CN115057906B - 利用去氢表雄酮合成胆固醇的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及有机合成领域，具体公开了一种利用去氢表雄酮合成胆固醇的方法。以去氢表雄酮为起始原料，依次经过酯化反应、关环反应、McMurry偶联反应、氢化反应以及水解反应得到胆固醇。本发明避免了产品中动物DNA或RNA的残留，且产品中细菌内毒素、需氧菌、霉菌、酵母菌总数较低。
Description
技术领域
本发明属于有机合成领域，具体涉及一种利用去氢表雄酮合成胆固醇的方法。
背景技术
胆固醇又称胆甾醇，具有甾体骨架，是合成甾类化合物的重要原料，广泛存在于动物体内，是动物组织细胞不可缺少的重要物质，在体内是合成胆汁酸、维生素D3以及其他甾体激素的重要原料。胆固醇的主要来源是从猪、牛、羊等动物的脑、内脏、脊髓中提取，其提取工艺及分离技术比较复杂。 但由于目前许多疾病的来源为动物本身，使得人们对动物提取所得胆固醇的安全性产生顾虑，迫切希望从其他渠道获得胆固醇。
现有化学合成胆固醇主要以薯蓣苷元、孕烯醇酮、豆甾醇、双降醇等为原料进行制备，但目前已报道的胆固醇合成方法存在操作繁琐、生产污染大、成本高等问题，如下所示：
（1）中国专利申请CN 105218609A公开了以孕烯醇酮为原料合成胆固醇，由于其所用原料1-氯-4-甲基戊烷市场上无大宗商品供应，且在制备双键过程中需要使用磷鎓盐进行Witting反应，在最终产品中较难除去该含磷化合物，且在催化还原双键的过程中需要使用昂贵的手性催化剂，因此该路线较难实现工业化生产。
（2）中国专利CN105237603B公开了以豆甾醇为原料，经六步反应制备目标产物。该路线在合成过程中使用臭氧，对设备要求较高，且臭氧工业化生产存在安全隐患，且在双键过程中需要磷鎓盐进行Witting反应，该过程中残留的磷盐易毒化下步氢化还原过程中的催化剂，最终产品较难完全除去含磷化合物，难以实现工业化生产。
（3）中国专利申请CN114524856A及CN114395009A公开了以双降醇为原料合成胆固醇，但由于该工艺中涉及Witting反应，会产生过量磷盐；且在制备脂类化合物过程中需要使用大量草酰氯与醋酸酐，均会造成环境污染。最终产品仍较难完全去除含磷化合物。
综上所述，仍需研发一种基于非动物源为原料，高效、绿色、环保安全、不含磷元素的更适合医药应用的胆固醇合成方法。
发明内容
为了弥补现有技术的不足，本发明提供了一种利用去氢表雄酮合成胆固醇的方法。
本发明的技术方案为：
一种利用去氢表雄酮合成胆固醇的方法，其特征在于：以去氢表雄酮式（1）为起始原料，依次经过酯化反应得式（2）、关环反应得式（3）、McMurry偶联反应得式（4）、氢化反应得式（5）以及水解反应得到胆固醇式（6），其中，R1选自芳香基或C1~C8烷基中的一种，R2选自C1~C5烷基中的一种；
式（1）：
；
式（2）：
；
式（3）：
；
式（4）：
；
式（5）：
；
式（6）：
。
优选地，R1为对甲苯基，R2为甲基。
优选地，利用去氢表雄酮合成胆固醇的方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤（a）：酯化反应：将去氢表雄酮、磺酰化试剂、碱与溶剂混合，20~50℃下反应10~40小时，得到式（2）化合物；
步骤（b）：关环反应：将式（2）化合物与醇、碱混合，30~80℃下反应1~20小时，得式（3）化合物；
步骤（c）：McMurry偶联反应：将式（3）化合物与钛类试剂在还原试剂的作用下，经McMurry偶联反应制备得式（4）化合物；
步骤（d）：氢化反应：式（4）化合物与催化剂在溶剂中混合，氢气加压至1~20 atm，然后在40~120℃下反应1~20小时，得式（5）化合物；
步骤（e）：水解反应：将式（5）化合物与酸催化剂在溶剂中混合，然后在30~120℃下反应2~24小时，有机相经烘干，得式（6）化合物。
优选地，步骤（a）中，去氢表雄酮与磺酰化试剂的摩尔比为（0.4~1.0）：1.0；去氢表雄酮与碱的质量比为（0.05~1.6）：1.0、去氢表雄酮与溶剂的质量比为（0.05~0.5）：1.0；所述碱为吡啶、三乙胺、DMAP、醋酸钾中任意一种或多种；所述溶剂为吡啶、三乙胺、甲苯、二氯乙烷、四氢呋喃、二氧六环中的任意一种或多种；所述磺酰化试剂为式（7）化合物，其中R为芳香基或C1~C8烷基中的一种，X为卤素；
式（7）：
。
优选地，步骤（a）中，所述溶剂为吡啶或二氯乙烷，所述X为氟、氯、溴、碘。
优选地，步骤（a）中，所述磺酰化试剂为对甲苯磺酰氯或苯磺酰氯。
优选地，步骤（b）中，所述碱为吡啶、三乙胺、DMAP、醋酸钾中的任意一种或多种；所述醇为C1~C6烷烃醇中的任意一种或多种；式（2）化合物与碱的摩尔比为（0.2~0.6）：1.0；式（2）化合物：醇的质量比为（0.05~0.5）：1.0。
优选地，步骤（b）中，所述碱为吡啶，所述醇为甲醇。
优选地，步骤（c）中，McMurry偶联反应过程为：将钛类试剂与还原试剂在溶剂中混合，而后加入到由式（3）化合物、6-甲基2-庚酮和溶剂混合得到的混合物中，然后在40~120℃下反应1~10 h，反应完毕后，用稀酸对反应液进行淬灭，萃取，烘干有机相，得式（4）化合物。
优选地，步骤（c）中，所述钛类试剂为四氯化钛、三氯化钛、四溴化钛、三溴化钛中的任意一种或多种；还原试剂为Yb粉、锌粉、铁粉中的一种或多种；所述溶剂为四氢呋喃、二氧六环的一种或多种；稀酸为稀盐酸、稀硫酸中的一种；式（3）化合物与钛类试剂的摩尔比为（0.5~3.0）：1.0；式（3）化合物与6-甲基-2-庚酮的摩尔比为（0.1~1.0）：1.0；式（3）化合物与还原试剂的摩尔比为（0.2~1.0）：1.0。
优选地，步骤（c）中，钛类试剂为四氯化钛，所述还原试剂为Yb粉或锌粉，所述稀酸为稀盐酸。
优选地，步骤（c）中，钛类试剂为四氯化钛，还原试剂为Yb粉。
优选地，步骤（d）中，所述催化剂为C粉与钯、铂、镍、钌金属中的一种或多种的混合物；溶剂为四氢呋喃、甲醇、甲苯、无水乙醇的一种；式（4）化合物：催化剂的质量比为（5.0~15.0）：1.0；式（4）化合物与溶剂的质量比为（0.05~0.2）：1.0。
优选地，步骤（d）中，所述催化剂为钯碳，溶剂为无水乙醇。
优选地，步骤（e）中，所述酸催化剂为盐酸、硫酸、对甲苯磺酸、苯磺酸的一种或多种；所述溶剂为甲醇、二氧六环、四氢呋喃、乙醇与水的一种或多种，其中，式（5）化合物：酸催化剂的摩尔比为（2.0~3.0）：1.0；式（5）化合物：溶剂的质量比为(0.05~1.0)：1.0。
与现有技术相比，本发明的有益效果如下：
本发明提供了一种新非动物源胆固醇的合成方法，避免了产品中动物DNA或RNA的残留，产品中细菌内毒素、需氧菌、霉菌、酵母菌含量均较低；本发明采用Mcmurry反应替代Witting反应制备双键，避免了含磷物质的使用；且本发明在未采用手性催化剂的条件下，实现双键选择性还原，避免了昂贵手性催化剂的使用，降低了生产成本，具体来说，本发明中式（4）化合物在催化条件下进行手性加氢时，由于式（4）化合物中甲基存在空间位阻，原子半径较大的钯、铂、镍、钌等催化剂易受到分子式中甲基的空间位阻，只能在甲基相反的位置进行催化氢化，使得本发明即便不使用手性催化剂，也依然能够实现双键的立体型还原，实现手性加氢目的，并且还获得了较高纯度的式（5）化合物；此外，依据本发明所述制备方法制备的胆固醇再经过进一步的纯化后可制备出高纯度胆固醇，HPLC纯度>99.0%，且经GC-FPD检测未发现磷元素，因此，本申请更适合医药级应用。
附图说明
图1为式（4）化合物在催化剂的催化作用下进行手性加氢的机理示意图。
具体实施方式
实施例一：
一种利用去氢表雄酮合成胆固醇的方法，包括以下步骤：
步骤（a）：制备式（2）化合物，
式（2）：
。
具体步骤如下：
室温下，于500 mL三口烧瓶中依次加入去氢表雄酮（30.0 g，0.104 mol）、对甲苯磺酰氯（29.74 g，0.156 mol）和吡啶（210.0 g），在25~35 ℃下搅拌反应12 h，反应结束后，减压蒸出吡啶，并将剩余残留物缓慢加入10%碳酸钾水溶液中，过滤，得滤饼，将所得滤饼经水淋洗至中性，滤饼经减压烘干得式（2）化合物41.43 g，收率90.0%；MS-APCI：[m+1]/z=443.31；本实施例一中吡啶既作为碱又作为溶剂；
步骤（b）：制备式（3）化合物，
式（3）：
。
具体步骤如下：
室温下，于500 mL三口烧瓶中依次加入式（2）化合物（41.43 g，0.094 mol）、醋酸钾（27.56 g，0.281 mol）和甲醇（248.58 g）；然后升温至55~65 ℃下搅拌反应5 h，反应结束后，减压蒸出甲醇，然后将剩余残留物加入400 mL水溶液中，并用410 mL二氯乙烷萃取，后再经200 mL自来水水洗至中性，有机相经减压烘干得无色油状物即式（3）化合物25.89g，收率91.45%；MS-APCI：[m+1]/z=303.34；
步骤（c）：制备式（4）化合物，
式（4）：
。
具体步骤如下：
室温下，于2 L三口烧瓶中依次加入金属Yb（14.88 g，0.086 mol）、TiCl4(5.5 g，0.029 mol)和四氢呋喃（344.0 g），室温搅拌5 min，得混合溶液，而后将该混合溶液加入至式（3）化合物（25.89 g，0.086 mol）、6-甲基-2-庚酮（27.57 g，0.215 mol）和四氢呋喃（344.0 g）的混合溶液中，后升温至65~75℃，保温反应5~7 h；冷却至室温后加入 0.1 M盐酸淬灭反应，并用500 g二氯乙烷对反应液进行萃取，有机相再经3次水洗至中性，每次水用量为300.0 g，而后将有机相经减压烘干得黄褐色固体。随后将固体用甲醇/甲苯体系重结晶，得白色固体即式（4）化合物23.81 g，收率：69.44%；MS-APCI：[m+1]/z=399.36；
步骤（d）：制备式（5）化合物，
式（5）：
；
式（5）异构体：
。
具体步骤如下：
室温条件下向1 L不锈钢反应釜中加入式（4）化合物(47.62 g ，0.12 mol)、4.76g Pd/C（钯含量：5%）、285.72 g无水乙醇，50~60℃，5~10 atm下保温反应5 h；反应完毕后，将反应液从反应釜中取出，减压抽滤，得滤饼，并用50 g无水乙醇对滤饼进行淋洗，得无色澄清液，即为母液，而后将所得母液减压烘干得灰白色固体即式（5）化合物47.27 g，收率：98.76%，对映体过量百分数ee为92.33% ；MS-APCI：[m+1]/z=401.39；
步骤（e）：制备式（6）化合物，
式（6）：
。
具体步骤如下：
室温条件下依次向1 L三口烧瓶中加入式（5）化合物（23.74 g ，0.059 mol）、237.4 g二氧六环、118.7 g自来水和浓硫酸(2.38 g，0.024 mol)，油浴升温T内至60~70℃保温反应4 h。反应完毕后，自然冷却至室温，并向体系中加入500 g甲苯进行萃取，有机相再经4次自来水水洗至中性，每次自来水的用量为118.7 g，有机相减压烘干得白色固体即式（6）化合物21.61 g，收率94.33%。
对步骤（e）中制备的白色固体进行进一步提纯制备高纯度式（6）化合物，即高纯度胆固醇，具体步骤如下：室温条件下，向上述固体中加入21.61 g甲苯和86.44 g甲醇，升温至55~65℃下使固体完全溶解，后在-10~-20℃下进行重结晶，过滤，滤饼再经少许甲醇淋洗，并减压烘干得白色固体即纯度高的式（6）化合物15.46 g，收率：67.48%，HPLC：99.21%。MS-APCI：[M-H2O+1]=369.25，1H NMR（CDCl3, 400MHz）：δ(ppm)：5.354~5.380ppm（dd,1H）,3.554~3.495ppm（m,1H）,2.324~2.195ppm ( m, 2H ), 2.028~1.940ppm (m, 2H)，1.873~1.785ppm (m，3H)，1.623~0.843ppm ( m, 34H)，0.681ppm（s,3H）。
13C NMR ( CDCl3, 100MHz )，δ(ppm)：148.844, 121.781, 71.859, 56.857,56.240, 50.216 42.342, 39.870, 39.602, 37.740, 36.583, 36.279, 35.871,31.990, 31.743, 28.322 28.100, 24.380, 23.923, 22.905, 22.647, 21.171,19.484, 18.802, 11.941。
此外，对本实施例一制备的胆固醇产品中的细菌内毒素、需氧菌、霉菌、酵母菌含量进行检测，检测结果如表1所示：
表1
| 细菌内毒素 | 0.15 Eu/mg |
| 需氧菌总数 | <10 CFU/g |
| 霉菌、酵母菌总数 | <10 CFU/g |
实施例二：
一种利用去氢表雄酮合成胆固醇的方法，包括以下步骤：
步骤（a）：制备式（2）化合物，
式（2）：
。
具体步骤如下：
室温下，于500 mL三口烧瓶中依次加入去氢表雄酮（25.0 g，0.087 mol）、对甲苯磺酰氯（21.48 g，0.113 mol）和三乙胺（125 g）；在25~35 ℃下搅拌反应10 h，反应结束后，减压蒸出三乙胺，并将剩余残留物缓慢加入10%碳酸钾水溶液中，过滤，得滤饼，将所得滤饼再经水淋洗至中性，滤饼经减压烘干得式（2）式化合物35.45 g，收率92.41%；MS-APCI：[m+1]/z=443.31；本实施例二中三乙胺既作为溶剂又作为碱；
步骤（b）：制备式（3）化合物，
式（3）：
。
具体步骤如下：
室温下，于2 L三口烧瓶中依次加入式（2）化合物（69.0 g，0.156 mol）、吡啶（24.66 g，0.312 mol）和甲醇（483.0 g）；然后升温至55~65 ℃下搅拌反应10 h，反应结束后，减压蒸出甲醇，然后将剩余残留物加入水溶液中，并用二氯乙烷萃取，后水洗至中性，有机相经减压烘干得无色油状物即式（3）化合物44.58 g，收率94.55%；MS-APCI：[m+1]/z=303.34；
步骤（c）：制备式（4）化合物，
式（4）：
。
具体步骤如下：
室温下，于2 L三口烧瓶中依次加入金属锌粉（17.29 g，0.264 mol）、TiCl4(50.17g，0.264 mol)和四氢呋喃（363.09 g），室温搅拌5 min，得混合溶液，然后将该混合溶液加入至由式（3）化合物（40.0 g，0.132 mol）、6-甲基2-庚酮（33.91 g，0.264 mol）和四氢呋喃（400.0 g）混合得到的混合溶液中，后升温至50~65 ℃，保温反应12 h，冷却至室温后加入0.1 M盐酸淬灭反应，并用二氯乙烷对反应液进行萃取，有机相经水洗至中性，有机相经减压烘干得黄褐色固体，随后将固体用甲醇/甲苯体系重结晶，得白色固体即式（4）化合物37.74 g，收率：71.57%；MS-APCI：[m+1]/z=399.36；
步骤（d）：制备式（5）化合物，
式（5）：
；式（5）异构体：
。
具体步骤如下：
室温条件下向1 L不锈钢反应釜中加入式（4）化合物(40.0 g ，0.1 mol)、4.0 gPd/C（钯含量：5%）和300.0 g四氢呋喃，50~60℃，10~15 atm下保温反应3 h，反应完毕后，将反应液从反应釜中取出，减压抽滤，得滤饼，并用50.0 g四氢呋喃对滤饼进行淋洗，得无色澄清液，即母液；然后将所得母液减压烘干得灰白色固体即式（5）化合物38.47 g，收率：95.69%，对映体过量百分数ee为94.75% ；MS-APCI：[m+1]/z=401.39；
步骤（e）：制备式（6）化合物，
式（6）：
。具体步骤如下：
室温条件下依次向2 L三口烧瓶中加入式（5）化合物（80.0 g ，0.2 mol）、500 g四氢呋喃、250.0 g自来水和35%浓盐酸(8.34 g，0.08 mol)，油浴升温T内至50~60℃保温反应7h，反应完毕后，自然冷却至室温，并向体系中加入甲苯进行萃取，有机相水洗至中性，有机相减压烘干得白色固体即式（6）化合物69.73 g，收率90.32%。
对步骤（e）中制备的白色固体进行进一步提纯制备高纯度式（6）化合物，即高纯度胆固醇，具体步骤如下：在室温条件下，向上述固体中加入68.84 g甲苯，275.36 g甲醇，升温至60~70℃下使固体完全溶解，后在-10~-20℃下进行重结晶，过滤，滤饼再经少许甲醇淋洗，并减压烘干49.54 g白色固体，收率：64.17 %，HPLC：99.23%。MS-APCI：[M-H2O+1]=369.25，1H NMR（CDCl3, 400MHz）：δ(ppm)：5.354~5.380ppm（dd,1H）,3.554~3.495ppm（m,1H）,2.324~ 2.195ppm ( m, 2H ), 2.028~1.940ppm (m, 2H)，1.873~1.785ppm (m，3H)，1.623~ 0.843ppm ( m, 34H)，0.681ppm（s,3H）。
13C NMR ( CDCl3, 100MHz )，δ(ppm)：148.844, 121.781, 71.859, 56.857,56.240, 50.216 42.342, 39.870, 39.602, 37.740, 36.583, 36.279, 35.871,31.990, 31.743, 28.322 28.100, 24.380, 23.923, 22.905, 22.647, 21.171,19.484, 18.802, 11.941。
此外，对本实施例二制备的胆固醇产品中的细菌内毒素、需氧菌、霉菌、酵母菌含量进行检测，检测结果如表2所示：
表2
| 细菌内毒素 | 0.13 Eu/mg |
| 需氧菌总数 | <10 CFU/g |
| 霉菌、酵母菌总数 | <10 CFU/g |
实施例三：
一种利用去氢表雄酮合成胆固醇的方法，包括以下步骤：
步骤（a）：制备式（2）化合物，
式（2）：
。具体步骤如下：
室温下，于500 mL三口烧瓶中依次加入去氢表雄酮（30.0 g，0.104 mol）、苯磺酰氯（22.04 g，0.125 mol）、醋酸钾（30.62 g，0.312 mol）、四氢呋喃（180.0g）；在25~35 ℃下搅拌反应12 h，反应结束后，减压蒸出吡啶，并将剩余残留物缓慢加入10%碳酸钾水溶液中，过滤，得滤饼，将所得滤饼再经水淋洗至中性，滤饼经减压烘干得式（2）式化合物41.98 g，收率94.17%；MS-APCI：[m+1]/z=429.43；
步骤（b）：制备式（3）化合物，
式（3）：
。
具体步骤如下：
室温下，于2 L三口烧瓶中依次加入式（2）化合物（42.86 g，0.10 mol）、吡啶（23.73 g，0.30 mol）和无水乙醇（257.16 g）；然后升温至60~70 ℃下搅拌反应7 h，反应结束后，减压蒸出无水乙醇，然后将剩余残留物加入水溶液中，并用二氯甲烷萃取，后水洗至中性，有机相经减压烘干得无色油状物即式（3）化合物29.10 g，收率91.72%；MS-APCI：[m+1]/z=317.27；
步骤（c）：制备式（4）化合物，
式（4）：
。
具体步骤如下：
室温下，于2 L三口烧瓶中依次加入金属铁粉（13.96 g，0.25 mol）、TiCl3(30.84g，0.2 mol)和二氧六环（363.09 g），室温搅拌5 min，得混合溶液，然后将该混合溶液加入至由式（3）化合物（31.65 g，0.1 mol）、6-甲基2-庚酮（38.47 g，0.3 mol）和二氧六环（250.0 g）混合得到的混合溶液中，后升温至60~70 ℃，保温反应10 h，冷却至室温后加入0.08 M稀硫酸淬灭反应，并用二氯乙烷对反应液进行萃取，有机相经水洗至中性，有机相经减压烘干得黄褐色固体，随后将固体用甲醇/甲苯体系重结晶，得白色固体即式（4）化合物28.11 g，收率：67.99 %；MS-APCI：[m+1]/z=413.41；
步骤（d）：制备式（5）化合物，
式（5）：
；
式（5）异构体：
。
具体步骤如下：
室温条件下向1 L不锈钢反应釜中加入式（4）化合物(41.34 g ，0.1 mol)、6.15 gRu/C（Ru含量：3%）和800.0 g无水乙醇，55~65℃，7~12 atm下保温反应6 h，反应完毕后，将反应液从反应釜中取出，减压抽滤，得滤饼，并用少许无水乙醇对滤饼进行淋洗，得无色澄清液，即母液；然后将所得母液减压烘干得灰白色固体即式（5）化合物39.08 g，收率：94.23%，对映体过量百分数ee为96.15% ；MS-APCI：[m+1]/z=415.81；
步骤（e）：制备式（6）化合物，
式（6）：
。
具体步骤如下：
室温条件下依次向2 L三口烧瓶中加入式（5）化合物（82.94 g ，0.2 mol）、500 g四氢呋喃、250.0 g自来水和对甲苯磺酸(17.22 g，0.1 mol)，油浴升温T内至50~60℃保温反应12 h，反应完毕后，自然冷却至室温，并向体系中加入甲苯进行萃取，有机相水洗至中性，有机相减压烘干得白色固体即式（6）化合物70.62 g，收率91.32%。
对步骤（e）中制备的白色固体进行进一步提纯制备高纯度式（6）化合物，即高纯度胆固醇，具体步骤如下：在室温条件下，向上述固体中加入77.33 g甲苯，309.32 g甲醇，升温至65~75℃下使固体完全溶解，后在-10~-20℃下进行重结晶，过滤，滤饼再经少许甲醇淋洗，并减压烘干47.78 g白色固体，收率：61.79 %，HPLC：99.47%。MS-APCI：[M-H2O+1]=369.25，1H NMR（CDCl3, 400MHz）：δ(ppm)：5.354~5.380ppm（dd,1H）,3.554~3.495 ppm（m,1H）,2.325~ 2.197ppm ( m, 2H ), 2.029~1.944ppm (m, 2H)，1.872~1.789ppm (m，3H)，1.625~ 0.841ppm ( m, 34H)，0.682ppm（s,3H）。
13C NMR ( CDCl3, 100MHz )，δ(ppm)：148.844, 121.780, 71.857, 56.856,56.239, 50.215, 42.341, 39.875, 39.601, 37.740, 36.582, 36.278, 35.870,31.989, 31.742, 28.321 28.100, 24.381, 23.922, 22.904, 22.646, 21.170,19.483, 18.801, 11.941。
此外，对本实施例三制备的胆固醇产品中的细菌内毒素、需氧菌、霉菌、酵母菌含量进行检测，检测结果如表3所示：
表3
| 细菌内毒素 | 0.11 Eu/mg |
| 需氧菌总数 | <10 CFU/g |
| 霉菌、酵母菌总数 | <10 CFU/g |
Claims (1)
1.一种利用去氢表雄酮合成胆固醇的方法，其特征在于:包括以下步骤：
步骤（a）：制备式（2）化合物，
式（2）：
；具体步骤如下：
室温下，于500 mL三口烧瓶中依次加入30.0 g去氢表雄酮、22.04 g苯磺酰氯、30.62 g醋酸钾、180.0g四氢呋喃；在25~35 ℃下搅拌反应12 h，反应结束后，减压蒸出吡啶，并将剩余残留物缓慢加入10%碳酸钾水溶液中，过滤，得滤饼，将所得滤饼再经水淋洗至中性，滤饼经减压烘干得式（2）式化合物41.98 g，收率94.17%；
步骤（b）：制备式（3）化合物，
式（3）：
，
具体步骤如下：
室温下，于2 L三口烧瓶中依次加入42.86 g式（2）化合物、23.73 g吡啶和257.16 g无水乙醇；然后升温至60~70 ℃下搅拌反应7 h，反应结束后，减压蒸出无水乙醇，然后将剩余残留物加入水溶液中，并用二氯甲烷萃取，后水洗至中性，有机相经减压烘干得无色油状物即式（3）化合物29.10 g，收率91.72%；
步骤（c）：制备式（4）化合物，
式（4）：
，
具体步骤如下：
室温下，于2 L三口烧瓶中依次加入13.96 g金属铁粉、30.84 g TiCl3和363.09 g二氧六环，室温搅拌5 min，得混合溶液，然后将该混合溶液加入至由31.65 g式（3）化合物、38.47 g 6-甲基2-庚酮和250.0 g二氧六环混合得到的混合溶液中，后升温至60~70 ℃，保温反应10 h，冷却至室温后加入 0.08 M稀硫酸淬灭反应，并用二氯乙烷对反应液进行萃取，有机相经水洗至中性，有机相经减压烘干得黄褐色固体，随后将固体用甲醇/甲苯体系重结晶，得白色固体即式（4）化合物28.11 g，收率：67.99 %；
步骤（d）：制备式（5）化合物，
式（5）：
；
式（5）异构体：
，
具体步骤如下：
室温条件下向1 L不锈钢反应釜中加入41.34 g式（4）化合物、6.15 g Ru含量为3%的Ru/C和800.0 g无水乙醇，55~65℃，7~12 atm下保温反应6 h，反应完毕后，将反应液从反应釜中取出，减压抽滤，得滤饼，并用少许无水乙醇对滤饼进行淋洗，得无色澄清液，即母液；然后将所得母液减压烘干得灰白色固体即式（5）化合物39.08 g，收率：94.23%，对映体过量百分数ee为96.15% ；
步骤（e）：制备式（6）化合物，
式（6）：
，具体步骤如下：
室温条件下依次向2 L三口烧瓶中加入82.94 g式（5）化合物、500 g四氢呋喃、250.0 g自来水和17.22 g对甲苯磺酸，油浴升温T内至50~60℃保温反应12 h，反应完毕后，自然冷却至室温，并向体系中加入甲苯进行萃取，有机相水洗至中性，有机相减压烘干得白色固体即式（6）化合物70.62 g，收率91.32%；
对步骤（e）中制备的白色固体进行进一步提纯制备高纯度式（6）化合物，即高纯度胆固醇，具体步骤如下：在室温条件下，向上述固体中加入77.33 g甲苯，309.32 g甲醇，升温至65~75℃下使固体完全溶解，后在-10~-20℃下进行重结晶，过滤，滤饼再经少许甲醇淋洗，并减压烘干47.78 g白色固体，收率：61.79 %，HPLC：99.47%。
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- 2022-07-28 CN CN202210894512.1A patent/CN115057906B/zh active Active
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