CN115068663A - 泡沫止血材料、止血注射剂及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种泡沫止血材料、止血注射剂及其制备方法和应用，该泡沫止血材料采用双孢蘑菇茎为原料经茎秆脱细胞、冻融处理制备而成的微管孔隙结构，具有压缩性、形状恢复特性和可注射性，可压注于创面床上并迅速恢复形态，瞬间将血液吸进平行通道，迅速凝结引起凝血，活化血细胞和血小板。此外，该泡沫止血材料表面的负电荷可以激活固有的凝血通路，促进纤维蛋白生长，超亲水性改善血小板和血细胞的粘附，形成牢固的凝血。该泡沫止血材料作为可注射止血材料，在体外血液和在体内注射动物受伤的肝脏和心脏中，具有良好的止血性能。

Description

泡沫止血材料、止血注射剂及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及止血技术领域，具体涉及一种泡沫止血材料、止血注射剂及其制备方法和应用。

背景技术

无法控制的大出血是创伤患者死亡的主要原因。目前，对于可压缩性出血的情况，控制出血的常用方法是使用纱布或绷带加压；对于不可压缩性出血事件，患者主要依靠输血控制出血，但是存在费用高、来源有限、可能引起免疫副作用、疾病交叉感染等缺点，因此迫切需要找寻找更有效的止血剂来减少伤口部位的失血。

发明内容

基于此，有必要一种新型泡沫止血材料、注射止血剂及其制备方法和应用，可以满足不可压缩性出血的快速止血。

本发明采用如下技术方案：

本发明提供一种泡沫止血材料，所述泡沫止血材料采用双孢蘑菇茎为原料经茎秆脱细胞、冻融处理制备而成的微管孔隙结构材料，具有压缩性、形状恢复特性和可注射性。

在其中一些实施例中，所述冻融处理的次数为1～15次，所述冻融的工艺参数为：-40℃冷冻过夜。优选地，所述冻融处理的次数为10次。

在其中一些实施例中，所述泡沫止血材料含有甲壳素和几丁质。

本发明的泡沫止血材料可以在制备止血产品中的应用。尤其是，所述止血产品可适用于体内止血。

本发明还可以提供一种止血注射剂，采用上述泡沫止血材料制备而成。

本发明还可以提供上述所述的泡沫止血材料的制备方法，包括如下步骤：采用双孢蘑菇茎为原料，进行茎秆脱细胞，再进行冻融处理，即得。

优选地，所述茎秆脱细胞的方法为：将双孢蘑菇茎切成圆柱形，浸泡于SDS溶液中振荡多天，洗涤后再浸泡于含Triton-X-100和亚氯酸钠的溶液中继续浸泡1～3天，转入灭菌的Tris-HCl缓冲液中继续浸泡1～3天，洗涤后转入乙醇溶液中灭菌，再采用PBS缓冲液洗涤，即得。

在其中一些实施例中，所述SDS溶液为含10％SDS的水溶液；所述含Triton-X-100和亚氯酸钠的溶液中，Triton-X-100的含量为0.1％，亚氯酸钠的含量为10％；所述Tris-HCl缓冲液的pH为8.5。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明的泡沫止血材料采用双孢蘑菇茎为原料经茎秆脱细胞、冻融处理制备而成的微管孔隙结构，具有压缩性、形状恢复特性和可注射性，可压注于创面床上并迅速恢复形态，瞬间将血液吸进平行通道，迅速凝结引起凝血，活化血细胞和血小板。此外，该泡沫止血材料表面的负电荷可以激活固有的凝血通路，促进纤维蛋白生长，超亲水性改善血小板和血细胞的粘附，形成牢固的凝血。该泡沫止血材料作为可注射止血材料，在体外血液和在体内注射动物受伤的肝脏和心脏中具有良好的止血性能。

附图说明

图1为试验例1的测试结果统计图；其中，a为压缩和可注射性试验结果照片；b为泡沫状材料DS1和DS10的SEM图；c为Gel、DS1和DS10的拉伸应力应变曲线；d为Gel、DS1和DS10在干燥条件下压缩应变为90％的的压缩应力应变曲线；e为Gel、DS1和DS10在吸水后压缩应变为90％的的压缩应力应变曲线；f为DS1在应变分别为80％、85％、90％情况下的压缩应力-应变曲线20次循环；g为DS10在应变分别为80％、85％、90％情况下的压缩应力-应变曲线20次循环；h为DS1、DS10的膨胀比(n＝3)。

图2为试验例2吸水吸血试验结果统计图；其中，a为未压缩状态下Gel、DS1和DS10的吸水情况照片；b为未压缩状态下Gel、DS1和DS10的吸水情况照片；c为Gel、DS1和DS10在自然条件下吸水180s后的照片；d为Gel、DS1和DS10在自然条件下血液吸收180s的照片；e为水到达Gel、DS1、DS10顶部的时间，f为血液到达Gel、DS1、DS10顶部的时间。

图3为试验例3中试验结果统计图；其中a为微观放大示意图；b为泡沫状材料的形成示意图；c为泡沫状材料在轴向(上)和侧向(下)压缩及其在湿条件下的快速恢复的状态示意图；d和e分别为脱细胞前后的蛋白质和DNA定量统计图；f为脱细胞前后的FTIR光谱测试图；g为脱细胞前后的xps谱图。

图4为试验例4的测试结果统计图；其中a为Gel、DS1、DS10的大鼠红细胞溶血试验照片；b为Gel、DS1、DS10在不同浓度下的溶血率统计图；c至g为L929成纤维细胞的细胞毒性测试结果统计图。

图5为试验例5的体外促凝测试统计图。

图6为试验例6的体内止血测试统计图。其中，a为大鼠肝脏切割模型示意图；b为不同组治疗的视觉失血量照片(上)和止血效果(下)；c为不同组治疗总失血量(n＝3)；d为各组止血时间(n＝3)。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的详细说明，以使本领域的技术人员更加清楚地理解本发明。

以下各实施例，仅用于说明本发明，但不止用来限制本发明的范围。基于本发明中的具体实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的情况下，所获得的其他所有实施例，都属于本发明的保护范围。

在本发明实施例中，若无特殊说明，所有原料组分均为本领域技术人员熟知的市售产品；在本发明实施例中，若未具体指明，所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。

关键材料来源说明：

双孢蘑菇购自当地菜市场。

十二烷基硫酸钠(SDS,98％，AR)和亚氯酸钠漂白剂(AR)产自麦克林生化技术有限公司(中国，上海)。盐酸多巴胺(98％，AR)取自阿拉丁生化科技有限公司(中国上海)。Tris-HCl(pH＝8.5，源业生物科技有限公司，上海)。商用明胶海绵购自快康医疗科技有限公司(中国，广州)。牛血清(FBS)和Dulbecco改良Eagle培养基。(DMEM)购自美国Gibco,Invitrogen Corp.，其他化学品购自Aladdin生化科技有限公司(中国，上海)。

试验例1

用锋利、干净的刀片沿横截面方向(厚度为5mm)将双孢蘑菇茎切成圆柱形。然后将所有圆柱形样品浸泡在10％(w/v)SDS水溶液中，置于室温低速振动台振荡5天。之后，将浸泡后的样品在蒸馏水中洗涤三次。然后将洗涤后的样品置于含0.1％Triton-X-100、10％亚氯酸钠的去离子水中浸泡48h。然后转入灭菌后的Tris-HCl(pH＝8.5)中再浸泡48h，在蒸馏水中洗涤5次，转入乙醇溶液中灭菌2h，在无菌、蒸馏的PBS缓冲液中洗涤3次，在-40℃下冷冻过夜，然后将样品冻干1次(DS1)或10次(DS10)，得双孢蘑菇泡沫材料。双孢蘑菇泡沫材料用紫外线照射每侧灭菌30分钟。

本试验例是将双孢蘑菇茎横切成圆柱形，然后将切好的茎杆脱细胞，进行冻融处理，可得泡沫状材料(简称“DS泡沫”)。其中，进行1个周期和10个周期冻融循环后再冷冻干燥24h，分别命名泡沫状材料DS1和泡沫状材料DS10。

分别对本实施例制备的泡沫状材料进行压缩和可注射性试验，结果如图1中的a所示，将制备的泡沫状材料DS1进行压缩，然后将其放入注射器管中立即注入水中，测试泡沫状材料DS1的可注射性。注射过程非常顺利，蘑菇很容易被注射到水中。泡沫状材料DS1与水接触后迅速恢复形状。

分别对本实施例制备的泡沫状材料进行扫描电镜(SEM)结构扫描测试，结果如图1中的b所示，其中泡沫状材料DS1的微观结构照片如图b中1-4，DS10的测试结果如图b中5-8中，横切面和矢状面均证实了排列的微管结构。扫描电镜照片显示了微管有助于高孔结构的合成，排列和均匀的孔。尽管微管结构相似，但泡沫状材料DS10的孔径明显小于泡沫状材料DS1。泡沫状材料DS的孔径随交联密度的增加而减小，冻干循环次数增加了泡沫状材料DS的交联密度。尤其是通过图b中7和8照片，还观察到微管通过壁上的小孔相互连接。DS泡沫的互联微孔结构对其吸水能力和形状恢复能力起着至关重要的作用。

与明胶作为对照材料，分别对泡沫状材料DS1和DS10进行拉伸应变试验。泡沫状材料DS(DS1和DS10)的尺寸为8mm×8mm×5mm，用夹持器夹紧拉伸试件的两端。在室温下，采用美特克斯工业系统(中国)有限公司CMT6104万能试验机，测压元件为5kN，十字头转速为20mm/min，测试试样的拉伸强度。压缩试验和循环压缩试验在同一台万能试验机上进行，以2mm/min的速度将试样压缩至80％，然后以2mm/min的速度释放试样，进行循环压缩试验。循环指数为20(n＝3)。

测试结果如图1中的c所示。结果表明，泡沫状材料DS具有良好的抗拉强度，止血时可形成坚实的血凝块，不易撕裂。具体为：泡沫状材料DS10组在3.77±1.92％处出现应变破坏，屈服应力为333.31±19.13kPa。泡沫状材料DS1的失效应变为4.22±2.14％，屈服应力为227.93±13.71kPa。泡沫状材料DS10抗拉强度比DS1高1.5倍，比明胶组高2倍。

对泡沫状材料DS施加90％的压缩应变，测试其抗压强度对形状恢复能力和注射性能的影响。测试结果如图1中的d和e所示。

干燥条件下，在90％的压缩应变下，泡沫状材料DS10组的压缩应力为641.56±38.85kPa,泡沫状材料DS1为484.52±29.59kPa，明胶组为326.35±16.21kPa。湿态下，泡沫状材料DS10、DS1、明胶组测得的压应力分别为53.59±4.41kPa、36.84±3.66kPa、20.58±1.95kPa。泡沫状材料DS组的机械强度均高于明胶组，这是由于DS泡沫内部的微管结构所致。在所有的力学测试中，泡沫状材料DS10显示出更高的稳健性。

采用压缩应变分别为80％、85％和90％，进行20循环压缩恢复试验，研究泡沫状材料DS的回弹特性。测试结果如图1中的f、g所示。各组均表现出高度均匀的应力-应变性能，并保持了原有的形状和压缩性，从而便于实现对出血部位提供持久的压迫。

进一步对本试验例制备的泡沫状材料进行孔隙率和膨胀率测试。

孔隙度测定采用液体置换法测定方法步骤：泡沫状材料DS(DS1、DS10)和凝胶组的孔隙度。测试样品的初始重量(m1)和体积(V)，然后将样品浸泡在纯酒精中，用滤纸将液体从表面冲洗掉，测量重量(m2)，直到在室温下质量保持恒定。孔隙率计算如下:

孔隙率(％)＝(m2-m1)/ρV×100％，ρ为醇的密度，(n＝3)。

形状恢复性能和膨胀率测定步骤：将冻干样品压缩，用拍片固定形状，然后将固定的样品浸入水中或血液中，松开拍片。用数码相机记录形状恢复过程和时间。

溶胀比的计算方法如下：将样品切成等量的块，浸泡在pH 7.4、37℃的磷酸盐缓冲盐水(PBS)中，每隔一定时间取下。吸附在表面的水被轻轻擦去，样品被称重。DS为膨胀度，Ww、Wd分别为试样的湿重、干重。

结果为：泡沫状材料DS10的孔隙率(53.95±2.46％)略高于DS1的孔隙率(50.31±2.29％)。泡沫状材料DS10的溶胀率(2349.04±77.69％)明显高于DS1的溶胀率(1745.08±101.62％)。但是与明胶对照组相比，DS1组和DS10组的吸水性均较明胶差，但吸水性仍超出了止血材料的最低要求。

试验例2吸水及吸血的速度测试试验

以明胶(Gel)作为对照，将冻干的DS泡沫(DS1和DS10)、明胶(Gel)海绵样品称重(m1)，用水或血液浸泡。在固定时间点称量样品，最后称量一次(m2)。T是m1到m2的时间。水/吸血量的计算如下：

水/吸血量＝(m2m1)/m1，

水/吸血量比值＝(m2-m1)/m1/t。

分别采用试验例2制备的泡沫状材料DS1和泡沫状材料DS10进行吸水(蓝色墨水)及吸血的速度测试试验的结果如图2所示。

由图2可以看出，与明胶相比，泡沫状材料DS1和DS10吸水吸血的速度非常快。

本试验中所有组都在完全放松的条件下进行测试，没有任何压缩。直观观察到，第1分钟时，泡沫状材料DS从下往上吸液，而对照组的液面保持在下。凝胶海绵吸水速度更快。这表明泡沫状材料DS比传统的止血剂有更快的液体吸收。泡沫状材料DS泡沫可以在短时间内吸收更多的水或血液并迅速恢复其形状。但是，明胶海绵能吸收更大容量的水或血液，但迅速减少。因而相比之下，泡沫状材料DS泡沫低吸收水或低血容量，对于出血的护理，迅速吸收血液更为重要。

进一步使用压缩样本进行水和血液吸收测试：泡沫状材料DS样品在水中或血液中浸泡3、6、9、12和15s，然后称重。两组泡沫状材料DS吸水性均明显高于明胶。15s时，DS10组吸收22.81±0.88g/g水、22.38±1.42g/g血，DS1组吸收19.44±0.60g/g水、19.37±0.54g/g血。

明胶组表现出连续而渐进的液体吸收，在15s时未达到平衡状态。明胶倾向于吸收更多的液体，但它比泡沫状材料DS慢得多。

泡沫状材料DS泡沫在3s时仍能快速吸收液体：DS10吸收17.88±0.53g/g水，18.36±0.22g/g血，DS1吸收16.45±0.39g/g水，16.49±0.44g/g血，而明胶仅吸收2.89±0.35g/g水，3.20±0.22g/g血。总的来说，在前15s内，DS泡沫比明胶有更高更快的吸收。吸水性和吸血性能无显著差异。

对泡沫状材料DS和明胶海绵的水触发和血触发形状恢复性能进行了测试。所有样品在挤出游离水后进行压缩和形状固定。吸水后均恢复原状，形状恢复率达99％。泡沫状材料DS10组DS泡沫恢复时间为3.02±0.51s,泡沫状材料DS1组为3.77±0.45s，显著短于gel组29.97±1.25s。DS泡沫吸血后完全恢复的时间(DS10组为5.16±0.42s,DS1组为5.79±0.35s)比明胶组(40.89±2.12s)短。

试验例3泡沫状材料的组成测试

将双孢蘑菇茎、试验例1制备泡沫状材料DS1的均浸泡在液氮浴中磨成粉末。DNA定量采用Plant Genomic DNA Kit进行，该试剂盒购自北京天根生化科技有限公司(DP350)。蛋白定量使用真菌蛋白试剂盒，该试剂盒购自上海贝斯特生物生化科技有限公司。然后用Victor 3分光光度计测定DNA和蛋白质。检测泡沫状材料DS1的DNA和蛋白质的浓度。

与原生双孢蘑菇样本相比，泡沫状材料DS1有显著降低DNA水平15.6±2.35μg/mg(原生双孢蘑菇样本，235.4±7.56μg/毫克)，同时具有较低的蛋白质水平为2.48±0.64μg/mg(原生双孢蘑菇样本，15.06±0.48μg/mg)。表明脱细胞过程几乎去除了DNA和蛋白质，证明加工处理后的泡沫状材料DS1具有较低的免疫原性，具有很大的生物植入潜力。

采用红外光谱(FTIR光谱，Nivolet IS20)检测泡沫状材料DS1的官能团：双孢蘑菇原料粉和泡沫状材料DS1用溴化钾(KBr)压制后，在4000-400cm^-1光谱区进行分析。如图3中的f所示，吸收带分布在3428.33、2918.75、1633.80、1557.23、1455.73、1317.12和1034.51cm^-1。3428.33cm^-1附近的宽峰是由-OH和-NH的拉伸振动引起的，两者都与样品中甲壳素的存在相对应。1633.80cm^-1处与C═O拉伸相关的酰胺I带以及1557.23cm^-1和1317.12cm^-1处的─NH变形导致的酰胺II和III带进一步证实泡沫状材料DS1具有几丁质结构。在1455.73cm^-1处的能带表明芳香胺基的C-N伸展。CH(2918.75cm^-1)和C─O─C(1034.51cm^-1)证实泡沫状材料DS1中具有葡聚糖和几丁质聚合物结构中碳水化合物主链的存在。该光谱结果表明，经过处理的泡沫状材料DS1与天然的双孢蘑菇具有相同的功能基团，并证明了甲壳素的存在。

双孢蘑菇脱细胞前后均含有碳水化合物，但由于脱细胞过程中DNA和蛋白质的丢失，泡沫状材料DS1的含氮官能团明显减少。在图3的g中，双孢蘑菇和泡沫状材料DS的XPS谱图显示，双孢蘑菇的n1s在398.98eV处有一个强峰，而泡沫状材料DS1则没有峰值。此外，泡沫状材料DS1组c1s和o1s峰值也有所下降，这说明脱细胞过程中去除了大量含氮官能团(蛋白质和DNA)，也验证了泡沫状材料DS1脱细胞成功。

试验例4溶血试验和细胞毒性试验

取大鼠全血，3000rpg离心10分钟，去除红细胞，稀释到5％(v/v)溶液中，PBS备用。将冷冻后的泡沫状材料样品磨成粉末，溶解在PBS中，分别得到2.5mg/ml、1.25mg/ml和0.625mg/ml溶液。将500μL红血溶液与500μL样品溶液混合于离心管中，在37℃培养箱中孵育1h。接下来，将溶液在1000rpg下离心10分钟。取上清液200μL置于96孔板中。然后在562nm处检测溶液的吸光度值，用酶标仪记录。样品分别用H₂O和PBS处理，阳性对照组和阴性对照组。

溶血率：

溶血率(％)＝(Am-Ap)/(Ah-Ap)×100％，

其中，Am、Ah、Ap分别为双孢蘑菇泡沫状材料组、水(阴性对照组)和PBS(阳性对照组)的吸光度，(n＝3)。

泡沫状材料DS被磨成粉末，分散在制备的红细胞(RBC)溶液中，分别制备的最终浓度为625到1250和2500μg/mL。

离心样品上清液宏观颜色如图4中的a所示，PBS(+rbc)为阴性对照组，水(+rbc)为阳性对照组。泡沫状材料DS组均呈浅棕色，与PBS阴性对照组相似，轻度溶血，阳性对照组呈鲜红色。进一步的溶血率分析(图4中的b)也表明，DS泡沫的溶血率低，因此具有良好的血液相容性。

将消毒后的泡沫状材料DS沉浸在细胞培养基24h。L929细胞在96孔培养板4x10³每个细胞，在普通培养基24h，然后培养基被拉长，取而代之的是含泡沫状材料DS的100μL泡沫培养基。在第1天、第3天和第7天，用90μL的培养液和10μL的CCK-8试剂盒溶液替换培养基，在酶标仪上测定吸光度值，波长为450nm(n＝3)。用活/死法研究了泡沫状材料DS培养基中L292细胞的活力。

具体为：用PBS将LIVE/DEAD活力/细胞毒性试剂盒稀释至1μL mL^-1的钙黄绿素AM和3μL mL^-1的碘化丙啶PI的最终浓度。用500μL双孢蘑菇泡沫培养基培养1天、3天的L929细胞，与工作探针液(≈500μL)在37℃下孵育30min。倒置荧光显微镜捕捉荧光显微图。活的L929细胞染成绿色，而死的细胞染成红色。使用ImageJ(美国国立卫生研究院)对活细胞和死细胞进行计数，定量分析L929细胞的生存能力。

为了测试DS泡沫的粘附能力，将4×10⁴个L929细胞滴于样品上，置于细胞培养箱的96孔板中，37℃培养24h。然后，样品用2.5％戊二醛固定过夜。然后，用倒置荧光显微镜(LSM 800，中国)检测样品。

图4中的c-g中CCK-8细胞活力检测结果显示，DS10和DS1的细胞毒性可以忽略不计：在第1天、第3天和第7天，对照组和DS泡沫组的细胞活力率无显著差异(P>0.05)。

另外，泡沫状材料DS1、DS10和对照组均未观察到明显的细胞死亡。多数细胞呈梭形。结果表明，泡沫状材料DS1、DS10具有良好的细胞相容性，具有广阔的临床应用前景。并且，L929细胞在泡沫状材料DS中生长良好，可以在泡沫状材料的不同表面发现细胞。当计数DS泡沫上的细胞数量时，发现DS10表面的细胞(DS10为26.74±5.21)比DS1组表面的细胞(DS1为19.35±3.42)更多。

试验例5体外促凝能力

止血过程主要依靠血液凝结、红细胞聚集以及活化血小板和产生纤维蛋白形成的网状结构。所有这些因素最终都会形成坚固的血凝块。为探讨DS泡沫与全血的相互作用及其对止血的影响，采用扫描电镜(SEM观察Gel、DS1、DS10标本入全血后1、2、3min的情况。

结果如图5所示，三组均有红细胞覆盖表面。1min后，与凝胶组相比，DS1和DS10表面粘附的红细胞和血小板增多。在DS泡沫团中，纤维蛋白和血小板粘附在红细胞表面，与红细胞结合在一起，形成预凝结构，在DS结构中红细胞之间形成气孔。随着纤维蛋白补片密度的增加，红细胞之间的孔隙变小。附着在红细胞上的纤维蛋白开始相互融合，形成桥梁，然后形成网络，最后形成血块。明胶组无此现象。这说明泡沫状材料DS可以加速纤维蛋白网络的形成。

试验例6体内止血测试

如图6所示，采用大鼠截尾模型评价其体内止血性能。以明胶为对照，切割后立即加入试验例1制备的泡沫状材料DS泡沫和明胶。从视觉上看，空白(未处理)组和明胶组出血量严重，DS组出血量最小。

经评估，空白组出血量大于207.33±13.05s为1235.12±111.3mg，凝胶组为595.12±77.7mg。相比之下，DS泡沫的失血量更小，DS1和DS10的失血量分别为380.43±18.7mg和310.33±26.3mg。DS10组的失血量仅为凝胶组的一半。如图6中的d记录的止血时间，DS10止血时间约为空白组(无治疗组)的1/3，表明DS泡沫止血更有效、更快速。

然后对直径8mm的大鼠肝脏穿孔模型进行实验。与其他组相比，DS泡沫处理的血流量最小。大鼠尾部模型的失血量和出血持续时间测量结果相似，其中DS10在所有组中出血控制最好。材料植入后第7天，Gel、DS1、DS10组肝脏界面可见炎性细胞浸润，植入物与肝脏界面存在明显界面。炎症细胞生长成植入物。第14天，炎症开始消退，炎症细胞减少。这表明植入的初始阶段，由于异物反应，炎症反应发生，随着时间的增加，炎症消退，表明试验例1制备的DS泡沫和明胶没有造成实质器官损伤有很好的生物相容性和可植入性。

试验例7致命不可压缩出血的体内止血

为了进一步评估DS泡沫在大出血和严重损伤情况下的致死性、不可压缩出血止血效果，采用大鼠肝脏下半部分切除的严重肝损伤模型。与其他组相比，DS泡沫植入创面后，恢复形状快，止血时间短，出血量小。

建立家兔心脏穿刺损伤模型，验证机械强度强、血触发形态恢复快、血吸收量大、血吸收速度快对DS泡沫致死性不可压缩出血止血的能力。在损伤部位应用不同材料(直径为8mm)时，明胶组可减少心脏失血量，较空白组减少约50％。但相比之下，DS1和DS10组的失血量控制更为明显，分别为80％和82％。DS1和DS10的止血时间明显短于凝胶组和空白组。

当将DS泡沫注射到心脏穿刺损伤部位时，样本对血液吸收强烈，与损伤部位周围表面紧密凝结。明胶牢牢地粘在心脏上，看起来就像心脏上的一个大疤痕。DS1、DS10组心脏表面损伤部位粘连不明显，表面瘢痕不明显。以上表明，DS泡沫具有较好的止血能力，能够形成牢固的凝块。

试验例8体内降解

以Gel为对照，采用大鼠皮下包埋模型观察试验例1制备的泡沫止血材料DS对宿主的反应。种植后7、14、28、56天采集标本进行H&E染色。结果表明，在前7天，Gel、DS1和DS10的降解速度都很快。之后，凝胶组仍保持降解速率，在第28天达到完全降解。DS在第7天降解速度较慢，但稳定。DS1和DS10在整个实验期间的降解率相似。第56天，DS1和DS10的体积分别下降了85.73±3.21％和83.69±1.78％。

在此有必要指出的是，以上实施例仅限于对本发明的技术方案做进一步的阐述和说明，并不是对本发明的技术方案的进一步的限制，本发明的方法仅为较佳的实施方案，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种泡沫止血材料，其特征在于，所述泡沫止血材料采用双孢蘑菇茎为原料经茎秆脱细胞、冻融处理制备而成的微管孔隙结构材料。

2.根据权利要求1所述的泡沫止血材料，其特征在于，所述冻融处理的次数为1～15次，所述冻融的工艺参数为：-40℃冷冻。

3.根据权利要求2所述的泡沫止血材料，其特征在于，所述冻融处理的次数为10次。

4.根据权利要求1或2所述的泡沫止血材料，其特征在于，所述泡沫止血材料含有甲壳素和几丁质。

5.权利要求1至4任一项所述的泡沫止血材料在制备止血产品中的应用。

6.根据权利要求5的应用，其特征在于，所述止血产品可适用于体内止血。

7.一种止血注射剂，其特征在于，采用权利要求1至4任一项所述的泡沫止血材料制备而成。

8.一种权利要求1至4任一项所述的泡沫止血材料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：采用双孢蘑菇茎为原料，进行茎秆脱细胞，再进行冻融处理，即得。

9.根据权利要求8所述的泡沫止血材料的制备方法，其特征在于，所述茎秆脱细胞的方法为：

将双孢蘑菇茎切成圆柱形，浸泡于SDS水溶液中振荡多天，洗涤后再浸泡于含Triton-X-100和亚氯酸钠的溶液中继续浸泡1～3天，转入灭菌的Tris-HCl缓冲液中继续浸泡1～3天，洗涤后转入乙醇溶液中灭菌，再采用PBS缓冲液洗涤，即得。

10.根据权利要求9所述的泡沫止血材料的制备方法，其特征在于，所述SDS溶液为含10％SDS的水溶液；所述含Triton-X-100和亚氯酸钠的溶液中，Triton-X-100的含量为0.1％，亚氯酸钠的含量为10％；所述Tris-HCl缓冲液的pH为8.5。

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