CN114295821A - 血栓弹力图实验试剂的室间质评样本及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本申请提供了血栓弹力图实验试剂的室间质评样本，包括高岭土组、快速高岭土组、肝素酶组、纤维蛋白原组和血小板抑制剂组中的至少一组；高岭土组包括第一高凝质控样本、第一正常质控样本和第一低凝质控样本，快速高岭土组包括第二高凝质控样本、第二正常质控样本和第二低凝质控样本，肝素酶组包括第三正常质控样本和第一异常质控样本，纤维蛋白原组包括第一高值质控样本、第四正常质控样本和第二异常质控样本，血小板抑制剂组包括第四正常质控样本和第三异常质控样本，上述样本包括去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原。本申请还提供了血栓弹力图实验试剂室间质评样本制备方法和应用。

Description

血栓弹力图实验试剂的室间质评样本及其制备方法和应用

技术领域

本申请涉及生物医学技术领域，具体涉及血栓弹力图实验试剂的室间质评样本及其制备方法和应用。

背景技术

血栓弹力图仪是一种从纤维蛋白原和血小板聚集、凝血、纤溶等整个动态过程来监测人体凝血过程的分析仪；通过血栓弹力图仪可以获得血栓弹力图，从而可以得到患者血样的情况，如血凝块形成时间、血凝块强度和纤溶速率等。随着血栓弹力图仪在疾病预防、诊断、治疗等生物医学领域应用的不断发展，血栓弹力图仪的质量控制也显得尤为重要。目前，已有针对血栓弹力图仪的室间质评样本，但其只能实现对仪器进行质量控制，无法对血栓弹力图实验中试剂质量进行评价和控制。

发明内容

为解决上述问题，本申请提供了血栓弹力图实验试剂的室间质评样本及其制备方法和应用，为血栓弹力图实验中试剂提供了室间质评样本，以保证血栓弹力图实验中试剂的质量，从而保证血栓弹力图实验结果的准确性和可靠性。

第一方面，本申请提供了一种血栓弹力图实验试剂的室间质评样本，所述室间质评样本包括高岭土组、快速高岭土组、肝素酶组、纤维蛋白原组和血小板抑制剂组中的至少一组；所述高岭土组包括第一高凝质控样本、第一正常质控样本和第一低凝质控样本，所述第一高凝质控样本的R值小于4min且MA值大于65mm，所述第一正常质控样本的R值为4min-7min且MA值为45mm-65mm，所述第一低凝质控样本的R值大于7min且MA值小于45mm；所述快速高岭土组包括第二高凝质控样本、第二正常质控样本和第二低凝质控样本，所述第二高凝质控样本的ACT值小于86s且MA值大于65mm，所述第二正常质控样本的ACT值为86s-118s且MA值为45mm-65mm，所述第二低凝质控样本的ACT值大于118s且MA值小于45mm；所述肝素酶组包括第三正常质控样本和第一异常质控样本，所述第三正常质控样本的R_普通杯与R_肝素酶杯的差值小于或等于2min，所述第一异常质控样本的R_普通杯与R_肝素酶杯的差值大于2min；所述纤维蛋白原组包括第一高值质控样本、第四正常质控样本和第二异常质控样本，所述第一高值质控样本的MA值大于24mm，所述第四正常质控样本的MA值为11mm-24mm，所述第二异常质控样本的MA值小于11mm；所述血小板抑制剂组包括第四正常质控样本和第三异常质控样本，所述第四正常质控样本的AA抑制率大于50％或者ADP抑制率大于30％，所述第三异常质控样本的AA抑制率小于或等于50％或者ADP抑制率小于或等于30％；所述第一高凝质控样本、所述第一正常质控样本、所述第一低凝质控样本、所述第二高凝质控样本、所述第二正常质控样本、所述第二低凝质控样本、所述第三正常质控样本、所述第一异常质控样本、所述第一高值质控样本、所述第四正常质控样本、所述第二异常质控样本、所述第四正常质控样本和所述第三异常质控样本包括去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原。

在本申请中，血栓弹力图实验试剂的室间质评样本包括一组或多组质控样本组，每组中含有多个水平的质控样本，可以从多个维度、多个水平对血栓弹力图实验试剂的质量进行评估，从而保证血栓弹力图实验试剂的稳定性和可靠性，进而保证血栓弹力图实验结果的准确性。

可选的，所述第一高凝质控样本、所述第一正常质控样本、所述第一低凝质控样本、所述第二高凝质控样本、所述第二正常质控样本、所述第二低凝质控样本、所述第四正常质控样本和所述第三异常质控样本中的至少一种还包括血小板冻干粉。

可选的，所述血小板冻干粉包括血小板和冻干缓冲试剂。进一步的，所述冻干缓冲试剂包括氯化钠、氯化钾、氯化钙、硫酸镁、碳酸氢钠、柠檬酸、柠檬酸钠、乙酸钠、葡萄糖、海藻糖和前列地尔。

可选的，所述第二高凝质控样本、所述第二正常质控样本和所述第二低凝质控样本还包括磷脂。

可选的，所述第三正常质控样本还包括肝素酶和鱼精蛋白中的至少一种。

可选的，所述第一异常质控样本还包括凝血酶抑制剂。

可选的，所述第四正常质控样本还包括血小板抑制剂。

可选的，所述第三异常质控样本还包括血小板抑制剂。

第二方面，本申请提供了一种血栓弹力图实验试剂的室间质评样本的制备方法，包括将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原混合制得室间质评样本，所述室间质评样本包括高岭土组、快速高岭土组、肝素酶组、纤维蛋白原组和血小板抑制剂组中的至少一组；所述高岭土组包括第一高凝质控样本、第一正常质控样本和第一低凝质控样本，所述第一高凝质控样本的R值小于4min且MA值大于65mm，所述第一正常质控样本的R值为4min-7min且MA值为45mm-65mm，所述第一低凝质控样本的R值大于7min且MA值小于45mm；所述快速高岭土组包括第二高凝质控样本、第二正常质控样本和第二低凝质控样本，所述第二高凝质控样本的ACT值小于86s且MA值大于65mm，所述第二正常质控样本的ACT值为86s-118s且MA值为45mm-65mm，所述第二低凝质控样本的ACT值大于118s且MA值小于45mm；所述肝素酶组包括第三正常质控样本和第一异常质控样本，所述第三正常质控样本的R_普通杯与R_肝素酶杯的差值小于或等于2min，所述第一异常质控样本的R_普通杯与R_肝素酶杯的差值大于2min；所述纤维蛋白原组包括第一高值质控样本、第四正常质控样本和第二异常质控样本，所述第一高值质控样本的MA值大于24mm，所述第四正常质控样本的MA值为11mm-24mm，所述第二异常质控样本的MA值小于11mm；所述血小板抑制剂组包括第四正常质控样本和第三异常质控样本，所述第四正常质控样本的AA抑制率大于50％或者ADP抑制率大于30％，所述第三异常质控样本的AA抑制率小于或等于50％或者ADP抑制率小于或等于30％。

可选的，所述制备方法还包括将血小板冻干粉与所述去蛋白的血清基质、所述凝血因子和所述纤维蛋白原混合制备所述室间质评样本。

可选的，所述血小板冻干粉的制备包括：将富血小板血浆离心后获得第一上清和第一沉淀，用冻干缓冲液重悬所述第一沉淀，得到前处理样本，其中所述冻干缓冲液包括10mM-100mM氯化钠、0.5mM-5mM氯化钾、0.1mM-5mM氯化钙、0.2mM-5mM硫酸镁、5mM-300mM碳酸氢钠、0.1mM-35mM柠檬酸、1mM-100mM柠檬酸钠、0.5mM-150mM乙酸钠、1mM-100mM葡萄糖、5mM-300mM海藻糖和0.1μg/ml-10μg/ml前列地尔；将所述前处理样本进行离心获得第二上清和第二沉淀，用所述冻干缓冲液重悬所述第二沉淀，得到冻干液；将所述冻干液冻干，获得所述血小板冻干粉。

进一步的，所述冻干包括在-45℃～-35℃预冻120min-200min，然后升温至-25℃～-15℃并保持1000min以上，最后升温至20℃-35℃并保持360min以上。

可选的，所述去蛋白的血清基质、所述凝血因子和所述纤维蛋白原的制备方法包括：血液抗凝处理后进行离心并收集血浆；所述血浆冷冻、复融后进行离心，获得第一上清液和第一沉淀物，所述第一沉淀物溶解后离心，获得的上层液体为所述纤维蛋白原；将所述第一上清液进行蛋白沉淀，并通过离心获得第二上清液和第二沉淀物，所述第二上清液为所述去蛋白的血清基质；溶解所述第二沉淀物并置于透析袋中透析，再将所述透析袋中的液体离心浓缩得到所述凝血因子。

本申请第二方面提供的血栓弹力图实验试剂的室间质评样本的制备方法简单，操作方便，可用于大规模生产和应用。

第三方面，本申请提供了第一方面所述的室间质评样本或第二方面所述的制备方法制得的室间质评样本在血栓弹力图实验试剂的质量控制中的应用。

本申请第三方面提供上述的室间质评样本在血栓弹力图实验试剂的质量控制中的应用，从而保证血栓弹力图实验试剂的准确性和可靠性，进而保证血栓弹力图实验结果的准确性。

附图说明

为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本申请，并不用于限定本申请。

图1为血栓弹力图理论曲线。

图2为本申请一实施方式提供的血栓弹力图实验试剂的室间质评样本的制备方法流程图。

图3为本申请另一实施方式提供的血栓弹力图实验试剂的室间质评样本的制备方法流程图。

具体实施方式

以下所述是本申请的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本申请的保护范围。

通过血栓弹力图仪可以获得血栓弹力图，从而可以得到患者血样的情况，如血凝块形成时间、血凝块强度和纤溶速率等。反应杯放置到一个恒温杯座中，内杯插入与传感金属丝紧密接触的转轴；然后把全血与试剂混合，随即加样于外杯中，上推后血液样本与内杯接触，内杯作为传感器浸入血液中；外杯固定，内杯以一定角度旋转(或者外杯旋转、内杯固定)；血液未凝固时，内杯可以不受任何阻力自由旋转；血液开始凝固时，粘弹性变化，内杯受阻力影响旋转角度逐步变小，由高灵敏度的角度传感器转换成电信号，输出凝血强度随时间变化的曲线，即为血栓弹力图。请参阅图1，为血栓弹力图理论曲线，反映了被测血液凝固的不同阶段，图中横坐标为时间(t/min)，纵坐标为血液凝固的强度振幅(mm)；其中，R值为最初的纤维蛋白的形成的时间；K值为从R时间终点至描记图幅度达20mm所需的时间，反应血凝块形成的速率；α为最大曲线弧度的切线与水平线的夹角，反映血凝块聚合的速率；MA值为最大振幅，反映血凝块最大强度；ACT值为激活全血凝固时间；R_普通杯为不含肝素时的R值，R_肝素酶杯为添加有肝素酶时的R值；枸橼酸抗凝全血样本检测血小板的血栓弹力图最大幅度(MA)，肝素抗凝全血样本检测纤维蛋白原诱导凝血块强度(MA_F)，肝素抗凝全血样本还用于检测腺苷二磷酸(ADP)诱导的凝血块强度(MA_ADP)，肝素抗凝全血样本还用于检测花生四烯酸(AA)诱导的凝血块强度(MA_AA)，AA抑制率即为花生四烯酸对血小板的抑制率，ADP抑制率即为腺苷二磷酸对血小板的抑制率，AA抑制率＝(MA-MA_AA)/(MA-MA_F)，ADP抑制率＝(MA-MA_ADP)/(MA-MA_F)。

本申请提供了一种血栓弹力图实验试剂的室间质评样本，室间质评样本包括高岭土组、快速高岭土组、肝素酶组、纤维蛋白原组和血小板抑制剂组中的至少一组；高岭土组包括第一高凝质控样本、第一正常质控样本和第一低凝质控样本，第一高凝质控样本的R值小于4min且MA值大于65mm，第一正常质控样本的R值为4min-7min且MA值为45mm-65mm，第一低凝质控样本的R值大于7min且MA值小于45mm；快速高岭土组包括第二高凝质控样本、第二正常质控样本和第二低凝质控样本，第二高凝质控样本的ACT值小于86s且MA值大于65mm，第二正常质控样本的ACT值为86s-118s且MA值为45mm-65mm，第二低凝质控样本的ACT值大于118s且MA值小于45mm；肝素酶组包括第三正常质控样本和第一异常质控样本，第三正常质控样本的R_普通杯与R_肝素酶杯的差值小于或等于2min，第一异常质控样本的R_普通杯与R_肝素酶杯的差值大于2min；纤维蛋白原组包括第一高值质控样本、第四正常质控样本和第二异常质控样本，第一高值质控样本的MA值大于24mm，第四正常质控样本的MA值为11mm-24mm，第二异常质控样本的MA值小于11mm；血小板抑制剂组包括第四正常质控样本和第三异常质控样本，第四正常质控样本的AA抑制率大于50％或者ADP抑制率大于30％，第三异常质控样本的AA抑制率小于或等于50％或者ADP抑制率小于或等于30％；第一高凝质控样本、第一正常质控样本、第一低凝质控样本、第二高凝质控样本、第二正常质控样本、第二低凝质控样本、第三正常质控样本、第一异常质控样本、第一高值质控样本、第四正常质控样本、第二异常质控样本、第四正常质控样本和第三异常质控样本包括去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原。

相关技术中还未有针对血栓弹力图实验试剂的室间质评样本，因此无法判断血栓弹力图实验试剂是否可靠，是否对实验结果有影响。有鉴于此，本申请提供了上述血栓弹力图实验试剂的室间质评样本，其包括一组或多组质控样本组，每组中含有多个水平的质控样本，可以从多个维度、多个水平对血栓弹力图实验试剂的质量进行评估，从而保证血栓弹力图实验试剂的稳定性和可靠性，进而保证血栓弹力图实验结果的准确性；用户可以通过上述血栓弹力图实验试剂的室间质评样本进行相应的检测，根据检测结果与血栓弹力图实验试剂的室间质评样本对应的性能之间的差异来评价血栓弹力图实验试剂的可靠性。具体的，高岭土组用于检测高岭土激活剂的质量是否合格，快速高岭土组用于检测快速高岭土激活剂的质量是否合格，肝素酶组用于检测肝素酶的质量是否合格，纤维蛋白原组用于检测纤维蛋白原的质量是否合格，血小板抑制剂组用于检测腺苷二磷酸、花生四烯酸的质量是否合格。

在本申请中，去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原由动物血液中分离获得，动物血液具体的可以但不限于为人血、羊血、猪血、兔血、牛血、马血等，其中人血可以但不限于包括枸橼酸抗凝全血、肝素抗凝全血、EDTA抗凝血浆等。

在本申请实施方式中，第二高凝质控样本、第二正常质控样本和第二低凝质控样本还包括磷脂，从而提供反应表面使组织因子执行激活功能。具体的，磷脂可以但不限于为动物卵磷脂、植物磷脂等，第二高凝质控样本、第二正常质控样本或第二低凝质控样本中磷脂的含量可以但不限于为0.00000001μg至100μg、0.01μg至80μg、0.1μg至65μg或100μg至25μg等。

在本申请实施方式中，第三正常质控样本还包括肝素酶和鱼精蛋白中的至少一种。通过加入肝素酶和/或鱼精蛋白分解肝素，从而进一步保证去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原配合形成的第三正常质控样本的R_普通杯与R_肝素酶杯的差值小于或等于2min。具体的，第三正常质控样本中肝素酶和/或鱼精蛋白的含量可以但不限于为0.00000001μg至100mg、0.01μg至80mg、0.1μg至50mg或100μg至20mg等。

在本申请实施方式中，第一异常质控样本还包括凝血酶抑制剂。通过加入凝血酶抑制剂，从而进一步保证去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原配合形成的第一异常质控样本的R_普通杯与R_肝素酶杯的差值大于2min。具体的，凝血酶抑制剂可以但不限于包括未分级肝素、低分子肝素、依诺肝素钠、达肝素钠、水蛭素、重组水蛭素、抗凝血酶III、抑肽酶、苯丙氨酰-脯氨酰-精氨酸氯甲基酮和(2R,4R)-4-甲基-1-[N-[(3-甲基-1,2,3,4-四氢-8-喹啉基)磺酰]-L-精氨酰]-2-哌啶甲酸中的一种或多种。具体的，第一异常质控样本中凝血酶抑制剂的含量可以但不限于为0.00000001μg至100mg、0.01μg至80mg、0.1μg至50mg或100μg至20mg等。

在本申请实施方式中，第四正常质控样本还包括血小板抑制剂。在本申请实施方式中，第三异常质控样本还包括血小板抑制剂。通过加入血小板抑制剂，从而使得第四正常质控样本、第三异常质控样本的抑制率在所需的范围内。具体的，血小板抑制剂可以但不限于包括阿司匹林、波立维、抵克立得、普拉格雷、替格瑞洛、坎格雷洛、替罗非班、依替非巴肽、阿昔单抗、血小板糖蛋白IIb/IIIa受体多抗等。具体的，第四正常质控样本或第三异常质控样本中血小板抑制剂的含量可以但不限于为0.00000001μg至100mg、0.1μg至90mg、1μg至75mg或100μg至30mg等。

在本申请实施方式中，第一高凝质控样本、第一正常质控样本、第一低凝质控样本、第二高凝质控样本、第二正常质控样本、第二低凝质控样本、第四正常质控样本和第三异常质控样本中的至少一种还包括血小板冻干粉。血小板冻干粉的加入更容易使去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原配合得到所需指标的质控样本。在本申请实施方式中，血小板冻干粉包括血小板和冻干缓冲试剂。通过加入冻干缓冲试剂，从而对血小板进行保护，降低血小板的环境敏感性，保证血小板的生物性能。进一步的，冻干缓冲试剂包括氯化钠、氯化钾、氯化钙、硫酸镁、碳酸氢钠、柠檬酸、柠檬酸钠、乙酸钠、葡萄糖、海藻糖和前列地尔。该冻干缓冲液的物质可以对血小板进行保护，还可以进入血小板细胞中，进一步对血小板进行保护。更进一步的，冻干缓冲试剂中还包括血浆和牛血清白蛋白中的至少一种，从而进入血小板细胞中，对血小板起到保护作用，进一步降低血小板的环境敏感性，保证血小板的生物性能。

本申请提供了一种血栓弹力图实验试剂的室间质评样本制备方法，包括将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原混合制得上述任一实施方式中的室间质评样本，室间质评样本包括高岭土组、快速高岭土组、肝素酶组、纤维蛋白原组和血小板抑制剂组中的至少一组。

在本申请实施方式中，去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原的制备方法包括：血液抗凝处理后进行离心并收集血浆；血浆冷冻、复融后进行离心，获得第一上清液和第一沉淀物，第一沉淀物溶解后离心，获得的上层液体为纤维蛋白原；将第一上清液进行蛋白沉淀，并通过离心获得第二上清液和第二沉淀物，第二上清液为去蛋白的血清基质；溶解第二沉淀物并置于透析袋中透析，再将透析袋中的液体离心浓缩得到凝血因子。

请参阅图2，为本申请一实施方式提供的血栓弹力图实验试剂的室间质评样本制备方法流程图，包括：

S101：血液抗凝处理后进行离心并收集血浆。

S102：血浆冷冻、复融后进行离心，获得第一上清液和第一沉淀物，第一沉淀物溶解后离心，获得的上层液体为纤维蛋白原。

S103：将第一上清液进行蛋白沉淀，并通过离心获得第二上清液和第二沉淀物，第二上清液为去蛋白的血清基质。

S104：溶解第二沉淀物并置于透析袋中透析，再将透析袋中的液体离心浓缩得到凝血因子。

S105：将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原混合制得室间质评样本。

在S101中，血液可以但不限于为人血、羊血、猪血、兔血、牛血、马血等。在一实施例中，血液抗凝处理包括将血液与枸橼酸抗凝剂混合。具体的，按重量份数计，血液与枸橼酸抗凝剂的混合比例为9:1。

在S102中，通过将血浆冷冻、复融，从而产生血凝块，即第一沉淀物。在一实施例中，冷冻的温度为-30℃～-15℃，冷冻的时间大于或等于12h。进一步的，冷冻的温度为-25℃～-20℃，冷冻的时间为12h-18h。在一实施例中，复融的温度为2℃～8℃，复融的时间大于或等于12h。进一步的，复融的温度为3℃～6℃，复融的时间为12h-18h。通过上述冷冻、复融工艺进一步保证了纤维蛋白原的生物性能。

在S103中，蛋白沉淀可以但不限于为硫酸铵沉淀，去蛋白的血清基质可以放置在2℃～8℃条件下短期保存，或放置在-20℃以下长期保存。

在S104中，可以但不限于用生理盐水溶解第二沉淀物，透析袋的截留分子量可以但不限于为3kDa。

在S105中，将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原混合制备室间质评样本。在一实施例中，可以将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原冷冻干燥后获得去蛋白的血清基质干粉、凝血因子干粉和纤维蛋白原干粉，将去蛋白的血清基质干粉、凝血因子干粉和纤维蛋白原干粉混合制备室间质评样本。

在本申请实施方式中，制备方法还包括将血小板冻干粉与去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原混合制备室间质评样本。

在本申请实施方式中，血小板冻干粉的制备包括：将富血小板血浆离心后获得第一上清和第一沉淀，用冻干缓冲液重悬第一沉淀，得到前处理样本，其中冻干缓冲液包括10mM-100mM氯化钠、0.5mM-5mM氯化钾、0.1mM-5mM氯化钙、0.2mM-5mM硫酸镁、5mM-300mM碳酸氢钠、0.1mM-35mM柠檬酸、1mM-100mM柠檬酸钠、0.5mM-150mM乙酸钠、1mM-100mM葡萄糖、5mM-300mM海藻糖和0.1μg/ml-10μg/ml前列地尔；将前处理样本进行离心获得第二上清和第二沉淀，用冻干缓冲液重悬第二沉淀，得到冻干液；将冻干液冻干，获得血小板冻干粉。

请参阅图3，为本申请另一实施方式提供的血栓弹力图实验试剂的室间质评样本的制备方法流程图，包括：

S201：将富血小板血浆离心后获得第一上清和第一沉淀，用冻干缓冲液重悬第一沉淀，得到前处理样本。

S202：将前处理样本进行离心获得第二上清和第二沉淀，用冻干缓冲液重悬第二沉淀，得到冻干液；将冻干液冻干，获得血小板冻干粉。

S203：将去蛋白的血清基质、凝血因子、纤维蛋白原和血小板冻干粉混合制得室间质评样本。

在S201中，富血小板血浆可以但不限于来自人血、羊血、猪血、兔血、牛血、马血等。在本申请实施方式中，富血小板血浆的制备方法包括：将血液离心后将上清液进行二次离心，获得富血小板血浆沉淀。

在S202中，可以采用与第二上清同体积的冻干缓冲液重悬第一沉淀。在一实施例中，前处理样本进行振荡处理，保证血小板保持悬浮状态。具体的，可以但不限于在37℃振荡水浴4h。在本申请中，离心的转速和时间根据需要进行选择，对其不做限定。

在本申请实施方式中，冻干缓冲液包括10mM-100mM氯化钠、0.5mM-5mM氯化钾、0.1mM-5mM氯化钙、0.2mM-5mM硫酸镁、5mM-300mM碳酸氢钠、0.1mM-35mM柠檬酸、1mM-100mM柠檬酸钠、0.5mM-150mM乙酸钠、1mM-100mM葡萄糖、5mM-300mM海藻糖和0.1μg/ml-10μg/ml前列地尔。本发明人研究发现，采用上述冻干缓冲液重悬血小板时，可以对血小板起到保护作用，获得性能好的血小板，有利于室间质评样本的制备。在本申请一实施例中，冻干缓冲液包括20mM-80mM氯化钠、1mM-3mM氯化钾、0.5mM-3mM氯化钙、1mM-3mM硫酸镁、15mM-200mM碳酸氢钠、1mM-20mM柠檬酸、5mM-70mM柠檬酸钠、10mM-100mM乙酸钠、5mM-60mM葡萄糖、30mM-200mM海藻糖和1μg/ml-5μg/ml前列地尔。进一步的，冻干缓冲液包括40mM-60mM氯化钠、1mM-3mM氯化钾、0.5mM-1mM氯化钙、1mM-3mM硫酸镁、20mM-50mM碳酸氢钠、1mM-5mM柠檬酸、5mM-10mM柠檬酸钠、10mM-20mM乙酸钠、5mM-15mM葡萄糖、30mM-60mM海藻糖和1μg/ml-5μg/ml前列地尔。具体的，可以将前列地尔溶于生理盐水中加入冻干缓冲液内。在本申请中，冻干缓冲液可以通过0.22μm滤器过滤除菌。

在本申请实施方式中，冻干缓冲液重悬第二沉淀后，还可以加入血浆和牛血清白蛋白中的至少一种，获得冻干液。加入血浆或牛血清白蛋白可以对血小板起到进一步的保护作用。在本申请一实施例中，冻干液中血浆的质量含量为30％-40％。进一步的，冻干液中血浆的质量含量为32％-37％。在本申请另一实施例中，冻干液中牛血清白蛋白的质量含量为0.1％-10％。进一步的，冻干液中牛血清白蛋白的质量含量为1％-8％。

在本申请实施方式中，冻干包括在-45℃～-35℃预冻120min-200min，然后升温至-25℃～-15℃并保持1000min以上，最后升温至20℃-35℃并保持360min以上。如此，保证血小板的生物活性。在一实施例中，冻干在冻干机中进行，冻干机的冷凝器温度为-75℃～-70℃，以保证冻干的进行。在另一实施例中，预冻的真空度小于133mBar；升温至-25℃～-15℃时，真空度小于0.5mBar。在又一实施例中，冻干包括在-45℃～-35℃预冻120min-200min，然后20min-40min内升温至-25℃～-15℃并保持1000min以上，最后30min-50min内升温至20℃-35℃并保持360min以上。在又一实施例中，可以将冻干液先置于超低温冰箱中预处理，再进行冻干。超低温冰箱的温度可以但不限于为-80℃。

在S203中，去蛋白的血清基质、凝血因子、纤维蛋白原和血小板冻干粉混合制备室间质评样本。

在本申请中，可以将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原按比例混合，如按体积比1：1：1、1：2：1或1：3：1混合，根据检测结果，调整去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原的含量。

在本申请一实施例中，将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原按体积比1：3：1混合后加入血小板冻干粉，采用血栓弹力图仪和高岭土试剂测试该样本，获取R值和MA值，若R值小于4min且MA值大于65mm，则该样本为第一高凝质控样本；将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原按体积比1：2：1混合后加入血小板冻干粉，采用血栓弹力图仪和高岭土试剂测试该样本，获取R值和MA值，若R值为4min-7min且MA值为45mm-65mm，则该样本为第一正常质控样本；将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原按体积比1：1：1混合后加入血小板冻干粉，采用血栓弹力图仪和高岭土试剂测试该样本，获取R值和MA值，若R值大于7min且MA值小于45mm，则该样本为第一低凝质控样本；若R值和MA值不在范围，视具体R值和MA值判断，继续加入去蛋白的血清基质、凝血因子、纤维蛋白原和血小板冻干粉中的至少一种。

在本申请一实施例中，将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原按体积比1：3：1混合后加入血小板冻干粉和磷脂，采用血栓弹力图仪和高岭土试剂测试该样本，获取ACT值和MA值，若ACT值小于86s且MA值大于65mm，则该样本为第二高凝质控样本；将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原按体积比1：2：1混合后加入血小板冻干粉和磷脂，采用血栓弹力图仪和高岭土试剂测试该样本，获取ACT值和MA值，若ACT值为86s-118s且MA值为45mm-65mm，则该样本为第二正常质控样本；将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原按体积比1：1：1混合后加入血小板冻干粉和磷脂，采用血栓弹力图仪和高岭土试剂测试该样本，获取ACT值和MA值，若ACT值大于118s且MA值小于45mm，则该样本为第二低凝质控样本；若ACT值和MA值不在范围，视具体ACT值和MA值判断，继续加入去蛋白的血清基质、凝血因子、纤维蛋白原和血小板冻干粉中的至少一种。

在本申请一实施例中，将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原按体积比1：1：1混合后，采用血栓弹力图仪，用高岭土试剂测试该样本获取R_普通杯值，用肝素酶杯试剂测试该样本获取R_肝素酶杯值，若R_普通杯与R_肝素酶杯的差值小于或等于2min，则该样本为第三正常质控样本，若R_普通杯与R_肝素酶杯的差值不在范围，视具体R_普通杯与R_肝素酶杯的差值判断，加入肝素酶、鱼精蛋白等；若R_普通杯与R_肝素酶杯的差值大于2min，则该样本为第一异常质控样本，若R_普通杯与R_肝素酶杯的差值不在范围，视具体R_普通杯与R_肝素酶杯的差值判断，加入凝血酶抑制剂。

在本申请一实施例中，将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原按体积比1：1：1混合后，采用血栓弹力图仪和功能性纤维蛋白原检测试剂测试该样本，获取MA值，若MA值大于24mm，则该样本为第一高值质控样本，若MA值过小，可以加入纤维蛋白原调整MA值大于24mm；若MA值为11mm-24mm，则该样本为第四正常质控样本；若MA值小于11mm，则该样本为第二异常质控样本，若MA值过大，可以加入去蛋白的血清基质调整MA值小于11mm。

在本申请一实施例中，将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原按体积比1：1：1混合后加入血小板冻干粉，采用血栓弹力图仪和血小板检测试剂(高岭土、激活剂F、激活剂ADP/激活剂AA)测试该样本，获取各个检测试剂测试样本的MA值(MA、MA_F、MA_ADP/MA_AA)，计算得到ADP或AA对血小板的抑制率，若AA抑制率大于50％或者ADP抑制率大于30％，则该样本为第四正常质控样本，若AA抑制率小于或等于50％或者ADP抑制率小于或等于30％，则该样本为第三异常质控样本，若抑制率不达标，可以加入血小板抑制剂。

可以理解的，上述实施例仅为示例性的示出室间质评样本的配制过程，在此基础上还可以做出若干变形和改进，均属于本申请的保护范围，可以获得本申请的血栓弹力图实验试剂的室间质评样本。

本申请提供的血栓弹力图实验试剂的室间质评样本的制备方法简单，操作方便，可用于大规模生产和应用。

本申请还提供了上述血栓弹力图实验试剂的室间质评样本在血栓弹力图实验试剂的质量控制中的应用。如此，保证血栓弹力图实验试剂的准确性和可靠性，进而保证血栓弹力图实验结果的准确性。

在本申请实施方式中，通过使用上述血栓弹力图实验试剂的室间质评样本与相应的实验试剂混合，经检测获得相应的检测结果，如R值、MA值、ACT值、R_普通杯值、R_肝素酶杯值、AA抑制率、ADP抑制率等，通过这些检测结果与上述室间质评样本的R值、MA值、ACT值、R_普通杯值、R_肝素酶杯值、AA抑制率或ADP抑制率的标准值进行对比，从而判断相应的实验试剂的质量。在本申请一实施例中，通过获取检测结果与标准值的偏差，从而判断相对应的实验试剂的质量，偏差的计算公式如式(1)所示，

在本申请实施方式中，当偏差在可接受范围内时，则认为血栓弹力图实验试剂质量合格。在一实施例中，血栓弹力图实验试剂的室间质评样本包括高岭土组时，当R值偏差小于或等于15％，MA值偏差小于或等于10％时，高岭土激活剂质量合格。在一实施例中，血栓弹力图实验试剂的室间质评样本包括快速高岭土组时，当ACT值偏差小于或等于15％，MA值偏差小于或等于10％时，快速高岭土激活剂质量合格。在一实施例中，血栓弹力图实验试剂的室间质评样本包括肝素酶组时，当R_普通杯与R_肝素酶杯的差值的偏差小于或等于15％时，肝素酶质量合格。在一实施例中，血栓弹力图实验试剂的室间质评样本包括纤维蛋白原组时，当MA值偏差小于或等于15％时，纤维蛋白原质量合格。在一实施例中，血栓弹力图实验试剂的室间质评样本包括血小板抑制剂组时，当MA值(MA_AA或MA_ADP)偏差小于或等于10％时，花生四烯酸或腺苷二磷酸质量合格。进一步的，高岭土组、快速高岭土组、肝素酶组、纤维蛋白原组和血小板抑制剂组中的至少一组进行多次实验，统计实验总次数以及质量合格的次数，获得血栓弹力图实验试剂的得分，其中，得分为质量合格的次数与实验总次数的比值。更进一步的，当得分大于或等于90％时，评价该血栓弹力图实验试剂质量合格，否则质量不合格。在一具体实施例中，高岭土组、快速高岭土组、肝素酶组、纤维蛋白原组和血小板抑制剂组共五组质控样本组对血栓弹力图实验试剂的质量进行检测，可以看出至少四组质控样本组对应的检测结果与标准值的偏差在可接受范围内时，该血栓弹力图实验试剂质量才合格。因此，通过本申请提供的血栓弹力图实验试剂的室间质评样本可以对血栓弹力图实验试剂的质量进行判断，从而避免血栓弹力图实验试剂对检测结果的影响；当血栓弹力图实验试剂质量不合格时，针对性地对血栓弹力图实验试剂进行检测、更换等，保证后续检测的进行。

在一实施例中，血栓弹力图实验试剂的室间质评样本中高岭土组的使用方法可以为：将第一高凝质控样本、第一正常质控样本或第一低凝质控样本加水溶解，并加入待检测的高岭土激活剂，混合后加入反应杯中，并向反应杯中加入氯化钙，置于血栓弹力图仪中进行凝血测试，根据血栓弹力图获得检测的R值和MA值；检测的R值和MA值与第一高凝质控样本、第一正常质控样本、第一低凝质控样本对应的标准的R值和MA值进行比较，从而判断待检测的高岭土激活剂是否合格。

在一实施例中，血栓弹力图实验试剂的室间质评样本中快速高岭土组的使用方法可以为：将待检测的快速高岭土激活剂以及氯化钙加入反应杯中，第二高凝质控样本、第二正常质控样本或第二低凝质控样本加水溶解后加入反应杯中，混匀后将反应杯置于血栓弹力图仪中进行凝血测试，根据血栓弹力图获得检测的ACT值和MA值；检测的ACT值和MA值与第二高凝质控样本、第二正常质控样本、第二低凝质控样本对应的标准的ACT值和MA值进行比较，从而判断待检测的快速高岭土激活剂是否合格。

在一实施例中，血栓弹力图实验试剂的室间质评样本中肝素酶组的使用方法可以为：将柠檬酸抗凝全血和高岭土激活剂混合后的样本分别加入普通杯(空白反应杯)和肝素酶杯(含待检测肝素酶的反应杯)中，普通杯和肝素酶杯均加入氯化钙后置于血栓弹力图仪中进行凝血测试，根据血栓弹力图获得R_普通杯与R_肝素酶杯，并计算得到检测的R_普通杯与R_肝素酶杯的差值；检测的R_普通杯与R_肝素酶杯的差值与第三正常质控样本、第一异常质控样本对应的标准的R_普通杯与R_肝素酶杯的差值进行比较，从而判断待检测肝素酶是否合格。

在一实施例中，血栓弹力图实验试剂的室间质评样本中纤维蛋白原组的使用方法可以为：将第一高值质控样本、第四正常质控样本或第二异常质控样本溶解后，加入待检测的纤维蛋白试剂，混合后加入含氯化钙的反应杯中，置于血栓弹力图仪中进行凝血测试，根据血栓弹力图获得检测的MA值；检测的MA值与第一高值质控样本、第四正常质控样本、第二异常质控样本对应的标准的MA值进行比较，从而判断待检测的纤维蛋白试剂是否合格。

在一实施例中，血栓弹力图实验试剂的室间质评样本中血小板抑制剂组的使用方法可以为：激活剂F、待检测的花生四烯酸、待检测的腺苷二磷酸加水重悬后获得激活剂F溶液、AA溶液、ADP溶液，将激活剂F溶液和AA溶液加入一反应杯中，将激活剂F溶液和ADP溶液加入反应杯中；将第四正常质控样本、第三异常质控样本加水溶解后，分别加入上述反应杯中，置于血栓弹力图仪中进行凝血测试，根据血栓弹力图获得检测的MA_AA值、MA_ADP值；检测的MA_AA值、MA_ADP值与第四正常质控样本、第三异常质控样本对应的标准的MA_AA值、MA_ADP值进行比较，从而判断待检测的花生四烯酸、待检测的腺苷二磷酸是否合格。

可以理解的，上述实施例仅为示例性的示出室间质评样本在评价血栓弹力图实验试剂质量的使用方法，在此基础上还可以进行不同的实验过程，如采用不同的血样、不同的检测方法、不同的混合顺序等，均可以对血栓弹力图实验试剂的质量进行评价，仍然在本申请的保护范围。

实施例

采集新鲜猪血样本，9份猪血样本和1份枸橼酸抗凝剂混合，然后在600g离心10min，实现血浆与红细胞及白细胞的分离；将分离出的血浆在-20℃以下冰冻至少12h，取出后在2℃-8℃下复融至少12h，有血凝块产生；将血浆在600g离心10min，得到第一上清液和第一沉淀物。第一沉淀物(血凝块)用水缓慢冲洗，再生理盐水溶解后离心，取上清液冷冻干燥，获取纤维蛋白原冻干粉；第一上清液进行硫酸铵沉淀，离心后得到第二上清液和第二沉淀物，第二上清液作为去蛋白的血清基质；第二沉淀物用生理盐水溶解后，放入透析膜截止分子量为3KD的透析袋，加入100X体积比的烧杯中透析过夜，然后经过离心浓缩，得到高浓度的凝血因子溶液。

采集新鲜猪血样本，9份猪血样本和1份枸橼酸抗凝剂混合，然后在600g离心10min，吸取全部血浆移至另一离心管，1500g离心10min，上层上清液为乏血小板血浆，下层为血小板浓缩物；吸取3/4上清液弃掉，剩余的液体摇匀，即为富血小板血浆。将富血小板血浆在1500g离心15min，去除上清。将55mM氯化钠、2.1mM氯化钾、0.7氯化钙、1.1mM硫酸镁、31mM碳酸氢钠、3.4mM柠檬酸、6.7mM柠檬酸钠、15mM乙酸钠、10.7mM葡萄糖、50mM海藻糖和1μg/ml前列地尔混合，配置成pH 6.8的冻干缓冲液并用0.22μm过滤器过滤。用与弃掉的上清等体积的冻干缓冲液重悬血小板，并在37℃水浴4h，得到前处理样本。将前处理样本进行离心后去除上清，并用冻干缓冲液重悬，并加入血浆和牛血清白蛋白，得到冻干液，冻干液中血浆质量含量为30％，牛血清白蛋白的质量含量为2％。将冻干液转移至冻干瓶中，每瓶4mL。设置冻干机降温70min，板层从室温降至-45℃预冻后，将冻干瓶移入冻干机，放入-45℃板层，进行真空干燥，冷阱温度保持为-70±5℃，真空度为＜133-mbar，持续180min，再逐步升温，设置升温30min，板层从-45℃升至-20℃，冷阱温度保持为-70±5℃，真空度为＜0.5mbar，保持在-20℃冻干不少于1000min；再逐步升温，设置升温40min，板层从-20℃升至30℃，冷阱温度维持为-70±5℃，板层保持在30℃解析干燥不少于360min，然后真空加盖密封，逐步放入空气，待气压平衡后取出血小板冻干粉。

将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原混合，并加入血小板冻干粉配置高岭土组试剂，包括R值小于4min且MA值大于65mm的第一高凝质控样本、R值为4min-7min且MA值为45mm-65mm的第一正常质控样本、R值大于7min且MA值小于45mm的第一低凝质控样本。将配置好的第一高凝质控样本、第一正常质控样本和第一低凝质控样本在标准血栓弹力图仪上测试，结果如表1所示。

表1高岭土组检测结果

由表1可以看出所获得的第一高凝质控样本、第一正常质控样本和第一低凝质控样本符合室间质评样本的要求，可以作为血栓弹力图实验试剂的室间质评样本使用，其中第一高凝质控样本的R值为2.6min，MA值为73.2mm；第一正常质控样本的R值为5.1min，MA值为53.7mm；第一低凝质控样本的R值为9.2min，MA值为24.7mm。

采用上述高岭土组试剂对七家医院进行高岭土激活剂的室间质评，各医院检测结果如表2所示，并计算各医院的检测结果与第一高凝质控样本、第一正常质控样本和第一低凝质控样本的标准的R值、MA值之间的偏差，结果如表3所示。

表2室间质评检测结果

表3室间质评检测结果偏差

从表3中可以看出，各医院检测结果的R值偏差均小于15％，MA值偏差均小于10％，偏差均在可接受范围内，各医院高岭土试剂的室间质评结果合格。

以上所述实施例仅表达了本申请的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本申请专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本申请构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本申请的保护范围。因此，本申请专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种血栓弹力图实验试剂的室间质评样本，其特征在于，所述室间质评样本包括高岭土组、快速高岭土组、肝素酶组、纤维蛋白原组和血小板抑制剂组中的至少一组；

所述高岭土组包括第一高凝质控样本、第一正常质控样本和第一低凝质控样本，所述第一高凝质控样本的R值小于4min且MA值大于65mm，所述第一正常质控样本的R值为4min-7min且MA值为45mm-65mm，所述第一低凝质控样本的R值大于7min且MA值小于45mm；

所述快速高岭土组包括第二高凝质控样本、第二正常质控样本和第二低凝质控样本，所述第二高凝质控样本的ACT值小于86s且MA值大于65mm，所述第二正常质控样本的ACT值为86s-118s且MA值为45mm-65mm，所述第二低凝质控样本的ACT值大于118s且MA值小于45mm；

所述肝素酶组包括第三正常质控样本和第一异常质控样本，所述第三正常质控样本的R_普通杯与R_肝素酶杯的差值小于或等于2min，所述第一异常质控样本的R_普通杯与R_肝素酶杯的差值大于2min；

所述纤维蛋白原组包括第一高值质控样本、第四正常质控样本和第二异常质控样本，所述第一高值质控样本的MA值大于24mm，所述第四正常质控样本的MA值为11mm-24mm，所述第二异常质控样本的MA值小于11mm；

所述血小板抑制剂组包括第四正常质控样本和第三异常质控样本，所述第四正常质控样本的AA抑制率大于50％或者ADP抑制率大于30％，所述第三异常质控样本的AA抑制率小于或等于50％或者ADP抑制率小于或等于30％；

所述第一高凝质控样本、所述第一正常质控样本、所述第一低凝质控样本、所述第二高凝质控样本、所述第二正常质控样本、所述第二低凝质控样本、所述第三正常质控样本、所述第一异常质控样本、所述第一高值质控样本、所述第四正常质控样本、所述第二异常质控样本、所述第四正常质控样本和所述第三异常质控样本包括去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原。

2.如权利要求1所述的室间质评样本，其特征在于，所述第一高凝质控样本、所述第一正常质控样本、所述第一低凝质控样本、所述第二高凝质控样本、所述第二正常质控样本、所述第二低凝质控样本、所述第四正常质控样本和所述第三异常质控样本中的至少一种还包括血小板冻干粉。

3.如权利要求2所述的室间质评样本，其特征在于，所述血小板冻干粉包括血小板和冻干缓冲试剂；

所述冻干缓冲试剂包括氯化钠、氯化钾、氯化钙、硫酸镁、碳酸氢钠、柠檬酸、柠檬酸钠、乙酸钠、葡萄糖、海藻糖和前列地尔。

4.如权利要求1所述的室间质评样本，其特征在于，所述第二高凝质控样本、所述第二正常质控样本和所述第二低凝质控样本还包括磷脂；

所述第三正常质控样本还包括肝素酶和鱼精蛋白中的至少一种；

所述第一异常质控样本还包括凝血酶抑制剂；

所述第四正常质控样本还包括血小板抑制剂；

所述第三异常质控样本还包括血小板抑制剂。

5.一种血栓弹力图实验试剂的室间质评样本的制备方法，其特征在于，包括将去蛋白的血清基质、凝血因子和纤维蛋白原混合制得室间质评样本，所述室间质评样本包括高岭土组、快速高岭土组、肝素酶组、纤维蛋白原组和血小板抑制剂组中的至少一组；

所述高岭土组包括第一高凝质控样本、第一正常质控样本和第一低凝质控样本，所述第一高凝质控样本的R值小于4min且MA值大于65mm，所述第一正常质控样本的R值为4min-7min且MA值为45mm-65mm，所述第一低凝质控样本的R值大于7min且MA值小于45mm；

所述快速高岭土组包括第二高凝质控样本、第二正常质控样本和第二低凝质控样本，所述第二高凝质控样本的ACT值小于86s且MA值大于65mm，所述第二正常质控样本的ACT值为86s-118s且MA值为45mm-65mm，所述第二低凝质控样本的ACT值大于118s且MA值小于45mm；

所述肝素酶组包括第三正常质控样本和第一异常质控样本，所述第三正常质控样本的R_普通杯与R_肝素酶杯的差值小于或等于2min，所述第一异常质控样本的R_普通杯与R_肝素酶杯的差值大于2min；

所述纤维蛋白原组包括第一高值质控样本、第四正常质控样本和第二异常质控样本，所述第一高值质控样本的MA值大于24mm，所述第四正常质控样本的MA值为11mm-24mm，所述第二异常质控样本的MA值小于11mm；

所述血小板抑制剂组包括第四正常质控样本和第三异常质控样本，所述第四正常质控样本的AA抑制率大于50％或者ADP抑制率大于30％，所述第三异常质控样本的AA抑制率小于或等于50％或者ADP抑制率小于或等于30％。

6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，还包括将血小板冻干粉与所述去蛋白的血清基质、所述凝血因子和所述纤维蛋白原混合制备所述室间质评样本。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述血小板冻干粉的制备包括：

将富血小板血浆离心后获得第一上清和第一沉淀，用冻干缓冲液重悬所述第一沉淀，得到前处理样本，其中所述冻干缓冲液包括10mM-100mM氯化钠、0.5mM-5mM氯化钾、0.1mM-5mM氯化钙、0.2mM-5mM硫酸镁、5mM-300mM碳酸氢钠、0.1mM-35mM柠檬酸、1mM-100mM柠檬酸钠、0.5mM-150mM乙酸钠、1mM-100mM葡萄糖、5mM-300mM海藻糖和0.1μg/ml-10μg/ml前列地尔；

将所述前处理样本进行离心获得第二上清和第二沉淀，用所述冻干缓冲液重悬所述第二沉淀，得到冻干液；

将所述冻干液冻干，获得所述血小板冻干粉。

8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述冻干包括在-45℃～-35℃预冻120min-200min，然后升温至-25℃～-15℃并保持1000min以上，最后升温至20℃-35℃并保持360min以上。

9.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述去蛋白的血清基质、所述凝血因子和所述纤维蛋白原的制备方法包括：

血液抗凝处理后进行离心并收集血浆；

所述血浆冷冻、复融后进行离心，获得第一上清液和第一沉淀物，所述第一沉淀物溶解后离心，获得的上层液体为所述纤维蛋白原；

将所述第一上清液进行蛋白沉淀，并通过离心获得第二上清液和第二沉淀物，所述第二上清液为所述去蛋白的血清基质；

溶解所述第二沉淀物并置于透析袋中透析，再将所述透析袋中的液体离心浓缩得到所述凝血因子。

10.如权利要求1-4任一项所述室间质评样本或权利要求5-9任一项所述的制备方法制得的室间质评样本在血栓弹力图实验试剂的质量控制中的应用。

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