CN115093988B - 一种复合菌豆瓣酱发酵剂及应用 - Google Patents
一种复合菌豆瓣酱发酵剂及应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115093988B CN115093988B CN202210523941.8A CN202210523941A CN115093988B CN 115093988 B CN115093988 B CN 115093988B CN 202210523941 A CN202210523941 A CN 202210523941A CN 115093988 B CN115093988 B CN 115093988B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lactobacillus plantarum
- pichia kudriavzevii
- dpul
- dpuy
- bean sauce
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 235000010749 Vicia faba Nutrition 0.000 title claims abstract description 53
- 235000002098 Vicia faba var. major Nutrition 0.000 title claims abstract description 53
- 235000015067 sauces Nutrition 0.000 title claims abstract description 39
- 239000007858 starting material Substances 0.000 title claims abstract description 14
- 239000002131 composite material Substances 0.000 title claims abstract description 9
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title abstract description 5
- 244000080030 Puffbohne Species 0.000 title 1
- 241000235645 Pichia kudriavzevii Species 0.000 claims abstract description 54
- 240000006677 Vicia faba Species 0.000 claims abstract description 52
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- 230000000035 biogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 4
- 240000006024 Lactobacillus plantarum Species 0.000 claims description 52
- 235000013965 Lactobacillus plantarum Nutrition 0.000 claims description 52
- 229940072205 lactobacillus plantarum Drugs 0.000 claims description 52
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 26
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 19
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 claims description 18
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 claims description 18
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 18
- 244000046052 Phaseolus vulgaris Species 0.000 claims description 14
- 235000010627 Phaseolus vulgaris Nutrition 0.000 claims description 14
- 240000006439 Aspergillus oryzae Species 0.000 claims description 6
- 235000002247 Aspergillus oryzae Nutrition 0.000 claims description 6
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 claims description 5
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 5
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 claims description 5
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims description 5
- 206010033546 Pallor Diseases 0.000 claims description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 claims description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 abstract description 35
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 abstract description 35
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 18
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 abstract description 14
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 abstract description 14
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 abstract description 11
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 abstract description 9
- 239000002253 acid Substances 0.000 abstract description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 abstract description 8
- OQIQSTLJSLGHID-WNWIJWBNSA-N aflatoxin B1 Chemical compound C=1([C@@H]2C=CO[C@@H]2OC=1C=C(C1=2)OC)C=2OC(=O)C2=C1CCC2=O OQIQSTLJSLGHID-WNWIJWBNSA-N 0.000 abstract description 6
- 239000002115 aflatoxin B1 Substances 0.000 abstract description 6
- 229930020125 aflatoxin-B1 Natural products 0.000 abstract description 6
- 235000020245 plant milk Nutrition 0.000 abstract 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 28
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 11
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 9
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 9
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 9
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 8
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 8
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 8
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 8
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 6
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 6
- 241000235342 Saccharomycetes Species 0.000 description 5
- -1 aldehydes, 4 ketones Chemical class 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 5
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 5
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 5
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000006872 mrs medium Substances 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 241000894007 species Species 0.000 description 5
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 4
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 4
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 4
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 4
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 4
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 4
- JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N cyclohexanone Chemical compound O=C1CCCCC1 JHIVVAPYMSGYDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 4
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 4
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 4
- 239000007222 ypd medium Substances 0.000 description 4
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 3
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 3
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N trichloroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(Cl)(Cl)Cl YNJBWRMUSHSURL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- XMAYWYJOQHXEEK-OZXSUGGESA-N (2R,4S)-ketoconazole Chemical compound C1CN(C(=O)C)CCN1C(C=C1)=CC=C1OC[C@@H]1O[C@@](CN2C=NC=C2)(C=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)OC1 XMAYWYJOQHXEEK-OZXSUGGESA-N 0.000 description 2
- LEZWWPYKPKIXLL-UHFFFAOYSA-N 1-{2-(4-chlorobenzyloxy)-2-(2,4-dichlorophenyl)ethyl}imidazole Chemical compound C1=CC(Cl)=CC=C1COC(C=1C(=CC(Cl)=CC=1)Cl)CN1C=NC=C1 LEZWWPYKPKIXLL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHVPQPYKVGDNFY-DFMJLFEVSA-N 2-[(2r)-butan-2-yl]-4-[4-[4-[4-[[(2r,4s)-2-(2,4-dichlorophenyl)-2-(1,2,4-triazol-1-ylmethyl)-1,3-dioxolan-4-yl]methoxy]phenyl]piperazin-1-yl]phenyl]-1,2,4-triazol-3-one Chemical compound O=C1N([C@H](C)CC)N=CN1C1=CC=C(N2CCN(CC2)C=2C=CC(OC[C@@H]3O[C@](CN4N=CN=C4)(OC3)C=3C(=CC(Cl)=CC=3)Cl)=CC=2)C=C1 VHVPQPYKVGDNFY-DFMJLFEVSA-N 0.000 description 2
- CHWNEIVBYREQRF-UHFFFAOYSA-N 4-Ethyl-2-methoxyphenol Chemical compound CCC1=CC=C(O)C(OC)=C1 CHWNEIVBYREQRF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 2
- GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N Levofloxacin Chemical compound C([C@@H](N1C2=C(C(C(C(O)=O)=C1)=O)C=C1F)C)OC2=C1N1CCN(C)CC1 GSDSWSVVBLHKDQ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 2
- BYBLEWFAAKGYCD-UHFFFAOYSA-N Miconazole Chemical compound ClC1=CC(Cl)=CC=C1COC(C=1C(=CC(Cl)=CC=1)Cl)CN1C=NC=C1 BYBLEWFAAKGYCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 2
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 2
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 2
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 2
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 2
- 229960002227 clindamycin Drugs 0.000 description 2
- KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N clindamycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@H](C)Cl)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 KDLRVYVGXIQJDK-AWPVFWJPSA-N 0.000 description 2
- 229960004022 clotrimazole Drugs 0.000 description 2
- VNFPBHJOKIVQEB-UHFFFAOYSA-N clotrimazole Chemical compound ClC1=CC=CC=C1C(N1C=NC=C1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 VNFPBHJOKIVQEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 229960003913 econazole Drugs 0.000 description 2
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N fluconazole Chemical compound C1=NC=NN1CC(C=1C(=CC(F)=CC=1)F)(O)CN1C=NC=N1 RFHAOTPXVQNOHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004884 fluconazole Drugs 0.000 description 2
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N isobutanol Chemical compound CC(C)CO ZXEKIIBDNHEJCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004130 itraconazole Drugs 0.000 description 2
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 2
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 2
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 2
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 2
- 229960004125 ketoconazole Drugs 0.000 description 2
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 2
- 229960003376 levofloxacin Drugs 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229960002509 miconazole Drugs 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N pyridoxal 5'-phosphate Chemical compound CC1=NC=C(COP(O)(O)=O)C(C=O)=C1O NGVDGCNFYWLIFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 2
- YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N salicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1O YGSDEFSMJLZEOE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 2
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LWFUFLREGJMOIZ-UHFFFAOYSA-N 3,5-dinitrosalicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=CC([N+]([O-])=O)=C1O LWFUFLREGJMOIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000001606 Adenanthera pavonina Species 0.000 description 1
- 235000011470 Adenanthera pavonina Nutrition 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062877 Bacteriocins Proteins 0.000 description 1
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- XPDXVDYUQZHFPV-UHFFFAOYSA-N Dansyl Chloride Chemical compound C1=CC=C2C(N(C)C)=CC=CC2=C1S(Cl)(=O)=O XPDXVDYUQZHFPV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N Diacetyl Chemical group CC(=O)C(C)=O QSJXEFYPDANLFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical class [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N Succinic acid Natural products OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010059993 Vancomycin Proteins 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-VANKVMQKSA-N aldehydo-L-glucose Chemical compound OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-VANKVMQKSA-N 0.000 description 1
- 102000004139 alpha-Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108090000637 alpha-Amylases Proteins 0.000 description 1
- 229940024171 alpha-amylase Drugs 0.000 description 1
- 235000011114 ammonium hydroxide Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N butanedioic acid Chemical compound O[14C](=O)CC[14C](O)=O KDYFGRWQOYBRFD-NUQCWPJISA-N 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012159 carrier gas Substances 0.000 description 1
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000003795 desorption Methods 0.000 description 1
- YXVFQADLFFNVDS-UHFFFAOYSA-N diammonium citrate Chemical compound [NH4+].[NH4+].[O-]C(=O)CC(O)(C(=O)O)CC([O-])=O YXVFQADLFFNVDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004205 dimethyl polysiloxane Substances 0.000 description 1
- 235000013870 dimethyl polysiloxane Nutrition 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000005886 esterification reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000021107 fermented food Nutrition 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 239000008098 formaldehyde solution Substances 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000001319 headspace solid-phase micro-extraction Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 239000001307 helium Substances 0.000 description 1
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 description 1
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000623 heterocyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000015784 hyperosmotic salinity response Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 1
- CDUFCUKTJFSWPL-UHFFFAOYSA-L manganese(II) sulfate tetrahydrate Chemical compound O.O.O.O.[Mn+2].[O-]S([O-])(=O)=O CDUFCUKTJFSWPL-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000011177 media preparation Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- CXQXSVUQTKDNFP-UHFFFAOYSA-N octamethyltrisiloxane Chemical compound C[Si](C)(C)O[Si](C)(C)O[Si](C)(C)C CXQXSVUQTKDNFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N papa-hydroxy-benzoic acid Natural products OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002989 phenols Chemical class 0.000 description 1
- 238000004987 plasma desorption mass spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 229920000435 poly(dimethylsiloxane) Polymers 0.000 description 1
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 235000007682 pyridoxal 5'-phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011589 pyridoxal 5'-phosphate Substances 0.000 description 1
- 229960001327 pyridoxal phosphate Drugs 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 229960004889 salicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 1
- 230000001953 sensory effect Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000002470 solid-phase micro-extraction Methods 0.000 description 1
- 235000013555 soy sauce Nutrition 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N vancomycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C2C=C3C=C1OC1=CC=C(C=C1Cl)[C@@H](O)[C@H](C(N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H]3C(=O)N[C@H]1C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](C3=CC(O)=CC(O)=C3C=3C(O)=CC=C1C=3)C(O)=O)=O)[C@H](O)C1=CC=C(C(=C1)Cl)O2)=O)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC)[C@H]1C[C@](C)(N)[C@H](O)[C@H](C)O1 MYPYJXKWCTUITO-LYRMYLQWSA-N 0.000 description 1
- 229960003165 vancomycin Drugs 0.000 description 1
- MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N vancomycin Natural products O1C(C(=C2)Cl)=CC=C2C(O)C(C(NC(C2=CC(O)=CC(O)=C2C=2C(O)=CC=C3C=2)C(O)=O)=O)NC(=O)C3NC(=O)C2NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CC(C)C)NC)C(O)C(C=C3Cl)=CC=C3OC3=CC2=CC1=C3OC1OC(CO)C(O)C(O)C1OC1CC(C)(N)C(O)C(C)O1 MYPYJXKWCTUITO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003039 volatile agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L11/00—Pulses, i.e. fruits of leguminous plants, for production of food; Products from legumes; Preparation or treatment thereof
- A23L11/50—Fermented pulses or legumes; Fermentation of pulses or legumes based on the addition of microorganisms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/225—Lactobacillus
- C12R2001/25—Lactobacillus plantarum
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/84—Pichia
Abstract
本发明公开了一种复合菌豆瓣酱发酵剂及应用属于微生物应用技术领域。使本发明提供的植物乳杆DPUL‑J5、库德里阿兹威毕赤酵母DPUY‑J5可以用于豆瓣酱发酵剂的制备，组合发酵的豆瓣酱总酸含量低，氨基酸态氮含量高，风味良好，不含生物胺和黄曲霉毒素B1，具有良好的安全性，有很好的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于微生物应用技术领域，涉及一种复合菌豆瓣酱发酵剂及应用，具体涉及一种植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DPUL-J5和库德里阿兹威毕赤酵母(Pichiakudriavzevii)DPUY-J5组成的复合菌及在豆瓣酱发酵生产中的应用。
背景技术
豆瓣酱是我国传统的发酵豆制品，主要是蚕豆与面粉混合后，通过米曲霉、酵母菌、乳酸菌等微生物发酵，制成的保持豆瓣原形的红褐色或深褐色半流动状态的发酵食品。微生物在豆瓣酱发酵过程中发挥了很大的作用。乳酸菌参与豆瓣酱的发酵过程，可产生有机酸、氨基酸，并为发酵体系提供有机酸、双乙酰、过氧化氢及细菌素等多种活性物质，有效增强感官品质、抑制不良微生物、延长产品保质期。酵母菌有较好的酒精发酵力，且抗高渗透压、耐盐性极强。酵母菌通常在酱醅发酵前期即可生长繁殖，可以对葡萄糖、麦芽糖，生成乙醇、甘油、阿拉伯糖醇、琥珀酸、异丁醇、异戊醇等进行发酵。在较高的盐浓度下，酵母菌可以发酵葡萄糖生成大量乙醇、甘油、甘露醇和4-乙基愈创木酚，并可与乳酸菌发酵产物和原料分解产物相结合，从而产生特有的香味。酵母菌产生的乙醇与豆瓣酱中的有机酸发生酯化反应生成香气成分酯类，对豆瓣酱风味产生了直接的影响。
参与豆瓣酱发酵的微生物对豆瓣酱产品的质量产生了重大影响，因此，发酵性能优良及具有安全性的发酵剂不仅能够提高豆瓣酱的安全性，同时也能够为豆瓣酱提供丰富的营养价值以及良好的风味。
发明内容
本发明提供了一种复合菌豆瓣酱发酵剂及应用。本发明涉及的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DPUL-J5、库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)DPUY-J5具有安全性和优良发酵性能，可应用于豆瓣酱发酵。
本发明提供了一种复合菌，所述复合菌由植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)DPUL-J5和库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)DPUY-J5组成，所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DPUL-J5于2021年7月21日，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌株保藏号为CCTCC NO：M 2021921；库德里阿兹威毕赤酵母(Pichiakudriavzevii)DPUY-J5于2021年7月8日，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌株保藏号为CCTCC NO：M 2021830。
进一步地，上述技术方案中，所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DPUL-J5和库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)DPUY-J5的接种体积比为1-3:1，优选为1.5:2.5。
本发明还提供了所述复合菌作为豆瓣酱发酵剂中的应用。
进一步地，上述技术方案中，所述复合菌不产生生物胺或产生物胺的含量低于1mg/L，不具有溶血性，不具有抗生素耐药性。
进一步地，上述技术方案中，所述抗生素包括卡那霉素、克林霉素、红霉素、氨苄西林、左氧氟沙星、庆大霉素、链霉素、氯霉素、四环素、两性霉素B、氟康唑、克霉唑、咪康唑、酮康唑、益康唑、伊曲康唑。
进一步地，上述技术方案中，所述复合菌蛋白酶活力高，可用于发酵豆瓣酱。
进一步地，上述技术方案中，所述复合菌发酵豆瓣酱具有良好风味，具有安全性。
进一步地，上述技术方案中，豆瓣酱的制备方法包括如下步骤：将待豆子预处理后，接入米曲霉，制曲，再接入所述复合菌作为豆瓣酱发酵剂，发酵，即可得到发酵豆瓣酱。
进一步地，上述技术方案中，所述豆子包括蚕豆。
进一步地，上述技术方案中，所述预处理包括将豆子洗净浸泡、沸水漂烫、控干水分。
本发明所述复合菌组合发酵的豆瓣酱总酸含量低，氨基酸态氮含量高，风味良好，不含生物胺和黄曲霉毒素B1，具有良好的安全性，有很好的应用前景。
附图说明
图1为植物乳杆菌DPUL-J5在1000倍显微镜下的镜检图片(A)以及系统发育树(C)；库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5在1000倍显微镜下的镜检图片(B)以及系统发育树(D)。
图2为溶血性测定结果：(A)单增李斯特菌(B)库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5(C)植物乳杆菌DPUL-J5。
图3为不同菌种发酵对豆瓣酱还原糖的影响。
图4为不同菌种发酵对豆瓣酱总酸的影响。
图5为不同菌种发酵对豆瓣酱氨基酸态氮的影响。
图6为不同菌种发酵对豆瓣酱挥发性化合物影响的百分含量图。
图7为不同菌种发酵对豆瓣酱挥发性化合物影响的热图。
具体实施方式
下述非限定性实施例可以使本领域的普通技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1菌株培养
本发明涉及的植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DPUL-J5和库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)DPUY-J5分离于四川传统郫县豆瓣酱。
所述植物乳杆菌DPUL-J5在MRS培养基中进行培养活化，库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5在YPD培养基中进行活化，具体步骤如下：
一、菌株培养方法
(1)MRS培养基制备
按照20g/L葡萄糖，10g/L蛋白胨，5g/L酵母膏，10g/L牛肉膏，1mL吐温-80，2g/L磷酸氢二钾，2g/L柠檬酸二铵，5g/L乙酸钠，0.58g/L七水硫酸镁，0.25g/L四水硫酸锰，称取这些原料，混合均匀，将得到的混合物混溶于去离子水中，得到的溶液在温度121℃下灭菌20min，得到所述的MRS培养基。
(2)YPD培养基
10g/L酵母膏，20g/L蛋白胨溶于去离子水，20g/L葡萄糖，高压蒸汽灭菌锅121℃灭菌20min，得到所述的YPD培养基。
植物乳杆菌DPUL-J5划线接种于含有2％(v/v)琼脂的步骤(1)MRS培养基中，在温度37℃下厌氧培养48h～72h，挑取单菌落，进行革兰氏染色，采用显微镜进行形态学观察。
库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5划线接种于含有2％(v/v)琼脂的步骤(2)YPD培养基中，在温度28℃下厌氧培养48h～72h，挑取单菌落，进行革兰氏染色，采用显微镜进行形态学观察。
二、菌株特性
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DPUL-J5、库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)DPUY-J5的显微镜图片(100×10)和系统发育树如图1所示。植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DPUL-J5的序列如SEQ ID NO.1所示，库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)DPUY-J5的序列如SEQ ID NO.2所示。
所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DPUL-J5保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：武汉市武昌珞珈山，中国典型培养物保藏中心，邮编430072)。植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DPUL-J5的菌种保藏号为CCTCC NO：M 2021921，保藏日期为2021年7月21日，分类命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)，菌株名称为DPUL-J5。
所述库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地521址：武汉市武昌珞珈山，中国典型培养物保藏中心，邮编430072)。库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)的菌种保藏号为CCTCC NO：M 2021830，保藏日期为2021年7月8日，分类命名为库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)，菌株名称为DPUY-J5。
实施例2菌株安全性评价
(1)评价菌株产生物胺能力。将植物乳杆菌DPUL-J5、库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5接种到含有7种0.1％前体氨基酸、0.005％磷酸吡哆醛的MRS或YPD培养基中，细菌37℃、真菌28℃培养48h，将培养液于7000g离心10min，取750μL上清液于2mL的EP管中，加入750μL的丹磺酰氯衍生，振荡混匀，加入150μL饱和碳酸钠溶液，45℃水浴30min后加入150μL氨水混匀，水浴15min后离心，0.22μm孔径的滤膜过滤。采用华普高效液相色谱(HPLC)测定生物胺含量。植物乳杆菌DPUL-J5产少量生物胺，但明显低于对照组(空白MRS培养基)，总胺含量不超过1000mg/L。库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5不产生任何生物胺，都是安全菌株，结果见表1。
表1植物乳杆菌DPUL-J5和库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5产生物胺含量(mg/L)
注：ND未检测到。
(2)评价菌株的溶血性。采用平板划线法，使用Columbia培养基灭菌后加入5％的绵羊血，将乳酸菌和酵母菌在平板上划线，观察。待菌液被培养基完全吸收后，倒置放于37℃培养箱中培养24～48h，观察是否出现溶血现象。出现草绿色环是α溶血性；出现界限分明、完全透明的溶血环是β溶血，未出现变化则是不溶血。结果见图2植物乳杆菌DPUL-J5、库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5均不具有溶血活性。
(3)评价菌株的抗生素耐药性。采用药敏纸片法，在15mL灭菌并融化后的MRS培养基(50℃)中添加1mL浓度为1×108CFU/mL的菌悬液，混匀后将其倾注到平皿中，待琼脂凝固后取药敏纸片贴于琼脂表面，每个培养皿贴3张间隔均匀适中的同种药物纸片，静置5min后翻转平皿，微需氧条件下37℃恒温培养，48h后测量并记录抑菌圈的直径。其中植物乳杆菌DPUL-J5氨苄西林、克林霉素、红霉素、链霉素、氯霉素等5种抗生素都比较敏感，对卡那霉素左氧氟沙星、庆大霉素、链霉素和四环素4种抗生素中度敏感，对万古霉素的耐药性属于固有耐药性，不会随食物转移给人体。库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5对克霉唑、酮康唑、益康唑、伊曲康唑、咪康唑4种抗生素敏感，对两性霉素B、氟康唑3种抗生素中度敏感，见表2、3。
表2植物乳杆菌DPUL-J5的抗生素敏感性
注：S,敏感；I，中度敏感；R，抗性
表3库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5抗生素敏感性
注：S,敏感；I，中度敏感；R，抗性
实施例3菌株的生产性能评价
(1)菌株蛋白酶活力测定。植物乳杆菌DPUL-J5和库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5分别以2％(v/v)的接种量接种至50mL 2.5mol/L盐水的蚕豆培养基中，37℃培养2天，活化三次备用，培养液离心后即为粗酶液。蚕豆培养基由5g蚕豆和50ml 2.5mol/L的盐水组成。采用总蛋白酶酶联免疫分析试剂盒(YBE-1819)进行测定。结果显示，植物乳杆菌DPUL-J5、库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5，具有下述发酵特性：其中植物乳杆菌DPUL-J5蛋白酶活力较高，达到了366.73±9.00U/L；库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5其蛋白酶活力达到了212.18±3.86U/L，菌株具有较高的蛋白酶对豆瓣酱的发酵有一定的促进作用，蛋白酶将蛋白质分解，生成氨基酸态氮等风味物质，有利于后期风味物质的形成。
(2)菌株淀粉酶活力测定。菌株培养方法与测定蛋白酶活力中菌株培养方法相同，α-淀粉酶活性检测试剂盒(BC0615)进行。淀粉酶分解了原料中的淀粉，生成葡萄糖等物质，为发酵体系中的微生物提供碳源，让微生物生长更加旺盛，结果显示库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5淀粉酶活力为14.81U/g
实施例4发酵豆瓣酱
一、菌株活化
取植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DPUL-J5、库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)DPUY-J5(以下用DPUL-J5、DPUY-J5表示)于MRS和YPD培养基中活化3次。活化后的菌株经平板划线纯化，挑取单一菌落接种于MRS培养基，以2％(v/v)接种量于MRS和YPD培养液，37℃培养18h，连续传代3次。活化的菌株利用0.85％生理盐水清洗3次，重悬至0.85％生理盐水中，调整菌液浓度为108CFU/mL和107CFU/mL。
二、豆瓣酱发酵
(1)原料的购买：蚕豆和食盐购买自市场，蚕豆是晒干脱壳的生蚕豆。
制曲菌株：米曲霉(Aspergillus oryzae)；发酵菌株：植物乳杆菌DPUL-J5、库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5。
(2)制曲：将100g洗净的生蚕豆浸泡4h，沸水漂烫3min，控干水分，放入无菌的大玻璃平皿中，共设置四组实验，每组都接入2％(v/w)的米曲霉孢子悬液，在人工气候箱中30℃制曲48h，待蚕豆表面布满绿色霉菌菌丝体即可。
(3)发酵：将制曲完成的蚕豆曲转入无菌的玻璃罐中，加入灭菌后的100mL含盐量16％盐水，分为4组，AB组不接种任何菌株作为对照组；ABL组在发酵7天以后接种2％(v/w)的植物乳杆菌DPUL-J5；ABP组在发酵7天以后接种2％(v/w)的库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5；ABLP组在发酵7天以后两种菌按照1.5:2.5(％)的比例混合接种，未接种乳酸菌和酵母菌作为对照组AB。发酵在30℃进行，六层纱布封口，直至理化指标稳定后发酵结束；
(4)上述发酵过程中需每天按时翻拌以保证发酵过程氧气充足。
三、还原糖
采用3，5-二硝基水杨酸(DNS)法测定。
将豆瓣酱样品搅拌均匀后，放入研钵中，在10min内迅速研磨至无肉眼可见颗粒，装入50mL容量瓶定容，倒入烧杯中于80℃水浴30min使还原糖浸出，拿出后放凉备用，即为还原糖提取液。
(1)葡萄糖标准曲线制作：取8支15mm×180mm试管，按顺序依次加入1.0mg/mL葡萄糖标准液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6mL，并向每管依次加入蒸馏水2.0、1.8、1.6、1.4、1.2、1.0、0.8、0.6、0.4mL，水杨酸溶液各1.5mL，将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5min，取出后立即用冷水冷却到室温，再向每管加入21.5mL蒸馏水，摇匀540nm处测定吸光度以葡萄糖含量(mg)为横坐标，光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线。
(2)样品中还原糖含量的测定
表4样品中还原糖含量的测定
将各管溶液混合均匀，在沸水中加热5min，取出后立即用水冷却到室温，再向每管加入21.5mL蒸馏水，摇匀，λ＝540nm处测定吸光度。测定后，对照葡萄糖标准曲线计算还原糖含量。
由图3可知，豆瓣酱在发酵过程中还原糖的含量随着发酵时间的延长不断降低。酱醅中霉菌可以产生大量酶，其中淀粉酶和糖化酶可以水解蚕豆瓣中的淀粉颗粒并且产生大量的还原糖，在发酵过程中，还原糖含量的变化可以帮助了解原料中大分子的水解程度，植物乳杆菌DPUL-J5和库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5组合发酵的还原糖利用率最高。
五、总酸和氨基酸态氮
将豆瓣酱样品搅拌均匀后，放入研钵中，在10min内迅速研磨至无肉眼可见颗粒，装入磨口瓶中备用。
根据GB/T12456-2008《食品安全国家标准食品中总酸的测定》进行测定。将豆瓣酱样品在研钵中研磨均匀无颗粒，称取5.00g放入烧杯，加50mL水，搅拌均匀，转移入100mL容量瓶，用少量水冲洗，合并于容量瓶，定容。取10mL，加入30mL去离子水，用NaOH(0.1mol/L)将pH值滴定至8.2，记录所消耗的NaOH体积，同时需要以40mL去离子水作为空白重复上面的步骤。
其中：X——试样中总酸含量(以乳酸计)g/100g；
V1——样品溶液消耗NaOH体积mL；
V2——空白样品消耗NaOH体积mL；
C——NaOH标准滴定溶液浓度mol/L；
V3——试样稀释液用量mL。
参照GB5009.235—2016《食品中氨基酸态氮的测定》酸度计法。向上述样品中加入10mL 36％的甲醛溶液，用氢氧化钠溶液滴定到溶液pH为9.2，同时用40mL去离子水作为空白组，重复上面步骤。
其中：X——样品里氨基酸态氮含量g/100g；
V1——样品稀释液所用的氢氧化钠体积mL；
V2——空白试样所用的氢氧化钠体积mL；
V3——试样稀释液取用量mL；
C——氢氧化钠标准滴定浓度mol/L。
实验结果如图4、5可知，四组样品其总酸含量均不超过郫县豆瓣国家标准GB/T20560-2006中规定的2.0g/100g，表明豆瓣酱未受到污染；植物乳杆菌DPUL-J5和库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5组合发酵组在第30d时氨基酸态氮达到最大值0.82g/100g，高于国家标准0.60g/100g，蛋白酶分解原料产生氨基酸态氮为风味物质的形成提供了原料。
六、挥发性风味物质
挥发性风味物质的测定采用SPME-GC-MS。
将75μm CAR/PDMS萃取头于300℃下处理l.0h，老化至无干扰峰出现。挥发性风味物质采用顶空固相微萃取技术进行提取。取粉碎的豆瓣样2.0g于15mL的顶空瓶内，加入20μL环己酮溶液(10μg/mL)，混合均匀，迅速盖上瓶盖，置于60℃恒温水浴锅中平衡30min，固相微萃取装置将萃取头手动插入顶空瓶中，顶空吸附40min后，直接将萃取头注入气相色谱仪进样口处在250℃条件下脱附10min，每个样品重复3次。
气相色谱(GC)条件：采用DB-5MS毛细管色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)，用氦气作载气，流速为1.0mL/min。升温程序：色谱柱起始柱温35℃，保持3min，再以3℃/min升到50℃，随后以6℃/min升到150℃，再以10℃/min升到230℃，然后在230℃下保持6min。
质谱(MS)条件：采集方式：全扫描，采集质量范围40～350m/z；电离方式：电子轰击(EI)；发射能量：70eV；离子源温度：200℃；接口温度：250℃。
挥发性风味化合物的定性分析：将所测挥发性化合物的质谱信息与数据库中已知挥发性化合物的质谱信息进行比对，根据相似度的高低进行定性。
定量分析：采用环己酮作为内标物进行定量分析，根据被测化合物和内标物相应的色谱峰面积之比，来计算被测组分的相对含量。
使用以下方程式计算挥发性化合物的含量：
正构烷烃(C6-C30)用于计算挥发性化合物的线性保留指数。挥发性化合物的鉴定是基于气相色谱保留指数(RI)和质谱(MS)与NIST 14和Wiley 11文库的比较。
由图6和图7可知，SPME-GC-MS共鉴定出42种挥发性化合物，包括醇类8种，醛类6种，酮类4种，酯类13种，酚类5种，杂环类4种，酸类2种，酯类化合物是豆瓣酱的主要挥发性成分，占比为37％～64％之间。结果显示，在ABP组中，添加酵母菌后醇类化合物占比大大增加，虽然占比略小于ABL组，但是种类和含量都高于其他组，醇类化合物总量达到了2966.21ng/g。ABLP组酯类化合物占比最低，但其中酮类物质在四组样品中占比最高，为6.76％，且挥发性化合物种类较多。在样品ABP组中的酯类物质含量和种类要高于其他三种样品，说明酵母菌对酯类物质的合成也有重要贡献。在四组样品中，接种了酵母菌的两组样品醇类物质含量比其他两组样品高。说明添加植物乳杆菌DPUL-J5和库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5组合发酵为豆瓣酱增添了风味。
七、豆瓣酱生物胺检测
(1)样品蛋白的去除
准确称取发酵0、5、10、15、20、25、30天的豆瓣酱5.00g，放入100mL的烧杯中，加入20mL 5％的三氯乙酸溶液，磁力搅拌60min，将混合物常温离心，收集上清液于50mL的容量瓶中，底部沉淀再次加入20mL 5％的三氯乙酸溶液，磁力搅拌60min,再将混合物常温离心，合并两次上清液于50ml的容量瓶中，5％的三氯乙酸溶液定容。
(2)样品脂肪的去除
将上述溶液用滤纸过滤，取10mL滤液于具塞离心管中，加入10mL的正己烷，强力震荡5min，弃去上层有机相，保留下层液体，重复提取两次，最后合并下层液体备用。
样品提取液中生物胺的衍生方法及色谱条件参照实施例2生物胺含量的测定。
植物乳杆菌DPUL-J5和库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5混合发酵豆瓣酱样品中不含生物胺，不产生物胺可能是由于原料来源良好，使用了高效的发酵剂，适当的发酵温度，适当的培养，保持适当的卫生，以及在发酵期间和之后的适当储存
八、豆瓣酱黄曲霉毒素B1检测
豆瓣酱中黄曲霉毒素B1含量的测定根据黄曲霉毒素B1酶联免疫试剂盒(YB-9601B1)说明书进行。
植物乳杆菌DPUL-J5和库德里阿兹威毕赤酵母DPUY-J5组合发酵的豆瓣酱样品中不含黄曲霉毒素B1，本研究在良好的实验室卫生条件下对豆瓣酱进行发酵，减少了产杂菌的污染。
SEQUENCE LISTING
<110> 大连工业大学
<120> 一种复合菌豆瓣酱发酵剂及应用
<130> 2022
<160> 2
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1503
<212> DNA
<213> 植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）
<400> 1
ggctcaggac gaacgctggc ggcgtgccta atacatgcaa gtcgaacgaa ctctggtatt 60
gattggtgct tgcatcatga tttacatttg agtgagtggc gaactggtga gtaacacgtg 120
ggaaacctgc ccagaagcgg gggataacac ctggaaacag atgctaatac cgcataacaa 180
cttggaccgc atggtccgag tttgaaagat ggcttcggct atcacttttg gatggtcccg 240
cggcgtatta gctagatggt ggggtaacgg ctcaccatgg caatgatacg tagccgacct 300
gagagggtaa tcggccacat tgggactgag acacggccca aactcctacg ggaggcagca 360
gtagggaatc ttccacaatg gacgaaagtc tgatggagca acgccgcgtg agtgaagaag 420
ggtttcggct cgtaaaactc tgttgttaaa gaagaacata tctgagagta actgttcagg 480
tattgacggt atttaaccag aaagccacgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac 540
gtaggtggca agcgttgtcc ggatttattg ggcgtaaagc gagcgcaggc ggttttttaa 600
gtctgatgtg aaagccttcg gctcaaccga agaagtgcat cggaaactgg gaaacttgag 660
tgcagaagag gacagtggaa ctccatgtgt agcggtgaaa tgcgtagata tatggaagaa 720
caccagtggc gaaggcggct gtctggtctg taactgacgc tgaggctcga aagtatgggt 780
agcaaacagg attagatacc ctggtagtcc ataccgtaaa cgatgaatgc taagtgttgg 840
agggtttccg cccttcagtg ctgcagctaa cgcattaagc attccgcctg gggagtacgg 900
ccgcaaggct gaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt 960
ttaattcgaa gctacgcgaa gaaccttacc aggtcttgac atactatgca aatctaagag 1020
attagacgtt cccttcgggg acatggatac aggtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt 1080
cgtgagatgt tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct tattatcagt tgccagcatt 1140
aagttgggca ctctggtgag actgccggtg acaaaccgga ggaaggtggg gatgacgtca 1200
aatcatcatg ccccttatga cctgggctac acacgtgcta caatggatgg tacaacgagt 1260
tgcgaactcg cgagagtaag ctaatctctt aaagccattc tcagttcgga ttgtaggctg 1320
caactcgcct acatgaagtc ggaatcgcta gtaatcgcgg atcagcatgc cgcggtgaat 1380
acgttcccgg gccttgtaca caccgcccgt cacaccatga gagtttgtaa cacccaaagt 1440
cggtggggta accttttagg aaccagccgc ctaaggtggg acagatgatt agggtgaagt 1500
cgt 1503
<210> 2
<211> 582
<212> DNA
<213> 库德里阿兹威毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）
<400> 2
ggaggaaaag aaaccaacag ggattgcctc agtagcggcg agtgaagcgg caagagctca 60
gatttgaaat cgtgctttgc ggcacgagtt gtagattgca ggttggagtc tgtgtggaag 120
gcggtgtcca agtcccttgg aacagggcgc ccaggagggt gagagccccg tgggatgccg 180
gcggaagcag tgaggccctt ctgacgagtc gagttgtttg ggaatgcagc tccaagcggg 240
tggtaaattc catctaaggc taaatactgg cgagagaccg atagcgaaca agtactgtga 300
aggaaagatg aaaagcactt tgaaaagaga gtgaaacagc acgtgaaatt gttgaaaggg 360
aagggtattg cgcccgacat ggggattgcg caccgctgcc tctcgtgggc ggcgctctgg 420
gctttccctg ggccagcatc ggttcttgct gcaggagaag gggttctgga acgtggctct 480
tcggagtgtt atagccaggg ccagatgctg cgtgcgggga ccgaggactg cggccgtgta 540
ggtcacggat gctggcagaa cggcgcaaca ccgcccgtct tg 582
Claims (6)
1. 一种复合菌，其特征在于，由植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DPUL-J5和库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)DPUY-J5组成，所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DPUL-J5于2021年7月21日，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌株保藏号为CCTCC NO：M 2021921；所述库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)DPUY-J5于2021年7月8日，保藏于中国典型培养物保藏中心，菌株保藏号为CCTCC NO：M2021830，所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)DPUL-J5和库德里阿兹威毕赤酵母(Pichia kudriavzevii)DPUY-J5的接种体积比为1-3:1。
2.权利要求1所述的复合菌作为豆瓣酱发酵剂的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述复合菌产生物胺的含量低于1mg/L，不具有溶血性，不具有抗生素耐药性。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述豆瓣酱的制备方法包括如下步骤：将豆子预处理后，接入米曲霉，制曲，再接入所述复合菌作为豆瓣酱发酵剂，发酵，即得到发酵豆瓣酱。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述豆子包括蚕豆。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述预处理包括将豆子洗净浸泡、沸水漂烫、控干水分。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210523941.8A CN115093988B (zh) | 2022-05-13 | 2022-05-13 | 一种复合菌豆瓣酱发酵剂及应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210523941.8A CN115093988B (zh) | 2022-05-13 | 2022-05-13 | 一种复合菌豆瓣酱发酵剂及应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115093988A CN115093988A (zh) | 2022-09-23 |
| CN115093988B true CN115093988B (zh) | 2023-06-09 |
Family
ID=83287485
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210523941.8A Active CN115093988B (zh) | 2022-05-13 | 2022-05-13 | 一种复合菌豆瓣酱发酵剂及应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115093988B (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101897429A (zh) * | 2010-07-09 | 2010-12-01 | 西华大学 | 用于郫县豆瓣生产的复合微生物菌剂及其制备方法 |
| CN111996131A (zh) * | 2020-09-07 | 2020-11-27 | 广西大学 | 一种降解氨氮的生香库德里阿兹威毕赤酵母菌与应用 |
| CN112471419A (zh) * | 2020-12-23 | 2021-03-12 | 江南大学 | 乳杆菌和鲁氏接合酵母协同发酵豆瓣酱的方法 |
-
2022
- 2022-05-13 CN CN202210523941.8A patent/CN115093988B/zh active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101897429A (zh) * | 2010-07-09 | 2010-12-01 | 西华大学 | 用于郫县豆瓣生产的复合微生物菌剂及其制备方法 |
| CN111996131A (zh) * | 2020-09-07 | 2020-11-27 | 广西大学 | 一种降解氨氮的生香库德里阿兹威毕赤酵母菌与应用 |
| CN112471419A (zh) * | 2020-12-23 | 2021-03-12 | 江南大学 | 乳杆菌和鲁氏接合酵母协同发酵豆瓣酱的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Lu Feng等.Safety evaluation and application of lactic acid bacteria and yeast strains isolated from Sichuan broad bean paste.《Food Science & Nutrition》.2022,第11卷(第2期),第940-952页. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115093988A (zh) | 2022-09-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108239608B (zh) | 一株戴尔凯氏有孢圆酵母菌株及其在葡萄酒酿造中的应用 | |
| CN110760471B (zh) | 一株巴氏醋杆菌、微生物菌剂及应用和食醋制备方法 | |
| CN105039187B (zh) | 一种产香酵母及其在发酵豆乳中的应用 | |
| CN113717867B (zh) | 一种不产乙醇的产香库德里阿兹威毕赤酵母及其应用 | |
| CN109749915B (zh) | 一种多菌种协同发酵联合前体添加提高山西老陈醋川芎嗪含量的方法 | |
| CN116138429B (zh) | 矮小哈萨克斯坦酵母xj-65及其在辣椒发酵中的应用 | |
| CN112553091A (zh) | 一种非酿酒酵母及用该酵母增加蓝莓果酒香味的发酵方法 | |
| CN109749914B (zh) | 一种用于提高山西老陈醋γ-氨基丁酸含量的生物强化方法 | |
| CN111206001B (zh) | 一株乳酸乳球菌乳酸亚种及其在制备豆乳中的应用 | |
| CN115812936A (zh) | 一种乳酸菌直投式发酵豇豆及其制备方法 | |
| CN109666616B (zh) | 高产乙偶姻及增香莫海威芽孢杆菌直投式发酵剂的制备方法及在山西老陈醋生产中的应用 | |
| CN114606152B (zh) | 一株贝莱斯芽孢杆菌、微生物菌剂及其应用 | |
| CN117448182A (zh) | 一种产香酵母及其培养方法和应用 | |
| CN115093988B (zh) | 一种复合菌豆瓣酱发酵剂及应用 | |
| CN116590164A (zh) | 一株毕赤克鲁维酵母fjy-4菌株及其应用 | |
| CN116804175A (zh) | 一株植物乳杆菌xz8-2及其在天麻发酵加工中的应用 | |
| CN114107113B (zh) | 一种合成发酵剂降低发酵食品中氨基甲酸乙酯的方法 | |
| CN113439830B (zh) | 一种复合发酵剂的制备方法及其在辣椒发酵增香中的应用 | |
| CN109749963B (zh) | 建立在菌种互作基础上的优良土著复合乳酸菌直投式发酵剂及其强化山西老陈醋生产的方法 | |
| CN109666594B (zh) | 一种利用优良土著高产醇酿酒酵母和产香蒿草假丝酵母强化生产山西老陈醋的方法 | |
| CN111053196A (zh) | 基于后发酵胶红酵母为优势共生菌系的大豆酱及制作方法 | |
| CN115960732B (zh) | 一株盔状毕赤酵母及其微生物菌剂和应用 | |
| CN114456962B (zh) | 一种利用复合微生物发酵柚子米酒的制备方法 | |
| CN113265363B (zh) | 一株降低生物胺的霍氏糖多孢菌及其应用 | |
| CN117229939A (zh) | 一株植物乳杆菌及其在辣椒低盐发酵中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |