CN115127896A - 两水平凝血激活检测试剂质控品及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及凝血检验质量控制技术领域，具体涉及两水平凝血激活检测试剂质控品及其制备方法和应用。两水平质控品包括TEG‑ACT值为100±20S且MA值为60±15mm的凝血激活质控品水平1以及TEG‑ACT值为160±30S的凝血激活质控品水平2。两水平质控品涵盖临床正常凝血状态和异常凝血状态，与血栓弹力图仪和凝血激活试剂联合使用，能对血栓弹力图凝血激活检测系统进行质量控制或检测系统评估。凝血激活质控品水平2对于配套凝血激活试剂的异常情况尤为敏感，可用于监测配套试剂的异常情况。本方案解决了现有技术缺少稳定可靠的针对凝血激活检测试剂的质控品的技术问题，易于工业化生产，具有理想的应用前景。

Description

两水平凝血激活检测试剂质控品及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及凝血检验质量控制技术领域，具体涉及两水平凝血激活检测试剂质控品及其制备方法和应用。

背景技术

血栓弹力图是由血栓弹性描记仪描记的凝血动态过程曲线，是一种能动态分析凝血形成和纤维蛋白溶解全过程的曲线图。血栓弹力图仪通常与配套试剂共同使用对临床样本进行检测，实现不同的检测目的。

血栓弹力图普通活化，使用了血栓弹力图试验(活化凝血)试剂(凝固法)，只激发内源性凝血通路，血栓弹力图检测结果显示，正常样本的凝血时间5～10min。而血栓弹力图凝血激活，也称血栓弹力图快速活化(r-TEG)，使用了血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法)，能同时激活内源性和外源性凝血通路，凝血时间更短(正常值≤2min)，因此更利于急诊科外伤后凝血功能异常的诊断和实时监测。由检测设备(血栓弹力图仪)和凝血激活检测试剂(快速活化检测试剂)共同组成凝血激活检测系统(快速活化检测系统)，对临床样本进行检测。检测过程大致为：先在临床样本中加入凝血激活检测试剂，再使用血栓弹力图仪进行检测，得到相关凝血参数。在使用该检测系统检测临床样本前，需先用合适的质控品评估该检测系统是否处于正常状态，以保证临床样本检测结果的可靠性。目前市场上尚无稳定、可靠的凝血激活检测试剂质控品，因此开发出适用于该检测系统的质控品十分必要。

发明内容

本发明意在提供两水平凝血激活检测试剂质控品，以解决现有技术缺少稳定可靠的针对凝血激活检测试剂的质控品的技术问题。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

两水平凝血激活检测试剂质控品，包括TEG-ACT值为100±20S且MA值为60±15mm的凝血激活质控品水平1以及TEG-ACT值为160±30S的凝血激活质控品水平2。

本方案还提供了一种两水平凝血激活检测试剂质控品的制备方法，包括以下依次进行的步骤：

S1：将血浆基质液、纤维蛋白原基质液、抗凝剂、pH缓冲剂、蛋白质保护剂以及防腐剂混合，获得原液；

S2：调整原液的TEG-ACT值和/或MA值至指定范围，获得待冻干原液，再经过冻干处理获得质控品。

本方案还提供了一种两水平凝血激活检测试剂质控品在评估凝血激活检测系统稳定性和准确性中的应用，凝血激活检测系统包括血栓弹力图仪和凝血激活检测试剂。

本方案的原理及优点是：

质控品通常是使用在实际样品检测之前，以确定检测系统的稳定性，从而保证实际样品检测结果的准确性。目前市场尚无适用于凝血激活检测系统的质控品，本方案的质控品可以实现对包括血栓弹力图仪、凝血激活检测试剂形成的凝血激活检测系统的质量控制。在本方案中，TEG-ACT值为100±20S且MA值为60±15mm的产品可作为凝血激活质控品水平1使用，凝血激活质控品水平1可模拟正常凝血状态，并对含有血栓弹力图仪和配套试剂的凝血激活检测系统进行质控。在本方案中，TEG-ACT值为160±30S的产品可作为凝血激活质控品水平2使用，凝血激活质控品水平2可模拟异常凝血状态，并对含有血栓弹力图仪和配套试剂的凝血激活检测系统进行质控。其中，配套试剂可选用本公司生产的凝血激活检测系统血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法)，同时激活内源性和外源性凝血通路，用于急诊科外伤后凝血功能异常的诊断和实时监测。

在本技术方案中，凝血激活质控品水平1和凝血激活质控品水平2两者在经过血栓弹力图仪以及配套试剂组成凝血激活检测系统中，进行检测得到相关凝血参数，其TEG-ACT值、Angle值以及MA值的多次测量后的变异系数小，符合应用要求，该质控品可用于评价凝血激活检测系统是否出现异常状态。质控品通过严格的赋值实验，获得其赋值范围，如果待测凝血激活检测系统的检测结果位于赋值范围内，则可判定系统正常；反之，则不正常，需要进一步对血栓弹力图仪和配套试剂进行分别检测，以排除故障。另外，本方案制备的质控品在加速实验中也表现出了稳定的性能，适合于应用推广。

除此之外，凝血激活质控品水平2对于配套试剂的异常情况尤为敏感，凝血激活质控品水平2的TEG-ACT值可以随着配套试剂中功效成分含量呈现出显著变化，通过观察上述变化，我们可以较为准确的获知配套试剂是否出现失效等问题。我们在实际应用过程中，可以将未知是否出现失效现象的配套试剂，与新出厂质检的合格配套试剂进行比较，并采用凝血激活质控品水平2作为质控品，如果未知配套试剂的TEG-ACT值的检测结果偏离合格配套试剂的TEG-ACT值的检测结果较大(例如：均值相对偏差≥5％)，我们则认为未知配套试剂处于异常状态，需要进行更换。经过大量测试，发现凝血激活质控品水平2相对于凝血激活质控品水平1、正常人源样本以及其他对比质控品，对于配套试剂的功效成分的含量均具有较为理想且显著的敏感性。对比例2也证明了凝血激活质控品水平2(TEG-ACT值控制在160±30S)，既能有效评估凝血激活检测试剂的异常情况(如含量变低、失效等)，又能保证样品的稳定。

进一步，所述凝血激活质控品水平1的原料均包括血浆基质液、纤维蛋白原基质液、抗凝剂、pH缓冲剂、蛋白质保护剂以及防腐剂。

进一步，凝血激活质控品水平2的原料均包括血浆基质液、抗凝剂、pH缓冲剂、蛋白质保护剂以及防腐剂。

血浆基质液和/或纤维蛋白原基质液可构成凝固主体。为了产品的稳定性和运输的便捷性，我们通常需要对质控品进行冻干处理。加入pH缓冲剂、蛋白质保护剂以及防腐剂等成分，可以保证更好的产品保存效果。蛋白质保护剂起到保护质控品中的蛋白质物质的作用；pH缓冲剂可为质控品中的各种生物分子提供稳定的pH环境以及维持一定的盐离子浓度，维持质控品中的生物分子活性状态；防腐剂的使用可以防止质控品腐败，延长质控品的保质期。

进一步，所述抗凝剂为比伐卢定、依度沙班和依诺肝素钠中的至少一种。

使用比伐卢定、依度沙班和依诺肝素钠作为抗凝剂的时候，质控品的均匀性和稳定性更好，更能够准确反映出凝血激活检测系统是否处于异常状态。

发明人通过大量研究发现，不同的抗凝剂的使用对质控品的稳定性有一定影响。通过使用不同的抗凝剂(肝素钠、肝素锂、柠檬酸钠、比伐卢定、依度沙班、依诺肝素钠等)制备相应的质控品，对获得的质控品进行检测。实验结果显示，加入肝素钠或肝素锂或柠檬酸钠等抗凝物质时，产品的稳定性较差，其检测结果的CV值(不精密度)较大；而加入适量的依诺肝素钠或比伐卢定或依度沙班，产品的稳定性较好，其检测结果的CV值(不精密度)较小。因此，宜选择依诺肝素钠或比伐卢定或依度沙班作为抗凝剂制备凝血激活质控品。

进一步，所述蛋白质保护剂包括牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖、甘氨酸、甘露醇和乳糖中的至少一种；所述pH缓冲剂为Hepes缓冲剂、Tris-HCl缓冲剂和磷酸盐缓冲剂中的至少一种；所述防腐剂为Proclin 300、叠氮化钠和苯甲酸钠中的至少一种。上述蛋白质保护剂、pH缓冲剂和防腐剂为现有技术中常规的试剂，性质稳定且成本适中。

进一步，所述血浆基质液和所述纤维蛋白原基质液由如下方法制备：在新鲜猪全血中加入柠檬酸钠，获得抗凝猪血；抗凝猪血静置分层后取上层液体，然后再离心取上清液，获得猪血浆；猪血浆经冻融和离心后，取上层获得血浆基质液，取下层获得纤维蛋白原基质液。

采用上述技术方案，可以从猪血中分离得到纤维蛋白原基质液和血浆基质液，上述操作过程简单且易于工业化，并且本方案以猪血为主要原料，来源充足，成本较低。

进一步，在S2中，调整原液的TEG-ACT值为100±20S且MA值为60±15mm，获得凝血激活质控品水平1。

在本方案中，TEG-ACT值为100±20S且MA值为60±15mm的产品可作为凝血激活质控品水平1使用，凝血激活质控品水平1可模拟正常凝血状态，并对含有血栓弹力图仪和配套试剂的凝血激活检测系统进行质控。

进一步，在S2中，调整原液的TEG-ACT值为160±30S，获得凝血激活质控品水平2。

在本方案中，TEG-ACT值为160±30S的产品可作为凝血激活质控品水平2使用，凝血激活质控品水平2可模拟异常凝血状态，并对含有血栓弹力图仪和配套试剂的凝血激活检测系统进行质控。

综上所述，本方案的有益效果在于：

目前，市场尚无适用于凝血激活检测系统的质控品，就无法评估该检测系统是否处于正常状态，也不能保证临床样本检测结果的可靠性。本方案克服现有技术的缺陷，提供了一种能模拟临床实际检测环境，涵盖临床正常凝血、异常凝血的凝血激活检测试剂质控品，且凝血激活质控品水平2优于人源样本，更能有效评估凝血激活检测试剂的异常情况。用户可方便对凝血激活检测系统进行质量控制或检测系统评估，保证临床样本检测结果的可靠性。本发明以猪血为主要原料，来源充足，成本较低；本发明制备工艺简单、产品稳定、易于工业化生产。

附图说明

图1为本发明实施例1的表1结果1的检测图谱。

图2为本发明实施例1的表2结果1的37℃加速7天后检测图谱。

图3为本发明实施例2的表3结果1的检测图谱。

图4为本发明实施例2的表4结果1的37℃加速7天后检测图谱。

图5为本发明对比例1的表5中20220614-1批结果1检测图谱。

图6为本发明对比例1的表5中20220614-2批结果1检测图谱。

图7为本发明对比例1的表5中20220614-3批结果1检测图谱。

图8为本发明对比例1的表5中20220614-4批结果1检测图谱。

图9为本发明对比例1的表5中20220614-5批结果1检测图谱。

图10为本发明对比例1的表5中20220614-6批结果1检测图谱。

图11为本发明对比例2的表6中正常人源样本的8μL结果1检测图谱。

图12为本发明对比例2的表6中20220301批凝血激活质控品水平1的8μL其中一结果的检测图谱。

图13为本发明对比例2的表6中20220301批凝血激活质控品水平2的8μL其中一结果的检测图谱。

图14为本发明对比例2的表6中20220101批对比质控品的8μL其中一结果的的检测图谱。

图15为本发明对比例2的表6中20220614批对比质控品的8μL其中一结果的的检测图谱。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步详细的说明，但本发明的实施方式不限于此。若未特别指明，下述实施例所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段；所用的实验方法均为常规方法；所用的材料、试剂等，均可从商业途径得到。

本方案实施例和对比例中，涉及到的主要检测仪器、配套试剂、原料信息如下：

DRNX-Ⅲ型血栓弹力图仪：重庆鼎润医疗器械有限责任公司；血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法)：重庆鼎润医疗器械有限责任公司(注册号：渝械注准20192400263)；氯化钙溶液：重庆鼎润医疗器械有限责任公司；抗凝猪血：重庆沙格生态农业开发有限公司；蔗糖：国药集团化学试剂有限公司；甘氨酸：国药集团化学试剂有限公司；氯化钠：国药集团化学试剂有限公司；柠檬酸钠二水物：国药集团化学试剂有限公司；Proclin 300：Sigma；叠氮化钠：Sigma；1M Hepes：北京索莱宝科技有限公司；肝素钠：河北常山生化药业股份有限公司；肝素锂：河北常山生化药业股份有限公司；比伐卢定：成都云希化工有限公司；依度沙班：上海朗旭生物科技有限公司；依诺肝素钠：河北常山生化药业股份有限公司；纤维蛋白原基质液：重庆鼎润医疗器械有限责任公司；血浆基质液：重庆鼎润医疗器械有限责任公司。

实施例1：凝血激活质控品水平1(正常值质控品)

1.血浆基质液与纤维蛋白原基质液的制备

(1)抗凝猪血的采集：在生猪屠宰时，按新鲜猪全血与3.8％柠檬酸钠抗凝剂的体积比为9：1混合，采集抗凝猪血。

(2)猪血浆的制备：收集的抗凝猪血，室温放置3～6小时，静置分层。吸取上层液体，放入管式离心机离心，设置离心参数：转速4500rpm，时间15min，温度4℃。离心后小心吸出上层，得猪血浆，-20～-30℃冷冻保存(有效期3年)。下层主要为红细胞，按医疗垃圾废物处理。

(3)血浆基质液与纤维蛋白原基质液的制备：将已冻成坚硬冰块状的猪血浆，置于2～8℃环境，缓慢解冻，至尚存少许碎冰块。猪血浆放入管式离心机离心，设置离心参数：转速4500rpm，时间15min，温度4℃。离心后，小心吸出上层为血浆基质液，-20～-30℃冷冻保存(有效期3年)；收集下层为纤维蛋白原基质液，-20～-30℃冷冻保存(有效期3年)。

2.制备凝血激活质控品水平1(正常值质控品)

(1)取出已冷冻的纤维蛋白原基质液和血浆基质液，置于37±2℃水浴锅中快速解冻。在2000mL烧杯中，依次加入919.85mL已解冻的血浆基质液、50mL已解冻的纤维蛋白原基质液、0.05mL 1％(质量分数)依诺肝素钠溶液(抗凝剂)、10mL 1M Hepes溶液(pH缓冲剂)、10mL 1M蔗糖溶液(蛋白质保护剂)、10mL 1M甘氨酸溶液(蛋白质保护剂)、0.1mLProclin300(防腐剂)，搅拌15min，得凝血激活质控品水平1原液。将抗凝剂、pH缓冲剂、蛋白质保护剂和防腐剂合称为冻干保护剂，共30.15ml。

实际操作中，我们可以采用不同的抗凝剂、pH缓冲剂、蛋白质保护剂和防腐剂：蛋白质保护剂包括牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖、甘氨酸、甘露醇和乳糖中的至少一种；pH缓冲剂为Hepes缓冲剂、Tris-HCl缓冲剂和磷酸盐缓冲剂中的至少一种；所述防腐剂为Proclin300、叠氮化钠和苯甲酸钠中的至少一种。抗凝剂在整个体系中的加入量以TEG-ACT值和MA值来确定，pH缓冲剂、蛋白质保护剂和防腐剂是现有技术中常规的用于冻干保护的物质，其用量可以通过常规实验确定。以上pH缓冲剂、蛋白质保护剂和防腐剂的用量仅为本实施例中使用到的情况，实际操作中，可根据实际情况调整。

(2)取凝血激活质控品水平1原液，用血栓弹力图仪(如DRNX-Ⅲ型)及血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法)检测，TEG-ACT值为100±20S且MA值为60±15mm。否则，补加依诺肝素钠溶液可提高TEG-ACT、降低MA，补加纤维蛋白原基质液可提高MA，补加血浆基质液可降低TEG-ACT、降低MA，直至调整TEG-ACT值和MA值至上述范围，获得待冻干原液。

(3)待冻干原液按每瓶1ML进行分装，经冻干40小时，得凝血激活质控品水平1冻干品，在2～8℃密闭保存，有效期12月。每瓶凝血激活质控品水平1含有1mL待冻干原液，经冻干获得。1mL原液大致含有0.92mL血浆基质液(919.85mL/(50mL+919.85mL+30.15mL))、0.05mL纤维蛋白原基质液(50mL/(50mL+919.85mL+30.15mL))和0.03mL冻干保护剂(30.15mL/(50mL+919.85mL+30.15mL))。使用时，每瓶冻干品加入1mL纯化水复溶得其复溶液。

3.凝血激活质控品水平1的性能检测

检测方法：按照“血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法)说明书”，在样品杯中加入10μL凝血激活检测试剂(血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法))和20μL 0.2M氯化钙溶液，再加入340μL质控品复溶液(每瓶质控品加入1mL纯化水复溶)，吹吸混匀3次，启动检测。

外观：产品为类白色或淡黄色固体，复溶后为无色或淡黄色液体。

均匀性：用血栓弹力图仪(如DRNX-Ⅲ)及血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法)，按照“血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法)说明书”进行检测，检测结果见表1，在表1中“结果1”的检测图谱见图1。由检测结果可知，产品的TEG-ACT值，Angle值以及MA值变异系数(CV)较小，符合要求(要求变异系数(CV)应≤15％)。在本实验中，为了保证实验结果能够反映凝血激活质控品水平1的质量，血栓弹力图仪已校准合格，并且血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法)也已检测合格，不存在失效或者功效成分含量异常的情况。本实验主要是为了研究同一批次的质控品中，取多个样本进行测量的情况下，质控品的检测结果之间是否存在较大的偏差，是否具有理想的均匀性。

表1：凝血激活质控品水平1(20220301批)的性能检测结果

4.凝血激活质控品水平1稳定性检测

产品在37℃加速7天(参考《中国药典2015第三部-P399》：粗略估计产品于2～8℃有效期为1年)后，用血栓弹力图仪(如DRNX-Ⅲ)及血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法)检测，结果如表2。“结果1的37℃加速7天后”的检测图谱见图2。检测结果显示产品在37℃加速7天后，仍然具有检测效力(要求相对偏差应≤15％)。37℃加速7天后相对偏差＝(37℃加速7天后检测均值-37℃加速7天前检测均值)/37℃加速7天前检测均值×100％。

表2：凝血激活质控品水平1(20220301批)稳定性检测结果

实施例2：凝血激活质控品水平2(异常值质控品)

1.制备凝血激活质控品水平2(异常值质控品)

(1)取出已冷冻的血浆基质液，置于37±2℃水浴锅中快速解冻。在2000mL烧杯中，依次加入969.4mL已解冻的血浆基质液、0.5mL 1％依诺肝素钠溶液、10mL 1M Hepes溶液、10mL 1M蔗糖溶液、10mL 1M甘氨酸溶液、0.1mL Proclin300，搅拌15min，得凝血激活质控品水平2原液。将抗凝剂、pH缓冲剂、蛋白质保护剂和防腐剂合称为冻干保护剂，共30.6ml。

(2)取凝血激活质控品水平2原液，用血栓弹力图仪(如DRNX-Ⅲ型)及血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法)检测，TEG-ACT值为160±30S，获得待冻干原液。否则，补加依诺肝素钠溶液可提高TEG-ACT，补加血浆基质液可降低TEG-ACT。

(3)待冻干原液按每瓶1ML进行分装，经冻干40小时，得凝血激活质控品水平2冻干品，在2～8℃密闭保存，有效期12月。每瓶凝血激活质控品水平2含有1mL待冻干原液，经冻干获得。1mL原液大致含有0.97mL血浆基质液(969.4mL/(969.4mL+30.6mL))和0.03mL冻干保护剂(30.6mL/(969.4mL+30.6mL))。使用时，每瓶冻干品加入1mL纯化水复溶得其复溶液。

2.凝血激活质控品水平2的性能检测

检测方法：同“凝血激活质控品水平1的性能检测”描述的检测方法。

外观：产品为类白色或淡黄色固体，复溶后为无色或淡黄色液体。

均匀性：用血栓弹力图仪(如DRNX-Ⅲ)及血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法)检测结果见表3，在表3中“结果1”的检测图谱见图3。由检测结果可知，凝血激活质控品水平2的MA值变异系数(CV)较小，符合要求(要求MA值的变异系数(CV)应≤15％)。

表3：凝血激活质控品水平2(20220301批)的性能检测结果

检测参数	TEG-ACT(s)	Angle(deg)	MA(mm)
				结果1	160.0	77.4	41.9
结果2	152.0	78.5	42.5
				结果3	152.0	78.9	42.6
结果4	152.0	76.5	41.4
				结果5	175.0	76.1	42.1
结果6	160.0	77.2	42.4
				结果7	175.0	76.6	40.8
结果8	175.0	75.5	42.0
				结果9	144.0	79.0	40.5
结果10	167.0	77.2	42.0
				CV	7.0％	1.5％	1.7％

3.凝血激活质控品水平2稳定性检测

产品在37℃加速7天(参考《中国药典2015第三部-P399》：粗略估计产品于2～8℃有效期为1年)后，用血栓弹力图仪(如DRNX-Ⅲ)及血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法)检测，结果如表4。“结果1的37℃加速7天后”的检测图谱见图4。检测结果显示产品在37℃加速7天后，仍然具有检测效力(要求相对偏差应≤15％)。

表4：凝血激活质控品水平2(20220301批)稳定性检测结果

对比例1：不同抗凝物质对于质控品的制备的效果

参照“实施例2：凝血激活质控品水平2(异常值质控品)”，在已解冻的血浆基质液中加入不同抗凝物质，调整抗凝物质比例至TEG-ACT值约200s，其他操作同实施例2，对比例研究了不同抗凝物质对于质控品的制备的效果。发明人通过大量研究发现，加入一定量的抗凝剂，可以调整TEG-ACT值至需要的范围。但是，不同的抗凝剂的使用对质控品的稳定性有一定影响。通过使用不同的抗凝剂(肝素钠、肝素锂、柠檬酸钠、比伐卢定、依度沙班、依诺肝素钠等)制备相应的质控品，对获得的质控品进行检测，实验结果参见表5。“20220614-1批结果1的检测图谱见图5、20220614-2批结果1的检测图谱见图6、20220614-3批结果1的检测图谱见图7、20220614-4批结果1的检测图谱见图8、20220614-5批结果1的检测图谱见图9、20220614-6批结果1的检测图谱见图10”。

实验结果显示，加入肝素钠或肝素锂或柠檬酸钠等抗凝物质时，产品的稳定性较差，其检测结果的CV值(不精密度)较大；而加入适量的依诺肝素钠或比伐卢定或依度沙班，产品的稳定性较好，其检测结果的CV值(不精密度)较小。因此，宜选择依诺肝素钠或比伐卢定或依度沙班作为抗凝剂制备凝血激活质控品。

表5：使用不同抗凝剂的样品TEG-ACT值检测结果

批号

结果1

结果2

结果3

结果4

CV值

备注

20220614-1

355s

191s

245s

214s

28.9％

添加终浓度15μg/mL肝素钠

20220614-2

206s

199s

277s

323s

23.6％

添加终浓度15μg/mL肝素锂

20220614-3

191s

214s

323s

222s

24.6％

添加终浓度25μg/mL柠檬酸钠

20220614-4

206s

206s

191s

238s

9.4％

添加终浓度2.5μg/mL比伐卢定

20220614-5

214s

230s

199s

191s

8.3％

添加终浓度1.0μg/mL依度沙班

20220614-6

214s

222s

191s

206s

6.4％

添加终浓度4.0μg/mL依诺肝素钠

对比例2：不同检测值范围的样品对凝血激活检测试剂的灵敏度评估

参照“实施例2：凝血激活质控品水平2(异常值质控品)”，在已解冻的血浆基质液中加入不同比例的依诺肝素钠溶液，其他操作同实施例2，分别获得TEG-ACT值＜130S的20220101批对比质控品和TEG-ACT值＞200S的20220101批对比质控品。用同一台血栓弹力图仪(DRNX-Ⅲ型血栓弹力图仪，已经校准)，按照“血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法)说明书”，在不同样品杯中分别加入8μL、10μL、12μL凝血激活检测试剂(血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法))和20μL 0.2M氯化钙溶液，再分别加入340μL不同检测值范围的样品(质控品)，吹吸混匀3次，启动检测。

使用不同的凝血激活检测试剂用量(8μL、10μL、12μL)，分别检测不同检测范围的样品(正常人源样本、凝血激活质控品水平1、凝血激活质控品水平2、20220101批对比质控品、20220614批对比质控品)，获得相应的TEG-ACT值。以凝血激活检测试剂10μL为基准，8μL和12μL检测结果的均值相对偏差≥5％，则该检测样品对凝血激活检测试剂的灵敏度较大，该检测样品可用于凝血激活检测试剂的灵敏度评估；否则，该检测样品不适用于凝血激活检测试剂的灵敏度评估。实验结果参见表6。“正常人源样本的8μL其中一个检测结果的检测图谱见图11；20220301批凝血激活质控品水平1的8μL其中一个检测结果的检测图谱见图12；20220301批凝血激活质控品水平2的8μL其中一个检测结果的检测图谱见图13、20220101批对比质控品的8μL其中一个检测结果的检测图谱见图14、20220614批对比质控品的8μL结果1检测图谱见图15”。

评估结果显示，正常人源样本、凝血激活质控品水平1、20220101批对比质控品的TEG-ACT值较小(<130S)，检测样品对凝血激活检测试剂的灵敏度均较低，不能有效评估凝血激活检测试剂的异常情况(如含量变低、失效等)；而凝血激活质控品水平2、20220614批对比质控品的TEG-ACT值较大(≥130S)，检测样品对凝血激活检测试剂的灵敏度均较高，能有效评估凝血激活检测试剂的异常情况(如含量变低、失效等)，但20220614批对比质控品的TEG-ACT值太大(≥200S)，稳定性较差(检测方法参见“3.凝血激活质控品水平1的性能检测”)。因此，样品的TEG-ACT值控制在160±30S，如凝血激活质控品水平2既能有效评估凝血激活检测试剂的异常情况(如含量变低、失效等)，又能保证样品的稳定。

表6：不同检测值范围的样品对凝血激活检测试剂的灵敏度检测结果

注：均值相对偏差＝(8μL或12μL的TEG-ACT均值-10μL的TEG-ACT均值)/10μL的TEG-ACT均值×100％。

凝血激活质控品水平1和凝血激活质控品水平2可以用于评价“血栓弹力图仪+血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法)”组成的快速活化检测系统的稳定性和准确性。按照血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法)说明书进行检测，TEG-ACT值、MA值等检测结果落入赋值范围，证明快速活化检测系统可用于临床样品检测。否则，需要调试血栓弹力图仪或者确认试剂是否失效。其中，水平2对试剂较为敏感，在血栓弹力图仪无故障的情况下，试剂的有效成分的量过高或者过低，都会造成质控品水平2的TEG-ACT值超出其赋值范围。说明水平2较为适合评价凝血激活检测试剂是否的异常情况(如含量变低、失效等)，即在制备过程中，调整TEG-ACT值为160±30S而形成的质控品，可以用于有效评价试剂的异常情况。而使用正常人源样本或水平1的TEG-ACT值不在上述范围内，不适合作为评价试剂异常情况的质控品。现有技术中，缺少针对本方案快速活化检测系统的质控品，通常采用正常人源样本来代替，存在稳定性差以及针对于凝血激活试剂的异常情况灵敏度差的问题。

总而言之，凝血激活质控品水平1和凝血激活质控品水平2具有较好的稳定性，可以用于评价快速活化检测系统的稳定性和准确性，并且分别模拟正常凝血和异常凝血的状态。而凝血激活质控品水平2除了上述功能之外，还可以特别用于血栓弹力图试验(凝血激活)试剂(凝固法)是否存在异常情况。

以上所述的仅是本发明的实施例，方案中公知的具体技术方案和/或特性等常识在此未作过多描述。应当指出，对于本领域的技术人员来说，在不脱离本发明技术方案的前提下，还可以作出若干变形和改进，这些也应该视为本发明的保护范围，这些都不会影响本发明实施的效果和专利的实用性。本申请要求的保护范围应当以其权利要求的内容为准，说明书中的具体实施方式等记载可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.两水平凝血激活检测试剂质控品，其特征在于：包括TEG-ACT值为100±20S且MA值为60±15mm的凝血激活质控品水平1以及TEG-ACT值为160±30S的凝血激活质控品水平2。

2.根据权利要求1所述的两水平凝血激活检测试剂质控品，其特征在于：所述凝血激活质控品水平1的原料均包括血浆基质液、纤维蛋白原基质液、抗凝剂、pH缓冲剂、蛋白质保护剂以及防腐剂。

3.根据权利要求1所述的两水平凝血激活检测试剂质控品，其特征在于：凝血激活质控品水平2的原料均包括血浆基质液、抗凝剂、pH缓冲剂、蛋白质保护剂以及防腐剂。

4.根据权利要求2或3所述的两水平凝血激活检测试剂质控品，其特征在于：所述抗凝剂为比伐卢定、依度沙班和依诺肝素钠中的至少一种。

5.根据权利要求2或3所述的两水平凝血激活检测试剂质控品，其特征在于：所述蛋白质保护剂包括牛血清白蛋白、蔗糖、海藻糖、甘氨酸、甘露醇和乳糖中的至少一种；所述pH缓冲剂为Hepes缓冲剂、Tris-HCl缓冲剂和磷酸盐缓冲剂中的至少一种；所述防腐剂为Proclin 300、叠氮化钠和苯甲酸钠中的至少一种。

6.根据权利要求2-5任一项所述的两水平凝血激活检测试剂质控品，其特征在于，所述血浆基质液和所述纤维蛋白原基质液由如下方法制备：在新鲜猪全血中加入柠檬酸钠，获得抗凝猪血；抗凝猪血静置分层后取上层液体，然后再离心取上清液，获得猪血浆；猪血浆经冻融和离心后，取上层获得血浆基质液，取下层获得纤维蛋白原基质液。

7.根据权利要求6所述的两水平凝血激活检测试剂质控品的制备方法，其特征在于：包括以下依次进行的步骤：

S1：将血浆基质液、纤维蛋白原基质液、抗凝剂、pH缓冲剂、蛋白质保护剂以及防腐剂混合，获得原液；

S2：调整原液的TEG-ACT值和/或MA值至指定范围，获得待冻干原液，再经过冻干处理获得质控品。

8.根据权利要求7所述的两水平凝血激活检测试剂质控品的制备方法，其特征在于：在S2中，调整原液的TEG-ACT值为100±20S且MA值为60±15mm，获得凝血激活质控品水平1。

9.根据权利要求7所述的两水平凝血激活检测试剂质控品的制备方法，其特征在于：在S2中，调整原液的TEG-ACT值为160±30S，获得凝血激活质控品水平2。

10.根据权利要求6所述的两水平凝血激活检测试剂质控品在评估凝血激活检测系统稳定性和准确性中的应用，其特征在于：凝血激活检测系统包括血栓弹力图仪和凝血激活检测试剂。

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