CN111172081B - 一株水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌及其生物制剂与应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开一株水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌及其生物制剂与应用，属于生物农药领域。该菌株名称为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefacien)BaYBZ，于2019年09月09日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：60770。该菌株来源于水稻叶片，能很好地在水稻叶片中定殖；对稻瘟病菌具有强烈的抑制作用，具有优异的防治稻瘟病的生防作用，且该生物来源环保无毒性，将其喷施到稻叶表面用于病害的防治，对生态环境影响小，对稻谷的食用及其加工产品来说更加安全可靠；培养条件要求低，具有很好的开发应用前景。

Description

一株水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌及其生物制剂与应用

技术领域

本发明属于生物农药领域，特别涉及一株水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌及其生物制剂与应用。

背景技术

水稻(Oryza sativa L.)为我国重要粮食作物，全国有近四分之一的耕地种植水稻，稻谷约占全国粮食总产量的二分之一。水稻上重要的病害有稻瘟病、纹枯病、白叶枯病、细菌性条斑病以及矮缩病等，流行性强，发生面积大，对产量为害及其严重。其中，由灰梨孢菌(Pyriculariagrisea(Cooke)Sacc.)引起的稻瘟病是水稻生产中最主要的病害之一，稻瘟病菌易发生变异，传播力强，一般使稻田减产可达两成，严重时可达一半以上。目前，生产上对该病的控制主要以抗病育种和化学药剂防治为主。然而，长期使用单一化学药剂容易产生抗药性，使用复合型药剂容易出现农药残留而导致环境污染与食品安全等问题，选育抗病品种虽然不会出现化学防治带来的弊端，但选育时间长且易出现因稻瘟病菌生理小种改变而丧失抗病能力等问题。因此，找寻一种既快速有效又安全的稻瘟病防治方法尤为重要。

芽孢杆菌属(Bacillus)是一种嗜温好氧的革兰氏阳性杆状细菌，在自然界广泛分布，它产生的芽孢耐热耐旱，对不良环境有很高抗性，且不同类群可通过不同方式抑制多种植物病害。在国内外，许多芽孢杆菌类群已投入生产实践当中。Chumthong等报道了用巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)对水稻各时期进行处理能有效防治穗颈瘟，并具有促进植株生长的作用。刘诗胤报道了几种枯草芽孢杆菌对稻瘟病菌菌丝生长抑制率达到80％。Suryadi等报道了坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)E65发酵液对水稻叶瘟有较明显的防治作用。Chaiharn等报道了坚强芽孢杆菌(Bacillus firmus)能产生一种特殊细胞与稻瘟病菌竞争营养物质，从而达到抑制效果。Hyakumachi等报道了芽孢杆菌(Bacillus)与病原菌在侵入位点上的相互竞争关系。Zhang CX等报道了枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)KB-1122分泌的β-1,3-葡聚糖酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶与抑制稻瘟病菌调控有关。Shan HY等报道了芽孢杆菌(Bacillus)BC79分泌的啉氨甲基醋酸能明显抑制稻瘟病菌分生孢子萌发及其菌丝生长。Kyung-Seok等报道了萎缩芽胞杆菌(Bacillus vallismortis)通过诱导水稻PR基因的表达诱导植物的系统抗性。

芽孢杆菌(Bacillus)还对多种植物病原真菌有抑制效果。例如，田涛等报道了贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)在黄瓜白粉病方面的应用。田雪亮等报道了从解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)中提取的一种抑菌物质对稻瘟病菌有较高的抑菌活性。刘文德等报道了一种解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)在玉米大斑病上的应用。黄现清等报道从枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)中分离的一种脂肽对细菌和真菌有广谱抑制效果。

其中，解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)抗菌性广谱，其许多代谢产物如，抗生素、蛋白或多肽等物质能起较好的生物防治效果，部分类群还能诱导植物抗病性。因此，解淀粉芽孢杆菌作为一种自然界常见细菌，在对稻瘟病的生防研究上具有多种抑制机制的潜力，已在世界范围内引起广泛关注。

发明内容

为了克服现有技术的缺点与不足，本发明的首要目的在于提供一株水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌。本发明以水稻叶片内生微生物为筛选对象，分离得到的对多个稻瘟病菌菌株(多个生理小种)有显著抑制作用的解淀粉芽孢杆菌，命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefacien)BaYBZ，为稻瘟病的生物防治做出补充；另外，本发明从水稻叶片内筛选到的拮抗菌，将其用于水稻病害的防治，仅仅表现为特定种群间某种微生物数量的增长或消减，并未改变水稻内微生物种群的类别从而保持了种群的稳定性，另外由于其从水稻叶片内提取，故分布非常普遍，与水稻长期共存，将其喷施到水稻表面用于病害的防治，对稻谷的食用及其加工产品来说更加安全可靠。

本发明另一目的在于提供一种基于上述解淀粉芽孢杆菌制备得到的生物制剂。

本发明再一目的在于提供上述解淀粉芽孢杆菌或生物制剂在防治稻瘟病中的应用。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一株水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌，将其命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillusamyloliquefacien)BaYBZ，是从水稻叶片内分离纯化得到的。

所述的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefacien)BaYBZ的保藏信息：保藏单位：广东省微生物菌种保藏中心，简称GDMCC，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所，保藏编号为GDMCC No：60770，保藏时间为2019年09月09日。

所述的水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌在LB培养基上28～30℃培养24h，菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，边缘不规则，常形成皱醭。

一种生物制剂，基于上述水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌制备得到。

所述的生物制剂由该解淀粉芽孢杆菌经液体发酵制备得到，优选包含以下步骤：将该解淀粉芽孢杆菌接种至LB液体培养基中培养，即可获得生物制剂。

所述LB液体培养基的pH值为7.0。

所述的培养指在28～30℃，摇床震荡速率为180～200rpm下培养24h。

上述生物制剂在防治稻瘟病中的应用。

上述解淀粉芽孢杆菌在防治稻瘟病中的应用。

优选的，稻瘟病菌菌株包括但不限于稻瘟病菌Guy11、稻瘟病菌B157、稻瘟病菌Y2、稻瘟病菌Y♀、稻瘟病菌Y7、稻瘟病菌98-06、稻瘟病菌Y34、稻瘟病菌70-15。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：

(1)本发明得到的解淀粉芽孢杆菌来源于水稻叶片，能很好地在水稻叶片内部(或表面)定殖；另外本发明从水稻叶片内筛选到的拮抗内生菌，将其用于稻瘟病的防治，仅仅表现为特定种群间某种微生物数量的增长或消减，并未改变水稻叶片上微生物种群的类别从而影响种群的稳定性，另外由于其与水稻长期共存，互惠共生，形成了一系列与其相似的生存机制，将其喷施到稻叶表面用于病害的防治，对稻谷的食用及其加工产品来说更加安全可靠。

(2)本发明的解淀粉芽孢杆菌对多个稻瘟病菌菌株(不同生理小种)具有强烈的抑制作用，具有优异的防治稻瘟病的生防作用，而且该生物来源环保无毒性，对生态环境影响小；

(3)本发明得到的解淀粉芽孢杆菌，培养条件要求低，具有很好的开发应用前景。

附图说明

图1为解淀粉芽孢杆菌BaYBZ在LB培养基上的单菌落图。

图2为解淀粉芽孢杆菌BaYBZ不同处理对稻瘟病菌Guy11的抑制作用效果图以及对照组图，其中A为BaYBZ菌体+稻瘟病菌Guy11，B为BaYBZ菌液+稻瘟病菌Guy11，C为BaYBZ发酵滤液+稻瘟病菌Guy11，D为LB液体培养基+稻瘟病菌Guy11，E为稻瘟病菌Guy11正常生长菌落形态。

图3为解淀粉芽孢杆菌BaYBZ不同处理对稻瘟病菌B157的抑制作用效果图以及对照组图，其中A为BaYBZ菌体+稻瘟病菌B157，B为BaYBZ菌液+稻瘟病菌B157，C为BaYBZ发酵滤液+稻瘟病菌B157，D为LB液体培养基+稻瘟病菌B157，E为稻瘟病菌B157正常生长菌落形态。

图4为解淀粉芽孢杆菌BaYBZ对稻瘟病菌Guy11菌丝影响的结果图，其中，A为稻瘟病菌Guy11正常菌丝，B为稻瘟病菌Guy11畸形菌丝。

图5为解淀粉芽孢杆菌BaYBZ对稻瘟病菌B157菌丝影响的结果图，其中，A为稻瘟病菌B157正常菌丝，B为稻瘟病菌B157畸形菌丝。

图6为解淀粉芽孢杆菌BaYBZ对多个稻瘟病菌菌株(不同生理小种，菌株编号分别为：Y2、Y♀、Y7、98-06、Y34、70-15)菌落生长影响的结果图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

下列实施例中未注明具体实验条件的试验方法，通常按照常规实验条件或按照制造厂所建议的实验条件。所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为从商业途径得到的试剂和材料。

实施例中用到的稻瘟病菌Guy11在文献“Zhang X,et al.,Magnaporthe oryzaedefeats rice defense by inducing miR319b and suppressing Jasmonic acidsignaling[J].Plant Physiology,2018:pp.01665.2017.”中公开，且可由华南农业大学农学院邓懿祯教授惠赠；

稻瘟病菌B157在文献“Patel J K,et al.,Antibiotic producing endophytic,Streptomyces,spp.colonize above-ground plant parts and promote shoot growthin multiple healthy and pathogen-challenged cereal crops[J].MicrobiologicalResearch,2018:S0944501317312752-.”中公开，且可由华南农业大学农学院邓懿祯教授惠赠；

稻瘟病菌Y2、稻瘟病菌Y♀、稻瘟病菌Y7均可由南京农业大学植物保护学院张正光教授惠赠；也可从广东省农业科学院水稻研究所获得；

稻瘟病菌98-06在文献“Dong Y,et al.,Global Genome and TranscriptomeAnalyses of Magnaporthe oryzae Epidemic Isolate 98-06Uncover Novel Effectorsand Pathogenicity-Related Genes,Revealing Gene Gain and Lose Dynamics inGenome Evolution[J].PLOS Pathogens,2015,11(4):e1004801.”中公开，且可由南京农业大学植物保护学院张正光教授惠赠；

稻瘟病菌Y34在文献“Xue M,et al.,Comparative Analysis of the Genomes ofTwo Field Isolates of the Rice Blast Fungus Magnaporthe oryzae[J].PLoSGenetics,2012,8(8):e1002869.”中公开，且可由南京农业大学植物保护学院张正光教授惠赠；

稻瘟病菌70-15在文献“Chen M,et al.,Purification and Characterizationof a Novel Hypersensitive Response-Inducing Elicitor from Magnaporthe oryzaethat Triggers Defense Response in Rice[J].PLOS ONE,2012,7.”中公开，且可由南京农业大学植物保护学院张正光教授惠赠；

且以上稻瘟病菌均可从广东省农业科学院水稻研究所获得。

实施例1：水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌的分离、纯化和保藏

(1)LB培养基的配置：称取胰蛋白胨(Tryptone，Oxoid LTD LP0042，England)10g，酵母提取物(Yeast extract，Oxoid LTD LP0021，England)5g，氯化钠(NaCl，国药集团化学试剂有限公司，10019318)10g，加水1000mL搅拌均匀，制备固体培养基时再加15g琼脂，充分加热溶解后分装，121℃灭菌20min后贮存备用。

(2)水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌的分离、纯化：

用于内生微生物分离的水稻叶片采自广东省农业科学院白云试验基地。

内生细菌的分离方法主要参照何红等(何红,蔡学清,关雄,胡方平.辣椒内生枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)防治辣椒炭疽病研究.植物病理学报,2003,33(2):170-173.)的方法并稍作修改，具体操作如下：将健康的水稻叶片用自来水冲洗干净，晾干水分后称取叶片10g，用体积百分数为70％的酒精浸泡2～3min，再用5％次氯酸钠表面消毒2～10min，最后用无菌水冲洗4次，在无菌滤纸上吸干水分后将样品转入无菌研钵中，加入10mL无菌水碾碎后，静止放置15min，各取100μL涂LB平板，每个处理3个重复，30℃培养48～72h后，观察结果。

采取漂洗液检验法(Schulz et al.,1993.)进行检验组织表面的消毒效果，取0.2mL的最后一次漂洗消毒材料的漂洗液涂布于LB固体平板上进行培养，观察培养有无菌落长出，若无菌落出现，证明材料表面灭菌彻底，否则分离结果不能使用。

分离自广东省农业科学院白云试验基地的水稻叶片的菌株的16S rRNA序列(如SEQ ID NO：1所示)，与GenBank中登陆号为MK271286.1的Bacillus amyloliquefaciensZ71-2菌株16S rRNA序列的同源性达99.17％，证实其分类命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)，命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefacien)BaYBZ。序列片段如下：

GCCGTGGCGGGGTGCTATACATGCAAGTCGAGCGGACAGATGGGAGCTTGCTCCCTGATGTTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCTGTAAGACTGGGATAACTCCGGGAAACCGGGGCTAATACCGGATGGTTGTTTGAACCGCATGGTTCAGACATAAAAGGTGGCTTCGGCTACCACTTACAGATGGACCCGCGGCGCATTAGCTAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGATCGGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCGCAATGGACGAAAGTCTGACGGAGCAACGCCGCGTGAGTGATGAAGGTTTTCGGATCGTAAAGCTCTGTTGTTAGGGAAGAACAAGTGCCGTTCAAATAGGGCGGCACCTTGACGGTACCTAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTGTCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGCAGGCGGTTTCTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCCCGGCTCAACCGGGGAGGGTCATTGGAAACTGGGGAACTTGAGTGCAGAAGAGGAGAGTGGAATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACTCTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAAGTGTTAGGGGGTTTCCGCCCCTTAGTGCTGCAGCTAACGCATTAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGGTCGCAAGACTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTTCGAAGCAACGCGAGACCTTACCAGGTCTTGACATCCTCTGACAATCCTAGAGATAGGACGTCCCCTTCGGGGGCAGAGTGACAGTGGTGCATGTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGGAGCCAATCCTGTCACTTCGGCGGCTGGCTCCATAAAGGTTACCTCACCGACTTCGGGTGTTACAAACTCTCGTGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAGCTTCACGCAGTCGAGTTGCAGACTGCGATCCGAACTGAGAACAGATTTGTGGGATTGGCTTAACCTCGCGGTTTCGCTGCCCTTTGTTCTGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCACCTTAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTAAGATCAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCACTCTGCCCCCGAAGGGGACGTCCTATCTCTAGGATTGTCAGAGGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTTGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAGTCTTGCGACCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTAAGGGGCGGAAACCCCCTAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGTCGCCTTCGCCACTGGTGTTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACCGCTACACGTGGAATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGTTCCCCAGTTTCCAATGACCCTCCCCGGTTGAGCCGGGGGCTTTCACATCAGACTTAAGAAACCGCCTGCGAGCCCTTTACGCCCAATAATTTCCGGACACGCTT。

解淀粉芽孢杆菌BaYBZ在LB培养基上30℃培养，培养24小时，菌落表面粗糙不透明，污白色或微黄色，边缘不规则，常形成皱醭(见图1)。

(3)解淀粉芽孢杆菌BaYBZ的保藏：将该菌株于2019年09月09日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号GDMCC No：60770。

实施例2：对峙培养法测定解淀粉芽孢杆菌BaYBZ的活性

(1)LB培养基的制备同实施例1；LB液体培养基的制备除不加琼脂，其他与LB固体培养基的配方相同，将称得的药剂充分溶解后分装于锥形瓶(每瓶100mL培养液)，加塞、包扎，121℃灭菌20min，冷却后贮存备用。

(2)CM培养基的制备：称取酵母提取物Yeast extract 6g，酶水解酪蛋白Casaminoacid 6g，蔗糖Sucrose 10g于量杯，定容至1000mL，充分加热溶解后分装于锥形瓶(每瓶100mL培养液)，加入1％琼脂粉，121℃灭菌20min，冷却后贮存备用。

(3)解淀粉芽孢杆菌单菌落的制备：将解淀粉芽孢杆菌划线接种至LB培养基平板上活化培养24h后，挑取单菌落进行划线保存。

(4)解淀粉芽孢杆菌菌悬液(生物制剂)和滤液的制备：取步骤(3)制备得到的解淀粉芽孢杆菌单菌落接入步骤(1)制备得到的LB液体培养基锥形瓶中，置于30℃，摇床速率为200rpm下培养24h，即可得到解淀粉芽孢杆菌菌悬液；将获得的菌悬液于12,000rpm离心10min，取上清液，再用0.2μm的过滤器滤除菌体，获得解淀粉芽孢杆菌滤液。

(5)活性测定：

①解淀粉芽孢杆菌对稻瘟病菌Guy11、B157生长的抑制作用测定：将直径9cm的滤纸对折，翻转90°对折再对折，定培养皿的四个点。将稻瘟病菌菌饼接种到一点上，4天后将步骤(3)制得的解淀粉芽孢杆菌接种到于该点相对的点上。实验以不接种解淀粉芽孢杆菌(图2E和图3E)和接种LB液体培养基(图2D和图3D)为对照，各设3个重复，置28℃下恒温培养。4天后测量菌落直径，观察抑菌带边缘和对照的稻瘟病菌的菌丝形态，结果如图2A和图3A所示。

②解淀粉芽孢杆菌菌液对稻瘟病菌Guy11、B157生长的抑制作用测定：将步骤①中的解淀粉芽孢杆菌菌体换成用牛津杯装着的200μL解淀粉芽孢杆菌菌液，其余步骤不变。菌液的制备：将解淀粉芽孢杆菌接种在LB液体培养基上，28℃恒温箱中培养一天，用接种环蘸取菌体放入装有10mL LB液体培养基的50mL离心管中，放入28℃摇床中过夜，取出放入4℃冰箱中备用。结果如图2B和图3B所示。

③解淀粉芽孢杆菌发酵滤液对稻瘟病菌Guy11、B157生长的抑制作用测定：将步骤①中的解淀粉芽孢杆菌菌体换成用牛津杯装着的200μL解淀粉芽孢杆菌发酵滤液，其余步骤不变。发酵液的制备：将步骤②中的解淀粉芽孢杆菌菌液放入离心机中，10000rpm离心2min，用2mL针管吸取上层液体，接上细菌过滤器，过滤出200μL液体即为发酵滤液。结果如图2C和图3C所示。

④解淀粉芽孢杆菌对稻瘟病菌Guy11、B157菌丝的影响：待步骤①测量稻瘟病菌菌落直径与拍照之后，用牙签挑取稻瘟病菌菌落边缘菌丝于载玻片上，盖上盖玻片并置于显微镜下观察与拍照。结果如图4和图5所示。

⑤解淀粉芽孢杆菌对多个稻瘟病菌菌株(不同生理小种，菌株编号分别为：Y2、Y♀、Y7、98-06、Y34、70-15)生长的抑制作用测定：参照步骤①的操作进行处理。实验是以不接种解淀粉芽孢杆菌为对照，各设3个重复，置28℃下恒温培养。4天后测量菌落直径，观察抑菌带边缘和对照的稻瘟病菌的菌丝形态，结果如图6所示。

结果分析：由图2、图3、图4、图5和图6可知，水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌BaYBZ对多个稻瘟病菌菌株的生长具有明显的抑制作用，且造成了稻瘟病菌菌丝的畸形。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

序列表

<110> 广东省农业科学院水稻研究所

<120> 一株水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌及其生物制剂与应用

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 2015

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<220>

<223> 解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefacien）BaYBZ的16S rRNA序列

<400> 1

gccgtggcgg ggtgctatac atgcaagtcg agcggacaga tgggagcttg ctccctgatg 60

ttagcggcgg acgggtgagt aacacgtggg taacctgcct gtaagactgg gataactccg 120

ggaaaccggg gctaataccg gatggttgtt tgaaccgcat ggttcagaca taaaaggtgg 180

cttcggctac cacttacaga tggacccgcg gcgcattagc tagttggtga ggtaacggct 240

caccaaggcg acgatgcgta gccgacctga gagggtgatc ggccacactg ggactgagac 300

acggcccaga ctcctacggg aggcagcagt agggaatctt ccgcaatgga cgaaagtctg 360

acggagcaac gccgcgtgag tgatgaaggt tttcggatcg taaagctctg ttgttaggga 420

agaacaagtg ccgttcaaat agggcggcac cttgacggta cctaaccaga aagccacggc 480

taactacgtg ccagcagccg cggtaatacg taggtggcaa gcgttgtccg gaattattgg 540

gcgtaaaggg ctcgcaggcg gtttcttaag tctgatgtga aagcccccgg ctcaaccggg 600

gagggtcatt ggaaactggg gaacttgagt gcagaagagg agagtggaat tccacgtgta 660

gcggtgaaat gcgtagagat gtggaggaac accagtggcg aaggcgactc tctggtctgt 720

aactgacgct gaggagcgaa agcgtgggga gcgaacagga ttagataccc tggtagtcca 780

cgccgtaaac gatgagtgct aagtgttagg gggtttccgc cccttagtgc tgcagctaac 840

gcattaagca ctccgcctgg ggagtacggt cgcaagactg aaactcaaag gaattgacgg 900

gggcccgcac aagcggtgga gcatgtggtt taatttcgaa gcaacgcgag accttaccag 960

gtcttgacat cctctgacaa tcctagagat aggacgtccc cttcgggggc agagtgacag 1020

tggtgcatgt gtcgtcagct cgtgtcgtga gatgttgggt taagtcccgc aacggagcca 1080

atcctgtcac ttcggcggct ggctccataa aggttacctc accgacttcg ggtgttacaa 1140

actctcgtgg tgtgacgggc ggtgtgtaca aggcccggga acgtattcac cgcggcatgc 1200

tgatccgcga ttactagcga ttccagcttc acgcagtcga gttgcagact gcgatccgaa 1260

ctgagaacag atttgtggga ttggcttaac ctcgcggttt cgctgccctt tgttctgtcc 1320

attgtagcac gtgtgtagcc caggtcataa ggggcatgat gatttgacgt catccccacc 1380

ttcctccggt ttgtcaccgg cagtcacctt agagtgccca actgaatgct ggcaactaag 1440

atcaagggtt gcgctcgttg cgggacttaa cccaacatct cacgacacga gctgacgaca 1500

accatgcacc acctgtcact ctgcccccga aggggacgtc ctatctctag gattgtcaga 1560

ggatgtcaag acctggtaag gttcttcgcg ttgcttcgaa ttaaaccaca tgctccaccg 1620

cttgtgcggg cccccgtcaa ttcctttgag tttcagtctt gcgaccgtac tccccaggcg 1680

gagtgcttaa tgcgttagct gcagcactaa ggggcggaaa ccccctaaca cttagcactc 1740

atcgtttacg gcgtggacta ccagggtatc taatcctgtt cgctccccac gctttcgctc 1800

ctcagcgtca gttacagacc agagagtcgc cttcgccact ggtgttcctc cacatctcta 1860

cgcatttcac cgctacacgt ggaattccac tctcctcttc tgcactcaag ttccccagtt 1920

tccaatgacc ctccccggtt gagccggggg ctttcacatc agacttaaga aaccgcctgc 1980

gagcccttta cgcccaataa tttccggaca cgctt 2015

Claims (10)

1.一株水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌，其特征在于：将其命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefacien)BaYBZ，于2019年09月09日保藏于广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物研究所的广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No：60770。

2.一种生物制剂，其特征在于：基于权利要求1所述的水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌制备得到，其中，所述生物制剂包括所述的水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌。

3.根据权利要求2所述的生物制剂，其特征在于：通过权利要求1所述的水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌经液体发酵制备得到。

4.根据权利要求3所述的生物制剂，其特征在于：包含以下步骤：

将解淀粉芽孢杆菌接种至LB液体培养基中培养，即获得生物制剂。

5.根据权利要求4所述的生物制剂，其特征在于：

所述LB液体培养基的pH值为7.0。

6.根据权利要求4或5所述的生物制剂，其特征在于：

所述的培养指在28～30℃，摇床震荡速率为180～200rpm下培养24h。

7.权利要求2～6任一项所述的生物制剂在防治稻瘟病中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：

稻瘟病菌菌株为稻瘟病菌Guy11、稻瘟病菌B157、稻瘟病菌98-06、稻瘟病菌Y34、稻瘟病菌70-15。

9.权利要求1所述的水稻叶片内生解淀粉芽孢杆菌在防治稻瘟病中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于：

稻瘟病菌菌株为稻瘟病菌Guy11、稻瘟病菌B157、稻瘟病菌98-06、稻瘟病菌Y34、稻瘟病菌70-15。

Images