CN115057939B - 结合新型冠状病毒的双特异性结合蛋白、药物和方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种结合新型冠状病毒的双特异性结合蛋白、药物和方法，涉及抗体技术领域。本发明公开的双特异性结合蛋白含有针对新型冠状病毒抗原的两个不同的抗原表位结合结构域，具有更好的新型冠状病毒中和活性，可用于抗新型冠状病毒药物的制备。

Description

结合新型冠状病毒的双特异性结合蛋白、药物和方法
技术领域
本发明涉及抗体技术领域，具体而言，涉及一种结合新型冠状病毒的双特异性结合蛋白、药物和方法。
背景技术
严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(severe acuterespiratory syndromecoronavirus 2，SARS-CoV-2)是导致2019年冠状病毒病的冠状病毒株。人感染了冠状病毒后常见体征有呼吸道症状、发热、咳嗽、气促和呼吸困难等。在较严重病例中，感染可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡。首先发现的新型冠状病毒即SARS-CoV-2，也叫野生型毒株，随后出现了一些列变异株，包括Delta变异株、Omicron变异株、Omicron BA.2变异株等。这些变异株的感染能力较强，为当前抗击疫情增加了困难。因此，开发预防或治疗这些病毒引起的相关疾病的药物是当前本领域的迫切需要。
鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种结合新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的双特异性结合蛋白、药物和方法。
本发明是这样实现的：
一方面，本发明提供一种结合新型冠状病毒的双特异性结合蛋白，其包括至少一个第一抗原表位结合结构域和至少一个第二抗原表位结合结构域；
所述第一抗原表位结合结构域为VHH，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1、或其人源化序列、或与其具有至少90％相似性且结合性能一致或更高的序列；
所述第二抗原表位结合结构域为VHH，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2、或其人源化序列、或与其具有至少90％相似性且结合性能一致或更高的序列。
SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2均是针对新型冠状病毒RBD蛋白的特异性VHH序列，二者均能特异性结合新型冠状病毒RBD蛋白，但具有不同的CDRs，以及不同的抗原结合表位。
本发明提供的双特异性结合蛋白包括SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2，具有两个抗原表位结合结构域，对新型冠状病毒具有双特异性结合能力，对新型冠状病毒(包括野生株和相关的变异株例如Delta变异株、Omicron变异株、Omicron BA.2变异株)具有中和活性，相较于由单一抗原表位结合结构域构成的单特异性结合蛋白，本发明提供的双特异性结合蛋白对新型冠状病毒的中和活性更高，可用于抗新型冠状病毒的药物制备。
其中，SEQ ID NO.1或2均可以由其人源化序列(例如SEQ ID NO.3或4)，或与其具有至少90％相似性且结合性能一致或更高的序列代替，在SEQ ID NO.1或2基础上得到这类衍生序列，以及由这些衍生序列构成的双特异性结合蛋白也属于本发明的保护范围。
可选地，在本发明一些实施方案中，与SEQ ID NO.1或2具有至少90％相似性可以是具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、99.2％、99.4％、99.8％和99.9％中的任意一者或两者之间的范围。
可选地，在本发明一些实施方案中，第一抗原表位结合结构和第二抗原表位结合结构域的数量在双特异性结合蛋白中可以是1个或多个，当两个抗原表位结合结构域的数量都是一个时，该双特异性结合蛋白属于单价结合蛋白，当两个抗原表位结合结构域中任一个的数量是多个如两个、3个、4个、5个、6个或其以上，该双特异性结合蛋白属于多价结合蛋白。
可选地，在本发明一些实施方案中，所述第一抗原表位结合结构域的数量为1-6个；所述第二抗原表位结合结构域的数量为1-6个。
所述第一抗原表位结合结构域的数量可以1个、2个、3个、4个、5个和6个中的任意一者或两者之间的范围。
所述第二抗原表位结合结构域的数量可以1个、2个、3个、4个、5个和6个中的任意一者或两者之间的范围。
在本发明的双特异性结合蛋白结构中，所述第一抗原表位结合结构域的数量与所述第二抗原表位结合结构域的数量可以相同(例如同为1个、2个、3个、4个、5个、6个)或不同(例如以1+2、1+3、1+4、1+5、1+6、2+3、2+4、2+5、2+6、3+4、3+5、3+6、4+5、4+6、或5+6的数量组合方式出现)。
第一抗原表位结合结构域的数量与第二抗原表位结合结构域的数量无论以何种数量组合方式来构成双特异性结合蛋白，其均属于本发明的保护范围。
可选地，在本发明一些实施方案中，所述双特异性结合蛋白还包括免疫球蛋白的Fc区，所述第一抗原表位结合结构域和所述第二抗原表位结合结构域均连接至所述Fc区。
通常而言，免疫球蛋白的Fc区可以延长双特异性结合蛋白的半衰期，与其类似功能的，还有人血清白蛋白、PEG化等，采用这类结构或其他的延长半衰期的结构代替本发明的Fc区也属于本发明的保护范围。
免疫球蛋白(Ig)是由两条相同的轻链和两条相同的重链通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。免疫球蛋白分为五类，即免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白M(IgM)、免疫球蛋白D(IgD)和免疫球蛋白E(IgE)。传统的抗体是一类能与抗原特异性结合的免疫球蛋白，也包括两条相同的轻链和两条相同的重链。重链结构为：VH-CH1-Hinge-CH2-CH3；
VH：重链可变区；CH1：重链恒定区1；Hinge：铰链区；CH2：重链恒定区2；CH3：重链恒定区3。
轻链结构为：VL-CL。
VL：轻链可变区；CL：轻链恒定区。
铰链区(hinge region)位于CH1与CH2之间，富含脯氨酸，易伸展弯曲，从而改变抗原结合部位之间的距离，有利于抗体结合位于不同位置的抗原表位。铰链区易被木瓜蛋白酶水解，产生不同的水解片段。木瓜蛋白酶水解Ig的部位是在铰链区二硫键连接的两条重链的近N端，可将Ig裂解为两个完全相同的Fab段和一个Fc段，Fc段通常由免疫球蛋白的Hinge、CH2和CH3结构域组成。
本发明双特异性结合蛋白中的Fc区可以是来自IgG(例如IgGl、IgG2、IgG3和IgG4)、IgA(IgAl和lgA2)、IgM、IgD、IgD中任意一种免疫球蛋白的Fc区。
可选地，在本发明一些实施方案中，上述Fc区来自IgGl、IgG2、IgG3或IgG4。
第一抗原表位结合结构域与第二抗原表位结合结构域，可以与Fc区直接连接，也可以间接连接；可以连接在Fc区的N端，也可以连接在Fc区的C端；第一抗原表位结合结构域与第二抗原表位结合结构域与Fc区无论采用何种方式连接均具有抗新型冠状病毒中和活性，其均属于本发明的保护范围。作为示例性的连接方式，本发明提供如下结构示例。
例如，可选地，在本发明一些实施方案中，所述双特异性结合蛋白包括第一肽链和第二肽链；
所述第一肽链包括：(EBD1)n-Fc区肽链；其中，EBD1为所述第一抗原表位结合结构域，n＝1-3，n为整数；
所述第二肽链包括：(EBD2)m-Fc区肽链；其中，EBD2为所述第二抗原表位结合结构域，m＝1-3，m为整数；
所述第一肽链与所述第二肽链通过Fc区肽链间的二硫键形成二聚体结构。
Fc区肽链是指免疫球蛋白Fc区的其中一条单链，由Hinge、CH2和CH3组成。EBD为抗原表位结合结构域(Epitope binding domain)。
可选地，在本发明一些实施方案中，所述第一肽链从N端到C端包括：EBD1-L-EBD1-L-EBD1-Fc区肽链；
所述第二肽链从N端到C端包括：EBD2-L-EBD2-L-EBD2-Fc区肽链；
其中，L代表柔性接头或无。
该实施方式提供的双特异性结合蛋白结构可参考图1-b所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，本发明的柔性接头是包含至少一个柔性氨基酸(Gly等)的多肽片段，其长度可以是自从1个氨基酸(Gly等)至20个氨基酸、2个氨基酸至15个氨基酸、4个氨基酸至10个氨基酸、5个氨基酸至9个氨基酸、6个氨基酸至8个氨基酸、或7个氨基酸至8个氨基酸，从3个氨基酸至12个氨基酸等不同长度的多肽片段。
作为柔性接头的例子，包括但不限于甘氨酸聚合物(G)n、甘氨酸-丝氨酸聚合物(例如包含(GS)n、(GSGGS)n及(GGGS)n，n为至少1的整数)、甘氨酸-丙氨酸聚合物、丙氨酸-丝氨酸聚合物等。使用现有技术中公知的其他柔性接头应用于本发明双特异性结合蛋白，也属于本发明的保护范围。
可选地，在本发明一些实施方案中，柔性接头为(GGGS)3(SEQ ID NO.17)。
可选地，在本发明一些实施方案中，上述Fc区具有增加异源二聚体形成的修饰，例如KIH修饰(例如L368R/D399K/Y407A,T366W、K392D、K409D)。
可选地，在本发明一些实施方案中，所述第一肽链的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述第二肽链的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，所述第一肽链从N端到C端包括：EBD1-Fc区肽链；EBD1为所述第一抗原表位结合结构域；
所述第二肽链从N端到C端包括：EBD2-Fc区肽链；EBD2为所述第二抗原表位结合结构域。
该实施方式提供的双特异性结合蛋白结构可参考图1-a所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，所述第一肽链的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述第二肽链的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，所述双特异性结合蛋白包括第一肽链和第二肽链；
所述第一肽链从N端到C端包括：EBD1-L-EBD2-L-EBD3-Fc区肽链；
所述第二肽链从N端到C端包括：EBD4-L-EBD5-L-EBD6-Fc区肽链；
其中，EBD1、EBD2、EBD3、EBD4、EBD5、以及EBD6各自独立选自所述第一抗原表位结合结构域和所述第二抗原表位结合结构域，且相邻两个抗原表位结合结构域不同；
L代表柔性接头或无；
所述第一肽链与所述第二肽链通过Fc区肽链间的二硫键形成二聚体结构。
可选地，在本发明一些实施方案中，EBD1为所述第一抗原表位结合结构域；EBD2为所述第二抗原表位结合结构域；EBD3所述第一抗原表位结合结构域；EBD4为所述第二抗原表位结合结构域；EBD5为所述第一抗原表位结合结构域；EBD6为所述第二抗原表位结合结构域；
所述第一肽链与所述第二肽链通过Fc区肽链间的二硫键形成二聚体结构。
该实施方式提供的双特异性结合蛋白结构可参考图1-c所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，上述第一肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，上述第二肽链如SEQ ID NO.10所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，EBD1为所述第二抗原表位结合结构域；EBD2为所述第一抗原表位结合结构域；EBD3所述第二抗原表位结合结构域；EBD4为所述第二抗原表位结合结构域；EBD5为所述第一抗原表位结合结构域；EBD6为所述第二抗原表位结合结构域；
所述第一肽链与所述第二肽链通过Fc区肽链间的二硫键形成二聚体结构。
该实施方式提供的双特异性结合蛋白结构可参考图1-d所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，上述第一肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示，上述第二肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，EBD1为所述第一抗原表位结合结构域；EBD2为所述第二抗原表位结合结构域；EBD3所述第一抗原表位结合结构域；EBD4为所述第一抗原表位结合结构域；EBD5为所述第二抗原表位结合结构域；EBD6为所述第一抗原表位结合结构域；
所述第一肽链与所述第二肽链通过Fc区肽链间的二硫键形成二聚体结构。
该实施方式提供的双特异性结合蛋白结构可参考图1-e所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，上述第一肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示，上述第二肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，所述双特异性结合蛋白包括第一肽链和第二肽链；
所述第一肽链包括：(EBD1)n-Fc区肽链-(EBD2)n；其中，EBD1为所述第一抗原表位结合结构域，n＝1-3，n为整数；
所述第二肽链包括：(EBD3)m-Fc区肽链-(EBD4)m；其中，EBD2为所述第二抗原表位结合结构域，m＝1-3，m为整数；
其中，EBD1、EBD2、EBD3、以及EBD4各自独立选自所述第一抗原表位结合结构域和所述第二抗原表位结合结构域，且EBD1、EBD2、EBD3以及EBD4不同时为所述第一抗原表位结合结构域或所述第二抗原表位结合结构域；
所述第一肽链与所述第二肽链通过Fc区肽链间的二硫键形成二聚体结构。
可选地，在本发明一些实施方案中，所述第一肽链从N端到C端包括：
EBD1-L-EBD1-L-EBD1-Fc区肽链-EBD2-L-EBD2-L-EBD2；
其中，EBD1为所述第一抗原表位结合结构域，EBD2为所述第二抗原表位结合结构域；
所述第二肽链从N端到C端包括：
EBD3-L-EBD3-L-EBD3-Fc区肽链-EBD4-L-EBD4-L-EBD4；
其中，EBD3为所述第一抗原表位结合结构域，EBD4为所述第二抗原表位结合结构域；
L代表柔性接头或无。
该实施方式提供的双特异性结合蛋白结构可参考图1-f所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，上述第一肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示，上述第二肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，所述第一肽链从N端到C端包括：
EBD1-L-EBD1-L-EBD1-Fc区肽链-EBD2-L-EBD2-L-EBD2；
其中，EBD1为所述第二抗原表位结合结构域，EBD2为所述第一抗原表位结合结构域；
所述第二肽链从N端到C端包括：
EBD3-L-EBD3-L-EBD3-Fc区肽链-EBD4-L-EBD4-L-EBD4；
其中，EBD3为所述第二抗原表位结合结构域，EBD4为所述第一抗原表位结合结构域；
L代表柔性接头或无。
该实施方式提供的双特异性结合蛋白结构可参考图1-g所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，上述第一肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示，上述第二肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，所述第一肽链从N端到C端包括：
EBD1-L-EBD1-L-EBD1-Fc区肽链-EBD2-L-EBD2-L-EBD2；
其中，EBD1和EBD2均为所述第二抗原表位结合结构域；
所述第二肽链从N端到C端包括：
EBD3-L-EBD3-L-EBD3-Fc区肽链-EBD4-L-EBD4-L-EBD4；
其中，EBD3和EBD4均为所述第一抗原表位结合结构域；
L代表柔性接头或无。
该实施方式提供的双特异性结合蛋白结构可参考图1-h所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，上述第一肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示，上述第二肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，双特异性结合蛋白包括：
(1)第一重链，其从N端到C端包括：EBD1-免疫球蛋白重链恒定区；
(2)第一轻链，其从N端到C端包括：EBD2-免疫球蛋白轻链恒定区；
(3)第二重链，其从N端到C端包括：EBD3-免疫球蛋白重链恒定区；
以及，(4)第二轻链，其从N端到C端包括：EBD4-免疫球蛋白轻链恒定区；
EBD1、EBD2、EBD3、以及EBD4各自独立选自所述第一抗原表位结合结构域和所述第二抗原表位结合结构域，且EBD1、EBD2、EBD3以及EBD4不同时为所述第一抗原表位结合结构域或所述第二抗原表位结合结构域。
免疫球蛋白重链恒定区包括：-CH1-Hinge-CH2-CH3，其结构对本领域技术人员来说是清楚的。
可选地，在本发明一些实施方案中，EBD1为所述第二抗原表位结合结构域，EBD2为所述第一抗原表位结合结构域，EBD3为所述第二抗原表位结合结构域，EBD4为所述第一抗原表位结合结构域。
该实施方式提供的双特异性结合蛋白结构可参考图1-i所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，上述第一重链和第二重链氨基酸序列如SEQID NO.18所示，上述第一轻链和第二轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.19所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，EBD1为所述第一抗原表位结合结构域，EBD2为所述第二抗原表位结合结构域，EBD3为所述第一抗原表位结合结构域，EBD4为所述第二抗原表位结合结构域。
该实施方式提供的双特异性结合蛋白结构可参考图1-j所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，上述第一重链和第二重链氨基酸序列如SEQID NO.20所示，上述第一轻链和第二轻链氨基酸序列如SEQ ID NO.21所示。
可选地，在本发明一些实施方案中，所述双特异性结合蛋白包括从N端至C端包括：(EBD1-EBD2)x；x＝1-3，x为整数；
其中，EBD1和EBD2各自独立选自所述第一抗原表位结合结构域和所述第二抗原表位结合结构域，且EBD1和EBD2不同时为所述第一抗原表位结合结构域或所述第二抗原表位结合结构域。
可选地，在本发明一些实施方案中，所述双特异性结合蛋白包括从N端至C端包括：(EBD1-EBD2)x；x＝1-3，x为整数；EBD1为所述第一抗原表位结合结构域，EBD2为所述第二抗原表位结合结构域；相邻两个抗原表位结合结构域间通过柔性接头连接。
该实施方式提供的双特异性结合蛋白结构可参考图1-k(当x＝1)、图1-l(当x＝2时)、图1-m(当x＝3)。
可选地，在本发明一些实施方案中，所述双特异性结合蛋白的氨基酸序列如SEQID NO.22、SEQ ID NO.23或SEQ ID NO.24所示。
另一方面，本发明提供一种分离的核酸分子，其编码如上所述的双特异性结合蛋白。
另一方面，本发明提供一种重组载体，其含有如上所述的核酸分子。
另一方面，本发明提供一种重组细胞，其含有如上所述的核酸分子，或如上所述的重组载体。
另一方面，本发明提供制备如上所述的双特异性结合蛋白的方法，其包括：从能重组表达所述双特异性结合蛋白的细胞的培养产物中分离纯化获得所述双特异性结合蛋白。
另一方面，本发明提供一种预防或治疗新型冠状病毒感染疾病的药物，其包括如上所述的双特异性结合蛋白。
可选地，在本发明一些实施方案中，所述新型冠状病毒为新型冠状病毒野生株、新型冠状病毒Delta变异株、新型冠状病毒Omicron变异株、或新型冠状病毒Omicron BA.2变异株。
另一方面，本发明提供一种治疗由新型冠状病毒引起的疾病的方法，其包括：向需要治疗的主体施用有效剂量的如上所述双特异性结合蛋白或如上所述的药物。
另一方面，本发明提供如上所述的双特异性结合蛋白、如上所述的核酸分子、如上所述的重组载体、或如上所述的重组细胞在制备药物中的应用，所述药物用于预防或治疗由新型冠状病毒感染引起的疾病。
可选地，在本发明一些实施方案中，所述新型冠状病毒为新型冠状病毒野生株、新型冠状病毒Delta变异株、新型冠状病毒Omicron变异株、或新型冠状病毒Omicron BA.2变异株。
另一方面，本发明提供一种缀合物，其包括如上所述的双特异性结合蛋白以及与所述双特异性结合蛋白结合的可检测标记。
术语“缀合物”是指本发明双特异性结合蛋白与酶相(如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等)、放射性同位素、荧光化合物或化学发光化合物、治疗剂等中的一种或多种相偶联得到的缀合物，这些缀合物可用于检测新型冠状病毒、制备治疗和/或预防新型冠状病毒的药物、或治疗新型冠状病毒感染疾病。
另一方面，本发明提供一种检测新型冠状病毒的试剂或试剂盒，其包括如上所述的双特异性结合蛋白，或如上所述的缀合物。
另一方面，本发明提供一种检测样品中新型冠状病毒存在的方法，其包括：将待测样品与如上所述的双特异性结合蛋白或如上所述的缀合物混合。
通过对可检测标记的检测有或无，强或弱，可确定检测样品中新型冠状病毒的存在与否。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为实施例1中提供的不同结构的双特异抗体的结构示意图。
图2为实施例2制备的双特异抗体R1467和R1468的电泳结果：a-R1467、R1468经过初纯后的样品还原电泳纯度，b-R1467、R1468经过精纯后的样品非还原电泳纯度。
图3a为不同双特异性抗体对新型冠状病毒野生株RBD蛋白的中和率。
图3b为不同双特异性抗体对新型冠状病毒Delta株RBD蛋白的中和率。
图3c为不同双特异性抗体对新型冠状病毒Omicron株RBD蛋白的中和率。
图4a为双特异性抗体R1411和对照单抗对新型冠状病毒野生株RBD蛋白的中和率比较。
图4b为双特异性抗体R1411和对照单抗对新型冠状病毒Delta株RBD蛋白的中和率比较。
图4c为双特异性抗体R1411和对照单抗对新型冠状病毒Omicron株RBD蛋白的中和率比较。
图5a为非Fc结构的双特异性抗体R1388对新型冠状病毒野生株RBD蛋白的中和率。
图5b为非Fc结构的双特异性抗体R1388对新型冠状病毒Delta变异株RBD蛋白的中和率。
图5c非Fc结构的双特异性抗体R1388对新型冠状病毒Omicron变异株RBD蛋白的中和率。
图5d非Fc结构的双特异性抗体R1388对新型冠状病毒Omicron BA.2变异株RBD蛋白的中和率。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1双特异性抗体的表达制备
1双特异性抗体设计构建：
利用Fc标签或His标签，使用可特异性结合新型冠状病毒RBD蛋白的两个不同来源的VHH结构域(COV2-171或其人源化序列、S-144或其人源化序列)，串联设计具有不同结构的单价或多价的双特异性抗体。双特异性抗体的序列见表1，结构见图1；
COV2-171 VHH1：
QLQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLDYYAIGWFRQAPGKEREGVSCISPSGTSTNYADSVKGRF TVSRDDAKNTVYLQMNSLKPEDTAVYYCAAANPSYYYCSGYPHEYDDWGQGTQVTVSS(SEQ ID NO.1)
COV2-171 VHH1人源化序列：
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTLDYYAIGWFRQAPGQGLEAVACISPSGTSTNYADSVKGRF TISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAAANPSYYYCSGYPHEYDDWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO.3)
S-144VHH2：
QVQLVESGGGPVQAGGSLRLSCTCSRCTFNWDGMGWFRQAPGKEREFVATISWSGQEPAYADSVKGRFTISRDKPKNTVYLQMTSLKSEDTAVYYCAAAQYTGASYSILRDQVGYDYWGQGTRVTVSA(SEQ ID NO.2)
S-144 VHH2人源化序列：
QVQLVESGGGVVQPGGSLRLSCTCSRCTFNWDGMGWFRQAPGKGLEFVATISWSGQEPAYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMTSLRAEDTAVYYCAAAQYTGASYSILRDQVGYDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO.4)
表1
Figure BDA0003717999500000101
Figure BDA0003717999500000111
Figure BDA0003717999500000121
Figure BDA0003717999500000131
Figure BDA0003717999500000141
2蛋白瞬转表达：
将表达上述目的蛋白的质粒通过与转染试剂PEI形成阳离子复合物后，导入到宿主细胞Expi293，质粒在细胞内期间，质粒上的外源基因在细胞内发生转录翻译，从而得到目的蛋白。
Expi293在37℃、8％二氧化碳、130rpm条件培养，并在转染前通过细胞计数，将2E6的细胞接种至1L摇瓶中，培养体系约为300ml。配制转染复合物准备转染：首先将750μg目标质粒加入到含有15ml Opti-MEM试剂的50ml离心管中，轻轻混匀，标记为A管；将1.5mg转染试剂PEI加入到含有15ml Opti-MEM试剂的50ml离心管中，轻轻混匀后，室温孵育5min，标记为B管；将B管PEI稀释液逐滴加入到A管DNA稀释液中，轻轻混匀后，室温孵育15min，孵育结束后，将PEI-目标质粒复合物加入到Expi293细胞，置于37℃摇床中继续培养。直到D7-D10后收样。
复合物样品的纯化：
瞬转细胞表达液经过9000rpm/20min离心，收集上清，再经过0.22μm滤膜除菌过滤。纯化采用ProA亲和层析或者Ni亲和层析(根据样品标签选择)。过程如下，使用AKTAavant 150层析设备，用至少5CV平衡缓冲液(10mM PBS)平衡层析柱(如MabSelectSuRe LX，GE或者Ni亲和层析柱)，加载样品至层析柱，使目标蛋白吸附在层析柱上而其他杂质穿透分离。完成上样后使用至少5CV平衡缓冲液(10mM PBS)再次冲洗层析柱，随后使用洗脱缓冲液(20mM NaAc，pH＝3.4或者含咪唑洗脱液)洗脱目标蛋白，收集管中预先加入中和缓冲液(1MTris，pH8.0)，中和缓冲液的加入体积根据洗脱样品的预估含量而定，一般加入10％洗脱体积量。
常规方法进行抗体的纯化，表达上清采用ProA亲和层析纯化。过程如下，使用AKTAavant 150层析设备，用至少5CV平衡缓冲液(10mM PBS)平衡层析柱(如MabSelectSuRe LX，GE)，加载样品至层析柱，使目标蛋白吸附在层析柱上而其他杂质穿透分离。完成上样后使用至少5CV平衡缓冲液(10mM PBS)再次冲洗层析柱，随后使用洗脱缓冲液(20mM NaAc，pH＝3.4)洗脱目标蛋白，收集管中预先加入中和缓冲液(1M Tris，pH8.0)，中和缓冲液的加入体积根据洗脱样品的预估含量而定，一般加入10％洗脱体积量。
样品使用Biotek-Epoch-Take-3进行浓度测定，利用A280方法检测抗体浓度，即以消光系数E.C.＝1.37(根据氨基酸序列预测)，光程＝0.05mm(Take-3板不同孔光程有细微差异，会自动校正)，通过设备检测样品吸光值，按照Lambert-Beer law计算待测抗体的浓度。样品浓度过低则需要进行超滤浓缩，使用超滤浓缩管(
Figure BDA0003717999500000152
Ultra-15 CentrifugalFilter Devices，30kD)按照说明书提供的通用操作方法，将样品浓度浓缩至＞0.5mg/ml；收集浓缩端样品，0.22um无菌针头滤器除菌过滤(科百特，PES，0.22um，直径13mm)后分装冻存备用；双特异性抗体的制备数据如下表2。R1467、R1468由于不带Fc标签，纯度数据参见图2。
表2
Figure BDA0003717999500000151
Figure BDA0003717999500000161
注：N.D.-未检测
从表2结果和图2，可以看出大部分双特异性抗体可以维持较好的表达、纯度水平。
实施例2双特异性抗体病毒中和活性检测
使用竞争法检测上述双特异性抗体对不同变种新型冠状病毒SARS-COV-2 RBD蛋白中和活性。实验条件如下：
包被条件：
病毒蛋白：不同变种新型冠状病毒SARS-COV-2 RBD蛋白，2μg/ml；
包被液：50mM pH9.51 CB；包被体积：100μl/孔；包被温度：2-8度；包被时间：18小时；封闭液：含1％BSA+1×PBS；封闭温度：37度；封闭时间：3小时；
加样：加50μl待测抗体(所有抗体起始浓度是5μg/mL，并按照5倍进行系列梯度稀释)，孵育30min，使用洗板液(1xPBS)清洗5次后，加入50μl ACE2抗原蛋白，使用洗板液(1xPBS)清洗3次后，显色检测。
基于Fc结构的双特异性抗体的病毒中和活性结果如下表3和图3所示，单位nM。
表3
Figure BDA0003717999500000162
Figure BDA0003717999500000171
R1372与R1382是R1408、R1409、R1410、R1411、R1412、R1413、R1414、R1415、R1416、R1417双抗分子的单抗对照分子。从结果可以看出R1372对于野生株、Delta株病毒RBD具有非常高的中和活性，但是R1372对于Omicron株病毒RBD几乎没有中和活性(结合图4-c)。而R1382对于野生株、Delta株、Omicron株病毒RBD均具有较好的中和活性，但是对于Delta株的中和活性略弱于R1382，对于双特异性抗体，得益于双抗分子可以同时占据病毒RBD上两个表位，所以含有VHH1和VHH2的不同结构的双特异性抗体均显示出了更强的病毒中和活性。结果可以参见图4。
非Fc结构的双特异性抗体的病毒中和活性结果如下表4和图5a-图5d所示。
表4
编号 野生型IC50 Delta株IC50 Omicron株IC50 Omicron BA.2IC50
R1468 0.0575 0.01402 0.1187 0.1631
R1388 0.07201 0.01983 0.1171 0.3353
从上结果可以看出与对照R1388相比，R1468对于野生株、Delta株、Omicron株病毒RBD具有非常相似的中和活性，但是R1468对于Omicron BA.2变异株病毒RBD的中和活性显著好于R1388。进一步说明含有VHH1和VHH2人源化的双特异性纳米抗体，对于新型冠状病毒变异株蛋白也具有更强的病毒中和活性。
上述实施例中的双特异抗体受益于利用同时占据病毒蛋白两个不同表位的结构特点，配合不同价位的结构设计，相比于普通的单抗分子，其能够更有效阻断野生型SARS-COV-2 RBD蛋白、Delta SARS-COV-2 RBD蛋白、Omicron SARS-COV-2 RBD蛋白、OmicronBA.2 SARS-COV-2 RBD与人ACE2受体蛋白的结合，显示出显著的新型冠状病毒中和活性。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 广东菲鹏制药股份有限公司
<120> 结合新型冠状病毒的双特异性结合蛋白、药物和方法
<160> 27
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 1
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu
100 105 110
Tyr Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 2
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 2
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln
100 105 110
Val Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
<210> 3
<211> 126
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 3
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ala Val
35 40 45
Ala Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu
100 105 110
Tyr Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 4
<211> 128
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 4
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln
100 105 110
Val Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 5
<211> 358
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 5
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu
100 105 110
Tyr Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Glu Pro
115 120 125
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
130 135 140
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
145 150 155 160
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
165 170 175
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
180 185 190
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
195 200 205
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
210 215 220
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
225 230 235 240
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
245 250 255
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
260 265 270
Gln Val Ser Leu Thr Cys Arg Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
275 280 285
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
290 295 300
Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Ala Ser Lys
305 310 315 320
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
325 330 335
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
340 345 350
Ser Leu Ser Pro Gly Ala
355
<210> 6
<211> 360
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 6
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln
100 105 110
Val Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
130 135 140
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
165 170 175
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
180 185 190
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
195 200 205
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
210 215 220
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
225 230 235 240
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
245 250 255
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
260 265 270
Lys Asn Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
275 280 285
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
290 295 300
Asp Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
305 310 315 320
Ser Asp Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
325 330 335
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
340 345 350
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala
355 360
<210> 7
<211> 640
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 7
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu
100 105 110
Tyr Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Gln
130 135 140
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg
145 150 155 160
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly
165 170 175
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser Cys Ile
180 185 190
Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
195 200 205
Phe Thr Val Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met
210 215 220
Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala
225 230 235 240
Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu Tyr Asp Asp
245 250 255
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
260 265 270
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Gln Leu Val Glu
275 280 285
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
290 295 300
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly Trp Phe Arg
305 310 315 320
Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser Cys Ile Ser Pro Ser
325 330 335
Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Val
340 345 350
Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
355 360 365
Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala Asn Pro Ser
370 375 380
Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu Tyr Asp Asp Trp Gly Gln
385 390 395 400
Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr
405 410 415
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
420 425 430
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
435 440 445
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
450 455 460
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
465 470 475 480
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
485 490 495
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
500 505 510
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
515 520 525
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
530 535 540
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
545 550 555 560
Arg Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
565 570 575
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Lys
580 585 590
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Ala Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
595 600 605
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
610 615 620
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala
625 630 635 640
<210> 8
<211> 646
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 8
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln
100 105 110
Val Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
130 135 140
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln Ala Gly Gly Ser
145 150 155 160
Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp Gly
165 170 175
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala
180 185 190
Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys
195 200 205
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr Leu
210 215 220
Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
225 230 235 240
Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln Val
245 250 255
Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ala Gly
260 265 270
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
275 280 285
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu
290 295 300
Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp Gly Met
305 310 315 320
Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Thr
325 330 335
Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
340 345 350
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
355 360 365
Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala
370 375 380
Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln Val Gly
385 390 395 400
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ala Glu Pro
405 410 415
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
420 425 430
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
435 440 445
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
450 455 460
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
465 470 475 480
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
485 490 495
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
500 505 510
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
515 520 525
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
530 535 540
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
545 550 555 560
Gln Val Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
565 570 575
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Asp Thr
580 585 590
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp
595 600 605
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
610 615 620
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
625 630 635 640
Ser Leu Ser Pro Gly Ala
645
<210> 9
<211> 642
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial sequence）
<400> 9
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu
100 105 110
Tyr Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln
130 135 140
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg
145 150 155 160
Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp Gly Met Gly
165 170 175
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Thr Ile
180 185 190
Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
195 200 205
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met
210 215 220
Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala
225 230 235 240
Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln Val Gly Tyr
245 250 255
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly
260 265 270
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Gln Leu
275 280 285
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
290 295 300
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly Trp
305 310 315 320
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser Cys Ile Ser
325 330 335
Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
340 345 350
Thr Val Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn
355 360 365
Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala Asn
370 375 380
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Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp
405 410 415
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
420 425 430
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
435 440 445
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
450 455 460
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
465 470 475 480
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
485 490 495
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500 505 510
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Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
530 535 540
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
545 550 555 560
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565 570 575
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580 585 590
Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Ala Ser Lys Leu Thr Val Asp
595 600 605
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
610 615 620
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
625 630 635 640
Gly Ala
<210> 10
<211> 644
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 10
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln
100 105 110
Val Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
130 135 140
Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
145 150 155 160
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala
165 170 175
Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser
180 185 190
Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
195 200 205
Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
210 215 220
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
225 230 235 240
Ala Ala Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu Tyr
245 250 255
Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
260 265 270
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu
275 280 285
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290 295 300
Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp Gly Met Gly Trp
305 310 315 320
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Thr Ile Ser
325 330 335
Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
340 345 350
Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Thr
355 360 365
Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala Gln
370 375 380
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385 390 395 400
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405 410 415
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
420 425 430
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
435 440 445
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
450 455 460
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465 470 475 480
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485 490 495
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
500 505 510
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515 520 525
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530 535 540
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545 550 555 560
Ser Leu Trp Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
565 570 575
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580 585 590
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Asp Leu Thr
595 600 605
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
610 615 620
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
625 630 635 640
Ser Pro Gly Ala
<210> 11
<211> 644
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 11
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln
100 105 110
Val Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
130 135 140
Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
145 150 155 160
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala
165 170 175
Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser
180 185 190
Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
195 200 205
Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu
210 215 220
Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
225 230 235 240
Ala Ala Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu Tyr
245 250 255
Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
260 265 270
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu
275 280 285
Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu
290 295 300
Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp Gly Met Gly Trp
305 310 315 320
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Thr Ile Ser
325 330 335
Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
340 345 350
Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Thr
355 360 365
Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala Gln
370 375 380
Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln Val Gly Tyr Asp
385 390 395 400
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ala Glu Pro Lys Ser
405 410 415
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
420 425 430
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
435 440 445
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
450 455 460
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
465 470 475 480
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
485 490 495
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
500 505 510
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
515 520 525
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
530 535 540
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val
545 550 555 560
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
565 570 575
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
580 585 590
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
595 600 605
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
610 615 620
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
625 630 635 640
Ser Pro Gly Ala
<210> 12
<211> 642
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 12
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu
100 105 110
Tyr Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln
130 135 140
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg
145 150 155 160
Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp Gly Met Gly
165 170 175
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Thr Ile
180 185 190
Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
195 200 205
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met
210 215 220
Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala
225 230 235 240
Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln Val Gly Tyr
245 250 255
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly
260 265 270
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Gln Leu
275 280 285
Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
290 295 300
Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly Trp
305 310 315 320
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser Cys Ile Ser
325 330 335
Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
340 345 350
Thr Val Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn
355 360 365
Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala Asn
370 375 380
Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu Tyr Asp Asp Trp
385 390 395 400
Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp
405 410 415
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
420 425 430
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
435 440 445
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
450 455 460
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
465 470 475 480
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
485 490 495
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
500 505 510
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
515 520 525
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
530 535 540
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
545 550 555 560
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
565 570 575
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
580 585 590
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
595 600 605
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
610 615 620
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
625 630 635 640
Gly Lys
<210> 13
<211> 1069
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 13
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu
100 105 110
Tyr Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly
115 120 125
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Gln
130 135 140
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg
145 150 155 160
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly
165 170 175
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser Cys Ile
180 185 190
Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
195 200 205
Phe Thr Val Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met
210 215 220
Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala
225 230 235 240
Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu Tyr Asp Asp
245 250 255
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
260 265 270
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Gln Leu Val Glu
275 280 285
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
290 295 300
Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly Trp Phe Arg
305 310 315 320
Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser Cys Ile Ser Pro Ser
325 330 335
Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Val
340 345 350
Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
355 360 365
Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala Asn Pro Ser
370 375 380
Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu Tyr Asp Asp Trp Gly Gln
385 390 395 400
Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr
405 410 415
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser
420 425 430
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
435 440 445
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro
450 455 460
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
465 470 475 480
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
485 490 495
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
500 505 510
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr
515 520 525
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
530 535 540
Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
545 550 555 560
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
565 570 575
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
580 585 590
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser
595 600 605
Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
610 615 620
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Ala
625 630 635 640
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
645 650 655
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln Ala Gly Gly Ser
660 665 670
Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp Gly
675 680 685
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala
690 695 700
Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys
705 710 715 720
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr Leu
725 730 735
Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
740 745 750
Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln Val
755 760 765
Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ala Gly
770 775 780
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
785 790 795 800
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu
805 810 815
Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp Gly Met
820 825 830
Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Thr
835 840 845
Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
850 855 860
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
865 870 875 880
Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala
885 890 895
Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln Val Gly
900 905 910
Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ala Gly Gly
915 920 925
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln
930 935 940
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg
945 950 955 960
Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp Gly Met Gly
965 970 975
Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Thr Ile
980 985 990
Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
995 1000 1005
Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
1010 1015 1020
Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
1025 1030 1035
Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln
1040 1045 1050
Val Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser
1055 1060 1065
Ala
<210> 14
<211> 1069
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 14
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Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
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65 70 75 80
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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
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Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp Gly
165 170 175
Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala
180 185 190
Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys
195 200 205
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Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
225 230 235 240
Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln Val
245 250 255
Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ala Gly
260 265 270
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
275 280 285
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290 295 300
Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp Gly Met
305 310 315 320
Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Thr
325 330 335
Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
340 345 350
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln
355 360 365
Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala
370 375 380
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435 440 445
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450 455 460
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465 470 475 480
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610 615 620
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
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Ser Leu Ser Pro Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
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Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu
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Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe
675 680 685
Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys
690 695 700
Glu Arg Glu Gly Val Ser Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn
705 710 715 720
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asp Ala
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740 745 750
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850 855 860
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1055 1060 1065
Ser
<210> 15
<211> 1075
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 15
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp
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Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
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Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln
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Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp Gly
165 170 175
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260 265 270
Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val
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290 295 300
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305 310 315 320
Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val Ala Thr
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340 345 350
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Thr Pro Pro Val Leu Lys Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Ala Ser Lys
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Ser Leu Ser Pro Gly Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
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Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro
660 665 670
Val Gln Ala Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys
675 680 685
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690 695 700
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Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro
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Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr
740 745 750
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser
755 760 765
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770 775 780
Val Thr Val Ser Ala Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
785 790 795 800
Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val
805 810 815
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820 825 830
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885 890 895
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915 920 925
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930 935 940
Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln
945 950 955 960
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<211> 1048
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 16
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260 265 270
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Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val Ser Cys Ile Ser Pro Ser
325 330 335
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340 345 350
Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
355 360 365
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565 570 575
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Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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660 665 670
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725 730 735
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755 760 765
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Gln
770 775 780
Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg
785 790 795 800
Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly
805 810 815
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820 825 830
Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg
835 840 845
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850 855 860
Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala
865 870 875 880
Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu Tyr Asp Asp
885 890 895
Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser
900 905 910
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Leu Gln Leu Val Glu
915 920 925
Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys
930 935 940
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945 950 955 960
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965 970 975
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980 985 990
Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
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1010 1015 1020
Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu Tyr Asp Asp Trp
1025 1030 1035
Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser
1040 1045
<210> 17
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 17
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 18
<211> 458
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 18
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln
100 105 110
Val Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
130 135 140
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
210 215 220
Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
225 230 235 240
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
260 265 270
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
275 280 285
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
290 295 300
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
305 310 315 320
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
325 330 335
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
340 345 350
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
355 360 365
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
370 375 380
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
385 390 395 400
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
405 410 415
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
420 425 430
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
435 440 445
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 19
<211> 233
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 19
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu
100 105 110
Tyr Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Arg Thr
115 120 125
Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu
130 135 140
Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro
145 150 155 160
Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly
165 170 175
Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr
180 185 190
Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His
195 200 205
Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val
210 215 220
Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230
<210> 20
<211> 456
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 20
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu
100 105 110
Tyr Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Ala Ser
115 120 125
Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr
130 135 140
Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro
145 150 155 160
Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val
165 170 175
His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser
180 185 190
Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile
195 200 205
Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val
210 215 220
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
225 230 235 240
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
245 250 255
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
260 265 270
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
275 280 285
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
290 295 300
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
305 310 315 320
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
325 330 335
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
340 345 350
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
355 360 365
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
370 375 380
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
385 390 395 400
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
405 410 415
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
420 425 430
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
435 440 445
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 21
<211> 235
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 21
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln
100 105 110
Val Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
130 135 140
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
145 150 155 160
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
165 170 175
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
180 185 190
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
195 200 205
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
210 215 220
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
225 230 235
<210> 22
<211> 269
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 22
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln
100 105 110
Val Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
130 135 140
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
145 150 155 160
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala
165 170 175
Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ala Val Ala
180 185 190
Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
195 200 205
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
210 215 220
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
225 230 235 240
Ala Ala Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu Tyr
245 250 255
Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
260 265
<210> 23
<211> 553
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 23
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln
100 105 110
Val Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
130 135 140
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
145 150 155 160
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala
165 170 175
Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ala Val Ala
180 185 190
Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
195 200 205
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
210 215 220
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
225 230 235 240
Ala Ala Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu Tyr
245 250 255
Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
260 265 270
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu
275 280 285
Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
290 295 300
Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp Gly Met Gly Trp
305 310 315 320
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ala Thr Ile Ser
325 330 335
Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
340 345 350
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Thr
355 360 365
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala Gln
370 375 380
Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln Val Gly Tyr Asp
385 390 395 400
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
405 410 415
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val
420 425 430
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
435 440 445
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly Trp Phe
450 455 460
Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ala Val Ala Cys Ile Ser Pro
465 470 475 480
Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr
485 490 495
Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
500 505 510
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala Asn Pro
515 520 525
Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu Tyr Asp Asp Trp Gly
530 535 540
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
545 550
<210> 24
<211> 837
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 24
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln
100 105 110
Val Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu
130 135 140
Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser
145 150 155 160
Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala
165 170 175
Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ala Val Ala
180 185 190
Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys
195 200 205
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu
210 215 220
Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
225 230 235 240
Ala Ala Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu Tyr
245 250 255
Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly
260 265 270
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu
275 280 285
Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu
290 295 300
Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp Gly Met Gly Trp
305 310 315 320
Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ala Thr Ile Ser
325 330 335
Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe
340 345 350
Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Thr
355 360 365
Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala Gln
370 375 380
Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln Val Gly Tyr Asp
385 390 395 400
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly
405 410 415
Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val
420 425 430
Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser
435 440 445
Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly Trp Phe
450 455 460
Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Ala Val Ala Cys Ile Ser Pro
465 470 475 480
Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr
485 490 495
Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser
500 505 510
Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala Asn Pro
515 520 525
Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu Tyr Asp Asp Trp Gly
530 535 540
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly
545 550 555 560
Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly
565 570 575
Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys
580 585 590
Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala
595 600 605
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val Ala Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln
610 615 620
Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg
625 630 635 640
Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala
645 650 655
Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala
660 665 670
Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln Val Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln
675 680 685
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
690 695 700
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly
705 710 715 720
Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser
725 730 735
Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro
740 745 750
Gly Gln Gly Leu Glu Ala Val Ala Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser
755 760 765
Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp
770 775 780
Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu
785 790 795 800
Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Ala Ala Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr
805 810 815
Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu Tyr Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Leu
820 825 830
Val Thr Val Ser Ser
835
<210> 25
<211> 360
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Pro Val Gln Ala Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Lys Pro Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln
100 105 110
Val Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Arg Val Thr Val Ser Ala
115 120 125
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
130 135 140
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
165 170 175
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
180 185 190
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
195 200 205
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
210 215 220
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
225 230 235 240
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
245 250 255
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
260 265 270
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
275 280 285
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
290 295 300
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
305 310 315 320
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
325 330 335
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
340 345 350
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360
<210> 26
<211> 358
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 26
Gln Leu Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Asp Tyr Tyr
20 25 30
Ala Ile Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Glu Arg Glu Gly Val
35 40 45
Ser Cys Ile Ser Pro Ser Gly Thr Ser Thr Asn Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asp Ala Lys Asn Thr Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Pro Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Asn Pro Ser Tyr Tyr Tyr Cys Ser Gly Tyr Pro His Glu
100 105 110
Tyr Asp Asp Trp Gly Gln Gly Thr Gln Val Thr Val Ser Ser Glu Pro
115 120 125
Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
130 135 140
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
145 150 155 160
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
165 170 175
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
180 185 190
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
195 200 205
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
210 215 220
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
225 230 235 240
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
245 250 255
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn
260 265 270
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
275 280 285
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
290 295 300
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
305 310 315 320
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
325 330 335
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
340 345 350
Ser Leu Ser Pro Gly Ala
355
<210> 27
<211> 360
<212> PRT
<213> 人工序列（ARTIFICIAL SEQUENCE）
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Thr Cys Ser Arg Cys Thr Phe Asn Trp Asp
20 25 30
Gly Met Gly Trp Phe Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Phe Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Trp Ser Gly Gln Glu Pro Ala Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ala Ala Gln Tyr Thr Gly Ala Ser Tyr Ser Ile Leu Arg Asp Gln
100 105 110
Val Gly Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
130 135 140
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
145 150 155 160
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
165 170 175
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
180 185 190
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
195 200 205
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
210 215 220
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
225 230 235 240
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
245 250 255
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr
260 265 270
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
275 280 285
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
290 295 300
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
305 310 315 320
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
325 330 335
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
340 345 350
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
355 360

Claims (41)

1.一种结合新型冠状病毒的双特异性结合蛋白，其特征在于，其包括至少一个第一抗原表位结合结构域和至少一个第二抗原表位结合结构域；
所述第一抗原表位结合结构域为VHH，其氨基酸序列为SEQ ID NO.1；
所述第二抗原表位结合结构域为VHH，其氨基酸序列为SEQ ID NO.2。
2.根据权利要求1所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述第一抗原表位结合结构域的数量为1-6个；所述第二抗原表位结合结构域的数量为1-6个。
3.根据权利要求2所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述双特异性结合蛋白还包括免疫球蛋白的Fc区，所述第一抗原表位结合结构域和所述第二抗原表位结合结构域均连接至所述Fc区。
4.根据权利要求3所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述双特异性结合蛋白包括第一肽链和第二肽链；
所述第一肽链包括：(EBD1)n-Fc区肽链；其中，EBD1为所述第一抗原表位结合结构域，n＝1-3，n为整数；
所述第二肽链包括：(EBD2)m-Fc区肽链；其中，EBD2为所述第二抗原表位结合结构域，m＝1-3，m为整数；
所述第一肽链与所述第二肽链通过Fc区肽链间的二硫键形成二聚体结构。
5.根据权利要求4所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，
所述第一肽链从N端到C端包括：EBD1-L-EBD1-L-EBD1-Fc区肽链；
所述第二肽链从N端到C端包括：EBD2-L-EBD2-L-EBD2-Fc区肽链；
其中，L代表柔性接头或无。
6.根据权利要求5所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述第一肽链的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述第二肽链的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
7.根据权利要求4所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，
所述第一肽链从N端到C端包括：EBD1-Fc区肽链；
所述第二肽链从N端到C端包括：EBD2-Fc区肽链。
8.根据权利要求7所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述第一肽链的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，所述第二肽链的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示。
9.根据权利要求3所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述双特异性结合蛋白包括第一肽链和第二肽链；
所述第一肽链从N端到C端包括：EBD1-L-EBD2-L-EBD3-Fc区肽链；
所述第二肽链从N端到C端包括：EBD4-L-EBD5-L-EBD6-Fc区肽链；
其中，EBD1、EBD2、EBD3、EBD4、EBD5、以及EBD6各自独立选自所述第一抗原表位结合结构域和所述第二抗原表位结合结构域，且相邻两个抗原表位结合结构域不同；
L代表柔性接头或无；
所述第一肽链与所述第二肽链通过Fc区肽链间的二硫键形成二聚体结构。
10.根据权利要求9所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，EBD1为所述第一抗原表位结合结构域；EBD4为所述第二抗原表位结合结构域。
11.根据权利要求10所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述第一肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示，所述第二肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示。
12.根据权利要求9所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，EBD1为所述第二抗原表位结合结构域；EBD4为所述第二抗原表位结合结构域。
13.根据权利要求12所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述第一肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示，所述第二肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.11所示。
14.根据权利要求9所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，EBD1为所述第一抗原表位结合结构域；EBD4为所述第一抗原表位结合结构域。
15.根据权利要求14所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述第一肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示，所述第二肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.12所示。
16.根据权利要求3所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述双特异性结合蛋白包括第一肽链和第二肽链；
所述第一肽链包括：(EBD1)n-Fc区肽链-(EBD2)n；其中，EBD1为所述第一抗原表位结合结构域，n＝1-3，n为整数；
所述第二肽链包括：(EBD3)m-Fc区肽链-(EBD4)m；其中，EBD2为所述第二抗原表位结合结构域，m＝1-3，m为整数；
其中，EBD1、EBD2、EBD3、以及EBD4各自独立选自所述第一抗原表位结合结构域和所述第二抗原表位结合结构域，且EBD1、EBD2、EBD3以及EBD4不同时为所述第一抗原表位结合结构域或所述第二抗原表位结合结构域；
所述第一肽链与所述第二肽链通过Fc区肽链间的二硫键形成二聚体结构。
17.根据权利要求16所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述第一肽链从N端到C端包括：
EBD1-L-EBD1-L-EBD1-Fc区肽链-EBD2-L-EBD2-L-EBD2；
其中，EBD1为所述第一抗原表位结合结构域，EBD2为所述第二抗原表位结合结构域；
所述第二肽链从N端到C端包括：
EBD3-L-EBD3-L-EBD3-Fc区肽链-EBD4-L-EBD4-L-EBD4；
其中，EBD3为所述第一抗原表位结合结构域，EBD4为所述第二抗原表位结合结构域；
L代表柔性接头或无。
18.根据权利要求17所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述第一肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示，所述第二肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.13所示。
19.根据权利要求16所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述第一肽链从N端到C端包括：
EBD1-L-EBD1-L-EBD1-Fc区肽链-EBD2-L-EBD2-L-EBD2；
其中，EBD1为所述第二抗原表位结合结构域，EBD2为所述第一抗原表位结合结构域；
所述第二肽链从N端到C端包括：
EBD3-L-EBD3-L-EBD3-Fc区肽链-EBD4-L-EBD4-L-EBD4；
其中，EBD3为所述第二抗原表位结合结构域，EBD4为所述第一抗原表位结合结构域；
L代表柔性接头或无。
20.根据权利要求19所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述第一肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示，所述第二肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.14所示。
21.根据权利要求16所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述第一肽链从N端到C端包括：
EBD1-L-EBD1-L-EBD1-Fc区肽链-EBD2-L-EBD2-L-EBD2；
其中，EBD1和EBD2均为所述第二抗原表位结合结构域；
所述第二肽链从N端到C端包括：
EBD3-L-EBD3-L-EBD3-Fc区肽链-EBD4-L-EBD4-L-EBD4；
其中，EBD3和EBD4均为所述第一抗原表位结合结构域；
L代表柔性接头或无。
22.根据权利要求21所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述第一肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.15所示，所述第二肽链氨基酸序列如SEQ ID NO.16所示。
23.根据权利要求3所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述双特异性结合蛋白包括：
(1)第一重链，其从N端到C端包括：EBD1-免疫球蛋白重链恒定区；
(2)第一轻链，其从N端到C端包括：EBD2-免疫球蛋白轻链恒定区；
(3)第二重链，其从N端到C端包括：EBD3-免疫球蛋白重链恒定区；
(4)第二轻链，其从N端到C端包括：EBD4-免疫球蛋白轻链恒定区；
EBD1、EBD2、EBD3、以及EBD4各自独立选自所述第一抗原表位结合结构域和所述第二抗原表位结合结构域，且EBD1、EBD2、EBD3以及EBD4不同时为所述第一抗原表位结合结构域或所述第二抗原表位结合结构域。
24.根据权利要求23所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，EBD1为所述第二抗原表位结合结构域，EBD2为所述第一抗原表位结合结构域，EBD3为所述第二抗原表位结合结构域，EBD4为所述第一抗原表位结合结构域。
25.根据权利要求24所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述第一重链和所述第二重链氨基酸序列如SEQ ID NO.18所示，所述第一轻链和所述第二轻链氨基酸序列如SEQIDNO.19所示。
26.根据权利要求23所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，EBD1为所述第一抗原表位结合结构域，EBD2为所述第二抗原表位结合结构域，EBD3为所述第一抗原表位结合结构域，EBD4为所述第二抗原表位结合结构域。
27.根据权利要求26所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述第一重链和所述第二重链氨基酸序列如SEQ ID NO.20所示，所述第一轻链和所述第二轻链氨基酸序列如SEQIDNO.21所示。
28.根据权利要求2所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述双特异性结合蛋白包括从N端至C端包括：(EBD1-EBD2)x；x＝1-3，x为整数；
其中，EBD1和EBD2各自独立选自所述第一抗原表位结合结构域和所述第二抗原表位结合结构域，且EBD1和EBD2不同时为所述第一抗原表位结合结构域或所述第二抗原表位结合结构域。
29.根据权利要求28所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，EBD1为所述第一抗原表位结合结构域，EBD2为所述第二抗原表位结合结构域；相邻两个抗原表位结合结构域间通过柔性接头连接。
30.根据权利要求29所述的双特异性结合蛋白，其特征在于，所述双特异性结合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.23或SEQ ID NO.24所示。
31.一种分离的核酸分子，其特征在于，其编码如权利要求1-30任一项所述的双特异性结合蛋白。
32.一种重组载体，其特征在于，其含有权利要求31所述的核酸分子。
33.一种重组细胞，其特征在于，其含有权利要求31所述的核酸分子，或权利要求32所述的重组载体。
34.制备如权利要求1-30任一项所述的双特异性结合蛋白的方法，其包括：从能重组表达所述双特异性结合蛋白的细胞的培养产物中分离纯化获得所述双特异性结合蛋白。
35.一种预防或治疗新型冠状病毒感染疾病的药物，其特征在于，其包括如权利要求1-30任一项所述的双特异性结合蛋白。
36.根据权利要求35所述的药物，其特征在于，所述新型冠状病毒为新型冠状病毒野生株、新型冠状病毒Delta变异株、新型冠状病毒Omicron变异株、或新型冠状病毒OmicronBA.2变异株。
37.权利要求1-30任一项所述的双特异性结合蛋白、权利要求31所述的核酸分子、权利要求32所述的重组载体、或权利要求33所述的重组细胞在制备药物中的应用，其特征在于，所述药物用于预防或治疗由新型冠状病毒感染引起的疾病。
38.根据权利要求37所述的应用，其特征在于，所述新型冠状病毒为新型冠状病毒野生株、新型冠状病毒Delta变异株、新型冠状病毒Omicron变异株、或新型冠状病毒OmicronBA.2变异株。
39.一种缀合物，其特征在于，其包括如权利要求1-30任一项所述的双特异性结合蛋白以及与所述双特异性结合蛋白结合的可检测标记。
40.一种检测新型冠状病毒的试剂或试剂盒，其特征在于，其包括如权利要求1-30任一项所述的双特异性结合蛋白，或如权利要求39所述的缀合物。
41.一种检测样品中新型冠状病毒存在的方法，所述方法不以疾病的诊断和治疗为目的，其特征在于，其包括：将待测样品与如权利要求1-30任一项所述的双特异性结合蛋白或如权利要求39所述的缀合物混合。
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