CN109541242B - 一种高岭土试剂质控品及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种高岭土试剂质控品，质控品为冻干制剂，冻干制剂的原料包括血小板缺乏的动物血浆；质控品的R值为6－8min，K值为2－5min，Angle值为60°－80°，MA值为23－45mm。高岭土试剂质控品对高岭土试剂的反应敏感，质量检测的准确性高，满足血栓弹力图检测中高岭土制剂的质控要求。质控品复溶稳定性好，在低温条件下能够长期保存。质控品以动物血浆为原料，降低了质控成本，提高了质控操作的安全性。本发明还公开了一种高岭土试剂质控品的制备方法，能够制备得到上述检测结果准确、稳定性好的高岭土试剂质控品，上述的制备方法稳定、可靠，制备过程简单、易于操作，适于高岭土试剂质控品的生产和应用。

Description

一种高岭土试剂质控品及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及凝血检测的控制标准领域，具体涉及一种高岭土试剂质控品及其制备方法和应用。
背景技术
凝血是一个非常复杂的生理生化级联反应，其实质是通过一系列的酶促反应。凝血过程由凝血因子逐步参与，可分为凝血酶原激活物的形成、凝血酶原的激活和纤维蛋白的生成三个阶段。凝血功能的评估实验对多种疾病的诊断、治疗和预后判断有重要意义，不仅可以用于对出血性疾病进行筛查和辅助诊断，还可以对血栓性疾病进行预测或风险评估；对凝血因子缺乏及血管性血友病也可以进行诊断、用药指导和预后判断。凝血检测还用来对围术期各种出凝血异常进行筛查，对于凝血功能紊乱的成分输血和用药给予指导。
传统的凝血系统检测项目包括血浆凝血酶原时间(prothrombin time，PT)、活化部分凝血活酶时间(activated partial thromboplastin time，APTT)、纤维蛋白原(fibrinogen；FIB)、凝血酶时间(thrombin time，TT)和血小板(plate-let，PLT)计数，这些项目检测通常都是凝血或者纤溶的某一个点或是部分时段，无法整体性反应凝血功能状况。血栓弹力图(throm belastography，TEG)是1948年由德国人Hartert发明的一种从整个动态过程来检测凝血过程的监测仪，它是以细胞学基础为模式，在短时间内用少量的全血模拟体内的凝血过程和纤溶过程，是一种全新概念的监测凝血功能的实验方法。
血检弹力图样本为患者的全血标本，检测时患者的全血标本置于样品杯中，将连接运动感应及传导系统的检测杆插入样本杯，使样本在37℃的恒温下由高岭土激活后进行检测。样品杯以4度45分的角速度匀速转动，检测杆则感应样本运动的阻力并进行记录产生描记图及参数。描记图大致分为两个部分，凝血阶段与纤溶阶段。在凝血阶段中，R时间为检测起始至曲线振幅上升至2mm所需时间，对应多种凝血因子逐步激活导致纤维蛋白开始形成的过程。K时间为曲线振幅由2mm上升至20mm所需时间，对应纤维蛋白交联及其与血小板的相互作用。α角(Angle)为描记图最大曲线弧度的切线与水平线的夹角，与K时间共同反映纤维蛋白与血小板的相互作用，在患者严重低凝K值无法测出的时候成为重要的替代指标。最大振幅(maximum amplitude，MA)为描记图最高振幅，对应血块最大强度，与血小板浓度、血小板功能以及血小板-纤维蛋白相互作用有关。
TEG的检测指标可以反凝血因子、纤维蛋白原及血小板之间的相互作用，能更全面的表现临床中患者的整体凝血状况，并且对于指导纠正凝血功能相关血液制品的使用具有重要意义。随着血栓弹力图检测项目在疾病诊断、治疗等领域应用的不断发展，对血栓弹力图检测的质量控制具有重要意义。目前，市场上的凝血质控品主要为血栓弹力图仪器的质控品，仅能实现对血栓弹力图仪的质量控制，而对于激活凝血途径的高岭土试剂(Kaolin)，仍是以健康人血液样本进行比对，以对高岭土试剂进行质量控制。然而，现有作为对照的血液样本无法长时间稳定保存，且血液样本的均一性和安全性难以保障，难以实现对高岭土试剂的稳定、准确的质量控制，并且会导致高岭土试剂质控过程的安全性降低。
发明内容
因此，本发明要解决的技术问题在于克服现有技术中对用于血栓弹力图检测的高岭土试剂稳定性、准确性和安全性低的缺陷，从而提供一种质控准确性好、稳定性且安全性高的高岭土试剂质控品。
为此，本发明提供如下技术方案：
第一方面，本发明提供了一种高岭土试剂质控品，所述质控品为冻干制剂，所述冻干制剂的原料包括血小板缺乏的动物血浆；所述质控品的R值为6－8min，K值为2－5min，Angle值为60°－80°，MA值为23－45mm。
优选地，上述的质控品，所述冻干制剂的原料还包括血栓弹力图参数调节剂，所述血栓弹力图参数调节剂选自血清和纤维蛋白原溶液中的任一种。
优选地，上述的质控品，所述冻干制剂的原料还包括血浆稳定剂，所述血浆稳定剂是含有如下成分的血浆缓冲液：
三羟甲基氨基甲烷，10－30mM/L；
叠氮钠，0.5－2g/L；
蔗糖，10－30g/L；
抑肽酶，10000－100000KIU/L；
海藻糖10－30g/L；
甘氨酸2－4g/L
所述血浆稳定剂的pH值为7.5。
第二方面，本发明提供了一种高岭土试剂质控品的制备方法，包括以下步骤：
S1，取动物全血，与抗凝剂混合后，分离动物血浆；去除动物血浆中的血小板，得到血小板缺乏的动物血浆；
S2，调节所述血小板缺乏的动物血浆的血栓弹力图参数，使所述血小板缺乏的动物血浆的R值为6－8min，K值为2－5min，Angle值为60°－80°，MA值为23－45mm；
S3，对步骤S2得到的动物血浆进行冷冻、干燥处理，得到高岭土试剂质控品。
优选地，上述的制备方法，所述抗凝剂是浓度为3.8wt％的柠檬酸钠水溶液，所述动物全血是选自牛、羊、猪、兔和马中至少一种的动物全血。
优选地，上述的制备方法，所述步骤S1包括：
S11，取动物全血，向所述动物全血中加入抗凝剂，混合均匀后，在2－8℃的温度下静置12－24小时，使混合溶液分层；
S12，吸取上层的动物血浆，对所述动物血浆进行离心处理，去除所述动物血浆中的血细胞；
S13，对步骤S12得到的动物血浆进行离心处理，去除所述动物血浆中的血小板，得到血小板缺乏的动物血浆。
进一步优选地，上述的制备方法，所述步骤S12中的离心处理的条件为1500转/分，离心时间为10－15分钟；
所述S13步骤中的离心处理的条件为3500转/分，离心时间为6－10分钟。
优选地，上述的制备方法，所述步骤S2包括：
根据所述血小板缺乏的动物血浆的血栓弹力图参数，向所述血小板缺乏的动物血浆中加入血清或纤维蛋白原溶液，使所述血小板缺乏的动物血浆的R值为6－8min，K值为2－5min，Angle值为60°－80°，MA值为23－45mm。
进一步优选地，上述的制备方法，所述血清和所述纤维蛋白原溶液的制备步骤包括：
S21，取步骤S1得到的血小板缺乏的动物血浆，调节pH至7.5，然后对所述动物血浆进行冷冻处理，使所述动物血浆冻结成块；
S22，将冻结的动物血浆置于4－8℃的温度下进行解冻，解冻的动物血浆中出现白色絮状物；对解冻后的动物血浆进行离心处理，分离得到白色沉淀和上清液；
S23，将步骤S22得到的白色沉淀溶解于三羟甲基氨基甲烷缓冲液中，得到纤维蛋白原溶液；向步骤S22得到的上清液中加入乙醇，离心，取离心后的上清液，即为血清。
进一步优选地，上述的制备方法，所述步骤S21中，所述冷冻处理的温度为－25℃，时间为24小时；
所述步骤S22中，所述解冻的时间为20小时，所述离心处理的条件为5000转/分，离心时间为5－10分钟；
所述步骤S23中，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液含有0.9wt％的NaCl，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液的pH为7.5；所述离心的条件为5000转/分，离心时间为5－10分钟。
优选地，上述的制备方法，所述步骤S3包括：向步骤S2得到的动物血浆中加入血浆稳定剂，然后进行冷冻、干燥处理，得到高岭土试剂质控品；
优选地，所述血浆稳定剂是含有如下一种或几种成分的血浆缓冲液：三羟甲基氨基甲烷，10－30mM/L；叠氮钠，0.5－2g/L；蔗糖，10－30g/L；抑肽酶，10000－100000KIU/L；海藻糖10－30g/L；甘氨酸2－4g/L所述血浆稳定剂的pH值为7.5。
优选地，上述的高岭土试剂质控品，所述高岭土试剂质控品由上述的制备方法制得。
第三方面，本发明提供了上述的高岭土试剂质控品，或由上述的制备方法得到的高岭土试剂质控品在用于血栓弹力图的高岭土试剂的质量控制中的应用。
本发明技术方案，具有如下优点：
1.本发明提供的高岭土试剂质控品，所述质控品为冻干制剂，所述冻干制剂的原料包括血小板缺乏的动物血浆；所述质控品的R值为6－8min，K值为2－5min，Angle值为60°－80°，MA值为23－45mm。
上述的高岭土试剂质控品，通过调节其R值、K值、Angle值和MA值的取值范围，使其落入临川健康人血样本的血栓弹力图参数范围内，以模拟人健康血液样本，高岭土试剂质控品的均一性好，满足用于血栓弹力图检测中高岭土试剂的质控要求。高领土试剂质控品对高岭土试剂反应敏感，质控品在被高岭土试剂激活后，启动凝血过程，质控品血浆的R值、K值、Angle值和MA值变化明显，从而实现对高岭土制剂的检测控制。高领土试剂质控品以血小板缺乏的动物血浆为原料，进一步提高了质控血浆对高岭土试剂的敏感性，减少基质效应的干扰，提高对高岭土试剂质控的准确性。
本发明提供的高岭土试剂质控品，弥补了目前无法对高岭土试剂进行质量控制的空白。高岭土试剂质控品用于高岭土试剂质量检测的准确性高，满足为临床血栓弹力图检测项目提供稳定可靠实验数据的基本要求，有利于提高血栓弹力图评估凝血因子、纤维蛋白原、血小板功能等的准确性，为临床疾病的诊断、治疗、药物疗效监测、预后评估以及临床输血等提供更加可靠的指导依据。
高岭土试剂质控品为冻干试剂，性质稳定，有效期长，在低温条件下能够长时间保持检测活性，适于长期保藏、使用，有利于降低高岭土试剂质控检测的成本、提高质控结果的稳定性；高岭土质控试剂且具有较好的复溶稳定性好，能够减少由于质控品本身不稳定造成的误差，提高质控检测的准确性。高岭土试剂质控品采用动物血浆制得，原料来源丰富、价格低廉，有利于降低高岭土试剂的质控检测的成本。同时，以动物血浆为原料，质控品的安全性易于控制，能够避免以人血样样本进行高岭土试剂比对时可能产生的HIV\HCV\HBV等的病毒危害，提高血栓弹力图检测的安全性。
2.本发明提供的高岭土试剂质控品，所述冻干制剂的原料还包括血栓弹力图参数调节剂，所述血栓弹力图参数调节剂选自血清和纤维蛋白原溶液中的任一种。利用血清或纤维蛋白原溶液对高岭土试剂质控品的R值、K值、Angle值和MA值进行调节，在质控品原料液的R值、K值高于预定范围，MA值低于预定范围时，向原料液中加入纤维蛋白原溶液，利用纤维蛋白原的促凝血效果，对质控品原料液的R值、K值和MA值进行调节，使其落入目标范围；当质控品原料液的R值、K值低于预定范围，MA值高于预定范围时，向原料液中加入血清，通过对原料液进行稀释，以调节质控品的R值、K值和MA值范围。
3.本发明提供的高岭土试剂质控品，所述冻干制剂的原料还包括血浆稳定剂，通过调节血浆稳定剂中的物质组成、浓度，以及血浆稳定剂pH值，以保护原料中的活性成分，使冷冻干燥过程不会对质控品的性能产生影响，从而得到具有检测结果准确、稳定性高的高岭土试剂质控品，高岭土试剂质控品能够长时间稳定保存，并具有良好的复溶稳定性。
4.本发明提供的高岭土试剂质控品的制备方法，首先获得血小板缺乏的动物血浆，并对血小板缺乏的动物血浆的R值、K值、Angle值和MA值进行调节，使R值为6－8min，K值为2－5min，Angle值为60°－80°，MA值为23－45mm；最后进行冷冻、干燥处理，得到高岭土试剂质控品。
本发明提供的制备方法稳定、可靠，制备过程简单、易于操作，制备过程中使用的添加物和调制物数量少，能够有效减少高岭土试剂质控品中基质效应的干扰，制得对高岭土试剂反应敏感的质控血浆。以上述制备方法得到的高岭土试剂质控品，均一性好、对高岭土试剂反应敏感，在用高岭土试剂激活后R值、K值、Angle值和MA值变化明显，能够实现对高岭土试剂准确、快速的质量检测。高岭土试剂复溶稳定性好，能够长时间稳定保存，提高了高岭土试剂质控的稳定性和准确性，降低了质控成本，满足为临床血栓弹力图检测项目提供稳定可靠实验数据的基本要求。
本发明提供的制备方法以动物血浆为制备原料，动物血浆来源丰富、价格低廉，安全性易于控制，有利于降低高岭土试剂质控品的制备成本、提高质控实验的安全性，适于大规模的推广、应用。
5.本发明提供的制备方法，以3.8wt％的柠檬酸钠水溶液为抗凝剂，分离动物血浆，得到R值、K值、Angle值和MA值范围易于调整、适于进一步匹配健康人血的动物血浆。
本发明提供了血小板缺乏的动物血浆的具体制备过程，通过调节制备过程中的温度、处理时间、离心条件等，能够有效从动物血浆中分离去除血细胞、血小板，并且能够避免血细胞破裂影响血浆成分。
6.本发明提供的血清和所述纤维蛋白原溶液的制备步骤，通过对血小板缺乏的动物血浆进行冷冻和解冻处理，能够同时得到血清和所述纤维蛋白原溶液，简化了制备过程。血清和所述纤维蛋白原溶液的制备过程中，通过调节温度、时间、离心条件、以及溶解纤维蛋白原的溶液条件等，得到稳定性高、杂质少的血清和所述纤维蛋白原溶液，以血清和所述纤维蛋白原溶液对动物血浆的血栓弹力图参数进行调节，达到健康人血的参数范围。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例1中高岭土试剂质控品在孵育高岭土前后的血栓弹力检测结果图；
图2是本发明由实施例1制备的不同批次间高岭土试剂质控品在孵育高岭土前的血栓弹力检测结果图；
图3是本发明由实施例1制备的不同批次间高岭土试剂质控品在孵育高岭土后的血栓弹力检测结果图。
具体实施方式
提供下述实施例是为了更好地进一步理解本发明，并不局限于所述最佳实施方式，不对本发明的内容和保护范围构成限制，任何人在本发明的启示下或是将本发明与其他现有技术的特征进行组合而得出的任何与本发明相同或相近似的产品，均落在本发明的保护范围之内。
实施例中未注明具体实验步骤或条件者，按照本领域内的文献所描述的常规实验步骤的操作或条件即可进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规试剂产品。
下述测试例中的使用的血栓弹力图仪为TEG5000，高岭土杯购自苏州新劢德医疗器械科技有限公司。
实施例1
本实施例提供一种高岭土试剂质控品的制备方法，包括如下步骤：
S1，制备血小板缺乏的动物血浆
S11，称取3.8g的二水合柠檬酸钠，溶于80mL蒸馏水配制成浓度为3.8wt％的柠檬酸钠水溶液，置于总体积1000mL的塑料容器杯中。
取800mL牛、羊、猪、兔和马中至少一种的动物全血，加入柠檬酸钠水溶液中。取血时需顺时针或逆时针温和晃动容器杯，以保证动物全血与柠檬酸钠水溶液混合均匀，从取血到加入到柠檬酸钠水溶液的时间要尽可能短，避免血液在遇到空气后凝固。
取血后将容器杯用保鲜膜密封，放置于2℃冰箱中冷藏，静置12小时，待混合溶液分层。
S12，混合溶液分层后取出，在4－10℃的低温环境下，用移液枪小心吸取上层动物血浆，分装，然后1500r/m离心15分钟，取上层动物血浆，弃红细胞等沉淀物，800mL动物全血与柠檬酸钠水溶液混合离心后总共得到动物血浆400mL。
S13，将步骤S12得到的动物血浆在3500r/m条件下离心6分钟，去除动物血浆中的血小板，得到血小板缺乏的动物血浆。
S2，调节所述血小板缺乏的动物血浆的血栓弹力图参数
S21，取步骤S1得到的血小板缺乏的动物血浆，用醋酸调节动物血浆pH值至7.5，置于－25℃冷冻库中进行冷冻处理，冷冻24小时，动物血浆冻结成坚硬的冰块。
S22，将冻结成冰块的动物血浆置于4℃的冷藏库中缓慢解冻20小时，解冻的动物血浆中出现白色絮状物，即为纤维蛋白原。在解冻后血浆温度低于10℃时，用离心机将其以5000r/min的转速离心5分钟，分离得到白色沉淀和上清液，其中白色沉淀即纤维蛋白原。
S23，将步骤S22得到的纤维蛋白原溶解在含0.9wt％的NaCl的Tris缓冲液中(三羟甲基氨基甲烷缓冲液)，Tris缓冲液的pH为7.5，形成饱和溶液，即为纤维蛋白原溶液。
向步骤S22得到的上清液中加入－25℃的冷乙醇，使乙醇的终浓度为8％(V/V)，进一步去除上清液中残余的纤维蛋白原；然后再次以5000r/min的转速离心10分钟，离心后的上清液即为血清，离心得到的白色沉淀加入纤维蛋白原溶液中。
S24，测试步骤S1中得到的血小板缺乏的动物血浆的R值、K值和MA值，当动物血浆的R值、K值低于预定范围，MA值高于预定范围时，向动物血浆中加入具有稀释作用的血清；当动物血浆的R值、K值高于预定范围，MA值低于预定范围时，向动物血浆中加入具有促凝作用的纤维蛋白原溶液，最终使血小板缺乏的动物血浆的R值落入6－8min、K值落入3－5min、MA值落入23－45mm的预定范围内，对应Angle值落入60°－80°的预定范围。
S3，对步骤S2得到的动物血浆进行冷冻、干燥处理，得到高岭土试剂质控品
向步骤S2得到的血小板缺乏的动物血浆中加入血浆稳定剂，血浆稳定剂是含有如下成分的血浆缓冲液：三羟甲基氨基甲烷，30mM/L；叠氮钠，2g/L；蔗糖，10g/L；抑肽酶，10000KIU/L；海藻糖10－30g/L；甘氨酸2－4g/L；盐酸调节血浆稳定剂的pH值为7.5。然后将添加有血浆稳定剂的动物血浆进行冷冻、干燥处理，得到高岭土试剂质控品。
实施例2
本实施例提供一种高岭土试剂质控品的制备方法，包括如下步骤：
S1，制备血小板缺乏的动物血浆
S11，称取3.8g的二水合柠檬酸钠，溶于80mL蒸馏水配制成浓度为3.8wt％的柠檬酸钠水溶液，置于总体积1000mL的塑料容器杯中。
取800mL牛、羊、猪、兔和马中至少一种的动物全血，加入柠檬酸钠水溶液中。取血时需顺时针或逆时针温和晃动容器杯，以保证动物全血与柠檬酸钠水溶液混合均匀，从取血到加入到柠檬酸钠水溶液的时间要尽可能短，避免血液在遇到空气后凝固。
取血后将容器杯用保鲜膜密封，放置于8℃冰箱中冷藏，静置24小时，待混合溶液分层。
S12，混合溶液分层后取出，在4－10℃的低温环境下，用移液枪小心吸取上层动物血浆，分装，然后1500r/m离心10分钟，取上层动物血浆，弃红细胞等沉淀物，800mL动物全血与柠檬酸钠水溶液混合离心后总共得到动物血浆400mL。
S13，将步骤S12得到的动物血浆在3500r/m条件下离心10分钟，去除动物血浆中的血小板，得到血小板缺乏的动物血浆。
S2，调节所述血小板缺乏的动物血浆的血栓弹力图参数
S21，取步骤S1得到的血小板缺乏的动物血浆，用醋酸调节动物血浆pH值至7.5，置于－25℃冷冻库中进行冷冻处理，冷冻24小时，动物血浆冻结成坚硬的冰块。
S22，将冻结成冰块的动物血浆置于8℃的冷藏库中缓慢解冻20小时，解冻的动物血浆中出现白色絮状物，即为纤维蛋白原。在解冻后血浆温度低于10℃时，用离心机将其以5000r/min的转速离心10分钟，分离得到白色沉淀和上清液，其中白色沉淀即纤维蛋白原。
S23，将步骤S22得到的纤维蛋白原溶解在含0.9wt％的NaCl的Tris缓冲液中(三羟甲基氨基甲烷缓冲液)，Tris缓冲液的pH为7.5，形成饱和溶液，即为纤维蛋白原溶液。
向步骤S22得到的上清液中加入－25℃的冷乙醇，使乙醇的终浓度为8％(V/V)，进一步去除上清液中残余的纤维蛋白原；然后再次以5000r/min的转速离心5分钟，离心后的上清液即为血清，离心得到的白色沉淀加入纤维蛋白原溶液中。
S24，测试步骤S1中得到的血小板缺乏的动物血浆的R值、K值和MA值，当动物血浆的R值、K值低于预定范围，MA值高于预定范围时，向动物血浆中加入具有稀释作用的血清；当动物血浆的R值、K值高于预定范围，MA值低于预定范围时，向动物血浆中加入具有促凝作用的纤维蛋白原溶液，最终使血小板缺乏的动物血浆的R值落入6－8min、K值落入3－5min、MA值落入28－45mm的预定范围内，对应Angle值落入77°－89°的预定范围。
S3，对步骤S2得到的动物血浆进行冷冻、干燥处理，得到高岭土试剂质控品
向步骤S2得到的血小板缺乏的动物血浆中加入血浆稳定剂5％－10％，血浆稳定剂是含有如下成分的血浆缓冲液：三羟甲基氨基甲烷，10mM/L；叠氮钠，0.5g/L；蔗糖，30g/L；抑肽酶，100000KIU/L；海藻糖10－30g/L；甘氨酸2－4g/L；盐酸调节血浆稳定剂的pH值为7.5。然后将添加有血浆稳定剂的动物血浆进行冷冻、干燥处理，得到高岭土试剂质控品。
测试例1
本测试例对实施例1和实施例2中制备的高岭土试剂质控品的进行检测，分别取实施例1和实施例2中的质控品，用1mL蒸馏水复溶，复溶后静置5min，取1mL复溶液加入到待质控的高岭土杯中，静置10min，使凝血因子得以充分激活。吸取340μL激活后的溶液，加入到含有20μL浓度为0.2mol/L的CaCl2的检测杯中，在血栓弹力图仪下进行检测。同时，采用上述的复溶检测方法，取相同制备批次的高岭土试剂质控品，高岭土试剂质控品不使用高岭土杯孵育激活。在血栓弹力图仪下分别检测孵育高岭土前、以及孵育高岭土后的质控品的R值、K值、Angle值和MA值，检测结果如表1所示。
表1高岭土试剂质控品在孵育高岭土前后的血栓弹力图检测结果
Figure BDA0001885850650000141
由表1结果可知，以本发明提供的制备方法制得的高岭土制剂质控品，在使用高岭土孵育后，质控品的R值、K值、Angle值和MA值变化明显，质控品对高岭土试剂的变化敏感，高岭土制剂质控品用于高岭土质量检测的准确性高。高岭土制剂质控品在孵育高岭土前的血栓弹力图参数落入临床健康人血的参数范围内，满足临床血栓弹力图检测的质控要求，能够应用于临床血栓弹力图检测中高岭土试剂的质量控制，提高血栓弹力图评估凝血因子、纤维蛋白原、血小板功能等的准确性，为临床疾病的诊断、治疗、药物疗效监测、预后评估以及临床输血等提供更加可靠的指导依据。
测试例2
本测试例采用测试例1中提供的检测方法，对以实施例1中制得的不同批次的高岭土试剂质控品进行血栓弹力图重复性检测实验，检测结果如表2和表3所示。
表2高岭土试剂质控品在孵育高岭土前的血栓弹力图重复检测结果
Figure BDA0001885850650000151
表3高岭土试剂质控品在孵育高岭土后的血栓弹力图重复检测结果
Figure BDA0001885850650000152
Figure BDA0001885850650000161
由表2和表3数据可知，以本发明提供的制备方法制得的高岭土试剂质控品，在孵育高岭土试剂前以及孵育高岭土试剂后，不同批次间的CV值均具有较小取值，不同批次间高岭土试剂质控品的均一性好，有利于提高高岭土质控检测的准确性，满足高岭土试剂的质控要求。
测试例3
本测试例采用测试例1中提供的检测方法，对实施例1和实施例2中制得的高岭土试剂质控品进行开瓶稳定性检测。开瓶稳定性检测实验包括：
开瓶稳定性检测1：将实施例1和实施例2中制得的高岭土试剂质控品复溶在室温(15～25℃)条件下保存，每天定时取样一次，检测结果如表4和表5所示。
开瓶稳定性检测2：将实施例1和实施例2中制得的高岭土试剂质控品(冻干试剂)在+2～+8℃条件下保存，每3个月取出一瓶准确复溶，检测结果如表6和表7所示。
表4开瓶测试检测1中高岭土试剂质控品在高岭土孵育前的检测结果
Figure BDA0001885850650000171
Figure BDA0001885850650000181
表5开瓶测试检测1中高岭土试剂质控品在高岭土孵育后的检测结果
Figure BDA0001885850650000182
Figure BDA0001885850650000191
表6开瓶测试检测2中高岭土试剂质控品在高岭土孵育前的检测结果
Figure BDA0001885850650000192
Figure BDA0001885850650000201
表7开瓶测试检测2中高岭土试剂质控品在高岭土孵育后的检测结果
Figure BDA0001885850650000202
Figure BDA0001885850650000211
由表4和表5数据可知，以本发明提供的制备方法得到的高岭土试剂质控品在每天的开瓶稳定性检测中，其R值、K值、Angle值和MA值的瓶间差的CV值小，质控品能够在室温条件下保持稳定，高岭土试剂质控品的稳定性好，有利于提高高岭土试剂质控的稳定性和准确性，符合临床血栓弹力图检测的质控要求。由表6和表7数据可知，高岭土试剂质控品在低温条件下具有较长的稳定期，能够长时间保持检测活性。高岭土试剂质控品复溶后的血栓弹力图参数瓶间差的CV值小，具有较高的复溶稳定性，有利于减少由于质控品本身不稳定造成的误差，提高质控检测的准确性，进而提高血栓弹力图评估凝血因子、纤维蛋白原、血小板功能等的准确性，为临床疾病的诊断、治疗、药物疗效监测、预后评估以及临床输血等提供更加可靠的指导依据。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (12)

1.一种高岭土试剂质控品，其特征在于，所述质控品为冻干制剂，所述冻干制剂的原料包括血小板缺乏的动物血浆；所述质控品的R值为6－8min，K值为2－5min，Angle值为60°－80°，MA值为23－45mm；
所述冻干制剂的原料还包括血栓弹力图参数调节剂，所述血栓弹力图参数调节剂选自血清和纤维蛋白原溶液中的任一种。
2.根据权利要求1所述的质控品，其特征在于，所述冻干制剂的原料还包括血浆稳定剂，所述血浆稳定剂是含有如下一种或多种成分的血浆缓冲液：
三羟甲基氨基甲烷，10－30mM/L；
叠氮钠，0.5－2g/L；
蔗糖，10－30g/L；
抑肽酶，10000－100000KIU/L；
海藻糖10－30g/L；
甘氨酸2－4g/L
所述血浆稳定剂的pH值为7.5。
3.一种高岭土试剂质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，取动物全血，与抗凝剂混合后，分离动物血浆；去除动物血浆中的血小板，得到血小板缺乏的动物血浆；
S2，调节所述血小板缺乏的动物血浆的血栓弹力图参数，使所述血小板缺乏的动物血浆的R值为6－8min，K值为2－5min，Angle值为60°－80°，MA值为23－45mm；
S3，对步骤S2得到的动物血浆进行冷冻、干燥处理，得到高岭土试剂质控品。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述抗凝剂是浓度为3.8wt％的柠檬酸钠水溶液，所述动物全血是选自牛、羊、猪、兔和马中至少一种的动物全血。
5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1包括：
S11，取动物全血，向所述动物全血中加入抗凝剂，混合均匀后，在2－8℃的温度下静置12－24小时，使混合溶液分层；
S12，吸取上层的动物血浆，对所述动物血浆进行离心处理，去除所述动物血浆中的血细胞；
S13，对步骤S12得到的动物血浆进行离心处理，去除所述动物血浆中的血小板，得到血小板缺乏的动物血浆。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S12中的离心处理的条件为1500转/分，离心时间为10－15分钟；
所述S13步骤中的离心处理的条件为3500转/分，离心时间为6－10分钟。
7.根据权利要求3－6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2包括：
根据所述血小板缺乏的动物血浆的血栓弹力图参数，向所述血小板缺乏的动物血浆中加入血清或纤维蛋白原溶液，使所述血小板缺乏的动物血浆的R值为6－8min，K值为2－5min，Angle值为60°－80°，MA值为23－45mm。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述血清和所述纤维蛋白原溶液的制备步骤包括：
S21，取步骤S1得到的血小板缺乏的动物血浆，调节pH至7.5，然后对所述动物血浆进行冷冻处理，使所述动物血浆冻结成块；
S22，将冻结的动物血浆置于4－8℃的温度下进行解冻，解冻的动物血浆中出现白色絮状物；对解冻后的动物血浆进行离心处理，分离得到白色沉淀和上清液；
S23，将步骤S22得到的白色沉淀溶解于三羟甲基氨基甲烷缓冲液中，得到纤维蛋白原溶液；向步骤S22得到的上清液中加入乙醇，离心，取离心后的上清液，即为血清。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S21中，所述冷冻处理的温度为－25℃，时间为24小时；
所述步骤S22中，所述解冻的时间为20小时，所述离心处理的条件为5000转/分，离心时间为5－10分钟；
所述步骤S23中，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液含有0.9wt％的NaCl，所述三羟甲基氨基甲烷缓冲液的pH为7.5；所述离心的条件为5000转/分，离心时间为5－10分钟。
10.根据权利要求3－9任一项所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S3包括：
向步骤S2得到的动物血浆中加入血浆稳定剂，然后进行冷冻、干燥处理，得到高岭土试剂质控品；
优选地，所述血浆稳定剂是含有如下一种或几种成分的血浆缓冲液：三羟甲基氨基甲烷，10－30mM/L；叠氮钠，0.5－2g/L；蔗糖，10－30g/L；抑肽酶，10000－100000KIU/L；海藻糖10－30g/L；甘氨酸2－4g/L；所述血浆稳定剂的pH值为7.5。
11.根据权利要求1或2所述的高岭土试剂质控品，其特征在于，所述高岭土试剂质控品由权利要求4－10任一项所述的制备方法制得。
12.权利要求1或2所述的高岭土试剂质控品，或由权利要求3－10任一项所述的制备方法得到的高岭土试剂质控品在用于血栓弹力图检测中高岭土试剂的质量控制中的应用。
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