CN115044512A

CN115044512A - 一株捕食性原囊菌及其在植物病害生物防治中的应用

Info

Publication number: CN115044512A
Application number: CN202210755118.XA
Authority: CN
Inventors: 崔中利; 李周坤; 张蕾; 叶现丰
Original assignee: Nanjing Agricultural University
Current assignee: Nanjing Agricultural University
Priority date: 2022-06-30
Filing date: 2022-06-30
Publication date: 2022-09-13
Anticipated expiration: 2042-06-30
Also published as: CN115044512B

Abstract

本发明公开了一株捕食性原囊菌及其在植物病害生物防治中的应用。一株拮抗植物病原菌的粘细菌AC19,其保藏号为GDMCC No：62205。本发明所述的原囊菌AC19通过捕食的方式抑制软腐果胶杆菌，青枯雷尔氏菌，黑胫病原菌，解淀粉欧文氏菌，丁香假单胞菌，水稻黄单胞杆菌以及稻瘟病菌，尖孢镰刀菌，禾谷镰刀菌，立枯丝核菌，大丽轮枝菌和大豆疫霉菌等多种植物病原菌的生长，且能够分泌细胞壁裂解酶类分解真菌和疫霉菌细胞壁，显示出粘细菌AC19广谱的抗病原菌能力。盆栽实验显示粘细菌AC19能够有效的抑制黄瓜枯萎病菌和大豆疫霉对黄瓜和大豆的侵染，降低枯萎病和根腐病的发病率，可用于植物病原菌所引起的植物病害的生物防治。

Description

一株捕食性原囊菌及其在植物病害生物防治中的应用

技术领域

本发明属于应用微生物学领域，涉及一株具有捕食植物病原菌能力的原囊菌及其在植物病害生物防治中的应用。

背景技术

植物病害是制约农作物优质高产的重要因素之一，据估计全球主要农作物的平均病害损失约占总产量的近20-40％，每年直接经济损失高达数十亿美元。据统计至2050年全球粮食产量需要增加70％，令人担忧的是自2000年以来，新的真菌类型或者真菌类似病原体(fungal-like plant pathogen)呈现逐年增加的趋势，使得粮食生产安全问题越来越受到关注，已成为最重要的国际问题之一。目前，农业生产过程中因微生物引起的植物病害主要以病原细菌、病原真菌以及卵菌为主。基于绿色农药的化学防控、耕作或种植管理和基于基因编辑建立的作物抗病育种技术在植物病害高效防控方面发挥着重要的作用。同时，利用微生物抑制植物病原菌的生长从而建立的植物病害生物防控技术，因其高效、无污染且环境友好型等特点，符合绿色农业可持续发展的要求，已逐渐成为植物病害防治的重要手段之一。

生防微生物的抗菌方式具有多样性，目前受到关注比较多的生防微生物主要来自于假单胞菌、芽孢杆菌、放线菌、伯克氏菌、溶杆菌、木霉、腐霉属以及蛭弧菌等，所涉及的抗菌作用主要包括分泌抗菌次级代谢物、生态位或者资源竞争、分泌的抗菌蛋白以及捕食作用等。然而，生防微生物进入环境中受到环境因子的多变性、植物与微生物互作过程中的免疫识别以及植物根际调控等多因素的影响，使得生防微生物在开放环境中存在难以定殖、防治效果不稳定等问题。

粘细菌是一类具有复杂的多细胞行为特征的原核生物，也是目前唯一具有发育行为的革兰氏阴性细菌，具有分泌次级代谢物和捕食其他活体微生物的能力，且其捕食行为与机制显著不同于已报道的其他捕食性微生物，如蛭弧菌等。粘细菌所具有的捕食作用、土壤定殖能力、产生丰富的新型次级代谢产物、抗逆性强的粘孢子以及参与土壤有机物代谢等特性，使其在农业生产过程中植物病害控制等方面具有重要的应用潜力，被视为是一类新型的生防微生物。目前，粘细菌被划分为一个独立的门Myxococcota，包括2个纲，4个目，19个属等在内的微生物类群，不同种属的粘细菌的抗菌行为存在多样性，其中作为专利保护的主要是广东省微生物所申请的Myxococcus sp.e-3-1，Polyangium sp.8#-3和Cystobacter sp.XJ9-1在制备捕食和抑制植物病原细菌的药物中的应用(201611095485.2)等；南京农业大学申请的珊瑚球菌Corallococcus sp.EGB、叶柄粘球菌Myxococcus sp.BS在植物病害防控方面的应用(201310028459.8和201711363218.3)；广东省微生物所申请的紫色原囊菌的发酵上清液在抑制白色念珠菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和植物病原真菌生长方面的应用(202110820724.0)等。不同类型的粘细菌通过不同的抗菌机制抑制病原菌生长，其抗菌行为存在多样性。因此，基于现有生防粘细菌的专利保护现状，不同特性且具有良好生防能力的新型粘细菌的筛选及专利保护对于植物病害的生物防治具有重要的意义。

发明内容

本发明提供一株粘细菌Archangium sp.AC19在植物病原菌引起的植物病害生物防治中的应用。

一株拮抗植物病原菌的粘细菌AC19，分类命名为原囊菌(Archangium sp.)，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为中国广州，广东省科学院微生物研究所，保藏日期为2022年1月13日，其保藏号为GDMCC No：62205。

本发明所述的粘细菌菌株AC19的培养物、菌株菌液、菌株发酵培养液或发酵培养液的过滤液。

本发明所述的粘细菌AC19为活性成分的生物菌剂和生物肥料。

本发明所述的粘细菌AC19及其培养物、菌株菌液、菌株发酵培养液或发酵培养液的过滤液在防治植物病原菌中的应用，其中所述的病原细菌包括软腐果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum)，青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)，黑胫病原菌(Dickeya solani)，解淀粉欧文氏菌(Erwinia amylovora)，丁香假单胞菌(Pseudomonassyringae)，水稻黄单胞杆菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae Xoo)等；所述的病原真菌包括稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)，尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum),立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)和大丽轮枝菌(Verticillium dahlia)等；所述的病原卵菌包括大豆疫霉(Phytophthora sojae)等。

所述的应用，优选将所述的粘细菌AC19进行培养，得到菌株培养物、菌株菌液、菌株发酵培养液或发酵培养液的过滤液；用所得到的菌株培养物、菌株菌液、菌株发酵培养液或发酵培养液的过滤液应用于所述的植物病害的生物防治。

本发明中粘细菌Archangium sp.AC19分泌的发酵上清液对真菌和疫霉菌菌丝均显示出良好的裂解作用。

本发明中粘细菌Archangium sp.AC19在盆栽实验中对大豆疫霉所引起的根腐病，对尖孢镰刀菌所引起的枯萎病均显示出良好的生防效果。

有益效果

本发明采用大肠杆菌诱导法成功的从所采集的土样中筛选到一株粘细菌菌株AC19，经16S rDNA和管家基因鉴定为原囊菌(Archangium sp.)，该菌在生长过程中能够以多种植物病原细菌、真菌和疫霉菌为食物，捕食病原菌为自身生长繁殖提供营养物质，表现出粘细菌AC19对植物病原菌的广谱抗菌活性。基于共培养实验以及黄瓜和大豆盆栽实验，表明本发明涉及的粘细菌Archangium sp.AC19在植物病原菌引起的植物病害生物防治方面具有巨大的应用潜力。

附图说明

图1菌株纯化流程图

图2菌株的特性图片

a图为菌株AC19形成的子实体形态图；b图为AC19菌体的扫描电镜图；

图3菌株的鉴定

通过16s rDNA和粘细菌管家基因fusA、gyrB、lepA序列比对对菌株AC19进行鉴定。

图4粘细菌Archangium sp.AC19对多种病原菌具有良好的抗菌能力a菌苔实验测定粘细菌AC19对包括解淀粉欧文氏菌在内的多种病原细菌的捕食作用；b平板共培养实验测定粘细菌AC19对不同植物病原真菌和疫霉菌的抗菌能力

图5粘细菌AC19培养发酵液对尖孢镰刀菌和大豆疫霉菌菌丝的影响。

a发酵上清液对尖孢镰刀菌菌丝形态结构的DIC观察；b发酵上清液对大豆疫霉菌菌丝形态结构的DIC观察

图6盆栽实验中菌株AC19对根腐病和枯萎病的防治效果。

a黄瓜枯萎病盆栽实验；b大豆疫霉病盆栽实验；左侧为植株表型观察，右侧为生效效率统计

生物材料保藏信息

Archangium sp.AC19，分类命名为Archangium sp.，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，广东省科学院微生物研究所，保藏日期为2022年1月13日，保藏号为GDMCC No：62205。

具体实施方式

实施例1.菌株的分离纯化

从新疆等地采集土样样品在室温条件下自然风干，以减少霉菌及杂菌的污染。以WCX培养基作为基础培养基(放线菌酮25mg/ml)，将风干的土样盛与培养好的大肠杆菌菌体混合，30℃恒温培养，3-5天后开始观察子实体的形成。用毛细管挑取所观察到的子实体，接种至VY/4平板上，待菌落扩散及时挑取菌落边缘的菌体，反复转接于含VY/4培养基的平板。将纯化后的细菌接种于LB培养基(tryptone 1％，NaCl 1％，yeast extract 0.5％)中，30℃振荡培养过夜培养液澄清即表明该细菌为纯菌株，命名为AC19(图1)。将纯化的菌种接种到经高温灭菌消毒的食草兔粪上，30℃培养5-8d，当子实体出现的时候，将长有子实体的兔粪放入真空干燥器中保存。同时，刮取平板生长的细菌菌膜，通过终浓度为16％的甘油管进行低温冷冻保藏。

实施例2.菌株的鉴定

获取的细菌AC19在分离过程中所观察到的子实体形态较为特殊，呈粉色的寿桃状(图2a)。将培养好的菌体细胞通过扫描电镜观察其菌体形态，发现AC19菌丝呈长杆状，无鞭毛，且菌体细胞周围粘附着泡状物质，推测为所分泌的外膜囊泡(图2b)。通过对该菌株16SrDNA(SEQ ID NO.1)以及管家基因lepA，gyrB和fusA的PCR扩增获取相关基因序列，基于NCBI(www.ncbi.nlm.nih.govPblastP)数据库序列比及常规的生理生化分析，将该菌株初步鉴定为Archangium sp.(图3)。发明专利(202110820724.0)所述的粘细菌Archangiumviolaceum 3-1能够产生抑制白色念珠菌、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和植物病原真菌生长的次级代谢产物，该产物可通过甲醇浸提。而本发明所述的粘细菌Archangium sp.AC19的发酵上清液是通过酶的作用抑制真菌和卵菌的生长，而甲醇抽取的次级代谢物没有抑菌作用。表明本发明所述的Archangium sp.AC19在抗菌特性方面与发明专利(202110820724.0)所述的粘细菌Archangium violaceum 3-1存在明显差别，说明并非同一种粘细菌。

实施例3.粘细菌(Archangium sp.AC19)对植物病原菌的捕食作用研究

3.1菌株AC19对多种植物病原细菌的捕食作用研究

利用LB液体培养基(蛋白胨1％,NaCl 1％,酵母提取物0.5％)或者NA液体培养基(葡萄糖2％，蛋白胨0.5％，牛肉膏0.3％)对病原细菌包括软腐果胶杆菌(Pectobacteriumcarotovorum)，青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)，黑胫病原菌(Dickeya solani)，解淀粉欧文氏菌(Erwinia amylovora)，丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)，水稻黄单胞杆菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae Xoo)等进行培养，30℃过夜培养，8000rpm离心3min，收集菌体，用无菌水重悬使其OD₆₀₀为10。将其悬滴至TPM(10mM Tris-HCl,1mMKH2PO4,8mM MgSO₄，1.5％琼脂，pH 7.6)固体平板上吹干待用。将菌株AC19(GDMCC No：62205)接种到LBS液体培养基(可溶性淀粉0.7％，酵母提取物0.5％，胰蛋白胨0.1％，MgSO₄0.1％，pH 7.2)中，30℃培养2天，8000rpm离心3min，收集菌体，用TPM缓冲液TPM(10mMTris-HCl[pH7.6],1mM KH2PO4[pH 7.6],8mM MgSO₄)洗涤菌体3次后重悬菌体，菌体浓度为10⁸cells/L，悬滴于吹干的病原细菌菌苔上，30℃培养3天观察粘细菌扩展情况，以不接粘细菌为阴对照。结果发现随着培养时间的延长，粘细菌AC19能够以接种点沿着病原菌菌苔向四周扩散，说明粘细菌具有良好的捕食特性(图4a)。结果表明粘细菌AC19对多种植物病原细菌均显示出良好的捕食能力，显示其良好的广谱抗病原细菌能力。

3.2菌株AC19对多种植物病原真菌的捕食作用研究

利用PDA培养基(200g土豆煮沸30min，过滤收集上清，加20g葡糖糖，1g酵母提取物，定容至1L，琼脂为15g)对选取的植物病原真菌进行培养，包括稻瘟病菌(Magnaportheoryzae)，尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum),立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)和大丽轮枝菌(Verticillium dahlia)等；随后将活化的真菌转接至VY/4培养基(干酵母0.25％，CaCl₂ 0.1％，pH至7.2)上，待真菌菌落直径长出1-2cm左右时，将培养好的粘细菌AC19接种到真菌菌落的周围，28℃条件下培养3-4天，观察菌落的坍塌情况。共培养结果显示，粘细菌对所选取的植物病原真菌具有良好的捕食作用，粘细菌菌膜扩展到真菌菌落里面，大部分菌丝坍塌，真菌生长明显受限(图4b)。结果表明粘细菌AC19对多种植物病原真菌均显示出良好的捕食能力，显示其良好的广谱抗病原真菌能力。

3.3菌株AC19对植物病原卵菌的捕食作用研究

利用V8培养基(10％V8培养基：V8汁上清液与去离子水1:9，CaCO₃ 1％)对大豆疫霉(Phytophthora sojae)进行活化培养，随后将活化的疫霉菌转接至VY/4培养基(干酵母0.25％，CaCl₂ 0.1％，pH至7.2)上，待菌落直径长出1-2cm左右时，将培养好的粘细菌AC19接种到菌落的周围，28℃条件下培养3天，观察菌落的坍塌情况。共培养结果显示，粘细菌菌膜扩展到大豆疫霉菌落里面，接触部分菌丝坍塌，疫霉菌生长明显受限(图4b)。结果表明粘细菌AC19对疫霉菌也显示出良好的捕食能力。

3.4菌株AC19发酵上清液对植物病原菌的抗菌作用研究

参照发明专利(202110820724.0)中的制备方法，在MD1液体培养基(酪蛋白胨0.6％，可溶性淀粉0.2％，MgSO₄0.2％，CaCl₂0.04％，pH7.2)接种粘细菌AC19，并加入2％大孔树脂XAD-16，30℃，于140rpm培养7天。用纱布过滤收集树脂，加入2倍体积甲醇抽取，后旋蒸获取粗浸提物。通过接种尖孢镰刀菌进行抗菌活性验证。利用PDA进行尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)的培养，待菌落张至2cm左右时，将制备的粗浸提物稀释不同的浓度点接至菌落边缘1cm处。结果发现，制备的粗浸提物在50mg/ml的浓度下对真菌生长无抑制作用，相比较发明专利(202110820724.0)中涉及的Archangium violaceum 3-1存在明显差别，即在Archangium violaceum 3-1中次级代谢物具有良好的抑菌作用，而本专利涉及的Archangium sp.AC19的抗菌效果主要通过粘细菌的捕食作用实现的。

利用VY/4液体培养基对粘细菌AC19进行发酵培养，30℃，180rpm培养3天至培养基澄清。4℃，8000rpm离心10min收集发酵上清。将获得的发酵上清用10kDa截留分子量的超滤管进行处理，分别收集超滤上液和下液。将培养基好的尖孢镰刀菌和大豆疫霉菌菌丝用无菌水洗涤3次，加入含有1ml超滤上液(>10kDa)和超滤下液(<10kDa)的反应体系中，30℃水浴孵育4h，通过显微镜DIC观察菌丝形态的变化，并以无菌水处理和100℃热处理的超滤上液作为对照。结果表明粘细菌AC19发酵上清的超滤上液能够明显裂解菌丝，破坏其完整性，而超滤下液和100℃热处理的超滤上液均对菌丝的形态无任何影响(图5)，说明粘细菌AC19通过分泌一些裂解酶类破坏菌丝的完整性，而小分子的代谢物对菌丝的完整性无影响。

实施例4.粘细菌(Archangium sp.AC19)抗植物病原菌的应用评估

为了研究本发明所涉及的粘细菌AC19在实际应用过程对植物病原菌的生防作用，本发明选取黄瓜枯萎病菌(FOC)和大豆疫霉菌作为模式病原菌材料，通过黄瓜和大豆盆栽试验验证粘细菌AC19在土壤环境下对病害的防控能力。

4.1黄瓜盆栽实验

采集正常的土壤，均匀接种10⁵spores/g土的尖孢镰刀菌FOC孢子悬液。将菌株AC19摇瓶发酵3天，通过灌根的方式接种到黄瓜根部，分别设置正常土壤组，正常土壤+FOC组，正常土壤+FOC+AC19组，正常土壤+AC19组。温室光照培养，温度为33-37℃，湿度为65％-80％。定时观察黄瓜的发病症状，并统计发病率。结果表明加AC19发酵菌悬液的处理组，植株长势很好，不发病，而FOC处理组发病严重，部分植株死亡(图6a)。说明在土壤环境中，粘细菌AC19能够抑制FOC对黄瓜的侵染，降低枯萎病的发病率，显示出菌株AC19良好的生防潜力。

4.2大豆盆栽实验

将大豆种子浸泡过夜，通过滤纸培养至萌芽后，种于花卉盆中。移栽培养5天后，采用下胚轴接种法，接种大豆疫霉菌琼脂块。分别设置正常土壤组，正常土壤+疫霉处理组，正常土壤+AC19+疫霉处理组，正常土壤+AC19组。温室光照培养，25-28℃，定时观察大豆植株的发病症状，并统计发病率。结果表明加AC19发酵菌悬液的处理组，植株长势很好，不发病，而疫霉菌处理组发病严重，部分植株颈部发病严重，植株出现倒伏(图6b)。说明粘细菌AC19能够抑制疫霉菌对大豆的侵染，降低大豆疫病的发病率，显示出菌株AC19良好的生防潜力。

序列表

<110> 南京农业大学

<120> 一株捕食性原囊菌及其在植物病害生物防治中的应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1497

<212> DNA

<213> Archangium sp. AC19

<400> 1

ggttaccttg ttacgacttc accccagtta ccgaccactc cttgggcacc tcttggtgag 60

atgacttctg gagcaatcga ctcccatggt gtgacgggcg gtgtgtacaa ggcccgggaa 120

cgtattcacc gcggcgtgct gatccgcgat tactagcgat tccgccttca tggagtcgag 180

ttgcagactc caatctgaac tgagaccggt tttatgcgat tagctccctc tcgcgagttg 240

gcgacgcgtt gtaccggcca ttgtagcacg tgtgtagccc tggtcataaa ggccatgagg 300

acttgacgtc atccccacct tcctccggtt taacaccggc agtccctcta gagatccgct 360

tgcgcggcaa ctaaaggcga gggttgcgct cgttgcggga cttaacccaa catctcacga 420

cacgagctga cgacagccat gcagcacctg tctctcggtt cccttgcggg caccccctca 480

tctctgagag gttccgagga tgtcaagacc aggtaaggtt ctgcgcgttg cgtcgaatta 540

aaccacatgc tccaccgctt gtgcgggccc ccgtcaattc ctttgagttt tagtcttgcg 600

accgtacttc ccaggcggag aacttaatgc gttagctacg gcaccgcggg ggtcaacacc 660

cacgacacct agttctcatc gtttacggcg tggactacca gggtatctaa tcctgtttgc 720

tccccacgct ttcgcgtctc agcgtcagtt accgtccagg tggccgcctt cgccaccggt 780

gttcctcccc atatctacga atttcacctc tacttgggga attccgccac cctctccggc 840

actcaagctc tgcagtttcg ggcgcacttc ctcagttgag ctgagggctt tcacacccga 900

cttgcaaagc cgcctacacg cgctttacgc ccaataattc cgaacaacgc ttgcaccctc 960

tgtattaccg cggctgctgg cacagagtta gccggtgctt cttctcccgg taccgtcaag 1020

ccccagcgtg ttaggctagg ggttttcgtc ccggtcgaaa gtgctttaca atccgaagac 1080

cttcatcaca cacgcggcgt tgctgcgtca ggctttcgcc cattgcgcaa aattccccac 1140

tgctgcctcc cgtaggagtc tggaccgtgt ctcagttcca gtgtggctga tcgtcctctc 1200

agaccagcta cccgtcgtcg ccttggtggg ccattacccc gccaactagc tgatgggccg 1260

cggactcatc tggatgtgat agcttgtata cagaggccac cttttccctc aggagccgaa 1320

gctcccgggg gcttatccgg tattagccaa tctttcgact ggttatccca gacacccagg 1380

cagattatcc acgtgttacg cacccgtgcg ccgctctact aggattgctc cattcgcgct 1440

cgacttgcat gtgttaggca cgccgccagc gttcgttctg agccaggatc aaactct 1497

Claims

1.一株拮抗植物病原菌的Archangium sp.AC19，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏日期为2022年1月13日，其微生物保藏号为GDMCC No：62205。

2.权利要求1所述的Archangium sp.AC19的培养物、菌株菌液、菌株发酵培养液或发酵培养液的过滤液。

3.权利要求1所述的Archangium sp.AC19为活性成分的生物菌剂或生物肥料。

4.权利要求1所述的Archangium sp.AC19在防治植物病原细菌、植物病原真菌和/或植物病原卵菌中的应用，其中所述的植物病原细菌包括但不限于软腐果胶杆菌(Pectobacteriumcarotovorum)，青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)，黑胫病原菌(Dickeya solani)，解淀粉欧文氏菌(Erwinia amylovora)，丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)，水稻黄单胞杆菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae Xoo)等；所述的植物病原真菌包括稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)，尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),禾谷镰刀菌(Fusariumgraminearum),立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)和大丽轮枝菌(Verticillium dahlia)中的任意一种；所述的植物病原卵菌选自大豆疫霉(Phytophthora sojae)。

5.权利要求2所述的Archangium sp.AC19的培养物、菌株菌液、菌株发酵培养液或发酵培养液的过滤液在防治植物病原细菌、植物病原真菌和植物病原卵菌中的的应用，其中，所述的病原细菌包括但不限于软腐果胶杆菌(Pectobacterium carotovorum)，青枯雷尔氏菌(Ralstonia solanacearum)，黑胫病原菌(Dickeya solani)，解淀粉欧文氏菌(Erwiniaamylovora)，丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)，水稻黄单胞杆菌(Xanthomonasoryzae pv.oryzae Xoo)等；所述的病原真菌包括稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)，尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum),禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum),立枯丝核菌(Rhizoctonia solani)和大丽轮枝菌(Verticillium dahlia)中的任意一种；所述的病原卵菌包括但不限于大豆疫霉(Phytophthora sojae)。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征是，包括将权利要求1所述的Archangiumsp.AC19进行培养，得到菌株培养物、菌株菌液、菌株发酵培养液或发酵培养液的过滤液；用所得到的菌株培养物、菌株菌液、菌株发酵培养液或发酵培养液的过滤液提取病原菌细胞壁裂解蛋白，应用于所述的植物菌害的生物防治。