CN115074321A - 一种间充质干细胞（msc）来源的促血管新生的制剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种间充质干细胞(MSC)来源的促血管新生的制剂及其制备方法，所述制备方法包括如下步骤：步骤(1)，在无血清培养基中稳定培养间充质干细胞；步骤(2)，使用细胞因子刺激制剂继续刺激培养所述稳定培养的间充质干细胞；步骤(3)，收集经步骤(2)培养的间充质干细胞的培养上清液；步骤(4)，浓缩所述的培养上清液得浓缩上清液，即为所述促血管新生制剂。
Description
技术领域
本发明属于医药生物技术领域，具体的，涉及一种间充质干细胞(MSC)来源的促血管新生的制剂及其制备方法。
背景技术
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是一群来自中胚层，具有向软骨细胞，骨骼细胞和脂肪细胞等多种终末端细胞分化的能力的成体干细胞，MSC来源丰富，广泛存在于骨髓组织、脐带组织、胎盘组织和脂肪组织中。MSC具有强大的旁分泌能力，有研究显示正常培养的MSC可以分泌超过200余种细胞生长因子作用于靶细胞上，实现特点生理功能，因此MSC免疫调节、促血管新生、促受损组织再生、支持造血等重要的生理功能，目前已经作为一个新药被多个国家批准上市，用于移植物抗宿主疾病(GVHD)、溃疡性结肠炎、克罗恩病、骨关节炎(OA)、心肌梗塞后心脏功能恢复等疾病上。
间充质干细胞(MSC)分泌的200余种细胞因子中，有一大类具有显著的促血管新生的能力，被称为血管活性因子，包括血管内皮细胞生长因子(vascular endothelialgrowth factor，VEGF)、血管生成素(angiopoietin，Ang)、碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblast grow factor，bFGF)等。
血管内皮细胞生长因子是血管新生过程中最重要的细胞生长因子，VEGF在体外可以直接刺激血管内皮细胞的增殖和迁移，在体内血管新生的模型中可以看到VEGF是一种强有力的血管新生诱导因子，此外VEGF还具有抑制血管内皮细胞凋亡的作用，在整个血管新生过程中是最重要刺激因子。
血管生成素是一类分泌型细胞因子，在血管重塑、胚胎血管发育中起重要的作用，血管生成素家族成员有4个，包括Ang-1、Ang-2、Ang-3、Ang-4，其中Ang-1起主要生理作用，Ang-1通过激活其受体酪氨酸激酶tie-2来抑制血管内皮细胞凋亡、促进血管内皮细胞生存，并进一步促进血管内皮细胞出芽、迁移和趋化形成新的血管，同时稳定新生血管结构，防止管壁渗漏等重要的生理作用。
碱性成纤维细胞生长因子是一种重要的促细胞有丝分裂因子和血管生成因子，对来源于中胚层和神经外胚层的多种类型细胞具有广泛的生物学活性，能促进细胞增殖、生长、分化，促血管新生，改善细胞生长微环境，促进受损组织的血管再生能力，能促进血管内皮细胞以及血管平滑肌细胞的生长，促进新生毛细血管形成，增加组织中毛细血管数量以及血流供应，为组织修复提供所需的氧气和营养成分。
MSC可以从脐带、胎盘、脂肪、骨髓等多个组织中分离，不同组织中分离的MSC具有独特的生理学功能。在所有的器官和组织中，脂肪组织的氧分压几乎是最高的，可以达到40-60mmHg，脂肪细胞对缺氧及其敏感，因此从脂肪组织中分离的脂肪间充质干细胞(ADSC)相比骨髓或脐带组织来源的MSC具有更强的促血管新生能力，但是骨髓和脂肪间充质干细胞一般需要从成年人中提取，其提取过程受年龄限制，对供者具有一定损伤。相比于成体间充质干细胞，脐带间充质干细胞发育更加原始，细胞增殖能力强，样本采集对无损伤，更适合后期临床应用。但同样的也存在一定的问题，简要而言，成体间充质干细胞(脂肪间充质干细胞)和脐带间充质干细胞的在临床应用中的缺点大致为：
1，自体脂肪间充质干细胞(ADSC)使用前需先采集患者脂肪组织，对患者来说是一种侵害；
2，异体脂肪间充质干细胞(ADSC)大多采集于成年供者，ADSC体外扩增能力有限，增殖能力弱于脐带间充质干细胞(UC-MSC)；
3，正常培养条件下的脐带间充质干细胞(UC-MSC)表达并分泌的促血管新生相关细胞因子能力有限，因为细胞因子分泌量不足带来治疗效果不佳。
4，正常培养条件下的脐带间充质干细胞(UC-MSC)局部移植到患者缺血组织中因组织的缺氧环境而造成存活能力不高，直接影响后期治疗效果。
基于此，提出本发明。
发明内容
本发明首先涉及一种间充质干细胞(MSC)来源的促血管新生制剂的制备方法，所述方法包括如下步骤：
步骤(1)，在无血清培养基中稳定培养间充质干细胞；
步骤(2)，使用细胞因子刺激制剂继续刺激培养所述稳定培养的间充质干细胞；
步骤(3)，收集经步骤(2)培养的间充质干细胞的培养上清液；
步骤(4)，浓缩所述的培养上清液得浓缩上清液，即为所述促血管新生制剂。
所述的无血清培养基含量(mg/L)如下表所示：
| 成分 | 含量 | 成分 | 含量 | 成分 | 含量 |
| L-精氨酸 | 100 | L-谷氨酸 | 10 | L-天门冬酰胺 | 75 |
| L-天门冬氨酸 | 30 | L-组氨酸 | 30 | 甘氨酸 | 5 |
| L-谷氨酰胺 | 500 | L-苯丙氨酸 | 30 | L-脯氨酸 | 10 |
| L-异亮氨酸 | 25 | L-蛋氨酸 | 10 | L-赖氨酸盐酸 | 60 |
| L-亮氨酸 | 75 | L-丝氨酸 | 45 | L-色氨酸 | 15 |
| L-苏氨酸 | 10 | L-缬氨酸 | 10 | 亚硒酸钠 | 35.0 |
| 葡萄糖 | 1000 | 人血清白蛋白 | 1000 | 丙酮酸钠 | 550 |
| L-胱氨酸二盐酸 | 75 | 二水L-酪氨酸二钠 | 144 | 过氧化氢酶 | 20 |
| 维生素C | 0.704 | 胰岛素 | 20 | 胆固醇 | 20 |
| β-巯基乙醇 | 4.0 | 人转铁蛋白 | 5 | 纤粘连蛋白 | 5 |
| 1％二巯基乙醇溶液 | 1.0ml/L | 乙醇胺 | 1 | 地塞米松 | 0.005 |
| SnCl<sub>2</sub>·2H<sub>2</sub>O | 0.0001 | FeSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O | 1.6 | 对羟基苯甲酸 | 0.5 |
| CoCl<sub>2</sub>·6H<sub>2</sub>O | 0.001 | CuSO<sub>4</sub>·5H<sub>2</sub>O | 0.0005 | 亚油酸 | 0.01 |
| Na<sub>2</sub>SeO<sub>3</sub> | 0.002 | ZnSO<sub>4</sub>·7H<sub>2</sub>O | 0.6 | NaSiO<sub>3</sub>·9H<sub>2</sub>O | 0.01 |
| Na<sub>3</sub>VO<sub>4</sub>·12H<sub>2</sub>O | 0.0005 | Ni(NO3)<sub>2</sub>·6H<sub>2</sub>O | 0.00002 | 余量为水 |
优选的，所述的无血清培养基中，进一步包含：
重组人成纤维细胞生长因子(FGF)，10mg/L；
重组人转化因子β(TGF-b)，0.1mg/L；
重组人表皮生长因子(EGF)，0.1mg/L。
所述的细胞因子刺激制剂为：在所述无血清培养基添加刺激因子配制，刺激因子由以下单个或多个组合而成：
全反式维甲酸(TARA)，0.1mM-50mM，优选为1uM-200uM；
核黄素(VB2)，0.05mM-50mM，优选为1uM-10uM；
抗坏血酸(Vc)，0.1mM-100mM，优选为10uM-100uM；
维生素A(Va)，0.01mM-50mM，优选为0.01uM-0.1uM；
辅酶Q10，0.05mM-50mM，优选为0.1uM-1uM。
步骤(1)所述的稳定培养间充质干细胞的方法为：
MSC长至90％融合度时使用温和消化酶消化成单细胞，以活细胞数量按1-10*105/cm2的密度接种于经TC处理的培养皿中，使用无血清培养基置于低氧(0.5％-10％)培养箱中培养24小时；
步骤(2)所述的刺激培养为：
1)细胞长至50％-70％融合度时，更换为预处理培养基(0.1-0.5ml/cm2)；
2)更换为预处理培养基后置于低氧(0.5％-10％)培养箱中继续培养48小时；
步骤(4)所述的浓缩所述的培养上清液为：使用超滤管离心浓缩5倍；
本发明还涉及使用所述方法制备得到的促血管新生制剂。
本发明还涉及所述方法和所述的促血管新生制剂在制备药物中的应用，所述的药物包括但不限于：治疗移植物抗宿主疾病的药物、治疗抗溃疡性结肠炎的药物、治疗克罗恩病的药物、治疗骨关节炎的药物、用于心肌梗塞后心脏功能恢复的药物。
本发明的有益效果在于：
1、针对目前MSC治疗缺血性疾病存在的缺点，本发明通过体外预刺激的方法激活MSC的生物学活性；
2、使用本发明的方法激活的MSC，一方面能适应患者缺血组织中的缺氧环境，提供其在病灶组织中的存活率，另一方面能大量表达并分泌多种促血管新生的细胞因子，可以有效促进缺血组织的血管新生能力，加速缺血组织中毛细血管新生速度，加快侧支循环重建，从而达到治疗组织缺血的目的。
附图说明
图1、各组UC-MSC细胞的促血管生长因子表达量。
图2、各组UC-MSC细胞促血管生长因子分泌量。
图3、HUVEC细胞成血管实验(图中标尺为100um)。
图4、HUVEC细胞迁移实验(图中标尺为100um)。
图5、RA对UC-MSC细胞活性影响(因为纵轴数值偏小，导致100和200近似重合)。
图6、血管新生相关基因表达量。
图7、各组培养细胞显微照片。
图8、各组UC-MSC细胞促血管生长因子VEGF bFGF分泌量
具体实施方式
以下实施例中使用的无血清培养基各原料的浓度如下表1所示(以下各成分浓度单位若无特别说明，均为mg/L)：
表1，无血清培养基成分表
所述的无血清中进一步包含：
重组人成纤维细胞生长因子(FGF)(peprotech，货号：100-18B-50)，10mg/L
重组人转化因子β(TGF-b)(peprotech，货号：100-21-100)，0.1mg/L
重组人表皮生长因子(EGF)(peprotech，货号：AF-100-15-50)，0.1mg/L。
以下实施例所用的预处理培养基的配置过程为：由无血清培养基添加刺激因子配制，刺激因子由以下单个或多个组合而成：
全反式维甲酸(TARA)，1uM-200uM(Sigma R2625)，
核黄素(VB2)，1uM-10uM(Sigma 9504)，
抗坏血酸(Vc)，10uM-100uM(Sigma A92902)，
维生素A(Va)，0.01uM-0.1uM(Sigma R7632)，
辅酶Q10，0.1uM-1uM(Sigma 9538)。
其他试剂耗材为常规分子生物学或细胞生物学试剂耗材。
实施例1、UC-MSC细胞的传代培养及预处理
1、脐带间充质干细胞(UC-MSC)，使用无血清培养基正常培养到P4代；
2，P4代UC-MSC长至90％融合度时使用温和消化酶(北京友康恒业生物科技有限公司NC1004.1)消化成单细胞，计数后离心(1500rpm*5min)，去上清；
3，根据计数结果，以活细胞数量按1-10*105/cm2的密度接种于经TC(TissueCulture，指器皿经过表面的改性处理，适合贴壁细胞的培养)处理的培养皿中，使用无血清培养基置于低氧(0.5％-10％)培养箱中培养24小时；
4，待细胞长至50％-70％融合度时，更换为预处理培养基(0.1-0.5ml/cm2)；
5，更换为预处理培养基后置于低氧(0.5％-10％)培养箱中继续培养48小时；
6，培养48小时后收集细胞上清液用于后续检测，使用温和消化酶(北京友康恒业生物科技有限公司NC1004.1)消化细胞，计数后离心(1500rpm*5min)去上清，使用GMP级冻存液(北京友康恒业生物科技有限公司NC1010)冻存细胞备用。
实施例2、不同条件下UC-MSC促血管新生相关细胞因子基因表达
1，选取P3～P5代UC-MSC(优选为P4代)，消化后以2*105/cm2密度接种于6孔板中，使用无血清培养基培养，随机分为3组：
正常组置于普通二氧化碳培养箱中(5％CO2+20％O2)培养，
低氧组和预处理组置于低氧培养箱中培养(5％CO2+0.5％-10％O2)；
2，24小时后更换培养基，每孔2ml，正常组使用无血清培养基正常培养，低氧组使用无血清培养基于低氧培养箱中培养，预处理组使用预处理培养基于低氧培养箱中培养；各组均继续培养48小时；
3，48小时后收集各组的细胞因子于-20℃冷冻保存，细胞使用PBS清洗后使用Trizol(Thermo 15596026)重悬，提取细胞中总RNA并逆转录为cDNA于-20℃保存(天根KR106)；
4，通过QPCR(Promega A6002)检测各组细胞中促血管新生相关因子的表达量，包括血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管生成素1(Ang-1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)，引物序列如表2所示，结果如图1所示；
表2、促血管新生相关因子的检测引物
5，收集的细胞因子上清液使用Ellisa试剂盒检测各组细胞分泌的促血管新生的细胞因子，包括血管内皮细胞生长因子(VEGF)(欣博盛EHC108)、血管生成素1(Ang-1)(酶免MM-0001H2)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)(酶免MM-0151H2)，结果如图2所示。
结果显示，预处理组的各个促血管新生的细胞因子尤其是VEGF的表达和分泌量有显著的提升。
实施例3、人血管内皮细胞功能检测
1，选取P4代UC-MSC，消化后以2*105/cm2密度接种于6孔板中，使用无血清培养基培养，随机分为3组：
正常组置于普通二氧化碳培养箱中(5％CO2+20％O2)培养，
低氧组和预处理组置于低氧培养箱中培养(5％CO2+0.5％-10％O2)；
2，24小时后更换培养基，每孔2ml，正常组使用无血清培养基正常培养、低氧组使用无血清培养基于低氧培养箱中培养、预处理组使用预处理培养基于低氧培养箱中培养，各组均继续培养48小时；
3，收集含细胞因子的细胞培养上清液，经超滤管离心浓缩5倍(MilliporeUFC900396)，冷藏备用；
4，取Matrigel(BD 356234)胶使用DMEM培养基按1:2.5比例稀释后铺到96孔板中，每孔40ul，置于37℃培养箱中30min使其凝固；
5，取P4代人脐带静脉血管内皮细胞(HUVEC)(广州赛业生物科技有限公司HUVEC-20001)，温和消化酶消化成单细胞后接种到96孔板中的Matrigel胶上，每孔2*104个细胞，并加入浓缩后的细胞因子上清液，每孔100ul，置于37℃常氧培养箱中培养24h，观察HUVEC成血管能力，结果如图3所示；
6，取P4代人脐带静脉血管内皮细胞(HUVEC)(广州赛业生物科技有限公司HUVEC-20001)，温和消化酶消化成单细胞后接种到预置伤口愈合插件培养皿(Ibidi 80206)中，细胞密度为5*105/ml，每孔接种70ul，24小时后去掉插件的中间隔板，培养皿中加入2ml浓缩后的细胞因子上清液，置于37℃常氧培养箱中培养48h，观察HUVEC的迁移能力，结果如图4所示。
实施例4、全反式维甲酸预处理对UC-MSC细胞活性影响
1、选取P4代UC-MSC消化后以1*104/cm2密度接种于96孔板中,使用无血清培养基置于低氧(0.5％-10％)培养箱中培养过夜；
2、24小时后更换为0、5、10、50、100、200uM浓度的全反式维甲酸预处理培养基(0.3-0.6ml/cm2)；
3、连续培养5天，评估Day1、Day2、Day3、Day4、Day5细胞增殖毒性，使用CCK8细胞增殖毒性检测-试剂盒(日本同仁化学CK04)，每孔加入10ul的CCK8溶液；
4、将板置于普通二氧化碳培养箱中(5％CO2+20％O2)培养4小时，在一定时间内用全波长酶标仪(Thermo Multiskan Sky)检测OD值,结果如图5。
结果显示，全反式维甲酸(TARA)有明显毒性，10uM及以上可见，实际使用浓度应降低，参考常用的诱导分化使用浓度2-5uM。
实施例5、不同刺激因子对UC-MSC促血管新生相关细胞因子基因表达
1，选取P5代UC-MSC，消化后以2*105/cm2密度接种于6孔板中，使用无血清培养基培养，随机分为5组：
正常组置于普通二氧化碳培养箱中(5％CO2+20％O2)培养，
低氧组和预处理组置于低氧培养箱中培养(5％CO2+0.5％-10％O2)；
2，24小时后更换培养基，每孔2ml，正常组使用无血清培养基正常培养，低氧组使用无血清培养基于低氧培养箱中培养，预处理组分别使用10uM全反式维甲酸(TARA)、5uM核黄素(VB2)、50uM抗坏血酸(Vc)三种刺激因子预处理培养基于低氧培养箱中培养；各组均继续培养48小时；
3，48小时后收集各组的细胞因子于-20℃冷冻保存，细胞使用PBS清洗后使用Trizol(Thermo 15596026)重悬，提取细胞中总RNA并逆转录为cDNA于-20℃保存(天根KR106)；
4，通过QPCR(Promega A6002)检测各组细胞中促血管新生相关因子的表达量，包括血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血管生成素1(Ang-1)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、肝细胞生长因子(HGF)引物序列如表3所示，结果如图6所示；
表3、促血管新生相关因子的检测引物
结果显示，血管新生相关基因(HGF、bFGF、VEGF、Ang-1)在低氧和RA、VB、VC刺激下相比常氧条件下均有高表达，但是HGF因检测背景值低，实际表达量可能低。
实施例6、不同刺激因子组合对VEGF、bFGF分泌量影响
1，选取P5代UC-MSC，消化后以2*105/cm2密度接种于6孔板中，使用无血清培养基培养，随机分为4组：
正常组置于普通二氧化碳培养箱中(5％CO2+20％O2)培养，
低氧组和预处理组置于低氧培养箱中培养(5％CO2+0.5％-10％O2)；
预处理组分为：5uM全反式维甲酸(TARA)+5uM核黄素(VB2)；5uM全反式维甲酸(TARA)+5uM核黄素(VB2)+50nM维生素A(Va)+1uM辅酶Q10。
2，24小时后更换培养基，每孔2ml，正常组使用无血清培养基正常培养，低氧组使用无血清培养基于低氧培养箱中培养，预处理组使用不同刺激因子预处理培养基于低氧培养箱中培养，各组均继续培养48小时；
3，48小时后收集各组的细胞因子于-20℃冷冻保存，细胞使用PBS清洗后使用Trizol(Thermo 15596026)重悬，提取细胞中总RNA并逆转录为cDNA于-20℃保存(天根KR106)；
4，培养过程中，通过倒置显微镜(Motic AE2000)逐日观察各组细胞形态变化，结果如图7所示；
5，收集的细胞因子上清液使用Ellisa试剂盒检测各组细胞分泌的促血管新生的细胞因子，包括血管内皮细胞生长因子(VEGF)(欣博盛EHC108)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)(酶免MM-0151H2)，结果如图8所示。
结果显示，
(1)在低氧条件下以全反式维甲酸(TARA)+核黄素(VB2)为基础，分别添加维生素A(Va)和辅酶Q10，各组间细胞形态无明显改变；无明显细胞毒性
(2)刺激是必需的，刺激条件下VEGF分泌量比不刺激条件下有显著差异；全反式维甲酸(TARA)+核黄素(VB2)刺激和全反式维甲酸(TARA)+核黄素(VB2)+维生素A(Va)+辅酶Q10刺激无显著差异。
(3)bFGF是消化性因子，培养基中含量极高，培养细胞后含量降低；各种条件刺激下，bFGF含量无明显差异；进一步分析可见，多因子组合刺激下，对UC-MSC促血管新生相关细胞因子(尤其是bFGF)的影响，与单一因素刺激的结果(参见实施例5)有一定的差异。
最后需要说明的是，以上实施例仅用于帮助本领域技术人员了解本发明的实质，不用于限定本发明的保护范围。
Claims (8)
1.一种间充质干细胞(MSC)来源的促血管新生制剂的制备方法，所述方法包括如下步骤：
步骤(1)，在无血清培养基中稳定培养间充质干细胞，优选的，所述的间充质干细胞为稳定穿代的脐带间充质干细胞(UC-MSC)细胞系；
步骤(2)，使用细胞因子刺激制剂继续刺激培养所述稳定培养的间充质干细胞；
步骤(3)，收集经步骤(2)培养的间充质干细胞的培养上清液；
步骤(4)，浓缩所述的培养上清液得浓缩上清液，即为所述促血管新生制剂。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的细胞因子刺激制剂为：在所述无血清培养基添加刺激因子配制，刺激因子由以下单个或多个组合而成：
全反式维甲酸(TARA)，0.1mM-50mM，优选为1uM-200uM；
核黄素(VB2)，0.05mM-50mM，优选为1uM-10uM；
抗坏血酸(Vc)，0.1mM-100mM，优选为10uM-100uM；
维生素A(Va)，0.01mM-50mM，优选为0.01uM-0.1uM；
辅酶Q10，0.05mM-50mM，优选为0.1uM-1uM。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述的稳定培养间充质干细胞的方法为：
MSC长至90％融合度时使用温和消化酶消化成单细胞，以活细胞数量按1-10*105/cm2的密度接种于经TC处理的培养皿中，使用无血清培养基置于低氧(0.5％-10％)培养箱中培养24小时。
4.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述的刺激培养为：
1)细胞长至50％-70％融合度时，更换为预处理培养基(0.1-0.5ml/cm2)；
2)更换为预处理培养基后置于低氧(0.5％-10％)培养箱中继续培养48小时。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤(4)所述的浓缩所述的培养上清液为：使用超滤管离心浓缩5倍。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的无血清培养基含量(mg/L)如下表所示：
优选的，所述的无血清培养基中，进一步包含：
重组人成纤维细胞生长因子(FGF)，10mg/L；
重组人转化因子β(TGF-b)，0.1mg/L；
重组人表皮生长因子(EGF)，0.1mg/L。
7.使用权利要求1-6任一所述方法制备得到的促血管新生制剂。
8.权利要求1-6任一所述方法或权利要求7所述的制剂在制备药物中的应用，所述的药物包括但不限于：治疗移植物抗宿主疾病的药物、治疗抗溃疡性结肠炎的药物、治疗克罗恩病的药物、治疗骨关节炎的药物、用于心肌梗塞后心脏功能恢复的药物。
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| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115074321A (zh) |
Citations (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101400787A (zh) * | 2006-01-27 | 2009-04-01 | 株式会社Prostemics | 采用脂肪来源成体干细胞大量制造生长因子的方法 |
| US20130177543A1 (en) * | 2011-12-20 | 2013-07-11 | Creative Medical Health Inc. | Natural Means of Augmenting Endogenous Stem Cell Numbers |
| US20140178987A1 (en) * | 2012-12-20 | 2014-06-26 | Shanghai Tenth People's Hospital | Stem cell culture medium and its applications as well as a stem cell culture method |
| WO2016009446A2 (en) * | 2014-07-14 | 2016-01-21 | Krishnan Venkataramanaa Neelam | A method for the regeneration and differentiation of human perinephric fat derived mesenchymal stromal cells into astroglial, renal, neuronal and pancreatic progenitor cells |
| CN107043747A (zh) * | 2017-06-23 | 2017-08-15 | 王晓柯 | 一种人脐带间充质干细胞无血清培养基 |
| KR20170116921A (ko) * | 2016-04-12 | 2017-10-20 | 서울대학교산학협력단 | 지방줄기세포에서 신경줄기세포, 신경세포 및 가바성 신경세포로의 분화 유도 방법 |
| CN108251359A (zh) * | 2017-12-20 | 2018-07-06 | 上海华新生物高技术有限公司 | 一种间充质干细胞无血清培养基及培养方法 |
| US20190117701A1 (en) * | 2016-04-27 | 2019-04-25 | Rohto Pharmaceutical Co., Ltd. | Mesenchymal stem cell expressing at least one cell surface marker selected from the group consisting of cd201, cd46, cd56, cd147, and cd165, method for preparing the same, pharmaceutical composition containing the mesenchymal stem cells, and method for preparing the same |
| CN109852654A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-06-07 | 广州润虹医药科技股份有限公司 | 能够诱导干细胞分泌细胞因子的组合物及其应用 |
| CN110269833A (zh) * | 2019-06-05 | 2019-09-24 | 湖南丰晖生物科技有限公司 | 一种脐带间充质干细胞制剂及其制备方法和应用 |
| CN110564680A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-12-13 | 西安艾尔菲生物科技有限公司 | 人脐带间充质干细胞无血清培养基和制备方法及人脐带间充质干细胞无血清培养液获取方法 |
| CN110894488A (zh) * | 2019-12-13 | 2020-03-20 | 深圳市蓝思人工智能医学研究院 | 全反式维甲酸在间充质干细胞分化调节中的应用 |
| CN111235101A (zh) * | 2020-03-26 | 2020-06-05 | 于继莲 | 一种人脐带间充质干细胞培养基及人脐带间充质干细胞的培养方法 |
| JP2021040551A (ja) * | 2019-09-11 | 2021-03-18 | 富士フイルム株式会社 | 培地組成物、キット、間葉系幹細胞組成物の製造方法、間葉系幹細胞組成物、間葉系幹細胞、細胞培養上清および細胞外小胞 |
| CN114736853A (zh) * | 2022-04-02 | 2022-07-12 | 麦迪森(江苏)医学研究有限公司 | 一种增强间充质干细胞促血管新生能力的方法 |
-
2022
- 2022-06-30 CN CN202210773047.6A patent/CN115074321A/zh active Pending
Patent Citations (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101400787A (zh) * | 2006-01-27 | 2009-04-01 | 株式会社Prostemics | 采用脂肪来源成体干细胞大量制造生长因子的方法 |
| US20130177543A1 (en) * | 2011-12-20 | 2013-07-11 | Creative Medical Health Inc. | Natural Means of Augmenting Endogenous Stem Cell Numbers |
| US20140178987A1 (en) * | 2012-12-20 | 2014-06-26 | Shanghai Tenth People's Hospital | Stem cell culture medium and its applications as well as a stem cell culture method |
| WO2016009446A2 (en) * | 2014-07-14 | 2016-01-21 | Krishnan Venkataramanaa Neelam | A method for the regeneration and differentiation of human perinephric fat derived mesenchymal stromal cells into astroglial, renal, neuronal and pancreatic progenitor cells |
| KR20170116921A (ko) * | 2016-04-12 | 2017-10-20 | 서울대학교산학협력단 | 지방줄기세포에서 신경줄기세포, 신경세포 및 가바성 신경세포로의 분화 유도 방법 |
| US20190117701A1 (en) * | 2016-04-27 | 2019-04-25 | Rohto Pharmaceutical Co., Ltd. | Mesenchymal stem cell expressing at least one cell surface marker selected from the group consisting of cd201, cd46, cd56, cd147, and cd165, method for preparing the same, pharmaceutical composition containing the mesenchymal stem cells, and method for preparing the same |
| CN107043747A (zh) * | 2017-06-23 | 2017-08-15 | 王晓柯 | 一种人脐带间充质干细胞无血清培养基 |
| CN108251359A (zh) * | 2017-12-20 | 2018-07-06 | 上海华新生物高技术有限公司 | 一种间充质干细胞无血清培养基及培养方法 |
| CN109852654A (zh) * | 2018-12-28 | 2019-06-07 | 广州润虹医药科技股份有限公司 | 能够诱导干细胞分泌细胞因子的组合物及其应用 |
| CN110269833A (zh) * | 2019-06-05 | 2019-09-24 | 湖南丰晖生物科技有限公司 | 一种脐带间充质干细胞制剂及其制备方法和应用 |
| CN110564680A (zh) * | 2019-08-27 | 2019-12-13 | 西安艾尔菲生物科技有限公司 | 人脐带间充质干细胞无血清培养基和制备方法及人脐带间充质干细胞无血清培养液获取方法 |
| JP2021040551A (ja) * | 2019-09-11 | 2021-03-18 | 富士フイルム株式会社 | 培地組成物、キット、間葉系幹細胞組成物の製造方法、間葉系幹細胞組成物、間葉系幹細胞、細胞培養上清および細胞外小胞 |
| CN110894488A (zh) * | 2019-12-13 | 2020-03-20 | 深圳市蓝思人工智能医学研究院 | 全反式维甲酸在间充质干细胞分化调节中的应用 |
| CN111235101A (zh) * | 2020-03-26 | 2020-06-05 | 于继莲 | 一种人脐带间充质干细胞培养基及人脐带间充质干细胞的培养方法 |
| CN114736853A (zh) * | 2022-04-02 | 2022-07-12 | 麦迪森(江苏)医学研究有限公司 | 一种增强间充质干细胞促血管新生能力的方法 |
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