CN115103590A - 用于促进植物生长的生长调节因子家族转录因子的突变 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于修饰植物中的生长调节因子(GRF)家族转录因子以产生具有改善的表型特征(包括增加的生长)的植物的组合物和方法。本发明进一步涉及使用本发明的方法和组合物产生的植物。

Description

用于促进植物生长的生长调节因子家族转录因子的突变

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优先权声明

此申请根据35 U.S.C.§119(e)要求2019年12月20日提交的美国临时申请号62/951,593的权益，其全部内容通过引用并入本文。

技术领域

本发明涉及用于修饰植物中的生长调节因子(GRF)家族转录因子以产生具有改善的表型特征(包括增加的生长)的植物的组合物和方法。本发明进一步涉及使用本发明的方法和组合物产生的植物。

背景技术

GRF是陆地植物特异性转录因子，与GRF相互作用因子(GIF)一起发挥作用，其在植物和后生动物中发现，但在真菌中没有。GRF家族成员数量在陆生植物中为约8-20。最近的研究揭示了GRF在植物生物学的其他方面(例如开花、种子和根发育、胁迫条件下的生长控制以及植物寿命的调节)的功能。

对GRF突变体和过表达植物的分析表明，这些转录因子在叶片发育过程中促进细胞增殖。还已经确定一些GRF的mRNA被microRNA miR396靶向。例如，九个拟南芥GRF中有七个具有micro-RNA(miRNA)miR396的结合位点。虽然GRF转录因子家族的初步研究集中在GRF错误表达对叶片大小的影响，但后来的工作确定，通过欧洲油菜(Brassica napus)GRF2的异质表达或AtGRF1、AtGRF2和AtGRF5的过表达，可以在拟南芥中实现较大的种子(vanDaele等人,Plant Biotechnology Journal 10:488–500 2012))。

谷粒大小是水稻产率的关键组成部分之一，其受水稻中数量性状基因座(QTL)的调节。在水稻中已报道了一个谷粒大小和重量的半显性QTL(GS2)，它编码转录因子OsGRF4(生长调节因子4)并受OsmiR396的调节。GS2中的2bp取代突变扰乱了对GS2的OsmiR396指导的调节，导致大而重的谷粒并增加了谷粒产率(图1)。

发明内容

本发明的一个方面提供了一种植物或其植物部分，其包含编码生长调节因子(GRF)转录因子的内源性基因中的至少一个非天然突变，其中编码GRF转录因子的内源性基因中的至少一个非天然突变导致由内源性基因产生的增加的mRNA水平。

本发明的另一方面提供了一种植物细胞，其包含碱基编辑系统，所述碱基编辑系统包含：(a)CRISPR相关效应蛋白；(b)胞苷脱氨酶或腺苷脱氨酶；和(c)具有与编码GRF转录因子的内源性靶基因互补的间隔序列的引导核酸(gRNA、gDNA、crRNA、crDNA)。

本发明的另一方面提供了一种植物细胞，其在GRF转录因子基因的miR396结合位点内包含至少一种非天然存在的基因组修饰，其阻止或减少miR396与GRF转录因子mRNA的结合，其中所述基因组修饰是使用编辑系统引入的取代、插入或缺失，该编辑系统包含与具有SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列的GRF转录因子基因中的靶位点结合的核酸结合结构域。

本发明的另一方面提供了一种植物或其部分，其包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因，其中突变的内源GRF转录因子基因包含靶基因(靶核酸)，该靶基因包含与SEQ ID NO：4、5和9-18的任一个核苷酸序列具有至少80％同一性的序列，其中SEQ ID NO：4、5和9-18中的每一个包含与SEQ ID NO：1具有至少90％序列同一性的序列，并且靶基因在与SEQ ID NO：1具有至少90％序列同一性的序列内被修饰(例如突变)。

本发明的另一方面提供了一种植物或其部分，其包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因，其中突变的内源GRF转录因子基因包含靶基因(靶核酸)，该靶基因包含与SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列，其中SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7的核苷酸序列中的每一个包含与SEQ ID NO：2的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列，并且靶基因在与SEQ ID NO：2的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列内被修饰(例如突变)。

本发明的另一方面提供了一种植物或其部分，其包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因，其中突变的内源GRF转录因子基因包含靶基因(靶核酸)，该靶基因包含与SEQ ID NO：8的任一个核苷酸序列具有至少80％的同一性的序列，其中SEQ ID NO：8包含与SEQ ID NO：3具有至少90％序列同一性的序列，并且靶基因在与SEQ ID NO：3的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列内被修饰(例如，突变)。

本发明的另一方面提供了一种植物或其部分，其包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因，其中突变的内源GRF转录因子基因包含靶基因(靶核酸)，该靶基因包含与SEQ ID NO：121-144的任一个核苷酸序列具有至少80％的同一性的序列，其中SEQ ID NO：121-144中的每一个包含与SEQ ID NO：145-146中的任一个具有至少90％序列同一性的序列，并且靶基因在与SEQ ID NO：145-146中的任一个具有至少90％序列同一性的序列内被修饰(例如突变)。

本发明的另一方面提供了一种植物或其部分，其包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因，其中突变的内源GRF转录因子基因包含靶基因(靶核酸)，该靶基因包含与SEQ ID NO：173-198的任一个核苷酸序列具有至少80％的同一性的序列，其中SEQ ID NO：173-198中的每一个包含与SEQ ID NO：199-202中的任一个具有至少90％序列同一性的序列，并且靶基因在与SEQ ID NO：199-202中的任一个具有至少90％序列同一性的序列内被修饰(例如突变)。

本发明的另一方面提供了包含生长调节因子(GRF)转录因子基因的植物，该基因包含SEQ ID NO：1-33中任一个的核苷酸序列中的突变和/或包含SEQ ID NO：34-41中任一个的核苷酸序列。

本发明的另一方面提供了一种玉米植物，其包含生长调节因子(GRF)转录因子基因，该转录因子基因包含SEQ ID NO：34-42中任一个的核苷酸序列。

本发明的另一方面提供了一种玉米植物，其包含在生长调节因子(GRF)转录因子基因的miR396结合位点中的突变，该GRF转录因子基因包含SEQ ID NO：1-33中任一个的核苷酸序列。

本发明的另一方面提供了一种小麦植物，其包含在生长调节因子(GRF)转录因子基因的miR396结合位点中的突变，该GRF转录因子基因包含SEQ ID NO：147-202中任一个的核苷酸序列.

本发明的另一方面提供了一种大豆植物，其包含在生长调节因子(GRF)转录因子基因的miR396结合位点中的突变，该GRF转录因子基因包含SEQ ID NO：97-146中任一个的核苷酸序列。

本发明还提供一种产生/培育无转基因碱基编辑植物的方法，该方法包括：(a)将本发明的植物与无转基因植物杂交，从而将至少一个突变、突变或修饰引入无转基因植物；和(b)选择包含至少一个单核苷酸取代但无转基因的后代植物，从而产生无转基因碱基编辑植物。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列具有至少80％序列同一性的序列，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：14的核苷酸序列具有至少65％序列同一性的序列并且包含在SEQ ID NO：9(GRF8 60nt cDNA)或SEQ ID NO：14(GRF5 60nt cDNA)的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：4、5或9-18中任一个的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：4、5或9-18中任一个的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：2具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：8的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：8的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：3具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：4的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：4的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：5的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：5的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：9的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：9的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：10的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：10的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：11的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：1的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：12的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：12的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：13的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：13的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：14的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：14的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：15的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：15的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：16的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：16的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：17的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：17的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：18的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：18的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：121-144中任一个的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：121-144中任一个的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：145-146中的任一个具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：173-198中任一个的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：173-198中任一个的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：199-202中的任一个具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

本发明的另一方面提供了一种制造植物的方法，所述方法包括：(a)使包含编码GRF转录因子的内源性基因的植物细胞群体与包含核酸结合结构域的编辑系统接触，所述核酸结合结构域结合与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202或SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列；(b)从所述群体中选择植物细胞，所述植物细胞在编码GRF转录因子的至少一个内源性基因中包含突变，其中所述突变是所述至少一个内源性基因中至少一个核苷酸的取代，其中所述突变减少或消除miR396与由包含突变的编码GRF转录因子的至少一个内源性基因产生的mRNA结合的能力；和(c)将选择的植物细胞培育成植物。

在一些方面，本发明提供了一种产生包含其中内源GRF转录因子基因被突变的至少一个细胞的植物或其部分的方法，该方法包括使植物或植物部分中的GRF转录因子基因中的靶位点与包含核酸结合结构域的编辑系统接触，所述核酸结合结构域与GRF转录因子基因中的靶位点结合，所述基因与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性、与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性或与SEQ ID NO：19-33、97-120或147-172中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性，从而产生包含在内源GRF转录因子基因中具有突变的至少一个细胞的植物或其部分。

本发明的另一方面提供了产生植物或其部分的方法，该植物或其部分包含突变的内源GRF转录因子基因，该基因产生具有减少的miR396结合的mRNA，该方法包括使内源GRF转录因子基因中的靶位点与编辑系统接触，所述编辑系统包含与GRF转录因子基因中的靶位点结合的核酸结合结构域，所述基因与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性、与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性或与SEQ ID NO：19-33、97-120或147-172中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性，从而产生包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因的植物或其部分。

本发明的另一方面提供了产生具有增加的生长或增加的生长速率的植物或其部分的方法，该方法包括使内源GRF转录因子基因中的靶位点与包含核酸结合结构域的编辑系统接触，所述核酸结合结构域与GRF转录因子基因中的靶位点结合，所述基因与SEQ IDNO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性、与SEQ IDNO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性或与SEQID NO：19-33、97-120或147-172中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性，从而产生包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因的植物或其部分，从而产生具有增加的生长或增加的生长速率的植物或其部分。

本发明的另一方面提供了与GRF转录因子基因中的靶位点结合的引导核酸(例如，gRNA)，该靶位点包含SEQ ID NO：44-71的任一个核苷酸序列。

本发明的另一方面提供了一种系统，其包含本发明的引导核酸和与引导核酸缔合的CRISPR-Cas效应蛋白。

本发明的另一方面提供了一种基因编辑系统，其包含与引导核酸缔合的CRISPR-Cas效应蛋白，其中引导核酸包含与GRF转录因子基因结合的间隔序列。

本发明的另一方面提供了一种复合物，其包含含有切割结构域的CRISPR-Cas效应蛋白和引导核酸(例如，gRNA)，其中引导核酸与具有SEQ ID NO：19-33、97-120或147-172中任一个的核苷酸序列的GRF转录因子基因中的靶位点结合，其中核酸酶切割靶标链。

本发明的另一方面提供了一种复合物，其包含含有切割结构域的CRISPR-Cas效应蛋白和引导核酸(例如，gRNA)，其中引导核酸与具有SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202或SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列的GRF转录因子基因中的靶位点结合，其中核酸酶切割靶标链。

本发明的另一方面提供了一种表达盒，其包含(a)编码含有切割结构域的CRISPR-Cas效应蛋白的多核苷酸和(b)与GRF转录因子基因中的靶位点结合的引导核酸，其中引导核酸包含与以下序列互补并结合的间隔序列：与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202或SEQID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列的至少一部分具有至少80％序列同一性的序列。

本发明的另一方面提供了编码具有突变的miR396结合位点的GRF转录因子mRNA的核酸，其中突变的miR396结合位点包含破坏miR396结合并导致GRF转录因子mRNA水平增加的突变。

本发明的另一方面提供了玉米植物或其植物部分，其在位于玉米植物的1、2、4、5、6、7、9和/或10号染色体上的限定染色体区间中的至少一种内源生长调节因子(GRF)转录因子中包含至少一个非天然突变，其中突变破坏了miR396与GRF转录因子mRNA的结合，导致GRF转录因子mRNA的水平增加。

本发明的另一方面提供了与玉米植物中GRF转录因子中的靶核酸结合的引导核酸，其中靶核酸位于玉米植物的1、2、4、5、6、7、9和/或10号染色体上的限定染色体区间中。

进一步提供了通过本发明的方法产生并且在它们的基因组中包含产生具有降低的结合相应miR396的能力的mRNA的一种或多种突变的GRF转录因子基因的植物，以及用于制造本发明的植物或其部分的多肽、多核苷酸、核酸构建体、表达盒和载体。

本发明的这些和其他方面在以下本发明的描述中更详细地阐述。

序列简述

SEQ ID NO：1-3是来自玉米的生长调节因子(GRF)转录因子中的miR396结合位点序列。

SEQ ID NO：4-18是来自玉米的GRF转录因子的部分cDNA序列。

SEQ ID NO：19-33是来自玉米的GRF转录因子的完整cDNA序列。

SEQ ID NO：34-41是生长调节因子(GRF)转录因子6(GRF6)的突变的miR396结合位点序列的实例。

SEQ ID NO：42-47分别是野生型(SEQ ID NO：43)和突变型蛋白质(SEQ ID NO：44-48)中的GRF转录因子蛋白。

SEQ ID NO：48-71显示了示例性间隔序列。

SEQ ID NO：72-76、209-213是可用于本发明的示例性腺苷脱氨酶序列。

SEQ ID NO：77-80、206-208是可用于本发明的示例性胞嘧啶脱氨酶氨基酸序列。

SEQ ID NO：81是用于本发明的示例性尿嘧啶-DNA糖基化酶抑制剂(UGI)。

SEQ ID NO：82-83是编码启动子和内含子的示例性调节序列。

SEQ ID NO：84-96是来自玉米的成熟miR396序列。

SEQ ID NO：97-120是来自大豆的GRF转录因子的完整cDNA序列。

SEQ ID NO：121-144是来自大豆的GRF转录因子的部分cDNA序列。

SEQ ID NO：145-146是来自大豆的生长调节因子(GRF)转录因子中的miR396结合位点序列。

SEQ ID NO：147-172是来自小麦的GRF转录因子的完整cDNA序列。

SEQ ID NO：173-198是来自小麦的GRF转录因子的部分cDNA序列。

SEQ ID NO：199-202是来自小麦的生长调节因子(GRF)转录因子的miR396结合位点序列。

SEQ ID NO：203-205提供了V型CRISPR-Cas12a核酸酶的前间隔区邻近基序位置的示例。

SEQ ID NO：214-230是可用于本发明的示例性Cas12a氨基酸序列。

SEQ ID NO：231-233是可用于本发明的示例性Cas12a核苷酸序列。

SEQ ID NO：234-250是可用于本发明的示例性Cas12a核苷酸序列。

附图简要说明

图1显示了在水稻中控制谷粒大小和产率的天然QTL。2bp的取代去除了水稻中GRF4的mir396结合。

图2显示了在使用CRISPR-CBE(CRISPR-Cas胞嘧啶碱基编辑器)的实验中在E0植物中观察到的碱基对和氨基酸变化。

图3显示了miR396结合位点的示例性编辑窗口。

图4A-4B显示示例性Cas9碱基编辑。

图5A-5B显示了示例性Cas12a(Cpf1)碱基编辑。

图6显示了使用如本文所述的方法和碱基编辑组合物获得的在GRF转录因子中具有突变的E1玉米植物的表型。

图7显示了以与间隔序列100％匹配靶向的GRF6和其他四个GRF基因座。Cas9碱基编辑器间隔序列(TTTCCACAGGCTTTCTTGAA SEQ ID NO：58)以100％的特异性靶向几种GRF转录因子。其他GRF转录因子靶标在间隔靶标序列中有错配(带下划线的核苷酸)。显示了靶序列、PAM、特异性评分和靶基因。

图8显示了E0植物中的Cas9碱基编辑。野生型GRF6序列位于顶部。miR396序列以红色突出显示，用于碱基编辑的间隔序列为蓝色(SEQ ID NO：58)。下面是植物7469、7480和7483的个体NGS读数。编辑的碱基是彩色的。这些植物的后代用于后续植物世代的表型分析。

图9提供了显示来自GRF4家族编辑的后代的平均穗长度测量值的图。X轴标签指示由条形表示的植物家族，WT表示未经编辑的野生型系，群体(Pop)7483、Pop 9284、Pop7480、Pop 7469各自表示源自已编辑的亲本的后代家族。条形表示平均值，误差条表示平均值周围的95％置信区间，误差条上方的标签表示每个家族的测量样品数。

图10提供了一个图表，显示了GRF4家族编辑的后代的平均高度。X轴标签表示由条形表示的植物家族，WT表示野生型未编辑的系，Pop 7483和Pop 9284分别表示来源于已编辑亲本的后代家族。条表示平均值，误差条表示平均值周围的95％置信区间，误差条上方的标签表示每个家族的测量样品数。

图11显示Cpf1间隔序列CACAGGCTTTCTTGAACGGTTGC(SEQ ID NO：55)以100％的特异性仅靶向GRF6(GRMZM2G034876)。其他GRF转录因子靶标在间隔靶序列中有错配(红色核苷酸)。显示了靶序列、PAM、特异性评分和靶基因。

图12显示了在E0植物中从基于Cpf1的缺失构建体实现的玉米GRF6编辑。顶部序列是野生型GRF6序列。还显示了miR396靶序列和Cpf1间隔序列(SEQ ID NO：55)位置。来自E0植物的个体读数在下方。加框读数显示从E0植物13270中恢复的6bp和9bp缺失，用于后续分析。每个读数名称旁边的数字是恢复的％NGS读数。

图13提供了显示GRF4在编辑的玉米基因型中的平均表达水平的图。X轴标签指示由条形表示的植物的基因型，WT/WT表示未编辑的野生型系，Δ6/WT表示6bp缺失的杂合系，Δ9/WT表示9bp缺失的杂合系。Y轴表示ZmGRF4相对于内源性对照基因EF1α和微管蛋白的表达。条形表示平均值，误差条表示平均值周围的95％置信区间，误差条上方的标签表示每个家族的测量样品数。

图14提供了一个图表，显示了与野生型相比，编辑的大豆植物中GRF的表达水平。X轴标签表示GRF家族成员(GLYMA_12g014700)等位基因的基因型。Y轴表示GmGRF相对于内源性对照基因ActII的表达。条形上方的标签表示每个基因型包含的样品数量。

发明详述

现在将在下文中参考附图和实施例来描述本发明，其中示出了本发明的实施方案。该描述并非旨在成为可以实施本发明的所有不同方式或可以添加到本发明的所有特征的详细目录。例如，关于一个实施方案举例说明的特征可以并入其他实施方案中，并且关于特定实施方案举例说明的特征可以从该实施方案中删除。因此，本发明设想在本发明的一些实施方案中，可以排除或省略本文阐述的任何特征或特征组合。此外，根据本公开内容，对本文提出的各种实施方案的许多变化和添加对于本领域技术人员来说将是明显的，它们不脱离本发明。因此，以下描述旨在举例说明本发明的一些特定实施方案，而不是详尽地指定其所有排列、组合和变化。

除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。在本文的本发明的描述中使用的术语仅用于描述特定实施方案的目的，并不旨在限制本发明。

本文引用的所有出版物、专利申请、专利和其他参考文献关于与在其中呈现参考文献的句子和/或段落相关的教导通过引用整体并入。

除非上下文另有说明，否则本文所述的本发明的各种特征特别旨在以任何组合形式使用。此外，本发明还设想在本发明的一些实施方案中，可以排除或省略本文阐述的任何特征或特征组合。为了举例说明，如果说明书声明组合物包含组分A、B和C，则特别意在A、B或C中的任一个或其组合可以单独或以任何组合被省略和弃权。

如在本发明和所附权利要求的描述中使用的，除非上下文另有明确指示，否则单数形式“一个”、“一种”和“该”意在也包括复数形式。

也如本文所用，“和/或”是指并且包括一个或多个相关列出的项目的任何和所有可能的组合，以及在替代(“或”)中解释时组合的缺乏。

如本文所用的术语“约”在提及可测量值诸如量或浓度时，意在涵盖规定值的±10％、±5％、±1％、±0.5％或甚至±0.1％的变化以及规定值。例如，其中X是可测量的值的“约X”意在包括X以及X的±10％、±5％、±1％、±0.5％或甚至±0.1％的变化。本文提供的可测量值的范围可以包括任何其他范围和/或其中的个体值。

如本文所用，诸如“在X和Y之间”和“在约X和Y之间”的短语应当被解释为包括X和Y。如本文所用，诸如“约X和Y之间”的短语意指“约X和约Y之间”并且诸如“从约X到Y”的短语意指“从约X到约Y”。

除非在本文中另有说明，否则本文中数值范围的列举仅旨在用作单独引用落入该范围内的每个单独值的速记方法，并且每个单独的值被并入说明书中，就好像它在本文中单独列举一样。例如，如果公开了范围10到15，则还公开了11、12、13和14。

如本文所用，术语“包括”、“包含”和“含有”指定了所述特征、整数、步骤、操作、元素和/或组件的存在，但不排除一种或多种其他特征、整数、步骤、操作、元素、组件和/或它们的组的存在或添加。

如本文所用，过渡短语“基本上由……组成”是指权利要求的范围应解释为包括权利要求中列举的具体材料或步骤，以及那些不实质影响要求保护的本发明的基本和新颖特征的材料或步骤。因此，当在本发明的权利要求中使用时，术语“基本上由……组成”并不旨在解释为等同于“包括”。

如本文所用，术语“提高”、“提高了”、“提高的”、“增强”、“增强的”、“增强了”和“增强”(及其语法变体)描述了与对照相比至少约15％、20％、25％、50％、75％、100％、150％、200％、300％、400％、500％或更多的升高。

如本文所用，术语“降低”、“降低的”、“降低了”、“减少”、“减小”和“减轻”(及其语法变体)描述例如与对照相比至少约5％、10％、15％、20％、25％、35％、50％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％、99.9％或100％的降低。在特定实施方案中，降低可导致没有或基本上没有(即，微不足道的量，例如，小于约10％或甚至5％)可检测的活性或量。

如本文所用，关于核酸分子和/或核苷酸序列(例如，RNA或DNA)的术语“表达”、“表达的”、“表达了”或“表达”等表示核酸分子和/或核苷酸序列被转录和任选地被翻译。因此，核酸分子和/或核苷酸序列可以表达感兴趣的多肽或例如功能性非翻译RNA。

“异源”或“重组”核苷酸序列是与其引入的宿主细胞不天然相关的核苷酸序列，包括天然存在的核苷酸序列的非天然存在的多个拷贝。

“天然”或“野生型”核酸、核苷酸序列、多肽或氨基酸序列是指天然存在的或内源性核酸、核苷酸序列、多肽或氨基酸序列。因此，例如，“野生型mRNA”是天然存在于参考生物体中或对于参考生物体内源性的mRNA。

如本文所用，术语“杂合的”是指其中不同等位基因位于同源染色体上相应基因座的遗传状态。

如本文所用，术语“纯合的”是指其中相同等位基因位于同源染色体上的相应基因座的遗传状态。

如本文所用，术语“等位基因”是指出现在特定基因座处的两种或更多种不同核苷酸或核苷酸序列之一。

“无效等位基因”是由基因突变引起的非功能性等位基因，该基因突变导致完全缺乏相应蛋白质的产生或产生非功能性蛋白质。

“显性负突变”是产生改变的基因产物(例如，相对于野生型具有异常功能)的突变，该基因产物不利地影响野生型等位基因或基因产物的功能。例如，“显性负突变”可能会阻断野生型基因产物的功能。显性负突变也可称为“反效等位基因突变”。

“半显性突变”是指杂合生物中表型的外显率低于纯合生物中观察到的突变。

“弱功能丧失突变”是导致基因产物与野生型基因产物相比具有部分功能或降低的功能(部分失活)的突变。

“亚形态突变”是导致基因功能部分丧失的突变，其可能通过降低表达(例如，减少蛋白质和/或减少RNA)或降低功能性能(例如，降低活性)而发生，但不是完全丧失功能/活性。“亚形态”等位基因是由基因突变引起的半功能等位基因，该基因突变导致功能在正常效率的1％到99％之间的相应蛋白质的产生。

“超形态突变”是导致基因产物表达增加和/或基因产物活性增加的突变。

“基因座”是基因或标记或等位基因所在的染色体上的位置。在一些实施方案中，基因座可以包含一个或多个核苷酸。

如本文所用，术语“所需等位基因”、“靶等位基因”和/或“感兴趣的等位基因”可互换使用以指代与所需性状相关的等位基因。在一些实施方案中，所需等位基因可与给定性状的增加或减少(相对于对照)或给定性状相关，这取决于所需表型的性质。在本发明的一些实施方案中，短语“所需等位基因”、“靶等位基因”或“感兴趣的等位基因”是指与植物在非水胁迫条件下相对于没有一种或多种靶等位基因的对照植物的增加的产率相关的等位基因。

当性状与标记相关并且当标记的存在是所需性状或性状形式是否将在包含所述标记的植物/种质中出现和/或以何种程度出现的指示时，所述标记与所述性状“相关”。类似地，当标记与等位基因或染色体区间相关并且当标记的存在是等位基因或染色体区间是否存在于包含标记的植物/种质中的指示时，标记与等位基因或染色体区间“相关”。例如，“与非水胁迫条件下的增加的产率相关的标记”是指其存在或不存在可用于预测植物是否将在非水胁迫条件下显示增加的产率的标记。

如本文所用，术语“回交”和“回交的”是指将后代植物回交至其亲本之一一次或多次(例如，1、2、3、4、5、6、7、8等)的过程。在回交方案中，“供体”亲本是指具有要渗入的所需基因或基因座的亲本植物。“受体”亲本(使用一次或多次)或“循环”亲本(使用两次或更多次)是指基因或基因座正在渗入的亲本植物。例如，参见Ragot,M.等人Marker-assistedBackcrossing:A Practical Example,TECHNIQUES ET UTILISATIONS DES MARQUEURSMOLECULAIRES LES COLLOQUES,Vol.72,pp.45-56(1995)；和Openshaw等人,Marker-assisted Selection in Backcross Breeding,PROCEEDINGS OF THE SYMPOSIUM“ANALYSIS OF MOLECULAR MARKER DATA,”pp.41-43(1994)。最初的杂交产生了F1代。术语“BC1”是指回交双亲的第二次使用，“BC2”是指回交双亲的第三次使用，依此类推。

如本文所用，术语“杂交”或“杂交的”是指配子通过授粉融合以产生后代(例如，细胞、种子或植物)。该术语包括有性杂交(一种植物由另一种植物授粉)和自交(自花授粉，例如，当花粉和胚珠来自同一植物时)。术语“杂交”是指通过授粉融合配子以产生后代的行为。

如本文所用，术语“渐渗”、“基因渐渗”和“基因渗入的”是指遗传基因座的所需等位基因或所需等位基因组合从一种遗传背景到另一种遗传背景的天然和人工传递。例如，可以通过同一物种的两个亲本之间的有性杂交将特定基因座处的所需等位基因传递给至少一个后代，其中至少一个亲本在其基因组中具有所需等位基因。可替代地，例如，等位基因的传递可以通过两个供体基因组之间的重组发生，例如在融合的原生质体中，其中至少一个供体原生质体在其基因组中具有所需的等位基因。所需等位基因可以是标记、QTL、转基因等的选定等位基因。包含所需等位基因的后代可以与具有所需遗传背景的品系回交一次或多次(例如，1、2、3、4或更多次)，选择所需等位基因，结果是所需等位基因固定在所需的遗传背景中。例如，与在非水胁迫条件下增加的产生相关的标记可以从供体渗入到不包含该标记并且在非水胁迫条件下不表现出增加的产生的回交亲本中。然后可以将所得后代回交一次或多次并进行选择，直到后代具有与回交亲本背景中的非水胁迫条件下的产生增加相关的遗传标记。

“遗传图谱”是对给定物种内一条或多条染色体上基因座之间遗传连锁关系的描述，通常以图解或表格形式描绘。对于每个遗传图谱，基因座之间的距离通过它们之间的重组频率来衡量。可以使用多种标记检测基因座之间的重组。遗传图谱是对群体、使用的标记类型以及不同群体之间每个标记的多态性潜力作图的产物。基因座之间的顺序和遗传距离可以从一个遗传图谱到另一个遗传图谱不同。

如本文所用，术语“基因型”是指个体(或个体群体)在一个或多个遗传基因座处的遗传构成，与可观察和/或可检测和/或表现的性状(表型)形成对比。基因型由个体从其亲本继承的一个或多个已知基因座的一个或多个等位基因定义。术语基因型可用于指个体在单个基因座、多个基因座处的遗传构成，或更一般地，术语基因型可用于指个体基因组中所有基因的个体遗传构成。基因型可以间接表征，例如使用标记，和/或通过核酸测序直接表征。

如本文所用，术语“种质”是指个体(例如植物)、个体群体(例如植物品系、品种或科)的遗传物质或来源于个体(例如植物)、个体群体(例如植物品系、品种或科)的遗传物质，或来源于品系、品种、物种或培养物的克隆。种质可以是生物体或细胞的一部分，或者可以与生物体或细胞分离。一般来说，种质提供了具有特定的遗传组成的遗传物质，其为生物体或细胞培养物的部分或全部遗传特性提供了基础。如本文所用，种质包括可从其生长新植物的细胞、种子或组织，以及可培养成整株植物的植物部分(例如，叶、茎、芽、根、花粉、细胞等)。

如本文所用，术语“栽培品种”和“品种”是指通过结构或遗传特征和/或性能可与同一物种内的其他品种区分开来的一组相似植物。

如本文所用，术语“外来的”、“外来品系”和“外来种质”是指非优良的任何植物、品系或种质。一般而言，外来植物/种质不是源自任何已知的优良植物或种质，而是被选择以将一种或多种所需遗传元件引入育种程序中(例如，以将新等位基因引入育种程序中)。

如本文所用，植物育种上下文中的术语“杂种”是指作为通过杂交不同品系或品种或物种的植物(包括但不限于两个近交系之间的杂交)产生的遗传不同亲本的后代的植物。

如本文所用，术语“近交”是指基本上纯合的植物或品种。该术语可以指在整个基因组中基本上是纯合的或者就特别感兴趣的基因组的一部分而言基本上是纯合的植物或植物品种。

“单倍型”是在多个基因座处的个体的基因型，即等位基因的组合。通常，定义单倍型的遗传基因座在物理上和遗传上是相连的，即在同一染色体区段上。术语“单倍型”可以指特定基因座处的多态性，例如单个标记基因座，或沿着染色体区段的多个基因座处的多态性。

如本文所用，术语“异源”是指源自外来物种或者如果源自相同物种则通过有意的人为干预在组成和/或基因组基因座上从其天然形式显著修饰的核苷酸/多肽。

如本文所用，“增加的生长”和/或“增加的生长速率”是指与生长相关的任何植物性状，例如生物量、产率、氮利用效率(NUE)、花序大小/重量、果实产量、果实质量、果实大小、种子大小、种子数、叶组织重量、结瘤数、结瘤质量、结瘤活动、种子头数、分蘖数、花量、块茎数量、块茎质量、鳞茎质量、种子数、总种子质量、出叶率、分蘖出现率、出苗率、根的长度、根的数量、根群的大小和/或重量，或它们的任何组合。因此，在一些方面，“增加的生长”和/或“增加的生长速率”可以包括但不限于与对照植物或其部分(例如，不包含编码如本文所述的GFR转录因子的修饰的内源核酸的植物)相比增加的花序产量、增加的果实产量(例如增加的果实数量、重量和/或大小；例如，例如玉米的穗的增加的数量、重量和/或大小)、增加的果实质量、根的增加的数量、大小和/或重量、增加的分生组织大小、增加的种子大小、增加的生物量、增加的叶大小、增加的氮利用效率、增加的抗病性、增加的高度和/或增加的节间长度。

“种子重量”是由谷粒形态性状诸如种子长度、种子宽度和种子厚度以及谷粒充实共同决定的，这些性状均受数量遗传学控制。

如本文所用，术语“核酸”、“核酸分子”、“核苷酸序列”和“多核苷酸”是指线性或支链、单链或双链或其混合体的RNA或DNA。该术语还包括RNA/DNA混合体。当合成产生dsRNA时，较少见的碱基例如肌苷、5-甲基胞嘧啶、6-甲基腺嘌呤、次黄嘌呤等也可用于反义、dsRNA和核酶配对。例如，含有尿苷和胞苷的C-5丙炔类似物的多核苷酸已被证明以高亲和力结合RNA，并且是基因表达的强效反义抑制剂。还可以进行其他修饰，例如对磷酸二酯骨架的修饰，或对RNA的核糖糖基中的2’-羟基的修饰。

如本文所用，术语“核苷酸序列”是指核苷酸的杂聚物或这些核苷酸从核酸分子的5’端至3’端的序列，并且包括DNA或RNA分子，包括cDNA、DNA片段或部分、基因组DNA、合成(例如，化学合成)DNA、质粒DNA、mRNA和反义RNA，其中任何一种都可以是单链或双链的。术语“核苷酸序列”、“核酸”、“核酸分子”、“核酸构建体”、“寡核苷酸”和“多核苷酸”在本文中也可互换地用于指核苷酸的杂聚物。本文提供的核酸分子和/或核苷酸序列在本文中从左到右以5’至3’方向呈现，并使用代表美国序列规则、37 CFR§§1.821-1.825和世界知识产权组织(WIPO)标准ST.25中所述的核苷酸字符的标准代码来表示。如本文所用，“5’区域”可以是指最接近多核苷酸的5’端的多核苷酸的区域。因此，例如，多核苷酸的5’区域中的元件可以位于从位于多核苷酸5’端的第一核苷酸到位于多核苷酸中间的核苷酸的任何位置。如本文所用，“3’区域”可以是指最接近多核苷酸的3’端的多核苷酸的区域。因此，例如，多核苷酸的3’区域中的元件可以位于从位于多核苷酸3’端的第一核苷酸到位于多核苷酸中间的核苷酸的任何位置。

如本文关于核酸使用的，术语“片段”或“部分”是指相对于参考核酸长度减少(例如减少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或更多个核苷酸)并且包含与参考核酸的相应部分相同或几乎相同(例如，70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％相同)的连续核苷酸的核苷酸序列、基本上由其组成和/或由其组成的核酸。在适当的情况下，这样的核酸片段可以包含在更大的多核苷酸中，该核酸片段是该多核苷酸的组成部分。例如，本发明的引导核酸的重复序列可以包含野生型CRISPR-Cas重复序列的一部分(例如，野生型CRISR-Cas重复序列；例如，来自例如Cas9、Cas12a(Cpf1)、Cas12b、Cas12c(C2c3)、Cas12d(CasY)、Cas12e(CasX)、Cas12g、Cas12h、Cas12i、C2c4、C2c5、C2c8、C2c9、C2c10、Cas14a、Cas14b和/或Cas14c等的CRISPRCas系统的重复序列)。在一些实施方案中，核酸片段可包含、基本上由以下组成或由以下组成：编码GRF转录因子的核苷酸序列的约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、660、700、750、800、850、900、950、1000、1050、1100、1150、1200、1250、1300、1350、1400、1450、1500、1550、1600、1650、1700、1750、1800、1850、1900、1950、2000或更多个连续核苷酸。

在一些实施方案中，片段或部分可以是GRF转录因子基因的片段或部分。在一些实施方案中，片段或部分可以是SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198的任一个核苷酸序列的片段或部分，其中该片段或部分包含SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198的任一个核苷酸序列的约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60个连续核苷酸或其中的任何范围或值。在一些实施方案中，片段或部分可以是SEQID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列的片段或部分，其可以来自SEQ IDNO：4-18、121-144或173-198中任一个的碱基对位置5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35到碱基对位置36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60。在一些实施方案中，SEQ IDNO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列的示例片段或部分可以是包含SEQ IDNO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列(从5’端开始计数)的从碱基对位置1到碱基对位置21或22，从碱基对位置5到碱基对位置21、22、23、24、25、26或27，从碱基对位置10到碱基对位置25、26、27、28、29、30、31或32，从碱基对位置15到碱基对位置30、31、32、33、34、35、36或37，从碱基对位置20到碱基对位置35、36、37、38、39、40、41或42，从碱基对位置21到碱基对位置37、38、39、40、41、42、43或44，从碱基对位置25到碱基对位置40、41、42、43、44、45、46、47或48，从碱基对位置30到碱基对位置45、46、47、48、49、50、51或52，从碱基对位置35到碱基对位置50、51、52、53、54、55、56或57，从碱基对位置40到碱基对位置55、56、57、58、59、60、61或62，从碱基对位置42到碱基对位置57、58、59、60、61或62等的连续核苷酸的片段或部分。在一些实施方案中，SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198的任一个核苷酸序列的片段或部分可以是包含SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198的任一个核苷酸序列(从5’端开始计数)的从碱基对位置20到碱基对位置42的连续核苷酸的片段或部分。在一些实施方案中，所述至少一部分可以包含SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198的任一个核苷酸序列的至少一个核苷酸或至少两个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22)连续核苷酸。

在一些实施方案中，序列特异性DNA结合结构域可以结合如本文所述的核苷酸序列的一个或多个片段或部分。

如本文关于多肽使用的，术语“片段”或“部分”可以指相对于参考多肽长度减少并且包含与参考多肽的相应部分相同或几乎相同(例如，90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％相同)的连续氨基酸的氨基酸序列、基本上由其组成和/或由其组成的多肽。在适当的情况下，这样的多肽片段可以包含在更大的多肽中，该多肽片段是该更大的多肽的组成部分。在一些实施方案中，多肽片段包含参考多肽的至少约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、175、200、225、250、300、350、400或更多个连续氨基酸、基本上由其组成和/或由其组成。在一些实施方案中，多肽片段可包含GRF转录因子的约5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、125、150、175、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、660、700或更多个连续氨基酸残基、基本上由其组成和/或由其组成。

如本文关于核酸使用的，术语“功能片段”是指编码多肽的功能片段的核酸。

如本文所用，术语“基因”是指能够用于产生mRNA、反义RNA、miRNA、抗microRNA反义寡脱氧核苷酸(AMO)等的核酸分子。基因可能或可能不能够用于生产功能性蛋白或基因产物。基因可以包括编码区和非编码区(例如，内含子、调节元件、启动子、增强子、终止序列和/或5’和3’非翻译区)。基因可以是“分离的”，其是指大体上或基本上不含通常在其自然状态下与核酸相关联的组分的核酸。这些组分包括其他细胞材料、来自重组生产的培养基和/或用于化学合成核酸的各种化学品。

术语“突变”是指点突变(例如，错义或无义，或导致移码的单个碱基对的插入或缺失)、插入、缺失和/或截短。当突变是氨基酸序列中的一个残基被另一个残基取代，或者是序列中一个或多个残基的缺失或插入时，突变通常通过识别原始残基，然后是该残基在序列中的位置以及新取代的残基的身份来描述。

如本文所用，术语“互补”或“互补性”是指多核苷酸在允许的盐和温度条件下通过碱基配对的自然结合。例如，序列“A-G-T”(5’至3’)与互补序列“T-C-A”(3’至5’)结合。两个单链分子之间的互补性可能是“部分的”，其中只有一些核苷酸结合，或者当单链分子之间存在完全互补时，互补性可能是完全的。核酸链之间的互补程度对核酸链之间杂交的效率和强度有显著影响。

如本文所用，“互补”可以是指与比较核苷酸序列的100％互补性，或其可以是指与比较核苷酸序列的小于100％的互补性(例如，约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％等的互补性)。

具有同源性的不同核酸或蛋白质在本文中称为“同源物”。术语同源物包括来自相同和其他物种的同源序列以及来自相同和其他物种的直系同源序列。“同源性”是指两个或更多个核酸和/或氨基酸序列在位置同一性百分比(即序列相似性或同一性)方面的相似性水平。同源性也是指不同核酸或蛋白质之间的相似功能特性的概念。因此，本发明的组合物和方法还包括本发明的核苷酸序列和多肽序列的同源物。如本文所用，“直系同源物”是指在物种形成过程中从共同祖先基因产生的不同物种中的同源核苷酸序列和/或氨基酸序列。本发明的核苷酸序列的同源物与本发明的所述核苷酸序列具有实质性的序列同一性(例如，至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％)。

如本文所用，“序列同一性”是指两个最佳比对的多核苷酸或多肽序列在组分(例如核苷酸或氨基酸)的比对的整个窗口中保持不变的程度。“同一性”可通过已知方法容易地计算，包括但不限于以下中描述的那些：Computational Molecular Biology(Lesk,A.M.,ed.)Oxford University Press,New York(1988)；Biocomputing:Informatics andGenome Projects(Smith,D.W.,ed.)Academic Press,New York(1993)；ComputerAnalysis of Sequence Data,Part I(Griffin,A.M.和Griffin,H.G.,eds.)HumanaPress,New Jersey(1994)；Sequence Analysis in Molecular Biology(von Heinje,G.,ed.)Academic Press(1987)；和Sequence Analysis Primer(Gribskov,M.和Devereux,J.,eds.)Stockton Press,New York(1991)。

如本文所用，术语“序列同一性百分比”或“同一性百分比”是指当两个序列最佳比对时，与测试(“对象”)多核苷酸分子(或其互补链)相比，参考(“查询”)多核苷酸分子(或其互补链)的线性多核苷酸序列中相同核苷酸的百分比。在一些实施方案中，“同一性百分比”可以是指与参考多肽相比氨基酸序列中相同氨基酸的百分比。

如本文所用，在两个核酸分子、核苷酸序列或蛋白质序列的上下文中，短语“基本上相同”或“实质同一性”是指当针对最大对应性进行比较和比对时，具有至少约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％的核苷酸或氨基酸残基同一性的两个或更多个序列或子序列，如使用以下序列比较算法之一或通过目视检查测量的。在本发明的一些实施方案中，实质同一性存在于本发明的核苷酸序列的连续核苷酸区域上，该区域的长度为约10个核苷酸至约20个核苷酸，约10个核苷酸至约25个核苷酸，约10个核苷酸至约30个核苷酸，约15个核苷酸至约25个核苷酸，约30个核苷酸至约40个核苷酸，约50个核苷酸至约60个核苷酸，约70个核苷酸至约80个核苷酸，约90个核苷酸至约100个核苷酸，或更多个核苷酸，以及其中的任何范围，直至序列的全长。在一些实施方案中，核苷酸序列可在至少约20个核苷酸(例如，约20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40个核苷酸)上基本上相同。在一些实施方案中，基本上相同的核苷酸或蛋白质序列执行与其基本上相同的核苷酸(或编码的蛋白序列)相同的功能。

对于序列比较，通常一个序列充当与测试序列进行比较的参考序列。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入计算机，必要时指定子序列坐标，并指定序列算法程序参数。然后，序列比较算法基于指定的程序参数计算测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。

用于对比较窗口进行比对的序列的最佳比对是本领域技术人员熟知的，并且可以通过诸如Smith和Waterman的局部同源算法、Needleman和Wunsch的同源比对算法、Pearson和Lipman的相似性方法的搜索的工具以及任选通过这些算法的计算机化实现诸如GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA(作为

Wisconsin

(Accelrys Inc.，SanDiego，CA)的一部分提供)来进行。测试序列和参考序列的比对区段的“同一性分数”是指两个比对序列共享的相同组分的数量除以参考序列区段(例如，整个参考序列或参考序列的较小定义部分)中组分的总数。序列同一性百分比表示为同一性分数乘以100。一个或多个多核苷酸序列的比较可以是与全长多核苷酸序列或其一部分，或与更长的多核苷酸序列进行比较。出于本发明的目的，还可以使用BLASTX 2.0版(用于翻译的核苷酸序列)和BLASTN2.0版(用于多核苷酸序列)来确定“同一性百分比”。

当两个序列在严格条件下相互杂交时，也可认为两个核苷酸序列实质上互补。在一些实施方案中，被认为基本上互补的两个核苷酸序列在高度严格的条件下彼此杂交。

“严格杂交条件”和“严格杂交洗涤条件”在核酸杂交实验(例如Southern和Northern杂交)的背景下是序列依赖性的，并且在不同的环境参数下是不同的。核酸杂交的广泛指南见Tijssen Laboratory Techniques in Biochemistry and MolecularBiology-Hybridization with Nucleic Acid Probes part I chapter 2“Overview ofprinciples of hybridization and the strategy of nucleic acid probe assays”Elsevier,New York(1993)。通常，在规定的离子强度和pH值下，选择高度严格的杂交和洗涤条件以比特定序列的热熔点(T_m)低约5℃。

T_m是50％靶序列与完全匹配的探针杂交的温度(在规定的离子强度和pH值下)。选择非常严格的条件以等于特定探针的T_m。在Southern或northern印迹中，在过滤器上具有超过100个互补残基的互补核苷酸序列的杂交的严格杂交条件的示例是在42℃下的50％甲酰胺与1mg肝素，杂交过夜进行。高度严格洗涤条件的示例是0.1 5M NaCl，72℃下约15分钟。严格洗涤条件的一个示例是在65℃下0.2×SSC洗涤15分钟(SSC缓冲液的描述见下文的Sambrook)。通常，在高严格洗涤之前先进行低严格洗涤，以去除背景探针信号。例如，超过100个核苷酸的双链体的中等严格洗涤的示例是在45℃下1xSSC持续15分钟。例如，超过100个核苷酸的双链体的低严格洗涤的示例是在40℃下4-6x SSC持续15分钟。对于短探针(例如，约10至50个核苷酸)，严格条件通常涉及在pH 7.0至8.3下小于约1.0M Na离子的盐浓度，通常约0.01至1.0M Na离子浓度(或其他盐)，并且温度通常为至少约30℃。加入去稳定剂(例如甲酰胺)也可达到严格条件。一般来说，在特定杂交测定中对无关探针观察到的信噪比的2x(或更高)的信噪比表明检测到特异性杂交。如果它们编码的蛋白质基本相同，则在严格条件下不相互杂交的核苷酸序列仍然基本相同。例如，当使用遗传密码子允许的最大密码子简并性创建核苷酸序列的拷贝时，可能发生这种情况。

本发明的多核苷酸和/或重组核酸构建体(例如，表达盒和/或载体)可以被密码子优化以用于表达。在一些实施方案中，本发明的编辑系统(例如，包含/编码序列特异性DNA结合结构域(例如，来自多核苷酸引导的核酸内切酶、锌指核酸酶、转录激活因子样效应核酸酶(TALEN)、Argonaute蛋白和/或CRISPR-Cas核酸内切酶(例如，CRISPR-Cas效应蛋白)(例如，I型CRISPR-Cas效应蛋白、II型CRISPR-Cas效应蛋白、III型CRISPR-Cas效应蛋白、IV型CRISPR-Cas效应蛋白、V型CRISPR-Cas效应蛋白或VI型CRISPR-Cas效应蛋白)的序列特异性DNA结合结构域)、核酸酶(例如，核酸内切酶(例如，Fok1)、多核苷酸引导的核酸内切酶、CRISPR-Cas核酸内切酶(例如，CRISPR-Cas效应蛋白)、锌指核酸酶和/或转录激活因子样效应核酸酶(TALEN))、脱氨酶蛋白质/结构域(例如，腺嘌呤脱氨酶、胞嘧啶脱氨酶)、编码逆转录酶蛋白质或结构域的多核苷酸、编码5’-3’核酸外切酶多肽的多核苷酸和/或亲和多肽、肽标签等)的多核苷酸、核酸构建体、表达盒和/或载体可以经密码子优化以用于在植物中表达。在一些实施方案中，本发明的密码子优化的核酸、多核苷酸、表达盒和/或载体与没有经过密码子优化的参考核酸、多核苷酸、表达盒和/或载体具有约70％至约99.9％(例如，70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％、99.9％或100％)的同一性或更高。

在本文所述的任何实施方案中，本发明的多核苷酸或核酸构建体可以与多种启动子和/或其他调节元件可操作地关联以在植物和/或植物的细胞中表达。因此，在一些实施方案中，本发明的多核苷酸或核酸构建体可以进一步包含与一种或多种核苷酸序列可操作地连接的一种或多种启动子、内含子、增强子和/或终止子。在一些实施方案中，启动子可以与内含子(例如，Ubi1启动子和内含子)可操作地关联。在一些实施方案中，与内含子关联的启动子可以称为“启动子区域”(例如，Ubi1启动子和内含子)。

如本文所用，关于多核苷酸的“可操作地连接”或“可操作地关联”是指所示元件在功能上彼此相关，并且通常也是物理相关的。因此，如本文所用，术语“可操作地连接”或“可操作地关联”是指单个核酸分子上功能关联的核苷酸序列。因此，与第二核苷酸序列可操作地连接的第一核苷酸序列是指当第一核苷酸序列与第二核苷酸序列处于功能关系时的情况。例如，如果启动子影响所述核苷酸序列的转录或表达，则启动子与核苷酸序列可操作地关联。本领域技术人员将理解，控制序列(例如，启动子)不需要与其可操作地连接的核苷酸序列连续，只要控制序列的功能是指导其表达即可。因此，例如，插入的非翻译但转录的核酸序列可以存在于启动子和核苷酸序列之间，并且启动子仍然可以被认为“可操作地连接”到核苷酸序列。

如本文所用，关于多肽的术语“连接”是指一种多肽与另一种多肽的连接。多肽可以直接(例如，通过肽键)或通过接头与另一多肽(在N-末端或C-末端)连接。

术语“接头”是本领域公认的并且是指化学基团，或连接两个分子或部分(例如融合蛋白的两个结构域)的分子，例如DNA结合多肽或结构域和肽标签，和/或与肽标签结合的逆转录酶和亲和多肽；或DNA核酸内切酶多肽或结构域和肽标签和/或与肽标签结合的逆转录酶和亲和多肽。接头可以由单个连接分子组成或可以包含多于一个连接分子。在一些实施方案中，接头可以是有机分子、基团、聚合物或化学部分，例如二价有机部分。在一些实施方案中，接头可以是氨基酸或者它可以是肽。在一些实施方案中，接头是肽。

在一些实施方案中，可用于本发明的肽接头长度可为约2至约100个或更多个氨基酸，例如长度为约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100个或更多个氨基酸(例如，约2至约40、约2至约50、约2至约60、约4至约40、约4至约50、约4至约60、约5至约40、约5至约50、约5至约60、约9至约40、约9至约50、约9至约60、约10至约40、约10至约50、约10至约60、或约2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25个氨基酸至约26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100个或更多个氨基酸(例如，长度为约105、110、115、120、130、140、150个或更多个氨基酸)。在一些实施方案中，肽接头可以是GS接头。

如本文所用，关于多核苷酸的术语“连接的”或“融合的”是指一个多核苷酸与另一个多核苷酸的连接。在一些实施方案中，两个或更多个多核苷酸分子可以通过接头连接，接头可以是有机分子、基团、聚合物或化学部分，例如二价有机部分。多核苷酸可以通过共价或非共价键合或结合，包括例如Watson-Crick碱基配对，或通过一个或多个连接核苷酸连接或融合到另一个多核苷酸(在5’端或3’端)。在一些实施方案中，可以将某种结构的多核苷酸基序插入另一个多核苷酸序列中(例如，引导RNA中发夹结构的延伸)。在一些实施方案中，连接核苷酸可以是天然存在的核苷酸。在一些实施方案中，连接核苷酸可以是非天然存在的核苷酸。

“启动子”是控制或调节与启动子可操作地关联的核苷酸序列(例如，编码序列)的转录的核苷酸序列。由启动子控制或调节的编码序列可以编码多肽和/或功能性RNA。通常，“启动子”是指包含RNA聚合酶II结合位点并指导转录起始的核苷酸序列。通常，启动子位于相对于相应编码序列的编码区起点的5’或上游。启动子可以包含其他作为基因表达调节因子的元件；例如，启动子区域。这些包括TATA盒共有序列，并且通常是CAAT盒共有序列(Breathnach和Chambon,(1981)Annu.Rev.Biochem.50:349)。在植物中，CAAT盒可以被AGGA盒替代(Messing等人,(1983),Genetic Engineering of Plants,T.Kosuge,C.Meredith和A.Hollaender(eds.),Plenum Press,pp.211-227)。

可用于本发明的启动子可以包括例如组成型、诱导型、时间调节的、发育调节的、化学调节的、组织优选的和/或组织特异性的启动子，用于制备重组核酸分子，例如“合成核酸构建体”或“蛋白质-RNA复合物”。这些不同类型的启动子是本领域已知的。

启动子的选择可能取决于表达的时间和空间要求而不同，并且也可能基于要转化的宿主细胞而不同。许多不同生物的启动子在本领域中是众所周知的。基于本领域现有的广泛知识，可以为感兴趣的特定宿主生物选择合适的启动子。因此，例如，关于在模式生物中高度组成型表达的基因的上游的启动子了解很多，并且可以在其他系统中适当地访问和实施此类知识。

在一些实施方案中，在植物中起作用的启动子可以与本发明的构建体一起使用。可用于在植物中驱动表达的启动子的非限制性实例包括RubisCo小亚基基因1的启动子(PrbcS1)、肌动蛋白基因的启动子(Pactin)、硝酸还原酶基因的启动子(Pnr)和重复碳酸酐酶基因1的启动子(Pdca1)(参见Walker等人,Plant Cell Rep.23:727-735(2005)；Li等人,Gene 403:132-142(2007)；Li等人,Mol Biol.Rep.37:1143-1154(2010))。PrbcS1和Pactin是组成型启动子，Pnr和Pdca1是诱导型启动子。Pnr由硝酸盐诱导并由铵抑制(Li等人,Gene403:132-142(2007))，Pdca1由盐诱导(Li等人,Mol Biol.Rep.37:1143-1154(2010))。在一些实施方案中，可用于本发明的启动子是RNA聚合酶II(PolII)启动子。在一些实施方案中，来自玉米的U6启动子或7SL启动子可用于本发明的构建体。在一些实施方案中，来自玉米的U6c启动子和/或7SL启动子可用于驱动引导核酸的表达。在一些实施方案中，来自大豆的U6c启动子、U6i启动子和/或7SL启动子可用于本发明的构建体。在一些实施方案中，来自大豆的U6c启动子、U6i启动子和/或7SL启动子可用于驱动引导核酸的表达。

可用于植物的组成型启动子的实例包括但不限于：cestrum病毒启动子(cmp)(美国专利号7,166,770)、水稻肌动蛋白1启动子(Wang等人,(1992)Mol.Cell.Biol.12:3399-3406；以及美国专利号5,641,876)、CaMV 35S启动子(Odell等人,(1985)Nature 313:810-812)、CaMV 19S启动子(Lawton等人,(1987)Plant Mol.Biol.9:315-324)、nos启动子(Ebert等人,(1987)Proc.Natl.Acad.Sci USA 84:5745-5749)、Adh启动子(Walker等人,(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84:6624-6629)、蔗糖合酶启动子(Yang&Russell(1990)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 87:4144-4148)和泛素启动子。源自泛素的组成型启动子在许多细胞类型中积累。泛素启动子已经从几种植物物种(例如向日葵(Binet等人,1991.PlantScience 79:87-94)、玉米(Christensen等人,1989.Plant Molec.Biol.12:619-632)和拟南芥(Norris等人,1993.Plant Molec.Biol.21:895-906))中克隆出来用于转基因植物。玉米泛素启动子(UbiP)已在转基因单子叶植物系统中开发，其序列和构建用于单子叶植物转化的载体在专利公开EP 0 342 926中公开。泛素启动子适用于本发明的核苷酸序列在转基因植物，尤其是单子叶植物中的表达。此外，McElroy等人(Mol.Gen.Genet.231:150-160(1991))描述的启动子表达盒可以容易地被修饰以表达本发明的核苷酸序列并且特别适用于单子叶植物宿主。

在一些实施方案中，组织特异性/组织优选启动子可用于在植物细胞中表达异源多核苷酸。组织特异性或优选表达模式包括但不限于绿色组织特异性或优选、根特异性或优选、茎特异性或优选、花特异性或优选或花粉特异性或优选。适合在绿色组织中表达的启动子包括许多调节参与光合作用的基因，其中许多已从单子叶植物和双子叶植物中克隆。在一个实施方案中，可用于本发明的启动子是来自磷酸烯醇羧化酶基因的玉米PEPC启动子(Hudspeth&Grula,Plant Molec.Biol.12:579-589(1989))。组织特异性启动子的非限制性实例包括与编码种子贮藏蛋白(例如β-伴大豆球蛋白、cruciferin、napin和菜豆球蛋白)、玉米醇溶蛋白或油体蛋白(例如油质蛋白)或涉及脂肪酸生物合成的蛋白质(包括酰基载体蛋白、硬脂酰-ACP去饱和酶和脂肪酸去饱和酶(fad2-1))的基因相关的那些启动子，以及在胚胎发育过程中表达的其他核酸(例如Bce4，参见例如Kridl等人,(1991)Seed Sci.Res.1:209-219；以及EP专利号255378)。可用于在植物，特别是玉米中表达本发明的核苷酸序列的组织特异性或组织优先启动子包括但不限于直接在根、髓、叶或花粉中表达的那些。此类启动子公开于例如WO93/07278中，其通过引用整体并入本文。可用于本发明的组织特异性或组织优选启动子的其他非限制性实例是美国专利6,040,504中公开的棉花rubisco启动子；美国专利5,604,121中公开的水稻蔗糖合酶启动子；de Framond(FEBS 290:103-106(1991)；Ciba-Geigy的EP 0 452 269)描述的根特异性启动子；在美国专利5,625,136(Ciba-Geigy)中描述的茎特异性启动子，其驱动玉米trpA基因的表达；WO01/73087中公开的certrum黄卷叶病毒启动子；和花粉特异性或优选启动子，包括但不限于来自水稻的ProOsLPS10和ProOsLPS11(Nguyen等人,Plant Biotechnol.Reports 9(5):297-306(2015))，来自玉米的ZmSTK2_USP(Wang等人,Genome 60(6):485-495(2017))、来自番茄的LAT52和LAT59(Twell等人,Development 109(3):705-713(1990))、来自拟南芥的Zm13(美国专利号10,421,972)、PLA₂-δ启动子(美国专利号7,141,424)和/或来自玉米的ZmC5启动子(国际PCT公开号WO1999/042587)。

植物组织特异性/组织优选启动子的其他例子包括但不限于根毛特异性顺式元件(RHE)(Kim等人,The Plant Cell 18:2958-2970(2006))，根特异性启动子RCc3(Jeong等人,Plant Physiol.153:185-197(2010))和RB7(美国专利号5459252)，凝集素启动子(Lindstrom等人,(1990)Der.Genet.11:160-167；和Vodkin(1983)Prog.Clin.Biol.Res.138:87-98)，玉米醇脱氢酶1启动子(Dennis等人,(1984)NucleicAcids Res.12:3983-4000)，S-腺苷-L-甲硫氨酸合成酶(SAMS)(Vander Mijnsbrugge等人,(1996)Plant and Cell Physiology,37(8):1108-1115)，玉米光收获复合启动子(Bansal等人,(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89:3654-3658)，玉米热休克蛋白启动子(O'Dell等人,(1985)EMBO J.5:451-458；和Rochester等人,(1986)EMBO J.5:451-458)，豌豆小亚基RuBP羧化酶启动子(Cashmore,"Nuclear genes encoding the small subunit ofribulose-l,5-bisphosphate carboxylase"pp.29-39In:Genetic Engineering ofPlants(Hollaender ed.,Plenum Press 1983；和Poulsen等人,(1986)Mol.Gen.Genet.205:193-200)，Ti质粒甘露碱合酶启动子(Langridge等人,(1989)Proc.Natl.Acad.Sci.USA86:3219-3223)，Ti质粒胭脂碱合酶启动子(Langridge等人,(1989)，同上)，矮牵牛查尔酮异构酶启动子(van Tunen等人,(1988)EMBO J.7:1257-1263)，豆甘氨酸富集蛋白1启动子(Keller等人,(1989)Genes Dev.3:1639-1646)，截短的CaMV 35S启动子(O'Dell等人,(1985)Nature 313:810-812)，马铃薯patatin启动子(Wenzler等人,(1989)Plant Mol.Biol.13:347-354)，根细胞启动子(Yamamoto等人,(1990)Nucleic Acids Res.18:7449)，玉米玉米醇溶蛋白启动子(Kriz等人,(1987)Mol.Gen.Genet.207:90-98；Langridge等人,(1983)Cell 34:1015-1022；Reina等人,(1990)Nucleic Acids Res.18:6425；Reina等人,(1990)Nucleic Acids Res.18:7449；和Wandelt等人,(1989)Nucleic Acids Res.17:2354)，球蛋白-1启动子(Belanger等人,(1991)Genetics 129:863-872)，α-微管蛋白cab启动子(Sullivan等人,(1989)Mol.Gen.Genet.215:431-440)，PEPCase启动子(Hudspeth&Grula(1989)PlantMol.Biol.12:579-589)，R基因复合物相关启动子(Chandler等人,(1989)Plant Cell 1:1175-1183)和查耳酮合酶启动子(Franken等人,(1991)EMBO J.10:2605-2612)。

可用于种子特异性表达的是豌豆球蛋白启动子(Czako等人,(1992)Mol.Gen.Genet.235:33-40；以及美国专利号5,625,136中公开的种子特异性启动子。可用于在成熟叶中的表达是在衰老开始时被转换的那些，例如来自拟南芥的SAG启动子(Gan等人,(1995)Science 270:1986-1988)。

此外，可以使用在叶绿体中起作用的启动子。此类启动子的非限制性实例包括噬菌体T3基因9 5’UTR和美国专利号7,579,516中公开的其他启动子。可用于本发明的其他启动子包括但不限于S-E9小亚基RuBP羧化酶启动子和Kunitz胰蛋白酶抑制剂基因启动子(Kti3)。

可用于本发明的其他调节元件包括但不限于内含子、增强子、终止序列和/或5’和3’非翻译区。

可用于本发明的内含子可以是在植物中鉴定和分离的内含子，然后插入到表达盒中以用于植物的转化。如本领域技术人员将理解的，内含子可包含自我切除所需的序列，并以符合阅读框的方式并入核酸构建体/表达盒中。内含子可用作间隔序列以分隔一个核酸构建体中的多个蛋白质编码序列，或者内含子可用于一个蛋白质编码序列内以例如稳定mRNA。如果它们在蛋白质编码序列中使用，它们将被插入“框内”并包含切除位点。内含子也可以与启动子关联以改善或修饰表达。例如，可用于本发明的启动子/内含子组合包括但不限于玉米Ubi1启动子和内含子的组合(参见例如SEQ ID NO：83和SEQ ID NO：84)。

可用于本发明的内含子的非限制性实例包括来自ADHI基因(例如，Adh1-S内含子1、2和6)、泛素基因(Ubi1)、RuBisCO小亚基(rbcS)基因、RuBisCO大亚基(rbcL)基因、肌动蛋白基因(例如，肌动蛋白-1内含子)、丙酮酸脱氢酶激酶基因(pdk)、硝酸还原酶基因(nr)、重复碳酸酐酶基因1(Tdca1)、psbA基因、atpA基因的内含子或其任意组合。

在一些实施方案中，本发明的多核苷酸和/或核酸构建体可以是“表达盒”或可以包含在表达盒内。如本文所用，“表达盒”是指重组核酸分子，其包含例如一种或多种本发明的多核苷酸(例如，编码序列特异性DNA结合结构域的多核苷酸、编码脱氨酶蛋白或结构域的多核苷酸，编码逆转录酶蛋白质或结构域的多核苷酸、编码5’-3’外切核酸酶多肽或结构域的多核苷酸、引导核酸和/或逆转录酶(RT)模板)，其中一个或多个多核苷酸与一个或多个控制序列(例如，启动子、终止子等)可操作地关联。因此，在一些实施方案中，可以提供一种或多种表达盒，其被设计为表达例如本发明的核酸构建体(例如，编码序列特异性DNA结合结构域的多核苷酸、编码核酸酶多肽/结构域的多核苷酸、编码脱氨酶蛋白质/结构域的多核苷酸、编码逆转录酶蛋白质/结构域的多核苷酸、编码5’-3’外切核酸酶多肽/结构域的多核苷酸、编码肽标签的多核苷酸和/或编码亲和多肽的多核苷酸等，或包含引导核酸、延伸的引导核酸和/或RT模板等)。当本发明的表达盒包含多于一个多核苷酸时，多核苷酸可以与驱动所有多核苷酸表达的单个启动子可操作地连接，或者多核苷酸可以与一个或多个单独的启动子(例如三个多核苷酸可以由一个、两个或三个任意组合的启动子驱动)可操作地连接。当使用两个或更多个单独的启动子时，启动子可以是相同的启动子或者它们可以是不同的启动子。因此，编码序列特异性DNA结合结构域的多核苷酸、编码核酸酶蛋白/结构域的多核苷酸、编码CRISPR-Cas效应蛋白/结构域的多核苷酸、编码脱氨酶蛋白/结构域的多核苷酸、编码逆转录酶多肽/结构域(例如，RNA依赖性DNA聚合酶)的多核苷酸和/或编码5’-3’外切核酸酶多肽/结构域的多核苷酸、引导核酸、延伸的引导核酸和/或当包含在单个表达盒中时可以各自可操作地连接到单个启动子的RT模板，或任何组合的单独的启动子。

包含本发明的核酸构建体的表达盒可以是嵌合的，这意味着它的至少一种成分相对于它的至少一种其他成分是异源的(例如，来自宿主生物的启动子可操作地连接到在宿主生物体中表达的感兴趣的多核苷酸，其中感兴趣的多核苷酸来自与宿主不同的生物体或通常不与该启动子关联)。表达盒也可以是天然存在的但已经以可用于异源表达的重组形式获得的表达盒。

根据本发明要优先处理的植物或植物栽培品种包括通过遗传修饰接受遗传物质的所有植物，所述遗传物质赋予这些植物特别有利的有用特性(“性状”)。此类特性的实例是更好的植物生长、活力、胁迫耐受性、站立性、抗倒伏性、养分吸收、植物营养和/或产率，特别是改善的生长、对高温或低温的增加的耐受性、对干旱或水分水平或土壤盐分的增加的耐受性、增强的开花性能、更容易收获、加速成熟、更高产率、更高质量和/或更高营养价值的收获产品、更好的储存寿命和/或收获产品的可加工性。

这样的特性的进一步和特别强调的例子是针对动物和微生物害虫(例如针对昆虫、蛛形纲动物、线虫、螨虫、蛞蝓和蜗牛，例如针对植物中形成的毒素)的增加的抗性。在编码赋予针对此类动物和微生物害虫特别是昆虫的耐受性特性的蛋白质的DNA序列中，将特别提及来自苏云金芽孢杆菌的编码文献中广泛描述且为本领域技术人员熟知的Bt蛋白质的遗传物质。还将提及从细菌例如发光杆菌(Photorhabdus)中提取的蛋白质(WO97/17432和WO98/08932)。具体而言，将提及Bt Cry或VIP蛋白，其包括CrylA、CryIAb、CryIAc、CryIIA、CryIIIA、CryIIIB2、Cry9c、Cry2Ab、Cry3Bb和CryIF蛋白或其毒性片段，以及它们的杂合体或组合，尤其是CrylF蛋白或衍生自CrylF蛋白的杂合体(例如杂合CrylA-CrylF蛋白或其毒性片段)、CrylA型蛋白或其毒性片段，优选CrylAc蛋白或衍生自CrylAc蛋白的杂合体(例如杂合CrylAb-CrylAc蛋白)或CrylAb或Bt2蛋白或其毒性片段、Cry2Ae、Cry2Af或Cry2Ag蛋白或其毒性片段、CrylA.105蛋白或其毒性片段、VIP3Aa19蛋白、VIP3Aa20蛋白、在COT202或COT203棉花中产生的VIP3A蛋白、如Estruch等人(1996),Proc Natl Acad SciUSA.28；93(11):5389-94所述的VIP3Aa蛋白或其毒性片段、如WO2001/47952中所述的Cry蛋白、来自异短杆菌属(Xenorhabdus)(如WO98/50427中所述)、沙雷氏菌属(Serratia)(特别是来自嗜虫沙雷氏菌(S.entomophila))或发光杆菌属物种菌株的杀虫蛋白，例如来自发光杆菌属的Tc-蛋白质，如WO98/08932中所述。本文还包括了这些蛋白质中的任何一种的与上述任何序列在一些氨基酸(1-10，优选1-5)中不同的任何变体或突变体，特别是它们的毒性片段的序列，或融合至转运肽，例如质体转运肽或另一种蛋白质或肽。

这种性质的另一个和特别强调的例子是赋予对一种或多种除草剂例如咪唑啉酮、磺酰脲、草甘膦或草丁膦的耐受性。在编码赋予转化的植物细胞和植物对某些除草剂的耐受性特性的蛋白质(即感兴趣的多核苷酸)的DNA序列中，将特别提及WO2009/152359中描述的bar或PAT基因或天蓝色链霉菌基因，其赋予对草铵膦除草剂的耐受性，编码合适的EPSPS(5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸-合酶)的基因，其赋予对以EPSPS作为靶标的除草剂(尤其是诸如草甘膦及其盐的除草剂)的耐受性，编码草甘膦-n-乙酰转移酶的基因，或编码草甘膦氧化还原酶的基因。其他合适的除草剂耐受性状包括至少一种ALS(乙酰乳酸合酶)抑制剂(例如WO2007/024782)、突变的拟南芥ALS/AHAS基因(例如美国专利6,855,533)、编码赋予对2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)的耐受性的2,4-D-单加氧酶的基因，和编码赋予对麦草畏(3,6-二氯-2-甲氧基苯甲酸)的耐受性的麦草畏单加氧酶的基因。

此类特性的进一步实例包括但不限于由于例如系统性获得性抗性(SAR)、系统素、植物抗毒素、诱导子以及抗性基因和相应表达的蛋白质和毒素而对植物病原真菌、细菌和/或病毒的增加的抗性。

可以根据本发明处理的转基因植物或植物栽培品种中特别有用的转基因事件包括事件531/PV-GHBK04(棉花，昆虫控制，描述于WO2002/040677)，事件1143-14A(棉花，昆虫控制，未保藏，描述于WO2006/128569)；事件1143-51B(棉花，昆虫控制，未保藏，描述于WO2006/128570)；事件1445(棉花、除草剂耐受性、未保藏，描述于US-A2002-120964或WO2002/034946)；事件17053(水稻，除草剂耐受性，保藏为PTA-9843，描述于WO2010/117737)；事件17314(水稻，除草剂耐受性，保藏为PTA-9844，描述于WO2010/117735)；事件281-24-236(棉花，昆虫控制-除草剂耐受性，保藏为PTA-6233，描述于WO2005/103266或US-A2005-216969)；事件3006-210-23(棉花，昆虫控制-除草剂耐受性，保藏为PTA-6233，描述于US-A2007-143876或WO2005/103266)；事件3272(玉米，质量性状，保藏为PTA-9972，描述于WO2006/098952或US-A2006-230473)；事件33391(小麦，除草剂耐受性，保藏为PTA-2347，描述于WO2002/027004)，事件40416(玉米，昆虫控制-除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-11508，描述于WO11/075593)；事件43A47(玉米，昆虫控制-除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-11509，描述于WO2011/075595)；事件5307(玉米，昆虫控制，保藏为ATCC PTA-9561，描述于WO2010/077816)；事件ASR-368(常绿草，除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-4816，描述于US-A2006-162007或WO2004/053062)；事件B16(玉米，除草剂耐受性，未保藏，描述于US-A2003-126634)；事件BPS-CV127-9(大豆，除草剂耐受性，保藏为NCIMB No.41603，描述于WO2010/080829)；事件BLR1(油菜，雄性不育的恢复，保藏为NCIMB 41193，描述于WO2005/074671)，事件CE43-67B(棉花，昆虫控制，保藏为DSM ACC2724，描述于US-A2009-217423或WO2006/128573)；事件CE44-69D(棉花，昆虫控制，未保藏，描述于US-A2010-0024077)；事件CE44-69D(棉花，昆虫控制，未保藏，描述于WO2006/128571)；事件CE46-02A(棉花，昆虫控制，未保藏，描述于WO2006/128572)；事件COT102(棉花，昆虫控制，未保藏，描述于US-A2006-130175或WO2004/039986)；事件COT202(棉花，昆虫控制，未保藏，描述于US-A2007-067868或WO2005/054479)；事件COT203(棉花，昆虫控制，未保藏，描述于WO2005/054480)；事件DAS21606-3/1606(大豆，除草剂耐受性，保藏为PTA-11028，描述于WO2012/033794)，事件DAS40278(玉米，除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-10244，描述于WO2011/022469)；事件DAS-44406-6/pDAB8264.44.06.l(大豆，除草剂耐受性，保藏为PTA-11336，描述于WO2012/075426)，事件DAS-14536-7/pDAB8291.45.36.2(大豆，除草剂耐受性，保藏为PTA-11335，描述于WO2012/075429)，事件DAS-59122-7(玉米，昆虫控制-除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA11384，描述于US-A2006-070139)；事件DAS-59132(玉米，昆虫控制-除草剂耐受性，未保藏，描述于WO2009/100188)；事件DAS68416(大豆，除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-10442，描述于WO2011/066384或WO2011/066360)；事件DP-098140-6(玉米，除草剂耐受性，保藏为ATCCPTA-8296，描述于US-A2009-137395或WO08/112019)；事件DP-305423-1(大豆，质量性状，未保藏，描述于US-A2008-312082或WO2008/054747)；事件DP-32138-1(玉米，杂交系统，保藏为ATCC PTA-9158，描述于US-A2009-0210970或WO2009/103049)；事件DP-356043-5(大豆，除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-8287，描述于US-A2010-0184079或WO2008/002872)；事件EE-I(茄子，昆虫控制，未保藏，描述于WO07/091277)；事件Fil17(玉米，除草剂耐受性，保藏为ATCC209031，描述于US-A2006-059581或WO98/044140)；事件FG72(大豆，除草剂耐受性，保藏为PTA-11041，描述于WO2011/063413)，事件GA21(玉米，除草剂耐受性，保藏为ATCC209033，描述于US-A2005-086719或WO98/044140)；事件GG25(玉米，除草剂耐受性，保藏为ATCC209032，描述于US-A2005-188434或WO98/044140)；事件GHB119(棉花，昆虫控制-除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-8398，描述于WO2008/151780)；事件GHB614(棉花，除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-6878，描述于US-A2010-050282或W02007/017186)；事件GJ11(玉米，除草剂耐受性，保藏为ATCC209030，描述于US-A2005-188434或WO98/044140)；事件GMRZ13(甜菜，病毒抗性，保藏为NCIMB-41601，描述于WO2010/076212)；事件H7-1(甜菜，除草剂耐受性，保藏为NCIMB41158或NCIMB41159，描述于US-A2004-172669或WO2004/074492)；事件JOPLINl(小麦，抗病性，未保藏，描述于US-A2008-064032)；事件LL27(大豆，除草剂耐受性，保藏为NCIMB41658，描述于WO2006/108674或US-A2008-320616)；事件LL55(大豆，除草剂耐受性，保藏为NCIMB41660，描述于WO2006/108675或US-A2008-196127)；事件LLcotton25(棉花，除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-3343，描述于WO2003/013224或USA2003-097687)；事件LLRICE06(水稻，除草剂耐受性，保藏为ATCC203353，描述于US6,468,747或WO2000/026345)；事件LLRice62(水稻，除草剂耐受性，保藏为ATCC203352，描述于WO2000/026345)，事件LLRICE601(水稻，除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-2600，描述于US-A2008-2289060或WO2000/026356)；事件LY038(玉米，质量性状，保藏为ATCC PTA-5623，描述于US-A2007-028322或WO2005/061720)；事件MIR162(玉米，昆虫控制，保藏为PTA-8166，描述于US-A2009-300784或WO2007/142840)；事件MIR604(玉米，昆虫控制，未保藏，描述于US-A2008-167456或WO2005/103301)；事件MON15985(棉花，昆虫控制，保藏为ATCCPTA-2516，描述于US-A2004-250317或WO2002/100163)；事件MON810(玉米，昆虫控制，未保藏，描述于US-A2002-102582)；事件MON863(玉米，昆虫控制，保藏为ATCC PTA-2605，描述于WO2004/011601或US-A2006-095986)；事件MON87427(玉米，授粉对照，保藏为ATCC PTA-7899，描述于WO2011/062904)；事件MON87460(玉米，胁迫耐受性，保藏为ATCC PTA-8910，描述于WO2009/111263或US-A2011-0138504)；事件MON87701(大豆，昆虫控制，保藏为ATCCPTA-8194，描述于US-A2009-130071或WO2009/064652)；事件MON87705(大豆，质量性状-除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-9241，描述于US-A2010-0080887或WO2010/037016)；事件MON87708(大豆，除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-9670，描述于WO2011/034704)；事件MON87712(大豆，产量，保藏为PTA-10296，描述于WO2012/051199)，事件MON87754(大豆，质量性状，保藏为ATCC PTA-9385，描述于WO2010/024976)；事件MON87769(大豆，质量性状，保藏为ATCC PTA-8911，描述于US-A2011-0067141或WO2009/102873)；事件MON88017(玉米，昆虫控制-除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-5582，描述于US-A2008-028482或WO2005/059103)；事件MON88913(棉花，除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-4854，描述于WO2004/072235或US-A2006-059590)；事件MON88302(油菜，除草剂耐受性，保藏为PTA-10955，描述于WO2011/153186)，事件MON88701(棉花，除草剂耐受性，保藏为PTA-11754，描述于WO2012/134808)，事件MON89034(玉米，昆虫控制，保藏为ATCC PTA-7455描述于WO07/140256或US-A2008-260932)；事件MON89788(大豆，除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-6708，描述于US-A2006-282915或WO2006/130436)；事件MS11(油菜，授粉控制-除草剂耐受性，保藏为ATCCPTA-850或PTA-2485，描述于WO2001/031042)；事件MS8(油菜，授粉控制-除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-730，描述于WO2001/041558或US-A2003-188347)；事件NK603(玉米，除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-2478，描述于US-A2007-292854)；事件PE-7(水稻，昆虫控制，未保藏，描述于WO2008/114282)；事件RF3(油菜，授粉控制-除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-730，描述于WO2001/041558或US-A2003-188347)；事件RT73(油菜，除草剂耐受性，未保藏，描述于WO2002/036831或US-A2008-070260)；事件SYHT0H2/SYN-000H2-5(大豆，除草剂耐受性，保藏为PTA-11226，描述于WO2012/082548)，事件T227-1(甜菜，除草剂耐受性，未保藏，描述于WO2002/44407或US-A2009-265817)；事件T25(玉米、除草剂耐受性、未保藏，描述于US-A2001-029014或WO2001/051654)；事件T304-40(棉花，昆虫控制-除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-8171，描述于US-A2010-077501或WO2008/122406)；事件T342-142(棉花，昆虫控制，未保藏，描述于WO2006/128568)；事件TC1507(玉米，昆虫控制-除草剂耐受性，未保藏，描述于US-A2005-039226或WO2004/099447)；事件VIP1034(玉米，昆虫控制-除草剂耐受性，保藏为ATCC PTA-3925，描述于WO2003/052073)，事件32316(玉米，昆虫控制-除草剂耐受性，保藏为PTA-11507，描述于WO2011/084632)，事件4114(玉米，昆虫控制-除草剂耐受性，保藏为PTA-11506，描述于WO2011/084621)，事件EE-GM3/FG72(大豆，除草剂耐受性，ATCC登录号PTA-11041)任选与事件EE-GM1/LL27叠加或事件EE-GM2/LL55(WO2011/063413A2)，事件DAS-68416-4(大豆，除草剂耐受性，ATCC登录号PTA-10442，WO2011/066360A1)，事件DAS-68416-4(大豆，除草剂耐受性，ATCC登录号PTA-10442，WO2011/066384A1)，事件DP-040416-8(玉米，昆虫控制，ATCC登录号PTA-11508，WO2011/075593A1)，事件DP-043A47-3(玉米，昆虫对照，ATCC登录号PTA-11509，WO2011/075595A1)，事件DP-004114-3(玉米，昆虫对照，ATCC登记号PTA-11506，WO2011/084621A1)，事件DP-032316-8(玉米，昆虫控制，ATCC登录号PTA-11507,WO2011/084632A1),事件MON-88302-9(油菜，除草剂耐受性，ATCC登录号PTA-10955，WO2011/153186A1)，事件DAS-21606-3(大豆，除草剂耐受性，ATCC登录号PTA-11028，WO2012/033794A2)，事件MON-87712-4(大豆，质量性状，ATCC登录号PTA-10296，WO2012/051199A2)，事件DAS-44406-6(大豆，叠加除草剂耐受性，ATCC登录号PTA-11336，WO2012/075426A1)，事件DAS-14536-7(大豆，叠加除草剂耐受性，ATCC登录号PTA-11335，WO2012/075429A1)，事件SYN-000H2-5(大豆，除草剂耐受性，ATCC登录号PTA-11226，WO2012/082548A2)，事件DP-061061-7(油菜，除草剂耐受性，无可用的保藏号，WO2012071039A1)，事件DP-073496-4(油菜，除草剂耐受性，无保藏号，US2012131692)，事件8264.44.06.1(大豆，叠加除草剂耐受性，登录号PTA-11336，WO2012075426A2)，事件8291.45.36.2(大豆，叠加除草剂耐受性，登录号PTA-11335，WO2012075429A2)，事件SYHT0H2(大豆，ATCC登录号PTA-11226，WO2012/082548A2)，事件MON88701(棉花ATCC登录号PTA-11754，WO2012/134808A1)，事件KK179-2(苜蓿，ATCC登录号PTA-11833，WO2013/003558A1)，事件pDAB8264.42.32.1(大豆，叠加除草剂耐受性，ATCC登录号PTA-11993，WO2013/010094A1)，事件MZDT09Y(玉米，ATCC登录号PTA-13025，WO2013/012775A1)。

赋予所需性状的基因/事件(例如，感兴趣的多核苷酸)也可以彼此组合存在于转基因植物中。转基因植物的实例包括但不限于农作物，例如谷物(小麦、水稻、黑小麦、大麦、黑麦、燕麦)、玉米、大豆、马铃薯、甜菜、甘蔗、西红柿、豌豆和其他类型的蔬菜、棉花、烟草、油菜以及水果植物(包括水果苹果、梨、柑橘类水果和葡萄)，特别强调玉米、大豆、小麦、水稻、马铃薯、棉花、甘蔗、烟草和油菜。特别强调的特性是植物对昆虫、蛛形纲动物、线虫和蛞蝓和蜗牛的增加的抗性，以及植物对一种或多种除草剂的增加的抗性。

可根据本发明优选处理的此类植物、植物部分或植物种子的可商购实例包括以

RIB

ROUNDUP

VT DOUBLE

VT TRIPLE

BOLLGARD

ROUNDUP READY 2

ROUNDUP

2XTEN^DTM、INTACTA RR2

VISTIVE

和/或XTENDFLEX^TM商品名销售或分销的商业产品，例如植物种子。

表达盒可以任选地包括在所选宿主细胞中起作用的转录和/或翻译终止区(即终止区)和/或增强子区。多种转录终止子和增强子是本领域已知的并且可用于表达盒。转录终止子负责转录的终止和正确的mRNA多聚腺苷酸化。终止区和/或增强子区对于转录起始区可以是天然的，对于例如编码序列特异性DNA结合蛋白的基因、编码核酸酶的基因、编码逆转录酶的基因、编码脱氨酶的基因等可以是天然的，或者对于宿主细胞可以是天然的，或者对于另一来源(例如，对于例如启动子、对于编码序列特异性DNA结合蛋白的基因、编码核酸酶的基因、编码逆转录酶的基因、编码脱氨酶的基因等，或对于宿主细胞或其任何组合来说是外来的或异源的)可以是天然的。

本发明的表达盒还可包括编码可选择标记的多核苷酸，其可用于选择转化的宿主细胞。如本文所用，“可选择标记”是指多核苷酸序列，其在表达时赋予表达该标记的宿主细胞不同的表型，从而允许将此类转化的细胞与不具有该标记的细胞区分开来。这样的多核苷酸序列可以编码可选择的或可筛选的标记，这取决于标记是否赋予可以通过化学手段(例如通过使用选择剂(例如抗生素等))选择的性状，或者取决于标记是否只是一种可以通过观察或测试来识别的性状，例如通过筛选(例如，荧光)。合适的可选择标记的许多例子是本领域已知的并且可以用于本文所述的表达盒中。

除了表达盒之外，本文所述的核酸分子/构建体和多核苷酸序列可以与载体结合使用。术语“载体”是指用于将核酸(或多种核酸)转移、递送或引入细胞中的组合物。载体包含含有待转移、递送或引入的一种或多种核苷酸序列的核酸构建体(例如一种或多种表达盒)。用于宿主生物转化的载体在本领域是众所周知的。一般类型的载体的非限制性实例包括双链或单链线性或环状形式的病毒载体、质粒载体、噬菌体载体、噬菌粒载体、粘粒载体、fosmid载体、噬菌体、人工染色体、小环或农杆菌双元载体，其可以或者可能无法自我传播或移动。在一些实施方案中，病毒载体可以包括但不限于逆转录病毒、慢病毒、腺病毒、腺相关病毒或单纯疱疹病毒载体。本文定义的载体可以通过整合到细胞基因组中或存在于染色体外(例如具有复制起点的自主复制质粒)来转化原核或真核宿主。另外包括穿梭载体，其意指能够在两种不同宿主生物(其可以选自放线菌和相关物种、细菌和真核生物(例如高等植物、哺乳动物、酵母或真菌细胞))中(天然或通过设计)复制的DNA载体。在一些实施方案中，载体中的核酸在合适启动子或其他调节元件的控制下并且可操作地与其连接以用于在宿主细胞中转录。该载体可以是在多个宿主中起作用的双功能表达载体。在基因组DNA的情况下，这可以包含其自身的启动子和/或其他调节元件，而在cDNA的情况下，这可以在合适的启动子和/或其他调节元件的控制下以用于在宿主细胞中表达。因此，本发明的核酸或多核苷酸和/或包含其的表达盒可以包含在如本文所述和本领域已知的载体中。

如本文所用，“接触”、“接触的”、“接触了”及其语法变体是指将所需反应的组分放在适合进行所需反应(例如，转化、转录控制、基因组编辑、切口和/或切割)的条件下。例如，靶核酸可以与序列特异性DNA结合蛋白(例如，多核苷酸引导的核酸内切酶、CRISPR-Cas核酸内切酶(例如，CRISPR-Cas效应蛋白)、锌指核酸酶、转录激活因子样效应核酸酶(TALEN)和/或Argonaute蛋白))和脱氨酶或编码其的核酸构建体在表达序列特异性DNA结合蛋白、逆转录酶和脱氨酶并且序列特异性DNA结合蛋白与靶核酸结合的条件下接触，逆转录酶和/或脱氨酶可以与序列特异性DNA结合蛋白融合或募集到序列特异性DNA结合蛋白上(例如，通过与序列特异性DNA结合蛋白融合的肽标签和与逆转录酶和/或脱氨酶融合的亲和标签)，因此脱氨酶和/或逆转录酶位于靶核酸附近，从而修饰靶核酸。可以使用利用其他蛋白质-蛋白质相互作用的募集逆转录酶和/或脱氨酶的其他方法，并且RNA-蛋白质相互作用和化学相互作用也可以用于蛋白质-蛋白质和蛋白质-核酸募集。

如本文所用，关于靶核酸的“修饰”或“修饰的”包括编辑(例如突变)、共价修饰、交换/取代核酸/核苷酸碱基、删除、切割、切口和/或靶核酸的转录控制。在一些实施方案中，修饰可以包括任何类型的一个或多个单碱基改变(SNP)。

在感兴趣的多核苷酸的上下文中，“引入”、“引入了”、“引入的”(及其语法变体)是指将感兴趣的核苷酸序列(例如，多核苷酸、RT模板、核酸构建体和/或引导核酸)以使得核苷酸序列能够进入细胞内部的方式呈递给植物、其植物部分或其细胞。

术语“转化”或“转染”可以互换使用，并且如本文所用，是指将异源核酸引入细胞。细胞的转化可以是稳定的或瞬时的。因此，在一些实施方案中，宿主细胞或宿主生物体(例如植物)可以用本发明的多核苷酸/核酸分子稳定转化。在一些实施方案中，宿主细胞或宿主生物体可以用本发明的多核苷酸/核酸分子瞬时转化。

在多核苷酸的上下文中，“瞬时转化”是指多核苷酸被引入细胞中并且不整合到细胞的基因组中。

在将多核苷酸引入细胞中的上下文中，“稳定地引入”或“稳定地引入的”意指引入的多核苷酸被稳定地掺入细胞的基因组中，因此细胞被多核苷酸稳定地转化。

如本文所用，“稳定转化”或“稳定转化的”是指将核酸分子引入细胞中并整合到细胞的基因组中。因此，整合的核酸分子能够被其后代，更具体地，被多个连续世代的后代遗传。如本文所用，“基因组”包括核基因组和质体基因组，因此包括将核酸整合到例如叶绿体或线粒体基因组中。如本文所用，稳定转化还可以指在染色体外维持的转基因，例如，作为微染色体或质粒。

瞬时转化可以通过例如酶联免疫吸附测定(ELISA)或蛋白质印迹来检测，其可以检测由引入生物体的一种或多种转基因编码的肽或多肽的存在。细胞的稳定转化可以通过例如细胞的基因组DNA与核酸序列的Southern印迹杂交测定来检测，所述核酸序列与引入生物体(例如植物)中的转基因的核苷酸序列特异性杂交。细胞的稳定转化可以通过例如细胞的RNA与核酸序列的Northern印迹杂交测定来检测，所述核酸序列与引入宿主生物的转基因的核苷酸序列特异性杂交。细胞的稳定转化也可以通过例如聚合酶链式反应(PCR)或本领域熟知的其他扩增反应来检测，使用与转基因的靶序列杂交的特异性引物序列，导致转基因序列的扩增，其可以根据标准方法检测。转化也可以通过本领域公知的直接测序和/或杂交方案检测。

因此，在一些实施方案中，本发明的核苷酸序列、多核苷酸、核酸构建体和/或表达盒可以瞬时表达和/或它们可以稳定地掺入宿主生物的基因组中。因此，在一些实施方案中，本发明的核酸构建体(例如，一种或多种包含用于如本文所述进行编辑的多核苷酸的表达盒)可以与引导核酸一起瞬时引入细胞中，因此，没有DNA保持在细胞中。

可以通过本领域技术人员已知的任何方法将本发明的核酸构建体引入植物细胞中。转化方法的非限制性实例包括通过细菌介导的核酸递送(例如，通过农杆菌)、病毒介导的核酸递送、碳化硅或核酸晶须介导的核酸递送、脂质体介导的核酸递送、显微注射、微粒轰击、磷酸钙介导的转化、环糊精介导的转化、电穿孔、纳米颗粒介导的转化、超声处理、渗透、PEG介导的核酸摄取以及导致将核酸引入植物细胞的任何其他电学、化学、物理(机械)和/或生物机制的转化，包括其任何组合。用于转化真核生物和原核生物的程序在本领域中是众所周知的并且是常规的并且在整个文献中都有描述(参见，例如，Jiang等人,2013.Nat.Biotechnol.31:233-239；Ran等人,Nature Protocols 8:2281–2308(2013))。本领域已知的各种植物转化方法的一般指南包括Miki等人(“Procedures for IntroducingForeign DNA into Plants”,Methods in Plant Molecular Biology andBiotechnology,Glick,B.R.和Thompson,J.E.,Eds.(CRC Press,Inc.,Boca Raton,1993),第67-88页)和Rakowoczy-Trojanowska(Cell.Mol.Biol.Lett.7:849-858(2002))。

在本发明的一些实施方案中，细胞的转化可以包括核转化。在其他实施方案中，细胞的转化可以包括质体转化(例如，叶绿体转化)。在更进一步的实施方案中，可以通过常规育种技术将本发明的核酸引入细胞中。在一些实施方案中，可以通过农杆菌转化将一种或多种多核苷酸、表达盒和/或载体引入植物细胞中。

因此，可以以本领域公知的许多方式将多核苷酸引入植物、植物部分、植物细胞中。本发明的方法不依赖于将一个或多个核苷酸序列引入植物的特定方法，仅依赖于它们能够进入细胞内部。在要引入多于多核苷酸的情况下，它们可以组装为单个核酸构建体的一部分，或作为单独的核酸构建体，并且可以位于相同或不同的核酸构建体上。因此，可以在单个转化事件中或在单独的转化事件中将多核苷酸引入感兴趣的细胞，或者，可替代地，作为育种方案的一部分，可以将多核苷酸掺入植物中。

GRF转录因子参与植物的生长促进。当GRF转录因子异位或过度表达时，它们的表达可以增加生长。抑制GRF转录因子表达的一种常见机制是通过microRNA，miR396。microRNA是在植物、动物和一些病毒中发现的小的非编码RNA分子，其在RNA沉默和基因表达的转录后调节中起作用。miRNA通过与mRNA分子内的互补序列进行碱基配对发挥作用。本发明人发现，通过改变靶mRNA中miRNA结合的结合位点，可以消除miRNA转录后调节靶基因表达的能力。

在一些实施方案中，提供了一种植物或其植物部分，该植物或其部分在编码内源生长调节因子(GRF)转录因子的至少一个基因中包含至少一个非天然突变，其中该突变破坏了miR396与由编码内源GRF转录因子的至少一个基因产生的mRNA的结合，导致mRNA水平升高。在一些实施方案中，如本文所述破坏miR396与GRF转录因子mRNA的结合并导致mRNA水平升高的突变是稳定突变，任选地其中突变位于由GRF转录因子基因编码的mRNA的miR396结合位点中(参见，例如，图3)。在一些实施方案中，编码GRF转录因子的至少一个基因中的至少一个非天然突变是半显性突变和/或亚形态突变。在一些实施方案中，突变的内源GRF转录因子可以包括但不限于GRF1、GRF2、GRF3、GRF4、GRF5、GRF6、GRF7、GRF8、GRF9、GRF10、GRF11、GRF12、GRF13、GRF14、GRF15、GRF16、GRF17、GRF18、GRF19或GRF20。该植物可以是本文所述的任何植物。在一些实施方案中，植物可以是小麦植物或玉米植物(参见例如表1)。在一些实施方案中，GRF转录因子可以来自玉米并且可以包含GRF6、GRF2、GRF1、GRF14、GRF15、GRF8、GRF4、GRF12、GRF10、GRF11、GRF5、GRF3、GRF9、GRF13或GRF7。在一些实施方案中，玉米植物可包含矮小/半矮化表型(参见例如图6)。在一些实施方案中，小麦植物中编码内源GRF转录因子的至少一个基因中的至少一个非天然突变可以在A基因组、B基因组或D基因组或其任何组合中。

在一些实施方案中，GRF转录因子基因产生结合相应miR396的mRNA。在一些实施方案中，相应的miR396可以是mir396a、miR396b、mir396c、miR396d、mir396e、miR396f、mir396g和/或miR396h(参见，例如，SEQ ID NO：84-96)。在一些实施方案中，GRF转录因子mRNA结合miR396a。在一些实施方案中，GRF转录因子mRNA结合miR396b。在一些实施方案中，miR396与GRF转录因子mRNA的减少的结合可以通过测量GRF转录因子mRNA的水平来测量。

在一些实施方案中，至少一个内源GRF转录因子基因中的至少一个非天然突变可以是碱基取代、缺失和/或插入。在一些实施方案中，至少一个突变可以是产生GRF转录因子mRNA的miRNA结合位点的GRF转录因子基因部分中的同义突变。在一些实施方案中，编码GRF转录因子的至少一个基因中的至少一个非天然突变是半显性突变和/或亚形态突变。在一些实施方案中，产生GRF转录因子mRNA中的miR396结合位点的GRF转录因子基因部分编码内源GRF转录因子多肽的一部分，其中内源GRF转录因子多肽的部分包含氨基酸序列NRSRKPVET(SEQ ID NO：42)。在一些实施方案中，至少一个突变可以是编码内源GRF转录因子氨基酸序列的一部分的核苷酸序列中的非同义突变，所述部分具有NRSRKPVET(SEQ IDNO：42)的氨基酸序列。在一些实施方案中，至少一个突变可以是编码内源GRF转录因子氨基酸序列的一部分的核苷酸序列中的框内缺失，所述部分具有NRSRKPVET(SEQ ID NO：42)的氨基酸序列。因此，在一些实施方案中，本发明提供了在编码GRF转录因子的内源性基因中包含稳定和靶向(例如，非天然)单核苷酸取代的植物细胞。在一些实施方案中，编码GRF转录因子的内源性基因中的突变不会导致GRF转录因子的多肽序列中的突变。在一些实施方案中，编码GRF转录因子的内源性基因中的突变产生包含GRF转录因子的多肽序列中的突变的多肽。在一些实施方案中，突变的GRF转录因子多肽可以包含氨基酸序列NRSRKPVKT(SEQID NO：43)、NRSRKPIKT(SEQ ID NO：44)、NRSKKPIKT(SEQ ID NO：45)、NRSRKPVQT(SEQ IDNO：46)，和/或NRSKKPVKT(SEQ ID NO：47)。

在一些实施方案中，产生具有miR396结合位点的mRNA的内源GRF转录因子基因包含：(a)与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的任一个核苷酸序列具有至少90％序列同一性的核苷酸序列；(b)与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的任一个核苷酸序列具有至少95％同一性(例如，约95、96、70、98、99或100％)的核苷酸序列；或(c)SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的核苷酸序列中的任一个中列出的核苷酸序列。在一些实施方案中，碱基取代可以是任何碱基取代为任何不同的碱基，例如取代为A、T、C或G。在一些实施方案中，内源GRF转录因子基因可以包含SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的任一个核苷酸序列的位置11、19、21和/或22的至少一个中的突变。在一些实施方案中，SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的任一个核苷酸序列的位置11处的突变可以是从G到A、T或C(例如，G>A，G>T，G>C)，SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的任一个核苷酸序列的位置19处的突变可以是从G到A、T或C，SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的任一个核苷酸序列的位置21处的突变可以是从G到A、T或C和/或SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的任一个核苷酸序列的位置22处的突变是从G到A、T或C。在一些实施方案中，SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的任一个核苷酸序列的位置11处的突变可以是G>A。在一些实施方案中，SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的任一个核苷酸序列的位置19处的突变可以是G>A或G>C。在一些实施方案中，SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的任一个核苷酸序列的位置21处的突变可以是G>A或G>C。在一些实施方案中，SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的任一个核苷酸序列的位置22处的突变可以是G>A或G>C。

包含SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的内源GRF转录因子基因中的突变可能会或可能不会产生氨基酸序列的变化。因此，对包含SEQ ID NO：1-3中任一个的核苷酸序列的内源GRF转录因子基因的突变可导致NRSRKPVET(SEQ ID NO：42)的相同氨基酸序列。在一些实施方案中，对包含SEQ ID NO：1-3中任一个的核苷酸序列的内源GRF转录因子基因的突变可产生可包括但不限于NRSRKPVKT(SEQ ID NO：43)、NRSRKPIKT(SEQ ID NO：44)、NRSKKPIKT(SEQ ID NO：45)、NRSRKPVQT(SEQ ID NO：46)和/或NRSKKPVKT(SEQ ID NO：47)的任一个的氨基酸序列的氨基酸序列。

在一些实施方案中，本发明提供植物细胞，该植物细胞包含碱基编辑系统，该碱基编辑系统包含：(a)序列特异性结合结构域(例如，CRISPR相关效应蛋白)；(b)胞苷脱氨酶或腺苷脱氨酶；和(c)具有与编码GRF转录因子的内源靶基因互补的间隔序列的引导核酸(gRNA)。在一些实施方案中，编码GRF转录因子的内源性靶基因可以与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的任一个核苷酸序列包含至少约90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)。在一些实施方案中，引导核酸可以包含具有例如SEQ ID NO：48-71中任一个的核苷酸序列的间隔序列。

在一些实施方案中，可用于本发明的引导核酸可包含与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列的片段或部分互补的间隔序列，其中SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的片段或部分可以是SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的从碱基对位置5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35到碱基对位置36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60。在一些实施方案中，引导核酸的间隔序列可以与其互补的SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的片段或部分可以包含SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198的任一个核苷酸序列(从5’端开始计算)的从碱基对位置1到碱基对位置21或22，从碱基对位置5到碱基对位置21、22、23、24、25、26或27，从碱基对位置10到碱基对位置25、26、27、28、29、30、31或32，从碱基对位置15到碱基对位置30、31、32、33、34、35、36或37，从碱基对位置20到碱基对位置35、36、37、38、39、40、41或42，从碱基对位置21到碱基对位置37、38、39、40、41、42、43或44，从碱基对位置25到碱基对位置40、41、42、43、44、45、46、47或48，从碱基对位置30到碱基对位置45、46、47、48、49、50、51或52，从碱基对位置35到碱基对位置50、51、52、53、54、55、56或57，从碱基对位置40到碱基对位置55、56、57、58、59、60、61或62，从碱基对位置42到碱基对位置57、58、59、60、61或62等的连续核苷酸。在一些实施方案中，引导核酸的间隔序列可以与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198的任一个核苷酸序列(从5’端开始计算)的从碱基对位置20到碱基对位置42的连续核苷酸互补。在一些实施方案中，引导核酸的间隔序列可包含具有SEQ ID NO：48-71中任一个的核苷酸序列的间隔序列。

在一些实施方案中，通过本发明的方法产生的植物部分或植物细胞可以被再生以产生在编码内源GRF转录因子的至少一个基因中包含稳定突变的植物，其中该突变导致减少的相应miR396与由内源GRF转录因子基因产生的mRNA的结合，任选地其中突变是半显性突变和/或亚形态突变。

在一些实施方案中，本发明进一步提供了一种植物细胞，该植物细胞在GRF转录因子基因的miR396结合位点内包含至少一种非天然发生的基因组修饰，其阻止或减少miR396与从包含至少一种非天然基因组修饰的GRF转录因子基因转录的GRF转录因子mRNA的结合，其中所述基因组修饰是使用编辑系统引入的取代、插入或缺失，所述编辑系统包含与具有SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列的GRF转录因子基因中的靶位点结合的核酸结合结构域。

在一些实施方案中，本发明提供了一种植物或其部分，其包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因，其中突变的内源GRF转录因子基因包含靶基因(靶核酸)，其包含与SEQ ID NO：4、5或9-18的任一个核苷酸序列具有至少80％序列同一性的序列(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，其中SEQ ID NO：4、5和9-18中的每一个包含与SEQ ID NO：1具有至少90％序列同一性的序列(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，并且靶基因在与SEQID NO：1具有至少90％序列同一性的序列内被修饰(例如突变)。在一些实施方案中，与SEQID NO：1的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列内的修饰(例如突变)可以使用包含序列特异性DNA结合结构域的编辑系统引入，该序列特异性DNA结合结构域结合与SEQ IDNO：4、5或9-18的任一个核苷酸序列具有至少80％同一性的核苷酸序列内的靶位点。在一些实施方案中，与SEQ ID NO：1的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列内的修饰可以使用编辑系统引入，该编辑系统包含与SEQ ID NO：19-33中任一个的核苷酸序列内的靶位点结合的序列特异性DNA结合结构域。

在一些实施方案中，提供了植物或其部分，该植物或其部分包含突变的内源GRF转录因子基因，其产生具有减少的miR396结合并导致由内源GRF转录因子基因产生的mRNA水平增加的mRNA，其中突变的内源GRF转录因子基因包含靶基因(核酸)，其包含与SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7的核苷酸序列具有至少80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，其中SEQ ID NO：6或SEQ IDNO：7的每个核苷酸序列包含与SEQ ID NO：2的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列，并且靶基因在与SEQ ID NO：2的核苷酸序列具有至少90％序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列内被修饰(例如突变)。在一些实施方案中，与SEQ ID NO：2具有至少90％序列同一性的序列内的修饰(例如突变)可以使用包含核酸结合结构域的编辑系统引入，该核酸结合结构域结合与SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7具有至少80％同一性的序列内的靶位点。在一些实施方案中，与SEQ ID NO：2具有至少90％序列同一性的序列内的修饰/突变可以使用包含与SEQ ID NO：21或SEQ ID NO：22中任一个的核苷酸序列内的靶位点结合的序列特异性DNA结合结构域的编辑系统引入。在一些实施方案中，由编辑系统引入的突变可以在编码GRF转录因子的至少一个基因中，其是半显性突变和/或亚形态突变。

在一些实施方案中，提供了在编码生长调节因子(GRF)转录因子的内源性基因中包含至少一个非天然突变的植物或其部分，其中在编码GRF的内源性基因中的至少一个非天然突变转录因子导致内源性基因产生的mRNA水平增加。在一些实施方案中，编码GRF转录因子的内源性基因中的至少一个非天然突变导致内源性基因产生的mRNA水平增加并破坏miR396与由GRF转录因子基因产生的mRNA的结合。

在一些实施方案中，提供了植物或其部分，该植物或其部分包含突变的内源GRF转录因子基因，该基因产生具有减少的miR396结合并导致GRF转录因子mRNA水平增加的mRNA，其中突变的内源GRF转录因子基因包含靶基因(核酸)，其包含与SEQ ID NO：8的核苷酸序列具有至少80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，其中SEQ ID NO：8的核苷酸序列包含与SEQ ID NO：3的核苷酸序列具有至少90％序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且靶基因在与SEQ ID NO：3的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列内被修饰(例如，突变)。在一些实施方案中，与SEQ ID NO：3具有至少90％序列同一性的序列内的修饰(例如突变)可以使用包含核酸结合结构域的编辑系统引入，该核酸结合结构域结合与SEQ ID NO：8具有至少80％同一性的序列内的靶位点。在一些实施方案中，与SEQ ID NO：3具有至少90％序列同一性的序列内的修饰可以使用包含序列特异性DNA结合结构域的编辑系统引入，该序列特异性DNA结合结构域结合SEQ ID NO：23的任一核苷酸序列内的靶位点。

在一些实施方案中，本发明提供了一种植物或其部分，其包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因，其中突变的内源GRF转录因子基因包含靶基因(核酸)，该靶基因包含与SEQ ID NO：121-144的任一个核苷酸序列具有至少80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，其中SEQ ID NO：121-144中的每一个包含与SEQ ID NO：145-146中的任一个具有至少90％序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且靶基因在与SEQ ID NO：145-146中任一个具有至少90％的序列同一性的序列内被修饰(例如突变)。在一些实施方案中，与SEQ ID NO：145-146的核苷酸序列中的任一个具有至少90％序列同一性的序列内的修饰(例如突变)可以使用包含序列特异性DNA结合结构域的编辑系统引入，该序列特异性DNA结合结构域结合与SEQ ID NO：121-144的任一个核苷酸序列具有至少80％的同一性的核苷酸序列内的靶位点。在一些实施方案中，与SEQ ID NO：145-146的任一个核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列内的修饰可以使用包含序列特异性DNA结合结构域的编辑系统引入，该序列特异性DNA结合结构域结合SEQ ID NO：121-144中任一个的核苷酸序列内的靶位点。

在一些实施方案中，本发明提供了一种植物或其部分，其包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因，其中突变的内源GRF转录因子基因包含靶基因(核酸)，该靶基因包含与SEQ ID NO：173-198的任一个核苷酸序列具有至少80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，其中SEQ ID NO：173-198中的每一个包含与SEQ ID NO：199-202中的任一个具有至少90％序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且靶基因在与SEQ ID NO：199-202中任一个具有至少90％的序列同一性的序列内被修饰(例如突变)，并且靶基因在与SEQ ID NO：199-202中任一个具有至少90％序列同一性的序列内被修饰(例如突变)。在一些实施方案中，与SEQ ID NO：199-202的任一个核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列内的修饰(例如突变)可以使用包含序列特异性DNA结合结构域的编辑系统引入，该序列特异性DNA结合结构域结合与SEQ ID NO：173-198的任一个核苷酸序列具有至少80％的同一性的核苷酸序列内的靶位点。在一些实施方案中，与SEQ IDNO：199-202的任一个核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列内的修饰可以使用包含序列特异性DNA结合结构域的编辑系统引入，该序列特异性DNA结合结构域结合SEQ ID NO：174-198中任一个的核苷酸序列内的靶位点。

本发明的另一方面提供了包含生长调节因子(GRF)转录因子基因的植物，该基因包含在SEQ ID NO：1-33或97-202中任一个的核苷酸序列中的任何一个中的突变。在一些实施方案中，本发明提供了包含突变的生长调节因子(GRF)转录因子基因的植物，该基因包含SEQ ID NO：34-41中任一个的核苷酸序列。在一些实施方案中，突变的GRF转录因子包含半显性突变和/或亚形态突变。

在一些实施方案中，本发明提供了包含生长调节因子(GRF)转录因子基因的玉米植物，该基因包含SEQ ID NO：34-41中任一个的核苷酸序列。

在一些实施方案中，本发明提供了包含生长调节因子(GRF)转录因子基因的小麦植物，该基因产生具有突变的miR396结合位点的mRNA，使得miR396与GRF转录因子mRNA的miR396结合位点的结合降低。在一些实施方案中，本发明提供在由生长调节因子(GRF)转录因子基因产生的mRNA的miR396结合位点中具有突变的小麦植物，所述转录因子基因包含SEQ ID NO：147-198中任一个的核苷酸序列。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO：147-198中任一个的核苷酸序列的生长调节因子(GRF)转录因子基因在小麦植物的A基因组、B基因组、D基因组或其任何组合中。

在一些实施方案中，本发明提供了包含生长调节因子(GRF)转录因子基因的小麦植物，该基因产生具有突变的miR396结合位点的mRNA，使得miR396与GRF转录因子mRNA的miR396结合位点的结合降低。在一些实施方案中，本发明提供在由生长调节因子(GRF)转录因子产生的mRNA的miR396结合位点中具有突变的大豆植物，所述转录因子包含SEQ ID NO：97-144中任一个的核苷酸序列。在一些实施方案中，包含SEQ ID NO：97-144中任一个的核苷酸序列的生长调节因子(GRF)转录因子在小麦植物的A基因组、B基因组、D基因组或其任何组合中。

在一些实施方案中，本发明提供玉米植物或其植物部分，其在至少一种内源生长调节因子(GRF)转录因子中包含至少一个非天然突变，其位于：(a)由5号染色体上的碱基对(bp)位置211773221到碱基对位置211774543定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM5G893117)，任选由碱基对(bp)位置211773897到碱基对位置211773957定义并包括这些位置的染色体区间；(b)由5号染色体上的碱基对(bp)位置200344009到碱基对位置200348833定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G034876)，任选由碱基对(bp)位置200346611到碱基对位置200346671定义并包括这些位置的染色体区间；(c)由5号染色体上的碱基对(bp)位置13817620到碱基对位置13822440定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G033612)，任选由碱基对(bp)位置138197933到碱基对位置13819853定义并包括这些位置的染色体区间；(d)由4号染色体上的碱基对(bp)位置177151736到碱基对位置177154443定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G105335)，任选由碱基对(bp)位置177152804到碱基对位置177152864定义并包括这些位置的染色体区间；(e)由1号染色体上的碱基对(bp)位置257245490到碱基对位置257249295定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G018414)，任选由碱基对(bp)位置257247225到碱基对位置257247285定义并包括这些位置的染色体区间；(f)由9号染色体上的碱基对(bp)位置25722859到碱基对位置25725873定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G119359)，任选由碱基对(bp)位置25723770到碱基对位置25723830定义并包括这些位置的染色体区间；(g)由6号染色体上的碱基对(bp)位置60351912到碱基对位置60356302定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G098594)，任选由碱基对(bp)位置60354489到碱基对位置60354549定义并包括这些位置的染色体区间；(h)由5号染色体上的碱基对(bp)位置196192921到碱基对位置196194872定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置196194175到碱基对位置196194235定义并包括这些位置的染色体区间；(i)由10号染色体上的碱基对(bp)位置140393394到碱基对位置140398705定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G129147)，任选由碱基对(bp)位置140396272到碱基对位置140396332定义并包括这些位置的染色体区间；(j)由4号染色体上碱基对(bp)位置155831622到碱基对位置155833517定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G124566)，任选由碱基对(bp)位置155832749到碱基对位置155832809定义并包括这些位置的染色体区间；

(k)由2号染色体上的碱基对(bp)位置12201898到碱基对位置12208052定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G041223)，任选由碱基对(bp)位置12204599到碱基对位置12204659定义并包括这些位置的染色体区间；(l)由9号染色体上的碱基对(bp)位置9818327到碱基对位置9820186定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G067743)，任选由碱基对(bp)位置9819224到碱基对位置9819284定义并包括这些位置的染色体区间；(m)由6号染色体上的碱基对(bp)位置108477686到碱基对位置108480099定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM5G850129)，任选由碱基对(bp)位置108478747到碱基对位置108478807定义并包括这些位置的染色体区间；(n)由2号染色体上的碱基对(bp)位置225827712到碱基对位置225832487定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G099862)，任选由碱基对(bp)位置225830099到碱基对位置225830159定义并包括这些位置的染色体区间；(o)由1号染色体上的碱基对(bp)位置272414778到碱基对位置272420567定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G178261)；(p)由2号染色体上的碱基对(bp)位置199377455到碱基对位置199381799定义并包括这些位置的染色体区间；(q)由7号染色体上的碱基对(bp)位置145016279到碱基对位置145019899定义并包括这些位置的染色体区间；和/或(r)由5号染色体上的碱基对(bp)位置8708791到碱基对位置8711617定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM5G853392)，其中突变导致GRF转录因子mRNA增加，和任选地，破坏miR396与GRF转录因子的结合，并且(a)至(r)的染色体区间对应于B73的参考玉米基因组。

在一些实施方案中，玉米植物可包含5号染色体上(a)bp位置211773927、(b)bp位置200346641、(c)bp位置13819823和(d)bp位置196194205的突变，其中(a)至(e)的染色体位置对应于B73的参考玉米基因组。

在一些实施方案中，玉米植物可包含4号染色体上(a)bp位置177152834和/或(b)bp位置155832779的突变，其中(a)和(b)的染色体位置对应于参考玉米基因组B73。

在一些实施方案中，玉米植物可包含1号染色体上bp位置257247255的突变，其中257247255的染色体位置对应于B73的参考玉米基因组。

在一些实施方案中，玉米植物可包含9号染色体上(a)bp位置25723800和/或(b)bp位置9819254的突变，其中(a)和(b)的染色体位置对应于B73的参考玉米基因组。

在一些实施方案中，玉米植物可以包含6号染色体上(a)bp位置60354519和/或(b)bp位置108478777的突变，其中(a)和(b)的染色体位置对应于B73的参考玉米基因组。

在一些实施方案中，玉米植物可包含10号染色体上bp位置140396302的突变，其中140396302的染色体位置对应于B73的参考玉米基因组。

在一些实施方案中，玉米植物可以包含2号染色体上(a)bp位置12204629和/或(b)bp位置225830129的突变，其中(a)和(b)的染色体位置对应于参考玉米基因组B73。

关于玉米(Zea mays)，在本文中相对于在MaizeGDB互联网资源(maizegdb.org/assembly)上的B73玉米基因组"B73 RefGen_v3"(汇编aka B73 RefGen_v3,AGPv3)中标记基因座的位置描述了本发明的标记。

本发明提供用于修饰参与植物生长和发育的GRF转录因子(特别是调节生物量、产率、花序大小/重量、果实产率、果实质量、果实大小、种子大小、种子数、叶组织重量、结瘤数、结瘤质量、结瘤活性、种子头数、分蘖数、花量、块茎数量、块茎质量、鳞茎质量、种子数、总种子质量、出叶率、分蘖出现率、幼苗出苗率、根的长度、根的数量、根群的大小和/或重量或这些特征的任何组合的那些GRF转录因子)的方法和组合物。因此，在本发明的一些实施方案中，包含具有减少的miR396结合的突变的内源GRF转录因子基因的植物可以表现出以下表型中的至少一种：与不包含具有减少的miR396结合的突变的内源GRF转录因子基因的对照植物相比增加的分生组织大小、增加的种子大小、增加的生物量、增加的叶大小、增加的根大小、增加的氮利用效率、增加的抗病性、增加的高度和/或增加的节间长度。

在一些实施方案中，本发明提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列具有至少80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94，95、96、70、98、99或100％)的序列，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，提供了一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：14的核苷酸序列具有至少65％序列同一性(例如，约65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列并且包含在SEQ ID NO：9(GRF860nt cDNA)或SEQ ID NO：14(GRF5 60nt cDNA)的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，该结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，提供了一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：4、5或9-18中任一个的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且包含在SEQ ID NO：4、5或9-18中任一个的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，本发明提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且包含在SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，结合位点序列与SEQ ID NO：2具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，本发明提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：8的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且包含在SEQ ID NO：8的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，该结合位点序列与SEQ IDNO：3具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，提供了一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：4的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且包含在SEQ ID NO：4的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，该结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，提供了一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：5的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且包含在SEQ ID NO：5的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，该结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，本发明提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：9的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且包含在SEQ ID NO：9的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，该结合位点序列与SEQ IDNO：1具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，提供了一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：10的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且包含在SEQ ID NO：10的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，该结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，本发明提供了一种编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：11的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且包含在SEQ ID NO：11的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，该结合位点序列与SEQ IDNO：1具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，提供了一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：12的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且包含在SEQ ID NO：12的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，该结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，提供了一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：13的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且包含在SEQ ID NO：13的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，该结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，本发明提供了一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：14的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且包含在SEQ ID NO：14的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，该结合位点序列与SEQID NO：1具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，本发明提供了一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：15的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且包含在SEQ ID NO：15的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，该结合位点序列与SEQID NO：1具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，提供了一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：16的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且包含在SEQ ID NO：16的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，该结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，提供了一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：17的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且包含在SEQ ID NO：17的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，该结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，本发明提供了一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：18的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且包含在SEQ ID NO：18的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，该结合位点序列与SEQID NO：1具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，提供了一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：121-144中任一个的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且包含在SEQ ID NO：121-144中任一个的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，结合位点序列与SEQ ID NO：145或SEQ ID NO：146具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，提供了一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，该方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：173-198中任一个的核苷酸序列具有约80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，并且在SEQ ID NO：173-198中任一个的bp位置21至42处包含miR396结合位点序列，结合位点序列与SEQ ID NO：145或SEQ ID NO：146具有至少90％的序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

在一些实施方案中，该方法可以进一步包括从包含内源GRF转录因子基因中的编辑的植物细胞再生植物以产生包含其内源GRF转录因子基因中的编辑的植物。在一些实施方案中，与不包含该编辑的对照植物相比，在其内源GRF转录因子基因中包含该编辑的植物可以具有增加的生长。在一些实施方案中，编辑导致非天然突变。

在一些实施方案中，提供了一种制造植物的方法，该方法包括：(a)使包含编码GRF转录因子的内源性基因的植物细胞群体与包含核酸结合结构域的编辑系统接触，所述核酸结合结构域结合与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202或SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198的核苷酸序列具有至少80％同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列；(b)从所述群体中选择植物细胞，所述植物细胞在编码GRF转录因子的至少一个内源性基因中包含突变，其中所述突变是所述至少一个内源性基因中至少一个核苷酸的取代，其中所述突变减少或消除miR396与由包含突变的编码GRF转录因子的至少一个内源性基因产生的mRNA结合的能力；和(c)将选择的植物细胞培育成植物。

在一些实施方案中，本发明提供了产生包含其中内源GRF转录因子基因被突变的至少一个细胞的植物或其部分的方法，该方法包括使植物或植物部分中的GRF转录因子基因中的靶位点与包含核酸结合结构域的编辑系统接触，所述核酸结合结构域与GRF转录因子基因中(或之内)的靶位点结合，所述基因与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)、与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性或与SEQ ID NO：19-33、97-120或147-172中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性，从而产生包含在内源GRF转录因子基因中具有突变的至少一个细胞的植物或其部分。在一些实施方案中，突变的内源GRF转录因子基因产生具有与其相应的miR396(例如，天然结合野生型GRF转录因子mRNA的miR396)的减少的结合的mRNA。

在一些实施方案中，本发明提供一种产生植物或其部分的方法，该植物或其部分包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因，该方法包括使内源GRF转录因子基因中的靶位点与编辑系统接触，所述编辑系统包含与GRF转录因子基因中的靶位点结合的核酸结合结构域，所述基因与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)、与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性或与SEQ ID NO：19-33、97-120或147-172中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性，从而产生包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因的植物或其部分。在一些实施方案中，SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198或SEQ ID NO：19-33、97-120或147-172中任一个的核苷酸序列包含与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少90％序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列被修饰。

在一些实施方案中，与对照植物(例如，在其内源GRF转录因子基因中不包含所述修饰或突变或其中植物的内源GRF转录因子基因尚未与编辑系统接触的植物)相比，包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因的植物表现出增加的生长。在一些实施方案中，包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因的植物表现出以下表型中的至少一种：与对照植物(例如，在其内源GRF转录因子基因中不包含所述修饰或突变或其中植物的内源GRF转录因子基因尚未与编辑系统接触的植物)相比，增加的分生组织大小、增加的种子大小、增加的生物量、增加的叶大小、增加的根大小、增加的氮利用效率、增加的抗病性、增加的高度和/或增加的节间长度。

在一些实施方案中，本发明提供了产生具有增加的生长或增加的生长速率的植物或其部分的方法，该方法包括使内源GRF转录因子基因中的靶位点与包含核酸结合结构域的编辑系统接触，所述核酸结合结构域与GRF转录因子基因中的靶位点结合，所述基因与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少80％序列同一性(例如，约80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)、与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性或与SEQ ID NO：19-33、97-120或147-172中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性，从而产生包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因的植物或其部分，从而产生具有增加的生长或增加的生长速率的植物或其部分。在一些实施方案中，SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198或SEQ ID NO：19-33、97-120或147-172中任一个的核苷酸序列包含与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少90％序列同一性(例如，约90、91、92、93、94、95、96、70、98、99或100％)的序列，与SEQ IDNO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列被修饰。

可用于本发明的编辑系统可以是现在已知或以后开发的任何位点特异性(序列特异性)基因组编辑系统，该系统可以以靶特异性方式引入突变。例如，编辑系统(例如，位点或序列特异性编辑系统)可以包括但不限于，CRISPR-Cas编辑系统、大范围核酸酶编辑系统、锌指核酸酶(ZFN)编辑系统、转录激活因子样效应核酸酶(TALEN)编辑系统、碱基编辑系统和/或引导编辑系统(prime editing system)，其各自可以包含当在细胞中作为系统表达时可以以序列特异性方式修饰(突变)靶核酸的一种或多种多肽和/或一种或多种多核苷酸。在一些实施方案中，编辑系统(例如，位点或序列特异性编辑系统)可以包含一种或多种多核苷酸和/或一种或多种多肽，包括但不限于核酸结合结构域(DNA结合结构域)、核酸酶和/或其他多肽和/或多核苷酸。

在一些实施方案中，编辑系统可以包含一个或多个序列特异性核酸结合结构域(DNA结合结构域)，其可以来自例如多核苷酸引导的核酸内切酶、CRISPR-Cas核酸内切酶(例如，CRISPR-Cas效应蛋白)、锌指核酸酶、转录激活因子样效应核酸酶(TALEN)和/或Argonaute蛋白。在一些实施方案中，编辑系统可以包含一个或多个切割结构域(例如，核酸酶)，包括但不限于，核酸内切酶(例如，Fok1)、多核苷酸引导的核酸内切酶、CRISPR-Cas核酸内切酶(例如，CRISPR-Cas效应蛋白)、锌指核酸酶和/或转录激活因子样效应核酸酶(TALEN)。在一些实施方案中，编辑系统可以包含一种或多种多肽，其包括但不限于脱氨酶(例如胞嘧啶脱氨酶、腺嘌呤脱氨酶)、逆转录酶、Dna2多肽和/或5’瓣状核酸内切酶(FEN)。在一些实施方案中，编辑系统可包含一种或多种多核苷酸，包括但不限于CRISPR阵列(CRISPR引导)核酸、延伸的引导核酸和/或逆转录酶模板。

在一些实施方案中，修饰或编辑GRF转录因子的方法可以包括将靶核酸(例如，编码GRF转录因子的核酸)与碱基编辑融合蛋白(例如，与脱氨酶结构域(例如腺嘌呤脱氨酶和/或胞嘧啶脱氨酶)和引导核酸融合的序列特异性DNA结合蛋白(例如CRISPR-Cas效应蛋白或结构域)，其中引导核酸能够将碱基编辑融合蛋白引导/靶向至靶核酸，从而编辑靶核酸内的基因座(参见例如图2)。在一些实施方案中，碱基编辑融合蛋白和引导核酸可以包含在一个或多个表达盒中。在一些实施方案中，靶核酸可以与碱基编辑融合蛋白和包含引导核酸的表达盒接触。在一些实施方案中，序列特异性DNA结合融合蛋白和引导物可以作为核糖核蛋白(RNP)提供。在一些实施方案中，细胞可以与多于一种碱基编辑融合蛋白和/或可以靶向细胞中的一种或多种靶核酸的一种或多种引导核酸接触。

在一些实施方案中，修饰或编辑GRF转录因子的方法可以包括将靶核酸(例如，编码GRF转录因子的核酸)与融合至肽标签的序列特异性DNA结合融合蛋白(例如，序列特异性DNA结合蛋白(例如，CRISPR-Cas效应蛋白或结构域)、包含融合到能够结合肽标签的亲和多肽的脱氨酶结构域(例如，腺嘌呤脱氨酶和/或胞嘧啶脱氨酶)的脱氨酶融合蛋白和引导核酸接触，其中引导核酸能够将序列特异性DNA结合融合蛋白引导/靶向至靶核酸并且序列特异性DNA结合融合蛋白能够通过肽标签-亲和多肽相互作用将脱氨酶融合蛋白募集到靶核酸，从而编辑靶核酸内的基因座。在一些实施方案中，序列特异性DNA结合融合蛋白可融合至结合肽标签的亲和多肽，并且脱氨酶可融合至肽标签，从而将脱氨酶募集至序列特异性DNA结合融合蛋白和靶核酸。在一些实施方案中，序列特异性结合融合蛋白、脱氨酶融合蛋白和引导核酸可以包含在一个或多个表达盒中。在一些实施方案中，靶核酸可以与序列特异性结合融合蛋白、脱氨酶融合蛋白和包含引导核酸的表达盒接触。在一些实施方案中，序列特异性DNA结合融合蛋白、脱氨酶融合蛋白和引导物可以作为核糖核蛋白(RNP)提供。

在一些实施方案中，诸如引导编辑的方法可用于在内源GRF转录因子基因中产生突变。在引导编辑中，RNA依赖性DNA聚合酶(逆转录酶，RT)和逆转录酶模板(RT模板)与序列特异性DNA结合结构域组合使用，该序列特异性DNA结合结构域赋予以序列特异性方式识别和结合靶标的能力，并且也可能导致靶标内含PAM的链的缺口。DNA结合结构域可以是CRISPR-Cas效应蛋白，并且在这种情况下，CRISPR阵列或引导RNA可以是延伸的引导物，其包含延伸的部分，该延伸的部分包含引物结合位点(PSB)和待整合到基因组(模板)中的编辑器。与碱基编辑类似，引导编辑可以利用招募蛋白质的各种方法用于编辑靶位点，这些方法包括基因组编辑的选定过程中使用的蛋白质和核酸之间的非共价和共价相互作用。

在一些实施方案中，突变或修饰可以是插入、缺失和/或点突变。在一些实施方案中，植物部分可以是细胞。在一些实施方案中，植物或其植物部分可以是本文所述的任何植物或其部分。在一些实施方案中，可用于本发明的植物可以是玉米、大豆、油菜、小麦、水稻、棉花、甘蔗、甜菜、大麦、燕麦、苜蓿、向日葵、红花、油棕、芝麻、椰子、烟草、马铃薯、甘薯、木薯、咖啡、苹果、李子、杏、桃、樱桃、梨、无花果、香蕉、柑橘、可可、鳄梨、橄榄、杏仁、核桃、草莓、西瓜、胡椒、葡萄、番茄、黄瓜或芸苔属的几个种。在一些实施方案中，包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因的植物可以包括增加的生长和/或增加的生长速率，任选地其根和/或果实的增加的生长和/或增加的生长速率。在一些实施方案中，植物可以是玉米并且果实可以是穗，任选地其中玉米植物包含矮小/半矮化表型。

在一些实施方案中，引入内源GRF转录因子基因并导致产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变可以是非天然发生的突变。在一些实施方案中，引入内源GRF转录因子基因并导致产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变可以是取代、插入和/或缺失。在一些实施方案中，引入内源GRF转录因子基因并导致产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变可以是点突变。

在一些实施方案中，GRF转录因子可以包括但不限于GRF1、GRF2、GRF3、GRF4、GRF5、GRF6、GRF7、GRF8、GRF9、GRF10、GRF11、GRF12、GRF13、GRF14、GRF15、GRF16、GRF17、GRF18、GRF19或GRF20。在一些实施方案中，GRF转录因子可以包括但不限于GRF6、GRF2、GRF1、GRF14、GRF15、GRF8、GRF4、GRF12、GRF10、GRF11、GRF5、GRF3、GRF9、GRF13或GRF7。

在一些实施方案中，本发明进一步提供了一种产生/培育无转基因碱基编辑植物的方法，该方法包括：(a)将本发明的在至少一个内源GRF转录因子基因中包含至少一个突变/修饰(其导致具有与相应miR396的减少的结合的mRNA)的植物与无转基因植物杂交，从而将至少一个突变/修饰引入无转基因植物；和(b)选择包含至少一个单核苷酸取代但无转基因的后代植物，从而产生无转基因碱基编辑植物。

在一些实施方案中，与对照植物(例如，在其内源GRF转录因子基因中不包含所述修饰或突变或其中植物的内源GRF转录因子基因尚未与核酸酶接触的植物)相比，包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因的植物可以表现出增加的生长。在一些实施方案中，包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因的植物可以表现出以下表型中的至少一种：与对照植物(例如，在其内源GRF转录因子基因中不包含所述修饰或突变或其中植物的内源GRF转录因子基因尚未与核酸酶接触的植物)相比，增加的分生组织大小、增加的种子大小、增加的生物量、增加的叶大小、增加的根大小、增加的氮利用效率、增加的抗病性、增加的高度和/或增加的节间长度。

本发明进一步提供了与GRF转录因子基因中的靶位点结合的引导核酸(例如，gRNA)，该靶位点包含SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198的任一个核苷酸序列，任选地其中GRF转录因子可以是GRF1、GRF2、GRF3、GRF4、GRF5、GRF6、GRF7、GRF8、GRF9、GRF10、GRF11、GRF12、GRF13、GRF14、GRF15、GRF16、GRF17、GRF18、GRF19或GRF20。在一些实施方案中，提供了与GRF转录因子基因中的靶位点结合的引导核酸(例如，gRNA)，该靶位点包含SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198的任一个核苷酸序列，任选地其中GRF转录因子可以是GRF6、GRF2、GRF1、GRF14、GRF15、GRF8、GRF4、GRF12、GRF10、GRF11、GRF5、GRF3、GRF9、GRF13或GRF7。

在一些实施方案中，本发明的基因编辑系统的引导核酸可以包含与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列的片段或部分互补的间隔序列，其中SEQ IDNO：4-18、121-144或173-198中任一个的片段或部分可以是SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的从碱基对位置5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35到碱基对位置36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60。在一些实施方案中，引导核酸可以包含间隔序列，其与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198的任一个核苷酸序列(从5’端开始计算)的从碱基对位置1到碱基对位置21或22，从碱基对位置5到碱基对位置21、22、23、24、25、26或27，从碱基对位置10到碱基对位置25、26、27、28、29、30、31或32，从碱基对位置15到碱基对位置30、31、32、33、34、35、36或37，从碱基对位置20到碱基对位置35、36、37、38、39、40、41或42，从碱基对位置21到碱基对位置37、38、39、40、41、42、43或44，从碱基对位置25到碱基对位置40、41、42、43、44、45、46、47或48，从碱基对位置30到碱基对位置45、46、47、48、49、50、51或52，从碱基对位置35到碱基对位置50、51、52、53、54、55、56或57，从碱基对位置40到碱基对位置55、56、57、58、59、60、61或62，从碱基对位置42到碱基对位置57、58、59、60、61或62等的连续核苷酸互补。在一些实施方案中，引导核酸可以包含与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198(从5’端开始计算)的任一个核苷酸序列的从碱基对位置20到碱基对位置42的连续核苷酸互补的间隔序列。在一些实施方案中，引导核酸可包含具有SEQ ID NO：48-71中任一个的核苷酸序列的间隔序列。

本发明还提供了一种编辑系统，其包含本发明的引导核酸和与该引导核酸缔合的CRISPR-Cas效应蛋白。在一些实施方案中，本发明的编辑系统可进一步包含与引导核酸和CRISPR-Cas效应蛋白缔合的tracr核酸，任选地其中tracr核酸和引导核酸是共价连接的。

本发明进一步提供了一种编辑系统，其包含与引导核酸缔合的CRISPR-Cas效应蛋白，其中引导核酸包含与GRF转录因子基因结合的间隔序列。在一些实施方案中，GRF转录因子基因可以是GRF1基因、GRF2基因、GRF3基因、GRF4基因、GRF5基因、GRF6基因、GRF7基因、GRF8基因、GRF9基因、GRF10基因、GRF11基因、GRF12基因、GRF13基因、GRF14基因、GRF15基因、GRF16基因、GRF17基因、GRF18基因、GRF19基因或GRF20基因。在一些实施方案中，GRF转录因子基因可以是GRF6基因、GRF2基因、GRF1基因、GRF14基因、GRF15基因、GRF8基因、GRF4基因、GRF12基因、GRF10基因、GRF11基因、GRF5基因、GRF3基因、GRF9基因、GRF13基因或GRF7基因。在一些实施方案中，基因编辑系统的GRF转录因子基因可以包含SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列。

在一些实施方案中，基因编辑系统的引导核酸可以包含具有SEQ ID NO：48-71中任一个的核苷酸序列的间隔序列。

本发明进一步提供了一种复合物，该复合物包含含有切割结构域的CRISPR-Cas效应蛋白和引导核酸(例如，gRNA)，其中引导核酸与具有SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中的任一个的核苷酸序列的GRF转录因子基因中的靶位点结合，其中核酸酶切割靶标链。

本文进一步提供了表达盒，其包含(a)编码包含切割结构域的CRISPR-Cas效应蛋白的多核苷酸和(b)与GRF转录因子基因中的靶位点结合的引导核酸，其中引导核酸包含间隔序列，该间隔序列与以下序列互补并结合：与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的任一个核苷酸序列的至少一部分具有至少80％序列同一性的序列或与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198的任一个核苷酸序列的至少一部分具有至少80％序列同一性的序列，如本文所述的。在一些实施方案中，所述至少一部分可以包含SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的任一个核苷酸序列的至少一个核苷酸或至少两个(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21或22)连续核苷酸。

在一些实施方案中，所述至少一部分可以是SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中的任一个和/或SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中的任一个的核苷酸序列的一部分，其中SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个和/或SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的部分可以来自SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个和/或SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的碱基对位置5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35到碱基对位置36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60。在一些实施方案中，所述至少一部分可以包含SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个和/或SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的任一个核苷酸序列(从5’端开始计算)的从碱基对位置1到碱基对位置21或22，从碱基对位置5到碱基对位置21、22、23、24、25、26或27，从碱基对位置10到碱基对位置25、26、27、28、29、30、31或32，从碱基对位置15到碱基对位置30、31、32、33、34、35、36或37，从碱基对位置20到碱基对位置35、36、37、38、39、40、41或42，从碱基对位置21到碱基对位置37、38、39、40、41、42、43或44，从碱基对位置25到碱基对位置40、41、42、43、44、45、46、47或48，从碱基对位置30到碱基对位置45、46、47、48、49、50、51或52，从碱基对位置35到碱基对位置50、51、52、53、54、55、56或57，从碱基对位置40到碱基对位置55、56、57、58、59、60、61或62，从碱基对位置42到碱基对位置57、58、59、60、61或62等的连续核苷酸。在一些实施方案中，所述至少一部分可包含SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个和/或SEQ IDNO：4-18、121-144或173-198中任一个的任一个核苷酸序列(从5’端开始计算)的从碱基对位置20到碱基对位置42的连续核苷酸。在一些实施方案中，SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中的任一个和/或SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中的任一个的一部分可以是SEQID NO：1-3、145、146或199-202中的任一个和/或SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中的任一个的至少约1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个或更多个连续核苷酸。

本文还提供了编码GRF转录因子的核酸，其产生具有突变的miR396结合位点的mRNA，其中突变的miR396结合位点包含导致增加的水平的mRNA和任选地破坏(减少或消除)miR396与mRNA的结合的突变。在一些实施方案中，突变可以消除相应miR396的结合(例如，零可检测结合)。在一些实施方案中，突变可将相应的miR396与GRF转录因子mRNA结合的能力降低至少约75％(例如，miR396结合降低约75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99％或更多，或其中的任何范围或值，或其中的任何范围或值)。在一些实施方案中，GRF转录因子可以是GRF1、GRF2、GRF3、GRF4、GRF5、GRF6、GRF7、GRF8、GRF9、GRF10、GRF11、GRF12、GRF13、GRF14、GRF15、GRF16、GRF17、GRF18、GRF19或GRF20。在一些实施方案中，GRF转录因子可以是GRF6、GRF2、GRF1、GRF14、GRF15、GRF8、GRF4、GRF12、GRF10、GRF11、GRF5、GRF3、GRF9、GRF13或GRF7。在一些实施方案中，提供了包含本发明的编码GRF转录因子的核酸的植物或其部分，所述核酸产生具有突变的miR396结合位点的mRNA，其中突变的miR396结合位点包含导致增加的水平的mRNA并且任选地破坏miR396结合的突变。在一些实施方案中，植物是玉米植物，任选地，其中玉米植物包含矮小/半矮化表型。在一些实施方案中，植物是小麦植物或其部分，任选地其中产生具有突变的miR396结合位点的mRNA的编码GRF转录因子的核酸可以包含在A基因组、B基因组、D基因组或其任何组合中。在一些实施方案中，包含本发明的产生具有突变的miR396结合位点的mRNA的编码GRF转录因子的核酸的植物或其部分可以包括增加的生长或增加的生长速率。在一些实施方案中，包含本发明的产生具有突变的miR396结合位点的mRNA的编码GRF转录因子的核酸的植物或其部分可以表现出以下表型中的至少一种：增加的分生组织大小、增加的种子大小、增加的生物量、增加的叶大小、增加的根大小、增加的氮利用效率、增加的抗病性、增加的高度和/或增加的节间长度。

在一些实施方案中，本发明进一步提供了与玉米植物中的GRF转录因子中的靶核酸结合的引导核酸，其中靶核酸位于：(a)由5号染色体上的碱基对(bp)位置211773221到碱基对位置211774543定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置211773897到碱基对位置211773957定义并包括这些位置的染色体区间；(b)由5号染色体上的碱基对(bp)位置200344009到碱基对位置200348833定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置200346611到碱基对位置200346671定义并包括这些位置的染色体区间；(c)由5号染色体上的碱基对(bp)位置13817620到碱基对位置13822440定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置138197933到碱基对位置13819853定义并包括这些位置的染色体区间；(d)由4号染色体上的碱基对(bp)位置177151736到碱基对位置177154443定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置177152804到碱基对位置177152864定义并包括这些位置的染色体区间；(e)由1号染色体上的碱基对(bp)位置257245490到碱基对位置257249295定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置257247225到碱基对位置257247285定义并包括这些位置的染色体区间；(f)由9号染色体上的碱基对(bp)位置25722859到碱基对位置25725873定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置25723770到碱基对位置25723830定义并包括这些位置的染色体区间；(g)由6号染色体上的碱基对(bp)位置60351912到碱基对位置60356302定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置60354489到碱基对位置60354549定义并包括这些位置的染色体区间；(h)由5号染色体上的碱基对(bp)位置196192921到碱基对位置196194872定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置196194175到碱基对位置196194235定义并包括这些位置的染色体区间；(i)由10号染色体上的碱基对(bp)位置140393394到碱基对位置140398705定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置140396272到碱基对位置140396332定义并包括这些位置的染色体区间；(j)由4号染色体上碱基对(bp)位置155831622到碱基对位置155833517定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置155832749到碱基对位置155832809定义并包括这些位置的染色体区间；(k)由2号染色体上的碱基对(bp)位置12201898到碱基对位置12208052定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置12204599到碱基对位置12204659定义并包括这些位置的染色体区间；(l)由9号染色体上的碱基对(bp)位置9818327到碱基对位置9820186定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置9819224到碱基对位置9819284定义并包括这些位置的染色体区间；(m)由6号染色体上的碱基对(bp)位置108477686到碱基对位置108480099定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置108478747到碱基对位置108478807定义并包括这些位置的染色体区间；(n)由2号染色体上的碱基对(bp)位置225827712到碱基对位置225832487定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置225830099到碱基对位置225830159定义并包括这些位置的染色体区间；(o)由1号染色体上的碱基对(bp)位置272414778到碱基对位置272420567定义并包括这些位置的染色体区间；(p)由2号染色体上的碱基对(bp)位置199377455到碱基对位置199381799定义并包括这些位置的染色体区间；(q)由7号染色体上的碱基对(bp)位置145016279到碱基对位置145019899定义并包括这些位置的染色体区间；和/或(r)由5号染色体上的碱基对(bp)位置8708791到碱基对位置8711617定义并包括这些位置的染色体区间，其中突变导致mRNA水平增加，和任选地，破坏miR396与GRF转录因子的结合，其中(a)至(r)的染色体区间对应于B73的参考玉米基因组(参见例如表1)。

在一些实施方案中，可用于本发明的编辑系统的序列特异性核酸结合结构域(DNA结合结构域)可以来自例如多核苷酸引导的核酸内切酶、CRISPR-Cas核酸内切酶(例如，CRISPR-Cas效应蛋白)、锌指核酸酶、转录激活因子样效应核酸酶(TALEN)和/或Argonaute蛋白。

在一些实施方案中，序列特异性DNA结合结构域可以是CRISPR-Cas效应蛋白，任选地，其中CRISPR-Cas效应蛋白可以来自I型CRISPR-Cas系统、II型CRISPR-Cas系统、III型CRISPR-Cas系统、IV型CRISPR-Cas系统、V型CRISPR-Cas系统或VI型CRISPR-Cas系统。在一些实施方案中，本发明的CRISPR-Cas效应蛋白可以来自II型CRISPR-Cas系统或V型CRISPR-Cas系统。在一些实施方案中，CRISPR-Cas效应蛋白可以是II型CRISPR-Cas效应蛋白，例如Cas9效应蛋白。在一些实施方案中，CRISPR-Cas效应蛋白可以是V型CRISPR-Cas效应蛋白，例如Cas12效应蛋白。

在一些实施方案中，CRISPR-Cas效应蛋白可以包括但不限于Cas9、C2c1、C2c3、Cas12a(也称为Cpf1)、Cas12b、Cas12c、Cas12d、Cas12e、Cas13a、Cas13b、Cas13c、Cas13d、Casl、CaslB、Cas2、Cas3、Cas3’、Cas3”、Cas4、Cas5、Cas6、Cas7、Cas8、Cas9(也称为Csnl和Csx12)、Cas10、Csyl、Csy2、Csy3、Csel、Cse2、Cscl、Csc2、Csa5、Csn2、Csm2、Csm3、Csm4、Csm5、Csm6、Cmrl、Cmr3、Cmr4、Cmr5、Cmr6、Csbl、Csb2、Csb3、Csxl7、Csxl4、Csx10、Csx16、CsaX、Csx3、Csxl、Csxl5、Csfl、Cs、Csf3、Csf4(dinG)和/或Csf5核酸酶，任选其中CRISPR-Cas效应蛋白可以是Cas9、Cas12a(Cpf1)、Cas12b、Cas12c(C2c3)、Cas12d(CasY)、Cas12e(CasX)、Cas12g、Cas12h、Cas12i、C2c4、C2c5、C2c8、C2c9、C2c10、Cas14a、Cas14b和/或Cas14c效应蛋白。

在一些实施方案中，可用于本发明的CRISPR-Cas效应蛋白可以在其核酸酶活性位点(例如，RuvC、HNH，例如，Cas12a核酸酶结构域的RuvC位点；例如，Cas9核酸酶结构域的RuvC位点和/或HNH位点)中包含突变。在其核酸酶活性位点具有突变并因此不再包含核酸酶活性的CRISPR-Cas效应蛋白通常被称为“死”，例如dCas。在一些实施方案中，与没有突变的相同CRISPR-Cas效应蛋白(例如切口酶，例如Cas9切口酶，Cas12a切口酶)相比，在其核酸酶活性位点具有突变的CRISPR-Cas效应蛋白结构域或多肽可能具有受损的活性或降低的活性。

可用于本发明的CRISPR Cas9效应蛋白或CRISPR Cas9效应结构域可以是任何已知的或后来鉴定的Cas9核酸酶(参见例如SEQ ID NO：234-250)。在一些实施方案中，CRISPRCas9多肽可以是来自例如链球菌属的几个种(例如，化脓性链球菌、嗜热链球菌)、乳杆菌属的几个种(Lactobacillus spp.)、双歧杆菌属的几个种(Bifidobacterium spp.)、坎德勒氏菌属的几个种(Kandleria spp.)、明串珠菌属的几个种(Leuconostoc spp.)、酒球菌属的几个种(Oenococcus spp.)、片球菌属的几个种(Pediococcus spp.)、魏斯氏菌属的几个种(Weissella spp.)和/或奥森氏菌属的几个种(Olsenella spp.)的Cas9多肽。图4A-4B显示了使用Cas9的示例碱基编辑。

在一些实施方案中，CRISPR-Cas效应蛋白可以是源自化脓性链球菌并且识别PAM序列基序NGG、NAG、NGA的Cas9多肽(Mali等人,Science 2013；339(6121):823-826)。在一些实施方案中，CRISPR-Cas效应蛋白可以是源自嗜热链球菌并且识别PAM序列基序NGGNG和/或NNAGAAW(W＝A或T)的Cas9多肽(参见例如Horvath等人,Science,2010；327(5962):167-170,和Deveau等人,JBacteriol 2008；190(4):1390-1400)。在一些实施方案中，CRISPR-Cas效应蛋白可以是源自变形链球菌(Streptococcus mutans)并且识别PAM序列基序NGG和/或NAAR(R＝A或G)的Cas9多肽(参见例如Deveau等人,J BACTERIOL 2008；190(4):1390-1400)。在一些实施方案中，CRISPR-Cas效应蛋白可以是源自金黄色链球菌并识别PAM序列基序NNGRR(R＝A或G)的Cas9多肽。在一些实施方案中，CRISPR-Cas效应蛋白可以是源自金黄色葡萄球菌的Cas9蛋白，其识别PAM序列基序N GRRT(R＝A或G)。在一些实施方案中，CRISPR-Cas效应蛋白可以是源自金黄色葡萄球菌的Cas9多肽，其识别PAM序列基序N GRRV(R＝A或G)。在一些实施方案中，CRISPR-Cas效应蛋白可以是源自脑膜炎奈瑟菌(Neisseriameningitidis)并且识别PAM序列基序N GATT或N GCTT(R＝A或G，V＝A、G或C)的Cas9多肽(参见，例如，Hou等人,PNAS 2013,1-6)。在上述实施方案中，N可以是任何核苷酸残基，例如A、G、C或T中的任何一个。在一些实施方案中，CRISPR-Cas效应蛋白可以是源自沙氏纤毛菌(Leptotrichia shahii)的Cas13a蛋白，其识别单个3’A、U或C的前间隔区侧翼序列(PFS)(或RNA PAM(rPAM))序列基序，其可能位于靶核酸内。

在一些实施方案中，CRISPR-Cas效应蛋白可以源自Cas12a，其是V型聚集规则间隔短回文重复序列(CRISPR)-Cas核酸酶，参见例如SEQ ID NO：214-230、SEQ ID NO：231-233)。Cas12a在几个方面与更知名的II型CRISPR Cas9核酸酶不同。例如，Cas9识别富含G的前间隔区邻近基序(PAM)，它位于其引导RNA(gRNA、sgRNA、crRNA、crDNA、CRISPR阵列)结合位点(前间隔区、靶核酸、靶DNA)的3’(3’-NGG)，而Cas12a识别位于靶核酸的5’的富含T的PAM(5’-TTN，5’-TTTN)。事实上，其中Cas9和Cas12a结合其引导RNA的方向相对于其N和C末端是非常几乎相反的。此外，Cas12a酶使用单引导RNA(gRNA、CRISPR阵列、crRNA)，而不是在天然Cas9系统中发现的双引导RNA(sgRNA(例如crRNA和tracrRNA))，并且Cas12a加工其自身的gRNA。此外，Cas12a核酸酶活性产生交错的DNA双链断裂，而不是由Cas9核酸酶活性产生的平末端，并且Cas12a依赖于单个RuvC结构域来切割两条DNA链，而Cas9利用HNH结构域和RuvC结构域用于切割。

可用于本发明的CRISPR Cas12a效应蛋白/结构域可以是任何已知的或后来鉴定的Cas12a多肽(以前称为Cpf1)(参见例如美国专利号9,790,490，其关于Cpf1(Cas12a)序列的公开内容通过引用并入本文)。术语“Cas12a”、“Cas12a多肽”或“Cas12a结构域”是指包含Cas12a多肽或其片段的RNA引导的核酸酶，其包含Cas12a的引导核酸结合结构域和/或Cas12a的活性、非活性或部分活性DNA切割结构域。在一些实施方案中，可用于本发明的Cas12a可包含核酸酶活性位点(例如，Cas12a结构域的RuvC位点)中的突变。在其核酸酶活性位点中具有突变并因此不再包含核酸酶活性的Cas12a结构域或Cas12a多肽通常被称为deadCas12a(例如，dCas12a)。在一些实施方案中，在其核酸酶活性位点中具有突变的Cas12a结构域或Cas12a多肽可能具有受损的活性，例如，可能具有切口酶活性。图5A-5B显示了使用Cas12a(Cpf1)的示例碱基编辑。

可用于碱基编辑的任何脱氨酶结构域/多肽可用于本发明。在一些实施方案中，脱氨酶结构域可以是胞嘧啶脱氨酶结构域或腺嘌呤脱氨酶结构域。可用于本发明的胞嘧啶脱氨酶(或胞苷脱氨酶)可以是来自任何生物体的任何已知或后来鉴定的胞嘧啶脱氨酶(参见例如美国专利号10,167,457和Thuronyi等人,Nat.Biotechnol.37:1070–1079(2019)，其各自关于其胞嘧啶脱氨酶的公开内容通过引用并入本文)。胞嘧啶脱氨酶可分别催化胞苷或脱氧胞苷水解脱氨为尿苷或脱氧尿苷。因此，在一些实施方案中，可用于本发明的脱氨酶或脱氨酶结构域可以是胞苷脱氨酶结构域，其催化胞嘧啶水解脱氨为尿嘧啶。在一些实施方案中，胞嘧啶脱氨酶可以是天然存在的胞嘧啶脱氨酶的变体，包括但不限于灵长类动物(例如人、猴、黑猩猩、大猩猩)、狗、牛、大鼠或小鼠。因此，在一些实施方案中，可用于本发明的胞嘧啶脱氨酶可以与野生型胞嘧啶脱氨酶约70％至约100％相同(例如，与天然存在的胞嘧啶脱氨酶约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同，以及其中的任何范围或值)。

在一些实施方案中，可用于本发明的胞嘧啶脱氨酶可以是载脂蛋白B mRNA-编辑复合物(APOBEC)家族脱氨酶。在一些实施方案中，胞嘧啶脱氨酶可以是APOBEC1脱氨酶、APOBEC2脱氨酶、APOBEC3A脱氨酶、APOBEC3B脱氨酶、APOBEC3C脱氨酶、APOBEC3D脱氨酶、APOBEC3F脱氨酶、APOBEC3G脱氨酶、APOBEC3H脱氨酶、APOBEC4脱氨酶、人活化诱导脱氨酶(hAID)、rAPOBEC1、FERNY和/或CDA1，任选地pmCDA1、atCDA1(例如，At2g19570)，以及它们的进化形式(例如，SEQ ID NO：206、SEQ ID NO：207或SEQ ID NO：208)。在一些实施方案中，胞嘧啶脱氨酶可以是具有SEQ ID NO：77的氨基酸序列的APOBEC1脱氨酶。在一些实施方案中，胞嘧啶脱氨酶可以是具有SEQ ID NO：78的氨基酸序列的APOBEC3A脱氨酶。在一些实施方案中，胞嘧啶脱氨酶可以是CDA1脱氨酶，任选地是具有SEQ ID NO：79的氨基酸序列的CDA1。在一些实施方案中，胞嘧啶脱氨酶可以是FERNY脱氨酶，任选地是具有SEQ ID NO：80的氨基酸序列的FERNY。在一些实施方案中，可用于本发明的胞嘧啶脱氨酶可以与天然存在的胞嘧啶脱氨酶(例如进化的脱氨酶)的氨基酸序列约70％至约100％相同(例如，70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％相同)。在一些实施方案中，可用于本发明的胞嘧啶脱氨酶可与SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：79或SEQ ID NO：80的氨基酸序列约70％至约99.5％相同(例如，约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％相同)(例如，与SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：79或SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：206、SEQ ID NO：207或SEQ ID NO：208的氨基酸序列至少80％、至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或至少99.5％相同)。在一些实施方案中，可以对编码胞嘧啶脱氨酶的多核苷酸进行密码子优化以用于在植物中表达，并且密码子优化的多肽可以与参考多核苷酸约70％至99.5％相同。

在一些实施方案中，本发明的核酸构建体可以进一步编码尿嘧啶糖基化酶抑制剂(UGI)(例如，尿嘧啶-DNA糖基化酶抑制剂)多肽/结构域。因此，在一些实施方案中，编码CRISPR-Cas效应蛋白和胞嘧啶脱氨酶结构域的核酸构建体(例如，编码包含与胞嘧啶脱氨酶结构域融合的CRISPR-Cas效应蛋白结构域的融合蛋白，和/或与肽标签或能够结合肽标签的亲和多肽融合的CRISPR-Cas效应蛋白结构域和/或与肽标签或能够结合肽标签的亲和多肽融合的脱氨酶蛋白结构域)可以进一步编码尿嘧啶-DNA糖基化酶抑制剂(UGI)，任选地其中UGI可以被密码子优化以用于在植物中表达。在一些实施方案中，本发明提供了包含CRISPR-Cas效应多肽、脱氨酶结构域和UGI的融合蛋白和/或一种或多种编码它们的多核苷酸，任选地其中所述一种或多种多核苷酸可以被密码子优化以用于在植物中表达。在一些实施方案中，本发明提供了融合蛋白，其中CRISPR-Cas效应多肽、脱氨酶结构域和UGI可以与如本文所述的肽标签和亲和多肽的任何组合融合，从而将脱氨酶结构域和UGI募集到CRISPR-Cas效应多肽和靶核酸。在一些实施方案中，引导核酸可以与募集RNA基序连接，并且脱氨酶结构域和/或UGI中的一个或多个可以与能够与募集RNA基序相互作用的亲和多肽融合，从而将脱氨酶结构域和UGI募集到靶核酸。

可用于本发明的“尿嘧啶糖基化酶抑制剂”可以是能够抑制尿嘧啶-DNA糖基化酶碱基切除修复酶的任何蛋白质。在一些实施方案中，UGI结构域包含野生型UGI或其片段。在一些实施方案中，可用于本发明的UGI结构域可以与天然存在的UGI结构域的氨基酸序列约70％至约100％相同(例如，70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％相同以及其中的任何范围或值)。在一些实施方案中，UGI结构域可包含SEQ ID NO：81的氨基酸序列或与SEQ ID NO：81的氨基酸序列具有约70％至约99.5％同一性的多肽(例如，与SEQ ID NO：81的氨基酸序列具有至少80％，至少85％、至少90％、至少92％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或至少99.5％的同一性)。例如，在一些实施方案中，UGI结构域可以包含SEQ ID NO：81的氨基酸序列的片段，其与SEQ ID NO：81的氨基酸序列的连续核苷酸的一部分(例如，10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80个连续核苷酸；例如，约10、15、20、25、30、35、40、45至约50、55、60、65、70、75、80个连续核苷酸)100％相同。在一些实施方案中，UGI结构域可以是与已知UGI(例如，SEQ ID NO：81)具有约70％至约99.5％同一性(例如，70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％同一性，以及其中的任何范围或值)的已知UGI的变体。在一些实施方案中，编码UGI的多核苷酸可以针对在植物(例如植物)中表达进行密码子优化，并且密码子优化的多肽可以与参考多核苷酸具有约70％至约99.5％的同一性。

可用于本发明的腺嘌呤脱氨酶(或腺苷脱氨酶)可以是来自任何生物体的任何已知的或以后鉴定的腺嘌呤脱氨酶(参见例如美国专利号10,113,163，其关于其腺嘌呤脱氨酶的公开内容通过引用并入本文)。腺嘌呤脱氨酶可以催化腺嘌呤或腺苷的水解脱氨。在一些实施方案中，腺嘌呤脱氨酶可分别催化腺苷或脱氧腺苷水解脱氨为肌苷或脱氧肌苷。在一些实施方案中，腺苷脱氨酶可以催化DNA中腺嘌呤或腺苷的水解脱氨。在一些实施方案中，由本发明的核酸构建体编码的腺嘌呤脱氨酶可以在靶核酸的有义链(例如“+”；模板)中产生A→G转换或在靶核酸的反义链(例如，“-”，互补的)中产生T→C转换。

在一些实施方案中，腺苷脱氨酶可以是天然存在的腺嘌呤脱氨酶的变体。因此，在一些实施方案中，腺苷脱氨酶可以与野生型腺嘌呤脱氨酶具有约70％至100％的同一性(例如，与天然存在的腺嘌呤脱氨酶约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％相同，以及其中的任何范围或值)。在一些实施方案中，一种或多种脱氨酶在自然界中不存在并且可以被称为工程化的、突变的或进化的腺苷脱氨酶。因此，例如，工程化的、突变的或进化的腺嘌呤脱氨酶多肽或腺嘌呤脱氨酶结构域可以与天然存在的腺嘌呤脱氨酶多肽/结构域具有约70％至99.9％的同一性(例如，与天然存在的腺嘌呤脱氨酶多肽或腺嘌呤脱氨酶结构域约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.1％、99.2％、99.3％、99.4％、99.5％、99.6％、99.7％、99.8％或99.9％相同，以及其中的任何范围或值)。在一些实施方案中，腺苷脱氨酶可以来自细菌(例如，大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、新月柄杆菌等)。在一些实施方案中，编码腺嘌呤脱氨酶多肽/结构域的多核苷酸可以进行密码子优化以用于在植物中表达。

在一些实施方案中，腺嘌呤脱氨酶结构域可以是野生型tRNA特异性腺苷脱氨酶结构域，例如tRNA特异性腺苷脱氨酶(TadA)和/或突变/进化的腺苷脱氨酶结构域，例如突变/进化的tRNA特异性腺苷脱氨酶结构域(TadA*)。在一些实施方案中，TadA结构域可以来自大肠杆菌。在一些实施方案中，TadA可以被修饰，例如截短，相对于全长TadA缺失一个或多个N端和/或C端氨基酸(例如，相对于全长TadA，可能缺失1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、6、17、18、19或20个N端和/或C端氨基酸残基)。在一些实施方案中，TadA多肽或TadA结构域不包含N-末端甲硫氨酸。在一些实施方案中，野生型大肠杆菌TadA包含SEQ ID NO：72的氨基酸序列。在一些实施方案中，突变/进化的大肠杆菌TadA*包含SEQ ID NO：73-76或209-213(例如，SEQ ID NO：73、74、75、76、209、210、211、212或213)的氨基酸序列。在一些实施方案中，编码TadA/TadA*的多核苷酸可以进行密码子优化以用于在植物中表达。

胞嘧啶脱氨酶催化胞嘧啶脱氨并产生胸苷(通过尿嘧啶中间体)，导致基因组中互补链中的C到T转换或G到A转换。因此，在一些实施方案中，由本发明的多核苷酸编码的胞嘧啶脱氨酶在靶核酸的有义链(例如“+”；模板)中产生C→T转换或在靶核酸的反义链(例如“-”，互补的)中产生G→A转换。

在一些实施方案中，由本发明的核酸构建体编码的腺嘌呤脱氨酶在靶核酸的有义链(例如“+”；模板)中产生A→G转换或在靶核酸的反义链(例如“-”，互补的)中产生T→C转换。

本发明的编码包含序列特异性DNA结合蛋白和胞嘧啶脱氨酶多肽的碱基编辑器的核酸构建体，以及编码其的核酸构建体/表达盒/载体，可以与引导核酸组合使用以用于修饰靶标核酸包括但不限于在靶核酸(包括但不限于质粒序列)中产生C→T或G→A突变；在编码序列中产生C→T或G→A突变以改变氨基酸同一性；在编码序列中产生C→T或G→A突变以产生终止密码子；在编码序列中产生C→T或G→A突变以破坏起始密码子；在基因组DNA中产生点突变以破坏转录因子结合；和/或在基因组DNA中产生点突变以破坏剪接点。

本发明的编码包含序列特异性DNA结合蛋白和腺嘌呤脱氨酶多肽的碱基编辑器的核酸构建体，以及编码其的表达盒和/或载体，可以与引导核酸组合使用以用于修饰靶核酸，包括但不限于在靶核酸(包括但不限于质粒序列)中产生A→G或T→C突变；在编码序列中产生A→G或T→C突变以改变氨基酸同一性；在编码序列中产生A→G或T→C突变以产生终止密码子；在编码序列中产生A→G或T→C突变以破坏起始密码子；在基因组DNA中产生点突变以破坏转录因子结合；和/或在基因组DNA中产生点突变以破坏剪接点。

包含CRISPR-Cas效应蛋白或其融合蛋白的本发明的核酸构建体可以与引导RNA(gRNA、CRISPR阵列、CRISPR RNA、crRNA)组合使用，该引导RNA被设计成与编码的CRISPR-Cas效应蛋白或结构域一起发挥作用以修饰靶核酸。可用于本发明的引导核酸包含至少一个间隔序列和至少一个重复序列。引导核酸能够与由本发明的核酸构建体编码和表达的CRISPR-Cas核酸酶结构域形成复合物，并且间隔序列能够与靶核酸杂交，从而引导复合物(例如，CRISPR-Cas效应融合蛋白(例如，与脱氨酶结构域融合的CRISPR-Cas效应结构域和/或与肽标签或亲和多肽融合以募集脱氨酶结构域和任选地UGI的CRISPR-Cas效应结构域)至靶核酸，其中靶核酸可以被脱氨酶结构域修饰(例如，切割或编辑)或调节(例如，调节转录)。

例如，编码与胞嘧啶脱氨酶结构域(例如，融合蛋白)连接的Cas9结构域的核酸构建体可以与Cas9引导核酸组合使用以修饰靶核酸，其中融合蛋白的胞嘧啶脱氨酶结构域使靶核酸中的胞嘧啶碱基脱氨基，从而编辑靶核酸。在另一个实例中，编码与腺嘌呤脱氨酶结构域(例如，融合蛋白)连接的Cas9结构域的核酸构建体可与Cas9引导核酸组合使用以修饰靶核酸，其中融合蛋白的腺嘌呤脱氨酶结构域使靶核酸中的腺苷碱基脱氨基，从而编辑靶核酸。

同样，编码与胞嘧啶脱氨酶结构域或腺嘌呤脱氨酶结构域连接的Cas12a结构域(或其他选定的CRISPR-Cas核酸酶，例如C2c1、C2c3、Cas12b、Cas12c、Cas12d、Cas12e、Cas13a、Cas13b、Cas13c、Cas13d、Cas1、Cas1B、Cas2、Cas3、Cas3’、Cas”、Cas4、Cas5、Cas6、Cas7、Cas8、Cas9(也称为Csnl和Csx12)、Cas10、Csyl、Csy2、Csy3、Csel、Cse2、Cscl、Csc2、Csa5、Csn2、Csm2、Csm3、Csm4、Csm5、Csm6、Cmrl、Cmr3、Cmr4、Cmr5、Cmr6、Csbl、Csb2、Csb3、Csxl7、Csxl4、Csx10、Csx16、CsaX、Csx3、Csxl、Csxl5、Csfl、Csf2、Csf3、Csf4(dinG)、和/或Csf5)(例如，融合蛋白)可与Cas12a引导核酸(或其他选定的CRISPR-Cas核酸酶的引导核酸)组合使用以修饰靶核酸，其中融合蛋白的胞嘧啶脱氨酶结构域或腺嘌呤脱氨酶结构域使靶核酸中的胞嘧啶碱基脱氨基，从而编辑靶核酸。

本文所用的“引导核酸”、“引导RNA”、“gRNA”、“CRISPR RNA/DNA”、“crRNA”或“crDNA”是指包含至少一个与靶DNA(例如，前间隔区)互补(和杂交)的间隔序列和至少一个重复序列(例如，V型Cas12a CRISPR-Cas系统的重复序列，或其片段或部分；II型Cas9CRISPR-Cas系统的重复序列，或其片段；V型C2c1 CRISPR Cas系统的重复序列，或其片段；例如C2c3、Cas12a(也称为Cpf1)、Cas12b、Cas12c、Cas12d、Cas12e、Cas13a、Cas13b、Cas13c、Cas13d、Casl、CaslB、Cas2、Cas3、Cas3’、Cas3”、Cas4、Cas5、Cas6、Cas7、Cas8、Cas9(也称为Csnl和Csx12)、Cas10、Csyl、Csy2、Csy3、Csel、Cse2、Cscl、Csc2、Csa5、Csn2、Csm2、Csm3、Csm4、Csm5、Csm6、Cmrl、Cmr3、Cmr4、Cmr5、Cmr6、Csbl、Csb2、Csb3、Csxl7、Csxl4、Csx10、Csx16、CsaX、Csx3、Csxl、Csxl5、Csfl、Csf2、Csf3、Csf4(dinG)、和/或Csf5的CRISPR-Cas系统的重复序列，或其片段)的核酸，其中重复序列可以连接到间隔序列的5’端和/或3’端。本发明的gRNA的设计可以基于I型、II型、III型、IV型、V型或VI型CRISPR-Cas系统。

在一些实施方案中，Cas12a gRNA可以从5’到3’包含重复序列(全长或其部分(“柄”)；例如，假结样结构)和间隔序列。

在一些实施方案中，引导核酸可以包含多于一个重复序列-间隔序列(例如，2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多个重复序列-间隔序列)(例如，重复序列-间隔序列-重复序列，例如，重复序列-间隔序列-重复序列-间隔序列-重复序列-间隔序列-重复序列-间隔序列-重复序列-间隔序列等)。本发明的引导核酸是合成的、人造的并且在自然界中不存在。gRNA可以很长，并且可以用作适配体(如在MS2募集策略中)或拉开(hanging off)间隔序列上的其他RNA结构。

如本文所用，“重复序列”是指例如野生型CRISPR Cas基因座(例如，Cas9基因座、Cas12a基因座、C2c1基因座等)的任何重复序列或与由本发明的核酸构建体编码的CRISPR-Cas效应蛋白一起起作用的合成crRNA。可用于本发明的重复序列可以是CRISPR-Cas基因座的任何已知或以后鉴定的重复序列(例如，I型、II型、III型、IV型、V型或VI型)，或者它可以是设计在I、II、III、IV、V或VI型CRISPR-Cas系统中起作用的合成的重复序列。重复序列可以包含发夹结构和/或茎环结构。在一些实施方案中，重复序列可以在其5’端形成假结样结构(即，“柄”)。因此，在一些实施方案中，重复序列可以与来自野生型I型CRISPR-Cas基因座、II型CRISPR-Cas基因座、III型CRISPR-Cas基因座、IV型CRISPR-Cas基因座、V型CRISPR-Cas基因座和/或VI型CRISPR-Cas基因座的重复序列相同或基本相同。来自野生型CRISPR-Cas基因座的重复序列可以通过已建立的算法来确定，例如使用通过CRISPRdb提供的CRISPRfinder(参见Grissa等人,Nucleic Acids Res.35(Web Server issue):W52-7)。在一些实施方案中，重复序列或其部分在其3’端连接到间隔序列的5’端，从而形成重复间隔序列(例如，引导核酸、引导RNA/DNA、crRNA、crDNA)。

在一些实施方案中，重复序列包含、基本上由或由至少10个核苷酸组成，这取决于特定的重复序列以及包含重复序列的引导核酸是加工的还是未加工的(例如，约10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50至100个或更多个核苷酸，或其中的任何范围或值；例如约)。在一些实施方案中，重复序列包含、基本上由或由约10至约20、约10至约30、约10至约45、约10至约50、约15至约30、约15至约约40、约15至约45、约15至约50、约20至约30、约20至约40、约20至约50、约30至约40、约40至约80、约50至约100或更多个的核苷酸组成。

与间隔序列的5’端连接的重复序列可以包含重复序列的一部分(例如，野生型重复序列的5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35个或更多个连续核苷酸)。在一些实施方案中，与间隔序列的5’端连接的重复序列的一部分的长度可以是约5至约10个连续核苷酸(例如，约5、6、7、8、9、10个核苷酸)并且与野生型CRISPR Cas重复核苷酸序列的相同区域(例如，5’端)具有至少90％的序列同一性(例如，至少约90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多)。在一些实施方案中，重复序列的一部分可以在其5’端包含假结样结构(例如，“柄”)。

如本文所用，“间隔序列”是与靶核酸(例如，靶DNA)(例如，前间隔区)(例如，SEQID NO：1-18中任一个的连续核苷酸)互补的核苷酸序列(例如，SEQ ID NO：48-71)。间隔序列可以与靶核酸完全互补或基本上互补(例如，至少约70％互补(例如，约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多))。因此，在一些实施方案中，与靶核酸相比，间隔序列可以具有一个、两个、三个、四个或五个错配，这些错配可以是连续的或不连续的。在一些实施方案中，间隔序列可以与靶核酸具有70％的互补性。在其他实施方案中，间隔核苷酸序列可以与靶核酸具有80％的互补性。在其他实施方案中，间隔核苷酸序列可以与靶核酸(前间隔区)具有85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或99.5％的互补性等。在一些实施方案中，间隔序列与靶核酸100％互补。间隔序列可具有约15个核苷酸至约30个核苷酸(例如，15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30个核苷酸或其中的任何范围或值)的长度。因此，在一些实施方案中，间隔序列可在长度为至少约15个核苷酸至约30个核苷酸的靶核酸(例如，前间隔区)的区域上具有完全互补性或基本互补性。在一些实施方案中，间隔序列的长度为约20个核苷酸。在一些实施方案中，间隔序列的长度为约21、22或23个核苷酸。

在一些实施方案中，引导核酸的间隔序列的5’区域可以与靶DNA相同，而间隔序列的3’区域可以与靶DNA(例如，V型CRISPR-Cas)基本上互补，或引导核酸的间隔序列的3’区域可以与靶DNA相同，而间隔序列的5’区域可以与靶DNA(例如II型CRISPR-Cas)基本上互补，并且因此，间隔序列与靶DNA的总体互补性可能低于100％。因此，例如，在V型CRISPR-Cas系统的引导物中，例如20个核苷酸的间隔序列的5’区域(即种子区域)中的前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个核苷酸可以与靶DNA 100％互补，而间隔序列的3’区域中的剩余核苷酸与靶DNA基本上互补(例如，至少约70％互补)。在一些实施方案中，间隔序列的5’端的前1至8个核苷酸(例如，前1、2、3、4、5、6、7、8个核苷酸以及其中的任何范围)可以与靶DNA 100％互补，而间隔序列3’区中的剩余核苷酸与靶DNA基本上互补(例如，至少约50％互补(例如，50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多))。

作为另一个例子，在II型CRISPR-Cas系统的引导物中，例如20个核苷酸的间隔序列的3’区域(即种子区域)中的前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个核苷酸可以与靶DNA 100％互补，而间隔序列的5’区域中的剩余核苷酸与靶DNA基本上互补(例如，至少约70％互补)。在一些实施方案中，间隔序列的3’端的前1至10个核苷酸(例如，前1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个核苷酸，以及其中的任何范围)可以与靶DNA 100％互补，而间隔序列的5’区域的剩余核苷酸与靶DNA基本上互补(例如，至少约50％互补(例如，至少约50％、55％、60％、65％、70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多或其中的任何范围或值))。

在一些实施方案中，间隔序列的种子区域可以是约8至约10个核苷酸的长度、约5至约6个核苷酸的长度或约6个核苷酸的长度。

如本文所用，“靶核酸”、“靶DNA”、“靶核苷酸序列”、“靶区域”或“基因组中的靶区域”是指植物基因组中与本发明的引导核酸中的间隔序列完全互补(100％互补)或基本互补(例如，至少70％互补(例如，70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更多))的区域。可用于CRISPR-Cas系统的靶区域可以紧邻生物体基因组(例如植物基因组)中的PAM序列的3’(例如，V型CRISPR-Cas系统)或紧邻其5’(例如II型CRISPR-Cas系统)定位。靶区域可以选自紧邻PAM序列定位的至少15个连续核苷酸(例如，16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30个核苷酸等)的任何区域。

“前间隔序列”是指靶双链DNA，并且特别是指与CRISPR重复序列-间隔序列(例如，引导核酸、CRISPR阵列、crRNA)完全或基本上互补(和杂交)的靶DNA部分(例如，或基因组中的靶区域)。

在V型CRISPR-Cas(例如，Cas12a)系统和II型CRISPR-Cas(Cas9)系统的情况下，前间隔序列的两侧是(例如，紧邻)前间隔区邻近基序(PAM)。对于IV型CRISPR-Cas系统，PAM位于非靶标链的5’端和靶标链的3’端(例如，见下文)。

在II型CRISPR-Cas(例如Cas9)系统的情况下，PAM紧邻靶区域的3’定位。I型CRISPR-Cas系统的PAM位于靶标链的5’。没有已知的用于III型CRISPR-Cas系统的PAM。Makarova等人描述了CRISPR系统的所有类别、类型和亚型的命名法(Nature ReviewsMicrobiology 13:722–736(2015))。R.Barrangou(Genome Biol.16:247(2015))描述了引导物结构和PAM。

典型的Cas12a PAM富含T。在一些实施方案中，典型的Cas12aPAM序列可以是5’-TTN、5’-TTTN或5’-TTTV。在一些实施方案中，典型的Cas9(例如，化脓性链球菌)PAM可以是5’-NGG-3’。在一些实施方案中，可以使用非典型PAM，但效率可能较低。

本领域技术人员可以通过已建立的实验和计算方法确定另外的PAM序列。因此，例如，实验方法包括靶向侧接所有可能的核苷酸序列的序列并识别不经历靶向的序列成员，例如通过靶质粒DNA的转化(Esvelt等人,2013.Nat.Methods 10:1116-1121；Jiang等人,2013.Nat.Biotechnol.31:233-239)。在一些方面，计算方法可以包括对天然间隔序列进行BLAST搜索以鉴定噬菌体或质粒中的原始靶DNA序列，并比对这些序列以确定与靶序列相邻的保守序列(Briner和Barrangou.2014.Appl.Environ.Microbiol.80:994-1001；Mojica等人,2009.Microbiology 155:733-740)。

在一些实施方案中，本发明提供了包含本发明的核酸构建体(例如，本发明的编辑系统的一种或多种组分)的表达盒和/或载体。在一些实施方案中，可以提供包含本发明的核酸构建体和/或一种或多种引导核酸的表达盒和/或载体。在一些实施方案中，编码碱基编辑器(例如，包含CRISPR-Cas效应蛋白和脱氨酶结构域的构建体(例如，融合蛋白))的本发明的核酸构建体或用于碱基编辑的组分(例如，与肽标签或亲和多肽融合的CRISPR-Cas效应蛋白、与肽标签或亲和多肽融合的脱氨酶结构域、和/或与肽标签或亲和多肽融合的UGI)可以包含在相同的表达盒或载体上或在与包含一种或多种引导核酸的表达盒或载体分开的表达盒或载体上。当编码碱基编辑器的核酸构建体或用于碱基编辑的组分包含在与包含引导核酸的表达盒或载体不同的表达盒或载体上时，靶核酸可以彼此以任何顺序接触(例如，与其一起提供)编码碱基编辑器或用于碱基编辑的组分的表达盒或载体，例如，在包含引导核酸的表达盒的表达盒之前、同时或之后提供(例如，与靶核酸接触)。

本发明的融合蛋白可以包含与如本领域已知的肽标签或与肽标签相互作用的亲和多肽融合的序列特异性DNA结合结构域、CRISPR-Cas多肽和/或脱氨酶结构域，用于募集脱氨酶到靶核酸。募集方法还可以包括与RNA募集基序连接的引导核酸和与能够与RNA募集基序相互作用的亲和多肽融合的脱氨酶，从而将脱氨酶募集至靶核酸。可替代地，化学相互作用可用于将多肽(例如脱氨酶)募集到靶核酸。

可用于本发明的肽标签(例如表位)可以包括但不限于GCN4肽标签(例如Sun-Tag)、c-Myc亲和标签、HA亲和标签、His亲和标签、S亲和标签、甲硫氨酸-His亲和标签、RGD-His亲和标签、FLAG八肽、strep标签或strep标签II、V5标签和/或VSV-G表位。可以与多肽连接并且存在可以与另一多肽连接的相应亲和多肽的任何表位可用于本发明作为肽标签。在一些实施方案中，肽标签可包含1或2或更多个拷贝的肽标签(例如，重复单元、多聚化表位(例如，串联重复))(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多个重复单元。在一些实施方案中，与肽标签相互作用/结合的亲和多肽可以是抗体。在一些实施方案中，抗体可以是scFv抗体。在一些实施方案中，与肽标签结合的亲和多肽可以是合成的(例如，进化用于亲和相互作用)，包括，但不限于，affibody、anticalin、单抗体和/或DARPin(参见，例如，Sha等人,Protein Sci.26(5):910-924(2017))；Gilbreth(Curr Opin Struc Biol22(4):413-420(2013))，美国专利号9,982,053，其各自关于affibody、anticalins、单抗体和/或DARPin的教导内容通过引用整体并入本文。

在一些实施方案中，引导核酸可与RNA募集基序连接，待募集的多肽(例如脱氨酶)可与结合RNA募集基序的亲和多肽融合，其中引导物与靶核酸结合和RNA募集基序与亲和多肽结合，从而将多肽募集到引导物并使靶核酸与多肽(例如脱氨酶)接触。在一些实施方案中，可以将两种或更多种多肽募集到引导核酸，从而使靶核酸与两种或更多种多肽(例如，脱氨酶)接触。

在一些实施方案中，与亲和多肽融合的多肽可以是逆转录酶并且引导核酸可以是与RNA募集基序连接的延伸的引导核酸。在一些实施方案中，RNA募集基序可以位于延伸的引导核酸的延伸部分的3’端(例如，5’-3’，重复序列-间隔序列-延伸部分(RT模板-引物结合位点)-RNA募集基序)。在一些实施方案中，RNA募集基序可以嵌入延伸部分中。

在本发明的一些实施方案中，延伸的引导RNA和/或引导RNA可以与一个或两个或更多个RNA募集基序(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个基序；例如，至少10至约25个基序)连接，任选地其中两个或更多个RNA募集基序可以是相同的RNA募集基序或不同的RNA募集基序。在一些实施方案中，RNA募集基序和相应的亲和多肽可以包括但不限于端粒酶Ku结合基序(例如，Ku结合发夹)和相应的亲和多肽Ku(例如，Ku异二聚体)，端粒酶Sm7结合基序和相应的亲和多肽Sm7、MS2噬菌体操纵子茎环和相应的亲和多肽MS2外壳蛋白(MCP)、PP7噬菌体操纵子茎环和相应的亲和多肽PP7外壳蛋白(PCP)、SfMu噬菌体Com茎环和相应的亲和多肽Com RNA结合蛋白、PUF结合位点(PBS)和亲和多肽Pumilio/fem-3mRNA结合因子(PUF)，和/或合成的RNA适配体和适配体配体作为相应的亲和多肽。在一些实施方案中，RNA募集基序和相应的亲和多肽可以是MS2噬菌体操纵子茎环和亲和多肽MS2外壳蛋白(MCP)。在一些实施方案中，RNA募集基序和相应的亲和多肽可以是PUF结合位点(PBS)和亲和多肽Pumilio/fem-3mRNA结合因子(PUF)。

在一些实施方案中，用于募集多肽和核酸的组分可以是通过化学相互作用起作用的那些组分，其可以包括但不限于雷帕霉素诱导的FRB-FKBP二聚化；生物素-链霉亲和素；SNAP标签；Halo标签；CLIP标签；化合物诱导的DmrA-DmrC异二聚体；双功能配体(例如，两种蛋白质结合化学物质一起的融合体；例如二氢叶酸还原酶(DHFR)。

在一些实施方案中，经优化以用于在植物中表达的本发明的核酸构建体、表达盒或载体可以与包含相同多核苷酸但尚未针对在植物中的表达进行密码子优化的核酸构建体、表达盒或载体约70％至100％相同(例如，约70％、71％、72％、73％、74％、75％、76％、77％、78％、79％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.5％或100％)。

在一些实施方案中，本发明提供了包含本发明的一种或多种多核苷酸、引导核酸、核酸构建体、表达盒或载体的细胞。

在一些实施方案中，提供了一种在植物或植物部分中编辑内源GRF转录因子基因的方法，该方法包括使植物或植物部分中的GRF转录因子基因中的靶位点与胞嘧啶碱基编辑系统接触，所述胞嘧啶碱基编辑系统包含胞嘧啶脱氨酶和与GRF转录因子基因中的靶位点结合的核酸结合结构域，所述基因与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性、与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性或与SEQ ID NO：19-33、97-120或147-172中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性，其中胞嘧啶脱氨酶在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列中产生至少一个C向T转化，从而产生包含在内源GRF转录因子基因中具有突变的至少一个细胞的植物或其部分。

在一些实施方案中，提供了一种在植物或植物部分中编辑内源GRF转录因子基因的方法，该方法包括使植物或植物部分中GRF转录因子基因中的靶位点与腺嘌呤碱基编辑系统接触，所述腺嘌呤碱基编辑系统包含腺嘌呤脱氨酶和与GRF转录因子基因中的靶位点结合的核酸结合结构域，所述基因与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性、与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性或与SEQ ID NO：19-33、97-120或147-172中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性，其中胞嘧啶脱氨酶在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列中产生至少一个A向G转化，从而产生包含在内源GRF转录因子基因中具有突变的至少一个细胞的植物或其部分。

在一些实施方案中，提供了检测突变GRF(内源GRF转录因子基因中的突变)的方法，该方法包括在植物基因组中检测SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置11、19、21和/或22中的至少一个中的碱基取代。在一些实施方案中，在SEQ IDNO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置11处检测到的取代可以来自G>A。在一些实施方案中，在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置19处检测到的取代可以来自G>A或G>C。在一些实施方案中，在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置21处检测到的取代可以来自G>A或G>C。在一些实施方案中，在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置22处检测到的取代可以来自G>A或G>C。

在一些实施方案中，本发明提供了一种检测内源GRF基因突变的方法，包括在植物基因组中检测SEQ ID NO：34-41的任一个核苷酸序列中的一个或多个。

在一些实施方案中，本发明提供了产生包含内源GRF转录因子基因中的突变和至少一种感兴趣的多核苷酸的植物的方法，该方法包括将包含内源GRF转录因子基因中的至少一个突变的本发明的植物(第一植物)与包含至少一个感兴趣的多核苷酸的第二植物杂交以产生后代植物；以及选择包含GRF转录因子基因中的至少一个突变和至少一种感兴趣的多核苷酸的后代植物，从而产生包含内源GRF转录因子基因中的突变和至少一种感兴趣的多核苷酸的植物。

本发明进一步提供了一种产生包含内源GRF转录因子基因中的突变和至少一种感兴趣的多核苷酸的植物的方法，该方法包括将至少一种感兴趣的多核苷酸引入包含GRF转录因子基因中的至少一个突变的本发明的植物中，从而产生包含GRF转录因子基因中的至少一个突变和至少一种感兴趣的多核苷酸的植物。

在一些实施方案中，本发明提供了一种产生植物的方法，该植物包括内源GRF转录因子基因中的突变和至少一种感兴趣的多核苷酸，该方法包括将至少一种感兴趣的多核苷酸引入包含内源GRF转录因子基因中的至少一个突变的本发明的植物中，从而产生包含GRF转录因子基因中的至少一个突变和至少一种感兴趣的多核苷酸的植物。

感兴趣的多核苷酸可以是可以赋予所需表型或以其他方式修饰植物的表型或基因型的任何多核苷酸。在一些实施方案中，感兴趣的多核苷酸可以是赋予除草剂耐受性、抗虫性、抗病性、增加的产率、增加的养分利用效率或非生物胁迫抗性的多核苷酸。

在一些实施方案中，提供了产生包含内源GRF转录因子基因中的突变并具有矮化或矮小表型的植物的方法，该方法包括将具有内源GRF转录因子基因中的至少一个突变的本发明的植物(第一植物)与具有矮化或矮小表型的第二植物杂交以产生后代植物；以及选择包含GRF转录因子基因中的至少一个突变和矮化或矮小表型的后代植物，从而产生矮化或矮小并且包含内源GRF转录因子基因中的至少一个突变的植物。

本发明还提供了一种控制容器(例如盆或种子盘等)、生长室、温室、田地(例如耕地)、休闲区、草坪和/或路边中的杂草的方法，包括将除草剂施用于在容器、生长室、田地或温室中生长的本发明的一种或多种(多个)植物，从而控制一种或多种植物生长在其中的容器、生长室、温室、田地、休闲区、草坪和/或路边中的杂草。

在一些实施方案中，提供一种对植物(或多个植物)的昆虫捕食的方法，包括将杀虫剂施用于本发明的一种或多种(多个)植物，从而减少昆虫对所述一种或多种(多个)植物的捕食。在一些实施方案中，一种或多种植物可以在容器、生长室、田地、休闲区(例如，运动场、高尔夫球场)、草坪、路边或温室中生长。

在一些实施方案中，本发明提供一种减少植物上的真菌病害的方法，包括将杀真菌剂施用于本发明的一种或多种(多个)植物，从而减少一种或多种(多个)植物上的真菌病害。在一些实施方案中，一种或多种植物可以在容器、生长室、田地、休闲区(例如，运动场、高尔夫球场)、草坪、路边或温室中生长。

本发明的核酸构建体(例如，包含序列特异性DNA结合结构域、CRISPR-Cas效应结构域、脱氨酶结构域、逆转录酶(RT)、RT模板和/或引导核酸等的构建体)和包含它们的表达盒/载体可以用作本发明的编辑系统用于修饰靶核酸和/或其表达。

任何植物或植物部分(或植物的分组，例如，分组到属或更高级分类)的靶核酸可以使用本发明的多肽、多核苷酸、核糖核蛋白(RNP)、核酸构建体、表达盒和/或载体进行修饰(例如，突变，例如，碱基编辑、切割、切口等)，包括被子植物、裸子植物、单子叶植物、双子叶植物、C3、C4、CAM植物、苔藓植物、蕨类和/或拟蕨类、微藻和/或大型藻类。可以如本文所述进行修饰的植物和/或植物部分可以是任何植物物种/品种/栽培品种的植物和/或植物部分。在一些实施方案中，可如本文所述进行修饰的植物是单子叶植物。在一些实施方案中，可如本文所述进行修饰的植物是双子叶植物。

如本文所用，术语“植物部分”包括但不限于生殖组织(例如，花瓣、萼片、雄蕊、雌蕊、花托、花药、花粉、花、果实、花蕾、胚珠、种子、胚胎、坚果、仁、穗、穗轴和壳)；营养组织(例如，叶柄、茎、根、根毛、根尖、髓、胚芽鞘、茎、芽、枝、树皮、顶端分生组织、腋芽、子叶、下胚轴和叶)；维管组织(例如韧皮部和木质部)；特化细胞，例如表皮细胞、薄壁细胞、胆囊细胞、厚壁细胞、气孔、保卫细胞、角质层、叶肉细胞；愈伤组织；和插条。术语“植物部分”还包括植物细胞，包括在植物和/或植物部分、植物原生质体、植物组织、植物器官、植物细胞组织培养物、植物愈伤组织、植物团块等中完整的植物细胞。如本文所用，“芽”是指地上部分，包括叶和茎。如本文所用，术语“组织培养物”包括组织、细胞、原生质体和愈伤组织的培养物。

如本文所用，“植物细胞”是指植物的结构和生理单位，其通常包括细胞壁，但也包括原生质体。本发明的植物细胞可以是分离的单细胞的形式，或者可以是培养的细胞，或者可以是更高组织单元例如植物组织(包括愈伤组织)或植物器官的一部分。在一些实施方案中，植物细胞可以是藻类细胞。“原生质体”是没有细胞壁或仅具有部分细胞壁的分离的植物细胞。因此，在本发明的一些实施方案中，包含本发明的核酸分子和/或核苷酸序列的转基因细胞是任何植物或植物部分的细胞，包括但不限于根细胞、叶细胞、组织培养细胞、种子细胞、花细胞、果实细胞、花粉细胞等。在本发明的一些方面，植物部分可以是植物种质。在一些方面，植物细胞可以是不再生成植物的非繁殖植物细胞。

“植物细胞培养物”是指植物单元(例如原生质体、细胞培养细胞、植物组织中的细胞、花粉、花粉管、胚珠、胚囊、合子和处于不同发育阶段的胚胎)的培养物。

如本文所用，“植物器官”是植物的独特且明显的结构化和分化的部分，例如根、茎、叶、花蕾或胚。

如本文所用，“植物组织”是指组织成结构和功能单元的一组植物细胞。包括植物中或培养物中的任何植物组织。该术语包括但不限于整株植物、植物器官、植物种子、组织培养物和组织成结构和/或功能单元的任何植物细胞群。该术语与以上列出的或本定义所包含的任何特定类型的植物组织结合或不结合使用时，并不旨在排除任何其他类型的植物组织。

在本发明的一些实施方案中，提供了转基因组织培养物或转基因植物细胞培养物，其中转基因组织或细胞培养物包含本发明的核酸分子/核苷酸序列。在一些实施方案中，可以通过使转基因植物与非转基因植物育种并在后代中选择包含所需基因编辑而不是用于产生该编辑的转基因的植物，可以从由转基因组织或细胞发育而来的植物中消除转基因。

可如本文所述进行修饰的植物的非限制性实例可包括但不限于草坪草(例如，蓝草、翦股颖、黑麦草、羊茅草)、羽毛芦苇草、簇毛草、芒草、芦竹、柳枝稷、蔬菜作物，包括洋蓟、大头菜、芝麻菜、大葱、芦笋、莴苣(例如，头、叶、生菜)、黄肉芋、瓜类(例如，甜瓜、西瓜、蜜瓜(crenshaw)、白兰瓜、哈密瓜)、芸苔属作物(例如，球芽甘蓝、卷心菜、花椰菜、西兰花、羽衣甘蓝、无头甘蓝、大白菜、小白菜)、cardoni、胡萝卜、napa、秋葵、洋葱、芹菜、欧芹、鹰嘴豆、欧洲防风草、梨苣、辣椒、马铃薯、葫芦类(例如，西葫芦、黄瓜、绿皮西葫芦、南瓜、倭瓜、蜜瓜、西瓜、哈密瓜)、萝卜、干洋葱、芸菁、茄子、婆罗门参、阔叶梨苣、小葱、苦苣、大蒜、菠菜、青葱、南瓜、青菜、甜菜类(甜菜和饲料甜菜)、甘薯、叶甜菜、辣根、西红柿、萝卜和香料；水果作物，例如，苹果、杏、樱桃、油桃、桃子、梨、李子、梅子、樱桃、柑橘、无花果、坚果(例如，栗子、山核桃、开心果、榛子、开心果、花生、核桃、澳洲坚果、杏仁等)、柑橘类(例如，克莱门氏小柑橘、金橘、橙、葡萄柚、柑桔、橘子(mandarin)、柠檬、酸橙等)、蓝莓、黑覆盆子、波森莓、越橘、红醋栗、醋栗、罗甘莓、树莓、草莓、黑莓、葡萄(葡萄酒和餐桌)、鳄梨、香蕉、奇异果、柿子、石榴、菠萝、热带水果、梨果、香瓜、芒果、木瓜和荔枝，大田作物植物如三叶草、苜蓿、梯牧草、月见草、绣线菊油、玉米/玉蜀黍(田野、甜的、爆米花)、啤酒花、加州希蒙得木、荞麦、红花、藜麦、小麦、水稻、大麦、黑麦、小米、高粱、燕麦、小黑麦、蜀黍、烟草、木棉、豆科植物(豆类(例如，绿色和干燥的)、扁豆、豌豆、大豆)、油料植物(油菜、芥花籽油作物(canola)、芥菜、罂粟、橄榄、向日葵、椰子、蓖麻油植物、可可豆、落花生、油棕榈)、浮萍、拟南芥(Arabidopsis)、纤维植物(棉花、亚麻、大麻、黄麻)、大麻属(例如，大麻(Cannabissativa)、印度大麻(Cannabis indica)和粗麻(Cannabis ruderalis))、樟科(肉桂皮、樟脑)或植物如咖啡、甘蔗、茶和天然橡胶植物；和/或盆栽植物，例如开花植物、仙人掌、多汁植物和/或观赏植物(例如玫瑰、郁金香、紫罗兰)，以及乔木诸如林木(阔叶树和常青树，如针叶树；例如榆树、梣树、橡树、枫树、冷杉、云杉、雪松、松树、桦树、柏树、桉树、柳树)，以及灌木和其他苗木。在一些实施方案中，本发明的核酸构建体和/或编码其的表达盒和/或载体可用于修饰玉米、大豆、小麦、芥花籽油作物、水稻、番茄、辣椒或向日葵。

在一些实施方案中，可如本文所述进行修饰的植物可包括但不限于玉米、大豆、油菜、小麦、水稻、棉花、甘蔗、甜菜、大麦、燕麦、苜蓿、向日葵、红花、油棕、芝麻、椰子、烟草、马铃薯、甘薯、木薯、咖啡、苹果、李子、杏、桃、樱桃、梨、无花果、香蕉、柑橘、可可、鳄梨、橄榄、杏仁、核桃、草莓、西瓜、胡椒、葡萄、番茄、黄瓜或芸苔属的几个种(例如，欧洲油菜(B.napus)、甘蓝(B.oleraceae)、白菜(B.rapa)、芥菜型油菜(B.juncea)和/或黑芥(B.nigra))。

在一些实施方案中，可如本文所述进行修饰的植物是玉米(即，玉米(maize)、玉蜀黍(Zea mays))，任选地其中玉米植物包含矮小/半矮化表型。

在一些实施方案中，可如本文所述进行修饰的植物是小麦(例如，普通小麦(Triticum aestivum)、硬粒小麦(T.durum)和/或密穗小麦(T.compactum))。在一些实施方案中，小麦植物可以包含在其A基因组、在其B基因组和/或在其D基因组中的内源生长调节因子(GRF)转录因子中的至少一个非天然突变。

现在将参考以下实施例描述本发明。应当理解，这些实施例并非旨在将权利要求的范围限制于本发明，而是旨在作为某些实施方案的示例。本领域技术人员想到的示例性方法的任何变化都旨在落入本发明的范围内。

实施例

实施例1

用碱基编辑修饰内源玉米GRF转录因子家族

这个实施例展示了使用DNA碱基编辑来修饰玉米GRF转录因子，从而增加植物高度和穗长度。

选择包含SEQ ID NO：58的间隔序列用于靶向几种玉米GRF转录因子的保守miR396区域的Cas9碱基编辑方法。以与间隔序列100％的匹配靶向GRF6和其他四个GRF基因座，图7。使用农杆菌将编码间隔序列的载体以及与胞嘧啶脱氨酶融合的突变的Cas9效应子引入玉米干切胚胎(DEE)。转化后，我们用标准的下一代测序(NGS)方法测定了再生植物(E0代)在GRF6基因座上的编辑，并在miR396靶位点中鉴定了几个具有碱基编辑突变的家族，图8。我们种植了四个用于下一代性状测试的不同群体，三个来源于在GRF6上显示编辑的自交E0植物(群体7483、7480、7469)，第四个使用来源于植物7469与转化种质回交的种子(群体9284)。这四个群体在受控环境中生长，并将无转基因植物自交并进行性状测试。我们的结果显示E0碱基编辑植物的后代增加了穗长度(图9)和植物高度(图10)。这些结果表明，这些GRF转录因子之一的miRNA396靶位点内的碱基编辑导致增加的玉米植物生长。

实施例2

使用Cpf1框内缺失基因编辑提高玉米GRF6转录因子的mRNA水平。

此实施例展示了使用Cpf1切割核酸酶修饰内源玉米GRF6转录因子GRMZM2G034876(GRF6)以破坏miRNA396作用并增加GRF6mRNA水平。

设计了包含对GRF6靶基因座具有高特异性的SEQ ID NO：55的间隔序列。在这种情况下，只有GRF6以100％的特异性被靶向(图11)。使用农杆菌将编码间隔序列和基于Cpf1的核酸酶的载体引入玉米干切胚胎(DEE)。转化后，我们使用标准NGS方法测定了再生植物(E0代)在GRF6基因座上的编辑，并在miR396靶位点中鉴定了几个具有框内缺失的家族，图12。植物13270具有对于6bp框内缺失的约50％的读数和对于9bp框内缺失的约50％的读数，并被选择用于进一步分析。将植物13270自交，并将后代生长另一代(E1)。在E1中，将含有6bp和9bp缺失的无转基因植物回交到转化种质(01DKD2)。培育来自这个杂交的后代，测定在GRF6处的编辑，并进行性状测试。使用标准定量PCR(qPCR)方法比较杂合6bp缺失、杂合9bp缺失和野生型对照植物的叶组织中的GRF6 mRNA水平，我们观察到两种杂合编辑群体中GRF6 mRNA水平的增加，图13。这个实施例表明，使用基因编辑在玉米GRF6 miRNA396靶位点内进行框内删除可以增加GRF6 mRNA水平，即使编辑处于杂合状态也是如此。没有观察到植物表型的统计差异，包括例如植物高度、穗长度和100粒重。这些结果表明，是其他GRF之一而非GRF6解释了实施例1中的碱基编辑导致的植物高度和穗长度增加。

实施例3

使用Cpf1框内缺失基因编辑增加大豆GRF转录因子的mRNA水平。

此实施例展示了修饰内源性大豆GRF转录因子(GLYMA_01g234400)以破坏miRNA396作用并增加GRF mRNA水平。设计了同时靶向四种不同GRF转录因子(GLYMA_01g234400SEQ ID NO:97,GLYMA_11g008500SEQ ID NO:110,GLYMA_12g014700SEQ ID NO:108,GLYMA_11g110700SEQ ID NO:112)的间隔序列(TGATTCCACAGGCTTTCTTGAAC(SEQ IDNO：251))。使用农杆菌将表达间隔序列和基于Cpf1的核酸酶的载体转化到大豆干切胚胎(DEE)中。使用标准NGS方法测定再生植物在所有四个靶基因座处的缺失。在高读数百分比下鉴定了在基因座GLYMA_01g234400的miR396靶位点中具有6bp框内缺失的植物(CE56546)。从该植物中取样叶组织，并使用标准qPCR方法将所有四个GRF基因座的mRNA水平与野生型对照进行比较(图14)。只有GLYMA_01g234400显示出mRNA水平的增加，这与该基因座的高编辑百分比一致。检测的其他GRF显示相对较低的编辑百分比，并且mRNA水平没有增加。这些结果表明，大豆GRF的miR396靶标内的框内缺失也可以增加该物种的mRNA水平。

表1.V1-V4 B73玉米品系基因模型中提供的玉米GRF转录因子基因名称以及本文使用的相应GRF名称。还提供了GRF基因和miRNA结合位点的染色体位置(基于B73 RefGen_v3)

前述内容是对本发明的举例说明，并不应被解释为对其的限制。本发明由以下权利要求限定，其中包括权利要求的等同物。

序列表

<110> 成对植物服务股份有限公司

Crawford, Brian C. W.

<120> 用于促进植物生长的生长调节因子家族转录因子的突变

<130> 1499.16.WO

<150> US 62/951,593

<151> 2019-12-20

<160> 303

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 22

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 1

ccgttcaaga aagcctgtgg aa 22

<210> 2

<211> 22

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 2

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<210> 3

<211> 22

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 3

ccgttcaaga aagcatgtgg aa 22

<210> 4

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<212> DNA

<213> 玉米

<400> 4

cacatgcacc gcggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aaacgcagct cgcgccccag 60

tc 62

<210> 5

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<212> DNA

<213> 玉米

<400> 5

cacatgcacc gtggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aatccaagac cgcctcctcg 60

cc 62

<210> 6

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<212> DNA

<213> 玉米

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cacatgaacc ggggacgcca tcgttcaaga aagcatgtgg aaggccagcc tggccatgcc 60

gc 62

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cacatgaacc ggggacgcca tcgttcaaga aagcatgtgg aagaccagcc tggccatgcc 60

gc 62

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<213> 玉米

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cacataaaac gtggttgcca ccgttcaaga aagcatgtgg aaggccgaaa ggcaacaccg 60

ac 62

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cacatgcacc gcggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aagcgcagct cgtgcccccg 60

cc 62

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<213> 玉米

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cacatcaata ggaaccgcca ccgttcaaga aagcctgtgg aaaaccaacc tagaaaggcc 60

ac 62

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<213> 玉米

<400> 11

cacatccacc gcgggaagag ccgttcaaga aagcctgtgg aagtgacctc ccccgccgcc 60

ta 62

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cacatgcacc ggggcaagaa ccgttcaaga aagcctgtgg aaatgtcctt ggccacgccg 60

gc 62

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cacattcacc gcgggaagag ccgttcaaga aagcctgtgg aagtgacctc ctcccccgcc 60

gc 62

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cacatgcacc gcggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aagcgcagct cgcgcccccg 60

cc 62

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<213> 玉米

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cacatgcacc ggggcaagaa ccgttcaaga aagcctgtgg aaatgtcctt ggccacgccg 60

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cacgtccacc gcggccgcgg ccgttcaaga aagcctgtgg aagccgccgc ggcaccggcg 60

gc 62

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cacatcaaca gaaaccgtca ccgttcaaga aagcctgtgg aaaatcaacc taagaagacc 60

ac 62

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cacatgcacc gtggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aatccaagac cgcctcgtcg 60

tc 62

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<212> DNA

<213> 玉米

<400> 19

gagcgaagca aagcacatca cgagcccagc ctgcgcctgc ggagggaggg ggctcattaa 60

agagggggcg cgagcgcgac cggccgcggg gagcaagcag cgcgcgagag agacaggttg 120

agatggcgat gccgtatgcc tctctttccc cggcaggcgc cgccgaccac cgctcctcca 180

cagccacggc gtccctcgtc cccttctgcc gctccactcc gctctccgcg ggcggcgggc 240

tgggcgagga ggacgcccag gcgagcgcga ggtggccggc cgcgaggccg gtggtgccgt 300

tcacgccggc gcagtaccag gagctggagc agcaggcgct catatacaag tacctggtgg 360

cgggcgtgcc cgttccgccg gatctcgtgg ttccaatccg ccgcggcctc gactccctcg 420

caacccgctt ctacggccaa cccacactcg ggtacggacc gtacctgggg aggaaactgg 480

atccggagcc cggccggtgc cggcgaacgg acggcaagaa gtggcggtgc tccaaggagg 540

ccgccccgga ctccaagtac tgcgagcgcc acatgcaccg cggccgcaac cgttcaagaa 600

agcctgtgga aacgcagctc gcgccccagt cccaaccgcc cgccgccgca gccgtctccg 660

ccgctccgcc cctggcagcc gccgccgccg ccaccaccaa cggcagcggc ttccagaacc 720

actctctcta cccggccatc gccggcagca ctggtggtgg aggaggagtt ggcgggtccg 780

gcaatatctc ctccccgttc tcctcgtcga tggggggatc gtctcagctg cacatggaca 840

gtgctgccag ctactcctac gcagctcttg gtggtggaac tgcaaaggat ctcaggtaca 900

acgcttacgg aataagatct ctggcggacg agcacaacca gctgatcgca gaagccatcg 960

actcgtcgat agagagccag tggcgcctcc ccagctcgtc gttcccgctc tcgagctacc 1020

cacatctcgg ggcgctgggc gacctgggcg gccagaacag cacggtgagc tcgctgccga 1080

agatggagaa gcagcagccg ccctcgtcct tcctagggaa cgacaccggg gccggcatgg 1140

ccatgggctc cgcctccgcg aagcaggagg gccagacgct gcggcacttc ttcgacgagt 1200

ggcccaaggc gcgggactcc tggccgggcc tctccgacga gaccgccagc ctcgcctcgt 1260

tccccccggc gacccagctg tcgatgtcca tacccatggc gtcctccgac ttctccgtgg 1320

ccagctccca gtcgcccaac gatgactaat ggtgcgtgga tcgtcgcgtt ctggcccttt 1380

gtctgtcttc cctccagtcc tccacccacc gcgcagtagt agctgcggaa acagcccatg 1440

ctcctgtata tttgtcggtc attttccgtg tcagatctgt gtaccaaacc aagcggcggc 1500

ggccgtcgtc tctccccgcc tccgcctcgc ctcatgtggg tgggtgaaca tgagaccgtt 1560

ttgcttaggc tcaaagcttt gtgtgacccc actgatcggt tgtctgcgta ctacctgaaa 1620

gcctgctgct tttgtagcat tactgt 1646

<210> 20

<211> 1718

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 20

aacccccacc tgaccttctc ttcctccctc ccccgaccgc ctgtctgtcc tccgcgcatc 60

cgttctctat cgaaagggag gaggaggagc gcgcgggagt gggctggggg cccaccgatg 120

ctgagctcgg cgtcctcggc cggggcggcc atggggatgg gcggcgggta ccaacaccag 180

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gagctggagc agcaggcgct catctacaag tacctcatgg ccggcgtccc cgtcccgccc 300

gatctcctcc gccccgcccc ccacgccgcc gccttctcct tcgccagccc cgccgcgtcg 360

cccttctacc atcaccacca ccaccacccg tccctgagtt actacgccta ctacgggaag 420

aagctggacc cggagccgtg gcggtgccgc cgcaccgacg gcaagaagtg gcggtgctcc 480

aaggaggcgc accccgactc caagtactgc gagcgccaca tgcaccgtgg ccgcaaccgt 540

tcaagaaagc ctgtggaatc caagaccgcc tcctcgccgc cccagctgtc caccgtcgtc 600

accaccacca ccacccggga ggccgccgcc gcgacgcccc ttgagtccct cgcgggggcg 660

gggggtaagg ctcacggcct gtccctcggc ggcggggctg gctcgtcgca cctcagcgtc 720

gacgcttcga acgctcactt tcgctatggc agcaagtacc ctcttggagc taaatccgat 780

gctggcgagc tgagcttctt ctcaggagca ccagggaact ccaggggctt caccattgat 840

tctccagcag ataactcttg gcactccctg ccatccaacg tgcccccgtt tacactgtcc 900

aagggcagag actctggcct cctgcccggt gcctactcct actcccacat tgaaccaccg 960

caggtgctcg gccaggtcac catcgcctcg ctgtcacagg accaggagcg ccaccagtcg 1020

tcgttcagca gcggcggggc cggcgctggt ggattgctgg ggagcgtgaa gcaggagaac 1080

cagccgctga ggcccttctt cgacgagtgg cctgggacgc gggactcgtg gtcggagatg 1140

gacgacgcga ggtccagtag gacctccttc tcgacgaccc agctctccat ctccattccg 1200

atgcccagat gtgattgaga acgaagctcg tgcgcggcca gtaggtggcg ttgtcgcatg 1260

acgcgcaccc agcatcgcgc tcgctgctag cgagccaccg tcacccggtg attgatgccc 1320

tcatcctagc tatttgtttc gctgaatcgc attaagaaca gaactctatg taagagcagg 1380

atccttcctc atgtatcaat gggggcaatg aactccattc tgtttctatg gttgtagtac 1440

cgaccatgct ttgtatttgt tgtacccaga ccgagaatga aaaccgccca gtcgtcaggc 1500

gttgtcgtcg ctgcatcaga tgatccaagt gtattgtgtg ctttccaggc tgtgtaagat 1560

ctgatggcga atctgttact gcagtgtagg tgtgtagcat ctgtggtatg gtaccttttg 1620

ttgtgctact ggatctggat tgatgcaaaa tctggtgctg ccgtaggccc ctcttccttt 1680

tctctactgc tataataata atacatcttt tttttatg 1718

<210> 21

<211> 3536

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 21

accgagcaca catacacact caccagcagg cagcagcagc tagccaagct ataccactag 60

aaccagagca caactcaaag caatgccgcc gcctcctcct cctccgcccc actcccacgc 120

ttcccatccc gcgccgcatg gacgcgagca gcactagcgc gggggcacac agcacggcga 180

gcgggcgggg gcgcgacgat ggacctgggc gggtcggtgg tgatggacgc gggcgcctcg 240

gagctgggcc tgctcggcgg cggatctagc aggctgctca agcacgggcg ggggcccaat 300

gcggcggggg gagacgacga cgtgtggggc ggcggcaggg ccaagcagcc caggacaggg 360

acagcgcccg tcgtcgccgg ggacgtggcg gctgccacca aggcggcggc ggcgccgttc 420

ctgctgggct cgtgcagtcc cggccacggc ggggagcaga tgctcagctt ctcgtccgcc 480

gccgccgccg ccgcggcctc gtgcgcctcc tccaccgctg cggctgatgg cggcggggcc 540

atgccgctgt actacgggac cccggcctct tgctcaggtg agcgcgagca cggcgacggc 600

gtacccgtgc tactgcttgt tgtggcggtg ccgcttgctg ctgcaaagct tacttctttt 660

tttcccgttg cttgttgatt ggattttggt gattgaaaag cttgctatcc acttcttctc 720

cagtattatt gcttttcggt tcgattcgat tcaccctgct ttctctcttt gctcttggtc 780

tcgtagctac agatttattt atttttactt ggttatgtct actgactgac tactgcttat 840

ccttaagctg atctgtgccc tcttccgttt cttctcctct tcttctttct tctagcttca 900

gttatttagt gcatctactc tagattcatg gggttttcat gaccagtgtt gactctttta 960

acctgccaat gatctttgta tggggttttc ctctctcttt tcgtcttctg gagatttaga 1020

ttagtgacga ctgtaaaagt tcttccacct ctggaaaaaa gaaatggttt taaatagtat 1080

tttaaaaaaa gctttattga atcatccgtg atatgtatcg acataagttt gcacttcttt 1140

ttgctgacat ccgccaacgc ttttcttgtc ctcaacggcg ccgcgatcgt gtggattcct 1200

ttttgtcacg ccgcctgctg ataatacgac tactagttct tattagagga agaatgaaaa 1260

agaatggcgt gatctacctc ggacctatac cttcacccct ttctcactca gaaacctaaa 1320

aaccaagaaa cagctaaaag agcatgaatg cacgcaagaa agtctcaaga atacaatgga 1380

gcctcgcgat tcaagttcac tgtcgggacc caacagtgtg gtccttggtc ggcttgctat 1440

ggacatcacc tataaatctg tgctgcttat caggtttctg atccttgcat gcaggcgctc 1500

cgttccaggt ttttgtgtct ttttttgctt gccttttatc ctgccctagg atcgtgttta 1560

ggaaacgctt gcatctcggc ggtcatctct atgaagcagt acacatgttt ttggctgcgc 1620

cttgttggct tccaccgttt tgctgctcat ctctcctaac tatgcctgcc tgtttgctcc 1680

ccgcaggatt gagctcggtg agcttgagca ccagcatgca gggggcaatg gccagggtga 1740

gggccccatt cacgccgtcc cagtggatcg agctcgaaca ccaggccctg atctacaagt 1800

acctggccgc gaacagcccc atacctcaca gcctcctcat ccccatcagg aggagcctcg 1860

cagcgtctcc ctacccgcct tcatacttcg gcacgagcac attggggtgg ggctctttcc 1920

agctgggcta ctccggcaat gcggatctgg agcctgggcg gtgccgccgg acggacggca 1980

agaaatggcg gtgctccagg gacgcggtcg ccgaccagaa gtactgcgag cgacacatga 2040

accggggacg ccatcgttca agaaagcatg tggaaggcca gcctggccat gccgcgaaag 2100

ccatgtccgc ggtggcggcg gcggctgctg ctgctgccca gcctgctgct ctggccggcg 2160

ccggagctcc tgctgctggc ctcactgtca atcagcacca gctgccggcg aagagctacg 2220

ccacgggtgc gactgaccct tgctctctgc aatataacag ggaactggtg aacaaacaga 2280

atgagagcga aaacatgcag gactccgaca acctctcgat gctgacttcc atgaacacag 2340

gaaacacagg cagcgtgttc ccattctcga aacaaaacac caatcctttt gaagtgacca 2400

gctcaaggct agagttcggc ctcgtttcat cggattcact gatgagttcc cctcacagtt 2460

ccttggagaa cgtcaacctg ctcggctcac agagtatgaa cgaacaccag aacccagcct 2520

ccctgcaaca cttcgtggac tggcccagga cgcctgccca gggaggcctt tcatggcccg 2580

aagctgaaga catgcaggct cagaggtcac agctctccat atctgctccc atggcatcct 2640

ccgagctatc gtcggcctcc acatccccca tccacgagaa gctgatgctg tcgcctctga 2700

agctgagccg cgagtacagc ccgactggtc tcggcattgc ggcgaacaga gacgaggcta 2760

gccagctaga agcaacctgg gcgacgatgt tccgtgactc ttcgatgggc ggtccgttgg 2820

gggaggttct ggccaagaac ggcaacgtgg aagcgagaaa ttacctgtcg gcgcctctga 2880

accttctcac cgactactgg gattcaagcc acgggatgga gtcctcccct gtgggcgttc 2940

tgcagaagac gaccgccttc ggatcggtct ccagcagtac agggagcagc cctagggttg 3000

agaaccacgg cgcctacgac ggtttcggca acctgcggga tgatctcggc tcaattgtag 3060

tgcgccatcc aagcatccgc cttgtgtgag ctttctgagt tctgaccatg gaaaactgca 3120

acaagacggc ggcccgcagc catagaagtg ggcatatggg ctactatgct aatcctcaaa 3180

gcgtgagggg ggggcattta cctcgtagtt tgtcatttga gactgatctc ctgttttttg 3240

tcacttcagt tcttcttttg cttccctttt taacttggct ttgtaacttt caccttcctt 3300

ggatcgtgaa aagcgctgtg gtgtgtggtg tggatggatt tggtgcgccg ctgatgcata 3360

tcatcatgtg atagaagaag ccagtatccg tcgaggatta ctgcgagtat cgcctgtttg 3420

ttgttcatac gtcatactgc tgcactgcac ttcactgttt gtgtgcccgt tgttgcattg 3480

tatggttcgg ttatattaat ttacaaacag gtcgtgaggc tgcacattta gattcg 3536

<210> 22

<211> 2086

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 22

cgagcaccgc gcgcgcacag acacacactc accagcaggc agcagctagc tagctctcta 60

gcaacgagca caaaacgagc aatgccgcta gttccgtccc actccctcgc ttcccatccc 120

gcaccccatg gaagggagca gcactagcta gcgtgggaca gggcggggtg gtgtcgtggt 180

gatggaagcg ggcggcggcg cctcggaact cggcctgctc ggcgccggat ctggcaggct 240

gctcaagcac gggcggggcg acgcggcggg gggagaggac cacgggtggg tcgtcgtcgt 300

cggcggcggc ggcagggcca agcaggccag gaccgcgtcc gtcggcaccg gggacgcggc 360

ggccacggcg gccgtgccgt tcctgctggg ctcctgcggc ggccccggcc acggcgggga 420

acggatgctc agcttctcgt ccgccgccgc cgccgccccg gatgatggcg gtgccatgcc 480

gccgctgtac tacgggaccc cggcctcttg ctcaggattg atgagctcgg cgagggtgag 540

aggccccttc acgccgccgc agtggatcga gctggagcac caggccctga tctacaagta 600

cctgtccgcg aacagccccg tacctcacag cctcctcgtc cccatcagga ggagcgggag 660

cctcgcatcg tctccctacc cgcctcccta cttcggcacg agcacattcg ggtggggctc 720

cttccagctg ggctactccg gcaatgcgga tctggagcct gggcggtgcc gccggacgga 780

cggcaagaag tggcggtgct ccagggacgc ggtcgccgac cagaagtact gcgagcgaca 840

catgaaccgg ggacgccatc gttcaagaaa gcatgtggaa gaccagcctg gccatgccgc 900

gaaagccatg tccgcggtgg ccgtggcggc tgctgctgct gctgctaccc agcatgctgc 960

tgctctggcc ggcgccggag ctactgctgc tgctggcctc gctgtcaatc ggcaccggca 1020

gccggggaag agctatgcca cgggtgcgac tgatccatgc tctctgcaat atagcaggga 1080

actggcgaac aaactgtcga acgagagcga aaacatgcag gactctgaca atgtctcgat 1140

gctgacttcc atgaacacag gaaacactgc aggcagcgtg tttccgttct cgaaacagaa 1200

cactgctctt ttcgaagtga gcagctcaag gccagagttt ggccttgttc catcggattc 1260

actgacgagt tcacctcata gttccttgaa gagtgtcaaa aatctgctca gctcacggag 1320

tctgagtgag caccagagct ccgcctccct gcaacacttt gtggactggc ccaggacgcc 1380

acctgcccag ggaggtcttt catggcccga ggcagaggac atgcccagag ctcagaggtc 1440

ccagctctca gtatccgctc caatggcatc ctccgagcta tcatcggcct ccacatctcc 1500

catccacgac cacgagaagc tgattctgtc acctctcaag ctgggccgcg agtatacccc 1560

atctggcgtc gtcagcgctg cagcgaacag atacgaggtt agccagctag aagcgacctg 1620

ggcgacgatg ttccgcgact cttcgacggg cggcccgttg ggggaggttc tggccaagaa 1680

caacagcaac gcggaagcaa gaggttgccc gtcggcggcg ccacctctaa ccgactacta 1740

ctgctgggat tcaggccacg gcatgcagtc gtcccccgtg ggagttctgc agaggacgac 1800

cgccttcgga tcggtctcca gcagcacggg cagcagccct agggtcgaga accacggcgc 1860

ctgctgcgat ggtaccagca acctgatgga tgatctcggt tcagttgtag tgagacatcc 1920

cagcatccgc ctcttgtgag cccgctgggt tctggccatg gaaaaagcgt gagggggagc 1980

atttaccacg tagtttgtca tttgagactg atctcctgtt tctgtcacct gagttcttct 2040

tttgttgccc ttatacctgg ctttgtaact ctcaccttcg ttggat 2086

<210> 23

<211> 2328

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 23

aggggcaagc tataattttg ttctgttgtc cagaacagcc aacaggtgtg gggctgtggg 60

cattcaattg cttttgcttc ctccgttccc ccatctggcc atctcccctt cccctgctcc 120

cccgaagcag caagccagcc tgcccacccg cagccatcac ctccgccgct ctccaccatg 180

aatcccatcc accagcacgg catcgtaccc aatccttcgt gactgttgcc tccgcgcatc 240

tccgggagca atggaaggag gccgagatgt gttcttaggt gcggcggcaa gggcgccgcc 300

gccgccgccg tcttgcccgt ttcacggatc cgctaccgcc acccgctccg gtggagcgca 360

gatgctcagc ttctcctcca atggcgtagc agggttgggt ctgtgctcag gtgccagcaa 420

gatgcagggt gtgttgtcga gggtgaggag gcccttcact ccgacgcagt ggatggagct 480

ggagcaccag gccctgatct acaagcactt cgctgtgaat gcccctgtgc cgtccagctt 540

gctcctccct atcaaaagaa gcctcaatcc atggagcagc cttggctcca gctcattggg 600

atgggcacca tttcgttccg gctctgctga tgcagaacca ggaagatgcc gccgcacaga 660

tggcaagaag tggcggtgct ctagagatgc tgtcggggac caaaaatact gtgagcgaca 720

cataaaacgt ggttgccacc gttcaagaaa gcatgtggaa ggccgaaagg caacaccgac 780

cactgcagat ccaaccatgg ctgtttctgg tggttcattg ttgcacagcc atgctgttgc 840

ttggcagcag cagggcaaaa gctcagctgc taatgtgact gatccattct cactagggtc 900

caacaggtga agtcacctga tcgtctgatc ctgcattgtt atactcattt ctgccactta 960

agtttgtgaa tttttatttt ctcaacattt ttttctcgaa cacgcaggag aactgtgcat 1020

catatattaa aagaagtaaa aaagtctaaa gaagaccaaa atctgccata agaggcagaa 1080

agagatagga agtgggaggg gcaccagcac actatatttt ctcaacataa atgacaatct 1140

atggttgata catgtgccag tctagcagtc agggttcagg acgtaccaaa acattgaaaa 1200

tgttatatcc tttagacatt gaaattttgt ccatagccat tcatagttga aaattttgtt 1260

cttgatttct ttcaactggt cagtgatttc ttcatgtaac ctgtcattga tgcattccat 1320

cttttgcccc gtgcccattc ctatatataa gattttatta ttatgtttgt ttgttcaaac 1380

aattatggta agcatgtgca aagaaaggca gtaggaagca ctataaataa ctgaaatgat 1440

atggtactta tgtcagtaca aactttagag ataggtgaat tctgttcatg atgacccttt 1500

caaattttga cgacttacta tagtcagcag tgaaagaaaa acaggacagt gtttcctttt 1560

ccttccatga acttgaaatg ttgactctgg tttgcaggaa tttgctggat aagcagaatc 1620

taggtgacca gttctctgta tccacttcca tggactcctt tgacttctca tcatcacatt 1680

cttccccaaa ccaagccaaa gttgcatttt caccggtggc catgcagcac gaacatgatc 1740

agctgtatct tgtgcatgga gccggcagct cagcagaaaa cgttaacaag tctcaggatg 1800

gtcagctgct agtctcgagg gaaacaattg acgacggacc tctgggcgag gtgttcaagg 1860

gcaagagttg ccagtcagca tccgcagaca tcttaactga ccattggact tcgactcgtg 1920

acttgcgtcc tccaaccgga gtcctacaaa tgtctagcag caacacagtg ccagcagaga 1980

atcacacgag taacagtagc tatctcatgg cgaggatggc gaattctcag accgtcccaa 2040

cactccactg agtgttcatc aggctggtct ttgttgggac cacaaaataa ctgaagccat 2100

gttgatgtcc tgagtttgct gatactaggt tttcagtcga gtcttgtaac tcctgtttta 2160

gagctgttat atgttcacgt catgtcgcct ttcattttcg gttcattcag atgggtgttc 2220

taataatttc tttccttctt acctgtgaag gatttgagtt ccaatctgag acgtgggttt 2280

gttctaactt ggaggtattt atgaatatta ggcacttctg atttccat 2328

<210> 24

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<212> DNA

<213> 玉米

<400> 24

gagagagaga gaactagaag catatatggc gatgcccttt gcctccctgt ctccggcagc 60

cgaccaccgc ccctcctccc tcctccccta ctgccgcgcc gcccctctct ccgcggtggg 120

agaggacgcc gccgcgcagg cgcaacagca gcagcagcac gctatgagcg gcaggtgggc 180

agcgaggccg ccggcgctct tcaccgcggc gcagtacgag gagctggagc accaggcgct 240

tatatacaag tacctcgtcg ccggcgtgcc cgtcccgccg gacctcctcc tccccctacg 300

ccgaggcttc gtctaccacc aacccgcccg taagcaagca cggcccccgc gccgcctccg 360

caccccttca cactcacacg cacgtttaac cgcttttgca ctgcacaacc ccggccgccc 420

ggcggcggcg tccgtgcctt gatctggttg tttactcgga tcgagggatt cagatgtcct 480

ctccgtccgt ttgttaatcg gctccggtca tttcttaatc tcgtcctgga ttcggtcacg 540

aaaagctaga ggtcaagatt ttgctctcga ttactatatc cttgcctcat gttctaatgg 600

agtttatttt attggtctga tgtgattaga taggatgcta gccaggcttg tctccggcca 660

aaagcggcgg tttagtttat tgatgattgc ttctttcctt gggggattta ttcctgtctg 720

gttgttggga gcctaaccac gctcctattg ctgctgcggt ttactaacca tctgcgccag 780

tacacctact ccatggaccc caaaatacag ttcttccaac cattcccccc ctccatctgc 840

tttctcgcgg gcaaataaaa acgtgtagaa cgacggtgta gtaggcagat ctactccttg 900

tgccgctacg ctagcccgct accgaagatc gggcccgttt caaccggttc gttggtctga 960

gcggagctaa gatggggcgc atttcatttt ttggtccttt cgtctgattg gagaagtgcc 1020

cattccggta tcgctccccg gcctccaaat acgcaccgac acagaacgtg ttcgtacgca 1080

cgtacacatg gtatgcgcac cgtgctgctg gccatagccg ttgactcacc gggattcact 1140

cctctctcgc gtgtgtgtgt gtggcttcct tgcagttggg tacgggccct acttcggcaa 1200

gaaggtggac ccggagcccg ggcggtgccg gcgtacggac ggcaagaagt ggcggtgctc 1260

caaggaggcc gccccggact ccaagtactg cgagcgccac atgcaccgcg gccgcaaccg 1320

ttcaagaaag cctgtggaag cgcagctcgt gcccccgccg cacgcccagc agcagcagca 1380

gcagcaggcc cccgcgccca ccgctggctt ccagagccac cccatgtacc catccatcct 1440

cgccggcaac ggcggcggcg gcggcggggt aggtggtggt gctggtggcg gtggcacgtt 1500

cggcctgggg cccacctctc agctgcacat ggacagtgcc gctgcttacg cgactgctgc 1560

tggtggaggg agcaaagatc tcaggtactc tgcctacggg gtgaagtctc tgtcggacga 1620

gcacagccag ctcttgtccg gcggcggcgg catggacgcg tcaatggaca actcgtggcg 1680

cctgttgccg tcccaaaccg ccgccacgtt ccaggccaca agctaccctc tgttcggcgc 1740

gctgagcggt ctggacgaga gcaccatcgc ctcgctgccc aagacgcaga gggagcccct 1800

ctccttcttc gggagcgact tcgtgacccc gaagcaggag aaccagacgc tgcgcccctt 1860

cttcgacgag tggcccaagt cgagggactc gtggccggag ctgaacgagg acaacagcct 1920

cggctcctcg gccacccagc tctccatctc catccccatg gcgccctccg acttcaacac 1980

cagctccaga tcgccgaatg gaataccgtc aagatgaacc tgagtaacca tgcggacccc 2040

aacatctcag agctgacgac tctttgctgc tggcctggcc tcatcgtacc ttgaggcgtc 2100

aaggaatact tcattaccac tagtatcatg ctcctggatt ttcgaacaat atatatatgc 2160

ttatgtaccg ctatttctct catcttttac acttctttac ccgtttggaa ttgtatgttc 2220

tgcgtggcac ggttgttcat ttgacctttt tggatttgat tgaaagctcc gtttcttgc 2279

<210> 25

<211> 1790

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 25

ccaccacaca aacggacaaa cccctgcctc ccaccagaaa agcaagcaga ccacacccac 60

ccgcctctaa accaaccagc ctgtccccat tccccgtccc cggcgatgca cgccagcatc 120

cactccctcc cgtcagcctc ttcttctccc cctgatgagc gctgagttct gtgctgccgc 180

tgctggtgct gtggccatgg agctcggagt cggggatgtg atggggctgc agcaaggcat 240

cgccgccgcc accgggccat cgtccggaga cagcgacctg ggtcttctca agcgagcagg 300

cctcgcccag gcagccacct cctacccctc ccctttcctc gaccaacaga agatgctcag 360

gttctccaag gcggcggcgg ctcacacgtc gccctcaggc ctagacttcg gaggaggccc 420

gagcgagcag gctttcctgc tgtccaggac caagcggccg ttcactccgt cgcagtggat 480

ggagctggag caccaggctc tcatatacaa gtatctcaat gccaaggccc ccataccttc 540

cagcctgctc gtttccatca gcaagagctt caggtcatcc aacagagagc ttgacagact 600

ctctaacgca gtgagctgga ggcctcttta ccaaggctac gcaaacgcag actccgaccc 660

agaacctggg aggtgccggc ggacagacgg aaagaagtgg cggtgctcca aggaggcgat 720

gcctgatcac aagtactgcg agcgccacat caataggaac cgccaccgtt caagaaagcc 780

tgtggaaaac caacctagaa aggccaccaa ggaggtgact accgctgctg ctggctcgtt 840

gccgtgtgcc gggccacaag gtagcttgaa gaaggcaaaa gttaatgact ccaagccagg 900

cactggcagc tattggacag atagcttaaa caggacaatg ctgagcagag agaaggcaaa 960

caaaccgacg gacgacgagt ctttgctgct tagttcgacg aagaacagtc agcccacctt 1020

gtccctgctc actcaactga agcagcagaa caaaccagat aagttaggtc ccacaccgga 1080

aaatgagccg aactcggaca cgatgttgaa agcctggggt ggcagccacc acaagagcat 1140

ttcctccaca cagcgccatg acgctgaatc cctccaatca gtcctccaaa atttcagcct 1200

agcccagaat gacaggttgg agtcagaaaa gaacagatat tctgattccg tgctagtctc 1260

atcggctttc tattctgcag acggtccaca aactacctgc cttacaccta acatgacaca 1320

agtgcagcag gactgcatat caagctcctg ggagatgcct caaggtggac ctctaggcga 1380

gatcttaacg aactccaaga ttagtgagga cttaagcaag tgtggatcta ggtcatatgg 1440

ttggctattg aatcttgacc atgcaccatg attcctcaat ccatggagag cttgacatag 1500

atatctcacc acggatgcaa acaatgagtc aggaaaaaag aaggtccaaa tgaccgtact 1560

gtttacccca tgcatgctcg ttatctacat ttgtacttct atttttgtag tattcagctg 1620

ttgaattatc agttcttctg aatctggctg tatcttaaac aaattctagt ttccgtcaaa 1680

tgatatcttg cttgctagat gcttaatgtt tccttttcag cagaaacttc agtggtccat 1740

tttaatcaaa agaaaactgt ttcaagatca agctctagta agcaaagttc 1790

<210> 26

<211> 1725

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 26

gccgactgca ccccacacca cccccccacc tcagctcacc ttgcgctgcc cctgtgcctg 60

ctgcatgcct gacaccggcg ccatatgcat gatagcggat gatgatacta gcacgtcttc 120

ccgttcccga gctgcctctg acaccagcac aaacctggag actactacta gtattggagt 180

cccctccatt tccacctccc ttgccactga agcgagagct ctcggagccg tcgtcctctg 240

tctctcatcc ttcttcgttg ttgagcaaag cgggctcgag gaggagatga tgctgagcgg 300

gcacggcggc gggaggcgcc tgttcacggc gtcgcagtgg caggagctgg agcaccaggc 360

gctcatcttc aaatacatgg cctccggcgc gcccgtgccg cacgacctcg tcctgccgct 420

ccgcctcgcc accggcgtcg acaccgcgcc ctccctcgcc ttcccgcccc agccttcgcc 480

gtcgctggcg tactggggct gctatggcgc gggggcgccg ttcggccgca aggcggagga 540

cccggagccc gggcggtgcc ggcggacgga cggcaagaag tggcgatgct ccagggaggc 600

ccacggagac tccaagtact gcgagaagca catccaccgc gggaagagcc gttcaagaaa 660

gcctgtggaa gtgacctccc ccgccgccta ccgcccgtcc gcgttctcca tctcgccgcc 720

tcgcgcggcc gacgcgccgc cgccgccgcc gggcctcggc cacccgcagc agcagcatct 780

ccgccacggc gctctctctc cagcaggccg cgcccacgcc gctggcgctc tccagctcca 840

cctcgactcg agcctgcacg cggcgtcgcc gccgccgtcc taccacaggt acgcccactc 900

ccacgctcac tacacgccgc cgccgccgcc gtcgctctac gactacgggc agtccaagga 960

gcttcgggag gcggcggagc tcaggcggcg gcacttccac gcgctcgggg ccgacctgag 1020

cctcgacaag ccgctggccg acgccggggc cgcggagaag cccctgcggc gtttcttcga 1080

cgagtggccg cgggagagag gcgacacgag gccgtcgtgg gcgggggcgg aggacgcgac 1140

gcagctctcc atctccatcc ccgcggcttc gccctcctct gaccacgctg cctctgccgc 1200

cgcgcgatgc cacaacgatg ggagtgatcg gtgcatctcc tagctgcaac tgcaatgcaa 1260

gcctgcaacc gcgtggattg ttgttgattg gtgtagtttc ctagctgcaa ttcaagcctg 1320

caacagcgag cagtgagcag caaatgcgtg gggagggcac gcagctcagg ctgatgcgca 1380

aaatccgaag cgagtcaagc agcaatagga ctctaggtct atgatttgat cttcctttgt 1440

agcagtacgt taccaaaatg ttagctcgtt gttgttcggt gtgacatttt cgttcaggtt 1500

gctcctattg gctgctgcaa ctgcaacgct agctctgtgg cttttgtgtg ctttcagtct 1560

gcggtgcgag ccttgtcagc tcttttccgg tgacccacgc ctttgattcc tttctctgat 1620

tcctctgcgg gctctgtcat tttgatcgtt tgtcacatcc gtggattctt cctcgcggga 1680

ctactcccgt cacgaaatat aaacaaacgc acatggcttt ctttc 1725

<210> 27

<211> 2475

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 27

cacaatcaca cgcgacgcgg caggcgtacg ccgtcgccgc gtctccgtcc gtacccgccg 60

ctggtctcgt ggaccgtgcg gtgggcgggt gcgacgcgac tgtgagagca gcgggggccc 120

ggtcggctct cgtcgcgcgg ctgcagccag cactgcatgc aggcacagca gcagccgcgg 180

acacggcaga ttctgcagcg cgcaccctgc atgctgtcac ggctgtgaat ggcctgcgca 240

gcgctggcag cctgtgccgc cggagaactg tcccagacac tgaccggtac atgtggagaa 300

tcacgtccaa ggcactgacc ggtcgcgctg ccgcgcgtgc cctccttgct tcgctcacct 360

cacacacgtc gtacgcccca cccgcatgct gcacggcacg tcccgtctgc tcctgccagg 420

ctcccatgat gacaccgagc gagcggtacg gaacacagcc tactacagtg tctgacgcct 480

gacggacggg ttagcgtaag cagccagatt cgcgtcccgg agctctcgcc tttgttgacg 540

aggtgagggg ggactgggca cggctgctgc tcggtcgtgc tgcccgttac agtagttgga 600

ggaacgcagc agggccgttg ggtcggagca ccggtgcccg tcgttcgtgt ggtcgatcca 660

atggcccaaa tctcttccgc ggcccaacaa acccacacac gcaggcgcct gcgaggcttg 720

ctcgtgcgac ccacagcagc ctgctgccgg gcgccgccca ctacaaataa aaccccttcc 780

ccatggacgt cgcccaagag actcactgct actcgcgctc ttgccaccgt ctactctcca 840

acccttctgc catccctcgg caccagctcg ctgacgctac cgccacccct accgccaggc 900

cgcatagccg tgctccgctc accttctctc gcgctacagt ctcaagggta gctagccaag 960

ctaccaagct cgtcaggagc gagagaaaga ggccgccggc ggtgcgcggg gatgatgatg 1020

atgagcagcg gccgggcggg cggcggggcc accgcggggc ggtacccgtt cacggcgtcg 1080

cagtggcagg agctggagca ccaggcgctc atctacaagt gcctggcgtc cggcaagccc 1140

atcccttcct acctcatgcc gccgctccgc cgcatcctcg actccgccct cgccacgtcg 1200

ccgtccctcg cctacccgcc gcaaccctca ctgggctggg gctgcttcgg gatgggcttc 1260

acccggaagg ccgacgagga cccggagccc gggcggtgcc ggcgcacgga cggcaagaag 1320

tggcgctgct ccaaggaggc gtacccggac tccaagtact gcgagaagca catgcaccgg 1380

ggcaagaacc gttcaagaaa gcctgtggaa atgtccttgg ccacgccggc cccggcgccg 1440

gcccccgccg ccgccacaac cgccaccgcc acctcatccc cggcgccgtc ctaccaccgc 1500

ccggcccacg acgccacgcc gtctccgtac cacgcgctgt atggaggcgg cggcggcggc 1560

ggcggtagcc cttactcggc gtcggcacgc ccaggagcaa ccggaggcgg cggcgcgtac 1620

caccacgcgc agcatgtgag ccccttccac ctccacctcg agaccaccca cccgcacccg 1680

ccgccgccct acaactactc cgccgaccag agggactacg cgtacgggca cgcggccgcc 1740

aaggaggtcg gcgagcacgc cttcttctcg gacggcgcgg gcgagcgggt cgaccggcag 1800

gccgcggcgg ggcagtggca gttcaggcag ctcggggtgg agacgaagcc gggccccacg 1860

ccgctgttcc ccgtcgccgg gtacgggcac ggcgcggcgt cgccgtacgg cgtggagatg 1920

ggcaaggacg acgacgagca ggaggagagg cgccgccagc actgcttcgt tcttggagcc 1980

gacctgcggc tggagcggcc gtcgtcgggc catggccatg gccatgacca tgacgacgcc 2040

gccgccgcgc agaagccgct ccggcccttc ttcgacgagt ggccgcacca gaagggggac 2100

aaggccgggt cgtggatggg gctcgacggc gagacgcagc tctccatgtc catccccatg 2160

gccgccaccg acctccccgt cacctcccgc ttccgtaacg gtgggcacta cgagtgatgc 2220

cacatcaaac ctggcgctgg aaactcggaa cgtatggtgc tgatgctgac catgagatgt 2280

accgtttcgc tcaaggccgg ccgtcatcac cacggccaca tcaaaccggt ttgaagaact 2340

tgggaaggcc gaatgaaacc tccagaagaa tgatctgtcc tctttttctc cattttcttt 2400

tttcttttag tattactctg tattgcttcg cgtgtaatat gttttcctgt aatatcaagt 2460

gagggcgttt ctgaa 2475

<210> 28

<211> 1539

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 28

atgatgctga gcgggcacgg cggcgggagg cgcctgttca cggcgtcgca gtggcaggag 60

ctcgagcacc aggcgctcat cttcaagtac atggcctcgg gcgcgcccgt gccgcacgac 120

ctcgtcctac cgctccgcct cgccaccggc gtcgacaccg cgccctccct cgccttcccg 180

ccgcagcctt cgccgtcgcg tacgacctgc gcgcttctct cctcccgacc cgacctcccc 240

cgtcctcgcc tcatgtttca ctctgatcat cgacagccat cagcccatca catcatcgct 300

gatgactttg tacgtgtgac cgtgcatgca gtggcgtact ggggctgcta cggcgcgggg 360

gcgccgttcg gccgcaaggc ggcggaggac acggagccgg ggcggtgccg gcggacggac 420

ggcaagaagt ggcggtgctc cagggaggcc cacggcgact ccaagtactg cgagaagcac 480

attcaccgcg ggaagagccg ttcaagaaag cctgtggaag tgacctcctc ccccgccgcc 540

ggccccgctg cggcgtaccg accgtccgcg atctccacca tctcgccgcc ccgcgcggcc 600

gacgcgccgc cgccgagcct cgcctacccg cagcagcatc tcctccacgg cgcctcctcc 660

gcagcaggag cagcagcccg cgtccccgct ggcgctctcc agctccacct cgacgcgagc 720

ctgcacgcgg cggcggcggc ggcgtcgcca tcgccgccgc cgtcctacca caggtacgcc 780

cactacacac cgccagcgtc gtcgctcttc ccgggcggcg gctacggcta cgactacgac 840

tacgggcagt ccaaggagct caggcgacgg cacttccacg cgctcggggc cgacctgagc 900

ctcgacaagc cgctgcccga gcccgacacc ggctccgacg agaagcagcc cctgcggcgt 960

ttcttcgacg agtggccgcg ggagagcggc gacatggccg cggacgacgc gacgcagctt 1020

tccatctcca tccccgcggc ttcgccctcc gacctcgctg ctacctccgc ctccgccgcc 1080

gccgcgcgat tccacaacgg ggagtgatcg gtccatctcc tagctgcagc cctgcaacag 1140

cgtggattga ccgctgcatt tcctggctgc aatgcaagcc tgcaacagcg agcagtaagc 1200

cagtgacgtg gatgcatctc gtagcggcaa accctgcttc tgcctctgcg gtctgcgctg 1260

ctttgcgcgg gacggctcag gggctgaggc tcaaaaaagt ctgaaccgag tcaagcagta 1320

ctagggactc tatgacttgg tcttttgttc ttttgtagca gtacgttact cgtaccaaat 1380

gttgtttatt ttttgtgtga cattttcatt tcttccagtt ccagtctgtg atgcaagctt 1440

tgtcgctttt gtcagctctt tttcggtgac ccacgccggc cttcgtgatc gattccctta 1500

tacttatacc tgattcctct gccatattga tcgtttgtc 1539

<210> 29

<211> 1619

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 29

ggaaccctcc cgtgtcgacc tcaccccacc gcgcagccct gcacggccgc ggtcgcctat 60

aaggctagcc cagccagtgg tagcacgcac agcacagcag ccgccctgct cggcgtagga 120

gcagcccaga gcgagcgaga cagagggaaa gagacacggc cagccaggta aggcaaaaga 180

gagagggcgg aagcagcggc agagcggaga gggagagaga agagcatata tgggcatggc 240

gatgcccttt gcctccccgt ctccggcagc cgaccaccgc ccctcctccc tcctcccctt 300

ctgccgcgcc gcccctctct ccgcggcggg ggaggacgcc gcgcagcagc acgcgatgag 360

cggcaggtgg gccgcgaggc cggcgctctt caccgcggcg cagtacgagg agctggagca 420

ccaggcgctc atatacaagt acctcgtcgc cggcgtgccc gtcccgccgg acctcctcct 480

ccccctgcgc cgaggcttcg tcttccacca gccacccgcc cttgggtacg ggccctactt 540

cggcaagaag gtggacccgg agcccgggcg gtgccggcgt acggacggca agaagtggcg 600

gtgctccaag gaggccgccc cggactccaa gtactgcgag cgccacatgc accgcggccg 660

caaccgttca agaaagcctg tggaagcgca gctcgcgccc ccgccgcacg cccagccgca 720

gcagcagcag caggcccccg cgcccgctgc tggcttccag aaccactcgc tgtacccgtc 780

gatcctcacc ggcaacggcg gcggcggggt aggtgctggt gctggtggtg gcacgttcgg 840

cctggggccc acctctcagc tgcacatgga cagtgccgct gcctacgcga ctgctgccgg 900

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cagcacgctc ttgtcgggcg gcatggatcc gtcgatgatg gacaactcgt ggcgcctgct 1020

gccatcccaa accaacacat tccaagccac aagctaccct gtgttcggca cgctgagtgg 1080

gctagacgag agcaccatcg cgtcgctgcc gaagacccag agggagcccc tctctttctt 1140

cggcagcgac ttcgtaaccg ccgccaagca ggagaaccag acgctgcgcc ctttcttcga 1200

cgagtggccc aagtcgaggg actcgtggcc ggagctgggc gaggacagca gcctcggctt 1260

ctcggccacc cagctctcca tctccattcc catggcgacc tccgacttct ccaacaccag 1320

ctccagatcg ccgggtggaa taccgtcgag atgaacgagt accgtgcatg tggatcccag 1380

cgtcttaggg ttgacgactc ttcggtgctg gcctcgtcgt atcatgctcc taaattttcg 1440

aacgatatat gccttatgta acgctatttc tctcattgtt acaacaccct ttacccgttt 1500

ggaattgtgt tgaagtggat ggtctgcgtt gctcggttgt tcattcgacc ttttttcaat 1560

ttggaaactc cgtttctttg tactcagtga tctgtgcaag tgcaatgatt cggtccatg 1619

<210> 30

<211> 1750

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 30

cgcgatccaa gcctgccact acaaataaaa ctcccttccc catgaagctc acctaagtgc 60

ttcactcact cctgtcctct cctctcgacc agctgacctc gctgacggag cacacagcca 120

cgccgcagcg ccgcgtgggt gtctgtctat agccttgtag gtcgttcgca ggtaggtaac 180

cgtaacctag ctagctcgtc gggatgatga tgatgagcgg tcgagcggcc accgcggggc 240

ggtacccgtt cacggcgtcg cagtggcagg agctggagca ccaggcgctc atctacaagt 300

gcctggcgtc cggcaagccc atcccgtcct acctcatgcc accgctccgc cgcatcctcg 360

actccgccct cgccacgtcg ccgtcgctcg ccgccttccc gccgcaaccc tcgctggggt 420

gggggggctg cttcgggatg ggcttcagca ggaagcccgc cgacgaggac ccggagcccg 480

ggcggtgccg gcgcacggac ggcaagaagt ggcgctgctc caaggaggcg tacccggact 540

ccaagtactg cgagaagcac atgcaccggg gcaagaaccg ttcaagaaag cctgtggaaa 600

tgtccttggc cacgccggcg ccggcctcct ccgccacaag cgccgccgcc gccgccacct 660

cctcgtccca ggcgccgtcc taccacagcc cggcccccgc cgtgccgtac cacgcgccct 720

acggcgccgc gtaccatcac acgcagacgc aggtgacgat gagccccttc cacctcctcc 780

acctcgagac cacccacccg cacccgccgc cgccgccgcc gccgccctac tactacgcgg 840

accagaggga ctacgcctac ggcaaggagg tcggcgagcg cgccttcttc tccgacggcg 900

cgggcgagag ggaccggcag cagcaggccg cggggcagtg gcagttcaag cagctcggga 960

cgatggaggc gacgaagcag ccgtgcacca cgccgctgct cgtccccgcc gccgggtacg 1020

gccacggcgc ggcgtcgccg tacggcgtcg gtcaggccaa ggaagacgag gaggaggagg 1080

aaacgcggcg gcagcagcag cactgcttcg ttcttggcgc cgacctgcgg ctggcggagc 1140

ggccgtcggg ggcacatgac gccgccgcgc agaagccgct ccggcatttc atcgacgagt 1200

ggccgcacga gaaggggagc aataaggcgg ggtcgtggat gggggggctc gacggcgaga 1260

cgacgcagct ctccatgtct atcccgatgg cggccgctgc cgacctcccc gtcacctccc 1320

gctaccgtac gtgatggcgg cgcgcactat gagtgattgc cagcaagaaa tgttttgtgg 1380

ttgctgcgac ctcgaggtgg cgaggccaca tgaaaaaaaa atactggagc tggaacacga 1440

gtggttcttt cctgtgccgt tttgctcagg gccggtcggc acggtttgaa gaagttggga 1500

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gctgtacctg tgagacgacg cttagtgcta gaagtgaggg cctttcctga tctcagctct 1620

ggtctggatt tgccttttcc cgctgtcgga ttcctctgcc tgtctgtgat ggtttgtctg 1680

tgatggtttg tgctcagagc ctgcagcgaa tactaaaccg cagtaattaa tcaccatgct 1740

tcacccgaca 1750

<210> 31

<211> 852

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 31

cttcttccct cctctcgaga agctgcctgc tacccgcgcg ctgcctctcc cttccactcc 60

ataccatacc gccacgacaa cgtcgacaag cgcaataccg gagccctccg aaatggccga 120

ggacaaggag accgactcgc cgcagccgcc ggccaagctg ccccgcctct cccgcgccga 180

cacgagcgcc ggagaggtga ccatggcggc ctcgtcgccg ctggttcttg ggctggggct 240

gggcctcggc gggcgcggcg gcggcggcga gcgagacgcg gatgtgtccc ccgcgacggt 300

gactcccaag aggccgtcgg cgctgacgtt catgcagcag caggagctgg agcaccaggt 360

gctcatctac cgctacttcg ccgcgggcgc gccggtgccg gtgcacctgg tgctccccat 420

ctggaagagc gtcgccgcgt cctccttcgg cccgcagcgc tttccctcgc tgatgggcct 480

gggcagcctg tgcttcgact accgcagcag catggagccg gagcccgggc ggtgccggcg 540

cacggacggc aagaagtggc ggtgctcccg cgacgtggtg ccgggccaca agtactgcga 600

gcggcacgtc caccgcggcc gcggccgttc aagaaagcct gtggaagccg ccgcggcacc 660

ggcggcggcg gccggcggca gcagccccgt cctccgggtc gccgcgcccc agcacgtgct 720

cggcctctcc tcgcccacca gcgtcctcct cgcccacggc gccgcgcgtg ccacgtgagt 780

agcgcgccgc cgcgggccga ccgatggtgc cgtggtctac tggtcttggg cctcggaatc 840

acgaggggca aa 852

<210> 32

<211> 1725

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 32

gccgcccagc gcccacccac acccctgcct cccaggctcc cactacctgt ccccaacaat 60

gcacaccaac atccactctc tcgtcaggct cctctccccc aaaaatgagc gctgagttct 120

gcgctgctgc cggtgtcgtg gccatggagc tcggagtcgg agatgtgctg gggctgcagc 180

aaggcatcgc aatcaccgcg ccatcgccca gggacagcga cctgggtctt ctcaagcgag 240

caggcctcac ccaggctgcg gctgctgccc cctacccctc ccccttcctt gacgaggaga 300

agatgctcag gttctccaag gcggctcaca cattgcactc aggcttggat tttggaggcc 360

caggtgagca ggctttcctg ctgtccagga ccaagatgcc atttactccc tcgcagtgga 420

tggagctgga gcaccaggct ctgatataca agtacctcaa tgcaaaggcc cccccatacc 480

ttccagcctg ctcatttcaa tcagcaagag cttcagatca tccaatagag agcttgacag 540

acttctctaa cgcagtgagc tggaggcctc tgtatcaagg ctacacaaat gcagactctg 600

acccagaacc tgggagatgc cgacgaacgg atggaaagaa gtggcggtgc tccaaggaag 660

caatggctga tcacaagtac tgtgagcggc acatcaacag aaaccgtcac cgttcaagaa 720

agcctgtgga aaatcaacct aagaagacca ccaaggaggt gcctgctgct gctggctcat 780

tgccatgtgc tgggccacaa ggtagcttga agaaggcaaa agttaatgac tccaagccag 840

gcactgtcag ctattgggca gatagtttaa acaggacaat gttgagcaga gagaaagcaa 900

acaaaccgac ggaagatagc tctttgctgc ttacttctac gaacagccaa cccaccttgt 960

ccctgctctc tcagctgaag cagcaaaaca aaccagataa gttaggcccc acactggaaa 1020

atgagtcaaa cccagacaca atattgaaag cctggggtgg caaccagcct agccacaaga 1080

gcatttcctc tacagagcgc catgatgctg aatccctcca atcagtcctt caaaatttca 1140

gcctagccca gaatgagaag atggagtcag aaaagaacaa atattctgat tccgtgctag 1200

tttcgtcgac tttctattct gcagacggtc caagagctac ctgccttaca cctaacatga 1260

cacaggtgaa gcaggattgc atatcaagct cttgggagat gcctcaaggt ggacctctag 1320

gcgaaatctt aacgaactcc aagaatagca aggacttaag caagtgtaaa ccaaggtcat 1380

atggttggtt gttgaatctt gaccatgcac catgattcct caatccatga agagcttgac 1440

atagatatcc catcatgtag gcaaacaatg gtcagaaaaa ggttatgacc acattgcttg 1500

ccccatgcat gcttgctatc tacatttgta tttctgttac gtagcattta gctagttgaa 1560

ttatcagttc ttctggatac ggctgtatct taaacaagtt ctagtttgtg tcagatgata 1620

tcttgcttgc tagatgtttc atgttccact ttcaacagga acttcagaca accactttga 1680

ttgacagaaa actgtttgaa gaaccagctc tagtaaacaa ggttc 1725

<210> 33

<211> 1668

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 33

aaatccaaag cgagcagatc ccccgcccct aaccgactcc cctcgcttcc attccattaa 60

tggccgccac caagagccct ccaacacaca cctgacctcc ccttcccccc tctctccgcc 120

gcccgttccc cgcgcctccg cccgtacgtc ccgttcccgg tcggccggcc ggtccaaagg 180

gaggggagga ggaggaacgc gggagtcggg gcccgcaccg atgctgagct cggcatcctc 240

ggccgcggga gcggccatgg ggatgggcgg cggcgggtac gcgcaccagc ccccgccaca 300

gcgcacggtc ttcaccgccg cgcagtgggc ggagctggag cagcaggcgc tcatctacaa 360

gtacctcatg gccggcgtcc ccgtcccgcc cgacctcctc ctccccgtcc gccccggccc 420

cgccgccgcc ttctccttcg ccggccccgc cgccgcgtcg cccttctacc accaacacca 480

cccgtccctg agctactacg cctactacgg caagaaactg gacccggagc cgtggcggtg 540

ccgccgcacc gacggcaaga agtggcggtg ctccaaggag gcgcaccccg actccaagta 600

ctgcgagcgc cacatgcacc gtggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aatccaagac 660

cgcctcgtcg tcgtcgcccg cgcacccgtc gccgccccag ctgtccaccg tcaccaccac 720

cgcgcctctc gagccccttg cagcggcggg gggcaaggtc cacggcctgt ccctcggcgg 780

cggcgctgct ggctcgtcgc acctcggcgt cgatgcttcg aatgctcact atcgttatgg 840

tagcaacagg taccctctcg gagctaaacc ggacggcggc gagttgagct tcttctcagg 900

agcgtcatcg gggaacaact cgaggggcgg cttcaccatc gactctccat cagataacaa 960

ctcgtggcac tccgccctgg cgtccagcgt gcccccgttc acgctgtcga cgaagagcgg 1020

ggactccggc ctcctgcccg gcgcctacgc ctcctactcc cagtcccact cccacatgga 1080

gccgccgcgg gagctcgggc aggtcaccat cgcctcgctg gcgcaggagc aggagcgcca 1140

gcagccgttc agtggtggga tgctcgggaa cgtgaagcag gagaaccaga accagccgct 1200

gcggcccttc ttcgacgagt ggcccgggac gcgggcggac tcgtggccgc cggagatgga 1260

cggcgcgccg cgggccggca ggacctcctt ctcctcctcc accacccagc tctccatctc 1320

catcccgatg cccagatgcg actgacgagg aaccgtcgat cgggcggcca ctagacggtg 1380

gacgctcacg ctcactagtg cgctgtcgcc tggagtggag atcgatcgtc acgccgccgc 1440

cgcctacgcc ctcgtcctac ctatttgttt tgccgtagtg tattgtaccg acctcattaa 1500

gaacagaaca gaacagaagt ctctgtgtaa gagccggctc cttcctgttc ctatggtttg 1560

tactagtagc gtgctttgta tttgttgtac ccctcaagac cgagaatgaa acccgcccgc 1620

cgtcagtctg tctttgcgtt ttagtagatg atgcgagtgt ttcgtgtg 1668

<210> 34

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GRF5合成结合位点

<400> 34

aaccgttcaa gaaagcctgt aaaaacg 27

<210> 35

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GRF6合成结合位点

<400> 35

aaccgttcaa gaaagcctat aaaaacg 27

<210> 36

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GRF6合成结合位点

<400> 36

aaccgttcaa gaaagcctgt caaaacg 27

<210> 37

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GRF6合成结合位点

<400> 37

aaccgttcaa aaaagcctat aaaaacg 27

<210> 38

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GRF6合成结合位点

<400> 38

aaccgttcaa gaaagcctct caaaacg 27

<210> 39

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GRF6合成结合位点

<400> 39

aaccgttcaa gaaagcctgt acaaacg 27

<210> 40

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GRF6合成结合位点

<400> 40

aaccgttcaa aaaagcctgt ggaaacg 27

<210> 41

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GRF6合成结合位点

<400> 41

aaccgttcaa aaaagcctgt aaaaacg 27

<210> 42

<211> 9

<212> PRT

<213> 玉米

<400> 42

Asn Arg Ser Arg Lys Pro Val Glu Thr

1 5

<210> 43

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 突变GRF miRNA结合位点

<400> 43

Asn Arg Ser Arg Lys Pro Val Lys Thr

1 5

<210> 44

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 突变GRF miRNA结合位点

<400> 44

Asn Arg Ser Arg Lys Pro Ile Lys Thr

1 5

<210> 45

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 突变GRF miRNA结合位点

<400> 45

Asn Arg Ser Lys Lys Pro Ile Lys Thr

1 5

<210> 46

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 突变GRF miRNA结合位点

<400> 46

Asn Arg Ser Arg Lys Pro Val Gln Thr

1 5

<210> 47

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 突变GRF miRNA结合位点

<400> 47

Asn Arg Ser Lys Lys Pro Val Lys Thr

1 5

<210> 48

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 48

caaccgttca agaaagcctg 20

<210> 49

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 49

aaccgttcaa gaaagcctgt 20

<210> 50

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 50

cgcaaccgtt caagaaagcc 20

<210> 51

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 51

ctttcttgaa cggttgcggc 20

<210> 52

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 52

ttcttgaacg gttgcggccg 20

<210> 53

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 53

tcttgaacgg ttgcggccgc 20

<210> 54

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 54

ttgaacggtt gcggccgcgg 20

<210> 55

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 55

cacaggcttt cttgaacggt tgc 23

<210> 56

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 56

ttgaacggtt gcggccgcgg 20

<210> 57

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 57

cacaggcttt cttgaacggt 20

<210> 58

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 58

tttccacagg ctttcttgaa 20

<210> 59

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 59

tgcgtttcca caggctttct 20

<210> 60

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 60

ttcaagaaag cctgtggaaa 20

<210> 61

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 61

aacggttgcg gccgcggtgc 20

<210> 62

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 62

aagaaagcct gtggaaacgc 20

<210> 63

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 63

tgaacggttg cggccgcggt 20

<210> 64

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 64

ttgaacggtt gcggccgcgg 20

<210> 65

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 65

acaggctttc ttgaacggtt 20

<210> 66

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 66

cacaggcttt cttgaacggt 20

<210> 67

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 67

agaaagcctg tggaaacgca 20

<210> 68

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 68

gaaacgcagc tcgcgcccca 20

<210> 69

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 69

caggctttct tgaacggttg 20

<210> 70

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 70

acaggctttc ttgaacggtt 20

<210> 71

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 71

agaaagcctg tggaaacgca 20

<210> 72

<211> 166

<212> PRT

<213> 大肠杆菌

<400> 72

Ser Glu Val Glu Phe Ser His Glu Tyr Trp Met Arg His Ala Leu Thr

1 5 10 15

Leu Ala Lys Arg Ala Trp Asp Glu Arg Glu Val Pro Val Gly Ala Val

20 25 30

Leu Val His Asn Asn Arg Val Ile Gly Glu Gly Trp Asn Arg Pro Ile

35 40 45

Gly Arg His Asp Pro Thr Ala His Ala Glu Ile Met Ala Leu Arg Gln

50 55 60

Gly Gly Leu Val Met Gln Asn Tyr Arg Leu Ile Asp Ala Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Val Thr Leu Glu Pro Cys Val Met Cys Ala Gly Ala Met Ile His Ser

85 90 95

Arg Ile Gly Arg Val Val Phe Gly Ala Arg Asp Ala Lys Thr Gly Ala

100 105 110

Ala Gly Ser Leu Met Asp Val Leu His His Pro Gly Met Asn His Arg

115 120 125

Val Glu Ile Thr Glu Gly Ile Leu Ala Asp Glu Cys Ala Ala Leu Leu

130 135 140

Ser Asp Phe Phe Arg Met Arg Arg Gln Glu Ile Lys Ala Gln Lys Lys

145 150 155 160

Ala Gln Ser Ser Thr Asp

165

<210> 73

<211> 166

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成tRNA特异性腺苷脱氨酶Tad

<400> 73

Ser Glu Val Glu Phe Ser His Glu Tyr Trp Met Arg His Ala Leu Thr

1 5 10 15

Leu Ala Lys Arg Ala Arg Asp Glu Arg Glu Val Pro Val Gly Ala Val

20 25 30

Leu Val Leu Asn Asn Arg Val Ile Gly Glu Gly Trp Asn Arg Ala Ile

35 40 45

Gly Leu His Asp Pro Thr Ala His Ala Glu Ile Met Ala Leu Arg Gln

50 55 60

Gly Gly Leu Val Met Gln Asn Tyr Arg Leu Ile Asp Ala Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Val Thr Phe Glu Pro Cys Val Met Cys Ala Gly Ala Met Ile His Ser

85 90 95

Arg Ile Gly Arg Val Val Phe Gly Val Arg Asn Ala Lys Thr Gly Ala

100 105 110

Ala Gly Ser Leu Met Asp Val Leu His Tyr Pro Gly Met Asn His Arg

115 120 125

Val Glu Ile Thr Glu Gly Ile Leu Ala Asp Glu Cys Ala Ala Leu Leu

130 135 140

Cys Tyr Phe Phe Arg Met Pro Arg Gln Val Phe Asn Ala Gln Lys Lys

145 150 155 160

Ala Gln Ser Ser Thr Asp

165

<210> 74

<211> 166

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成tRNA特异性腺苷脱氨酶Tad

<400> 74

Ser Glu Val Glu Phe Ser His Glu Tyr Trp Met Arg His Ala Leu Thr

1 5 10 15

Leu Ala Lys Arg Ala Trp Asp Glu Arg Glu Val Pro Val Gly Ala Val

20 25 30

Leu Val Leu Asn Asn Arg Val Ile Gly Glu Gly Trp Asn Arg Ser Ile

35 40 45

Gly Leu His Asp Pro Thr Ala His Ala Glu Ile Met Ala Leu Arg Gln

50 55 60

Gly Gly Leu Val Met Gln Asn Tyr Arg Leu Ile Asp Ala Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Val Thr Phe Glu Pro Cys Val Met Cys Ala Gly Ala Met Ile His Ser

85 90 95

Arg Ile Gly Arg Val Val Phe Gly Val Arg Asn Ala Lys Thr Gly Ala

100 105 110

Ala Gly Ser Leu Met Asp Val Leu His Tyr Pro Gly Met Asn His Arg

115 120 125

Val Glu Ile Thr Glu Gly Ile Leu Ala Asp Glu Cys Ala Ala Leu Leu

130 135 140

Cys Tyr Phe Phe Arg Met Arg Arg Gln Val Phe Asn Ala Gln Lys Lys

145 150 155 160

Ala Gln Ser Ser Thr Asp

165

<210> 75

<211> 166

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成tRNA特异性腺苷脱氨酶Tad

<400> 75

Ser Glu Val Glu Phe Ser His Glu Tyr Trp Met Arg His Ala Leu Thr

1 5 10 15

Leu Ala Lys Arg Ala Leu Asp Glu Arg Glu Val Pro Val Gly Ala Val

20 25 30

Leu Val Leu Asn Asn Arg Val Ile Gly Glu Gly Trp Asn Arg Ala Ile

35 40 45

Gly Leu His Asp Pro Thr Ala His Ala Glu Ile Met Ala Leu Arg Gln

50 55 60

Gly Gly Leu Val Met Gln Asn Tyr Arg Leu Ile Asp Ala Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Val Thr Phe Glu Pro Cys Val Met Cys Ala Gly Ala Met Ile His Ser

85 90 95

Arg Ile Gly Arg Val Val Phe Gly Val Arg Asn Ala Lys Thr Gly Ala

100 105 110

Ala Gly Ser Leu Met Asp Val Leu His Tyr Pro Gly Met Asn His Arg

115 120 125

Val Glu Ile Thr Glu Gly Ile Leu Ala Asp Glu Cys Asn Ala Leu Leu

130 135 140

Cys Tyr Phe Phe Arg Met Arg Arg Gln Val Phe Asn Ala Gln Lys Lys

145 150 155 160

Ala Gln Ser Ser Thr Asp

165

<210> 76

<211> 166

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成tRNA特异性腺苷脱氨酶Tad

<400> 76

Ser Glu Val Glu Phe Ser His Glu Tyr Trp Met Arg His Ala Leu Thr

1 5 10 15

Leu Ala Lys Arg Ala Leu Asp Glu Arg Glu Val Pro Val Gly Ala Val

20 25 30

Leu Val Leu Asn Asn Arg Val Ile Gly Glu Gly Trp Asn Arg Ala Ile

35 40 45

Gly Leu His Asp Pro Thr Ala His Ala Glu Ile Met Ala Leu Arg Gln

50 55 60

Gly Gly Leu Val Met Gln Asn Tyr Arg Leu Ile Asp Ala Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Val Thr Phe Glu Pro Cys Val Met Cys Ala Gly Ala Met Ile His Ser

85 90 95

Arg Ile Gly Arg Val Val Phe Gly Val Arg Asn Ala Lys Thr Gly Ala

100 105 110

Ala Gly Ser Leu Met Asp Val Leu His Tyr Pro Gly Met Asn His Arg

115 120 125

Val Glu Ile Thr Glu Gly Ile Leu Ala Asp Glu Cys Asn Ala Leu Leu

130 135 140

Cys Tyr Phe Phe Arg Met Pro Arg Gln Val Phe Asn Ala Gln Lys Lys

145 150 155 160

Ala Gln Ser Ser Thr Asp

165

<210> 77

<211> 228

<212> PRT

<213> 褐家鼠

<400> 77

Ser Ser Glu Thr Gly Pro Val Ala Val Asp Pro Thr Leu Arg Arg Arg

1 5 10 15

Ile Glu Pro His Glu Phe Glu Val Phe Phe Asp Pro Arg Glu Leu Arg

20 25 30

Lys Glu Thr Cys Leu Leu Tyr Glu Ile Asn Trp Gly Gly Arg His Ser

35 40 45

Ile Trp Arg His Thr Ser Gln Asn Thr Asn Lys His Val Glu Val Asn

50 55 60

Phe Ile Glu Lys Phe Thr Thr Glu Arg Tyr Phe Cys Pro Asn Thr Arg

65 70 75 80

Cys Ser Ile Thr Trp Phe Leu Ser Trp Ser Pro Cys Gly Glu Cys Ser

85 90 95

Arg Ala Ile Thr Glu Phe Leu Ser Arg Tyr Pro His Val Thr Leu Phe

100 105 110

Ile Tyr Ile Ala Arg Leu Tyr His His Ala Asp Pro Arg Asn Arg Gln

115 120 125

Gly Leu Arg Asp Leu Ile Ser Ser Gly Val Thr Ile Gln Ile Met Thr

130 135 140

Glu Gln Glu Ser Gly Tyr Cys Trp Arg Asn Phe Val Asn Tyr Ser Pro

145 150 155 160

Ser Asn Glu Ala His Trp Pro Arg Tyr Pro His Leu Trp Val Arg Leu

165 170 175

Tyr Val Leu Glu Leu Tyr Cys Ile Ile Leu Gly Leu Pro Pro Cys Leu

180 185 190

Asn Ile Leu Arg Arg Lys Gln Pro Gln Leu Thr Phe Phe Thr Ile Ala

195 200 205

Leu Gln Ser Cys His Tyr Gln Arg Leu Pro Pro His Ile Leu Trp Ala

210 215 220

Thr Gly Leu Lys

225

<210> 78

<211> 199

<212> PRT

<213> 智人

<400> 78

Met Glu Ala Ser Pro Ala Ser Gly Pro Arg His Leu Met Asp Pro His

1 5 10 15

Ile Phe Thr Ser Asn Phe Asn Asn Gly Ile Gly Arg His Lys Thr Tyr

20 25 30

Leu Cys Tyr Glu Val Glu Arg Leu Asp Asn Gly Thr Ser Val Lys Met

35 40 45

Asp Gln His Arg Gly Phe Leu His Asn Gln Ala Lys Asn Leu Leu Cys

50 55 60

Gly Phe Tyr Gly Arg His Ala Glu Leu Arg Phe Leu Asp Leu Val Pro

65 70 75 80

Ser Leu Gln Leu Asp Pro Ala Gln Ile Tyr Arg Val Thr Trp Phe Ile

85 90 95

Ser Trp Ser Pro Cys Phe Ser Trp Gly Cys Ala Gly Glu Val Arg Ala

100 105 110

Phe Leu Gln Glu Asn Thr His Val Arg Leu Arg Ile Phe Ala Ala Arg

115 120 125

Ile Tyr Asp Tyr Asp Pro Leu Tyr Lys Glu Ala Leu Gln Met Leu Arg

130 135 140

Asp Ala Gly Ala Gln Val Ser Ile Met Thr Tyr Asp Glu Phe Lys His

145 150 155 160

Cys Trp Asp Thr Phe Val Asp His Gln Gly Cys Pro Phe Gln Pro Trp

165 170 175

Asp Gly Leu Asp Glu His Ser Gln Ala Leu Ser Gly Arg Leu Arg Ala

180 185 190

Ile Leu Gln Asn Gln Gly Asn

195

<210> 79

<211> 621

<212> DNA

<213> 海七鳃鳗

<400> 79

acagatgcag agtatgtgag aattcacgaa aagctggaca tctatacctt caagaagcag 60

ttctttaaca ataagaagtc tgtgagccat aggtgctacg tgctgttcga gctgaagaga 120

aggggtgaaa gaagggcatg tttttggggg tatgctgtga acaagcccca gtctggaact 180

gagagaggca ttcacgccga aattttcagc atcagaaagg tggaggaata cctgagggat 240

aaccctggac agtttacaat taattggtat tctagctggt ctccatgcgc tgactgtgcc 300

gagaagatcc tggaatggta caaccaggag ctgagaggaa atggccatac cctgaagatt 360

tgggcctgca agctgtacta tgaaaagaac gcaagaaatc agatcggact gtggaacctg 420

agggataatg gtgtggggct gaacgtgatg gtgtccgagc actatcagtg ctgtagaaag 480

attttcattc agtcctcaca taatcagctg aacgagaata gatggctgga aaagactctg 540

aagagggctg agaagagaag gtccgaactg tcaattatga tccaggtgaa gatcctgcac 600

accactaagt cacctgccgt g 621

<210> 80

<211> 160

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成多肽

<400> 80

Phe Glu Arg Asn Tyr Asp Pro Arg Glu Leu Arg Lys Glu Thr Tyr Leu

1 5 10 15

Leu Tyr Glu Ile Lys Trp Gly Lys Ser Gly Lys Leu Trp Arg His Trp

20 25 30

Cys Gln Asn Asn Arg Thr Gln His Ala Glu Val Tyr Phe Leu Glu Asn

35 40 45

Ile Phe Asn Ala Arg Arg Phe Asn Pro Ser Thr His Cys Ser Ile Thr

50 55 60

Trp Tyr Leu Ser Trp Ser Pro Cys Ala Glu Cys Ser Gln Lys Ile Val

65 70 75 80

Asp Phe Leu Lys Glu His Pro Asn Val Leu Glu Ile Tyr Val Ala Arg

85 90 95

Leu Tyr Tyr His Glu Asp Glu Arg Asn Arg Gln Gly Leu Arg Asp Leu

100 105 110

Val Asn Ser Gly Val Thr Ile Arg Ile Met Asp Leu Pro Asp Tyr Asn

115 120 125

Tyr Cys Trp Lys Thr Phe Val Ser Asp Gln Gly Gly Asp Glu Asp Tyr

130 135 140

Trp Pro Gly His Phe Ala Pro Trp Ile Lys Gln Tyr Ser Leu Lys Leu

145 150 155 160

<210> 81

<211> 83

<212> PRT

<213> 芽孢杆菌噬菌体AR9

<400> 81

Thr Asn Leu Ser Asp Ile Ile Glu Lys Glu Thr Gly Lys Gln Leu Val

1 5 10 15

Ile Gln Glu Ser Ile Leu Met Leu Pro Glu Glu Val Glu Glu Val Ile

20 25 30

Gly Asn Lys Pro Glu Ser Asp Ile Leu Val His Thr Ala Tyr Asp Glu

35 40 45

Ser Thr Asp Glu Asn Val Met Leu Leu Thr Ser Asp Ala Pro Glu Tyr

50 55 60

Lys Pro Trp Ala Leu Val Ile Gln Asp Ser Asn Gly Glu Asn Lys Ile

65 70 75 80

Lys Met Leu

<210> 82

<211> 1592

<212> DNA

<213> 蒺藜状苜蓿

<400> 82

actgttaata atttttaaac gtcagcgcac taaaaaaacg aaaagacgga cacgtgaaaa 60

taaaaaacac acactagttt atgacgcaat actattttac ttatgatttg ggtacattag 120

acaaaaccgt gaaagagatg tatcagctat gaaacctgta tacttcaata cagagactta 180

ctcatatcgg atacgtacgc acgaagtatc atattaatta ttttaatttt taataaatat 240

tttatcggat acttatgtga tactctacat atacacaagg atatttctaa gatactttat 300

agatacgtat cctagaaaaa catgaagagt aaaaaagtga gacaatgttg taaaaattca 360

ttataaatgt atatgattca attttagata tgcatcagta taattgattc tcgatgaaac 420

acttaaaatt atatttcttg tggaagaacg tagcgagaga ggtgattcag ttagacaaca 480

ttaaataaaa ttaatgttaa gttcttttaa tgatgtttct ctcaatatca catcatatga 540

aaatgtaata tgatttataa gaaaattttt aaaaaattta ttttaataat cacatgtact 600

attttttaaa aattgtatct tttataataa tacaataata aagagtaatc agtgttaatt 660

tttcttcaaa tataagtttt attataaatc attgttaacg tatcataagt cattaccgta 720

tcgtatctta attttttttt aaaaaccgct aattcacgta cccgtattgt attgtacccg 780

cacctgtatc acaatcgatc ttagttagaa gaattgtctc gaggcggtgc aagacagcat 840

ataatagacg tggactctct tataccaaac gttgtcgtat cacaaagggt taggtaacaa 900

gtcacagttt gtccacgtgt cacgttttaa ttggaagagg tgccgttggc gtaatataac 960

agccaatcga tttttgctat aaaagcaaat caggtaaact aaacttcttc attcttttct 1020

tccccatcgc tacaaaaccg gttcctttgg aaaagagatt cattcaaacc tagcacccaa 1080

ttccgtttca aggtataatc tactttctat tcttcgatta ttttattatt attagctact 1140

atcgtttaat cgatcttttc ttttgatccg tcaaatttaa attcaattag ggttttgttc 1200

ttttctttca tctgattgaa atccttctga attgaaccgt ttacttgatt ttactgttta 1260

ttgtatgatt taatcctttg tttttcaaag acagtcttta gattgtgatt aggggttcat 1320

ataaattttt agatttggat ttttgtattg tatgattcaa aaaatacgtc ctttaattag 1380

attagtacat ggatattttt tacccgattt attgattgtc agggagaatt tgatgagcaa 1440

gtttttttga tgtctgttgt aaattgaatt gattataatt gctgatctgc tgcttccagt 1500

tttcataacc catattcttt taaccttgtt gtacacacaa tgaaaaattg gtgattgatt 1560

catttgtttt tctttgtttt ggattataca gg 1592

<210> 83

<211> 2000

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 83

gtcgtgcccc tctctagaga taaagagcat tgcatgtcta aagtataaaa aattaccaca 60

tatttttttg tcacacttat ttgaagtgta gtttatctat ctctatacat atatttaaac 120

ttcactctac aaataatata gtctataata ctaaaataat attagtgttt tagaggatca 180

tataaataaa ctgctagaca tggtctaaag gataattgaa tattttgaca atctacagtt 240

ttatcttttt agtgtgcatg tgatctctct gttttttttg caaatagctt gacctatata 300

atacttcatc cattttatta gtacatccat ttaggattta gggttgatgg tttctataga 360

ctaattttta gtacatccat tttattcttt ttagtctcta aattttttaa aactaaaact 420

ctattttagt tttttattta ataatttaga tataaaatga aataaaataa attgactaca 480

aataaaacaa atacccttta agaaataaaa aaactaagca aacatttttc ttgtttcgag 540

tagataatga caggctgttc aacgccgtcg acgagtctaa cggacaccaa ccagcgaacc 600

agcagcgtcg cgtcgggcca agcgaagcag acggcacggc atctctgtag ctgcctctgg 660

acccctctcg agagttccgc tccaccgttg gacttgctcc gctgtcggca tccagaaatt 720

gcgtggcgga gcggcagacg tgaggcggca cggcaggcgg cctcttcctc ctctcacggc 780

accggcagct acgggggatt cctttcccac cgctccttcg ctttcccttc ctcgcccgcc 840

gtaataaata gacaccccct ccacaccctc tttccccaac ctcgtgttcg ttcggagcgc 900

acacacacgc aaccagatct cccccaaatc cagccgtcgg cacctccgct tcaaggtacg 960

ccgctcatcc tccccccccc cctctctcta ccttctctag atcggcgatc cggtccatgg 1020

ttagggcccg gtagttctac ttctgttcat gtttgtgtta gagcaaacat gttcatgttc 1080

atgtttgtga tgatgtggtc tggttgggcg gtcgttctag atcggagtag gatactgttt 1140

caagctacct ggtggattta ttaattttgt atctgtatgt gtgtgccata catcttcata 1200

gttacgagtt taagatgatg gatggaaata tcgatctagg ataggtatac atgttgatgc 1260

gggttttact gatgcatata cagagatgct ttttttctcg cttggttgtg atgatatggt 1320

ctggttgggc ggtcgttcta gatcggagta gaatactgtt tcaaactacc tggtggattt 1380

attaaaggat aaagggtcgt tctagatcgg agtagaatac tgtttcaaac tacctggtgg 1440

atttattaaa ggatctgtat gtatgtgcct acatcttcat agttacgagt ttaagatgat 1500

ggatggaaat atcgatctag gataggtata catgttgatg cgggttttac tgatgcatat 1560

acagagatgc tttttttcgc ttggttgtga tgatgtggtc tggttgggcg gtcgttctag 1620

atcggagtag aatactgttt caaactacct ggtggattta ttaattttgt atctttatgt 1680

gtgtgccata catcttcata gttacgagtt taagatgatg gatggaaata ttgatctagg 1740

ataggtatac atgttgatgt gggttttact gatgcatata catgatggca tatgcggcat 1800

ctattcatat gctctaacct tgagtaccta tctattataa taaacaagta tgttttataa 1860

ttattttgat cttgatatac ttggatgatg gcatatgcag cagctatatg tggatttttt 1920

agccctgcct tcatacgcta tttatttgct tggtactgtt tcttttgtcc gatgctcacc 1980

ctgttgtttg gtgatacttc 2000

<210> 84

<211> 22

<212> RNA

<213> 玉米

<400> 84

uuccacaggc uuucuugaac ug 22

<210> 85

<211> 21

<212> RNA

<213> 玉米

<400> 85

uuccacagcu uucuugaacu u 21

<210> 86

<211> 21

<212> RNA

<213> 玉米

<400> 86

guucaagaaa gcuguggaag a 21

<210> 87

<211> 21

<212> RNA

<213> 玉米

<400> 87

guucaauaaa gcugugggaa a 21

<210> 88

<211> 21

<212> RNA

<213> 玉米

<400> 88

uuccacagcu uucuugaacu g 21

<210> 89

<211> 21

<212> RNA

<213> 玉米

<400> 89

uuccacagcu uucuugaacu u 21

<210> 90

<211> 21

<212> RNA

<213> 玉米

<400> 90

guucaauaaa gcugugggaa a 21

<210> 91

<211> 21

<212> RNA

<213> 玉米

<400> 91

ucccacagcu uuauugaacu g 21

<210> 92

<211> 21

<212> RNA

<213> 玉米

<400> 92

ggucaagaaa gcugugggaa g 21

<210> 93

<211> 21

<212> RNA

<213> 玉米

<400> 93

ucccacagcu uuauugaacu g 21

<210> 94

<211> 21

<212> RNA

<213> 玉米

<400> 94

ggucaagaaa gccgugggaa g 21

<210> 95

<211> 21

<212> RNA

<213> 玉米

<400> 95

uuccacagcu uucuugaacu g 21

<210> 96

<211> 22

<212> RNA

<213> 玉米

<400> 96

uuccacaggc uuucuugaac ug 22

<210> 97

<211> 957

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 97

atgaataaga gtgggggagg agagatgagt aagtggccgt tcacaatgtc tcagtggcag 60

gaactggaac atcaagcttt gatttacaaa tacatggtgg ctggtcttcc tgtccctcct 120

gatctagtcc ttcccattca gaacagcttc cactccattt cccaaacctt cttgcaccat 180

ccctctacca ccatgagtta ttgttccttc tatgggaaga aggtggaccc ggagccagga 240

cgatgcagga ggactgatgg gaaaaagtgg aggtgctcca aggaagccta cccagactcc 300

aagtactgtg agcgacacat gcaccgtggc cgcaaccgtt caagaaagcc tgtggaatca 360

caaactatga ctcagtcatc atctaatgtg tcatcattga ctgtaactgc tggcagcagc 420

agcagtgcaa ctggaaattt ccataacctt accaccacaa atgcatatgg taatccccaa 480

gggactggtt ctggatcaga ccaaacccac tatcacatgg attccattcc ctatgggatc 540

ccaagtaaag aatacaggta ttttcaagga cctaaatctg agggaggtga acatagtttc 600

ttgtccaaaa ctttaggaag caacaaggtt cttcacatgg agtcacagat ggataacact 660

ttgatgccaa ccagtggagt tgcctcattc tctacattga gatcaaataa taattccatg 720

ttgcagggtg attatctgca gccttctttc ttatctagtg agtatgcctc agcagaaact 780

gtgaagcaag agggtcagtt ccttcgacct ttctttgatg aatggcctaa aaggagggac 840

tcatggtctg gtctggaaga tgagggatcc aaccacactc aactctcaat atccattcct 900

atgtcagcat caaatttctc tacaactagc tctcattccc cacatggtga gatttaa 957

<210> 98

<211> 1377

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 98

atggaagcta agcctcttcg aactgttccc tcttcacaca acacttctgg aggtggaccc 60

cagaagaaga ttgacatggg acacaagatg gtaggtgatg ttggtgttgt tgttgttgat 120

gaaagaaaga gggttgttgt ggtcaaggaa gagaaagaga acacttcttc ctacagtgtt 180

gaacttcatc tcggggttga tgcttctcat tctgctccac aagaaataaa ccatgtgatc 240

actgaagctc agaggcgtga gcttcaccat caagttttca tcttcaacca tttggcatat 300

aatcttcctc ctccttatca ccttgtgcaa ttcccgagca acatgtcaga atacagtttc 360

ctgggttttg atcatgggag tatggtggat ccagagcctc ataggtgtag aagaactgat 420

ggaaagaaat ggaggtgtgg taagaatgtg gtgcctaacc agaagtactg tgaaagacac 480

atgcatagag gtcgaaatcg ttcaagaaag cctgtggaaa catctcaaat taactctcat 540

ctggcaacaa agccatctag caagtcacac aacaaacccg cctcaaggac acaatttgaa 600

atttcaaatc caaaccttat ggccattcga catagtgaca catcaagtac cccatcaagg 660

agtctcagtg ttgccaattg ctcttctgct aataataggt ggaaaaatag tgcaagttat 720

gctgactacc tcacatcgtt ttcttctgcg tctgcagtgt cccctggatc cactcttgcc 780

actccagttg ctcctaagat ggccaccttc agcagtgtga catccattgc ttcagataga 840

ggaagttgcc taaatatatg ccagaaagat aacaagtcca agagctgtat cagcaacaac 900

atcagtgtta aaagtggtgg gaaaggaaga attgttggtg acactaatgg catttctact 960

ggaataggct tctccccaac gagtgttctt caagtttctg gttgcaaccc ttcatacctg 1020

aatgacagaa ccaacataga atctgcatcc ggtaggtgcc ggagaacaga tggtaagaag 1080

tggcaatgca agagtgctgt tcttccgggt cagaagtact gtgccacaca catgcacaga 1140

ggtgctaaaa agcggctcac aagccatgaa ccggcagtta ccattgcgcg gttgcctaac 1200

tcttcagtca caaccaaaat gcagaaagcg cattgtgcaa ttccaaacac aaatctttcc 1260

atgtcagtcc cagcaagtga accattcata caatgtaatg agaaaagtca aagtaccagt 1320

gacactgata ccaccatcag tgacaccttg aatgagtgta gctatgcttc tttctga 1377

<210> 99

<211> 1008

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 99

atgagcgttc ctccgccgta tgcggcggcg atgtggacgc cgttcacggc ggcacagtgg 60

cacgagctgg agcaccaggc cctcatcttc aagtacctca aggcgggtct ctcggttccc 120

cctgacctcc ttctccccat tcgcaagagc ctccagttga tgtctcatcc atctctgggg 180

ttttatggga agaagataga ccctgaaccg ggtcggtgca ggagaaccga tgggaaaaag 240

tggaggtgtt cgagggatgc gcaccctgac tccaagtact gcgaccgcca tatgatacgg 300

cggcgttacc gttcaagaaa gcctgtggaa tcatctcaaa ctcactcttc ttcttcttct 360

tcttcttctt cttctgctac tgctgcttct tcaaattcaa atcctgttgc tggtggtggt 420

ggtggttctg ttgctaatgt ttctggaact gcaactgctg caaaaaccct tcacaccctt 480

cccttgcaca ccaatggtgc aagggaaggt ttcactttca cccttgggaa caacaccaac 540

accaccctcc cacaccttca catgaacccc ctcactcttt cagctgacaa taccaagaaa 600

acttacaggt ttggactgaa ctcagaagca gatgagcaca acgtcttaca gaaagatctg 660

ggaagtgtga ggtatcaagg ttatgacttt acctcagatg ccatgtggtc tcaaatgtct 720

cacattccat caaatactgt ttcggaatca agaagtggtt ctactatgct gggcaactgc 780

ttccaacatc aaacaatgcg agatgctgag ctgttgaacc tggaaacggc aaggaccaaa 840

gatcttgtct ttagtggcca gttaagttca gctgggggtt tgaaacagga atatcagtct 900

ccccagtctc tcttcagtga ctgggactgg aagaaggatt taagttcctc tgcccttgag 960

tataagccta acaaggattt taactgcaac ccagatgcca atgtttga 1008

<210> 100

<211> 1155

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 100

atgaatggaa ggaacgttaa cacaaacagg ttccctttca ctccttccca gtggcaagag 60

cttgaacacc aagctctcat ctacaaatac atggcttcag gtatctccat cccccctgac 120

cttctcttca ccatcaaaag aacaacccac ttggactcct caagactatt gcctcaccac 180

cctcaacact ttggatggaa ctatttgcca atggggttgg ggaggaaaat agacccggag 240

ccagggaggt gtagaagaac agatggaaag aaatggaggt gctcaaagga ggcgtatcca 300

gattcaaagt actgtgagag gcacatgcac agagggaaaa atcgttcaag aaagcctgtg 360

gaagttttga aaacaacacc aacgacagca gcagtggcaa caaacacaga tgcctcaacc 420

ccaacaacaa tcttatcaat caccaaaaac agtcctgcac atgcactctc cccaaccact 480

cattctctct ctcatgacac ttaccatcat catcatcatc accctcaccc tcagcaacat 540

tcctcccact ccttcctcta tcatcattct tcgaggccct cttccggtgc tgctttgtca 600

tttcaagaca acagtgcccc cttgtttctc gacactgctt cttgctctca gaataacaac 660

aacactgact gcaggaacag gtatgtgtat ggactgaagg aggaggtgga cgagcatgcc 720

ttcttcacag aaccttctgg aactatgaga agcttctctg cttcctcaat ggaagattca 780

tggcaactca caccactgac tataagctcc tcttcctctt cgaaacagag gaactgctct 840

ggtttatcca atgacaacaa cgagtactcc tacttgcaac ttcagagcct caatggcaac 900

aactcaaaac agccacaaca agatcaaggt tgctacatat caggcagtga tgtcaagtgc 960

gaaacattca tgaaacttgg gaaagaagaa cctcagaaaa ccgttcatcg cttcttcgat 1020

gaatggcccc ctaaaagcag aggatcgtgg cttgatttgg atgataaatc atccaccacc 1080

cagctttcaa tttccattcc aacttctact catgattttg caactttcaa ttcaacaacc 1140

caacgagatg gttga 1155

<210> 101

<211> 1098

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 101

atgatgaatg gaagaaacag gtttcccttt accccatcac agtggcaaga gcttgaacac 60

caagctctca tctacaagta catggcttca ggcatttcca ttccccctga tcttctcttc 120

accataaaaa ggagctattt tgattcccct ctctcctcaa ggcttttgcc taaccagcca 180

caacactttg gatggaacta ccttcagatg ggtttgggaa gaaaaataga ccctgagcca 240

ggtaggtgta gaagaactga tggcaagaaa tggagatgct caaaagaagc atacccagat 300

tctaagtact gtgagaggca catgcacaga gggaagaatc gttcaagaaa gcctgtggaa 360

gttttgaaaa caacaacacc atcatcaaca atgacaacaa caaacacaaa ctcaaatgct 420

tcttcaacac aacaagcaat ctcatcaatc accaaaatta atactctttc acctcttgct 480

tcatctgaga ctcaccaaca ccaccctcaa cactatggct cctttctcta tcatcatcac 540

cctccttcaa ggtcctctgg cattggcttg tcctttgaag ataatagggc tcccttgttt 600

cttgacactg gctcttgctc tcagtccaac acagactgca ggagtaggta tgtttatgga 660

gagaaagagg aggtggatga gcatgctttc ttcacagaac cttgtggtgt tatgaaaagc 720

ttctctgctt cctctatgga tgactcatgg caactcacac cattgactat gagttcctca 780

tcttcttctt ccaaacagag gagttccttt ggcttgtcca gtgattactc ttgcttgcaa 840

cttcagagcc actcaaagca gcagcaacaa gagcatcatc aagatcaggg ttgctacatg 900

tttggtggtg gtcaagttgt gaaagaagaa cctcagaaaa cggttcatcg cttctttgat 960

gaatggcccc acaaaggaag agaagggtct tggcttgatt tggatgacaa atcttccaca 1020

acccaacttt caatttccat ccccacatgt tctcatgatt ttccaacttt cagttctaga 1080

aaccaccacg atggttga 1098

<210> 102

<211> 1014

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 102

atgagcgttc ctccgccgtc tacggcggcg atgtggacgc cgttcacggc agcgcagtgg 60

cacgagctgg agcaccaggc cctcatcttc aagtacctca aggcgggtct ctcggttccc 120

cctgacctcc ttctccccat tcgcaagagc ctccaattga tatcgtctca cccatcgatg 180

gggtattatg ggaagaagat agaccctgaa ccgggtcggt gcaggagaac cgatgggaaa 240

aagtggaggt gttcgaggga tgcacaccct gactccaagt actgcgaccg ccatatgata 300

cgacgtcgtt accgttcaag aaagcctgtg gaatcatctc aaactcactc ttcttcttct 360

gcttctgctg cttcttcaaa ttcaaaccct gttgctgctg gtggtggtgg tggttctgtt 420

gctaatgttt ctgcaactgc tgcaaaaaac cttcacacac ttcccttgca catcaatggc 480

gcaagggaag gtttcacttt cacccttggg aacaacacca gcaccaacac caacaccaac 540

accaacaccc tccctcacct tcacatgaac cccctcactc tttcagctga caataccaag 600

aaaacttaca ggtttggact gaactcagaa gcagatgagc acaacgtctt acagaaagat 660

ctgggaagtg tgaggtatca aggttatgac tttacctcag atgccatgtg gtctcaaatg 720

tctcacattc catcaaatac tgtttcggaa tcgagaatcg gttctactat gctgggcaac 780

tgcttccagc atcaaacaat gcgagatgct gagctgttga atctggaaac ggcgaggacc 840

aaagaccttg tctttagtgg ccagctaagt tctgcagggg gtatgaaaca ggaatatcag 900

tctccccagt ctctcttcag tgactgggac tggaagaagg atttaagttc ctctgccctt 960

gagtataggc ccaacaagga ttttaactgc aacccagatg tcaatgttga ttaa 1014

<210> 103

<211> 1803

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 103

atggatcttg gggtggtggg tttggagggg gtggtgggtt cagaaagtgg ttgtgtgttt 60

ggttcttctc ttgtttcaga tcctgagaca aagcacaagt ggtacggatc tggtttgctc 120

aagcaagaga gatctgccat agctactgaa gatgatgagt ggagaatttc caaagttgct 180

aaaactgatc atgacatgtc ttcagcctcc aaagcaatgc tctttcagca aagaaacaac 240

tctttgttga gatctaataa tgcaactctc ttctctgatg gtcatcacca atcacaaatg 300

ttgagcttct cttctccaaa gtcagattct ttgttgatag ataaggcttc ctcaaatgcc 360

acattgcctt tttcttccca ccaattgtct agctacacca gaaatacagg ttacaattca 420

ggaagcataa gcatgcatgg ggctttggct agtgtgagag ggccattcac tccatcacag 480

tggatggagc ttgaacacca agccttgatc tacaagtaca tcacagcaaa tgttcctgtg 540

ccaactcatc ttctcattcc catcagaaaa gcacttgatt ctgttggctt ctgcaacttc 600

tcagccggac tcctcagacc caactcattg ggatggggag gtttccatct aggattctcg 660

aacaatacag accctgagcc agggaggtgt aggagaacag atggaaagaa atggcgatgt 720

tcaagagatg ccgtagtaga tcagaagtat tgcgagcggc acatgaaccg aggacgccat 780

cgttcaagaa agcctgtgga aggccaatca ggccatgccc tcaccaccac caccagtaat 840

acacctaatg cttcctccaa ctctgtggtg cctggcaaca acaacaacac ctttgcacac 900

aacaatgtgc accaccctat tcctcctcat tcctctccgg tcaacaccat cactaggatg 960

tttacaagca acaaagagaa taataacagt accagtgaga ggatgcagga ccctgcactt 1020

cccatgcttc ctcccactct tgagctgaaa ccaaaggaga acaatccttt catgattcat 1080

aaacaccaaa tcccatctga tgaatactca agtaggaaca acaatgagtt tgggcttgtc 1140

acttctgatt ctttgcttaa cccctcagag aaaagaagct ttacttcttc acaaaagaat 1200

gattcttctg agtcccaaca acaacattcc ctcaggcact tcattgatga ctctcccaaa 1260

ccacagtcta atcatcatca tcgttcgtcg tctatatggc ctgaacttga caacatgcag 1320

tcagacagga ctcagttatc aatctccata ccaatatctt cctcagatca cttcatgtca 1380

ttcactactt ccttgccctc gaacgagaaa ctcacgttgt caccacttag gctttcaagg 1440

gagttagacc ccattcaaat ggggttggga gtgggaagtg cccccaatga agcaaacact 1500

aggcaagcca attggattcc aatcacttgg gagagttcaa tgggtggtcc tcttggagag 1560

gttttgaacc ttagtaacaa taacaacagc aatgctagtg atcaatgtgg caagaacaac 1620

aacaacactt cagctctcaa cctcatgaaa gatggatggg acaataatcc tccatcaggg 1680

tcatccccaa ctggggtgct tcaaaaatct gcatttggat cactttccaa tagcagtgct 1740

gggagcagtc caaggggggc agagaacaac aaagaaggtg ccaccttgtg caatgccttg 1800

taa 1803

<210> 104

<211> 1134

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 104

atgatgaatg gaaggaacgt tgacacaaac aggttcccct tcactccttc ccagtggcaa 60

gagcttgaac accaagccct catctacaaa tacatggctt caggtatttc catcccccct 120

gaccttctct tcaccatcaa aagaacaacc cacttggact cctcaagact cttgcctcaa 180

cactttgggt ggaattattt gccaatggga ttggggagaa aaatagaccc agagccaggg 240

aggtgtagaa gaacagatgg gaaaaaatgg aggtgctcaa aggaggcgta tccagattca 300

aagtactgtg agaggcacat gcacagaggg aaaaaccgtt caagaaagcc tgtggaagtt 360

ttgaaaacaa caccaatgac agcagcaaca aacacagatg cctcaacccc aacaacaatc 420

ttatcaatca ccaaaaacag tcctgtactc ttcccaacca ctcattctct gtctcatgac 480

acttaccatc atcatcacca tcatcactct caccctcagc aacattcctc ccactccttc 540

ctctatcatt cttcgaggcc ctcttccggt ggtgtttctt tgtcatttca agacaacagt 600

gcccccttgt ttctcgacac tgcttcatgc tctcagaata acaacaacac tgactgcagg 660

tatgtgtatg gactaaaaga ggaggtggat gagcatgcct ttttcacaga accttctgga 720

actatgagaa gcttctctgc ttcctcaatg gaagattcat ggcaactcac accactgact 780

ataagctcct cttcctcttc aaaacagagg agttgctctg gtttatccaa tgacagcaat 840

gagtactcct acttgcaact tcagagcctc agtggcaaca actcaaagca tccacagcaa 900

gatcaaggtt gctacatatc aggcagtgat atcaagtgcg aaacattcat gaaacttggg 960

aaagaagaac ctcagaaaac cgttcatcgc ttcttcgatg aatggcctcc caaaagcaga 1020

ggatcatggc ttgatttgga tgataaatca tccacaaccc agctttcaat ttccattccc 1080

acttctactc atgattttgc aactttcagt tcaacaaccc aacgagatgg ttga 1134

<210> 105

<211> 1830

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 105

atggatcttg gggtggtggg tttggagggg gtggtgggtt cagaaagtgg ttgtgtgttt 60

ggttcttctc ttgcttcaga tcctgagaca aagcacaagt ggtacggatc tggtttgctc 120

aagcaagaga gatctgccat agctactgaa gatgatgagt ggagaatttc caaagttgct 180

aaaactgatc atgacatgtc ttcagcctcc aaagcaatgt tctttcagca aagaaacaac 240

tctttgttga gatctaataa tgcaactctt ttctctgatg gtcatcacca atcacaaatg 300

ttgaacttct cttctccaaa gtcagagact ttattggtag ataaggcttt ctcaaatgcc 360

acattgcctt tttcttatca tcaattgtct agttacagca gaaatacagg ttacaattcg 420

ggaagcataa gcatgcatgg ggctttggct agtgtgagag ggccattcac tccatcacag 480

tggatggagc ttgaacacca agccttgatc tacaagtaca tcacagcaaa tgttcctgtg 540

ccaactcatc ttctcattcc catcagaaaa gcacttgatt ccgttggctt ctgcaacttc 600

tcatctggac tcctcagatc caactcgttg ggatggggag gcttccattt gggattctcc 660

aacagcacag accctgagcc agggaggtgt aggagaacag atgggaaaaa atggcgatgc 720

tcaagagatg ctgtagtaga tcagaagtat tgcgaacggc acatgaaccg aggacgccat 780

cgttcaagaa agcctgtgga aggccaatca ggccatgccc tcaccaccac taacacacct 840

aatgcttcct caaactcaac cgtggtgccc ggcaaccaca acaacaacac ctttgcacac 900

atcaatgtgc accaccctct tcctcctcat tcctctccag ccaataccat caataggatg 960

tttatgagta ataataaaga gaacaacaac acgagtgaga ggatgaagga tggccttgcc 1020

cttcccatgc tacctcctac tcttgagctg aaaccaaagg acaacaacaa ctctttcatg 1080

gttcataaac accaagaacc atatgatgaa tcctcaagga acaagaatga gtttggactc 1140

gtcacttctg attccttgct taacccttca cagaaaagaa gctttgattc ttcttcttct 1200

tcttcacaaa aggatgattc ttctgagtcc caacaacaac attccctcag gcacttcatt 1260

gatgactctc ccaaaccaca gtctcatcat aatcataacc atcgttcgtc gtcatctatt 1320

tggcctgaac tcgacaacat gcagtcagac aggactcagt tatcaatctc cataccaata 1380

tcttcctcag atcacttcat gtcatttgca acttcctcgc cctcgaatga aaaactcaca 1440

ttgtcgccac taaggctttc gagggagttc gaccccattc aaatgggatt aggagtggga 1500

agtgcctcca atgaagcaaa cactaggcaa gccaattgga ttccaatcac ttgggagagt 1560

tcaatgggtg gtcctcttgg agaggttttg aaccttagta acaataataa taacagcaat 1620

gcaagtgatc aatgtggcaa gaacaacaac aacacttcag ctctcaacct catgaaagat 1680

gatgacgatg atgatgggtg ggacaatagt cctcctccaa tagggtcatc accaactggg 1740

gtgcttcaaa aaacagcatt tggatcactt tccaacagca gtgctgggag cagtccaaga 1800

ggggcaccag agaacaacaa caaagaatag 1830

<210> 106

<211> 1800

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 106

atggatcttg gggtggtggg tttggagggg gtggtgggtt cagaaagttg ttgtgtgttt 60

ggttcctctc ttgcttcaga tcctgagaca aagcacaaat ggtacggatc tggtgtgctc 120

aagcaagaga gatctgccat agcaagtgaa gatgatgagt ggagaacttc taaagtggcc 180

aaaactgatc atgacatgtc ttctgcctcc aaagcaatgc tctttcagca aagaaacaac 240

tctttgttga gatctaatgc tacccttttc tctgatggcc atcatcacca atcacaaatg 300

ttgagcttct cttctccaaa gtcagagtct ttgttggtag ataaggcttc ctcaaatgcc 360

acattgcctt tttcttacca ccaattgtct agcaacacca gaaatgcagg ttacagttca 420

ggaagcataa gcatgcatgg ggctttggct ggtgtgagag ggccattcac tccgtcacag 480

tggatggagc ttgaacacca agccttgatc tacaaataca tcacttcaaa cgtgcctgtg 540

ccaacccatc tcatacccat tagaaaagca cttgattctt tgggcttctg caacttttca 600

actggactcc taaggcccaa cgcattggga tggggaggtt tccatctggg attctcgaac 660

aacacagacc ctgagccagg caggtgtagg agaacagatg gaaaaaaatg gcgatgctcg 720

agagatgccg tagtggatca aaagtattgc gagcggcaca tgaatagagg acgccatcgt 780

tcaagaaagc ctgtggaagg ccaattaggc catgccctca ccaccaccac caccaccaat 840

acacctaatg cttcctccaa ctctaccgtg gtgccccgca acaccaccac caccaccacc 900

tttgcacaca acaatgtgca ccaccctctt ccacctcatt cgtctcaggc caacaccatc 960

aataggatgt ttacaagcaa caaagagaat aacagtacca gtgagaggct gcaggaccct 1020

gctcttccca tgctgcctcc cactcttgag ctgaaaccaa aggagaacaa tcctttcatg 1080

attcataaac accacatccc agctgatgaa tactcaagga acagcaatga gtttggactc 1140

gtcacttctg attccttgct taaccctaca cagaaaagaa gctttacttc ttcacaaaag 1200

gatgattctg agtcccaaca acaacattcc ctcaggcact tcattgatga ctctcccaaa 1260

ccacagtctc ataatcatca ccaccatcat cattcgtcgt ctatttggcc cgaactggac 1320

agcatgcaat cagacaggac tcagttatca atctccatac cgatatcttc ctcagatttt 1380

atgtcattca ctacttcctc accctccaac gagaaactca cgttgtcacc attggggcat 1440

tcgagggagt tagaccccat tcaaatggag ttgggaatgg gaagtggtgc ctccaatgaa 1500

gcaaacacca ggcaagccaa ttggattcca atcacttggg agagttcaat gggtggtcct 1560

cttggagagg tattgaacct tagcaataac agcaatgcaa gtgatcaatg tggcaagaac 1620

aacaacactt cagctctcaa cctcatgaaa gatgggtggg acaataatcc tccactaggg 1680

tcatccccaa ctggggtgct tcaaaaatca gcatttggat cactttccaa tagcagtgct 1740

gggagcagtc caagggcaga aaacaacaaa gaaggtgcca ccttgtgcaa tgccttgtaa 1800

<210> 107

<211> 1785

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 107

atggatcttg gggtagtggg tttggagggg gtggtgggtt cagaaagtgg ttgcgtgttt 60

ggttcctctc ttgcttcaga tcctgagaca aagcacaagt ggtacggatc tggtgtgctc 120

aagcaagaga gatctgccat agcaagtgaa gatgatgagt ggggaactta taaagtggcc 180

aaaattgatc atgacatgtc ttctgcccct aaagcaatga tctttcagca aagaaacaac 240

tctttgttga gatctaataa tgctactctt ttttctgacg gccatcacca atctcaaatg 300

ttgagtttct cttctccaaa gtcagagact ttgttggtag atacagcttc ctcaaatgcc 360

acattgcctt tttcttacca tcaattgtct agttacagca gaaatacagg ttacagttca 420

ggaagcataa gcatgcatgg ggctttggct ggtgtgagag ggccattcac tccatcacag 480

tggatggagc ttgaacacca agccttgatc tacaaataca tcactgcaaa catgcctgtg 540

ccaactcatc ttctcatacc catcagaaaa gcacttgatt ctgttggctt ctgcaacttc 600

tcaactggac tcctcagatc caactcattg ggatggggag gtttccatct gggattctcg 660

aacagcacgg accctgagcc agggaggtgc aggagaacag atggaaagaa atggcgatgc 720

tcaagagatg ccgtagtaga tcagaagtat tgtgagcggc acatgaacag aggacgccat 780

cgttcaagaa agcctgtgga aggccaatca ggccatgccc tcaccaccac caccaccact 840

actaacacac ttaatgcttc ctcaaactca accgtggtgc ccggcaacaa cacctttgca 900

cacaacaaag tgcaccaccc tcttccacct aattcctctc cagccaatac catcaatagg 960

atgtttatga ataataaaga gaataacagc acgagtgaga ggatggagga ttgctctgcc 1020

cttcccatgc tacctcccac tcttgagctg aaaccgaagg agaaaaacaa tttcatgatt 1080

cataaacacc aagaccccta tgatgaatcc tcaaggaaca acaatgagtt tggactcgtc 1140

acttctgatt ccttgcttaa ccctacacag aaaagaagct ttgattcttc ttcttcacaa 1200

aaggatgatt ctgagtccca acaacaacat tccctcaggc acttcattga tgactctccc 1260

aaaccaccat ctcataatca tcatcgttcg tcgtccattt ggcccgaact cgacaacata 1320

cagtcagata ggactcagtt atcaatctcc ataccaatat cttcctcaga cttcatgtca 1380

ttcactactt cctcaccctc caacgagaaa ctcacgttgt cgccacttag gctttcgagg 1440

gcgttagacc ccattcaaat ggggttggga gtgggaagcg gtgcctccaa tgaagcaaat 1500

cctaggcaag ccaattggat tccaatcact tgggagagtt caatgggtgg ccctcttgga 1560

gaggttttga accttagcaa taacagcaat gcaagtgatc aatgtggcaa gaacaacact 1620

tcagctctca acctcatgaa agatgatgat gatgatgggt gggacaatag tcctccacta 1680

gggtcatcac caactggggt gttgcaaaaa acagcatttg gatcactctc caacagcagt 1740

gctgggagca gtccaagggg ggcaccagag aacaacaaag aatag 1785

<210> 108

<211> 1002

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 108

atgaacatca gtggcggagg aggaactgtg atgggtttca gtagtaatgg gaggtcccca 60

ttcacagtgt ctcagtggca ggaactggag caccaagctt tgattttcaa gtacatggtt 120

gcgggtcttc ctgtgcctcc cgatctcgtc ctccccattc agaagagctt cgactctact 180

ctctctcacg ctttctttca ccatcccaca ctgagttatt gttccttcta tgggaagaag 240

gtggaccctg agccaggacg atgcaggagg actgatggaa aaaagtggag gtgctccaag 300

gaagcatacc cagactccaa gtactgcgag cgccacatgc accgtggccg caaccgttca 360

agaaagcctg tggaatcaca aactatgact cactcgtctt caactgtcac atcactcact 420

gtgactggtg gtggtgacag taatggaact gtaaacttcc aaaaccttcc cacaaatgcc 480

tttggtaatc tccagggtac tgattctgga actgaccgca cgaattatca tctagattcc 540

attccctatg cgattccaag taaagaatac aggtgtcttc aaggacttaa atctgagggt 600

ggtgaacact gcttcttttc tgaagcttct ggaagcaaca aggttctcca aatggagtca 660

cagctggaaa acacatggcc ttcgatgtca accagagttg cctctttttc tacatcaaaa 720

tcaagtactg attccctgtt gcatagtgat tatccccaac attcgttttt atctggtgaa 780

tatgcatcgg gagaacacgt gaaggaggag ggccagcctc ttcgaccttt ttctaatgaa 840

tggcctaaaa gcagggagtc atggtctggt ctggaagatg atatatccaa ccaaacagcc 900

ttctccacaa ctcaactctc aatatccatt cctatgtctt ccgatttctc tgcaacgagc 960

tctcagtccc cacatggtga gaatgagatt caatttaggt aa 1002

<210> 109

<211> 1737

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 109

atgggtgaat tatttggcgt tggaaaaaga aggaacatca gcagcagcaa caacaacaac 60

aacagttcta gtagtagcgt tcttgggttg gatgtgaagg tgcaacagag ccctgaagca 120

ttattccata ataggatgat gatgatggcg catcataatc atcaccaccg tccattgtca 180

tcaccctttg ataataatgg tgatggcgat ggtcccacga cttacatgtc ttttactaat 240

catataaacc ttgttagtgg tgcttcttct gttcttggtc ctgctattga tgctggctgt 300

ggtgctgctc ctcctgcacc tgtaagaact ttgcagcctt ttgacatttc ttcttatact 360

tcttctccca ccaccactac cacaaccttc aacttcaaac ccccttcagc aggtgtgatg 420

gcggcttcgt tggggtttcc tttcacaagt gcacaatgga gggagcttga aagacaagct 480

atgatataca agtacatgat ggcttctgtt cctgttccac atgatctcct cacaccctct 540

tctcgctctt cctgcatgga tggtggtttc aatctgaggt tggcaaatag cactgaccct 600

gagccaggta ggtgtagaag aacagatggt aaaaaatgga gatgttcaag agatgtggct 660

cctaaccaca agtactgtga gcgccatatg catagaggcc gtccccgttc aagaaagcct 720

gtggaagtta acaccaacag caccaccact cccactagcg tcaacaataa caaccatcaa 780

atcaaaaagg ctcgccatga gtgtaataat aatccttttg ctacacctga cgttactgcg 840

gctatttcca accccacatc cagaaaaaat ggatcttctc cccattttct tgggtctact 900

accactcagc cataccttga ttcttccctc tcccttgata actttggtct aaaagctgct 960

agttttgact ccgtggcttc tgtttctgct aataaggaac ccaggggttt agagtggatg 1020

ctgaatggag atcctatttc cctgggtgct tctgactcac aatggcagtc tctgatgcac 1080

aataaagatg gaatgaccag tgttagttcc tgtaacacca ccgagtctca gtatctgaat 1140

tcattagcac tatataactc tggactagaa caacagaata gacgccatcc tttgttcctg 1200

aaccctcttg ttgttcccat ggaaaatctc caaccggaga aaccaagggg ttttattgat 1260

gcttggtcta acgctgaaag caatgccaac accaacacca ccaacaagaa ctctgctgca 1320

tcaattggta aattatccct ttcttctctt gatctatcaa tggggggtgc tgctgtgaat 1380

gaagatgtgg gtaatgttaa catgggtttg ggcctaatgg agcctaatgg aaaaacgcac 1440

actggtacta aaatttctct ctccaattgg caaaacccag caccttgggt ggcttcatca 1500

cttgggggtc cactagctga agttctaagg tcaagcacag tcactgccac caccaccacc 1560

aatgaagcaa cctccaacac accctcgcca gccaccacta cacatgctga atctccatct 1620

ggggtgttgc agaaaacgct tgtttcattg tctgatagca gtaacaatag cagcccaagg 1680

gttgcatcat caagggccaa ttctgagatg gccttgctaa ggtttcaatc aaattaa 1737

<210> 110

<211> 927

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 110

atgagtaagt ggcctttcac aatatctcag tggcaggaac tggaacatca agctttaatt 60

tacaaataca tggtggctgg tcttcctgtg cctcctgatc tagtcattcc cattcagaac 120

agcttccact ccatttccca aaccttcttg caccatccct ctaccaccat gagttattgt 180

tccttctatg ggaagaaggt ggacccggag ccaggacgat gcaggaggac tgatgggaaa 240

aagtggaggt gctccaagga agcctaccca gactccaagt actgtgagcg acacatgcac 300

cgtggccgca accgttcaag aaagcctgtg gaatcacaaa ctatgacaca gtcatcatcc 360

aatgtgtcat cattgactgt aactgctggc agcagcacca gtgcaactgg aaatttccag 420

aacctttcca ccacaaatgc atatggtaat ccccaaggga ctgcttctgg aacagaccaa 480

acccactatc acatggattc cattccctat gggatcccaa gtaaagaata caggtatttt 540

caaggatcta aatctgagga acatagtttc ttgtccaaaa ctttaggaag caacagggtt 600

ctacacatgg agccacagat ggacaacact ttgatgccaa ccggtggagt tgcctcattc 660

tctacattga gatcaaataa taattccatg ttgcagggtg attatctgca gccttctttc 720

ttatctagtg aatatgcctc ggcagaaact gtgaagcaag agggtcagtc ccttcgaccg 780

ttctttgatg aatggcctaa aagcagggac tcatggtctg gtctggaaga tgagagatcc 840

aatcacactc aactctcaat atccattcct atgtcatcgt caaatttctc tgcaactagc 900

tctcattccc cacatggtga gatttaa 927

<210> 111

<211> 1008

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 111

atggacttgc agttgaagca atggagtaac cggcatgagt cagaacaaga acattattcc 60

ccaaacatgc caaaatttct ccctcaacac cacccaccac catctccctc tgcactccct 120

ctctttgtac ctgaacaacc caacaccaaa gtctgcaccc tgtcagcatt ttctgattcc 180

acactacctt ctgctcccag attttccagg atggagagtt gcttcagctt tgcacagtgg 240

caagagcttg agttgcaggc tctgatattc aggtacatgc tggccggtgc tcctgttcct 300

cctgagctcc ttctaccaat caagaaaagc ttccttcaac tttataaccc tcctttgttg 360

gaatcagggt actactgggg aagagcagcg ctggatccgg agccggggcg gtgccggagg 420

accgacggca agaagtggcg gtgctcgaag gacgcggtgg cgggtcagaa gtactgcgac 480

cgccacatgc atcgtggccg aaaccgttca agaaagcctg tggaacaacg tgatggatct 540

ctttctgcta tagcctccgt ttcttcttca ccctcttctt catttaatct ccttcacctc 600

agtgaaagtt cctctggggc caagagtgac aacaagagct tctttgaaaa ccatgatcat 660

gtggatgggg atggaaattc agccaaatct gatggccatg tcttgaggca tttctttgat 720

gattggccaa ggacactgca agagcctgac aatggtgaaa gcaatggttg ccagaacaac 780

aactcaggaa catgtctttc tatgtcaaca ccaggaatca cttcctcgga tgtgtcgttg 840

aaattgtcca ctggccatgg agaggatgcg tgccacgcgg cctcaatggg aggaccactt 900

gcagaggcat taagatcatc caccaccagc tccacttctt caccaaccag tgttctgctt 960

cagttgcctc ctagttctgc ttctgaggct agtttcatta gcacctaa 1008

<210> 112

<211> 1026

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 112

atgaacaaca gcagtggcgg aggaggacga ggaactttga tgggtttgag taatgggtat 60

tgtgggaggt cgccattcac agtgtctcag tggcaggaac tggagcacca agctttgatc 120

ttcaagtaca tgcttgcggg tcttcctgtt cctctcgatc tcgtgttccc cattcagaac 180

agcttccact ctactatctc gctctcgcac gctttctttc accatcccac gttgagttac 240

tgttccttct atgggaagaa ggtggaccct gagccaggac gatgcaggag gactgatgga 300

aaaaagtgga ggtgctccaa ggaagcatac ccagactcca agtactgcga gcgccacatg 360

caccgtggcc gcaaccgttc aagaaagcct gtggaatcac aaactatgac tcactcatct 420

tcaactgtca catcactcac tgtcactggg ggtagtggtg ccagcaaagg aactgtaaat 480

ttccaaaacc tttctacaaa tacctttggt aatctccagg gtaccgattc tggaactgac 540

cacaccaatt atcatctaga ttccattccc tatgcgattc caagtaaaga atacaggtat 600

gttcaaggac ttaaatctga gggtggtgag cactgctttt tttctgaagc ttctggaagc 660

aacaaggttc tccaaatgga gtcacagctg gaaaacacat ggcctttgat gtcaaccaga 720

gttgcctctt tttctacgtc aaaatcaagt aatgattccc tgttgcatag tgattatccc 780

cggcattcgt ttttatctgg tgaatatgtg tcgggagaac acgtaaagga ggagggccag 840

cctcttcgac ctttttttaa tgaatggcct aaaagcaggg agtcatggtc tggtctagaa 900

gatgagagat ccaaccaaac agccttctcc acaactcaac tctcaatatc cattcctatg 960

tcttccaatt tctctgcaac gagctctcag tccccacatg gtgaagatga gattcaattt 1020

aggtaa 1026

<210> 113

<211> 1155

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 113

atggacttcc atctgaagca atggagaaac cagcacgagt cagaggaaca acattctaca 60

aagatgccaa aacttctccc tgaatcccat caacaacaac agccatcagc ctctgcactc 120

cctttgtttg tacctgaacc caacagcagc aaagtcagca ccctgtcaga ttcaacatta 180

gcttctgcta caatgacttc taccaccact aacagattat ttcccaggat ggggagctac 240

ttcagcttgt ctcagtggca ggagcttgag ttgcaggctt tgatattcag gtacatgttg 300

gctggtgctg ctgttcctcc tgaactcctt caaccaatca agaaaagcct tcttcattct 360

ccacactatt acctccatca ccctctccaa cattaccaac cttctgcttt gttgcaatca 420

gggtattggg gtagaggagc gatggatccg gagccagggc ggtgccggag aaccgacggc 480

aagaagtggc gctgttcgag ggacgtggtg gctgggcaaa agtactgtga gcgccacatg 540

caccgtggaa gaaaccgttc aagaaagcct gtggaactac ccacaccaac tagtgctatt 600

aacaattgtg gtgtaactgg agttggatcc ctaggaccag gtgcttcatc atcttccatt 660

tgttcaccac ccttagcttc tgcttcattc aaatctcctt ttgatcttca tcttgatgaa 720

cgttcctctg ggaccaagaa tgaagacgaa gatcatgtgg gtggggatgg cagatcaggt 780

ggaggtggtg gccatatgct gaggcatttc ttcgatgatt ggccacgatc actccaagac 840

tctgacaacg ttgaaaacaa tgctgctgct ggccgtagcc tctctatttc aatgcccggt 900

gcttcctcgg atgtgtcatt gaaattgtcc acgggctatg gagaggactc gggcccagga 960

aatgagaatg taagcctcga gccagagcag ctgcagttga attgggccgg aggatgggcc 1020

tcgtctaatc aagtggcttc gatgggaggt ccacttgctg aggcactcag atcatctact 1080

tcaacctcat ctcccactag tgttttgcat cgtcacttgc ctcgtggatc tgagaccagc 1140

tttattagca cctga 1155

<210> 114

<211> 1407

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 114

atggaagcta agcctcttcg aactgttccc tcttcacaca acacttctgg ggtaggaggt 60

ggaccccaga agaagattgg catggaacac aagatggaaa gtcgtgttgt tgatgagagg 120

aagagggttg ttatggtcaa ggaagagaac agcacttctt ctcccaacag tgttgaactt 180

catctcgggt ttgatgcttc tcattcgact ccacaagaaa taaaccatgt gatcactgaa 240

gctcagaggc gtgagcttca ccatcaagtt ttcatcttca accatttggc ttataatctt 300

cctcctcctt atcaccttgt gcaattccct agcaacatgt cagaatacag tttcctgggt 360

tttgatcatg ggattatggt ggatccagaa cctcataggt gtagaagaac tgatggaaag 420

aaatggaggt gtggtaagaa tgtggtgcct aaccagaagt actgtgaaag gcacatgcac 480

agaggtcgaa atcgttcaag aaagcctgtg gaaacatctc aagttaactc tcctttggca 540

acaaagcctt gtagcaagtc acacaccaaa ccatcctcaa agacacaatt tgaaatttca 600

agtccaaacc ttatcgccat tccacatatt gacacatcaa gtaccccatc aaggagcctc 660

agtgtcacca attgctcttc tgctaataat aggtcgaaaa atagggcagg ttatgctgac 720

tacctcatgt cgttttcttc cgcgtccaca gtgtcccctg gaaccactct tgccactcca 780

gttgccccta agatagctgc cttcagcagt gcgacatccg ttgttgcttc agatagcaaa 840

agttgcctaa agatatgcca gaaagataac cagtccaaga gctgtatcag caacaacatc 900

ggtgttaaaa gcggtgggaa aggaagcatt gttggtgata ctaatactaa tggcatctct 960

actggaataa gcttctcccc aacgagtgtt cttcaagttt cagtttctgg ttgcaaccct 1020

tcatacctga atgacggaac caacatagaa gctgcatccg gtaggtgccg gagaacagat 1080

ggtaagaagt ggcagtgcaa gagtgctgtt cttcctggtc agaaatactg tgccacacac 1140

atgcatagag gtgccaaaaa gcgtctcaca agccatgaac cagcagctac tgctaccagt 1200

tccgccgtta ccgttgcgcg gttgccttac tcttcagcca ctaccaacat acagaaagcg 1260

cattgtgcaa ttccaaacac aaatctttcc atgtcagtcc aagccaggga agcattcata 1320

caatgtaatg agaaaagtca aagtagcagt gacactgata ctactatcag tgacaccttg 1380

aatgagtata gctatgcttc tttctga 1407

<210> 115

<211> 1083

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 115

atgatgagtg caagtgcagg tgcaagaaat aggtctccgt tcacacaaat tcagtggcaa 60

gagcttgagc aacaagctct tgtttttaag tacatggtta caggaacacc tatcccacca 120

gatctcatct actctattaa aagaagtcta gacacttcaa tttcttcaag gctcttccca 180

catcatccaa ttgggtgggg atgttttgaa atgggatttg gcagaaaagt agacccagag 240

ccagggaggt gcagaagaac agatggcaag aaatggagat gttcaaagga ggcatatcca 300

gactcaaagt actgtgaaag acacatgcac agaggcagaa accgttcaag aaagcctgtg 360

gaagtttctt cagcaacaag caccgccaca aacacctccc aaacaatccc atcatcttat 420

accagaaacc tttccttgac caataacagt aaccccaaca taacaccacc accaccaccc 480

tcttctttcc ctttctctca tttgccctct tctatgccta ttgatcagtc ccaacccttt 540

tcccaatcct accaaaactc ttctctcaat cccttcttct actcccaatc aacctcctct 600

agacccccag atgctgattt tccaccccaa gatgccacca cccaccacct attcatggac 660

tctgctggct cttattctca tgatgaaaag aattatagca ggcatgttca tggaataagg 720

gaagatgtgg atgagagagc tttcttccca gaagcatcag gatcagctag gagctataca 780

gactcgtacc aacaactatc aatgagctcc tacaagtcct attcaaactc caactttcag 840

aacattaata atgatgccac caccaaccca agacagcaag agcagcaact acaacaacaa 900

caacactgtt ttgttttagg gacagacttc aaatcaacaa ggccaagcaa agagaaagaa 960

gctgagacaa caacaggtca gagacccctt caccgtttct ttggggagtg gccaccaaag 1020

aacacaacaa cagattcctg gctagatctt gcttccaact ccagaatcca aaccgatgaa 1080

tga 1083

<210> 116

<211> 1098

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 116

atgatgaatg gaaggaacag gttccccttt accccatcac agtggcaaga gcttgaacac 60

caagctctca tctacaagta catggcttca ggcatttcca ttccacctga tcttctcttc 120

accataaaaa ggagctattt tgattcccct ctgtcctcaa ggcttttgcc taaccagcca 180

cagcactttg gatggaacta ccttcagatg ggtttgggaa gaaaaataga ccctgagcca 240

ggtaggtgta gaagaactga tggcaagaaa tggagatgct ccaaagaagc atacccagat 300

tcaaagtact gtgagaggca catgcacaga gggaagaatc gttcaagaaa gcctgtggaa 360

gttttaaaat caacaacaac accatcatca tcaacaacaa actcaaatgc ttcttctaca 420

caacaagcaa tctcatcaat caccaaaatt aatagcactc tctcacctct tgcatcatct 480

gagactcacc aacaccacca ctatcctcaa cactatggct cctttctcta tcatcatcac 540

cctccttcaa ggtcctctgg cattggcttg tcttttgaag acaacagtgc tcccttgttt 600

cttgacactg gctcatgctc tcagtccaac acagactgca ggagtaggta tgtttatgga 660

gagaaagagg aggtggatga gcatgctttc ttcacagaac cttgtggtgt tatgaaaagc 720

ttctctgctt cctctatgga tgactcatgg caactcacac cattgactat gagctcctca 780

tcttcatctt ccaagcagag gagttccttt ggcttgtcca gtgattactc ttgcttgcaa 840

cttcagagcc actcaaagca gcagcagcaa gagcatcatc aagatcaggg ttgctacatg 900

tttggtgctg gtcaagttgt gaaagaagaa cctcagaaaa cggttcatcg cttctttgat 960

gaatggccac acaaaggaag agaaggctct tggcttgatt tggatgacaa atcttccaca 1020

acccaacttt caatttccat ccccacatct tctcatgatt tttcaacttt cagttccaga 1080

acccaccatg atggttga 1098

<210> 117

<211> 1038

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 117

atgatgagtg caagtgcaag aaataggtct cctttcacgc aaactcagtg gcaagagctt 60

gagcatcaag ctcttgtttt taagtacatg gttacaggaa cacccatccc accagatctc 120

atctactcta ttaaaagaag tctagacact tcaatttctt caaggctctt cccacatcat 180

ccaattgggt ggggatgttt tgaaatggga tttggcagaa aagtagaccc agagccaggg 240

aggtgcagaa gaacagatgg caagaaatgg agatgctcaa aggaggcata tccagactcc 300

aagtactgtg aaagacacat gcacagaggc agaaaccgtt caagaaagcc tgtggaagtt 360

tcttcagcaa taagcaccgc cacaaacacc tcccaaacaa tcccatcttc ttatacccga 420

aacctttcct tgaccaaccc caacatgaca ccaccctctt ccttcccttt ctctcctttg 480

ccctcttcta tgcctattga gtcccaaccc ttttcccaat cctaccaaaa ctcttctctc 540

aatcccttct tctactccca atcaacctcc tctagacccc cagatgctga ttttccaccc 600

caagatgcca ccacccacca gctattcatg gactctgggt cttattcgca tgatgaaaag 660

aattataggc atgttcatgg aataagagaa gatgtggatg agagagcttt cttcccagaa 720

gcatcaggat cagctaggag ctacactgaa tcataccagc aactatcaat gagctcctac 780

aagtcctatt caaactccaa ctttcagaac atcaatgatg ccaccaccaa cccaagacag 840

caagagcagc aacaacaaca acactgcttt gttttgggga cagacttcaa atcaacaaga 900

ccaactaaag agaaagaagc tgagacagct acgggtcaga gaccccttca ccgtttcttt 960

ggggagtggc caccaaagaa cacaacagat tcatggctag atcttgcttc caactccaga 1020

atccaaaccg atgaatga 1038

<210> 118

<211> 1167

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 118

atggacttcc atctgaagga atggagaaac cagcatgagt cagaggaaca acaacattct 60

acaaagatgc caaaacttct ccctgaatcc catcatcaac agccatctgc cactgcactc 120

cctttgtttg tacctgaacc caacagcagc agcaaagtca gcaccctgtc agattcaaca 180

ttagcagctg aaactgaaac aatgaccact acaaccacta acagattatt tcccaggatg 240

gggagctact tcagcttgtc tcagtggcag gagcttgagt tgcaggcttt gatattcagg 300

tacatgttgg ctggtgctgc tgttcctcct gaactccttc aaccaatcaa gaaaagcctt 360

cttcattccc ctcactattt cctccatcac cctctccaac attaccaacc tgctgctttg 420

ttgcaatcag ggtattgggg tagaggagcg atggatccgg agccagggcg gtgccggaga 480

accgacggca agaaatggcg gtgctcgagg gacgtggtgg ctgggcaaaa gtactgtgag 540

cgccacatgc atcgtggaag aaaccgttca agaaagcctg tggaactacc cacaccaact 600

agtgctaata attgtgatgg tggatctcta ggactaggtg cttcttcatc ttccatttct 660

tcaccacccc tagcttctgc ttcactcaaa tccccatttg atcttcttcg tcttaatgaa 720

cgttcctctg ggaccaagaa tgaagacgaa gaccatgtgg gtggggatgg cagatcaggt 780

ggagggggtg gccatatgct gaggcatttc ttcgatgatt ggccacgatc actgcaagac 840

tctgacaacg ttgaaaacaa tgctgctggc cctagcctct ctatttcaat gcccggaaat 900

gctgctgctg cttcctcgga tgtgtcattg aaattgtcca cgggctatgg agaggaccca 960

ggcccaagaa atgagaatgt gggcctcgtg gcagagcagc tgcagttgaa ttgggccgga 1020

ggatgggcct cgtctaatca agtggcttcc atgggaggac cactggccga ggcactcaga 1080

tcatctattt caacttcatc tcccactagt gttttgcatc acttgcctcg tggttctgga 1140

tctgagacca gcattattag cacctga 1167

<210> 119

<211> 1782

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 119

atgggtgaat tatttggcgt tgggaaaaga agggacatca tcagcaacaa caacagtgct 60

agtagtagcg ttcttgggtt ggatgtgaag gtgcagagcc ctgaagtatt attccataat 120

aggatgacca tgatggggca tcataatcat cacctccatc cattgtcatc cccctttgat 180

aataataacg atatttcctg tgctgctggt gatggcgatg gtgatggtcc cacgacttac 240

atgtctctca ctaatcatat aaaccttgtt agtggtgctt ctgttcttgg tcctgctatt 300

gatggtggct gtggtgctgc tcctgctgca cctgtaagaa ctttgcagcc ttttcaaatt 360

tcttcttata cttctcccac caccactacc acagccttcg aacccttttc aggtgtgatg 420

gcggcttcat tggggtttcc cttcacaagt gcacaatgga gggagcttga aaggcaggct 480

atgatataca agtacatgat ggcttcagtt cctgttccac ctgatctcct cattcctact 540

tcactcacat cctcttctcg ctcttcctgc atggatggtg gtttcaatct gaggttggca 600

aatagcactg accctgagcc aggtaggtgc agaagaacag atggaaaaaa atggagatgt 660

tcaagagacg tggctcctaa ccacaagtac tgcgagcgcc atatgcatag aggccgtccc 720

cgttcaagaa agcctgtgga agttaacacc aacaccactc ccactagcat caacaacaac 780

aataacaacc accaaatcaa aagggctcgc catgagtgta ataatccctt tgctacacct 840

gatgttgctg tggctatttc caatcccact tccagaaaag gtgaatcttc atcccatttt 900

cttgggtcta ctaccactca gccatacctt aaatctcccc tctgtcttgc taacttcggt 960

ctcaaagctg cgagttttga ctccgtggct tctgtttctg caaataagga acccaggggt 1020

ttggagtgga tgctgaatgg agatcctatt tccctggatg cttctaactc ccaatggcag 1080

tctctgatgc ataataaagt tggaatgagc agtgttagtt cctgtaatac caccgagtct 1140

cagtatctga attcatttgc actatatagc tctggactgg aacaacagaa cagacgccat 1200

cctttgttcc tgaatcctct tcttgttccc atgaaaaatc tccaaccaga gaaaccaagg 1260

ggtttcattg atgcttggtc taatgcagaa acagctcaaa gcaatgccaa caccaacaac 1320

aagaactctg ctgcatcaat tggtaaatta tccctctctt ctcttgatct atcaatgggg 1380

ggtggtgctg tgagtgaaga tgttgataat gttaacatgg gtttgggact aatggagact 1440

tatggaaaaa cacacactga tactaaaatc tctctctcaa attggcacaa cccggcacct 1500

tgggtggctt caagttcaac acttgggggt cctctagctg aagttctaag gtcaagcaca 1560

gtcactgcca cgaccaatga agcaacctcc aacgcaacct catcaccagc caccactaca 1620

catgctgaat ctaacagccc tctgggaaca atggtgtcat ctccatccgg ggtgttgcag 1680

aaaaccctta tttcattgtc tgatagcagt aacaatagca gccctacggt tgcatcatca 1740

agggccaatt ctgagatggc cttcctcagc tttaaattct ag 1782

<210> 120

<211> 1011

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 120

atggacttgc agttgaagca atggagaaac cagcatgagt cagagcaaga acaagaacat 60

tattccccaa acatggcaaa atttctatct caacaacaac acccaccacc atttccctct 120

gcactccctc tctttgtacc tgaacaaccc aacaccaaag tcagcacctt gtcagcattt 180

tctgattcca cattaccctc ttctcccaga tttcccagaa tggagagttg cttcagcttt 240

gcacaatggc aagagcttga gttgcaggct ctgatattca ggtacatgct ggccggtgct 300

cctgttcctc ctgagctcct tctaccaatc aagaaaagct tccttcaact ttatcaccct 360

cctaatttgt tggaatcagg gtactactgg cgaagagaag cactggatcc ggagccgggg 420

cggtgccgga ggaccgacgg caagaagtgg cggtgctcga aggacacggt ggcaggtcag 480

aagtactgcg accgccacat gcaccgtggc cggaaccgtt caagaaagcc tgtggaacaa 540

cgtgaaggat ctctttctgc tatagactct gtttcttctt cacactctgc ttcattcaat 600

ctccttcacc tcggtcaaag ttccgctgtg gccaagagtg acagcaagag cttgtctaga 660

aaccgtgatc atgtggatgg ggatggcaaa tcaaatggcc atgtcttgag gcatttcttt 720

gatgattggc caaggacact gcaagagcct gacaatggtg aaagcaatgg aagccagaac 780

aacaactcag gaaaatgtct ttctatgtca acaccaggaa tcgatccctc ggatgtgtcg 840

ttgaaattga ccactggcta tggagaggac gcgtgccagg cagcttcggt gggaggacca 900

cttgcagagg cattgagatc atccaccacc agctccactt cttcaccaac cagtgttctg 960

cttcagttgc ctcctagttc tgcttgtgag accagcttca ttagcaccta a 1011

<210> 121

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 121

cacatgcacc gtggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aatcacaaac tatgactcag 60

tc 62

<210> 122

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 122

catatgatac ggcggcgtta ccgttcaaga aagcctgtgg aatcatctca aactcactct 60

tc 62

<210> 123

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 123

cacatgcaca gagggaaaaa tcgttcaaga aagcctgtgg aagttttgaa aacaacacca 60

ac 62

<210> 124

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 124

cacatgcata gaggtcgaaa tcgttcaaga aagcctgtgg aaacatctca aattaactct 60

ca 62

<210> 125

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 125

cacatgcaca gagggaagaa tcgttcaaga aagcctgtgg aagttttgaa aacaacaaca 60

cc 62

<210> 126

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 126

catatgatac gacgtcgtta ccgttcaaga aagcctgtgg aatcatctca aactcactct 60

tc 62

<210> 127

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 127

cacatgaacc gaggacgcca tcgttcaaga aagcctgtgg aaggccaatc aggccatgcc 60

ct 62

<210> 128

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 128

cacatgcaca gagggaaaaa ccgttcaaga aagcctgtgg aagttttgaa aacaacacca 60

at 62

<210> 129

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 129

cacatgaacc gaggacgcca tcgttcaaga aagcctgtgg aaggccaatc aggccatgcc 60

ct 62

<210> 130

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 130

cacatgaata gaggacgcca tcgttcaaga aagcctgtgg aaggccaatt aggccatgcc 60

ct 62

<210> 131

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 131

cacatgaaca gaggacgcca tcgttcaaga aagcctgtgg aaggccaatc aggccatgcc 60

ct 62

<210> 132

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 132

cacatgcacc gtggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aatcacaaac tatgactcac 60

tc 62

<210> 133

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 133

catatgcata gaggccgtcc ccgttcaaga aagcctgtgg aagttaacac caacagcacc 60

ac 62

<210> 134

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 134

cacatgcacc gtggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aatcacaaac tatgacacag 60

tc 62

<210> 135

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 135

cacatgcatc gtggccgaaa ccgttcaaga aagcctgtgg aacaacgtga tggatctctt 60

tc 62

<210> 136

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 136

cacatgcacc gtggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aatcacaaac tatgactcac 60

tc 62

<210> 137

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 137

cacatgcacc gtggaagaaa ccgttcaaga aagcctgtgg aactacccac accaactagt 60

gc 62

<210> 138

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 138

cacatgcaca gaggtcgaaa tcgttcaaga aagcctgtgg aaacatctca agttaactct 60

cc 62

<210> 139

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 139

cacatgcaca gaggcagaaa ccgttcaaga aagcctgtgg aagtttcttc agcaacaagc 60

ac 62

<210> 140

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 140

cacatgcaca gagggaagaa tcgttcaaga aagcctgtgg aagttttaaa atcaacaaca 60

ac 62

<210> 141

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 141

cacatgcaca gaggcagaaa ccgttcaaga aagcctgtgg aagtttcttc agcaataagc 60

ac 62

<210> 142

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 142

cacatgcatc gtggaagaaa ccgttcaaga aagcctgtgg aactacccac accaactagt 60

gc 62

<210> 143

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 143

catatgcata gaggccgtcc ccgttcaaga aagcctgtgg aagttaacac caacaccact 60

cc 62

<210> 144

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成GRF

<400> 144

cacatgcacc gtggccggaa ccgttcaaga aagcctgtgg aacaacgtga aggatctctt 60

tc 62

<210> 145

<211> 22

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 145

ccgttcaaga aagcctgtgg aa 22

<210> 146

<211> 22

<212> DNA

<213> 大豆

<400> 146

tcgttcaaga aagcctgtgg aa 22

<210> 147

<211> 1737

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 147

atggacctgg gcggggtgct gatggcggcc gcggacgcgg gggtgggcgg cggggacctc 60

ggcatgctcg gatctaggct gctcaagcac gggaggggca atgaggccga cgagcacggc 120

tggggcggcg gcaggccggc gtccaagcag gcccgggtcg ccggggacag cgacgcggtg 180

tccgaggccg tcaaggcggc cgcgccctac ctgctcggca cctgcagccc cgggcacggc 240

cgggagaaga tgctcagctt ctcctcctcg cagccggcct cctgcccctc cgccgctcag 300

gccgcgctgc cgctctacta cggcacgccc gcttcttgct cagggttgag ctcagtgagg 360

gggcccttca cgccgtcgca gtggatggag ctggagcacc aggccctgat ctacaagtac 420

ctggcggcca acatcgccgt gcctcacaac ctcgtcgtcc ccatccgccg gagcgtcacc 480

tcgctctacc cgtccgccta ctttggctcc tccacattgg ggtgggggcc tttccagctg 540

ggctactccg ggagcgcgga cctggagccc gggcggtgcc gccggacgga cggcaagaag 600

tggcggtgct ccagggacgc cgtcgccgac cagaagtact gcgagcggca tatgaaccgg 660

ggacgccatc gttcaagaaa gcatgtggaa ggccagcctg gccatgccgc gaaagcgatg 720

cctgcgacgg ccgctgctgc cgcccagccc ggtgctctcg ccaccggggg cggcggcgga 780

gctcccgccg gcgccgccat ctgccacgag cagcaaccgt tgaagaacta cgccgccagc 840

accattgatc cttgttcact gcaatataac agggaaatgg tgagcaagca gcaacacgag 900

tgcgagcaag tgcaggactc cgacaccctc tcgatgctga cctccatgag cgcgaggaac 960

accaatgcag gcagcatgtt cccgttctca aaggaacatc ataaccacaa tcctttcgag 1020

gtgacgagct cgaggccgga ctacgggctg gtttcatccg actcgctgat gagctcccct 1080

cacagctccc tggagaacgt caacctgctc acctcgcagc gagctctctc gagcgagcag 1140

cagagctcgc tctccctgca gcacttcgcg gactggccga ggacgccctc gcagcagggg 1200

cagggaggag gtctctcatg gccggacgcc gaggacatgc aagctcatca gaggacccag 1260

ctctcggtgt ccgccgttcc aatggcgtcc tctgacctgt cgtcggcctc cacgtccccg 1320

atccacgaga agctcatgct gtcgcccctc aagctgagcc gcgagtacag ccccatcggc 1380

ctcagcgtcg cggccacggc ggcggtggcg aaggacgagg gggaggcgaa ctggatgccc 1440

atgttccgcg actcgtccat gggcgggccg ctgggggagg ctctgaacaa gaacaatggc 1500

ggcaacatgg aggccaagag ctacctgtcg gcgtcgctga acctgatgac ggacgcctgg 1560

gactcgagcc cgctggagtc gtcgccggtg ggggtcctgc agaggaccgc cttcggatcg 1620

gtgtccagca gcaccggcag cagccccagg caggagtacc acggcgtgta tgatggtaac 1680

ccgcgggatg atctcggctc catcgtcgtg aatcacccca gcatccgcct gatgtga 1737

<210> 148

<211> 678

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 148

atgaccgagc gaaggcagga gcactcgccg ccgtccaaga tcccccgcct ctccggcgcc 60

gacgacgatg acggcgcagg gacggtgacc atggcggcgc cgtcgccgct ggttcttggg 120

ctgggtctcg gcgtaggcgg cagcagcagt gacagcggac gcggcgacgc ggaggcctct 180

gcggcgacgc ggccgtcggc gctgacgttc atgcagcggc aggagctgga gcaccaggtg 240

ctcatctacc gctacttcgc cgccaacgct cccgtgcccg tgcacctcgt gctccccatc 300

tggaagagcg tcgccgcttc ctcctccgcc ccgcagaggt ttccatccct ggcggggctg 360

gggagcatgt gctacgacca caggagcagc atggagccgg agccggaccg gtgccggcgc 420

acggacggca agaagtggcg gtgctcgcgc ggcgtggtgc cggggcacaa gtactgcgag 480

cgccacgtcc accgcggccg cagccgtgca agaaagcctg tggaagccgc ggcggccaca 540

tcagccgtcc cgatccgcgc gatgcacgcc gccgacgcgc agggcgccac cagtgcgcac 600

gcggcgccac cgcagcgcct cggcttctcc tcccccgccg gcgtctacct ggcgcacggc 660

accgcccgtg ccacctga 678

<210> 149

<211> 1176

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 149

atggcgatgc cctttgcctc cctgtcgccg gcagccgacc accaccgctc ctcccccatc 60

ttccccttct gccgctcctc ccctctctac tcggcagggg aggaggcggc gcagcagcag 120

cagcagcacg cgatgagcgg cgcgaggtgg gcggcgatga ggccggcgac cttcacggcg 180

gcgcagtacc aggagctgga gcagcaggcg ctcatctaca agtacctcgt cgccggcgtg 240

cccgtcccgc cggatctcct cctccccatc cgccgcgact tcgactccct cgcctcgcgc 300

ttctaccacc accacgccct tgggtacggg tcctacttcg ggaagaagct ggatccggag 360

ccggggcggt gccggcggac ggacggcaag aagtggcggt gctccaagga ggccgcccag 420

gactccaagt actgcgagcg ccacatgcac cgcggccgca accgttcaag aaagcctgtg 480

gaaacgcagc tcgtcgccac gccccactcc cactcccact cccagcagct gcagcagcac 540

gcccccgccg ccaccgccgc cgcgttccac agccactcgc cgtacccggc gatcgccact 600

ggcggcggcg gcggcgcggc cggctccttc ggcctggggt ctgctcagct gcacatggac 660

aatgctgctg cgccttacgc gaccgctggt gcggccggaa acaaggattt caggtattct 720

gcctatgggt ttaggacttc ggcgctggag gagcacaacc agttcatcag cgcggccatg 780

gacaccgcca tggacaacta ctcatggcgc ctgatgccgg cccagaactc ggcgttctca 840

ctctcgagct accccatgct gggcaccctg ggcgacctgg accagagcgc gatctgctcg 900

ctggccaaga cggagaggga gccgctgtcc ttcggcggcg gcggcggctt cgaggacgac 960

gagtcggcgg tgaagcagga gaaccagacg ctgcggccct tcttcgacga gtggcccaag 1020

gacagggact cgtggccgga gctgcaggac catgactcca accacaacag caacgccttc 1080

tcggccacca agctgtccat ctccatcccg gtgaccagct ccgacttctc caccaccgcc 1140

ggctcccgct cgccccacgg tatatactcc cggtga 1176

<210> 150

<211> 1824

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 150

atggacctgg gcggggtgct gatggcggcc gcggacgcgg gggtgggcgg cggggagctc 60

ggcatgctcg gatctaggct gctcaagcac gggaggggca atgccgcggc ggcggaggcc 120

gacgagcgtc acgagcacgg gtggggcggc ggcaggccgg ccgccaagca ggcccgggtc 180

gccggggaca gcgacgccgt gtccgaggcc gtcaaggcgg ccgcgccata cctgctgggc 240

acctgcagcc ccgggcacgg ccgggagaag atgctcagct tctcctcctc gcagcagccg 300

ccctcctgcc cctccgccgc cgccgccgct caggccgcgc tgccgctcta ctacggcacg 360

cccgcttctt gcttagggtt gagctcggtg agcttgagcg ccagcatcca gggcgccatg 420

gccagggtga gggggccctt cacgccgtcg cagtggatgg agctggagca ccaggccctg 480

atctacaagt acctggcggc caacatcgcc gtgccgcaca gcctcctcgt ccccatccgc 540

cggagcgtca cctcgctcta cccgtccgcc tactttggct cctccacatt ggggtggggg 600

cctttccagc tgggctactc cgggagcgcg gacctggagc ccgggcggtg ccgccggacg 660

gacggcaaga agtggcggtg ctccagggac gccgtcgctg accagaagta ctgcgagcgg 720

catatgaacc ggggacgcca tcgttcaaga aagcatgtgg aaggccagcc tggccatgcc 780

gcgaaagcga tgcctgcgac ggtggcggct gctgccgccc agcccggtgc tctcgccacc 840

gggggcggcg gcggagccac cgccggcgcc gccatctgcc acgagcagca gccgttgaag 900

agctactccg ccagcaccat tgatccttgt tcactgcaat acaacaggga aatggcgagc 960

aagcagcaac acgagtgcga gcaagtgcag gactcggaca ccctctcgat gctgacctcc 1020

atgagcgcga ggaacaccaa cacgggcagc atgttcccgt tctcaaagga acatcataac 1080

cacaatcctt tcgaggtgac gagctcgagg ccggactacg ggctggtttc ctccgactcg 1140

ctgatgagct ccccccacag ctccctggag aacgtcaacc tgctcacctc gcagcgagcg 1200

ctctcgagcg agcagcagag ctcgctctcc ctgcagcact tcgcggactg gccgaggacg 1260

ccgtcgcagc aggggcaggg agggggaggc ctctcatggc cggacgccga gaacatgcag 1320

ctggctcatc agcggaccca gcagctctcg gtgtccgccg ctccgatggc gtcctccgac 1380

ctgtcgtcgg cctccacgtc ccccatccac gagaagctca tgctgtcgcc cctcaagctg 1440

agccgcgagt acagccccat cggcctcagc gtcgcggcca cggcggcagc ggcggcgaag 1500

gacgaggggg aggcgaactg gatgcccatg ttccgcgact cgtccatggg cgggccactg 1560

ggggaggctc tgaacaagaa caatggcggc aacatggagg ccaagaacta cctgtcggcg 1620

tcgctgaacc tcatgacgga cgcctgggac tcgagcccgc tggagtcgtc gccggtgggg 1680

gtcctgcaga ggaccgcctt cgggtcggtg tccagcagca ccggcagcag ccccaggcag 1740

gagtaccacg gcgtgtatga tggtaatccg cgggatgatc tcggctccat cgtcgtgaat 1800

caccccagca tccgcctcat gtga 1824

<210> 151

<211> 690

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 151

atgaccgagc gaaggcagga gcactcgccg ccgtccaagc tcccccgcct ctccggcccc 60

gacgccgacg ccgacgacaa tgatggcgca gggacggtga ccatggcggc gccgtcgccg 120

ctggttcttg ggctgggtct cggcgtaggc ggcagctgca gtgacagcgg acgcggcgac 180

gcggaggcct ctgcggcgac gcggccgtcg gcgctgacgt tcatgcagcg gcaggagctg 240

gagcaccagg tgctcatcta ccgctacttc gccgccaacg ctcccgtgcc ggtgcacctc 300

gtcctcccca tctggaagag cgtcgccgcc tcctcctccg ccccgcagag gttcccatcc 360

ctggcgggac tggggagcat gtgctacgac cacaggagca gcatggagcc ggagccggac 420

cggtgccggc gcacggacgg caagaagtgg cggtgctcgc gcggggtggt gccggggcac 480

aagtactgcg agcgccacgt ccaccgcggc cgcggccgtg caagaaagcc tgtggaagcc 540

gcggcggcca catcagccat cccgatccgc gcgatgcacg ccgccgacgc gcagggcgcc 600

accagcgcgc acgcggcgcc gccgcagcgc ctcggcttct cctcccccgc cggcgtgtac 660

ctggcccacg gcaccgcccg tgccacctga 690

<210> 152

<211> 1248

<212> DNA

<213> 普通小麦

<220>

<221> misc_feature

<222> (46)..(51)

<223> n为a, c, g或t

<400> 152

atgcttcctg agctcaccgc cgccgccatg gagctcgggc aggtgnnnnn ntacacgccg 60

ccggcgacca aggacgcgag atccggcggc ggcttcgccc aggccgccgc ttgcccctac 120

ccctacccct cccccttcct cgacgagcag aagatgctca gcttctccaa ggccgccgcc 180

cctccatcgt caggtatgga ttttggcagg tccaatgagc agaggctgct gctggccagg 240

agcaagatgc ccttcactcc ttcacagtgg atggagctgg agcaccaggc cctcatatac 300

aagtatctca atgcaaaggc ccccatacct tccagcctgc tcatctccat cagcaaaagc 360

ttcagaccct cctccgatag aatgccctgg aggcctgtct accaagggtt caccaatgca 420

gattctgacc cggaacctgg aagatgccgt cgaacagacg gcaagaaatg gcggtgctca 480

aaggaggcga tggccgagca caagtactgt gagcggcaca tcaataggaa ccgccatcgt 540

tcaagaaagc ctgtggaaaa ccaaacaagg aagaacgcca aagagacgcc tgctgctggc 600

tcgttatcgg ccgctgtctc acagggtggc tgtaagaaag caaaagctgg tgatgaactg 660

aagccaggga gcgtcagcta ttggacagat aatttaaaca gggcaatggt gagcaaagcc 720

aggggaaaca accctgaaga aggcaacagt gctccactcc tgaattctac taatcaacaa 780

cacacattgt ccttgttctc tcaactgaag caacagagca aaccagataa gttcagcccg 840

gcagtcgata gtgaatcgat ctcctcaaat acagtattga agccctggga aagaagcaac 900

cagcagagca gcaaggacgt ttcttcgacg acgctccatg atcgcgggtg ccttcaatca 960

gtccttcaag atttcagcat gcataagaat gacaagatcg aggctcagaa aaacaatgct 1020

tcagtgccat caactttcta ttcacctaca gaaggtcaac acatcagctg ccttgcatct 1080

aacatgatgc aagtgcagga ggattgcatc tcaagctctt gggagatacc tcaaggtggg 1140

ccattaggtg aaatcctaac aaactccaag aacactgatg acttgaccaa taagtgtgaa 1200

tcaagatcat atggttggtt actgagtctt gatgaacatg aaatgtga 1248

<210> 153

<211> 1164

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 153

atggcgatgc cctttgcctc cctgtcgccg gcagccgacc accaccgctc ctcccccatc 60

ttccccttct gccgctcctc ccctctctac tcggtagggg aggagacggc gcatcagcag 120

cagcagcagc acacgatgag cggcgcgagg tgggcggcga ggccggcgac cttcacggcg 180

gcgcagtacg aggagctgga gcagcaggcg ctcatctaca agtacctcgt cgccggcgtc 240

cccgtcccgc cggatctcct cctccccatc cgccgcggct tcgactccct cgcctcgcgc 300

ttctaccacc accacgccct cgggtacggt tcctacttcg ggaagaagct ggatccggag 360

ccggggcggt gccggcggac ggacggcaag aagtggcggt gctccaagga ggccgcccag 420

gactccaagt actgcgagcg ccacatgcac cgcggccgca accgttcaag aaagcctgtg 480

gaaacgcagc tcgtcgccac gccccaccac tcccactccc agcagctgca gcagcacgcc 540

cccgccgcca gcgccgccgc gttccacagc cactcgccgt atccggcgat cgcctctggc 600

ggcggcggct ccttcgccgt gggatctgct cagctgcaca tggacaatgc tgcttcgcct 660

tacgcgaccg ctggtgccgc cggaaacaaa gatttcaggt attctgccta tgggtttagg 720

acttcggcga tggaggagca caaccagttc atctctgcgg ccatggagac cgccatggag 780

aactactcat gccgcctgat gccggcccag aactcatcct tctcactcgc cagctacccc 840

atgctgggca ccctgggcga ccttgaccag agcgcgatct gctcgctggc caagacggag 900

agggagcctc tgtccttctt cggcggcggc ggcggcttcg acgacgacga ctcggcggtg 960

aagcaggaga accagacgct gcggcccttc ttcgacgagt ggcccaagga cagggactcg 1020

tggccggagc tgcaggacca cgatgccaac aacagcagca acgccttctc ggccaccaag 1080

ctgtccatct ccatcccggt gaccagctcc gacttctcca ccaccgccgg ctcccgctcg 1140

cccaacggta tatactcccg gtga 1164

<210> 154

<211> 1107

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 154

atgctgagct cgtcggcggc gatggggatg gggctgggcg ggtacggcca gcagcagcag 60

cagcagatgc agatgcagat gcagcggggg gcggagccgg tgttcacgcc ggcgcagtgg 120

gccgagctgg agcagcaggc gctgatttac aagtacctca tggcgggcgt gcccgtgccg 180

cccgatctcc tgctccccat ccgcccccac cccgccggcg ccgccggaac caccttctcc 240

ttcgccaacc ccgccgcctc gcccttctac caccaccacc acccctccat gagttactac 300

gcctactatg gcaagaagct cgacccggag ccgtggcggt gccgacgcac cgacggcaag 360

aagtggcggt gctccaagga ggcgcacccc gactccaagt actgcgagcg ccacatgcac 420

cgtggccgca accgttcaag aaagcctgtg gaatccaagt ctgcttcccc tgcgcaccag 480

tcgcagcagc cccagttgtc cgccgtcacg tccgcggccc gcgacgccga gcctctcccc 540

tccctcccgg cgggggctaa aacccatggc ctgtccctcg gcggggctgg ctcgtcgcag 600

atgcacgtcg acgcctcgtc atacggcggc aaatactccc ttggagctaa atctgatgtg 660

ggtgaactga gcttcttctc tggagcatca ggaaacaaca acaggggatt caccatcgat 720

tccccaacgg acagctcgtg gcactcaatg ggatccagcc tgaccccata ccaactgtcg 780

aaacctagag attccggcct catgcagggc ggcttctcgt attcccactt tgagccgtcg 840

caggagctcg ggcaggtaac catcgcctcg ctgtcccact cccaggagca ggaccgccgc 900

tctttcgggg gcggtggtgg aggtgggggt ggaggggcag ggctcatggg aaatgttaag 960

caggagaacc agccgctgag gcccttcttc gacgagtggc cggggaggcg ggactcgtgg 1020

tcggagatgg acgacgagcg ctccaacggc acctccttct cgacgaccca gctctcgatc 1080

tccatcccaa tgcctcgatg cgattga 1107

<210> 155

<211> 1227

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 155

atggagctcg ggcaggtgct gggctacacg ccaccggcga ccaaggacgc gagatccggc 60

ggcggcttca cccaggctgc cgcttgcccc tacccctacc cctccccctt cctcgacgag 120

cagaagatgc tcagcttctc caaggccgcc gccgctcacc agccgccctc aggtatggat 180

tttgggaggt ccaatgagca gaggctgttg ctggccagga gcaagatgcc cttcacccct 240

tcacagtgga tggagctgga gcaccaggcc ctcatttaca agtatctcaa tgcaaaggcc 300

cccatacctt ccggcctgct catctccatc agcaagagct tcagaccctc ctccgataga 360

atgccctgga ggcctgtcta tcaagggttc accaatgcag attctgaccc ggaacctgga 420

agatgccgtc gaacagacgg caagaaatgg cggtgctcaa aggaggcgat ggccgagcac 480

aagtactgtg agcggcacat caataggaac cgccatcgtt caagaaagcc tgtggaaaac 540

caaacaagga agaacgccaa agagacacct gctgctggct cgatatcggc cgctgtctca 600

cagggtggct gtaagaaagc aaaagctggt gatgaactga agccagggag cgtcagttat 660

tggacagata atttaaacag ggcaatggtg agcaaagcca ggggaaacaa ccctgaagaa 720

ggcaacagtg ctccactcct gaattctact aatcaacaac acacattgtc cttgttctct 780

caactgaagc aacagagcaa accagataag ttcagcccgg cagtcgatag tgaatcgatc 840

tcctcaaata ctgtattgaa gccttgggaa agaagcaacc agcagagcag taaggacgtt 900

tcttccacga cgctccatga tcgcgggtgc cttcaatcag tccttcaaga tttcagcatg 960

cataagaatg acaagatcga gtctcagaaa aacaatgctt cagtgccatc tactttctat 1020

tcatctacag aaggtcgaca catcagctgc cttgcatcta acatgatgca agtgcaggag 1080

gattgcatct caagctcttg ggagatacct caaggtgggc ctttaggtga aatcctaaca 1140

aactccaaga atactgatga cttgaccaat aagtgtgaat caagatcata tggttggtta 1200

ctgagtcttg atgaacatga aatgtga 1227

<210> 156

<211> 1836

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 156

atggacctgg gcggcgtgct gatggcggcc gcggacgcgg gggtgggcgg cggggacctg 60

ggcatgctcg gatctaggct gctcaagcac gggaggggca atgcggcggc ggcggaggcc 120

gacgagcacg gctggggcag cggcaggccg cccgccaagc aggcccgggt cgcggcctcg 180

gccgcgtccg gggacagcga cgccgtgtcc gaggccgtca aggcggcggc accctacctg 240

ctcggcacct gcagccccgg gcacggccgg gagaagatgc tcagcttctc ctcctcgcag 300

ccgccctcct gcccctcctc cgccgccgcc gccgccgctc aggccgcgct gccgctctac 360

tacggcacgc ccgcttcttg ctcagggttg agctcggtga gcttgagcgc cagcatccag 420

aacgccatgg ccagggtgag ggggcccttc acgccgtcgc agtggatgga gctggagcac 480

caggccctga tctacaagta cctggcggcc aacatcgccg tgcctcacaa cctgctcgtc 540

cccatccgcc ggagcgtcac ctcgctctac ccgtccgcct actttggctc ctccacattg 600

gggtgggggc ctttccagct gggctactcc gggagcgcgg acctggagcc cgggcggtgc 660

cgccggacgg acggcaagaa gtggcggtgc tccagggacg ccgtcgccga ccagaagtac 720

tgcgagcggc atatgaaccg gggacgccat cgttcaagaa agcatgtgga aggccagcct 780

ggccatgccg cgaaagcgat gcctgcgacg gtggcggcgg ctgctgccca gcccggtgct 840

ctcgccaccg ggggcggcgg cggagctacc gccggcgccg ccgccatctg ccacgagcag 900

cagccgttga agaactacgc cgcgaacacc attgatcctt gttcactgca atataacagg 960

gaaatggtga gcaagcagca gcaacacgag tgcgagcaag tgcaggactc cgacaccctc 1020

tcgatgctga cctccatgag cgcgaggaac accaacacgg gcagcatgtt cccgttctca 1080

aaggagcatc acaatcacaa tcctttcgag gtgacgagct caaggccgga ctacgggctg 1140

gtttcatccg actcgctgat gagctcccct cacagctccc tggagaacgt caacctgctc 1200

acctcgcact cgcagcgagc gctctccaac gagcagcaga gctcgctctc cctgcagcac 1260

ttcgcggact ggccgaggac gccctcgcag caggggcaag gaggaggagg tctctcatgg 1320

ccggacgccg aggacatgca agcacatcag aggacccagc tctcggtgtc cgccgctcca 1380

atggcgtccc ccgacctgtc gtcggcctcc acgtccccga tccacgagaa gctcatgctg 1440

tcgcccctca agctgagccg cgagtacagc cccatcggcc tcagcatcgc ggcgacggcg 1500

gcggcggcga aggacgaggg ggaggcgaac tggatgccca tgttccgcga ctcgtccatg 1560

ggcgggccgc tgggggaggc cctgaacaag aacaatggcg gcaacatgga ggccaagaac 1620

tacctgtcgg cgtcgctgaa cctcatgacg gacgcctggg actcgagccc gctggagtcg 1680

tccccggtgg gggtcctgca gaggaccgcc ttcgggtcgg tgtcgagcag caccggcagc 1740

agccccaggc aggagtacca cggcgtgtat gatggtaacc cgcgggatga tctcggctcc 1800

atcgtcgtga atcaccccag catccgcctc atgtga 1836

<210> 157

<211> 930

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 157

atgatgctgg gagggcacgg cggcggcggc gggaggtgcc tgttcacggc gtcgcagtgg 60

cgggagctgg agcaccaggc gctcatctac aagtacatgg ccgccggctc gcaggtgccc 120

cacgagctgg tcctcccgct ccgccaccgc gacgccgccg ccttcgccgg catcgacacc 180

gccccctccg tcgcctgcta ccctcctccg cagccctccc tggggtgggg gctctacggg 240

gcgggggcgc agtacgcgcg gaagccggag gacccggagc ccgggcggtg ccggcggacg 300

gacggcaaga agtggcgctg ctccagggag gcgtacgggg agtccaagta ctgcgacagg 360

cacatgcacc gcggcaagaa ccgttcaaga aagcctgtgg aaccgatgag ctcctcctcc 420

gtctcctccc cggccgcctc ctaccgccag accaccctct ccatgtcgcc ccccacgccg 480

gccgacacgc ccagctacgg ccacggccac ctccgcgcag ctgcttctca gagccagata 540

aaccctctcc agctccacct cgacaccccg tcgcccccgc cgtcctacca caggtacgcg 600

ccggcgcagc agtacggggg ctccttcttc ccgagcaggc agcaggtgca ggaggaggcc 660

gaggcggagg cgaggcggcg gcagcacttc ctggctctcg gcgccgacct gagcctggac 720

aagccggacg ccaccaccgc ggcgtcctcg acaaccgagg agaagccgct gcggcgcttc 780

ttcgacgagt ggccgcgcga cgggaacgcc gtcgaggttc ggccctggaa tatgggccac 840

cgggacgaga cgctgctctc catgtccatc cccacgacga cggcctcgca ccccgacctc 900

gccgcctacc gccaccacaa cgatgaataa 930

<210> 158

<211> 1233

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 158

atgatgatga tgggcggtcg cgcgggggcc ggcggcgtcg gggccggcgg gggccggtgc 60

ccgttcacgg cgacgcagtg gcaggagctg gagcaccagg cgctcatcta caagtacatg 120

gcctccggcg tgcccatccc ctccgacctc ctcctcccgc tccgccgcag cttcctcctc 180

gactccgccc tcgccacctc cccctccctc gccttccctc cccaggccgc actgggctgg 240

ggatgtttcg ggatggggtt cggccggaag gcggaggacc cggagccggg gcggtgccgg 300

cggactgacg gcaagaagtg gcgctgctcc aaggaggcgt acccggactc caagtactgc 360

gagaagcaca tgcaccgcgg caagaaccgt tcaagaaagc ctgtggaaat gtccttggcc 420

acgcccccgc cgccgccttc ctcctcggcc tcctcctcct cctccaacgt ccactccgcc 480

gtcaacgccg ccaccaccac cacctccccc gcgccgtcct accaccgcca cgccgccgcg 540

actcacgaca cgacgcccta ccacacgctc tacggcggcc cctactcctc cgccggccgc 600

cagcagcacg ccagcgccta ccaccacgcc gcgcaggtca gcccgttcca cctgcacctc 660

gacaccaccc acccgcaccc gccgccgtcc tactactcca ccatggacca cagcaaggac 720

agctacgcct acgggcacag cgtcaaggag gtgcacggcg gcggcgagca cgccttcttc 780

tcctccgacg tcaccactga cagggaccac caccaccacc aacaccacgc cggcgccggc 840

ggcaacgggc agtggcagtt caagcagctc ggcggcatgg agcccaagca gcacaacccc 900

acgtcgctct tccccggctg cggcgggtac ggcaacaacg cggcgtacgc catcgacctg 960

tccagcaaag aagaggacga ggagaaggag aggcggcagc agcagcagca ctgcttcctg 1020

ctgggcgccg acctgaggct cgacaagccg tcgtcggggc acggcgactc cgccgaccag 1080

aagcctctcc ggcccttctt cgacgagtgg ccgcacgaga agaccgggag caaggggtcg 1140

tggatggggc tcgaggggga gacgcagctc tccatctcca tcgccaacga actccccatc 1200

accaccacct cccgctacca ccatggtgaa tga 1233

<210> 159

<211> 1230

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 159

atggcgatgc cgtatgcctc tctttccccg gcaggcgacc gccgctcctc cccggccgcc 60

accgcctccc tcctcccctt ctgccgctcc tcccccttct ccgccggcgg cggcaatggc 120

ggcatggggg aggaggcgcg gatggacggg aggtggatgg cgaggccggt gcccttcacg 180

gcggcgcagt acgaggagct ggagcaccag gcgctgatat acaagtacct ggtggccggc 240

gtgcccgtcc cgccggatct cgtgctcccc atccgccgcg gcatcgaatc cctcgccgcc 300

cgcttctacc acaaccccct cgccatcggg tacggatcgt acctaggcaa gaaggtggat 360

ccggagccgg gccggtgccg gcgcacggac ggcaagaagt ggcggtgcgc caaggaggcc 420

gcctccgatt ccaagtattg cgagcgccac atgcaccgcg gccgcaaccg ttcaagaaag 480

cctgtggaaa cgcagctcgt cccgcacacc cagccgccgg ccgcctccgc cgtgccgccc 540

ctcgccaccg gcttccacag ccactccctc taccccgcca tcggcggcag caccaacggt 600

ggtggaggcg gggggaacaa cggcatgtcc atgcccagca cgttctcctc cgcgctgggg 660

ccgcctcagc agcacatggg cagcaatgcc gcctctccct acgcggctct cggtggcgcc 720

ggaacatgca aagatttcag gtataccgca tatggaataa gatctttggc agacgagcac 780

agtcagctca tgacagaagc catgaatacc tccgtggaga acccatggcg cctgccgccg 840

tcgtctcaaa cgacctcatt cccgctttca agctacgctc ctcagcttgg agcaacgagt 900

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gcgaagcagg agaaccagac gctgcggccg ttcttcgacg agtggccgaa gacgagggac 1080

tcgtggtcgg acctgacgga cgacaactcc agcctcgcct ccttctcggc cacccagctg 1140

tcgatctcga tacccatgac gtcctccgac ttctccgccg ccagctccca gtcgcccaac 1200

ggtatgctgt tcgccggcga gatgtactag 1230

<210> 160

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<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 160

atgctgagct cgtcggcggc gatggggatg gggctgggcg ggtacggcca gcagcagcag 60

cagcagcaga tgcagatgca gatgcagatg cagcgggggg cggggccggt gttcacgccg 120

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ttctccttcg ccaaccccgc cgcctcgccc ttctaccacc accaccaccc ctccatgagt 300

tactacgcct actatggcaa gaagctcgac ccggagccgt ggcggtgccg ccgcaccgac 360

ggcaagaagt ggaggtgctc caaggaggcg caccccgact ccaagtactg cgagcgccac 420

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ctcccctccc tcccggcggg ggctaagacc catggcctgt ccctcggcgg ggctggctcg 600

tcgcagatgc acgtcgacgc ctcgtcatac ggcaacaaat actcccttgg agctaaatct 660

gacgtgggtg aactgagctt cttctctgga gcatcaggaa acaacaacag gggcttcacc 720

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ccgtcgcagg agcttgggca ggtaaccatc gcctcgctgt cccactccca ggagcaggac 900

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gttaagcagg agaaccagcc gctgaggccc ttcttcgacg agtggccggg gaggcgggac 1020

tcgtggtcgg agatggacga cgagcgctcc aacggcacct ccttctcgac gacccagctc 1080

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<210> 161

<211> 684

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 161

atgaccgagc gaaggcagga acactcgccg ccgtccaagc tcccccgcct ctccggcccc 60

gacgccgacg acaacgacgg cgcagggacg gtgaccatgg cggcgccgtc gccgctggtt 120

cttgggctgg gtctcggcgt aggcggcagc agcagtgaca gtggacgtgg cgacgcggag 180

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ggactgggga gcatgtgcta cgaccacagg agcagcatgg agccggagcc ggaccggtgc 420

cggcgcacgg acggcaaaaa gtggcggtgc tcgcgcggcg tgatgccggg gcacaagtac 480

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cacggcaccg cccgtgccac ctga 684

<210> 162

<211> 648

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 162

atggccgacg agaaagaagc cgactcgctg cagccgccgt ccaagcagcc ccgcctctcc 60

tccgccgact cgaacgccgg tgcggtgacg atggcggtct cgtcgccgct gggtcttggc 120

ctcggcctgg gactcggcgg cgatagccgc ggcgagcagc aggccttcca agcacgggca 180

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gtgctcatct accgctactt cgcggcgggg gcgcccgtgc cggtgaacct cgtgctgccc 300

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cttgggagcc tgtgcttcga ctaccggagc agcatggagc cggagcccgg gaggtgccgc 420

cgcacggacg gcaagaagtg gcggtgctcc cgcgacgtgc tgcaggggca caagtactgc 480

gagcggcacg tccaccgggg ccgcggccgt tcaagaaagc ctgtggaagg agcccccgca 540

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gccggcatcc tccacgccac ccacagcgcc gccgcgcgcg ccacctga 648

<210> 163

<211> 963

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 163

atgatgctgg gagggcacgg cggcggcggc ggcgggaggt gcctgttcac ggcgtcgcag 60

tggcgggagc tggagcacca ggcgctcatc tacaagtaca tggccgccgg ctcgcaggtg 120

ccccacgagc tggtcctccc gctccgccac cgcgacgctg ccgccttcgc cgccatcgac 180

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acggacggca agaagtggcg ctgctccagg gaggcgtacg gggagtccaa gtactgcgac 360

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tccgtctcct ccccggccgc ctcctaccgc cagaccgccc tctccatgtc gccccccacg 480

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cagcaggtgc aggaggaggc ggaggcggag gcgaggcggc ggcagcactt cctggctctc 720

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taa 963

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<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 164

atgatgatga tgggtggtcg cgcgggggcc ggcggcgtcg gggcaggcgg ggggcggtgc 60

ccgttcacgg cgacgcagtg gcaggagctt gagcaccagg cactcatcta caagtacatg 120

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gactccgccc tcgccacctc cccctccctc gccttccctc cccaggccgc acttggctgg 240

ggttgctttg gcatggggtt cggccggaag gcggaggacc cggagccggg gcggtgccgg 300

cggacggacg gcaagaagtg gcgctgctcc aaggaggcgt acccggactc caagtactgc 360

gagaagcaca tgcaccgcgg caagaaccgt tcaagaaagc ctgtggaaat gtccttggcc 420

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tcctccgacg tcaccaccga cagggaccat caccaccacc accatcagca ccaacaccac 840

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gaactcccca tcaccaccac ctcccgctac caccatggtg aatga 1245

<210> 165

<211> 1221

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 165

atggcgatgc cgtatgcctc tctttccccg gcaggcgacc gccgctcctc cccggccgcc 60

accgcctccc tcctcccctt ctgccgctcc tccccgttct ccgccggcaa tggcggcatg 120

ggggaggagg cgcggatggc cggtaggtgg atggcgaggc cggcgccctt cacggcggcg 180

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ctctccttcc cggggtgcgg cgacttcggc ggcggcggcg ccatggactc cgcgaagcag 1020

gagaaccaga cgctgcggcc gttcttcgac gagtggccca agacgaggga ctcgtggtcg 1080

gacctgaccg acgacaactc cagcctcgcc tccttctcgg ccacccagct gtcgatctcg 1140

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ttcgccggcg aaatgtacta g 1221

<210> 166

<211> 1116

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 166

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cagcagatgc agatgcagat gcagcggggc gcggggccgg tgttcacgcc ggcgcagtgg 120

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cccgatctcc tgctccccat ccgcccccac caccccgccg ccggcgccgc cggaaccacc 240

ttctccttcg ccagccccgc cgcctcgccc ttctaccacc accaccatcc ctccatgagt 300

tactacgcct actatggcaa gaagctcgac ccggagccgt ggcggtgccg gcgcaccgac 360

ggcaagaagt ggcggtgctc caaggaggcg caccccgact ccaagtactg cgagcgccac 420

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ctcccctccc tcccggctgg ggctaaaacc catggcctgt ccctcggcgg ggctggctcg 600

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<400> 167

atggcgatgc cctttgcctc cctgtcgccg gcagccgacc accaccgctc ctcccccatc 60

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atggaggacc acaaccagtt catcagtgcg gccatggaca ccgccatgga caactactca 780

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accctgagcg acctggacca gagcgcgatc tgctcgctgg ccaagacgga gagggagccg 900

ctgtccttct tcggcgtggg cggcggcttc gacgacgacg agtcggcggt gaagcaggag 960

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<212> DNA

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atggccgacg agaaagaagc cgactcgctg cagccgccgt ccaagcagcc ccgcctctcc 60

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atgatgctgg gagggcacgg cggcggcggc ggcggcggga ggtgcctgtt cacggcgtcg 60

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accgccccct ccctcgcctg ctaccctcct ccgcagccat ccctggggtg ggggctctac 240

ggggcgggat cgcagtacgc gcggaagccg gaggacccgg agcccgggcg gtgccggcgg 300

acggacggca agaaatggcg gtgctccagg gaggcgtatg gggagtccaa gtactgcgac 360

aggcacatgc accgcggcaa gaaccgttca agaaagcctg tggaaccaat gagctccgcc 420

tcctccgtct cctccccggc cgcctcgtac cgccacaccg ccctctccat gtcgcccccc 480

acgccggccg acacgcccag ctacggccac ggccacggcc acgaccacct ccgcgcagct 540

gctggtcaga gccagataaa ccctctccag ctccacctcg acaccccgtc gcccccgccg 600

tcctaccaca ggtacgcgcc ggcgcagcag tacgggggct ccttcttccc gagcaggcag 660

caggtgcagg aggaggaggc gaggcggcgg cagcacttcc tggctctcgg cgccgacctg 720

agcctggaca agccggacgc caccaccgcg gcgtcctcga caaccgagga gaagccgctg 780

cggcgcttct tcgacgagtg gccgcgcgac gggaacgccg tcgagggtag gccctggaat 840

atgggccacc gggacgagac gctgctctcc atgtccatcc ccacgacgac ggcctcgcac 900

cccgacctcg ccgccgcctc gcgctaccac caccaccaca acgatgaata a 951

<210> 170

<211> 1227

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 170

atggcgatgc cgtatgcctc tctttccccg gcaggcgacc gccgctcctc cccggccgcc 60

accgccaccg cctccctcct ccccttctgc cgctcctccc ccttctccgc cggcggcaat 120

ggcggcatgg gggaggaggc gccgatggac gggaggtgga tggcgaggcc ggtgcccttc 180

acggcggcgc agtacgagga gctggagcac caggcgctca tatacaagta cctggtggcc 240

ggcgtgcccg tcccgccgga tctcgtgctc cccatccgcc gcggcatcga gtccctcgcc 300

gcccgcttct accacaaccc cctcgccatc gggtacggat cgtacctggg caagaaggtg 360

gatccggagc cgggccggtg ccggcgcacg gacggcaaga agtggcggtg cgccaaggag 420

gccgcctccg actccaagta ctgcgagcgc cacatgcacc gcggccgcaa ccgttcaaga 480

aagcctgtgg aaacgcagct cgtgccccac tcccagccgc cggccgcctc cgccgtgccg 540

cccctcgcca ccggcttcca cggccactcc ctctaccccg ccgtcggcgg cggcaccaac 600

ggtggtggag gcggggggaa caacggcatg tccatgcccg gcacgttctc ctccgcgctg 660

gggccgcctc agcagcacat gggcaacaat gccgcctctc cctacgcggc tctcggcggc 720

gccggaacat gcaaagattt caggtatacc gcatatggaa taagatcttt ggcagatgag 780

cagagtcagc tcatgacaga agccatgaac acctccgtgg agaacccatg gcgcctgccg 840

ccatcttctc aaacgactac attcccgctc tcaagctact ctcctcagct tggagcaacg 900

agtgacctgg gtcagaacaa cagcagcaac aacaacagcg gcgtcaaggc cgagcgacag 960

cagcagcagc agccgctctc cttcccgggg tgcggcgact tcggcggcgg cgactccgcg 1020

aagcaggaga accagacgct gcggccgttc ttcgacgagt ggccgaagac gagggactcg 1080

tggtcggacc tgaccgacga caactcgaac gtcgcctcct tctcggccac ccagctgtcg 1140

atctcgatac ctatgacgtc ccccgacttc tccgccgcca gctcccagtc gcccaacggc 1200

atgctgttcg ccggcgagat gtactag 1227

<210> 171

<211> 1230

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 171

atgatgatga tgggcggtcg cgcgggggcc ggcggcgtcg gggcaggcgg cggccggtgc 60

ccgttcacgg cgacgcagtg gcaggagctg gagcaccagg cgctcatcta caagtacatg 120

gcctccggcg tgcccatccc ctccgacctc ctcctcccgc tccgccgcag cttcctcctc 180

gactccgccc tcgccacctc cccctccctc gccttccctc cccaggccgc acttgggtgg 240

ggttgctttg gcatggggtt cggccggaag gcggaggacc cggagccggg gcggtgccgg 300

cggacggacg ggaagaagtg gcgctgctcc aaggaggcgt acccggactc caagtactgc 360

gagaagcaca tgcaccgggg caagaaccgt tcaagaaagc ctgtggaaat gtccttggcc 420

acgcccccgc cgccgccttc ctcctcggcc tcctcttcct cctccaacgt ccactccgcc 480

gtcaacgtcg ccaccaccac cacctcccca gcgccgtcct accaccgcca cgccgctgcg 540

actcacgaca cgacgcccta ccacgccctc tacggcggcc cctactcctc cgccggccgc 600

cagcagcacg ccagcgccta ccaccacgcg gcgcaggtca gcccgttcca cctgcacctc 660

gacaccaccc acccgcaccc gccgccgtcc tactactcca ccatggacca cagcaaggac 720

agctacgcct acgggcacag cgtcaaggag gtgcacggcg gcggcgagca cgccttcttc 780

tcctccgacg tcagcaccga cagggaccac caccaccatc agcaccaaca ccacgctagc 840

gccggcggca acggccagtg gcagttcaag cagctcggcg gcatggagcc caagcagcac 900

aaccccacgt cgctcttccc cggctacggc aacaacgcgg cgtacgccat cgacctgtcc 960

agcaaagaag aggacgagga gaaggagagg cggcaacagc agcagcactg cttcctgctg 1020

ggcgccgacc tgaggctcga caagccgtcg tcggggcacg gcgactccgc cgaccagaag 1080

cctctccggc cgttcttcga cgagtggccg cacgagaaga ctggcagcaa ggggtcgtgg 1140

atggggctcg agggggagac gcagctctcc atctccatcg ccaatgaact ccccatcacc 1200

accacctccc gctaccacca tggtgaatga 1230

<210> 172

<211> 636

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 172

atggccgacg agaaagaagc cgactcgctg cagccgccgt ccaagcagcc ccgcctctcc 60

tccgccgact cgaacgccgg ggcggtgacg acggcggtct cgtcgccgct gggtcttggc 120

ctcggcctgg ggctcggcgg cgatagccgt ggcgagcagc aggccttcga agcacgggca 180

gccgcggcgg cggcgaaatc ggcgctgacg ttcatgcagc agcaggagct ggagcaccag 240

gtgctcatct accgctactt cgcggcgggt gcgcccgtgc cggtgcacct cgtgctcccc 300

atctggaaga gcgtcgccgc ctcctccttc ggcccgcacc gcttcccctc cctgattggg 360

ctggggagcc tgtgcttcga ctaccggagc agcatggagc cggagcccgg gcggtgccgc 420

cgcacggacg gcaagaagtg gcggtgctcc cgcgacgtgg tgcaggggca caagtactgc 480

gagcggcacg tccaccgggg ccgcggccgt tcaagaaagc ctgtggaagg agcctccgca 540

gccccggcgc acagcggcag ccccaccaca gccccgcccc gcgccatcgg cttctccccc 600

gccggcatcc tccacgccac ccacagcgcc acctga 636

<210> 173

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 173

cacgtccacc ggggccgcgg ccgttcaaga aagcctgtgg aaggagcctc cgcagccccg 60

gc 62

<210> 174

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 174

cacatgcacc ggggcaagaa ccgttcaaga aagcctgtgg aaatgtcctt ggccacgccc 60

cc 62

<210> 175

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 175

cacatgcacc gcggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aaacgcagct cgtgccccac 60

tc 62

<210> 176

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 176

cacatgcacc gcggcaagaa ccgttcaaga aagcctgtgg aaccaatgag ctccgcctcc 60

tc 62

<210> 177

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 177

cacgtccacc ggggccgcgg ccgttcaaga aagcctgtgg aaggagcccc ctcagcccgg 60

gc 62

<210> 178

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 178

cacatgcacc gcggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aaacgcagct cgtctcccac 60

tc 62

<210> 179

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 179

cacatgcacc gtggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aatccaagtc tgcttcccct 60

gc 62

<210> 180

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 180

cacatgcacc gcggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aaacgcagct cgtctcgcac 60

tc 62

<210> 181

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 181

cacatgcacc gcggcaagaa ccgttcaaga aagcctgtgg aaatgtcctt ggccacgccc 60

cc 62

<210> 182

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 182

cacatgcacc gcggcaagaa ccgttcaaga aagcctgtgg aaccgatgtc ctcctcctcc 60

gt 62

<210> 183

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 183

cacgtccacc ggggccgcgg ccgttcaaga aagcctgtgg aaggagcccc cgcagccccg 60

gc 62

<210> 184

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 184

cacgtccacc gcggccgcgg ccgtgcaaga aagcctgtgg aagccgcgcc ggccacatca 60

gc 62

<210> 185

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 185

cacatgcacc gcggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aaacgcagct cgtcccgcac 60

ac 62

<210> 186

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 186

cacatgcacc gcggcaagaa ccgttcaaga aagcctgtgg aaatgtcctt ggccacgccc 60

cc 62

<210> 187

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 187

cacatgcacc gcggcaagaa ccgttcaaga aagcctgtgg aaccgatgag ctcctcctcc 60

gt 62

<210> 188

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 188

catatgaacc ggggacgcca tcgttcaaga aagcatgtgg aaggccagcc tggccatgcc 60

gc 62

<210> 189

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 189

cacatcaata ggaaccgcca tcgttcaaga aagcctgtgg aaaaccaaac aaggaagaac 60

gc 62

<210> 190

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 190

cacatgcacc gcggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aaacgcagct cgtcgccacg 60

cc 62

<210> 191

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 191

cacatcaata ggaaccgcca tcgttcaaga aagcctgtgg aaaaccaaac aaggaagaac 60

gc 62

<210> 192

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 192

cacgtccacc gcggccgcgg ccgtgcaaga aagcctgtgg aagccgcggc ggccacatca 60

gc 62

<210> 193

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 193

catatgaacc ggggacgcca tcgttcaaga aagcatgtgg aaggccagcc tggccatgcc 60

gc 62

<210> 194

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 194

cacatgcacc gcggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aaacgcagct cgtcgccacg 60

cc 62

<210> 195

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 195

cacgtccacc gcggccgcag ccgtgcaaga aagcctgtgg aagccgcggc ggccacatca 60

gc 62

<210> 196

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 196

catatgaacc ggggacgcca tcgttcaaga aagcatgtgg aaggccagcc tggccatgcc 60

gc 62

<210> 197

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 197

cacatgcacc gtggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aatccaagtc tgcttcccct 60

gc 62

<210> 198

<211> 62

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 198

cacatgcacc gtggccgcaa ccgttcaaga aagcctgtgg aatccaagtc tgcttcccct 60

gc 62

<210> 199

<211> 22

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 199

ccgttcaaga aagcctgtgg aa 22

<210> 200

<211> 22

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 200

ccgtgcaaga aagcctgtgg aa 22

<210> 201

<211> 22

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 201

tcgttcaaga aagcatgtgg aa 22

<210> 202

<211> 22

<212> DNA

<213> 普通小麦

<400> 202

tcgttcaaga aagcctgtgg aa 22

<210> 203

<211> 19

<212> RNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成RNA间隔序列

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(19)

<223> n为a, c, g或u

<400> 203

nnnnnnnnnn nnnnnnnnn 19

<210> 204

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 靶标链

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(22)

<223> n为a, c, g或t

<400> 204

aaannnnnnn nnnnnnnnnn nn 22

<210> 205

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 非靶标链

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(22)

<223> n为a, c, g或t

<400> 205

tttnnnnnnn nnnnnnnnnn nn 22

<210> 206

<211> 207

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成胞嘧啶脱氨酶

<400> 206

Thr Asp Ala Glu Tyr Val Arg Ile His Glu Lys Leu Asp Ile Tyr Thr

1 5 10 15

Phe Lys Lys Gln Phe Ser Asn Asn Lys Lys Ser Val Ser His Arg Cys

20 25 30

Tyr Val Leu Phe Glu Leu Lys Arg Arg Gly Glu Arg Arg Ala Cys Phe

35 40 45

Trp Gly Tyr Ala Val Asn Lys Pro Gln Ser Gly Thr Glu Arg Gly Ile

50 55 60

His Ala Glu Ile Phe Ser Ile Arg Lys Val Glu Glu Tyr Leu Arg Asp

65 70 75 80

Asn Pro Gly Gln Phe Thr Ile Asn Trp Tyr Ser Ser Trp Ser Pro Cys

85 90 95

Ala Asp Cys Ala Glu Lys Ile Leu Glu Trp Tyr Asn Gln Glu Leu Arg

100 105 110

Gly Asn Gly His Thr Leu Lys Ile Trp Val Cys Lys Leu Tyr Tyr Glu

115 120 125

Lys Asn Ala Arg Asn Gln Ile Gly Leu Trp Asn Leu Arg Asp Asn Gly

130 135 140

Val Gly Leu Asn Val Met Val Ser Glu His Tyr Gln Cys Cys Arg Lys

145 150 155 160

Ile Phe Ile Gln Ser Ser His Asn Gln Leu Asn Glu Asn Arg Trp Leu

165 170 175

Glu Lys Thr Leu Lys Arg Ala Glu Lys Arg Arg Ser Glu Leu Ser Ile

180 185 190

Met Phe Gln Val Lys Ile Leu His Thr Thr Lys Ser Pro Ala Val

195 200 205

<210> 207

<211> 228

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成胞嘧啶脱氨酶

<400> 207

Ser Ser Lys Thr Gly Pro Val Ala Val Asp Pro Thr Leu Arg Arg Arg

1 5 10 15

Ile Glu Pro His Glu Phe Glu Val Phe Phe Asp Pro Arg Glu Leu Arg

20 25 30

Lys Glu Thr Cys Leu Leu Tyr Glu Ile Asn Trp Gly Gly Arg His Ser

35 40 45

Ile Trp Arg His Thr Ser Gln Asn Thr Asn Lys His Val Glu Val Asn

50 55 60

Phe Ile Glu Lys Phe Thr Thr Glu Arg Tyr Phe Cys Pro Asn Thr Arg

65 70 75 80

Cys Ser Ile Thr Trp Phe Leu Ser Trp Ser Pro Cys Gly Glu Cys Ser

85 90 95

Arg Ala Ile Thr Glu Phe Leu Ser Arg Tyr Pro Asn Val Thr Leu Phe

100 105 110

Ile Tyr Ile Ala Arg Leu Tyr His Leu Ala Asn Pro Arg Asn Arg Gln

115 120 125

Gly Leu Arg Asp Leu Ile Ser Ser Gly Val Thr Ile Gln Ile Met Thr

130 135 140

Glu Gln Glu Ser Gly Tyr Cys Trp His Asn Phe Val Asn Tyr Ser Pro

145 150 155 160

Ser Asn Glu Ser His Trp Pro Arg Tyr Pro His Leu Trp Val Arg Leu

165 170 175

Tyr Val Leu Glu Leu Tyr Cys Ile Ile Leu Gly Leu Pro Pro Cys Leu

180 185 190

Asn Ile Leu Arg Arg Lys Gln Ser Gln Leu Thr Ser Phe Thr Ile Ala

195 200 205

Leu Gln Ser Cys His Tyr Gln Arg Leu Pro Pro His Ile Leu Trp Ala

210 215 220

Thr Gly Leu Lys

225

<210> 208

<211> 162

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成胞嘧啶脱氨酶

<400> 208

Ser Phe Glu Arg Asn Tyr Asp Pro Arg Glu Leu Arg Lys Glu Thr Tyr

1 5 10 15

Leu Leu Tyr Glu Ile Lys Trp Gly Lys Ser Gly Lys Leu Trp Arg His

20 25 30

Trp Cys Gln Asn Asn Arg Thr Gln His Ala Glu Val Tyr Phe Leu Glu

35 40 45

Asn Ile Phe Asn Ala Arg Arg Phe Asn Pro Ser Thr His Cys Ser Ile

50 55 60

Thr Trp Tyr Leu Ser Trp Ser Pro Cys Ala Glu Cys Ser Gln Lys Ile

65 70 75 80

Val Asp Phe Leu Lys Glu His Pro Asn Val Asn Leu Glu Ile Tyr Val

85 90 95

Ala Arg Leu Tyr Tyr Pro Glu Asn Glu Arg Asn Arg Gln Gly Leu Arg

100 105 110

Asp Leu Val Asn Ser Gly Val Thr Ile Arg Ile Met Asp Leu Pro Asp

115 120 125

Tyr Asn Tyr Cys Trp Lys Thr Phe Val Ser Asp Gln Gly Gly Asp Glu

130 135 140

Asp Tyr Trp Pro Gly His Phe Ala Pro Trp Ile Lys Gln Tyr Ser Leu

145 150 155 160

Lys Leu

<210> 209

<211> 1763

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成腺苷脱氨酶

<400> 209

Ser Glu Val Glu Phe Ser His Glu Tyr Trp Met Arg His Ala Leu Thr

1 5 10 15

Leu Ala Lys Arg Ala Trp Asp Glu Arg Glu Val Pro Val Gly Ala Val

20 25 30

Leu Val His Asn Asn Arg Val Ile Gly Glu Gly Trp Asn Arg Pro Ile

35 40 45

Gly Arg His Asp Pro Thr Ala His Ala Glu Ile Met Ala Leu Arg Gln

50 55 60

Gly Gly Leu Val Met Gln Asn Tyr Arg Leu Ile Asp Ala Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Val Thr Leu Glu Pro Cys Val Met Cys Ala Gly Ala Met Ile His Ser

85 90 95

Arg Ile Gly Arg Val Val Phe Gly Ala Arg Asp Ala Lys Thr Gly Ala

100 105 110

Ala Gly Ser Leu Met Asp Val Leu His His Pro Gly Met Asn His Arg

115 120 125

Val Glu Ile Thr Glu Gly Ile Leu Ala Asp Glu Cys Ala Ala Leu Leu

130 135 140

Ser Asp Phe Phe Arg Met Arg Arg Gln Glu Ile Lys Ala Gln Lys Lys

145 150 155 160

Ala Gln Ser Ser Thr Asp Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly

165 170 175

Ser Glu Thr Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala Thr Pro Glu Ser Ser Gly

180 185 190

Gly Ser Ser Gly Gly Ser Ser Glu Val Glu Phe Ser His Glu Tyr Trp

195 200 205

Met Arg His Ala Leu Thr Leu Ala Lys Arg Ala Arg Asp Glu Arg Glu

210 215 220

Val Pro Val Gly Ala Val Leu Val Leu Asn Asn Arg Val Ile Gly Glu

225 230 235 240

Gly Trp Asn Arg Ala Ile Gly Leu His Asp Pro Thr Ala His Ala Glu

245 250 255

Ile Met Ala Leu Arg Gln Gly Gly Leu Val Met Gln Asn Tyr Arg Leu

260 265 270

Ile Asp Ala Thr Leu Tyr Val Thr Phe Glu Pro Cys Val Met Cys Ala

275 280 285

Gly Ala Met Ile His Ser Arg Ile Gly Arg Val Val Phe Gly Val Arg

290 295 300

Asn Ala Lys Thr Gly Ala Ala Gly Ser Leu Met Asp Val Leu His Tyr

305 310 315 320

Pro Gly Met Asn His Arg Val Glu Ile Thr Glu Gly Ile Leu Ala Asp

325 330 335

Glu Cys Ala Ala Leu Leu Cys Tyr Phe Phe Arg Met Pro Arg Gln Val

340 345 350

Phe Asn Ala Gln Lys Lys Ala Gln Ser Ser Thr Asp Ser Gly Gly Ser

355 360 365

Ser Gly Gly Ser Ser Gly Ser Glu Thr Pro Gly Thr Ser Glu Ser Ala

370 375 380

Thr Pro Glu Ser Ser Gly Gly Ser Ser Gly Gly Ser Asp Lys Lys Tyr

385 390 395 400

Ser Ile Gly Leu Ala Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly Trp Ala Val Ile

405 410 415

Thr Asp Glu Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys Val Leu Gly Asn

420 425 430

Thr Asp Arg His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly Ala Leu Leu Phe

435 440 445

Asp Ser Gly Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys Arg Thr Ala Arg

450 455 460

Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr Leu Gln Glu Ile

465 470 475 480

Phe Ser Asn Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe Phe His Arg Leu

485 490 495

Glu Glu Ser Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His Glu Arg His Pro

500 505 510

Ile Phe Gly Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His Glu Lys Tyr Pro

515 520 525

Thr Ile Tyr His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser Thr Asp Lys Ala

530 535 540

Asp Leu Arg Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met Ile Lys Phe Arg

545 550 555 560

Gly His Phe Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp Asn Ser Asp Val

565 570 575

Asp Lys Leu Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn Gln Leu Phe Glu

580 585 590

Glu Asn Pro Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys Ala Ile Leu Ser

595 600 605

Ala Arg Leu Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu Ile Ala Gln Leu

610 615 620

Pro Gly Glu Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu Ile Ala Leu Ser

625 630 635 640

Leu Gly Leu Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp Leu Ala Glu Asp

645 650 655

Ala Lys Leu Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp Asp Leu Asp Asn

660 665 670

Leu Leu Ala Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu Phe Leu Ala Ala

675 680 685

Lys Asn Leu Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile Leu Arg Val Asn

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<220>

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<400> 212

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<210> 213

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成腺苷脱氨酶

<400> 213

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<210> 214

<211> 1228

<212> PRT

<213> 未知

<220>

<223> 毛螺科细菌

<400> 214

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<213> 氨基酸球菌属物种

<400> 215

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<213> 丁酸弧菌属proteoclasticus

<400> 216

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<210> 217

<211> 1238

<212> PRT

<213> 暂定种Methanoplasma termitum

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<212> PRT

<213> 挑剔真杆菌（Eubacterium eligens）

<400> 218

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Tyr Leu Asp Lys Val Glu Val Arg Thr Ala Gln Lys Asp Ile Val Lys

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Ile Asn Tyr Lys Val Thr Ala Arg Asn Asn Val Asn Asp Met Val Val

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Leu Tyr Lys Leu Thr Val Gln Met Arg Asn Ser Tyr Thr Glu Ala

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Glu Glu Gln Glu Asn Gly Ile Ser Tyr Asp Lys Ile Ile Ser Pro

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Glu Ser Asp Asp Lys Glu Cys Lys Met Pro Lys Asp Ala Asp Ala

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Asn Gly Ala Tyr Cys Ile Ala Leu Lys Gly Leu Tyr Glu Val Leu

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<212> PRT

<213> 新儿手弗朗西斯菌（Francisella novicida） U112

<400> 219

Met Ser Ile Tyr Gln Glu Phe Val Asn Lys Tyr Ser Leu Ser Lys Thr

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Leu Arg Phe Glu Leu Ile Pro Gln Gly Lys Thr Leu Glu Asn Ile Lys

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Lys Leu Pro Gln Gln Lys Ser Lys Asn Lys Ser Glu Lys Asn Glu Pro

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Lys Val Lys Lys Phe Ile Ser Ile Ala Glu Ile Lys Asn Ala Val Glu

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<210> 226

<211> 1260

<212> PRT

<213> 狗口腔红棕色单胞菌（Porphyromonas crevioricanis）

<400> 226

Met Asp Ser Leu Lys Asp Phe Thr Asn Leu Tyr Pro Val Ser Lys Thr

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Leu Arg Phe Glu Leu Lys Pro Val Gly Lys Thr Leu Glu Asn Ile Glu

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Lys Ala Leu Lys Gly Glu Glu Ser Ile Ser Leu Ala Asn Leu Asn Ser

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Leu Ser Thr Leu Gly Gln Lys Glu Gly Pro His Gly Leu Ser Asn Leu

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Val Leu Ile Lys Asn Leu Leu Asp Asn Ile Ser Asp Leu Gln Arg Phe

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<210> 227

<211> 1324

<212> PRT

<213> 解糖胨普雷沃氏菌（Prevotella disiens）

<400> 227

Met Glu Asn Tyr Gln Glu Phe Thr Asn Leu Phe Gln Leu Asn Lys Thr

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Tyr Arg Asn Phe Ser Ile Asp Glu Ala Ile Asp Ala Gln Asn Ala Glu

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Leu Gln Thr Phe Asn Asn Tyr Glu Leu Ile Ala Asn Ala Leu Arg Ala

385 390 395 400

Lys Ile Lys Lys Glu Thr Lys Gln Gly Arg Lys Ser Phe Glu Lys Tyr

405 410 415

Glu Glu Tyr Ile Asp Lys Lys Val Lys Ala Ile Asp Ser Leu Ser Ile

420 425 430

Gln Glu Ile Asn Glu Leu Val Glu Asn Tyr Val Ser Glu Phe Asn Ser

435 440 445

Asn Ser Gly Asn Met Pro Arg Lys Val Glu Asp Tyr Phe Ser Leu Met

450 455 460

Arg Lys Gly Asp Phe Gly Ser Asn Asp Leu Ile Glu Asn Ile Lys Thr

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Lys Leu Ser Ala Ala Glu Lys Leu Leu Gly Thr Lys Tyr Gln Glu Thr

485 490 495

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Val Arg Asn Arg Leu Thr Gln Lys Pro Tyr Ser Lys Asp Lys Ile Arg

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Leu Cys Phe Asn Lys Pro Lys Leu Met Thr Gly Trp Val Asp Ser Lys

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Lys Ala Gln Leu Phe Arg Lys Asn Glu Ala Val Ile Gly Asp Tyr Glu

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Asp Ser Tyr Asn Gly Ile Leu Ser Phe Lys Ser Phe Gln Ser Val Asn

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Val Ala Asn Lys Asp Lys Val Ser Leu Phe Thr Tyr Asp Ile Tyr Lys

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Asn Arg Arg Tyr Met Glu Asn Lys Phe Leu Phe His Leu Ser Ile Val

900 905 910

Gln Asn Tyr Lys Ala Ala Asn Asp Ser Ala Gln Leu Asn Ser Ser Ala

915 920 925

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930 935 940

Arg Gly Glu Arg Asn Leu Leu Tyr Tyr Ser Val Ile Asp Met Lys Gly

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Asn Ile Val Glu Gln Asp Ser Leu Asn Ile Ile Arg Asn Asn Asp Leu

965 970 975

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980 985 990

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995 1000 1005

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Leu Ala Ser Ser Ile Thr Lys Asn Asn Ser Asp Lys Gln Asn Gly

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Asn Asp Lys Gly Tyr Phe Glu Phe Glu Thr Asn Tyr Asp Lys Phe

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1205 1210 1215

Gln Asn Lys Asp Asn Arg Lys Phe Phe Asp Asp Leu Ile Lys Leu

1220 1225 1230

Leu Gln Leu Thr Leu Gln Met Arg Asn Ser Asp Asp Lys Gly Asn

1235 1240 1245

Asp Tyr Ile Ile Ser Pro Val Ala Asn Ala Glu Gly Gln Phe Phe

1250 1255 1260

Asp Ser Arg Asn Gly Asp Lys Lys Leu Pro Leu Asp Ala Asp Ala

1265 1270 1275

Asn Gly Ala Tyr Asn Ile Ala Arg Lys Gly Leu Trp Asn Ile Arg

1280 1285 1290

Gln Ile Lys Gln Thr Lys Asn Lys Asp Asp Leu Asn Leu Ser Ile

1295 1300 1305

Ser Ser Thr Glu Trp Leu Asp Phe Val Arg Glu Lys Pro Tyr Leu

1310 1315 1320

Lys

<210> 228

<211> 1484

<212> PRT

<213> Peregrinibacteria细菌

<220>

<221> misc_feature

<222> (1073)..(1073)

<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸

<400> 228

Met Ser Asn Phe Phe Lys Asn Phe Thr Asn Leu Tyr Glu Leu Ser Lys

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Thr Leu Arg Phe Glu Leu Lys Pro Val Gly Asp Thr Leu Thr Asn Met

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Leu Asn Asp Ser Glu Lys Lys Leu Arg Asn Lys Ile Gly Glu Thr Phe

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Asn Lys Ala Gly Glu Lys Trp Lys Lys Glu Lys Tyr Pro Gln Tyr Glu

115 120 125

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145 150 155 160

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165 170 175

Gly Gly Phe Asn Gln Asn Arg Ala Asn Tyr Tyr Glu Thr Lys Lys Glu

180 185 190

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<213> 史密斯氏菌属物种（Smithella sp.）

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Ile Leu Lys Gln Asp Thr Leu Asn Val Ile Ala Asn Glu Lys Gln Lys

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<213> 人工序列

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3725 3730 3735

Thr Ala Cys Ala Thr Thr Ala Ala Cys Thr Cys Cys Cys Cys Cys

3740 3745 3750

Gly Thr Cys Cys Gly Cys Gly Ala Cys Cys Thr Cys Ala Ala Cys

3755 3760 3765

Gly Gly Gly Gly Thr Cys Thr Gly Cys Thr Thr Cys Gly Ala Thr

3770 3775 3780

Ala Gly Cys Cys Gly Cys Thr Thr Cys Cys Ala Gly Ala Ala Cys

3785 3790 3795

Cys Cys Gly Gly Ala Gly Thr Gly Gly Cys Cys Thr Ala Thr Gly

3800 3805 3810

Gly Ala Thr Gly Cys Gly Gly Ala Cys Gly Cys Gly Ala Ala Cys

3815 3820 3825

Gly Gly Gly Gly Cys Cys Thr Ala Cys Cys Ala Cys Ala Thr Cys

3830 3835 3840

Gly Cys Cys Cys Thr Cys Ala Ala Gly Gly Gly Cys Cys Ala Ala

3845 3850 3855

Cys Thr Cys Cys Thr Gly Cys Thr Cys Ala Ala Cys Cys Ala Cys

3860 3865 3870

Thr Thr Gly Ala Ala Gly Gly Ala Ala Ala Gly Cys Ala Ala Ala

3875 3880 3885

Gly Ala Cys Cys Thr Cys Ala Ala Ala Thr Thr Gly Cys Ala Gly

3890 3895 3900

Ala Ala Thr Gly Gly Cys Ala Thr Cys Ala Gly Thr Ala Ala Cys

3905 3910 3915

Cys Ala Gly Gly Ala Cys Thr Gly Gly Cys Thr Cys Gly Cys Gly

3920 3925 3930

Thr Ala Cys Ala Thr Cys Cys Ala Gly Gly Ala Ala Cys Thr Gly

3935 3940 3945

Ala Gly Ala Ala Ala Cys Gly Gly Gly Thr Cys Cys Ala Ala Gly

3950 3955 3960

Ala Ala Gly Cys Gly Gly Cys Gly Thr Ala Thr Cys Ala Ala Gly

3965 3970 3975

Cys Ala Ala Gly Ala Thr Thr Gly Ala

3980 3985

<210> 232

<211> 3987

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成Cas12a

<400> 232

atggcgggaa gcaaaaagcg ccggattaag caagacacgc agttcgaggg cttcacgaac 60

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cagctcgact gggagaacct ctccgccgcc attgactcgt accggaagga gaagactgag 300

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accacgaccg agcacgagaa cgcgctcctc cgcagcttcg acaagttcac cacctacttc 540

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cacgccatcg acacgatggt cgcgctgatc cggtcggtgc tccagatgcg gaactccaac 3720

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<210> 233

<211> 3987

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成Cas12a

<400> 233

atggcgggct ccaagaaacg ccggattaag caagataccc agttcgaggg gttcacgaac 60

ctctaccaag tgagcaagac cctccgattc gaactgattc ctcaggggaa gaccctcaag 120

cacatccagg agcaagggtt catcgaggag gacaaggcgc ggaacgacca ctacaaggaa 180

ctcaaaccca tcatcgaccg catctacaag acctacgccg atcagtgcct ccagctcgtg 240

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aagggactct tcaaagcgga gctgtttaac ggcaaggttc tcaagcaact cggcactgtg 480

accacgaccg agcatgagaa cgccctgctc cgctccttcg acaagttcac cacctacttc 540

tccgggttct accgcaaccg caagaatgtc ttcagcgcgg aggacatcag cacggccatt 600

ccacatcgaa tcgtccaaga taacttcccg aagttcaagg agaactgcca catcttcacc 660

cgactcatta ctgctgtacc gtcgttacgc gaacacttcg agaacgtcaa gaaggcaatt 720

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aagaacaatg gagccatcct gttcgtcaag aacgggcttt actacctcgg gataatgccc 1740

aagcagaagg gccgctacaa ggccctttcc ttcgagccga cggagaaaac ctccgagggg 1800

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aacaacttca tcgagcccct tgagatcact aaggagatat acgacctgaa caaccccgag 1980

aaggagccca agaagtttca aaccgcctac gccaaaaaaa ctggcgacca aaagggctac 2040

agggaggcgc tgtgtaagtg gatcgacttc acacgcgact tcctttcgaa gtatacgaag 2100

acaacctcta ttgacctgag cagcctgcgt cctagctccc agtacaaaga tttgggcgag 2160

tactacgcgg agcttaatcc actactctac cacatctcat tccagcgcat cgctgagaag 2220

gaaatcatgg acgcggtgga gacaggcaaa ctgtacctct tccagatata caacaaagac 2280

ttcgctaagg ggcaccacgg gaagcccaac cttcatacgc tctactggac gggcctattc 2340

agccccgaaa atctggccaa gacctccatc aagctgaacg gccaagcgga gctgttctac 2400

agacccaaga gccggatgaa gcggatggcc cacaggctcg gcgagaaaat gcttaacaaa 2460

aagttgaagg accagaaaac ccctatcccc gacaccctct accaggaact gtacgactac 2520

gtgaaccaca ggctctcgca cgacctttcc gacgaggccc gtgccctact cccgaacgtc 2580

attaccaaag aggtttcgca cgagatcatc aaggaccggc ggttcacgag cgacaagttt 2640

ttctttcacg tccccatcac ccttaactac caggcggcca actccccatc caagttcaac 2700

cagcgtgtga atgcctacct caaggagcac ccagagaccc cgatcattgg gatcgaccgg 2760

ggcgagcgga acctgatcta catcaccgtc atcgactcga cgggcaagat tcttgagcag 2820

agatcgttga ataccataca gcagttcgac taccagaaga aactcgacaa ccgcgagaag 2880

gagcgcgtgg cggcccgcca ggcgtggtcc gtcgttggga cgattaagga cttgaaacaa 2940

ggttatctgt cccaagtcat ccacgagatc gttgatctga tgatccacta tcaggcagtg 3000

gtggtgctgg agaatctcaa cttcggcttc aagagtaagc ggacgggaat cgccgagaag 3060

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acctccttcg ccaagatggg cactcagtcc gggttcttgt tctacgtccc cgcaccttac 3240

acctctaaga tcgaccctct gactggcttc gtagatccat tcgtgtggaa gaccattaag 3300

aaccacgaga gccgcaagca cttcctggag ggcttcgact tcctgcacta cgacgtgaag 3360

accggggact tcatccttca cttcaagatg aaccggaacc tcagcttcca gcggggcctg 3420

ccggggttca tgcccgcctg ggacatcgtg ttcgagaaga acgagaccca gttcgacgcg 3480

aagggcacgc ccttcatcgc cgggaagcgt atcgtgccgg tgatcgagaa ccatcgtttc 3540

acgggtcgct accgtgacct ctacccggcg aacgagctta tcgcactcct ggaggagaag 3600

ggcatcgtct tccgggacgg ctccaacatc ctcccgaaac tgctggaaaa cgacgactct 3660

cacgccatcg acacgatggt ggccctcatc cggtccgtgc tccaaatgcg gaacagcaac 3720

gccgccaccg gtgaggacta catcaacagc ccggtccggg atctgaacgg ggtgtgcttc 3780

gattcgcggt tccagaatcc tgagtggccg atggacgcgg atgcaaacgg ggcgtaccac 3840

atcgcgctca agggccagtt acttctgaac caccttaagg agtctaaaga tttgaaactc 3900

cagaacggga tctcgaacca ggactggctg gcctacatcc aagagttgcg gaacggcagc 3960

aagaagcggc ggattaagca agattag 3987

<210> 234

<211> 1367

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成nCas9

<400> 234

Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly Leu Ala Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly

1 5 10 15

Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys

20 25 30

Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly

35 40 45

Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys

50 55 60

Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe

85 90 95

Phe His Arg Leu Glu Glu Ser Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His

100 105 110

Glu Arg His Pro Ile Phe Gly Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His

115 120 125

Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser

130 135 140

Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met

145 150 155 160

Ile Lys Phe Arg Gly His Phe Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp

165 170 175

Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn

180 185 190

Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys

195 200 205

Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu

210 215 220

Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu

225 230 235 240

Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp

245 250 255

Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp

260 265 270

Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu

275 280 285

Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile

290 295 300

Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met

305 310 315 320

Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala

325 330 335

Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp

340 345 350

Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln

355 360 365

Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly

370 375 380

Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys

385 390 395 400

Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly

405 410 415

Glu Leu His Ala Ile Leu Arg Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu

420 425 430

Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro

435 440 445

Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met

450 455 460

Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val

465 470 475 480

Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Asn

485 490 495

Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu

500 505 510

Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr

515 520 525

Val Thr Glu Gly Met Arg Lys Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys

530 535 540

Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val

545 550 555 560

Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp Ser

565 570 575

Val Glu Ile Ser Gly Val Glu Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr

580 585 590

Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn

595 600 605

Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu

610 615 620

Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His

625 630 635 640

Leu Phe Asp Asp Lys Val Met Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr

645 650 655

Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys

660 665 670

Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala

675 680 685

Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys

690 695 700

Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His

705 710 715 720

Glu His Ile Ala Asn Leu Ala Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile

725 730 735

Leu Gln Thr Val Lys Val Val Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg

740 745 750

His Lys Pro Glu Asn Ile Val Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr

755 760 765

Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu

770 775 780

Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val

785 790 795 800

Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln

805 810 815

Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu

820 825 830

Ser Asp Tyr Asp Val Asp His Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Lys Asp

835 840 845

Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly

850 855 860

Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn

865 870 875 880

Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe

885 890 895

Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys

900 905 910

Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys

915 920 925

His Val Ala Gln Ile Leu Asp Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu

930 935 940

Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys

945 950 955 960

Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu

965 970 975

Ile Asn Asn Tyr His His Ala His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val

980 985 990

Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys Tyr Pro Lys Leu Glu Ser Glu Phe Val

995 1000 1005

Tyr Gly Asp Tyr Lys Val Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys

1010 1015 1020

Ser Glu Gln Glu Ile Gly Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr

1025 1030 1035

Ser Asn Ile Met Asn Phe Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn

1040 1045 1050

Gly Glu Ile Arg Lys Arg Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr

1055 1060 1065

Gly Glu Ile Val Trp Asp Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg

1070 1075 1080

Lys Val Leu Ser Met Pro Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu

1085 1090 1095

Val Gln Thr Gly Gly Phe Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg

1100 1105 1110

Asn Ser Asp Lys Leu Ile Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys

1115 1120 1125

Lys Tyr Gly Gly Phe Asp Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu

1130 1135 1140

Val Val Ala Lys Val Glu Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser

1145 1150 1155

Val Lys Glu Leu Leu Gly Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe

1160 1165 1170

Glu Lys Asn Pro Ile Asp Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu

1175 1180 1185

Val Lys Lys Asp Leu Ile Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe

1190 1195 1200

Glu Leu Glu Asn Gly Arg Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu

1205 1210 1215

Leu Gln Lys Gly Asn Glu Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn

1220 1225 1230

Phe Leu Tyr Leu Ala Ser His Tyr Glu Lys Leu Lys Gly Ser Pro

1235 1240 1245

Glu Asp Asn Glu Gln Lys Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His

1250 1255 1260

Tyr Leu Asp Glu Ile Ile Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg

1265 1270 1275

Val Ile Leu Ala Asp Ala Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr

1280 1285 1290

Asn Lys His Arg Asp Lys Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile

1295 1300 1305

Ile His Leu Phe Thr Leu Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe

1310 1315 1320

Lys Tyr Phe Asp Thr Thr Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr

1325 1330 1335

Lys Glu Val Leu Asp Ala Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly

1340 1345 1350

Leu Tyr Glu Thr Arg Ile Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp

1355 1360 1365

<210> 235

<211> 1367

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成enCas9

<400> 235

Asp Lys Lys Tyr Ser Ile Gly Leu Ala Ile Gly Thr Asn Ser Val Gly

1 5 10 15

Trp Ala Val Ile Thr Asp Glu Tyr Lys Val Pro Ser Lys Lys Phe Lys

20 25 30

Val Leu Gly Asn Thr Asp Arg His Ser Ile Lys Lys Asn Leu Ile Gly

35 40 45

Ala Leu Leu Phe Asp Ser Gly Glu Thr Ala Glu Ala Thr Arg Leu Lys

50 55 60

Arg Thr Ala Arg Arg Arg Tyr Thr Arg Arg Lys Asn Arg Ile Cys Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Glu Ile Phe Ser Asn Glu Met Ala Lys Val Asp Asp Ser Phe

85 90 95

Phe His Arg Leu Glu Glu Ser Phe Leu Val Glu Glu Asp Lys Lys His

100 105 110

Glu Arg His Pro Ile Phe Gly Asn Ile Val Asp Glu Val Ala Tyr His

115 120 125

Glu Lys Tyr Pro Thr Ile Tyr His Leu Arg Lys Lys Leu Val Asp Ser

130 135 140

Thr Asp Lys Ala Asp Leu Arg Leu Ile Tyr Leu Ala Leu Ala His Met

145 150 155 160

Ile Lys Phe Arg Gly His Phe Leu Ile Glu Gly Asp Leu Asn Pro Asp

165 170 175

Asn Ser Asp Val Asp Lys Leu Phe Ile Gln Leu Val Gln Thr Tyr Asn

180 185 190

Gln Leu Phe Glu Glu Asn Pro Ile Asn Ala Ser Gly Val Asp Ala Lys

195 200 205

Ala Ile Leu Ser Ala Arg Leu Ser Lys Ser Arg Arg Leu Glu Asn Leu

210 215 220

Ile Ala Gln Leu Pro Gly Glu Lys Lys Asn Gly Leu Phe Gly Asn Leu

225 230 235 240

Ile Ala Leu Ser Leu Gly Leu Thr Pro Asn Phe Lys Ser Asn Phe Asp

245 250 255

Leu Ala Glu Asp Ala Lys Leu Gln Leu Ser Lys Asp Thr Tyr Asp Asp

260 265 270

Asp Leu Asp Asn Leu Leu Ala Gln Ile Gly Asp Gln Tyr Ala Asp Leu

275 280 285

Phe Leu Ala Ala Lys Asn Leu Ser Asp Ala Ile Leu Leu Ser Asp Ile

290 295 300

Leu Arg Val Asn Thr Glu Ile Thr Lys Ala Pro Leu Ser Ala Ser Met

305 310 315 320

Ile Lys Arg Tyr Asp Glu His His Gln Asp Leu Thr Leu Leu Lys Ala

325 330 335

Leu Val Arg Gln Gln Leu Pro Glu Lys Tyr Lys Glu Ile Phe Phe Asp

340 345 350

Gln Ser Lys Asn Gly Tyr Ala Gly Tyr Ile Asp Gly Gly Ala Ser Gln

355 360 365

Glu Glu Phe Tyr Lys Phe Ile Lys Pro Ile Leu Glu Lys Met Asp Gly

370 375 380

Thr Glu Glu Leu Leu Val Lys Leu Asn Arg Glu Asp Leu Leu Arg Lys

385 390 395 400

Gln Arg Thr Phe Asp Asn Gly Ser Ile Pro His Gln Ile His Leu Gly

405 410 415

Glu Leu His Ala Ile Leu Arg Arg Gln Glu Asp Phe Tyr Pro Phe Leu

420 425 430

Lys Asp Asn Arg Glu Lys Ile Glu Lys Ile Leu Thr Phe Arg Ile Pro

435 440 445

Tyr Tyr Val Gly Pro Leu Ala Arg Gly Asn Ser Arg Phe Ala Trp Met

450 455 460

Thr Arg Lys Ser Glu Glu Thr Ile Thr Pro Trp Asn Phe Glu Glu Val

465 470 475 480

Val Asp Lys Gly Ala Ser Ala Gln Ser Phe Ile Glu Arg Met Thr Asn

485 490 495

Phe Asp Lys Asn Leu Pro Asn Glu Lys Val Leu Pro Lys His Ser Leu

500 505 510

Leu Tyr Glu Tyr Phe Thr Val Tyr Asn Glu Leu Thr Lys Val Lys Tyr

515 520 525

Val Thr Glu Gly Met Arg Lys Pro Ala Phe Leu Ser Gly Glu Gln Lys

530 535 540

Lys Ala Ile Val Asp Leu Leu Phe Lys Thr Asn Arg Lys Val Thr Val

545 550 555 560

Lys Gln Leu Lys Glu Asp Tyr Phe Lys Lys Ile Glu Cys Phe Asp Ser

565 570 575

Val Glu Ile Ser Gly Val Glu Asp Arg Phe Asn Ala Ser Leu Gly Thr

580 585 590

Tyr His Asp Leu Leu Lys Ile Ile Lys Asp Lys Asp Phe Leu Asp Asn

595 600 605

Glu Glu Asn Glu Asp Ile Leu Glu Asp Ile Val Leu Thr Leu Thr Leu

610 615 620

Phe Glu Asp Arg Glu Met Ile Glu Glu Arg Leu Lys Thr Tyr Ala His

625 630 635 640

Leu Phe Asp Asp Lys Val Met Lys Gln Leu Lys Arg Arg Arg Tyr Thr

645 650 655

Gly Trp Gly Arg Leu Ser Arg Lys Leu Ile Asn Gly Ile Arg Asp Lys

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Gln Ser Gly Lys Thr Ile Leu Asp Phe Leu Lys Ser Asp Gly Phe Ala

675 680 685

Asn Arg Asn Phe Met Gln Leu Ile His Asp Asp Ser Leu Thr Phe Lys

690 695 700

Glu Asp Ile Gln Lys Ala Gln Val Ser Gly Gln Gly Asp Ser Leu His

705 710 715 720

Glu His Ile Ala Asn Leu Ala Gly Ser Pro Ala Ile Lys Lys Gly Ile

725 730 735

Leu Gln Thr Val Lys Val Val Asp Glu Leu Val Lys Val Met Gly Arg

740 745 750

His Lys Pro Glu Asn Ile Val Ile Glu Met Ala Arg Glu Asn Gln Thr

755 760 765

Thr Gln Lys Gly Gln Lys Asn Ser Arg Glu Arg Met Lys Arg Ile Glu

770 775 780

Glu Gly Ile Lys Glu Leu Gly Ser Gln Ile Leu Lys Glu His Pro Val

785 790 795 800

Glu Asn Thr Gln Leu Gln Asn Glu Lys Leu Tyr Leu Tyr Tyr Leu Gln

805 810 815

Asn Gly Arg Asp Met Tyr Val Asp Gln Glu Leu Asp Ile Asn Arg Leu

820 825 830

Ser Asp Tyr Asp Val Asp His Ile Val Pro Gln Ser Phe Leu Ala Asp

835 840 845

Asp Ser Ile Asp Asn Lys Val Leu Thr Arg Ser Asp Lys Asn Arg Gly

850 855 860

Lys Ser Asp Asn Val Pro Ser Glu Glu Val Val Lys Lys Met Lys Asn

865 870 875 880

Tyr Trp Arg Gln Leu Leu Asn Ala Lys Leu Ile Thr Gln Arg Lys Phe

885 890 895

Asp Asn Leu Thr Lys Ala Glu Arg Gly Gly Leu Ser Glu Leu Asp Lys

900 905 910

Ala Gly Phe Ile Lys Arg Gln Leu Val Glu Thr Arg Gln Ile Thr Lys

915 920 925

His Val Ala Gln Ile Leu Asp Ser Arg Met Asn Thr Lys Tyr Asp Glu

930 935 940

Asn Asp Lys Leu Ile Arg Glu Val Lys Val Ile Thr Leu Lys Ser Lys

945 950 955 960

Leu Val Ser Asp Phe Arg Lys Asp Phe Gln Phe Tyr Lys Val Arg Glu

965 970 975

Ile Asn Asn Tyr His His Ala His Asp Ala Tyr Leu Asn Ala Val Val

980 985 990

Gly Thr Ala Leu Ile Lys Lys Tyr Pro Ala Leu Glu Ser Glu Phe Val

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Tyr Gly Asp Tyr Lys Val Tyr Asp Val Arg Lys Met Ile Ala Lys

1010 1015 1020

Ser Glu Gln Glu Ile Gly Lys Ala Thr Ala Lys Tyr Phe Phe Tyr

1025 1030 1035

Ser Asn Ile Met Asn Phe Phe Lys Thr Glu Ile Thr Leu Ala Asn

1040 1045 1050

Gly Glu Ile Arg Lys Ala Pro Leu Ile Glu Thr Asn Gly Glu Thr

1055 1060 1065

Gly Glu Ile Val Trp Asp Lys Gly Arg Asp Phe Ala Thr Val Arg

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Lys Val Leu Ser Met Pro Gln Val Asn Ile Val Lys Lys Thr Glu

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Val Gln Thr Gly Gly Phe Ser Lys Glu Ser Ile Leu Pro Lys Arg

1100 1105 1110

Asn Ser Asp Lys Leu Ile Ala Arg Lys Lys Asp Trp Asp Pro Lys

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Lys Tyr Gly Gly Phe Asp Ser Pro Thr Val Ala Tyr Ser Val Leu

1130 1135 1140

Val Val Ala Lys Val Glu Lys Gly Lys Ser Lys Lys Leu Lys Ser

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Val Lys Glu Leu Leu Gly Ile Thr Ile Met Glu Arg Ser Ser Phe

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Glu Lys Asn Pro Ile Asp Phe Leu Glu Ala Lys Gly Tyr Lys Glu

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Val Lys Lys Asp Leu Ile Ile Lys Leu Pro Lys Tyr Ser Leu Phe

1190 1195 1200

Glu Leu Glu Asn Gly Arg Lys Arg Met Leu Ala Ser Ala Gly Glu

1205 1210 1215

Leu Gln Lys Gly Asn Glu Leu Ala Leu Pro Ser Lys Tyr Val Asn

1220 1225 1230

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Glu Asp Asn Glu Gln Lys Gln Leu Phe Val Glu Gln His Lys His

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Tyr Leu Asp Glu Ile Ile Glu Gln Ile Ser Glu Phe Ser Lys Arg

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Val Ile Leu Ala Asp Ala Asn Leu Asp Lys Val Leu Ser Ala Tyr

1280 1285 1290

Asn Lys His Arg Asp Lys Pro Ile Arg Glu Gln Ala Glu Asn Ile

1295 1300 1305

Ile His Leu Phe Thr Leu Thr Asn Leu Gly Ala Pro Ala Ala Phe

1310 1315 1320

Lys Tyr Phe Asp Thr Thr Ile Asp Arg Lys Arg Tyr Thr Ser Thr

1325 1330 1335

Lys Glu Val Leu Asp Ala Thr Leu Ile His Gln Ser Ile Thr Gly

1340 1345 1350

Leu Tyr Glu Thr Arg Ile Asp Leu Ser Gln Leu Gly Gly Asp

1355 1360 1365

<210> 236

<211> 4101

<212> DNA

<213> 未知

<220>

<223> Cas9核苷酸序列

<400> 236

gacaagaagt acagcatcgg gctggcgatc gggaccaact ccgtcggctg ggctgtgatt 60

accgacgagt acaaggtgcc atccaagaag ttcaaggtcc tcggcaacac tgaccggcac 120

agcattaaga agaacctgat tggggcgctg ctgttcgatt cgggggagac tgcggaggcg 180

accaggctga agcggactgc gcgccggagg tacaccagga ggaagaatcg gatctgctac 240

ctccaggaga ttttctcgaa tgagatggcc aaggtggacg attccttctt ccatcgcctg 300

gaggagtcgt tcctcgttga ggaggacaag aagcatgaga ggcatcccat tttcgggaat 360

atcgttgacg aggtggctta ccatgagaag tacccgacca tctaccatct gcggaagaag 420

ctcgtcgatt cgaccgataa ggccgacctg cggctgatct acctggccct cgcgcacatg 480

attaagttcc ggggccattt cctcatcgag ggcgacctca acccggacaa ctcggacgtg 540

gataagctct tcattcagct cgtgcagaca tacaaccagc tcttcgagga gaatcccatt 600

aacgcctcgg gggtcgacgc taaggctatt ctctcggctc ggctgtcgaa gtcgcgccgg 660

ctggagaatc tcattgccca gctcccaggc gagaagaaga acggcctctt cggcaacctg 720

attgccctgt cgctggggct cacaccgaat ttcaagtcga acttcgacct cgccgaggac 780

gctaagctcc agctcagcaa ggatacttac gatgatgacc tcgataacct gctcgcccag 840

attggggatc agtacgcgga tctgttcctc gcggccaaga atctcagcga tgctattctc 900

ctgtcggaca ttctccgcgt caacacagag attactaagg ccccactgtc ggcgagcatg 960

attaagaggt acgatgagca tcatcaggac ctgacactgc tcaaggcgct ggtccggcag 1020

cagctccccg agaagtacaa ggagattttc ttcgatcagt caaagaatgg gtacgcgggc 1080

tacattgatg gcggcgcgtc ccaggaggag ttctacaagt tcattaagcc catcctggag 1140

aagatggacg ggaccgagga gctgctggtg aagctcaatc gggaggacct gctccggaag 1200

cagcgcacat tcgacaatgg ctcgattcct caccagattc acctgggcga gctgcacgcc 1260

attctccgca ggcaggagga cttctacccg ttcctcaagg acaaccgcga gaagatcgag 1320

aagatcctga ccttccggat tccatactac gtggggccgc tcgcgcgggg gaactcccgg 1380

ttcgcgtgga tgactcgcaa gtccgaagaa acgattacac cgtggaattt cgaggaggtc 1440

gtcgacaagg gcgctagtgc gcagtcattc attgagagga tgaccaattt cgataagaac 1500

ctgcctaacg agaaggtgct gccgaagcat tcgctgctct acgagtactt caccgtttac 1560

aatgagctga ccaaggtgaa gtatgtgact gagggcatga ggaagccagc gttcctgagc 1620

ggcgagcaga agaaggctat cgtggacctg ctcttcaaga ctaaccggaa ggtgactgtg 1680

aagcagctca aggaggacta cttcaagaag attgagtgct tcgattccgt tgagattagc 1740

ggggtggagg atcggttcaa tgcttcgctc gggacatacc acgatctcct gaagatcatt 1800

aaggataagg acttcctcga caacgaggag aacgaggaca ttctcgaaga tattgtcctg 1860

accctcaccc tcttcgagga tcgggagatg atcgaggaga ggctcaagac atacgctcat 1920

ctgttcgatg ataaggtcat gaagcagctg aagcgcaggc ggtacacagg gtgggggcgg 1980

ctgagccgga agctgatcaa cgggattcgg gataagcagt ccgggaagac aattctcgac 2040

ttcctcaagt ccgacgggtt cgctaaccgg aacttcatgc agctcattca tgatgactcg 2100

ctgacattca aggaggatat tcagaaggcg caggtttcgg ggcagggcga ctcgctccac 2160

gagcatattg cgaatctggc gggctccccc gcgattaaga agggcattct gcaaaccgtc 2220

aaggtggttg atgagctggt caaggtcatg gggcggcata agccagagaa tattgtcatc 2280

gagatggcgc gggagaatca gaccacacag aaggggcaga agaactcacg ggagcggatg 2340

aagcgcatcg aggagggcat caaggagctg gggtcgcaga tcctgaagga gcatcccgtg 2400

gagaacactc agctgcaaaa tgagaagctg tacctctact acctccagaa cgggagggac 2460

atgtatgtgg atcaggagct ggatattaat aggctgagcg attacgatgt cgaccacatt 2520

gtcccacagt cgttcctgaa ggacgacagc attgacaaca aggtgctgac ccgctcggat 2580

aagaacaggg gcaagagcga taatgttcca agcgaggagg ttgtgaagaa gatgaagaac 2640

tactggcggc agctcctgaa cgcgaagctc atcacacagc ggaagttcga caacctcacc 2700

aaggctgagc gcgggggcct gagcgagctg gacaaggcgg ggttcattaa gaggcagctg 2760

gtcgagacac ggcagattac aaagcatgtt gcgcagattc tcgattcccg gatgaacacc 2820

aagtacgatg agaacgataa gctgattcgg gaggtcaagg taattaccct gaagtccaag 2880

ctggtgtccg acttcaggaa ggacttccag ttctacaagg ttcgggagat caacaactac 2940

caccacgcgc atgatgccta cctcaacgcg gtcgtgggga ccgctctcat caagaagtac 3000

ccaaagctgg agtcagagtt cgtctacggg gattacaagg tttacgacgt gcggaagatg 3060

atcgctaaga gcgagcagga gattggcaag gctaccgcta agtacttctt ctactccaac 3120

atcatgaact tcttcaagac agagattacc ctcgcgaatg gcgagatccg gaagaggccc 3180

ctcatcgaga caaatgggga gacaggggag attgtctggg ataaggggcg ggatttcgcg 3240

accgtccgga aggtcctgtc gatgccccag gttaatattg tcaagaagac tgaggtccag 3300

actggcggct tctcaaagga gtcgattctc ccaaagagga actccgataa gctcattgct 3360

cggaagaagg attgggaccc caagaagtac gggggattcg actcccccac tgttgcttac 3420

tctgttctgg ttgttgctaa ggtggagaag gggaagtcga agaagctgaa gagcgtgaag 3480

gagctgctcg ggattacaat tatggagagg tcatccttcg agaagaatcc catcgacttc 3540

ctggaggcca agggctacaa ggaggtgaag aaggacctga ttattaagct gcccaagtac 3600

tcgctcttcg agctggagaa tgggcggaag cggatgctgg cgtccgcggg ggagctgcaa 3660

aaggggaacg agctggcgct cccctccaag tatgtgaact tcctctacct ggcgtcgcac 3720

tacgagaagc tgaaggggtc cccagaggat aatgagcaga agcagctctt cgtcgagcag 3780

cataagcact acctggacga gattatcgag cagattagcg agttctcgaa gcgggtcatc 3840

ctcgcggatg cgaacctgga taaggtgctc agcgcctaca ataagcaccg ggacaagccg 3900

attcgggagc aggcggagaa tattattcac ctcttcacac tcaccaacct cggggcacca 3960

gctgcgttca agtacttcga cactactatc gaccggaagc ggtacacctc gacgaaggag 4020

gtgctcgacg ccaccctcat tcaccagtcg atcacaggcc tgtacgagac acggattgac 4080

ctgtcccagc tcgggggcga c 4101

<210> 237

<211> 4101

<212> DNA

<213> 未知

<220>

<223> Cas9核苷酸序列

<400> 237

gacaagaagt actccattgg cctggcgatt gggacaaact cggtggggtg ggccgtgatt 60

acggatgagt acaaggttcc aagcaagaag ttcaaggtcc tcgggaacac agatcggcat 120

tcgattaaga agaatctcat tggggcgctc ctcttcgact cgggggagac agcggaggct 180

accaggctca agcggacagc caggcggcgg tacacaaggc ggaagaatcg catctgctac 240

ctccaggaga ttttctcgaa tgagatggcg aaggtggacg acagcttctt ccatcggctg 300

gaggagtcct tcctggtgga ggaggataag aagcacgaga ggcatccaat tttcgggaac 360

atcgtggacg aggttgcgta ccatgagaag taccctacaa tctaccatct gcggaagaag 420

ctggttgact ccacagacaa ggcggacctg aggctgatct acctcgctct ggcccacatg 480

attaagttcc gcgggcattt cctgatcgag ggggacctga atcccgacaa ttcggatgtg 540

gacaagctct tcatccagct ggtgcagacc tacaaccagc tgttcgagga gaatcccatc 600

aatgcgtcgg gcgttgacgc taaggccatt ctgtccgcta ggctgtcgaa gagcaggagg 660

ctggagaacc tgatcgccca gctgccaggc gagaagaaga atgggctctt cgggaatctg 720

attgcgctct ccctggggct gacaccgaac ttcaagagca atttcgatct ggctgaggac 780

gcgaagctcc agctctcgaa ggacacttac gacgatgacc tcgataacct cctcgcgcag 840

atcggggacc agtacgctga tctcttcctc gccgctaaga acctctcgga tgctatcctg 900

ctctccgaca ttctccgggt taataccgag attacaaagg ccccactgtc ggcgtccatg 960

atcaagcggt acgatgagca tcatcaggat ctcaccctgc tcaaggccct cgtgcggcag 1020

cagctgcccg agaagtacaa ggagattttc ttcgaccaga gcaagaatgg gtacgctggc 1080

tacattgacg gcggggcctc acaggaggag ttctacaagt tcatcaagcc aatcctggag 1140

aagatggatg ggacagagga gctgctggtg aagctcaacc gggaggatct gctcaggaag 1200

cagcggacgt tcgacaacgg gtcgattccc catcagatcc acctggggga gctgcacgcg 1260

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aagattctca ccttccggat tccctactac gtcgggccac tcgcgcgggg caatagcagg 1380

ttcgcctgga tgacacggaa gagcgaggag acaatcaccc cctggaactt cgaggaggtt 1440

gtcgacaagg gggcgtccgc ccagtcattc attgagcgga tgaccaattt cgacaagaat 1500

ctgccaaatg agaaggttct cccaaagcat agcctcctct acgagtactt cactgtttac 1560

aacgagctga ccaaggtgaa gtatgtgacc gagggcatgc ggaagcccgc gttcctgtcc 1620

ggcgagcaga agaaggccat tgtggacctc ctgttcaaga ccaatcgcaa ggtcacagtc 1680

aagcagctca aggaggatta cttcaagaag atcgagtgct tcgactcggt tgagattagc 1740

ggggtggagg atcggttcaa cgcgagcctc ggcacttacc acgacctcct gaagatcatc 1800

aaggataagg acttcctcga caacgaggag aacgaggata ttctggagga catcgtgctc 1860

accctgacgc tgttcgagga tcgggagatg atcgaggagc gcctgaagac ctacgctcat 1920

ctcttcgatg ataaggtcat gaagcagctg aagaggaggc ggtacaccgg gtggggccgc 1980

ctgagcagga agctcattaa cgggatcagg gacaagcaga gcggcaagac catcctggac 2040

ttcctcaaga gcgatggctt cgccaaccgg aatttcatgc agctcatcca cgacgactcc 2100

ctcaccttca aggaggacat tcagaaggct caggtcagcg gccagggcga ctcgctgcat 2160

gagcacatcg ctaacctggc gggcagccca gccatcaaga agggcatcct ccagacagtg 2220

aaggtcgtgg atgagctggt gaaggtcatg ggccggcata agcccgagaa tattgtgatt 2280

gagatggcgc gggagaatca gaccactcag aagggccaga agaactcgcg ggagcgcatg 2340

aagaggatcg aggaggggat taaggagctg ggcagccaga ttctcaagga gcaccccgtg 2400

gagaataccc agctccagaa cgagaagctg tacctctact acctccagaa tgggcgggac 2460

atgtatgttg atcaggagct ggacatcaat cgcctctcgg attacgacgt ggaccacatc 2520

gtgccccaga gcttcctgaa ggatgatagc atcgacaata aggtcctgac ccgctccgac 2580

aagaatcgcg gcaagagcga caacgtgccg agcgaggagg tcgtgaagaa gatgaagaac 2640

tactggcggc agctgctgaa cgcgaagctc attacacagc ggaagttcga taacctgacg 2700

aaggcggaga ggggcggcct ctccgagctg gacaaggcgg gcttcattaa gaggcagctc 2760

gtggagactc gccagatcac caagcacgtg gctcagatcc tcgatagccg gatgaatacg 2820

aagtacgatg agaatgacaa gctcatccgg gaggtgaagg taatcaccct gaagtcaaag 2880

ctcgttagcg atttccggaa ggacttccag ttctacaagg tgcgggagat taacaactac 2940

catcatgcgc acgatgcgta cctcaatgcg gtggtgggca cagccctgat taagaagtac 3000

cccaagctgg agagcgagtt cgtctacggg gactacaagg tgtacgatgt tcggaagatg 3060

atcgccaaga gcgagcagga gattgggaag gccaccgcta agtacttctt ctactcgaat 3120

attatgaatt tcttcaagac cgagatcaca ctcgctaatg gggagattcg gaagcggccc 3180

ctcatcgaga ctaacgggga gactggcgag attgtgtggg acaaggggcg cgacttcgct 3240

accgtgcgca aggtcctctc gatgccccag gttaatattg ttaagaagac agaggtgcag 3300

acgggcgggt tctccaagga gtctatcctg ccgaagcgga actcggacaa gctgatcgcc 3360

cgcaagaagg attgggaccc caagaagtac gggggattcg atagcccaac cgtggcttac 3420

agcgtcctgg tggtcgccaa ggttgagaag gggaagtcga agaagctcaa gagcgttaag 3480

gagctgctgg gcatcaccat catggagcgg tccagcttcg agaagaatcc tatcgacttc 3540

ctggaggcta aggggtacaa ggaggtcaag aaggacctga tcattaagct gcccaagtac 3600

tctctgttcg agctggagaa cgggaggaag cggatgctgg cgtctgctgg cgagctacag 3660

aagggcaatg agctggcgct cccctcgaag tatgtcaact tcctctacct ggcttcccat 3720

tacgagaagc tgaagggctc gcccgaggat aatgagcaga agcagctctt cgtggagcag 3780

cacaagcact acctcgacga gatcattgag cagatttcgg agttctcgaa gcgggtcatt 3840

ctcgcggacg cgaacctcga caaggtcctc tcggcgtaca acaagcaccg ggacaagccc 3900

atccgggagc aggccgagaa cattatccac ctcttcacac tgaccaacct cggcgctccc 3960

gccgcgttca agtacttcga caccaccatt gaccgcaaga gatacacatc caccaaggag 4020

gtgctggacg cgaccctcat ccaccagagc atcacaggcc tctacgagac acggatcgac 4080

ctctcgcagc tcgggggcga t 4101

<210> 238

<211> 4092

<212> DNA

<213> 未知

<220>

<223> Cas9核苷酸序列

<400> 238

gacaagaagt actcgatcgg cctggcgatt ggcacaaaca gcgtggggtg ggctgtgatc 60

actgatgagt acaaggtgcc atcgaagaag ttcaaggtgc tggggaatac agaccggcat 120

tcgatcaaga agaatctcat tggcgctctc ctcttcgatt ccggcgagac tgctgaggcg 180

acccgcctga agcgcaccgc ccggcggcgc tacactcggc ggaagaatag gatttgctac 240

ctccaggaga ttttctcgaa tgagatggcc aaggtggatg acagcttctt ccaccgcctg 300

gaggagtcgt tcctggtcga ggaggacaag aagcatgagc ggcaccctat cttcgggaat 360

atcgttgatg aggtcgccta ccacgagaag taccccacta tctaccatct ccgcaagaag 420

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<210> 239

<211> 4101

<212> DNA

<213> 未知

<220>

<223> Cas9核苷酸序列

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<211> 4101

<212> DNA

<213> 未知

<220>

<223> Cas9核苷酸序列

<400> 242

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<210> 245

<211> 3307

<212> DNA

<213> 未知

<220>

<223> Cas9核苷酸序列

<400> 245

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<212> DNA

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<220>

<223> Cas9核苷酸序列

<400> 247

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ggcgagcaga aaaaggccat cgtggacctg ctgttcaaga ccaaccggaa agtgaccgtg 1680

aagcagctga aagaggacta cttcaagaaa atcgagtgct tcgactccgt ggaaatctcc 1740

ggcgtggaag atcggttcaa cgcctccctg ggcacatacc acgatctgct gaaaattatc 1800

aaggacaagg acttcctgga caatgaggaa aacgaggaca ttctggaaga tatcgtgctg 1860

accctgacac tgtttgagga cagagagatg atcgaggaac ggctgaaaac ctatgcccac 1920

ctgttcgacg acaaagtgat gaagcagctg aagcggcgga gatacaccgg ctggggcagg 1980

ctgagccgga agctgatcaa cggcatccgg gacaagcagt ccggcaagac aatcctggat 2040

ttcctgaagt ccgacggctt cgccaacaga aacttcatgc agctgatcca cgacgacagc 2100

ctgaccttta aagaggacat ccagaaagcc caggtgtccg gccagggcga tagcctgcac 2160

gagcacattg ccaatctggc cggcagcccc gccattaaga agggcatcct gcagacagtg 2220

aaggtggtgg acgagctcgt gaaagtgatg ggccggcaca agcccgagaa catcgtgatc 2280

gaaatggcca gagagaacca gaccacccag aagggacaga agaacagccg cgagagaatg 2340

aagcggatcg aagagggcat caaagagctg ggcagccaga tcctgaaaga acaccccgtg 2400

gaaaacaccc agctgcagaa cgagaagctg tacctgtact acctgcagaa tgggcgggat 2460

atgtacgtgg accaggaact ggacatcaac cggctgtccg actacgatgt ggaccatatc 2520

gtgcctcaga gctttctggc cgacgactcc atcgacaaca aggtgctgac cagaagcgac 2580

aagaaccggg gcaagagcga caacgtgccc tccgaagagg tcgtgaagaa gatgaagaac 2640

tactggcggc agctgctgaa cgccaagctg attacccaga gaaagttcga caatctgacc 2700

aaggccgaga gaggcggcct gagcgaactg gataaggccg gcttcatcaa gagacagctg 2760

gtggaaaccc ggcagatcac aaagcacgtg gcacagatcc tggactcccg gatgaacact 2820

aagtacgacg agaatgacaa gctgatccgg gaagtgaaag tgatcaccct gaagtccaag 2880

ctggtgtccg atttccggaa ggatttccag ttttacaaag tgcgcgagat caacaactac 2940

caccacgccc acgacgccta cctgaacgcc gtcgtgggaa ccgccctgat caaaaagtac 3000

cctgccctgg aaagcgagtt cgtgtacggc gactacaagg tgtacgacgt gcggaagatg 3060

atcgccaaga gcgagcagga aatcggcaag gctaccgcca agtacttctt ctacagcaac 3120

atcatgaact ttttcaagac cgagattacc ctggccaacg gcgagatccg gaaggcccct 3180

ctgatcgaga caaacggcga aaccggggag atcgtgtggg ataagggccg ggattttgcc 3240

accgtgcgga aagtgctgag catgccccaa gtgaatatcg tgaaaaagac cgaggtgcag 3300

acaggcggct tcagcaaaga gtctatcctg cccaagagga acagcgataa gctgatcgcc 3360

agaaagaagg actgggaccc taagaagtac ggcggcttcg acagccccac cgtggcctat 3420

tctgtgctgg tggtggccaa agtggaaaag ggcaagtcca agaaactgaa gagtgtgaaa 3480

gagctgctgg ggatcaccat catggaaaga agcagcttcg agaagaatcc catcgacttt 3540

ctggaagcca agggctacaa agaagtgaaa aaggacctga tcatcaagct gcctaagtac 3600

tccctgttcg agctggaaaa cggccggaag agaatgctgg cctctgccgg cgaactgcag 3660

aagggaaacg aactggccct gccctccaaa tatgtgaact tcctgtacct ggccagccac 3720

tatgagaagc tgaagggctc ccccgaggat aatgagcaga aacagctgtt tgtggaacag 3780

cacaagcact acctggacga gatcatcgag cagatcagcg agttctccaa gagagtgatc 3840

ctggccgacg ctaatctgga caaagtgctg tccgcctaca acaagcaccg ggataagccc 3900

atcagagagc aggccgagaa tatcatccac ctgtttaccc tgaccaatct gggagcccct 3960

gccgccttca agtactttga caccaccatc gaccggaaga ggtacaccag caccaaagag 4020

gtgctggacg ccaccctgat ccaccagagc atcaccggcc tgtacgagac acggatcgac 4080

ctgtctcagc tgggaggtga c 4101

<210> 249

<211> 4101

<212> DNA

<213> 未知

<220>

<223> Cas9核苷酸序列

<400> 249

gacaagaagt acagcatcgg cctggccatc ggcaccaact ctgtgggctg ggccgtgatc 60

accgacgagt acaaggtgcc cagcaagaaa ttcaaggtgc tgggcaacac cgaccggcac 120

agcatcaaga agaacctgat cggagccctg ctgttcgaca gcggcgaaac agccgaggcc 180

acccggctga agagaaccgc cagaagaaga tacaccagac ggaagaaccg gatctgctat 240

ctgcaagaga tcttcagcaa cgagatggcc aaggtggacg acagcttctt ccacagactg 300

gaagagtcct tcctggtgga agaggataag aagcacgagc ggcaccccat cttcggcaac 360

atcgtggacg aggtggccta ccacgagaag taccccacca tctaccacct gagaaagaaa 420

ctggtggaca gcaccgacaa ggccgacctg cggctgatct atctggccct ggcccacatg 480

atcaagttcc ggggccactt cctgatcgag ggcgacctga accccgacaa cagcgacgtg 540

gacaagctgt tcatccagct ggtgcagacc tacaaccagc tgttcgagga aaaccccatc 600

aacgccagcg gcgtggacgc caaggccatc ctgtctgcca gactgagcaa gagcagacgg 660

ctggaaaatc tgatcgccca gctgcccggc gagaagaaga atggcctgtt cggaaacctg 720

attgccctga gcctgggcct gacccccaac ttcaagagca acttcgacct ggccgaggat 780

gccaaactgc agctgagcaa ggacacctac gacgacgacc tggacaacct gctggcccag 840

atcggcgacc agtacgccga cctgtttctg gccgccaaga acctgtccga cgccatcctg 900

ctgagcgaca tcctgagagt gaacaccgag atcaccaagg cccccctgag cgcctctatg 960

atcaagagat acgacgagca ccaccaggac ctgaccctgc tgaaagctct cgtgcggcag 1020

cagctgcctg agaagtacaa agagattttc ttcgaccaga gcaagaacgg ctacgccggc 1080

tacattgacg gcggagccag ccaggaagag ttctacaagt tcatcaagcc catcctggaa 1140

aagatggacg gcaccgagga actgctcgtg aagctgaaca gagaggacct gctgcggaag 1200

cagcggacct tcgacaacgg cagcatcccc caccagatcc acctgggaga gctgcacgcc 1260

attctgcggc ggcaggaaga tttttaccca ttcctgaagg acaaccggga aaagatcgag 1320

aagatcctga ccttccgcat cccctactac gtgggccctc tggccagggg aaacagcaga 1380

ttcgcctgga tgaccagaaa gagcgaggaa accatcaccc cctggaactt cgaggaagtg 1440

gtggacaagg gcgcttccgc ccagagcttc atcgagcgga tgaccaactt cgataagaac 1500

ctgcccaacg agaaggtgct gcccaagcac agcctgctgt acgagtactt caccgtgtat 1560

aacgagctga ccaaagtgaa atacgtgacc gagggaatga gaaagcccgc cttcctgagc 1620

ggcgagcaga aaaaggccat cgtggacctg ctgttcaaga ccaaccggaa agtgaccgtg 1680

aagcagctga aagaggacta cttcaagaaa atcgagtgct tcgactccgt ggaaatctcc 1740

ggcgtggaag atcggttcaa cgcctccctg ggcacatacc acgatctgct gaaaattatc 1800

aaggacaagg acttcctgga caatgaggaa aacgaggaca ttctggaaga tatcgtgctg 1860

accctgacac tgtttgagga cagagagatg atcgaggaac ggctgaaaac ctatgcccac 1920

ctgttcgacg acaaagtgat gaagcagctg aagcggcgga gatacaccgg ctggggcagg 1980

ctgagccgga agctgatcaa cggcatccgg gacaagcagt ccggcaagac aatcctggat 2040

ttcctgaagt ccgacggctt cgccaacaga aacttcatgc agctgatcca cgacgacagc 2100

ctgaccttta aagaggacat ccagaaagcc caggtgtccg gccagggcga tagcctgcac 2160

gagcacattg ccaatctggc cggcagcccc gccattaaga agggcatcct gcagacagtg 2220

aaggtggtgg acgagctcgt gaaagtgatg ggccggcaca agcccgagaa catcgtgatc 2280

gaaatggcca gagagaacca gaccacccag aagggacaga agaacagccg cgagagaatg 2340

aagcggatcg aagagggcat caaagagctg ggcagccaga tcctgaaaga acaccccgtg 2400

gaaaacaccc agctgcagaa cgagaagctg tacctgtact acctgcagaa tgggcgggat 2460

atgtacgtgg accaggaact ggacatcaac cggctgtccg actacgatgt ggaccatatc 2520

gtgcctcaga gctttctgaa ggacgactcc atcgacaaca aggtgctgac cagaagcgac 2580

aagaaccggg gcaagagcga caacgtgccc tccgaagagg tcgtgaagaa gatgaagaac 2640

tactggcggc agctgctgaa cgccaagctg attacccaga gaaagttcga caatctgacc 2700

aaggccgaga gaggcggcct gagcgaactg gataaggccg gcttcatcaa gagacagctg 2760

gtggaaaccc ggcagatcac aaagcacgtg gcacagatcc tggactcccg gatgaacact 2820

aagtacgacg agaatgacaa gctgatccgg gaagtgaaag tgatcaccct gaagtccaag 2880

ctggtgtccg atttccggaa ggatttccag ttttacaaag tgcgcgagat caacaactac 2940

caccacgccc acgacgccta cctgaacgcc gtcgtgggaa ccgccctgat caaaaagtac 3000

cctaagctgg aaagcgagtt cgtgtacggc gactacaagg tgtacgacgt gcggaagatg 3060

atcgccaaga gcgagcagga aatcggcaag gctaccgcca agtacttctt ctacagcaac 3120

atcatgaact ttttcaagac cgagattacc ctggccaacg gcgagatccg gaagcggcct 3180

ctgatcgaga caaacggcga aaccggggag atcgtgtggg ataagggccg ggattttgcc 3240

accgtgcgga aagtgctgag catgccccaa gtgaatatcg tgaaaaagac cgaggtgcag 3300

acaggcggct tcagcaaaga gtctatcctg cccaagagga acagcgataa gctgatcgcc 3360

agaaagaagg actgggaccc taagaagtac ggcggcttcg acagccccac cgtggcctat 3420

tctgtgctgg tggtggccaa agtggaaaag ggcaagtcca agaaactgaa gagtgtgaaa 3480

gagctgctgg ggatcaccat catggaaaga agcagcttcg agaagaatcc catcgacttt 3540

ctggaagcca agggctacaa agaagtgaaa aaggacctga tcatcaagct gcctaagtac 3600

tccctgttcg agctggaaaa cggccggaag agaatgctgg cctctgccgg cgaactgcag 3660

aagggaaacg aactggccct gccctccaaa tatgtgaact tcctgtacct ggccagccac 3720

tatgagaagc tgaagggctc ccccgaggat aatgagcaga aacagctgtt tgtggaacag 3780

cacaagcact acctggacga gatcatcgag cagatcagcg agttctccaa gagagtgatc 3840

ctggccgacg ctaatctgga caaagtgctg tccgcctaca acaagcaccg ggataagccc 3900

atcagagagc aggccgagaa tatcatccac ctgtttaccc tgaccaatct gggagcccct 3960

gccgccttca agtactttga caccaccatc gaccggaaga ggtacaccag caccaaagag 4020

gtgctggacg ccaccctgat ccaccagagc atcaccggcc tgtacgagac acggatcgac 4080

ctgtctcagc tgggaggtga c 4101

<210> 250

<211> 4101

<212> DNA

<213> 未知

<220>

<223> Cas9核苷酸序列

<400> 250

gacaagaagt acagcatcgg cctggacatc ggcaccaact ctgtgggctg ggccgtgatc 60

accgacgagt acaaggtgcc cagcaagaaa ttcaaggtgc tgggcaacac cgaccggcac 120

agcatcaaga agaacctgat cggagccctg ctgttcgaca gcggcgaaac agccgaggcc 180

acccggctga agagaaccgc cagaagaaga tacaccagac ggaagaaccg gatctgctat 240

ctgcaagaga tcttcagcaa cgagatggcc aaggtggacg acagcttctt ccacagactg 300

gaagagtcct tcctggtgga agaggataag aagcacgagc ggcaccccat cttcggcaac 360

atcgtggacg aggtggccta ccacgagaag taccccacca tctaccacct gagaaagaaa 420

ctggtggaca gcaccgacaa ggccgacctg cggctgatct atctggccct ggcccacatg 480

atcaagttcc ggggccactt cctgatcgag ggcgacctga accccgacaa cagcgacgtg 540

gacaagctgt tcatccagct ggtgcagacc tacaaccagc tgttcgagga aaaccccatc 600

aacgccagcg gcgtggacgc caaggccatc ctgtctgcca gactgagcaa gagcagacgg 660

ctggaaaatc tgatcgccca gctgcccggc gagaagaaga atggcctgtt cggaaacctg 720

attgccctga gcctgggcct gacccccaac ttcaagagca acttcgacct ggccgaggat 780

gccaaactgc agctgagcaa ggacacctac gacgacgacc tggacaacct gctggcccag 840

atcggcgacc agtacgccga cctgtttctg gccgccaaga acctgtccga cgccatcctg 900

ctgagcgaca tcctgagagt gaacaccgag atcaccaagg cccccctgag cgcctctatg 960

atcaagagat acgacgagca ccaccaggac ctgaccctgc tgaaagctct cgtgcggcag 1020

cagctgcctg agaagtacaa agagattttc ttcgaccaga gcaagaacgg ctacgccggc 1080

tacattgacg gcggagccag ccaggaagag ttctacaagt tcatcaagcc catcctggaa 1140

aagatggacg gcaccgagga actgctcgtg aagctgaaca gagaggacct gctgcggaag 1200

cagcggacct tcgacaacgg cagcatcccc caccagatcc acctgggaga gctgcacgcc 1260

attctgcggc ggcaggaaga tttttaccca ttcctgaagg acaaccggga aaagatcgag 1320

aagatcctga ccttccgcat cccctactac gtgggccctc tggccagggg aaacagcaga 1380

ttcgcctgga tgaccagaaa gagcgaggaa accatcaccc cctggaactt cgaggaagtg 1440

gtggacaagg gcgcttccgc ccagagcttc atcgagcgga tgaccaactt cgataagaac 1500

ctgcccaacg agaaggtgct gcccaagcac agcctgctgt acgagtactt caccgtgtat 1560

aacgagctga ccaaagtgaa atacgtgacc gagggaatga gaaagcccgc cttcctgagc 1620

ggcgagcaga aaaaggccat cgtggacctg ctgttcaaga ccaaccggaa agtgaccgtg 1680

aagcagctga aagaggacta cttcaagaaa atcgagtgct tcgactccgt ggaaatctcc 1740

ggcgtggaag atcggttcaa cgcctccctg ggcacatacc acgatctgct gaaaattatc 1800

aaggacaagg acttcctgga caatgaggaa aacgaggaca ttctggaaga tatcgtgctg 1860

accctgacac tgtttgagga cagagagatg atcgaggaac ggctgaaaac ctatgcccac 1920

ctgttcgacg acaaagtgat gaagcagctg aagcggcgga gatacaccgg ctggggcagg 1980

ctgagccgga agctgatcaa cggcatccgg gacaagcagt ccggcaagac aatcctggat 2040

ttcctgaagt ccgacggctt cgccaacaga aacttcatgc agctgatcca cgacgacagc 2100

ctgaccttta aagaggacat ccagaaagcc caggtgtccg gccagggcga tagcctgcac 2160

gagcacattg ccaatctggc cggcagcccc gccattaaga agggcatcct gcagacagtg 2220

aaggtggtgg acgagctcgt gaaagtgatg ggccggcaca agcccgagaa catcgtgatc 2280

gaaatggcca gagagaacca gaccacccag aagggacaga agaacagccg cgagagaatg 2340

aagcggatcg aagagggcat caaagagctg ggcagccaga tcctgaaaga acaccccgtg 2400

gaaaacaccc agctgcagaa cgagaagctg tacctgtact acctgcagaa tgggcgggat 2460

atgtacgtgg accaggaact ggacatcaac cggctgtccg actacgatgt ggacgccatc 2520

gtgcctcaga gctttctgaa ggacgactcc atcgacaaca aggtgctgac cagaagcgac 2580

aagaaccggg gcaagagcga caacgtgccc tccgaagagg tcgtgaagaa gatgaagaac 2640

tactggcggc agctgctgaa cgccaagctg attacccaga gaaagttcga caatctgacc 2700

aaggccgaga gaggcggcct gagcgaactg gataaggccg gcttcatcaa gagacagctg 2760

gtggaaaccc ggcagatcac aaagcacgtg gcacagatcc tggactcccg gatgaacact 2820

aagtacgacg agaatgacaa gctgatccgg gaagtgaaag tgatcaccct gaagtccaag 2880

ctggtgtccg atttccggaa ggatttccag ttttacaaag tgcgcgagat caacaactac 2940

caccacgccc acgacgccta cctgaacgcc gtcgtgggaa ccgccctgat caaaaagtac 3000

cctaagctgg aaagcgagtt cgtgtacggc gactacaagg tgtacgacgt gcggaagatg 3060

atcgccaaga gcgagcagga aatcggcaag gctaccgcca agtacttctt ctacagcaac 3120

atcatgaact ttttcaagac cgagattacc ctggccaacg gcgagatccg gaagcggcct 3180

ctgatcgaga caaacggcga aaccggggag atcgtgtggg ataagggccg ggattttgcc 3240

accgtgcgga aagtgctgag catgccccaa gtgaatatcg tgaaaaagac cgaggtgcag 3300

acaggcggct tcagcaaaga gtctatcctg cccaagagga acagcgataa gctgatcgcc 3360

agaaagaagg actgggaccc taagaagtac ggcggcttcg acagccccac cgtggcctat 3420

tctgtgctgg tggtggccaa agtggaaaag ggcaagtcca agaaactgaa gagtgtgaaa 3480

gagctgctgg ggatcaccat catggaaaga agcagcttcg agaagaatcc catcgacttt 3540

ctggaagcca agggctacaa agaagtgaaa aaggacctga tcatcaagct gcctaagtac 3600

tccctgttcg agctggaaaa cggccggaag agaatgctgg cctctgccgg cgaactgcag 3660

aagggaaacg aactggccct gccctccaaa tatgtgaact tcctgtacct ggccagccac 3720

tatgagaagc tgaagggctc ccccgaggat aatgagcaga aacagctgtt tgtggaacag 3780

cacaagcact acctggacga gatcatcgag cagatcagcg agttctccaa gagagtgatc 3840

ctggccgacg ctaatctgga caaagtgctg tccgcctaca acaagcaccg ggataagccc 3900

atcagagagc aggccgagaa tatcatccac ctgtttaccc tgaccaatct gggagcccct 3960

gccgccttca agtactttga caccaccatc gaccggaaga ggtacaccag caccaaagag 4020

gtgctggacg ccaccctgat ccaccagagc atcaccggcc tgtacgagac acggatcgac 4080

ctgtctcagc tgggaggtga c 4101

<210> 251

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 251

tgattccaca ggctttcttg aac 23

<210> 252

<211> 26

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GRF5合成结合位点

<400> 252

aaccgttcaa gaaagcctgt ggaacg 26

<210> 253

<211> 8

<212> PRT

<213> 玉米

<400> 253

Asn Arg Ser Arg Lys Pro Val Glu

1 5

<210> 254

<211> 27

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 254

aaccgttcaa gaaagcctgt ggaaacg 27

<210> 255

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 突变GRF miRNA结合位点

<400> 255

Asn Arg Ser Arg Lys Pro Leu Lys Thr

1 5

<210> 256

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 突变GRF miRNA结合位点

<400> 256

Asn Arg Ser Lys Lys Pro Val Glu Thr

1 5

<210> 257

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(27)

<223> n为a, c, g或t

<400> 257

tttvnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnn 27

<210> 258

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(21)

<223> n为a, c, g或t

<400> 258

nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn ngg 23

<210> 259

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(27)

<223> n为a, c, g或t

<400> 259

tttvnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnn 27

<210> 260

<211> 20

<212> PRT

<213> 玉米

<400> 260

His Met His Arg Gly Arg Asn Arg Ser Arg Lys Pro Val Glu Thr Gln

1 5 10 15

Leu Ala Pro Gln

20

<210> 261

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 261

cttccacagg ctttcttgaa 20

<210> 262

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 262

attccacagg ctttcttgaa 20

<210> 263

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GRF6合成结合位点

<400> 263

aaccgttcaa gaaagcctgt ggaaacc 27

<210> 264

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GRF6合成结合位点

<400> 264

aaccgttcaa gaaaacctgt ggaaacc 27

<210> 265

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GRF6合成结合位点

<400> 265

aaccgttcaa gaaagcctgt caaaacc 27

<210> 266

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GRF6合成结合位点

<400> 266

aaccgttcaa gaaaacctgt caaaacc 27

<210> 267

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GRF6合成结合位点

<400> 267

aaccgttcaa aaaagcctgt ggaaacc 27

<210> 268

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GRF6合成结合位点

<400> 268

aaccgttcaa gaaagcctgt aaaaacc 27

<210> 269

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> GRF6合成结合位点

<400> 269

aaccgttcaa gaaaacctgt aaaaacc 27

<210> 270

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 270

cacaggcttt cttgaacggt tct 23

<210> 271

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 271

cacaggcttt cttgaacggt gac 23

<210> 272

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 272

cacaggcttt cttgaacggt tct 23

<210> 273

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 273

cacaggcttt cttgaacggt ggc 23

<210> 274

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成间隔序列

<400> 274

cacaggcttt cttgaactgt gaa 23

<210> 275

<211> 68

<212> DNA

<213> 玉米

<400> 275

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc gcaaccgttc aagaaagcct gtggaaacgc 60

agctcgcg 68

<210> 276

<211> 60

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 276

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc gcaagaaagc ctgtggaaac gcagctcgcg 60

<210> 277

<211> 58

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 277

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc gagaaagcct gtggaaacgc agctcgcg 58

<210> 278

<211> 23

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 278

agcctgtgga aacgcagctc gcg 23

<210> 279

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 279

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc gctcaagaaa gcctgtggaa acgcagctcg 60

cg 62

<210> 280

<211> 59

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 280

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc caagaaagcc tgtggaaacg cagctcgcg 59

<210> 281

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 281

agaaagcctg tggaaacgca gctcgcg 27

<210> 282

<211> 58

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 282

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc aagaaagcct gtggaaacgc agctcgcg 58

<210> 283

<211> 61

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 283

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc gtcaagaaag cctgtggaaa cgcagctcgc 60

g 61

<210> 284

<211> 60

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 284

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc gcaagaaagc ctgtggaaac gcagctcgcg 60

<210> 285

<211> 56

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 285

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc gaaagcctgt ggaaacgcag ctcgcg 56

<210> 286

<211> 60

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 286

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc gcaagaaagc ctgtggaaac gcagctcgcg 60

<210> 287

<211> 40

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 287

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc acggctcgcg 40

<210> 288

<211> 33

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 288

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc gcg 33

<210> 289

<211> 59

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 289

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc caagaaagcc tgtggaaacg cagctcgcg 59

<210> 290

<211> 63

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 290

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc ggttcaagaa agcctgtgga aacgcagctc 60

gcg 63

<210> 291

<211> 58

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 291

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc aagaaagcct gtggaaacgc agctcgcg 58

<210> 292

<211> 67

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 292

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc gcaaccgtca agaaagcctg tggaaacgca 60

gctcgcg 67

<210> 293

<211> 63

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 293

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc gcttcaagaa agcctgtgga aacgcagctc 60

gcg 63

<210> 294

<211> 39

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 294

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc cagtcccaa 39

<210> 295

<211> 59

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 295

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc caagaaagcc tgtggaaacg cagctcgcg 59

<210> 296

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 296

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc gctcaagaaa gcctgtggaa acgcagctcg 60

cg 62

<210> 297

<211> 59

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 297

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc gcaagaagcc tgtggaaacg cagctcgcg 59

<210> 298

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 298

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc gcaaccgaaa gcctgtggaa acgcagctcg 60

cg 62

<210> 299

<211> 59

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 299

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc caagaaagcc tgtggaaacg cagctcgcg 59

<210> 300

<211> 65

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 300

agtactgcga gcgccacatg caccgcggca accgttcaag aaagcctgtg gaaacgcagc 60

tcgcg 65

<210> 301

<211> 63

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 301

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc gcaacaagaa agcctgtgga aacgcagctc 60

gcg 63

<210> 302

<211> 67

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 302

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc gcaaccttca agaaagcctg tggaaacgca 60

gctcgcg 67

<210> 303

<211> 59

<212> DNA

<213> 人工序列

<220>

<223> 合成寡核甘酸

<400> 303

agtactgcga gcgccacatg caccgcggcc caagaaagcc tgtggaaacg cagctcgcg 59

Claims (116)

1.一种植物或其植物部分，其包含编码生长调节因子(GRF)转录因子的内源性基因中的至少一个非天然突变，其中编码GRF转录因子的内源性基因中的至少一个非天然突变导致由内源性基因产生的增加的mRNA水平。

2.权利要求1的植物，其中所述植物是单子叶植物。

3.权利要求1的植物，其中所述植物是双子叶植物。

4.前述权利要求中任一项的植物，其中所述植物是玉米、大豆、油菜、小麦、水稻、棉花、甘蔗、甜菜、大麦、燕麦、苜蓿、向日葵、红花、油棕、芝麻、椰子、烟草、马铃薯、甘薯、木薯、咖啡、苹果、李子、杏、桃、樱桃、梨、无花果、香蕉、柑橘、可可、鳄梨、橄榄、杏仁、核桃、草莓、西瓜、胡椒、葡萄、番茄、黄瓜或芸苔属物种。

5.权利要求1或2的植物，其中所述植物是玉米，任选地其中所述玉米植物包含矮小/半矮化表型。

6.权利要求1或2的植物，其中所述植物是小麦，任选地其中内源生长调节因子(GRF)转录因子中的至少一个非天然突变在A基因组、B基因组、D基因组或其任何组合中。

7.前述权利要求中任一项的植物或其植物部分，其中所述至少一个突变是碱基取代、缺失和/或插入。

8.前述权利要求中任一项的植物或其植物部分，其中编码GRF转录因子的内源性基因包括：

(a)与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的核苷酸序列；

(b)与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少95％同一性的核苷酸序列；或者

(c)SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的任一个核苷酸序列中列出的核苷酸序列。

9.权利要求8的植物或其植物部分，其中编码GRF转录因子的内源性基因包含miR396结合位点序列，其在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置11、19、21和/或22中的至少一个中包含突变。

10.权利要求8或9的植物或其植物部分，其中在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置11处的突变是从G到A、T或C。

11.权利要求8或9的植物或其植物部分，其中在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置19处的突变是从G到A、T或C。

12.权利要求8或9的植物或其植物部分，其中在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置21处的突变是从G到A、T或C。

13.权利要求8或9的植物或其植物部分，其中在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置22处的突变是从G到A、T或C。

14.权利要求8至10中任一项的植物或其植物部分，其中在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置11处的突变是从G>A。

15.权利要求8至9或11中任一项的植物或其植物部分，其中在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置19处的突变是从G>A或G>C。

16.权利要求8至9或12中任一项的植物或其植物部分，其中在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置21处的突变是从G>A或G>C。

17.权利要求8至9或13中任一项的植物或其植物部分，其中在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置22处的突变是G>A或G>C。

18.权利要求8至17中任一项的植物或其植物部分，其中所述植物是玉米，任选具有矮小/半矮化表型的玉米植物。

19.前述权利要求中任一项的植物或植物部分，其中所述GRF转录因子是GRF1、GRF2、GRF3、GRF4、GRF5、GRF6、GRF7、GRF8、GRF9、GRF10、GRF11、GRF12、GRF13、GRF14、GRF15、GRF16、GRF17、GRF18、GRF19或GRF20。

20.权利要求1-19中任一项的植物或植物部分，其中所述植物是玉米并且所述GRF转录因子是GRF6、GRF2、GRF1、GRF14、GRF15、GRF8、GRF4、GRF12、GRF10、GRF11、GRF5、GRF3、GRF9、GRF13或GRF7。

21.一种植物细胞，其包含碱基编辑系统，其包括：

(a)CRISPR相关效应蛋白；

(b)胞苷脱氨酶或腺苷脱氨酶；和

(c)具有与编码GRF转录因子的内源靶基因互补的间隔序列的引导核酸(gRNA)。

22.权利要求21的植物细胞，其中编码GRF转录因子的内源靶基因与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的核苷酸序列中的任一个具有至少90％的序列同一性。

23.权利要求21或22的植物细胞，其中gRNA包含SEQ ID NO：48-71中任一个的核苷酸序列。

24.由权利要求1至20中任一项的植物部分或权利要求21至23中任一项的植物细胞再生的植物。

25.一种植物细胞，其在GRF转录因子基因的miR396结合位点序列内包含至少一个非天然突变，其中所述至少一个非天然突变阻止或减少miR396与由GRF转录因子基因产生的mRNA的结合，导致由GRF转录因子基因产生的增加的mRNA水平，进一步地，其中所述至少一个非天然突变是使用包含核酸结合结构域的编辑系统引入的取代、插入或缺失，所述核酸结合结构域与具有SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列的GRF转录因子基因中的靶位点结合。

26.一种植物或其部分，其包含内源GRF转录因子基因，所述内源GRF转录因子基因包含突变并产生具有减少的miR396结合的mRNA，其中突变的内源GRF转录因子基因包含靶基因(靶核酸)，其包含与SEQ ID NO：4、5或9-18的任一个核苷酸序列具有至少80％同一性的序列，其中SEQ ID NO：4、5或9-18中的每一个包含与SEQ ID NO：1具有至少90％序列同一性的序列，并且靶基因在与SEQ ID NO：1具有至少90％序列同一性的序列内发生突变。

27.一种植物或其部分，其包含内源GRF转录因子基因，所述内源GRF转录因子基因包含突变并产生具有减少的miR396结合的mRNA，其中突变的内源GRF转录因子基因包含靶基因(靶核酸)，其包含与SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7的核苷酸序列具有至少80％的同一性的序列，其中SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7的核苷酸序列中的每一个包含与SEQ ID NO：2的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列，并且靶基因在与SEQ ID NO：2的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列内发生突变。

28.一种植物或其部分，其包含内源GRF转录因子基因，所述内源GRF转录因子基因包含突变并产生具有减少的miR396结合的mRNA，其中突变的内源GRF转录因子基因包含靶基因(核酸)，其包含与SEQ ID NO：8的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列，SEQ ID NO：8的核苷酸序列包含与SEQ ID NO：3的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列，并且靶基因在与SEQ ID NO：3的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列内发生突变。

29.权利要求26的植物或其部分，其中所述靶基因在与SEQ ID NO：1的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列内通过编辑系统被突变，所述编辑系统包含结合与SEQ ID NO：4、5或9-18的任一个核苷酸序列具有至少80％同一性的序列内的靶位点的核酸结合结构域。

30.权利要求27的植物或其部分，其中所述靶基因在与SEQ ID NO：2的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列内通过编辑系统被突变，所述编辑系统包含结合与SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列内的靶位点的核酸结合结构域。

31.权利要求28的植物或其部分，其中所述靶基因在与SEQ ID NO：2具有至少90％序列同一性的序列内通过编辑系统被突变，所述编辑系统包含结合SEQ ID NO：21或SEQ ID NO：22的核苷酸序列内的靶位点的核酸结合结构域。

32.权利要求29的植物或其部分，其中所述靶基因在与SEQ ID NO：1的核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列内通过编辑系统被突变，所述编辑系统包含结合具有SEQ IDNO：19、20或24-33的任一个核苷酸序列的核苷酸序列的靶位点的核酸结合结构域。

33.权利要求28的植物或其部分，其中所述靶基因在与SEQ ID NO：3具有至少90％序列同一性的序列内通过编辑系统被突变，所述编辑系统包含结合与SEQ ID NO：8的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列内的靶位点的核酸结合结构域。

34.权利要求33的植物或其部分，其中所述靶基因在与SEQ ID NO：3具有至少90％序列同一性的序列内通过编辑系统被突变，所述编辑系统包含结合SEQ ID NO：23的核苷酸序列内的靶位点的核酸结合结构域。

35.权利要求26至34中任一项的植物或其部分，其中所述突变是插入和/或缺失。

36.权利要求26至35中任一项的植物或其部分，其中所述突变是点突变。

37.权利要求26至36中任一项的植物或其部分，其中所述编辑系统的核酸结合结构域来自多核苷酸引导的核酸内切酶、CRISPR-Cas核酸内切酶(例如，CRISPR-Cas效应蛋白)、锌指核酸酶、转录激活因子样效应核酸酶(TALEN)和/或Argonaute蛋白。

38.权利要求26至37中任一项的植物或其部分，其中所述植物是玉米、大豆、油菜、小麦、水稻、棉花、甘蔗、甜菜、大麦、燕麦、苜蓿、向日葵、红花、油棕、芝麻、椰子、烟草、马铃薯、甘薯、木薯、咖啡、苹果、李子、杏、桃、樱桃、梨、无花果、香蕉、柑橘、可可、鳄梨、橄榄、杏仁、核桃、草莓、西瓜、胡椒、葡萄、番茄、黄瓜或芸苔属物种。

39.权利要求26至38中任一项的植物或其部分，其中所述植物部分是细胞。

40.权利要求26至39中任一项的植物或其部分，其中所述植物包括增加的生长和/或增加的生长速率。

41.权利要求40的植物，其中所述增加的生长和/或增加的生长速率是在根和/或果实中。

42.权利要求26至41的植物或其部分，其中所述植物是玉米并且所述果实是穗，任选地其中所述玉米植物包含矮小/半矮化表型。

43.一种植物，其包含生长调节因子(GRF)转录因子基因，所述基因包含核苷酸序列SEQID NO：1-3、145、146或199-202中任一个中的突变和/或包含SEQ ID NO：34-41中任一个的核苷酸序列。

44.一种玉米植物，其包含生长调节因子(GRF)转录因子基因，所述基因包含SEQ IDNO：34-41中任一个的核苷酸序列。

45.权利要求1至44中任一项的植物，其表现出以下表型中的至少一种：增加的分生组织大小、增加的种子大小、增加的生物量、增加的叶大小、增加的根大小、增加的氮利用效率、增加的抗病性、增加的抗病性、增加的高度和/或增加的节间长度。

46.一种产生/培育无转基因碱基编辑植物的方法，所述方法包括：

(a)将权利要求1至45中任一项的植物与无转基因植物杂交，从而将至少一个突变或突变引入无转基因的植物中；和

(b)选择包含所述至少一个突变或所述突变且无转基因的后代植物，从而产生无转基因碱基编辑植物。

47.一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，所述方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列具有至少80％序列同一性的序列，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

48.一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，所述方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：14的核苷酸序列具有至少65％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：9或SEQ ID NO：14的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

49.一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，所述方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：4、5或9-18中任一个的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：4、5或9-18中任一个的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：1具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

50.一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，所述方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：6或SEQ ID NO：7的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQID NO：6或SEQ ID NO：7的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：2具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

51.一种用于编辑植物细胞基因组中特定位点的方法，所述方法包括：以位点特异性方式切割植物细胞中内源GRF转录因子基因内的靶位点，所述内源GRF转录因子基因包含与SEQ ID NO：8的核苷酸序列具有约80％序列同一性的序列，并且包含在SEQ ID NO：8的bp位置21至42处的miR396结合位点序列，所述结合位点序列与SEQ ID NO：3具有至少90％的序列同一性，从而在植物细胞的内源GRF转录因子基因中产生编辑。

52.权利要求46-51的方法，进一步包括从包含内源GRF转录因子基因中的编辑的植物细胞再生植物以产生在其内源GRF转录因子基因中包含所述编辑的植物。

53.权利要求52的方法，其中在其内源GRF转录因子基因中包含编辑的植物与不包含编辑的对照植物相比具有增加的生长。

54.权利要求52或53的方法，其中所述编辑导致非天然突变。

55.一种制造植物的方法，所述方法包括：

(a)使包含编码GRF转录因子的内源性基因的植物细胞群体与包含核酸结合结构域的编辑系统接触，所述核酸结合结构域结合与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202或SEQ IDNO：4-18、121-144或173-198的核苷酸序列具有至少80％同一性的序列；

(b)从所述群体中选择植物细胞，所述植物细胞在编码GRF转录因子的至少一个内源性基因中包含突变，其中所述突变是所述至少一个内源性基因中至少一个核苷酸的取代，其中所述突变减少或消除miR396与由包含突变的编码GRF转录因子的至少一个内源性基因产生的mRNA结合的能力；和

(c)将选择的植物细胞培育成植物。

56.一种产生包含其中内源GRF转录因子基因被突变的至少一个细胞的植物或其部分的方法，所述方法包括：

使植物或植物部分中的GRF转录因子基因中的靶位点与包含核酸结合结构域的编辑系统接触，所述核酸结合结构域与GRF转录因子基因中的靶位点结合，所述基因与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性、与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性或与SEQ IDNO：19-33、97-120或147-172中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性，从而产生包含在内源GRF转录因子基因中具有突变的至少一个细胞的植物或其部分。

57.权利要求56的方法，其中所述突变的内源GRF转录因子基因产生具有减少的与miR396的结合的mRNA。

58.一种产生植物或其部分的方法，所述植物或其部分包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因，所述方法包括：

使内源GRF转录因子基因中的靶位点与编辑系统接触，所述编辑系统包含与GRF转录因子基因中的靶位点结合的核酸结合结构域，所述基因与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性、与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性或与SEQ ID NO：19-33、97-120或147-172中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性，从而产生包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因的植物或其部分。

59.权利要求55至58中任一项的方法，其中SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198的核苷酸序列包含与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202的至少一个核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列，并且与SEQ ID NO：19-33、97-120或147-172的至少一个核苷酸序列具有至少90％序列同一性的序列已被修饰。

60.权利要求55至59中任一项的方法，其中所述植物与对照植物相比表现出增加的生长。

61.权利要求55至60中任一项的方法，其中所述植物表现出以下表型中的至少一种：增加的分生组织大小、增加的种子大小、增加的生物量、增加的叶大小、增加的根大小、增加的氮利用效率、增加的抗病性、增加的高度和/或增加的节间长度。

62.一种产生具有增加的生长或增加的生长速率的植物或其部分的方法，所述方法包括：

使植物或植物部分中的内源GRF转录因子基因中的靶位点与包含核酸结合结构域的编辑系统接触，所述核酸结合结构域与GRF转录因子基因中的靶位点结合，所述基因与SEQ IDNO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性、与SEQ IDNO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性或与SEQID NO：19-33、97-120或147-172中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性，从而产生包含产生具有减少的miR396结合的mRNA的突变的内源GRF转录因子基因的植物或其部分，从而产生具有增加的生长或增加的生长速率的植物或其部分。

63.权利要求55至62中任一项的方法，其中所述编辑系统进一步包含切割所述内源GRF转录因子基因的核酸酶；并且在内源GRF转录因子基因的miR396结合位点序列中引入突变。

64.权利要求55至63中任一项的方法，其中所述突变是非天然突变。

65.权利要求55至64中任一项的方法，其中所述突变是取代、插入和/或缺失。

66.权利要求55至65中任一项的方法，其中所述突变是点突变。

67.权利要求55至66中任一项的方法，其中所述核酸酶是核酸内切酶(例如，Fok1)、多核苷酸引导的核酸内切酶、CRISPR-Cas核酸内切酶(例如，CRISPR-Cas效应蛋白)、锌指核酸酶和/或转录激活因子样效应核酸酶(TALEN)。

68.权利要求43至59中任一项的方法，其中所述GRF转录因子是GRF6、GRF2、GRF1、GRF14、GRF15、GRF8、GRF4、GRF12、GRF10、GRF11、GRF5、GRF3、GRF9、GRF13或GRF7。

69.一种与GRF转录因子基因中的靶位点结合的引导核酸，所述基因包含SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列。

70.权利要求69的引导核酸，其中所述引导核酸包含具有SEQ ID NO：48-71中任一个的核苷酸序列的间隔序列。

71.权利要求69或70的引导核酸，其中所述GRF转录因子是GRF1、GRF2、GRF3、GRF4、GRF5、GRF6、GRF7、GRF8、GRF9、GRF10、GRF11、GRF12、GRF13、GRF14、GRF15、GRF16、GRF17、GRF18、GRF19或GRF20。

72.权利要求69或70的引导核酸，其中所述GRF转录因子来自玉米，任选地其中玉米GRF转录因子是GRF6、GRF2、GRF1、GRF14、GRF15、GRF8、GRF4、GRF12、GRF10、GRF11、GRF5、GRF3、GRF9、GRF13或GRF7。

73.一种系统，其包含权利要求69至72中任一项的引导核酸和与所述引导核酸缔合的CRISPR-Cas效应蛋白。

74.权利要求73的系统，进一步包含与引导核酸和CRISPR-Cas效应蛋白缔合的tracr核酸，任选地其中所述tracr核酸和所述引导核酸是共价连接的。

75.一种基因编辑系统，其包含与引导核酸缔合的CRISPR-Cas效应蛋白，其中所述引导核酸包含与GRF转录因子基因结合的间隔序列。

76.权利要求75的基因编辑系统，其中所述GRF转录因子基因包含SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列。

77.权利要求75或76的基因编辑系统，其中所述引导核酸包含具有SEQ ID NO：48-71中任一个的核苷酸序列的间隔序列。

78.权利要求75至77中任一项的基因编辑系统，进一步包含与引导核酸和CRISPR-Cas效应蛋白缔合的tracr核酸，任选地其中所述tracr核酸和所述引导核酸是共价连接的。

79.权利要求75至78中任一项的基因编辑系统，其中所述GRF转录因子是GRF1、GRF2、GRF3、GRF4、GRF5、GRF6、GRF7、GRF8、GRF9、GRF10、GRF11、GRF12、GRF13、GRF14、GRF15、GRF16、GRF17、GRF18、GRF19或GRF20。

80.权利要求75至78中任一项的基因编辑系统，其中所述GRF转录因子来自玉米，任选地其中玉米GRF转录因子是GRF6、GRF2、GRF1、GRF14、GRF15、GRF8、GRF4、GRF12、GRF10、GRF11、GRF5、GRF3、GRF9、GRF13或GRF7。

81.包含CRISPR-Cas效应蛋白的复合物，所述CRISPR-Cas效应蛋白包含切割结构域(例如，核酸酶)和引导核酸(例如，gRNA)，其中所述引导核酸与具有SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列的GRF转录因子基因中的靶位点结合，其中所述切割结构域切割靶标链。

82.一种表达盒，其包含(a)编码含有切割结构域的CRISPR-Cas效应蛋白的多核苷酸和(b)与GRF转录因子基因中的靶位点结合的引导核酸，其中引导核酸包含与以下序列互补并结合的间隔序列：与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202或SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198的至少一部分具有至少80％序列同一性的序列，任选其中一部分是约2至约22个连续核苷酸。

83.权利要求81的复合物或权利要求82的表达盒，其中所述GRF转录因子是GRF1、GRF2、GRF3、GRF4、GRF5、GRF6、GRF7、GRF8、GRF9、GRF10、GRF11、GRF12、GRF13、GRF14、GRF15、GRF16、GRF17、GRF18、GRF19或GRF20。

84.权利要求81的复合物或权利要求82的表达盒，其中所述GRF转录因子来自玉米，任选地其中玉米GRF转录因子是GRF6、GRF2、GRF1、GRF14、GRF15、GRF8、GRF4、GRF12、GRF10、GRF11、GRF5、GRF3、GRF9、GRF13或GRF7。

85.一种编码GRF转录因子的核酸，其产生具有突变的miR396结合位点的mRNA，其中突变的miR396结合位点包含破坏miR396与mRNA结合的突变，导致由核酸产生的mRNA水平增加。

86.权利要求85的核酸，其中所述突变消除了miR396与mRNA的结合。

87.权利要求85的核酸，其中所述突变将miR396结合mRNA的能力降低至少75％。

88.权利要求85至87中任一项的核酸，其中所述GRF转录因子是GRF1、GRF2、GRF3、GRF4、GRF5、GRF6、GRF7、GRF8、GRF9、GRF10、GRF11、GRF12、GRF13、GRF14、GRF15、GRF16、GRF17、GRF18、GRF19或GRF20。

89.权利要求85至87中任一项的核酸，其中所述GRF转录因子来自玉米，任选地其中玉米GRF转录因子是GRF6、GRF2、GRF1、GRF14、GRF15、GRF8、GRF4、GRF12、GRF10、GRF11、GRF5、GRF3、GRF9、GRF13或GRF7。

90.一种植物或其部分，包含权利要求85至89中任一项的核酸。

91.一种玉米植物或其部分，包含权利要求85至89中任一项的核酸，任选地其中所述玉米植物包含矮小/半矮化表型。

92.一种小麦植物或其部分，包含权利要求85至88中任一项的核酸。

93.权利要求92的小麦植物或其部分，其中所述核酸包含在A基因组、B基因组、D基因组中或其任何组合中。

94.权利要求90的植物、权利要求91的玉米植物、或权利要求92或权利要求83的小麦植物，包括增加的生长或增加的生长速率。

95.权利要求90或94的植物、权利要求91或94的玉米植物、或权利要求92至94中任一项的小麦植物，其表现出以下表型中的至少一种：增加的分生组织大小、增加的种子大小、增加的生物量、增加的叶大小、增加的根大小、增加的氮利用效率、增加的抗病性、增加的高度和/或增加的节间长度。

96.一种玉米植物或其植物部分，其在位于以下位置的至少一个内源生长调节因子(GRF)转录因子基因中包含至少一个非天然突变：

(a)由5号染色体上的碱基对(bp)位置211773221到碱基对位置211774543定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM5G893117)，任选由碱基对(bp)位置211773897到碱基对位置211773957定义并包括这些位置的染色体区间；

(b)由5号染色体上的碱基对(bp)位置200344009到碱基对位置200348833定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G034876)，任选由碱基对(bp)位置200346611到碱基对位置200346671定义并包括这些位置的染色体区间；

(c)由5号染色体上的碱基对(bp)位置13817620到碱基对位置13822440定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G033612)，任选由碱基对(bp)位置138197933到碱基对位置13819853定义并包括这些位置的染色体区间；

(d)由4号染色体上的碱基对(bp)位置177151736到碱基对位置177154443定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G105335)，任选由碱基对(bp)位置177152804到碱基对位置177152864定义并包括这些位置的染色体区间；

(e)由1号染色体上的碱基对(bp)位置257245490到碱基对位置257249295定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G018414)，任选由碱基对(bp)位置257247225到碱基对位置257247285定义并包括这些位置的染色体区间；

(f)由9号染色体上的碱基对(bp)位置25722859到碱基对位置25725873定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G119359)，任选由碱基对(bp)位置25723770到碱基对位置25723830定义并包括这些位置的染色体区间；

(g)由6号染色体上的碱基对(bp)位置60351912到碱基对位置60356302定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G098594)，任选由碱基对(bp)位置60354489到碱基对位置60354549定义并包括这些位置的染色体区间；

(h)由5号染色体上的碱基对(bp)位置196192921到碱基对位置196194872定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置196194175到碱基对位置196194235定义并包括这些位置的染色体区间；

(i)由10号染色体上的碱基对(bp)位置140393394到碱基对位置140398705定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G129147)，任选由碱基对(bp)位置140396272到碱基对位置140396332定义并包括这些位置的染色体区间；

(j)由4号染色体上碱基对(bp)位置155831622到碱基对位置155833517定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G124566)，任选由碱基对(bp)位置155832749到碱基对位置155832809定义并包括这些位置的染色体区间；

(k)由2号染色体上的碱基对(bp)位置12201898到碱基对位置12208052定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G041223)，任选由碱基对(bp)位置12204599到碱基对位置12204659定义并包括这些位置的染色体区间；

(l)由9号染色体上的碱基对(bp)位置9818327到碱基对位置9820186定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G067743)，任选由碱基对(bp)位置9819224到碱基对位置9819284定义并包括这些位置的染色体区间；

(m)由6号染色体上的碱基对(bp)位置108477686到碱基对位置108480099定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM5G850129)，任选由碱基对(bp)位置108478747到碱基对位置108478807定义并包括这些位置的染色体区间；

(n)由2号染色体上的碱基对(bp)位置225827712到碱基对位置225832487定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G099862)，任选由碱基对(bp)位置225830099到碱基对位置225830159定义并包括这些位置的染色体区间；

(o)由1号染色体上的碱基对(bp)位置272414778到碱基对位置272420567定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G178261)；

(p)由2号染色体上的碱基对(bp)位置199377455到碱基对位置199381799定义并包括这些位置的染色体区间；

(q)由7号染色体上的碱基对(bp)位置145016279到碱基对位置145019899定义并包括这些位置的染色体区间；和/或

(r)由5号染色体上的碱基对(bp)位置8708791到碱基对位置8711617定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM5G853392)，其中突变破坏了miR396与GRF转录因子的结合，导致由GRF转录因子基因产生的mRNA水平增加和(a)至(r)的染色体区间对应于B73的参考玉米基因组。

97.权利要求96的玉米植物或其部分，其中(a)和(r)的染色体区间和碱基对位置对应于版本3的B73的参考玉米基因组(B73RefGen_v3)。

98.一种与玉米植物中GRF转录因子中的靶核酸结合的引导核酸，其中所述靶核酸位于：

(a)由5号染色体上的碱基对(bp)位置211773221到碱基对位置211774543定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM5G893117)，任选由碱基对(bp)位置211773897到碱基对位置211773957定义并包括这些位置的染色体区间；

(b)由5号染色体上的碱基对(bp)位置200344009到碱基对位置200348833定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G034876)，任选由碱基对(bp)位置200346611到碱基对位置200346671定义并包括这些位置的染色体区间；

(c)由5号染色体上的碱基对(bp)位置13817620到碱基对位置13822440定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G033612)，任选由碱基对(bp)位置138197933到碱基对位置13819853定义并包括这些位置的染色体区间；

(d)由4号染色体上的碱基对(bp)位置177151736到碱基对位置177154443定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G105335)，任选由碱基对(bp)位置177152804到碱基对位置177152864定义并包括这些位置的染色体区间；

(e)由1号染色体上的碱基对(bp)位置257245490到碱基对位置257249295定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G018414)，任选由碱基对(bp)位置257247225到碱基对位置257247285定义并包括这些位置的染色体区间；

(f)由9号染色体上的碱基对(bp)位置25722859到碱基对位置25725873定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G119359)，任选由碱基对(bp)位置25723770到碱基对位置25723830定义并包括这些位置的染色体区间；

(g)由6号染色体上的碱基对(bp)位置60351912到碱基对位置60356302定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G098594)，任选由碱基对(bp)位置60354489到碱基对位置60354549定义并包括这些位置的染色体区间；

(h)由5号染色体上的碱基对(bp)位置196192921到碱基对位置196194872定义并包括这些位置的染色体区间，任选由碱基对(bp)位置196194175到碱基对位置196194235定义并包括这些位置的染色体区间；

(i)由10号染色体上的碱基对(bp)位置140393394到碱基对位置140398705定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G129147)，任选由碱基对(bp)位置140396272到碱基对位置140396332定义并包括这些位置的染色体区间；

(j)由4号染色体上碱基对(bp)位置155831622到碱基对位置155833517定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G124566)，任选由碱基对(bp)位置155832749到碱基对位置155832809定义并包括这些位置的染色体区间；

(k)由2号染色体上的碱基对(bp)位置12201898到碱基对位置12208052定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G041223)，任选由碱基对(bp)位置12204599到碱基对位置12204659定义并包括这些位置的染色体区间；

(l)由9号染色体上的碱基对(bp)位置9818327到碱基对位置9820186定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G067743)，任选由碱基对(bp)位置9819224到碱基对位置9819284定义并包括这些位置的染色体区间；

(m)由6号染色体上的碱基对(bp)位置108477686到碱基对位置108480099定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM5G850129)，任选由碱基对(bp)位置108478747到碱基对位置108478807定义并包括这些位置的染色体区间；

(n)由2号染色体上的碱基对(bp)位置225827712到碱基对位置225832487定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G099862)，任选由碱基对(bp)位置225830099到碱基对位置225830159定义并包括这些位置的染色体区间；

(o)由1号染色体上的碱基对(bp)位置272414778到碱基对位置272420567定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM2G178261)；

(p)由2号染色体上的碱基对(bp)位置199377455到碱基对位置199381799定义并包括这些位置的染色体区间；

(q)由7号染色体上的碱基对(bp)位置145016279到碱基对位置145019899定义并包括这些位置的染色体区间；和/或

(r)由5号染色体上的碱基对(bp)位置8708791到碱基对位置8711617定义并包括这些位置的染色体区间(例如，基因ID号GRMZM5G853392)，其中突变破坏了miR396与GRF转录因子的结合，导致由GRF转录因子基因产生的mRNA水平增加和(a)至(r)的染色体区间对应于B73的参考玉米基因组。

99.权利要求98的引导核酸，其中(a)和(b)的染色体区间对应于B73的参考玉米基因组。

100.一种在植物或植物部分中编辑内源GRF转录因子基因的方法，所述方法包括：

使植物或植物部分中的GRF转录因子基因中的靶位点与胞嘧啶碱基编辑系统接触，所述胞嘧啶碱基编辑系统包含胞嘧啶脱氨酶和与GRF转录因子基因中的靶位点结合的核酸结合结构域，所述基因与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性、与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性或与SEQ ID NO：19-33、97-120或147-172中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性，其中胞嘧啶脱氨酶在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列中产生至少一个C向T转化，从而产生包含在内源GRF转录因子基因中具有突变的至少一个细胞的植物或其部分。

101.一种在植物或植物部分中编辑内源GRF转录因子基因的方法，所述方法包括：

使植物或植物部分中的GRF转录因子基因中的靶位点与腺嘌呤碱基编辑系统接触，所述腺嘌呤碱基编辑系统包含腺嘌呤脱氨酶和与GRF转录因子基因中的靶位点结合的核酸结合结构域，所述基因与SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性、与SEQ ID NO：4-18、121-144或173-198中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性或与SEQ ID NO：19-33、97-120或147-172中任一个的核苷酸序列具有至少80％的序列同一性，其中胞嘧啶脱氨酶在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列中产生至少一个A向G转化，从而产生包含在内源GRF转录因子基因中具有突变的至少一个细胞的植物或其部分。

102.一种检测内源GRF转录因子基因中的突变的方法，所述方法包括在植物基因组中检测在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置11、19、21和/或22中的至少一个中的碱基取代。

103.权利要求102的方法，其中在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置11处检测到的取代是从G>A。

104.权利要求102或103的方法，其中在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置19处检测到的取代是从G>A或G>C。

105.权利要求102-104中任一项的方法，其中在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置21处检测到的取代是从G>A或G>C。

106.权利要求102-105中任一项的方法，其中在SEQ ID NO：1-3、145、146或199-202中任一个的核苷酸序列的位置22处检测到的取代是G>A或G>C。

107.一种检测内源GRF转录因子基因中的突变的方法，所述方法包括在植物基因组中检测SEQ ID NO：34-41的任一个核苷酸序列中的一个或多个。

108.一种产生植物的方法，所述植物包含内源GRF转录因子基因中的突变和至少一种感兴趣的多核苷酸，所述方法包括：

将第一植物与包含至少一种感兴趣的多核苷酸的第二植物杂交以产生子代植物，所述第一植物为权利要求1-20、24、26-45或90-97中任一项的植物；和

选择包含GRF转录因子基因中的突变和至少一种感兴趣的多核苷酸的后代植物，从而产生包含内源GRF转录因子基因中的突变和至少一种感兴趣的多核苷酸的植物。

109.一种产生植物的方法，所述植物包含内源GRF转录因子基因中的突变和至少一种感兴趣的多核苷酸，所述方法包括：

将至少一种感兴趣的多核苷酸引入权利要求1-20、24、26-45或90-97中任一项的植物中，从而产生包含GRF转录因子基因中的突变和至少一种感兴趣的多核苷酸的植物。

110.一种产生植物的方法，所述植物包含内源GRF转录因子基因中的突变和至少一种感兴趣的多核苷酸，所述方法包括：

将至少一种感兴趣的多核苷酸引入权利要求1-20、24、26-45或90-97中任一项的植物中，从而产生包含GRF转录因子基因中的突变和至少一种感兴趣的多核苷酸的植物。

111.一种产生包含内源GRF转录因子基因中的突变并具有矮化或矮小表型的植物的方法，所述方法包括：

将第一植物与包含矮化或矮小表型的第二植物杂交以产生子代植物，所述第一植物为权利要求1-20、24、26-45或90-97中任一项的植物；和

选择包含GRF转录因子基因中的突变和矮化或矮小表型的后代植物，从而产生矮化或矮小并包含内源GRF转录因子基因中的突变的植物。

112.一种控制容器(例如，花盆或种子盘等)、生长室、温室、田地、休闲区、草坪或路边中的杂草的方法，所述方法包括：

将除草剂施用于生长在容器、生长室、温室、田地、休闲区、草坪或路边中的权利要求1-20、24、26-45或90-97中任一项的一种或多种(多个)植物，从而控制一种或多种植物生长在其中的容器、生长室、温室、田地、休闲区、草坪或路边中的杂草。

113.一种减少对植物的昆虫捕食的方法，所述方法包括：

将杀虫剂施用于权利要求1-20、24、26-45或90-97中任一项的一种或多种植物，从而减少对所述一种或多种植物的昆虫捕食。

114.一种减少植物上的真菌病害的方法，所述方法包括：

将杀真菌剂施用于权利要求1-20、24、26-45或90-97中任一项的一种或多种植物，从而减少所述一种或多种植物上的真菌病害。

115.权利要求113或114的方法，其中所述一种或多种植物生长在容器、生长室、温室、田地、休闲区、草坪或路边中。

116.权利要求108-110中任一项的方法，其中所述感兴趣的多核苷酸是赋予除草剂耐受性、抗虫性、抗病性、增加的产率、增加的养分利用效率或非生物胁迫抗性的多核苷酸。

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