CN102363753B - 白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株及其培养物和用途 - Google Patents

白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株及其培养物和用途 Download PDF

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本发明属于生物技术农业生产领域，尤其涉及白蚁链霉菌（Streptomycestermitum）ACT-2菌株及其培养物和用途。白蚁链霉菌（Streptomycestermitum）ACT-2菌株，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学生命科学学院，其保藏编号为：CCTCCNO:M2011008，保藏日期是2011年1月7日。从水稻田土壤中分离筛选得到具有拮抗白叶枯病菌作用的白蚁链霉菌（Streptomycestermitum）ACT-2菌株及其发酵产物可以作为生物农药，用于水稻白叶枯病菌等的防治。

Description

白蚁链霉菌(Streptomyces termitum)ACT-2菌株及其培养物和用途
技术领域
本发明属于生物技术农业生产领域，尤其涉及白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株及其培养物和用途。
背景技术
放线菌广泛存在于土壤、空气和水中，绝大部分放线菌具有产抗生素的能力。链霉菌所产生抗生素的占据了放线菌类产生抗生素类数量的80%。链霉菌在抗生素的工业生产中发挥着非常重要的作用。
某些链霉菌所产生的抗生素类物质可以对有些植物病原菌有特异性的拮抗作用，可抑制病原微生物的生长和繁殖。对由该种病原菌引起的植物病害有一定程度的防治效果。
水稻白叶枯病是由水稻黄单胞杆菌（X. oryzae）引起的，对水稻生产具有严重的危害性。筛选对某种水稻白叶枯病菌具有一定拮抗作用的链霉菌，并使用到植物病害的防治中，具有较好的应用前景。
目前，已见报道的对白叶枯病菌具有拮抗作用的微生物主要是细菌类，如枯草芽孢杆菌和肠杆菌等，而且抑菌效价较低，难以满足农业生产的生物防治要求，而具有拮抗白叶枯病菌活性的放线菌类鲜见报道。
发明内容
为了拮抗水稻白叶枯病，本发明的第一个目的是提供白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株；本发明的第二个目的是提供上述的白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株的培养物；本发明的第三个目的是提供一种上述的培养物的制备方法；本发明的第四个目的是提供一种上述的培养物的用途；本发明的第五个目的是提供一种具有对白叶枯病菌具有高拮抗活性的生物农药。
为了实现上述第一个目的，本发明采用了以下的技术方案：
白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学生命科学学院，其保藏编号为：CCTCC NO: M 2011008，保藏日期是2011年1月7日。
为了实现上述第二个目的，本发明采用了以下的技术方案：
一种对白叶枯病菌具有高拮抗活性的发酵液，该发酵液由上述的白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株发酵得到。
为了实现上述第三个目的，本发明采用了以下的技术方案：
一种发酵液的制备方法，其特征在于该方法包括以下的步骤： 
（一）上述的白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株经高氏1号固体培养基活化后，用无菌水配成1×106 个/ml的孢子悬浮液；
（二）取1 ml接入高氏1号培养液，28 ℃活化培养24 h；
（三）250 ml三角瓶中装入50 ml高氏1号培养液，取培养24 h的种子培养液，按0.2%的接种量接种，28 ℃，180 r/min，摇瓶培养48 h，得到对水稻白叶枯病菌具有高拮抗活性的发酵液。
为了实现上述第四个目的，本发明采用了以下的技术方案：
上述的白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株或者该菌株的发酵液用于制备拮抗水稻白叶枯病菌的药物中的应用。
为了实现上述第五个目的，本发明采用了以下的技术方案：
一种对白叶枯病菌具有高拮抗活性的生物农药，该生物农药至少包括上述的白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株和该菌株的发酵液中的一种。
本发明由于采用了上述的技术方案，Streptomyces termitum）ACT-2菌株及其发酵产物可以作为生物农药，用于水稻白叶枯病菌等的防治。
附图说明
图1为蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株的培养特征和形态特征；上左：菌落正面；上右：抑菌圈；下左：基内菌丝和气生菌丝；下右：气生菌丝和孢子丝。
生物材料保藏说明
白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心（CCTCC），地址：湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学生命科学学院，其保藏编号为：CCTCC NO: M 2011008，保藏日期是2011年1月7日。
具体实施方式
实施例1
从水稻田土壤中分离筛选得到一株拮抗水稻白叶枯病菌白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株。
（一）培养基
高氏1号液体培养基：可溶性淀粉20 g，KNO3 1 g，K2HPO4 0.5 g，MgSO4 0.5 g，NaCl 0.5 g，FeSO4 0.01 g，蒸馏水1000 ml，pH值7.2-7.5。
牛肉膏蛋白胨固体培养基：牛肉膏3 g，蛋白胨10 g，NaCl 5 g，琼脂20 g，水1000 ml，pH值7.0-7.2。
（二）方法
采用梯度稀释分离法。取1 g土壤，加入9 ml蒸馏水，进行梯度稀释（10-1-10-4），选择合适的浓度（10-2）100 μl涂布高氏1号培养基平板，28 ℃培养24 h，出现圆形白色干燥菌落，可初步确定该菌株为放线菌。挑取单菌落，进一步分离、纯化后，对所分离纯化的菌株进行拮抗白叶枯病菌的能力测定。选取对白叶枯病菌具有拮抗能力的放线菌菌株编号，置4 ℃冰箱中保存，备用。用高氏1号斜面培养基进行菌种活化传代，菌株每4 w转接一次；菌种使用之前需先活化。对选出的菌株进行形态学、生理生化和16S rDNA序列鉴定。
该白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）菌落表面干燥、粗糙，边缘整齐，为白色不透明；气生菌丝色泽较深，直、柔曲，分枝较多，无横隔，粗壮，不断裂，菌丝直径约为2.5 μm。基内菌丝较气生菌丝色泽浅，呈网状交织，菌丝短，分枝多，无横隔，易断裂，菌丝直径约为2.0 μm。孢子丝多呈直线，存在分叉，极少部分呈弯曲状。孢子呈椭圆形、长圆形，表面光洁（图1）。
16S rDNA测序结果表明，与白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）菌株的同源性达99%，该菌株的16S rDNA序列在GeneBank的登录号为HQ680451。
在高氏1号培养基上，28 ℃培养10 d条件下，经15代连续传代培养，其培养特征、形态特征和对白叶枯病菌的拮抗能力基本稳定。
实施例2
对水稻白叶枯病菌具有拮抗作用的白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株发酵液的制备方法。
（一）菌株：ACT-2菌株。
（二）方法
菌种经高氏1号固体培养基活化后，用无菌水配成1×106 个/ml的孢子悬浮液，取1 ml接入高氏1号培养液，28 ℃活化培养24 h；250 ml三角瓶中装入50 ml高氏1号培养液，按2%接种量，28 ℃，150 r/min，摇瓶培养48 h，获取对白叶枯病菌具有拮抗活性的发酵液，以牛津杯法测定抑菌效果，抑菌圈直径为21.73 mm。
经发酵条件初步优化，当250 ml三角瓶中装入50 ml高氏1号培养液，取培养24 h的种子培养液，按0.2%的接种量接种，28 ℃，180 r/min，摇瓶培养48 h，可以得到对水稻白叶枯病菌具有高拮抗活性的发酵液，以牛津杯法测定抑菌效价，获得最大抑菌圈直径为26.20 mm。
将白叶枯病菌均匀涂布到牛肉膏蛋白胨固体培养基上，将在高氏1号固体培养基上活化后的ACT-2菌株，通过打孔法取直径为5 mm的小块菌饼，移接到牛肉膏蛋白胨固体培养基上。28 ℃培养72 h。经检测，获得最大抑菌圈直径为38.00 mm。 

Claims (5)

1.白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株，其特征在于：该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，其保藏编号为：CCTCC NO: M 2011008，保藏日期是2011年1月7日。
2.一种对白叶枯病菌具有高拮抗活性的发酵液，其特征在于：该发酵液由权利要求1所述的白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株发酵得到，所述的发酵液的制备包括以下的步骤：
1）权利要求1所述的白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株经高氏1号固体培养基活化后，用无菌水配成1×106 个/ml的孢子悬浮液；
2）取1 ml接入高氏1号培养液，28 ℃活化培养24 h；
3）250 ml三角瓶中装入50 ml高氏1号培养液，取培养24 h的种子培养液，按0.2%的接种量接种，28 ℃，180 r/min，摇瓶培养48 h，得到对水稻白叶枯病菌具有高拮抗活性的发酵液。
3.一种对白叶枯病菌具有高拮抗活性的发酵液的制备方法，其特征在于该方法包括以下的步骤： 
1）权利要求1所述的白蚁链霉菌（Streptomyces termitum）ACT-2菌株经高氏1号固体培养基活化后，用无菌水配成1×106 个/ml的孢子悬浮液；
2）取1 ml接入高氏1号培养液，28 ℃活化培养24 h；
3）250 ml三角瓶中装入50 ml高氏1号培养液，取培养24 h的种子培养液，按0.2%的接种量接种，28 ℃，180 r/min，摇瓶培养48 h，得到对水稻白叶枯病菌具有高拮抗活性的发酵液。
4.根据权利要求2所述的发酵液用于制备拮抗水稻白叶枯病菌的药物中的应用。
5.一种具有对白叶枯病菌具有高拮抗活性的生物农药，其特征在于：该生物农药至少包括权利要求2所述的发酵液。
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