CN115058340B - 一种细胞薄膜夹持装置、使用方法及神经修复材料的制备方法 - Google Patents

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    • A61L2430/32—Materials or treatment for tissue regeneration for nerve reconstruction

Abstract

本发明公开了一种细胞薄膜夹持装置、使用方法及神经修复材料的制备方法，细胞薄膜夹持装置包括机架；固定板固定设置在机架；第一夹持部可调地设在机架，与固定板配合夹持细胞薄膜的一端；活动板可活动地设在机架；第二夹持部可调地设在机架，与活动板配合夹持细胞薄膜的另一端；以及活动板能够在预设平面内相对靠近或远离固定板，且活动板在预设平面活动时第二夹持部同步活动。通过第一夹持部和固定板配合夹持细胞薄膜的一端，第二夹持部和活动板配合夹持细胞薄膜的另一端，通过同步调节第二夹持部和活动板以使细胞薄膜处于自然长度，随后使固定板和活动板的位置相对固定并培养细胞预设时间，使细胞薄膜自发性的收缩成圆柱状形成神经修复材料。

Description

一种细胞薄膜夹持装置、使用方法及神经修复材料的制备 方法
技术领域
本发明涉及细胞组织工程技术领域，特别涉及一种细胞薄膜夹持装置、使用方法及神经修复材料的制备方法。
背景技术
神经修复材料为通过可生物降解的合成聚合物、天然生物材料构成的支架型神经修复材料。但支架型神经修复材料存在降解速度不好把握、局部炎症反应、材料的内部引导空间过大导致轴突分散从而抑制神经功能恢复、神经再生过程中发生管内塌陷和压缩等缺点。
发明内容
本发明的目的在于至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种细胞薄膜夹持装置，能够制备出效果更好的自组装型神经修复材料。
本发明还提出一种细胞薄膜夹持装置的使用方法。
本发明还提出一种神经修复材料的制备方法。
根据本发明第一方面实施例的细胞薄膜夹持装置，包括：
机架；
固定板，固定设置在所述机架，用于承载细胞薄膜的部分；
第一夹持部，可调节地设置在所述机架，所述第一夹持部能够在纵向上相对靠近或相对远离所述固定板，以使所述第一夹持部能够通过与所述固定板配合的方式夹持所述细胞薄膜的一端；
活动板，可活动地设置在所述机架，用于承载所述细胞薄膜的另一些部分；
第二夹持部，可调节地设置在所述机架，所述第二夹持部能够在纵向上相对靠近或相对远离所述活动板，以使所述第二夹持部能够通过与所述活动板配合的方式夹持所述细胞薄膜的另一端；以及
所述活动板能够在预设平面内相对靠近或相对远离所述固定板，且所述活动板在所述预设平面活动时所述第二夹持部同步活动，以使所述第一夹持部和所述第二夹持部在分别夹持所述细胞薄膜后能够调节所述细胞薄膜的展开状态。
根据本发明的第一方面实施例的细胞薄膜夹持装置，至少具有如下有益效果：通过第一夹持部和固定板配合夹持细胞薄膜的一端，第二夹持部和活动板配合夹持细胞薄膜的另一端，通过同步调节第二夹持部和活动板以使细胞薄膜处于自然长度，随后使固定板和活动板的位置相对固定并对细胞薄膜进行预设时间的培养，使细胞薄膜自发性的收缩成圆柱状形成神经修复材料，该无支架型的神经修复材料具有低免疫排异反应、可重构出自然组织的机械和结构特性的优点。
根据本发明的第一方面实施例所述的细胞薄膜夹持装置，所述机架包括顶板、支撑部、连接件和滑块组件，所述支撑部的底端与所述固定板连接，所述支撑部的顶端用于支撑所述顶板，所述第一夹持部设置在所述顶板，所述连接件的底端与所述活动板连接，所述顶板与所述滑块组件连接，所述滑块组件可滑动地设置在所述顶板，所述第二夹持部设置在所述滑块组件。
根据本发明的第一方面实施例所述的细胞薄膜夹持装置，所述连接件的底端与所述活动板通过型面联接的方式进行连接；
和/或所述支撑部的底端与所述固定板通过型面联接的方式进行连接。
根据本发明的第一方面实施例所述的细胞薄膜夹持装置，所述顶板的顶面设有第一导轨，所述顶板的底面设有第二导轨，所述滑块组件包括锁紧件、第一滑块和第二滑块，所述第一滑块可滑动地设置在所述第一导轨，所述第二滑块可滑动地设置在所述第二导轨，所述锁紧件可调节地穿设于所述第一滑块和所述第二滑块，以使所述滑块组件能够在所述锁紧件调节至预设状态时锁紧于所述顶板。
根据本发明的第一方面实施例所述的细胞薄膜夹持装置，所述锁紧件上套设有弹力组件，所述弹力组件设置在所述第一滑块和所述第二滑块之间以提供锁紧的预紧力。
根据本发明的第一方面实施例所述的细胞薄膜夹持装置，所述第一导轨和所述第二导轨之间设有第三导轨，所述第三导轨的顶端连通所述第一导轨的底端，所述第三导轨的底端连通所述第二导轨的顶端，所述第二滑块的顶面上设有第一凸起部和第二凸起部，所述第一凸起部滑动设置在所述第三导轨，所述第二凸起部滑动设置在所述第二导轨，所述锁紧件穿设于所述第一凸起部，所述弹力组件设置在所述第一凸起部。
根据本发明的第一方面实施例所述的细胞薄膜夹持装置，所述固定板上设有第一硅胶凸起，所述第一夹持部的底端设有第二硅胶凸起，所述第一硅胶凸起和所述第二硅胶凸起相互配合以用于夹持所述细胞薄膜的一端；
和/或所述活动板上设有第三硅胶凸起，所述第二夹持部的底端设有第四硅胶凸起，所述第三硅胶凸起和所述第四硅胶凸起相互配合以用于夹持所述细胞薄膜另一端。
根据本发明第二方面实施例的细胞薄膜夹持装置的使用方法，包括：
使用的细胞薄膜夹持装置包括：机架、固定板、第一夹持部、活动板以及第二夹持部，其中所述第二夹持部通过所述滑块组件滑动设置在所述机架，所述滑动组件包括锁紧件；
细胞薄膜夹持装置的使用方法包括以下步骤：
将所述机架放置于盛有预设量培养液的培养皿中，培养液至少没过所述固定板的第一硅胶凸起和所述活动板的第三硅胶凸起；
将细胞薄膜转移至培养皿中，使用移液枪吸取培养液并滴下，使得细胞薄膜在培养液中展开；
将展开的细胞薄膜使用移液枪吹到所述第一硅胶凸起，并相应调节第一夹持部，控制夹持力夹紧细胞薄膜的边缘，然后将细胞薄膜另一边吹到所述第三硅胶凸起，并相应调节第二夹持部，控制夹持力夹紧细胞薄膜的另一边缘；
松开所述锁紧件，调节所述滑块组件以同时带动所述第二夹持部和所述活动板活动，使细胞薄膜处于自然长度，自然悬浮于培养液中；
锁紧所述锁紧件，使所述第一硅胶凸起和所述第三硅胶凸起的相对位置固定。
根据本发明的第二方面实施例的细胞薄膜夹持装置的使用方法，至少具有如下有益效果：通过夹持并利用细胞薄膜收缩特性制备出圆柱状的自组装型神经修复材料，该无支架型的神经修复材料具有低免疫排异反应、可重构出自然组织的机械和结构特性的优点，而且通过夹持和细胞薄膜剥离后的自收缩，还形成了结构排列有序的细胞外基质，引导神经沿目标方向再生的效果更显著，并且制备周期短于其他基于细胞薄膜制备的无支架型神经修复材料的制备周期。
根据本发明第三方面实施例的神经修复材料的制备方法，包括以下步骤：培养制备细胞薄片；使用本发明第一方面所述的细胞夹持装置将细胞薄片进行夹持，培养即得所述的神经修复材料。
根据本发明第三方面实施例所述的神经修复材料的制备方法，所述培养的条件为35～39℃、3％～7％CO2浓度下培养3～5天。
根据本发明第三方面实施例所述的神经修复材料的制备方法，本发明并不对培养皿的规格进行限定；优选地，所述培养皿上可粘贴环状材料，环状材料的大小可根据培养皿的规格进行调整，所述环状材料包括使用高分子水凝胶或硅胶中的至少一种制备得到。
根据本发明第三方面实施例所述的神经修复材料的制备方法，所述细胞包括：NHDF成纤维细胞、3T3成纤维细胞、施万细胞等可用于制备神经修复材料的细胞中的至少一种。
根据本发明的第三方面实施例的神经修复材料的制备方法，至少具有如下有益效果：
在非专利文献《用于海洋毒素检测的心肌细胞薄膜传感器》中，记载了使用夹子固定心肌细胞薄膜，但其另一端则处于自由状态，形成一个悬臂梁结构，心肌细胞的自发收缩运动会引起薄膜的弯曲，但该文献中的方法仅是通过心肌细胞的自发收缩运动用于表征细胞的搏动状态，无法用于制备圆柱状材料。
而本发明通过夹持固定细胞薄膜的形式，使细胞薄膜自发性的收缩成圆柱状形成神经修复材料。具体为通过两端夹持的方式使得细胞薄膜，因两个固定点的限制而收缩为圆柱形。
本发明使用的方法操作简单，且充分运用了细胞薄膜剥离后的自收缩特性，使细胞薄膜可以自组装形成结构排列有序的细胞外基质，进而形成神经修复材料。结构排列有序的细胞外基质引导神经沿目标方向再生的效果更显著。并且制备周期短于其他基于细胞薄膜制备的无支架型神经修复材料的制备周期。
根据本发明的第四方面实施例所述的修复材料，通过本发明第三方面所述的神经修复材料的制备方法，制备得到。
根据本发明的第四方面实施例所述的神经修复材料，至少具有如下有益效果：本发明通过夹持并利用细胞薄膜收缩特性制备出圆柱状的自组装型神经修复材料，该材料具有其他基于细胞薄膜制备的无支架型神经修复材料低免疫排异反应、可重构出自然组织的机械和结构特性的优点，而且因为通过夹持和细胞薄膜剥离后的自收缩，还形成了结构排列有序的细胞外基质，引导神经沿目标方向再生的效果更显著。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明进一步地说明；
图1为本发明实施例的结构示意图；
图2为本发明实施例中顶板与滑块组件的爆炸图；
图3为图1中A的内部示意图；
图4为本发明实施例中制备基于细胞薄膜收缩特性的组织工程自组装型神经修复材料的流程示意图；
图5为本发明实施例中制备基于NHDF成纤维细胞薄膜收缩特性的组织工程自组装型神经修复材料的效果图；
图6为对比例1中NHDF成纤维细胞细胞薄膜无夹持自然悬浮培养的效果图。
附图标记：
固定板100、第一硅胶凸起110、第一夹持部200、第二硅胶凸起210、活动板300、第三硅胶凸起310、第二夹持部400、第四硅胶凸起410、顶板510、第一导轨511、第二导轨512、第三导轨513、支撑部520、第一滑块531、第二滑块532、第一凸起部5321、第二凸起部5322、锁紧件533、弹力组件534、连接件540。
具体实施方式
下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。
在本发明的描述中，需要理解的是，涉及到方位描述，例如上、下、前、后、左、右等指示的方位或位置关系为基于附图所示的方位或位置关系，仅是为了便于描述本发明和简化描述，而不是指示或暗示所指的装置或元件必须具有特定的方位、以特定的方位构造和操作，因此不能理解为对本发明的限制。
在本发明的描述中，若干的含义是一个或者多个，多个的含义是至少两个，大于、小于、超过等理解为不包括本数，以上、以下、以内等理解为包括本数。如果有描述到第一、第二只是用于区分技术特征为目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量或者隐含指明所指示的技术特征的先后关系。
本发明的描述中，除非另有明确的限定，设置、安装、连接等词语应做广义理解，所属技术领域技术人员可以结合技术方案的具体内容合理确定上述词语在本发明中的具体含义。
由于疾病和事故等原因使周围神经、中枢神经损伤，而神经组织自我再生能力有限可能会导致神经功能丧失，无法控制目标肌肉完成特定响应。当损伤的神经断口间隙大于5mm时，直接通过神经缝合术来缝合周围神经损伤的神经间隙难以达到治疗效果，需要采用自体神经移植、神经修复材料移植等治疗方案实现神经的损伤修复。虽然自体神经移植能达到较好神经修复效果，但是其缺点也十分显著。人体中可用的供体神经组织数量有限、尺寸与受损神经组织不匹配，同时供体部位存在神经瘤、功能丧失和瘢痕形成的风险，导致继发性身体损伤，降低患者治疗后的生活质量。因此，研发制备良好移植修复功能的人工神经修复材料具有重要意义。
目前神经修复材料主要通过组织工程技术，结合工程、材料科学和细胞生物学进行设计研制。大多数FDA批准的神经修复材料为可生物降解的合成聚合物、天然生物材料构成的支架型神经修复材料。支架型神经修复材料存在降解速度过快或过慢、局部炎症反应、材料的内部引导空间过大导致轴突分散从而抑制神经功能恢复、神经再生过程中发生管内塌陷和压缩等缺点。为了优化材料内部引导空间，有提出使用含有相关基质的水凝胶等对材料内部进行填充，这样可以防止塌陷和压缩、还可以模拟细胞外基质微环境促进神经修复。但是，该种优化方式需要研究填充物成分以及填充密度，工艺繁琐，且填充物与支架的降解速率不同会对神经修复有所影响。无支架型神经修复材料主要由细胞外基质等细胞产物构成。该种方式所用原料可由宿主的干细胞产生，可以最大限度降低免疫排异反应，并且通过细胞薄膜技术制备的神经修复材料相较与支架型能更好的重构出自然组织的机械和结构特性，无须模拟细胞外基质提供的微环境，直接使用细胞外基质作为修复材料的主体。
其中使用细胞薄膜制备神经修复材料难点在于使薄膜形成圆柱状。目前将细胞薄膜由膜状成型为圆柱状主要采用直接卷膜或芯棒辅助卷膜的方法，但该类方法操作复杂，卷成圆柱状后细胞薄膜间存在的间隙的融合需要较长时间。若通过芯棒辅助卷成圆柱状会存在芯棒抽取不便，以及抽取芯棒后产生较大空洞等不足。若采用细胞薄膜卷膜的方法制备神经修复材料由于结构方面缺少有序排列的细胞外基质，会影响引导神经定向修复的效果，且所需要的培养周期较长。
参照图1至图3，本发明第一方面实施例的细胞薄膜夹持装置，应用于组织工程中的自组装型神经修复材料制备，细胞薄膜夹持装置包括机架、固定板100、第一夹持部200、活动板300和第二夹持部400。
其中机架作为承载平台，固定板100、第一夹持部200、活动板300和第二夹持部400均设置在机架上。其中固定板100固定设置，固定板100用于承载细胞薄膜的部分；第一夹持部200可调节地设置在机架，第一夹持部200能够在纵向上相对靠近或相对远离固定板100，以使第一夹持部200能够通过与固定板100配合的方式夹持细胞薄膜的一端；活动板300可活动地设置在机架，用于承载细胞薄膜的另一些部分；第二夹持部400可调节地设置在机架，第二夹持部400能够在纵向上相对靠近或相对远离活动板300，以使第二夹持部400能够通过与活动板300配合的方式夹持细胞薄膜的另一端；以及活动板300能够在预设平面内相对靠近或相对远离固定板100，且活动板300在预设平面活动时第二夹持部400同步活动，以使第一夹持部200和第二夹持部400在分别夹持细胞薄膜后能够调节细胞薄膜的展开状态。通过第一夹持部200和固定板100配合夹持细胞薄膜的一端，第二夹持部400和活动板300配合夹持细胞薄膜的另一端，通过同步调节第二夹持部400和活动板300以使细胞薄膜处于自然长度，随后使固定板100和活动板300的位置相对固定并培养细胞预设时间，使细胞薄膜自发性的收缩成圆柱状形成神经修复材料，该无支架型的神经修复材料具有低免疫排异反应、可重构出自然组织的机械和结构特性的优点。该方法操作简单，且充分运用了细胞薄膜剥离后的自收缩特性，使细胞薄膜可以自组装形成结构排列有序的细胞外基质，进而形成神经修复材料。结构排列有序的细胞外基质引导神经沿目标方向再生的效果更显著。
可以理解的是，第一夹持部200可上下调节地设置在固定板100的上方并与固定板100配合设置，第二夹持部400可上下调节地设置在活动板300的上方并与活动板300配合设置，以能够通过两个夹紧端夹紧细胞薄膜的两个位置，细胞薄膜基于自发的收缩特性会以这两个夹紧端作为基准收缩，最终形成以这两个夹紧端的连线为轴线的圆柱形组织结构，优选第一夹持部200和第二夹持部400均为螺杆，通过转动螺杆实现调节效果。
在本发明的一些实施例中，具体参照图1，机架包括顶板510、支撑部520、连接件540和滑块组件，支撑部520的底端与固定板100连接，支撑部520的顶端用于支撑顶板510，第一夹持部200设置在顶板510，连接件540的底端与活动板300连接，顶板510与滑块组件连接，滑块组件可滑动地设置在顶板510，第二夹持部400设置在滑块组件。可以理解的是，支撑部520作为受力基础竖直设置，顶板510与支撑部520固定连接并水平设置，顶板510作为安装基础，第一夹持部200和滑块组件均设置在顶板510，其中第一夹持部200为螺杆的实施例中，第一夹持部200穿设于顶板510的螺纹孔内，螺纹孔竖直设置使第一夹持部200只能纵向调节。其中滑块组件可滑动地设置在顶板510上，其中第二夹持部400为螺杆的实施例中，第二夹持部400穿设于滑块组件的螺纹孔内，螺纹孔竖直设置使第二夹持部400只能纵向调节，同时活动板300通过连接件540与滑块组件连接，使得第二夹持部400和活动板300在滑块组件滑动调节时同步活动，从而实现张拉细胞薄膜的效果。优选的支撑部520和连接件540均设置为板状构件，在机架中作为侧板存在，以保证机架的稳固。
优选的，具体参照图3，连接件540的底端与活动板300通过型面联接的方式进行连接，支撑部520的底端与固定板100通过型面联接的方式进行连接。通过型面联接方式进行连接可以避免采用金属螺钉连接时金属与培养液接触，造成对细胞薄膜的影响，确保直接与培养液接触的仅有PC(聚碳酸酯)、硅胶等无毒材料。
在本发明的一些实施例中，具体参照图2，顶板510的顶面设有第一导轨511，顶板510的底面设有第二导轨512，滑块组件包括锁紧件533、第一滑块531和第二滑块532，第一滑块531可滑动地设置在第一导轨511，第二滑块532可滑动地设置在第二导轨512，锁紧件533可调节地穿设于第一滑块531和第二滑块532，以使滑块组件能够在锁紧件533调节至预设状态时锁紧于顶板510。可以理解的是，通过滑动第一滑块531实现第二夹持部400的位置调节，由于锁紧件533穿设于第一滑块531和第二滑块532，使得滑动第一滑块531时第二滑块532同步滑动，在需要锁紧时通过锁紧件533使得第一滑块531和第二滑块532相对靠近，通过相对靠近的静摩擦力实现锁紧。优选的，锁紧件533为螺纹紧固件，第二滑块532上加工有螺纹孔，通过旋转锁紧件533实现第二滑块532相对靠近和相对远离第一滑块531的调节，从而对应松开和锁紧第一滑块531。
优选的，锁紧件533上套设有弹力组件534，弹力组件534设置在第一滑块531和第二滑块532之间以提供锁紧的预紧力。具体的，弹力组件534为弹簧，通过弹簧可加强锁紧件533对滑块组件的锁紧效果，以及在未锁紧时保持装置的稳定性。
优选的，具体参照图2，第一导轨511和第二导轨512之间设有第三导轨513，第三导轨513的顶端连通第一导轨511的底端，第三导轨513的底端连通第二导轨512的顶端，第二滑块532的顶面上设有第一凸起部5321和第二凸起部5322，第一凸起部5321滑动设置在第三导轨513，第二凸起部5322滑动设置在第二导轨512，锁紧件533穿设于第一凸起部5321，弹力组件534设置在第一凸起部5321。一些实施例中，固定板100和活动板300沿机架的长度方向间隔设置，活动板300沿该长度方向可调节设置，则第一导轨511、第二导轨512和第三导轨513均沿平行于该长度方向设置，且第一导轨511、第二导轨512和第三导轨513可基于加工槽的工艺加工成型与顶板510，第一滑块531和第二滑块532的具体结构形状设置为适配第一导轨511、第二导轨512和第三导轨513的滑块结构，以保证正常滑动。因此第一凸起部5321位于第二滑块532顶面的中部，第二凸起部5322设置两个并对称设置在第一凸起部5321的两侧，第二导轨512和第三导轨513也对应设置，通过第一凸起部5321作为弹力组件534和第二夹持部400的安装基础，保证第二夹持部400的调节、滑块组件的调节和锁紧件533的调节能够更加合理，不互相发生干涉。
在本发明的一些实施例中，固定板100上设有第一硅胶凸起110，第一夹持部200的底端设有第二硅胶凸起210，第一硅胶凸起110和第二硅胶凸起210相互配合以用于夹持细胞薄膜的一端；活动板300上设有第三硅胶凸起310，第二夹持部400的底端设有第四硅胶凸起410，第三硅胶凸起310和第四硅胶凸起410相互配合以用于夹持细胞薄膜另一端。可以理解的是，通过第一硅胶凸起110和第二硅胶凸起210的相互配合作为一个夹紧端，通过第三硅胶凸起310和第四硅胶凸起410的相互配合作为另一个夹紧端，利用两个夹紧端夹持细胞薄膜，使得细胞薄膜能够在处于自然长度下进行收缩，并最终形成圆柱形，其中第一硅胶凸起110、第二硅胶凸起210、第三硅胶凸起310和第四硅胶凸起410均由硅胶材质制成，且能够接触培养液的连接件540、支撑部520、固定板100和活动板300均由PC材料(聚碳酸酯)制成，可有效避免对对细胞薄膜的影响，保证细胞培养的效果。
参照图1至图3，本发明第二方面实施例的细胞薄膜夹持装置的使用方法，细胞薄膜夹持装置的使用方法可以是本发明第一方面实施例的细胞薄膜夹持装置的使用方法，使用的细胞薄膜夹持装置包括：机架、固定板100、第一夹持部200、活动板300以及第二夹持部400，其中第二夹持部400通过滑块组件滑动设置在机架，滑动组件包括锁紧件533；
细胞薄膜夹持装置的使用方法包括以下步骤：
将机架放置于盛有预设量培养液的培养皿中，培养液至少没过固定板100的第一硅胶凸起110和活动板300的第三硅胶凸起310；
将细胞薄膜转移至培养皿中，使用移液枪吸取培养液并滴下，使得细胞薄膜在培养液中展开；
将展开的细胞薄膜使用移液枪吹到第一硅胶凸起110，并相应调节第一夹持部200，控制夹持力夹紧细胞薄膜的边缘，然后将细胞薄膜另一边吹到第三硅胶凸起310，并相应调节第二夹持部400，控制夹持力夹紧细胞薄膜的另一边缘；
松开锁紧件533，调节滑块组件以同时带动第二夹持部400和活动板300活动，使细胞薄膜处于自然长度，自然悬浮于培养液中；
锁紧锁紧件533，使第一硅胶凸起110和第三硅胶凸起310的相对位置固定。
通过夹持并利用细胞薄膜收缩特性制备出圆柱状的自组装型神经修复材料，该无支架型的神经修复材料具有低免疫排异反应、可重构出自然组织的机械和结构特性的优点，而且通过夹持和细胞薄膜剥离后的自收缩，还形成了结构排列有序的细胞外基质，引导神经沿目标方向再生的效果更显著，并且制备周期短于其他基于细胞薄膜制备的无支架型神经修复材料的制备周期。
具体的使用方法包括：
将细胞进行常规培养；
将细胞传代，在35mm温度培养皿或贴有内部为35*35mm正方形的环状材料温度培养皿上接种，接种细胞数100万，置于37℃、5％的CO2培养箱内培养7天；
将培养有细胞薄膜的35mm温度培养皿置于20℃培养箱内1h-2h，以剥离细胞薄膜；
将滑块组件移动至装置横向长度最小处，锁紧锁紧件533使滑块组件保持在最短横向长度；
将机架放置于盛有一定量培养液的10cm培养皿中，培养液刚没过固定板100和活动板300的硅胶凸起；
将剥离下来的细胞薄膜转移至10cm培养皿内，使用移液枪吸取培养液，逐滴滴下培养液，使得细胞薄膜在培养液中展开；
将展开的细胞薄膜，使用移液枪缓缓吹到装置中其中一个硅胶凸起上，随后旋下相对应的第一夹持部200或第二夹持部400，使得上下两个硅胶凸起接触，夹紧细胞薄膜的边缘，并使用相同的方式将细胞薄膜另一边进行夹紧；
将锁紧件533松开，缓缓移动滑块组件使得细胞薄膜处于自然长度，自然悬浮于培养液中，随后锁紧锁紧件533，固定夹持装置横向长度；
将夹持了细胞薄膜的整个装置置于37℃、5％的CO2培养箱内，培养3-5天；
其中细胞可以为NHDF成纤维细胞、3T3成纤维细胞等细胞；进一步地，细胞薄膜可由单一种类细胞、多种类细胞、单一种类细胞复合可降解材料，以及多种类细胞复合可降解材料制备而成。具体的，细胞薄膜可以为NHDF成纤维细胞薄膜、3T3成纤维细胞薄膜，、与施万细胞共培养的NHDF成纤维细胞薄膜或与施万细胞共培养的3T3成纤维细胞薄膜，以及单一种类细胞复合可降解材料、多种类细胞复合可降解材料制备而成的细胞薄膜；
进一步地，所培养皿为35*35mm正方形的环状材料，由高分子水凝胶或硅胶中的至少一种制得。
参照图1至图3，本发明第三方面实施例的神经修复材料的制备方法，具体是NHDF成纤维细胞细胞薄膜制备组织工程自组装型神经修复材料的制备方法，流程图见图4。
具体的神经修复材料的制备方法包括：
将2ml胎牛血清加入35mm温度培养皿(购自UpCell)，37℃过夜涂层。NHDF成纤维细胞按照说明书规定方法进行培养，胰蛋白酶消化，备用。吸出温度培养皿中的胎牛血清，将NHDF成纤维细胞在预涂胎牛血清的温度培养皿上接种，接种细胞数100万，置于37℃、5％的CO2培养箱内使用低糖培养液培养7天，每2天换一次培养液。
将滑块组件移动至装置横向长度最小处，锁紧锁紧件533使装置保持在最短横向长度；将机架放置于盛有一定量高糖培养液的10cm培养皿中，高糖培养液刚没过固定板100和活动板300的硅胶凸起；高糖培养液包括89％DMEM(dulbecco's modified eaglemedium)高糖基础培养基、10％胎牛血清、1％双抗。
将培养有NHDF细胞薄膜的35mm温度培养皿置于20℃培养箱内1h-2h，运用专利文献CN202010601331.6(一种肝细胞体外共培养体系及其构建方法与应用)中的吹打方法，使用移液枪轻轻吹打培养皿边缘以剥离NHDF细胞薄膜。将剥离下来的NHDF细胞薄膜转移至培养皿内，使用移液枪吸取高糖培养液，逐滴滴下高糖培养液，使得NHDF细胞薄膜在高糖培养液中展开；将展开的NHDF细胞薄膜，使用移液枪缓缓吹到装置中其中一个硅胶凸起上，随后旋下相对应的第一夹持部200或第二夹持部400，使得上下两个硅胶凸起接触，夹紧NHDF细胞薄膜的边缘，并使用相同的方式将NHDF细胞薄膜另一边进行夹紧。
将锁紧件533松开，缓缓滑块组件使得NHDF细胞薄膜处于自然长度，自然悬浮于高糖培养液中，随后锁紧锁紧件533固定夹持装置横向长度。
将夹持了NHDF细胞薄膜的整个装置置于37℃、5％的CO2培养箱内，培养3-5天，于1天记录NHDF细胞薄膜的状态(图5)；最后获得组织工程自组装型神经修复材料，证明通过夹持并利用细胞薄膜收缩特性可以制备出圆柱状的自组装型神经修复材料。
对比例1NHDF成纤维细胞细胞薄膜无夹持自然悬浮培养
采用实施例中剥离下来的NHDF细胞薄膜，将其转移至盛有高糖培养液的10cm培养皿中，使用移液枪吸取高糖培养液，逐滴滴下培养液，使得NHDF细胞薄膜在高糖培养液中展开，自然悬浮于高糖培养液中，将该培养皿放置到37℃、5％CO2培养箱内培养，培养7天。分别于1、3、7天记录NHDF细胞薄膜的状态，结果见图6。说明NHDF细胞薄膜不经过夹持的悬浮培养无法形成组织工程自组装型神经修复材料，仅自收缩成了具有厚度的圆饼状组织，说明NHDF细胞薄膜不经过夹持的悬浮培养无法形成组织工程自组装型神经修复材料，仅自收缩成了具有厚度的圆饼状组织。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
上面结合附图对本发明实施例作了详细说明，但是本发明不限于上述实施例，在所述技术领域普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本发明宗旨的前提下作出各种变化。

Claims (6)

1.一种细胞薄膜夹持装置的使用方法，其特征在于，细胞薄膜夹持装置包括：
机架；
固定板，固定设置在所述机架，用于承载细胞薄膜的部分；
第一夹持部，可调节地设置在所述机架，所述第一夹持部能够在纵向上相对靠近或相对远离所述固定板，以使所述第一夹持部能够通过与所述固定板配合的方式夹持所述细胞薄膜的一端；
活动板，可活动地设置在所述机架，用于承载所述细胞薄膜的另一些部分；
第二夹持部，可调节地设置在所述机架，所述第二夹持部能够在纵向上相对靠近或相对远离所述活动板，以使所述第二夹持部能够通过与所述活动板配合的方式夹持所述细胞薄膜的另一端；
所述活动板能够在预设平面内相对靠近或相对远离所述固定板，且所述活动板在所述预设平面活动时所述第二夹持部同步活动，以使所述第一夹持部和所述第二夹持部在分别夹持所述细胞薄膜后能够调节所述细胞薄膜的展开状态；
所述机架包括顶板、支撑部、连接件和滑块组件，所述支撑部的底端与所述固定板连接，所述支撑部的顶端用于支撑所述顶板，所述第一夹持部设置在所述顶板，所述连接件的底端与所述活动板连接，所述顶板与所述滑块组件连接，所述滑块组件可滑动地设置在所述顶板，所述第二夹持部设置在所述滑块组件；
所述顶板的顶面设有第一导轨，所述顶板的底面设有第二导轨，所述滑块组件包括锁紧件、第一滑块和第二滑块，所述第一滑块可滑动地设置在所述第一导轨，所述第二滑块可滑动地设置在所述第二导轨，所述锁紧件可调节地穿设于所述第一滑块和所述第二滑块，以使所述滑块组件能够在所述锁紧件调节至预设状态时锁紧于所述顶板；
所述锁紧件上套设有弹力组件，所述弹力组件设置在所述第一滑块和所述第二滑块之间以提供锁紧的预紧力；
所述第一导轨和所述第二导轨之间设有第三导轨，所述第三导轨的顶端连通所述第一导轨的底端，所述第三导轨的底端连通所述第二导轨的顶端，所述第二滑块的顶面上设有第一凸起部和第二凸起部，所述第一凸起部滑动设置在所述第三导轨，所述第二凸起部滑动设置在所述第二导轨，所述锁紧件穿设于所述第一凸起部，所述弹力组件设置在所述第一凸起部；
细胞薄膜夹持装置的使用方法包括以下步骤：
将所述机架放置于盛有预设量培养液的培养皿中，培养液至少没过所述固定板的第一硅胶凸起和所述活动板的第三硅胶凸起；
将细胞薄膜转移至培养皿中，使用移液枪吸取培养液并滴下，使得细胞薄膜在培养液中展开；
将展开的细胞薄膜使用移液枪吹到所述第一硅胶凸起，并相应调节第一夹持部，控制夹持力夹紧细胞薄膜的边缘，然后将细胞薄膜另一边吹到所述第三硅胶凸起，并相应调节第二夹持部，控制夹持力夹紧细胞薄膜的另一边缘；
松开所述锁紧件，调节所述滑块组件以同时带动所述第二夹持部和所述活动板活动，使细胞薄膜处于自然长度，自然悬浮于培养液中；
锁紧所述锁紧件，使所述第一硅胶凸起和所述第三硅胶凸起的相对位置固定。
2.根据权利要求1所述的细胞薄膜夹持装置的使用方法，其特征在于：所述连接件的底端与所述活动板通过型面联接的方式进行连接；
和/或所述支撑部的底端与所述固定板通过型面联接的方式进行连接。
3.根据权利要求1或2所述的细胞薄膜夹持装置的使用方法，其特征在于：所述固定板上设有第一硅胶凸起，所述第一夹持部的底端设有第二硅胶凸起，所述第一硅胶凸起和所述第二硅胶凸起相互配合以用于夹持所述细胞薄膜的一端；
和/或所述活动板上设有第三硅胶凸起，所述第二夹持部的底端设有第四硅胶凸起，所述第三硅胶凸起和所述第四硅胶凸起相互配合以用于夹持所述细胞薄膜另一端。
4.一种神经修复材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：培养制备细胞薄膜；使用权利要求1～3任一项所述的细胞薄膜夹持装置的使用方法，培养即得所述的神经修复材料。
5.根据权利要求4所述的神经修复材料的制备方法，其特征在于：所述细胞包括：NHDF成纤维细胞、3T3成纤维细胞、施万细胞中的至少一种。
6.一种神经修复材料，其特征在于，通过权利要求4所述的制备方法制备得到。
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