CN115028636A - 三唑并嘧啶化合物和其用于治疗癌症的用途 - Google Patents

三唑并嘧啶化合物和其用于治疗癌症的用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、X、环A、环B和环C具有在说明书前文中所定义的任一种含义，其制备方法，含有其的药物组合物和其用于治疗MCT4介导的疾病的用途。

Description

三唑并嘧啶化合物和其用于治疗癌症的用途
本申请是申请号为201980046079.2的中国发明专利申请(其申请日为2019年5月10 日，发明名称为“三唑并嘧啶化合物和其用于治疗癌症的用途”)的分案申请，原申请为国际申请号为PCT/EP2019/062020的中国国家阶段申请，该国际申请要求2018年5月11 日提交的美国临时申请第62/670,075号的优先权，所述临时申请的全部内容特此以引用的方式并入。
发明领域
本说明书大体上涉及三唑并嘧啶化合物和其药学上可接受的盐。这些化合物和其药学上可接受的盐选择性地抑制MCT4，并且因此本说明书还涉及所述化合物和其盐用于治疗或预防包括癌症的MCT4介导的疾病的用途。本说明书进一步涉及三唑并嘧啶化合物和其药学上可接受的盐的结晶形式；包含所述化合物和盐的药物组合物；包含所述化合物和盐的试剂盒；制造所述化合物和盐的方法；并且涉及使用所述化合物和盐治疗包括癌症的MCT4介导的疾病的方法。
背景技术
单羧酸转运蛋白(monocarboxylate transporter)由SLC16基因家族编码。所述家族也称为单羧酸转运蛋白(MCT)家族，这是因为有待识别的第一成员证实为负责例如L-乳酸盐、丙酮酸盐和酮体的单羧酸盐穿过质膜的质子相关转运。质子相关乳酸盐和丙酮酸盐转运的直接论证已经为MCT1(SLC16A1)、MCT2(SLC16A7)、MCT3(SLC16A8)和MCT4 (SLC16A3)证实。MCT家族命名法摘自Halestrap和Price,《生物化学杂志(Biochemical Journal)》(1999)343:281-299。
MCT具有12个跨膜螺旋，并且功能性表达需要与称为CD 147(也称为basigin和EMMPRIN)和embigin的单跨膜域伴侣蛋白的相互作用。CD 147充当用于将MCT1和 MCT4带到质膜的基本伴侣蛋白，其中转运蛋白和CD 147保持紧密地缔合(Kirk等人(2000) 《欧洲分子生物学学会杂志(EMBO J.)》19:3896-3904)。MCT2的恰当质膜表达展示相对于CD147的强embigin偏好(Wilson等人(2005)《生物化学杂志(J.Biol.Chem.)》280: 27213-27221)。
可以明确的是，肿瘤展现经更改的代谢(Vander Heiden(2011)《自然·药物发现(Nat. Drug Dis.)》10:671-684)。肿瘤由充分氧化(好氧)区和不良氧化(低氧)区构成。与正常细胞相比，肿瘤细胞具有增加的糖酵解路径依赖性，所述糖酵解路径用于通过好氧糖酵解(瓦氏效应(Warburg effect))或由于肿瘤低氧而导致的厌氧糖酵解生成ATP。高度增殖肿瘤和低氧肿瘤似乎尤其取决于糖酵解以满足其能量和生物合成需求。FDG-PET(氟脱氧葡萄糖正电子发射断层摄影术)-具有示踪物氟-18(F-18)氟脱氧葡萄糖_(FDG)的PET 扫描的广泛临床使用已经证实在一系列实体肿瘤和血液肿瘤中观察到这种糖酵解表型。因此，FDG-PET可以用于诊断癌症、分期癌症和监测癌症治疗。与计算机断层摄影术组合的 FDG-PET在大部分上皮肿瘤转移检测上具有>90％灵敏度和特异性(Mankoff等人(2007) 《临床癌症研究(Clin.Cancer Res.)》13:3460-3469)。
肿瘤中增加的糖酵解率的副产物是乳酸盐积聚。胞内乳酸盐可以通过单羧酸转运蛋白 (MCT 1、2、3和4)从肿瘤细胞当中转出(Halestrap和Price,《生物化学杂志》(1999)343； 291-299)。肿瘤细胞产生的乳酸盐可以被基质氧化肿瘤细胞吸收(通过单羧酸转运蛋白 MCT1和MCT2)以再生可以用于推动氧化磷酸化(OXPHOS)的丙酮酸盐(Koukouris 等人,《癌症研究(Cancer Res.)》(2006)66；632-637；Sonveaux等人,《临床研究杂志(J.Clin.Invest.)》(2008)118；3930-3942)。驱动肿瘤的糖酵解表型的关键因素中的一个是作为通过低氧应激活化的转录因子的低氧诱导因子(HIF)的活化。MCT4是HIF靶基因并且通过低氧上调并为从糖酵解肿瘤中输出乳酸盐所需(Ullah等人(2006)《生物化学杂志》 281:9030-9037)。MCT4的动力学性质被调谐成其输出衍生于糖酵解的乳酸的作用，这是因为其对于丙酮酸盐的极高Km(150mM)确保丙酮酸盐不从细胞中输出。这种情况是基本的，因为衍生于丙酮酸盐向乳酸盐的还原的NADH为驱动糖酵解通量(glycolytic flux) 所需(Halestrap和Wilson(2012)《IUMBM Life》64:109-119)。
与正常上皮相比，MCT4在包括以下的一系列实体肿瘤中过度表达：肾脏肿瘤(Fisel 等人(2013)《临床癌症研究》19:5170-5181；Gerlinger等人《病理学杂志(J.Pathol.)》 227:146-156)、胰腺肿瘤(Baek等人(2014)《细胞报告(Cell Rep.)》9:2233-2249)、结肠直肠肿瘤(Pinheiro等人,《维尔荷氏文献(Virchows Arch.)》(2008)452；139-146)、 HNSCC(Zhu等人(2014)《公共科学图书馆：综合(PLoS One)》9:e87904)、乳腺癌(Doyen 等人(2014)《生物化学与生物物理研究通讯(Biochem.Biophys.Res.Commun.)》451:54-61)、前列腺癌(Pertega-Gomes等人《BMC Cancer》(2011)11:312)和肝癌(Gao 等人(2015)《癌症研究杂志(J Cancer Res.)》141:1151-1162)。
最新数据已经指示乳酸盐在调节免疫细胞功能中发挥重要作用。已经显示乳酸盐抑制例如T细胞和NK细胞的免疫效应细胞的活性。乳酸抑制离体人类T细胞的增殖和活化(Fisher等人(2007)《血液(Blood)》109:3812-3819；Haas等人(2015)《公共科学图书馆：生物学(PLoS Biol)》13)。Husain等人已经证实来自LDHA耗乏肿瘤的NK细胞展示了改善的细胞溶解功能并且NK细胞的乳酸盐治疗降低其细胞毒性活性(Husain等人 (2013)《免疫学杂志(J.Immunol.)》191:1486-1495)。此外，Brand等人证实在具有免疫能力的小鼠中LDHA的阻断减少了乳酸产生，并且在肿瘤中观察到IFN-y产生T细胞和 NK细胞的增加的浸渗(Brand等人(2016)《细胞代谢(Cell Metab.)》24:657-671)。还已经显示乳酸盐抑制单核细胞活化和树突状细胞分化(Gottfried等人(2006)《血液》 107:2013-2021；Dietl等人(2010)《免疫学杂志》184:1200-1209)并且还诱导M2(免疫抑制的)肿瘤相关巨噬细胞极化(Colegio等人(2014)《自然(Nature)》513:559-563)。这些数据一起支持以下假设：在肿瘤微环境中作为肿瘤的糖酵解表型的副产物产生的乳酸盐驱动免疫抑制效应。
肿瘤微环境中的乳酸盐积聚伴随着酸中毒(归因于与质子一起的共转运)。肿瘤微环境中的低pH已经与胞外基质降解和肿瘤细胞迁移相关联(Gillies和Gatenby(2015)《癌症杂志(Cancer J.)》21:88-96)。
W02004/065394中已经描述MCT1/2的强效抑制剂，其展示为：在T淋巴细胞中发生通过MCT1的乳酸盐流出，这是因为MCT1的小分子抑制剂导致胞内乳酸盐积聚(Murray 等人,《自然-化学生物学(Nat.Chem Biol.)》(2005)1；371-376)。
然而，还需要抑制乳酸盐转运至MCT4依赖型细胞中、展现良好生物可用性并且适用于给药的MCT4抑制剂。
发明内容
简言之，本说明书部分描述式(I)化合物：
Figure BDA0003645404260000031
或其药学上可接受的盐，其中：
R1和R2各自独立地表示氢或甲基；
X表示CH2或O；
环A和环B各自独立地表示选自苯基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基和哒嗪基的环，其中环A和环B中的每一个独立地任选地被一个或多个选自C1-3烷基和C1-3烷氧基的取代基取代；
环C表示任选地含有一个或多个独立地选自O、N和S的额外杂原子的5元到9元单环或双环饱和杂环烷基，其中环C任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：任选地被甲氧基或羟基取代的C1-3烷基；二氧代基、C0-2烷基-C(O)N(Me)2、C(O)C1-2烷基和S(O)2C1-2烷基。
本说明书还部分描述包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
本说明书还部分描述用于疗法中的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
本说明书还部分描述用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
本说明书还部分描述用于制造用以治疗癌症的药剂的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
本说明书还部分描述用于治疗需要所述治疗的温血动物的癌症的方法，所述方法包含向温血动物施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
附图说明
图1展示(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1- 基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉(化合物A，实例62)的形式A的X射线粉末衍射(XRPD) 图。
图2展示(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1- 基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉(化合物A，实例62)的形式A的DSC。
图3展示肺癌异种移植模型中的MCT4抑制剂(实例62)以及VEGFR TKI(AZD2171，也称为西地尼布(cediranib))的活体内活性。
图4展示小鼠同系模型中的与α-CTLA4抗体相结合的MCT4抑制剂(实例62)的活体内活性。
图5展示小鼠同系模型中的与αPD-1抗体相结合的MCT4抑制剂(实例62)的活体内活性。
具体实施方式
本发明的许多实施例在整个本说明书中得以详述并且为所属领域的技术读者显而易见。本发明不应理解为限于其一个或多个任何特定实施例。
在第一实施例中，提供式(I)化合物：
Figure BDA0003645404260000051
或其药学上可接受的盐，其中：
R1和R2各自独立地表示氢或甲基；
X表示CH2或O；
环A和环B各自独立地表示选自苯基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基和哒嗪基的环，其中环A和环B中的每一个独立地任选地被一个或多个选自C1-3烷基和C1-3烷氧基的取代基取代；
环C表示任选地含有一个或多个独立地选自O、N和S的额外杂原子的5元到9元单环或双环饱和杂环烷基，其中杂环烷基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：任选地被甲氧基或羟基取代的C1-3烷基；二氧代基、C0-2烷基-C(O)N(Me)2、C(O)C1-2烷基和 S(O)2C1-2烷基。
术语“杂环烷基”意思指包含一个或多个独立地选自氮、氧和硫的额外杂原子的5元到9元饱和含氮非芳香环(式(I)中的环C)。合适杂环烷基组的实例包括吗啉基、哌嗪基、哌啶基、硫代吗啉基、二氮杂二环辛烷基、八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪基、吡咯烷基、二氮杂环庚烷基、氧氮杂环庚烷基和氮杂环庚烷基。为免生疑问，杂环烷基环上的取代基可以通过碳原子或杂原子连接。
术语“二氧代基”意思指连接到同一原子的两个氧代基取代基。二氧代基取代的实例包括环C表示硫代吗啉基、硫原子被两个氧代基取代(即环C是硫代吗啉-1,1-二氧化物)的情况。
Cp-q烷基和其它术语(其中p和q是整数)中的前缀Cp-q指示基团中所存在的碳原子的范围，例如C1-3烷基包括C1烷基(甲基)、C2烷基(乙基)和C3烷基(呈正丙基和异丙基形式的丙基)。在一个实施例中，C1-3烷基是甲基。
术语Cp-q烷氧基包含-O-Cp-q烷基。举例来说，C1-3烷氧基包括C1烷氧基(甲氧基)、 C2烷氧基(乙氧基)和C3烷氧基(呈正丙氧基和异丙氧基形式的丙氧基)。在一个实施例中，C1-3烷氧基是甲氧基。
在使用术语“任选地”的情况下，希望后续部分可以存在或可以不存在。因此，术语“任选地”的使用包括部分存在的情况以及部分不存在的情况。举例来说，“任选地被一个甲氧基取代的”基团包括具有和不具有甲氧基取代基的基团。
术语“被取代的”意味着特指基团上的一个或多个氢(例如一个或两个氢或者一个氢) 被一个或多个指定取代基(例如一个或两个取代基或者一个取代基)置换，其条件是任何带有取代基的原子都维持准许的原子价。取代基组合仅涵盖稳定化合物和稳定合成中间物。“稳定”意味着相关化合物或中间物足够稳健以进行分离并且具有作为合成中间物或作为具有潜在治疗效用的药剂的效用。如果基团不被描述为“被取代的”或“任选地被取代的”，那么其将被视为未被取代的(即特指基团上的氢中无一者被置换)。
术语“药学上可接受的”用于指明适合用于患者中的对象(例如盐、剂型、赋形剂)。药学上可接受的盐的示例清单可以在《药物盐手册：性质、选择和用途(Handbook ofPharmaceutical Salts:Properties,Selection and Use)》,P.H中找到。
另一个实施例提供本文所定义的实施例中的任一个(例如根据权利要求1所述的实施例)，其条件是选自由实例1、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、 19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、 39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、 59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、 79、80、81、82、83、84、85、86和87组成的组的一个或多个具体实例(例如一个、两个或三个具体实例)单独地不被要求保护。
在一个实施例中，X表示CH2。在另一个实施例中，X表示O。
在一个实施例中，R1和R2两者均表示氢。在另一个实施例中，R1和R2两者均表示甲基。在另一个实施例中，R1表示氢并且R2表示甲基。在一个实施例中，R1和R2两者均表示氢或R1表示氢并且R2表示甲基。
环A选自苯基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基和哒嗪基。
环B选自苯基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基和哒嗪基。
在式(I)中，环A连接到吡咯烷环的氮并且连接到环B，并且环B连接到环A并且连接到基团-C(R1R2)-环C。环A和环B可以如本文所定义地任选地进一步被取代。在一个实施例中，吡咯烷环和环B在环A上处于对位(即1,4)方向。在另一个实施例中，环A 和基团-C(R1R2)-环C在环B上处于对位(即1,4)方向。在一个实施例中，吡咯烷环和环 B在环A上处于对位(即1,4)方向，并且环A和基团-C(R1R2)-环C在环B上处于对位(即 1,4)方向。在又另一个实施例中，吡咯烷环和环B在环A上处于对位(即1,4)方向，并且环A和基团-C(R1R2)-环C在环B上处于对位(即1,4)方向，并且环A和环B通过环碳彼此连接并且通过环碳连接到分子的剩余部分。
在一个实施例中，环A或环B中的至少一者选自吡啶基、吡嗪基、嘧啶基和哒嗪基。
在一个实施例中，环A和环B各自独立地选自苯基、哒嗪基和吡嗪基。在另一个实施例中，环A和环B各自独立地选自苯基和哒嗪基。在另一个实施例中，环A是苯基并且环B是哒嗪基。在另一个实施例中，环A是吡嗪基并且环B是苯基。
在一个实施例中，环A和环B任选地被一个或两个选自C1-3烷基和C1-3烷氧基的取代基取代。在一个实施例中，环A和环B各自独立地任选地被一个选自C1-3烷基和C1-3烷氧基的取代基取代。
在一个实施例中，环A和环B各自独立地任选地被一个选自甲基和甲氧基的取代基取代。
在一个实施例中，环C表示5元到7元单环饱和杂环烷基环。在另一个实施例中，环C表示8元或9元双环饱和杂环烷基环。双环杂环烷基环可以是桥接或稠合双环。
在一个实施例中，环C选自由以下组成的组：吗啉基、哌嗪基、哌啶基、硫代吗啉基、二氮杂二环辛烷基、八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪基、吡咯烷基、二氮杂环庚烷基、氧氮杂环庚烷基和氮杂环庚烷基。
在一个实施例中，环C选自由以下组成的组：吗啉-4-基、哌嗪-4-基、哌啶-1-基、硫代吗啉-4-基、3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-基、八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基、吡咯烷-1-基、 1,4-二氮杂环庚烷-1-基、1,4-氧氮杂环庚烷-4-基、氮杂环庚烷基-1-基。
在一个实施例中，环C是吗啉基或哌嗪基。在一个实施例中，环C是吗啉-4-基或哌嗪-4-基。
在一个实施例中，环C是吗啉基。在一个实施例中，环C是吗啉-4-基。
在一个实施例中，环C是哌嗪基。在一个实施例中，环C是哌嗪-4-基。
在一个实施例中，环C任选地被一个或多个(例如一个、两个或三个)独立地选自以下的取代基取代：羟基；任选地被甲氧基或羟基取代的乙基；二氧代基、C(O)N(Me)2、 CH2C(O)N(Me)2、C(O)Me和S(O)2Me。在一个实施例中，环C被C(O)Me或甲基取代。
在一个实施例中，环C是哌嗪-4-基-乙酮。在另一个实施例中，环C是4-甲基-1-哌嗪基。
在一个实施例中：
R1和R2两者均是氢；
X表示CH2或O；
环A和环B各自独立地表示选自苯基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基和哒嗪基的环，其中环A和环B中的每一个独立地任选地被一个或多个选自C1-3烷基和C1-3烷氧基的取代基取代；
环C表示任选地含有一个或多个独立地选自O、N和S的额外杂原子的5元到9元单环或双环饱和杂环烷基，其中杂环烷基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：任选地被甲氧基或羟基取代的C1-3烷基；二氧代基、C0-2烷基-C(O)N(Me)2、C(O)C1-2烷基和 S(O)2C1-2烷基。
在一个实施例中：
R1和R2两者均是氢；
X表示O；
环A和环B各自独立地选自苯基和哒嗪基；
环C表示吗啉基或哌嗪基，其中哌嗪基任选地被以下取代：任选地被甲氧基或羟基取代的C1-3烷基；C0-2烷基-C(O)N(Me)2、C(O)C1-2烷基和S(O)2C1-2烷基。
在一个实施例中：
R1和R2两者均是氢；
X表示CH2；
环A和环B各自独立地选自苯基、哒嗪基和吡嗪基；
环C表示吗啉基、哌嗪基或吡嗪基，其中吡嗪基或哌嗪基任选地被以下取代：任选地被甲氧基或羟基取代的C1-3烷基；C0-2烷基-C(O)N(Me)2、C(O)C1-2烷基和S(O)2C1-2烷基。
另一个实施例提供式(Ia)化合物：
Figure BDA0003645404260000091
或其药学上可接受的盐，其中
R1和R2各自独立地表示氢或甲基；
X表示CH2或O；
D、E、G、J、L、M、Q和R各自独立地表示N或CR3，其中D、E、G和J中不超过两个表示N并且其中L、M、Q和R中不超过两个表示N；
R3表示氢、C1-3烷基或C1-3烷氧基；
环C表示任选地含有一个或多个独立地选自O、N和S的额外杂原子的5元到9元单环或双环饱和杂环烷基，其中杂环烷基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：任选地被甲氧基或羟基取代的C1-3烷基；二氧代基、C0-2烷基-C(O)N(Me)2、C(O)C1-2烷基和 S(O)2C1-2烷基。
在一个实施例中，R1和R2两者均表示氢。在另一个实施例中，R1和R2两者均表示甲基。在另一个实施例中，R1表示氢并且R2表示甲基。在一个实施例中，R1和R2两者均表示氢或R1表示氢并且R2表示甲基。
D、E、G和J各自独立地表示N或CR3，其中D、E、G和J中不超过两个表示N。
L、M、Q和R各自独立地表示N或CR3，其中L、M、Q和R中不超过两个表示N。
在一个实施例中，D、E、G和J各自独立地表示CR3。在另一个实施例中，D、E、G 和J中的一个表示N并且剩余部分各自独立地表示CR3。在另一个实施例中，D、E、G和 J中的两个表示N并且剩余部分两者均独立地表示CR3。
在一个实施例中，L、M、Q和R各自独立地表示CR3。在另一个实施例中，L、M、 Q和R中的一个表示N并且剩余部分各自独立地表示CR3。在另一个实施例中，L、M、 Q和R中的两个表示N并且剩余部分两者均独立地表示CR3。
在一个实施例中，D、E、G和J各自独立地表示CR3并且L、M、Q和R各自独立地表示N或CR3，其中L、M、Q和R中不超过两个表示N。在一个实施例中，D、E、G和 J中的一个表示N并且剩余部分各自独立地表示CR3，并且L、M、Q和R各自独立地表示N或CR3，其中L、M、Q和R中不超过两个表示N。在一个实施例中，D、E、G和J 中的两个表示N并且剩余部分两者均独立地表示CR3，并且L、M、Q和R各自独立地表示N或CR3，其中L、M、Q和R中不超过两个表示N。
在一个实施例中，D、E、G和J表示N或CR3，其中D、E、G和J中不超过两个表示N并且L、M、Q和R各自独立地表示CR3。在一个实施例中，D、E、G和J表示N或 CR3，其中D、E、G和J中不超过两个表示N，并且L、M、Q和R中的一个表示N并且剩余部分各自独立地表示CR3。在一个实施例中，D、E、G和J表示N或CR3，其中D、 E、G和J中不超过两个表示N，并且L、M、Q和R中的两个表示N并且剩余部分两者均独立地表示CR3。
在一个实施例中，D、E、G和J各自独立地表示CR3并且L、M、Q和R各自独立地表示CR3。
在一个实施例中，D、E、G和J各自独立地表示CR3，并且L、M、Q和R中的一个表示N并且剩余部分各自独立地表示CR3。
在一个实施例中，D、E、G和J各自独立地表示CR3，并且L、M、Q和R中的两个表示N并且剩余部分两者均独立地表示CR3。
在一个实施例中，D、E、G和J中的一个表示N并且剩余部分各自独立地表示CR3，并且L、M、Q和R各自独立地表示CR3。
在一个实施例中，D、E、G和J中的一个表示N并且剩余部分各自独立地表示CR3，并且L、M、Q和R中的一个表示N并且剩余部分各自独立地表示CR3。
在一个实施例中，D、E、G和J中的一个表示N并且剩余部分各自独立地表示CR3，并且L、M、Q和R中的两个表示N并且剩余部分两者均独立地表示CR3。
在一个实施例中，D、E、G和J中的两个表示N并且剩余部分两者均独立地表示CR3，并且L、M、Q和R各自独立地表示CR3。
在一个实施例中，D、E、G和J中的两个表示N并且剩余部分两者均独立地表示CR3，并且L、M、Q和R中的一个表示N并且剩余部分各自独立地表示CR3。
在一个实施例中，D、E、G和J中的两个表示N并且剩余部分两者均独立地表示CR3，并且L、M、Q和R中的两个表示N并且剩余部分两者均独立地表示CR3。
在一个实施例中，含有D、E、G和J的环是选自苯基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基和哒嗪基的环。在一个实施例中，含有D、E、G和J的环是选自苯基、哒嗪基和吡嗪基的环。在一个实施例中，环选自苯基和哒嗪基。
在一个实施例中，含有L、M、Q和R的环是选自苯基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基和哒嗪基的环。在一个实施例中，含有L、M、Q和R的环是选自苯基、哒嗪基和吡嗪基的环。在一个实施例中，环选自苯基和哒嗪基。
在另一个实施例中，含有D、E、G和J的环是苯基并且含有L、M、Q和R的环是哒嗪基。在另一个实施例中，含有D、E、G和J的环是吡嗪基并且含有L、M、Q和R的环是苯基。
在一个实施例中，含有D、E、G和J的环和含有L、M、Q和R的环各自独立地任选地被一个或两个取代基(即其中R3表示C1-3烷基和C1-3烷氧基)取代。在一个实施例中，含有D、E、G和J的环和含有L、M、Q和R的环各自独立地任选地被一个取代基(即其中R3表示C1-3烷基和C1-3烷氧基)取代。在一个实施例中，含有D、E、G和J的环和含有L、M、Q和R的环各自独立地任选地被其中R3选自甲基和甲氧基的一个取代基取代。
在一个实施例中，环C表示5元到7元单环饱和杂环烷基环。在另一个实施例中，环C表示8元或9元双环饱和杂环烷基环。双环杂环烷基环可以是桥接或稠合双环。
在一个实施例中，环C选自由以下组成的组：吗啉基、哌嗪基、哌啶基、硫代吗啉基、二氮杂二环辛烷基、八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪基、吡咯烷基、二氮杂环庚烷基、氧氮杂环庚烷基和氮杂环庚烷基。
在一个实施例中，环C选自由以下组成的组：吗啉-4-基、哌嗪-4-基、哌啶-1-基、硫代吗啉-4-基、3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-基、八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2-基、吡咯烷-1-基、 1,4-二氮杂环庚烷-1-基、1,4-氧氮杂环庚烷-4-基、氮杂环庚烷基-1-基。
在一个实施例中，环C是吗啉基或哌嗪基。在一个实施例中，环C是吗啉-4-基或哌嗪-4-基。
在一个实施例中，环C是吗啉基。在一个实施例中，环C是吗啉-4-基。
在一个实施例中，环C是哌嗪基。在一个实施例中，环C是哌嗪-4-基。
在一个实施例中，环C任选地被一个或多个(例如一个、两个或三个)独立地选自以下的取代基取代：羟基；任选地被甲氧基或羟基取代的乙基；二氧代基、C(O)N(Me)2、 CH2C(O)N(Me)2、C(O)Me和S(O)2Me。在一个实施例中，环C被C(O)Me或甲基取代。
在一个实施例中，环C是哌嗪-4-基-乙酮。在另一个实施例中，环C是4-甲基-1-哌嗪基。
在一个实施例中：
R1和R2两者均是氢；
X表示CH2或O；
D、E、G、J、L、M、Q和R各自独立地表示N或CR3，其中D、E、G和J中不超过两个表示N并且其中L、M、Q和R中不超过两个表示N；
R3表示氢、C1-3烷基或C1-3烷氧基；
环C表示任选地含有一个或多个独立地选自O、N和S的额外杂原子的5元到9元单环或双环饱和杂环烷基，其中杂环烷基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：任选地被甲氧基或羟基取代的C1-3烷基；二氧代基、C0-2烷基-C(O)N(Me)2、C(O)C1-2烷基和 S(O)2C1-2烷基。
在一个实施例中：
R1和R2两者均是氢；
X表示O；
D、E、G、J、L、M、Q和R各自独立地表示N或CR3，其中D、E、G和J中不超过两个表示N并且其中L、M、Q和R中不超过两个表示N；
R3表示氢、甲基或甲氧基；
环C表示吗啉基或哌嗪基，其中哌嗪基任选地被以下取代：任选地被甲氧基或羟基取代的C1-3烷基；C0-2烷基-C(O)N(Me)2、C(O)C1-2烷基和S(O)2C1-2烷基。
在一个实施例中：
R1和R2两者均是氢；
X表示CH2；
D、E、G、J、L、M、Q和R各自独立地表示N或CR3，其中D、E、G和J中不超过两个表示N并且其中L、M、Q和R中不超过两个表示N；
R3选自氢、甲基或甲氧基；
环C表示吗啉基、哌嗪基或吡嗪基，其中吡嗪基或哌嗪基任选地被以下取代：任选地被甲氧基或羟基取代的C1-3烷基；C0-2烷基-C(O)N(Me)2、C(O)C1-2烷基和S(O)2C1-2烷基。
另一个实施例提供式(Ib)化合物：
Figure BDA0003645404260000131
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、X、环A、环B和环C如本文所定义。
另一个实施例提供式(Ic)化合物：
Figure BDA0003645404260000141
或其药学上可接受的盐，其中R1、R2、X、D、E、G、J、L、M、Q、R和环C如本文所定义。
在一个实施例中，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物选自由以下组成的组：
(R)-4-((6'-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)-[3,3'-联吡啶]-6-基)甲基)吗啉；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(6'-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-[3,3'-联吡啶]-6-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-4-(4-(2-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)嘧啶-5- 基)苄基)吗啉；
(R)-4-((5-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡啶-2- 基)吡嗪-2-基)甲基)吗啉；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(6-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡啶-3-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-4-((6-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡啶-2- 基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉；
6-(((R)-1-(2-(4-(((S)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-4-((5-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)嘧啶-2- 基)吡啶-2-基)甲基)吗啉；
(R)-6-((1-(2-(2-甲氧基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(2-(2-甲基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)嘧啶-5-基)吡咯烷-3- 基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
6-(((R)-1-(2-(4-(((3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-N,N-二甲基-2-(4-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)嘧啶-2-基)苄基)哌嗪-1-基)乙酰胺；
(R)-2-(4-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)嘧啶 -2-基)苄基)哌嗪-1-基)乙醇；
(R)-1-(4-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)嘧啶-2-基)苄基)哌嗪-1-基)乙烯酮；
(R)-6-((1-(2-(4-((4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-4-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)嘧啶-2- 基)苄基)吗啉；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡嗪-2-基)苯基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶-5-基)苯基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)苯基)吡啶-3-基)甲基)吗啉；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶-2-基)苯基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-4-((5-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)苯基)吡嗪-2-基)甲基)吗啉；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)苯基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-4-((5-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)苯基)嘧啶-2-基)甲基)吗啉；
(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉；
(S)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉；
(R)-6-((1-(5-(2-甲氧基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-6-甲基吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基) 甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
2,5,7-三甲基-6-(((R)-1-(5-(4-(((3R,5S)-3,4,5-三甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
6-(((R)-1-(5-(4-(((R)-3,4-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
6-(((R)-1-(5-(4-(((R)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
2,5,7-三甲基-6-(((R)-1-(5-(4-(((2R,5R)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
2,5,7-三甲基-6-(((R)-1-(5-(4-(((2S,5R)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
2,5,7-三甲基-6-[[(3R)-1-[5-[4-(l-哌啶基甲基)苯基]吡嗪-2-基]吡咯烷-3-基]甲基]-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-6-((1-(5-(4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基) 甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
6-(((R)-1-(5-(4-(((3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
2-{4-[4-(5-{(3R)-3-[(2,5,7-三甲基[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基]吡咯烷-1-基}吡嗪 -2-基)苄基]哌嗪-1-基}乙醇；
(R)-6-((1-(5-(4-((4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-6-((1-(5-(2-甲氧基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
{1-[4-(5-{(3R)-3-[(2,5,7-三甲基[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基]吡咯烷-1-基}吡嗪 -2-基)苄基]哌啶-4-基}甲醇；
6-{[(3R)-1-(5-{4-[(1,1-二氧化硫代吗啉-4-基)甲基]苯基}吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基]甲基}-2,5,7-三甲基[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
2,5,7-三甲基-6-({(3R)-1-[5-(4-{[4-(甲基磺酰基)哌啶-1-基]甲基}苯基)吡嗪-2-基]吡咯烷 -3-基}甲基)[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-4-((6-(3-甲基-5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基) 吡嗪-2-基)吡啶-3-基)甲基)吗啉；
6-(((R)-1-(5-(4-(((S)-3,4-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-4-((5-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2- 基)吡啶-2-基)甲基)吗啉；
6-(((R)-1-(5-(4-(((S)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-4-(4-(3-甲基-5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基) 吡嗪-2-基)苄基)吗啉；
2,5,7-三甲基-6-({(3R)-1-[5-(4-{[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]甲基}苯基)吡嗪-2-基]吡咯烷-3-基}甲基)[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-N,N-二甲基-2-(4-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2-基)苄基)哌嗪-1-基)乙酰胺；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(6-甲基-5-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3- 基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
N,N-二甲基-4-[4-(5-{(3R)-3-[(2,5,7-三甲基[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基]吡咯烷 -1-基}吡嗪-2-基)苄基]哌嗪-1-甲酰胺；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(3-甲基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3- 基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基) 甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-1-(4-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪 -2-基)苄基)哌嗪-1-基)乙烯酮；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-4-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2- 基)苄基)吗啉；
(R)-4-(4-(6-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)哒嗪-3- 基)苄基)吗啉；
(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉；
(S)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(6-(哌啶-1-基甲基)哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3-基)氧基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3-基)氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
2,5,7-三甲基-6-(((3R)-1-(4-(6-((3-甲基-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-基)甲基)哒嗪-3-基) 苯基)吡咯烷-3-基)氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
6-(((R)-1-(4-(6-(((R)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)甲基)哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3- 基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
6-(((R)-1-(4-(6-(((S)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)甲基)哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3- 基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-4-((5-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)苯基)嘧啶-2-基)甲基)吗啉；
(R)-4-((5-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)苯基)吡嗪-2-基)甲基)吗啉；
(R)-1-(4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)苯基) 哒嗪-3-基)甲基)哌嗪-1-基)乙-1-酮；
(R)-6-((1-(4-(6-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3-基)氧基)-2,5,7-三甲基 -[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-6-((1-(4-(6-((4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)甲基)哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3-基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-4-((6'-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)-[2,3'-联吡啶]-5-基)甲基)吗啉；
(R)-4-((6'-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)-[3,3'-联吡啶]-6-基)甲基)吗啉；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-4-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2- 基)苄基)吗啉；
1-[4-[[4-[5-[(3R)-3-[(2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基]吡咯烷-1-基]吡嗪 -2-基]苯基]甲基]-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]乙烯酮；(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(4-(吡咯烷-1-基甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(5-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-2-基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(4-((4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)-1,4-氧氮杂环庚烷；
(R)-6-((1-(4-(6-(氮杂环庚烷-1-基甲基)哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3-基)氧基)-2,5,7-三甲基 -[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；
4-[(1R)-1-[4-[5-[(3R)-3-[(2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基]吡咯烷-1-基] 吡嗪-2-基]苯基]乙基]吗啉；和
4-[(1S)-1-[4-[5-[(3R)-3-[(2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基]吡咯烷-1-基] 吡嗪-2-基]苯基]乙基]吗啉。
在一个实施例中，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物选自由以下组成的组：
(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉；
(R)-1-(4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)苯基) 哒嗪-3-基)甲基)哌嗪-1-基)乙-1-酮；
(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶；和
(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉。
在一个实施例中，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物是 (R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)苯基)哒嗪-3- 基)甲基)吗啉(也称为化合物A)。
在一个实施例中，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物是 (R)-1-(4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)苯基)哒嗪 -3-基)甲基)哌嗪-1-基)乙-1-酮。
在一个实施例中，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物是(R)-2,5,7- 三甲基-6-((1-(5-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶。
在一个实施例中，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中化合物是 (R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)苯基)哒嗪-3- 基)甲基)吗啉。
在一个实施例中，式(I)化合物呈游离碱形式。
本说明书中所描述的化合物和盐可以以溶剂化形式和非溶剂化形式存在。举例来说，溶剂化形式可以是水合形式，例如半水合物、单水合物、二水合物、三水合物或其替代量。就使用本文所描述的测试而测量的实例而论，本发明涵盖式(I)化合物的所有所述溶剂化和非溶剂化形式，尤其达到所述形式具有MCT4抑制活性的程度。
本说明书中所描述的化合物和盐的原子可以以其同位素形式存在。本发明涵盖其中原子被其同位素中的一者或多者置换的所有式(I)化合物(例如其中一个或多个碳原子是11C 或13C碳同位素、或其中一个或多个氢原子是2H或3H同位素、或其中一个或多个氮原子是15N同位素、或其中更多氧原子中的一者是17O或18O同位素的式(I)化合物)。
本说明书中所描述的化合物和盐可以通过一个或多个不对称碳原子以光学活性或外消旋形式存在。就使用本文所描述的测试测量的实例而论，本发明包括具有MCT4抑制活性的式(I)化合物的任何光学活性或外消旋形式。光学活性形式合成可以通过所属领域中熟知的标准有机化学技术，例如通过使用光学活性材料进行的合成或通过外消旋形式分解来进行。
因此，在一个实施例中，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐，所述式(I)化合物是呈≥95％、≥98％或≥99％的对映体过量(％e.e.)的单光学异构体。在一个实施例中，单光学异构体以≥99％的对映体过量(％e.e.)存在。
式(I)化合物中的一些可以是结晶并且可以具有超过一种结晶形式。应理解，本发明涵盖具有可用于MCT4抑制活性的性质的任何结晶形式或非晶形式或其混合物。如何通过下文所描述的标准测试测定结晶形式或非晶形式的功效是众所周知的。
众所周知，结晶材料可以使用例如X射线粉末衍射(下文为XRPD)分析和差示扫描量热法(下文为DSC)的常规技术来加以分析。
作为实例，实例62的化合物展现结晶度并且结晶形式(形式A)已经被识别。
因此，本公开的另一个方面是化合物A(实例62)的形式A。
根据本公开，提供化合物A的结晶形式(形式A)，其具有使用CuKα辐射测量的具有在约2θ＝7.8°下的至少一个特定峰的XRPD图。
根据本公开，提供化合物A的结晶形式(形式A)，其具有使用CuKα辐射测量的具有在约2θ＝19.0°下的至少一个特定峰的XRPD图。
根据本公开，提供化合物A的结晶形式(形式A)，其具有通过CuKα辐射测量的具有在约2θ＝7.8°和19.0°下的至少两个特定峰的XRPD图。
根据本公开，提供化合物A的结晶形式(形式A)，其具有通过CuKα辐射测量的具有在约2θ＝7.8°、9.2°、9.5°、10.4°、11.6°、15.8°、18.3°、19.0°、22.3°和25.3°下的特定峰的XRPD图。
根据本公开，提供化合物A的结晶形式(形式A)，其具有通过CuKα辐射测量的与图1中示出的XRPD图实质上相同的XRPD图。
根据本公开，提供化合物A的结晶形式(形式A)，其具有通过CuKα辐射测量的具有在2θ＝7.8°±0.2°2θ下的至少一个特定峰的XRPD图。
根据本公开，提供化合物A的结晶形式(形式A)，其具有通过CuKα辐射测量的具有在2θ＝19.0°±0.2°2θ下的至少一个特定峰的XRPD图。
根据本公开，提供化合物A的结晶形式(形式A)，其具有通过CuKα辐射测量的具有在2θ＝7.8°和19.0°(其中所述值可以±0.2°2θ)下的至少两个特定峰的XRPD图。
根据本公开，提供化合物A的结晶形式(形式A)，其具有通过CuKα辐射测量的具有在2θ＝7.8°、9.2°、9.5°、10.4°、11.6°、15.8°、18.3°、19.0°、22.3°和25.3°(其中所述值可以±0.2°2θ)下的特定峰的XRPD图。
化合物A形式A的DSC分析展示具有约210.2℃的始点和在约213.2℃下的峰的熔化吸热(图2)。
因此，DSC分析展示化合物A形式A是具有在约210.2℃下的熔化始点和在约213.2℃下的峰的高熔化固体。
当声明本公开涉及化合物A的结晶形式即形式A时，结晶度是适宜地大于约60％、更适宜地大于约80％、优选地大于约90％并且更优选地大于约95％。最优选地，结晶度大于约98％。
应理解，XRPD图的2θ值可能因机器不同或因样品不同而略有变化，并且因此所引用的值不应理解为绝对的。
已知可以获得取决于测量条件(例如所用设备或机器)而具有一个或多个测量误差的 XRPD图。确切地说，众所周知XRPD图中的强度可以取决于测量条件而波动。因此，应理解，本公开的化合物A形式A不限于落入本公开的范围内的提供与图1中示出的XRPD 图具有一致性的XRPD图的晶体和提供与图1中示出的XRPD图实质上相同的XRPD图的任何晶体。XRPD领域的技术人员能够判断XRPD图的实质一致性。
XRPD领域的技术人员应理解，峰的相对强度可能受例如尺寸超过30微米并且纵横比不统一的晶粒影响，所述晶粒可能影响样品分析。所属领域的技术人员还应理解，反射位置可能受样品在衍射仪中样品点所处的精确高度和衍射仪的零点校准影响。样品的表面平坦度还可以具有细微影响。因此，所呈现的衍射图数据不应被视为绝对值(Jenkins,R和Snyder,R.L.《X射线粉末衍射测定法介绍(Introduction to X-Ray PowderDiffractometry)》约翰·威利父子出版公司(John Wiley&Sons)1996；Bunn,C.W.(1948),《化学晶体学 (Chemical Crystallography)》,伦敦克拉伦登出版社(Clarendon Press,London)；Klug,H.P. 和Alexander,L.E.(1974),《X射线衍射程序(X-Ray DiffractionProcedures)》)。
一般来说，X射线粉末衍射图中衍射角的测量误差是约±0.2°2θ，并且当考虑图1中的 XRPD图时和当读取表A时，应将所述测量误差度考虑在内。
此外，应理解，强度可能取决于实验条件和样品制备(优选取向)而波动。
式(I)化合物包括一个或多个手性中心。在本说明书中的结构或化学名称不指示手性的情况下，结构或名称意欲涵盖对应于该结构或名称的任何单立体异构体(即任何单手性异构体)以及任何立体异构体(例如外消旋体)混合物。所属领域中众所周知所述光学活性形式可以如何制备。举例来说，单立体异构体可以通过使用例如手性色谱分离将其与异构体(例如外消旋体)混合物分离来获得。在其它实施例中，单立体异构体是通过由例如手性起始材料进行直接合成来获得。
其中X表示O的式(I)化合物可以例如通过使式(II)化合物
Figure BDA0003645404260000241
或其盐与式(III)化合物
Figure BDA0003645404260000242
或其盐(其中W是例如Cl、Br、I或OTf的合适离去基，并且R1、R2、环A、环B 和环C如本文实施例中的任一个中所定义)反应来制备。反应适宜在合适温度(例如介于 60℃到80℃范围内)下在存在碱(例如碳酸铯)的情况下和在存在合适催化剂(例如Ruphos Pd第3代)和配体(例如Ruphos)的情况下在合适溶剂(例如2-甲基四氢呋喃)中执行。
或者，取决于环A的性质，式(I)化合物或其药学上可接受的盐还可以通过在合适温度(例如介于60℃到120℃范围内)下使用所属领域的技术人员熟知的标准芳香族取代条件，例如用合适碱(例如二异丙基乙胺)在合适溶剂(例如1-丁醇)中使式(II)化合物或其盐与式(III)化合物或其盐相互反应来制备。
因此，式(II)和(III)化合物以及其盐适用作式(I)化合物制备中的中间物并且提供另一个实施例。
式(II)化合物可以例如通过以下方案，即方案1来制备：
Figure BDA0003645404260000251
其中PG是例如Boc的合适氮保护基。
步骤1：在合适温度(例如介于20℃到50℃范围内)下在存在合适碱(例如KOH) 的情况下在合适溶剂(例如DMF)中使用合适亲核试剂(例如苯甲酸)执行。
步骤2：在合适温度(例如介于70℃到90℃范围内)下在合适溶剂(例如AcOH)中使用合适环化基质(例如3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-胺)执行。
步骤3：在室温下在所属领域的技术人员熟知的标准水解条件，例如含1M NaOH(水溶液)的EtOH下执行。
步骤4：使用所属领域的技术人员熟知的标准条件执行。反应可以在室温下使用标准光延条件，用合适醇基质(例如3-羟基吡咯烷-1-叔丁酯)和含三苯膦和DIAD的THF执行。
步骤5：使用所属领域的技术人员熟知的标准脱保护条件执行。举例来说，当PG是Boc时，反应可以在室温下在MeOH中使用含4M HCl的1,4-二噁烷执行。
其中R1和R2是氢的式(III)化合物可以例如通过在合适温度下(例如在室温下)使式(IV)化合物
Figure BDA0003645404260000252
或其盐与合适氯化试剂(例如三氯异氰脲酸)在合适溶剂(例如二氯乙烷)中反应，接着与合适环C基胺(例如吗啉)反应来制备，其中W是例如Cl、Br、I或OTf的合适离去基，并且环A、环B和环C如本文实施例中的任一个中所定义。在一个实施例中，环 A是苯基并且环B是哒嗪基。
其中X表示CH2的式(I)化合物可以例如通过使其中R1、R2、环A、环B和环C如本文实施例中的任一个中所定义的式(III)化合物或其盐与式(V)化合物
Figure BDA0003645404260000261
或其盐反应来制备。反应适宜在合适温度(例如60℃到90℃)下在存在碱(例如碳酸铯)的情况下和在存在合适催化剂(例如Ruphos Pd第3代)和配体(例如Ruphos)的情况下在合适溶剂(例如1,4-二噁烷)中执行。
因此，式(V)化合物还适用作式(I)化合物制备中的中间物并且提供另一个实施例。
式(V)化合物可以例如通过以下方案，即方案2来制备：
Figure BDA0003645404260000262
其中PG是例如Boc的合适氮保护基并且Y是例如Cl、Br、I或OMs的合适离去基。
步骤1：使用将OH转化成合适离去基的条件执行，例如如果选择Br作为离去基，那么反应可以在0℃到室温的温度范围内使用所属领域的技术人员熟知的条件，例如用含三苯膦、四溴甲烷的DCM来执行。
步骤2：在合适温度(例如介于60℃到80℃范围内)下在存在合适碱(例如碳酸钾)的情况下在合适溶剂(例如DMF)中使用合适亲核试剂(例如戊烷-2,4-二酮)执行。
步骤3：在合适温度(例如介于70℃到90℃范围内)下在合适溶剂(例如AcOH)中使用合适环化基质(例如3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-胺)执行。
步骤4：使用所属领域的技术人员熟知的标准脱保护条件执行。举例来说，当PG是Boc时，反应可以在室温下在MeOH中使用含4M HCl的1,4-二噁烷执行。
或者，其中X表示CH2的式(I)化合物可以通过使式(VI)化合物
Figure BDA0003645404260000271
或其盐(其中W是例如Cl、Br、I或OTf的合适离去基并且环A如本文实施例中的任一个中所定义)与式(VII)化合物
Figure BDA0003645404260000272
或其盐(其中Z是例如频哪醇硼酸酯、硼酸或有机锡的合适离去基并且R1、R2、环B和环C如本文实施例中的任一个中所定义)反应来制备。当Z是频哪醇硼酸酯时，那么反应适宜在合适温度(例如60℃到90℃)下在存在碱(例如碳酸铯)的情况下和在存在合适催化剂(例如Xphos Pd第2代)的情况下在合适溶剂(例如1,4-二噁烷与水的混合物) 中执行。在一个实施例中，R1和R2表示氢，环A是吡嗪基，环B是苯基并且环C是4- 甲基-1-哌嗪基。
式(VI)化合物或其盐可以通过使用标准芳香族取代化学方法使式(V)化合物或其盐与环A反应来制备。环A具有合适离去基(例如氯或溴)，并且反应适宜在合适温度(例如60℃到120℃)下在存在合适碱(例如二异丙基乙胺)的情况下在合适溶剂(例如1-丁醇)中执行。或者，式(VI)化合物或其盐可以通过使用标准交叉偶合条件使式(V)化合物或其盐与环A反应来制备。在合适温度(例如60℃到90℃)下在存在碱(例如碳酸铯)的情况下和在存在合适催化剂(例如Ruphos Pd第3代)的情况下在合适溶剂(例如 1,4-二噁烷)中，环A具有合适离去基(例如氯、溴或碘)。
或者，其中X表示CH2的式(I)化合物可以通过使式(VIII)化合物
Figure BDA0003645404260000281
或其盐与合适环C基胺反应来制备，其中环A、环B和环C如本文实施例中的任一个中所定义。反应可以在所属领域的技术人员熟知的标准条件下，例如在60℃下用含三乙胺的THF中执行。
或者，其中X表示CH2的式(I)化合物可以通过使式(IX)化合物
Figure BDA0003645404260000282
或其盐与合适环C基胺反应来制备，其中环A、环B和环C如本文实施例中的任一个中所定义。反应可以在所属领域的技术人员熟知的标准条件下，例如在室温下用含三乙酰氧基硼氢化钠、AcOH的DCM中执行。
应了解，本公开化合物中的各种环取代基中的某些可以在上文所提及的过程之前或紧接地在上文所提及的过程之后通过标准芳香族取代反应引入或通过常规官能基修饰生成，并且因此包括于本公开的方法方面中。举例来说，式(I)化合物可以通过标准芳香族取代反应或通过常规官能基改性转化成另外的式(I)化合物。所述反应和改性包括例如通过芳香族取代反应进行的取代基引入、取代基还原、取代基烷基化和取代基氧化。用于所述程序的试剂和反应条件在化学领域中为人所熟知。
还应了解，在上文所提及的反应中的一些中，可能需要或期望保护化合物中的任何敏感性基团。需要或期望保护的情况和适用于保护的方法为所属领域的技术人员所知。常规保护基可以根据标准惯例(关于说明，参见T.W.Green,《有机合成中的保护基(Protective Groups in Organic Synthesis)》,约翰·威利父子出版公司,1991)来使用。因此，如果反应物包括例如氨基、羧基或羟基的基团，那么在本文所提及的反应中的一些中可能期望保护所述基团。
在提及式(II)到(IX)化合物或其盐的实施例中的任一个中，应理解，所述盐不需要为药学上可接受的盐。
式(I)化合物和用于制造式(I)化合物的任何中间物可以通过与实例部分中示出的方法类似的方法来制备。
生物分析
以下活体外分析用于测量本文所描述的化合物的作用。
在整个分析描述中，已经使用以下缩写：BCECF AM＝2',7'-双-(2-羧乙基)-5-(和-6)- 羧基荧光素，乙酰氧基甲酯；DMSO＝二甲亚砜；FBS＝胎牛血清；HBSS＝汉克平衡盐溶液(Hanks Balanced Salt Solution)；HEPES＝4-(2-羟乙基)-1-哌嗪乙磺酸；OD＝光学密度； RPMI＝洛斯维·帕克纪念研究所(Roswell Park Memorial Institute)1640培养基。
在分析内，通过测量IC50值(抑制50％生物活性的测试化合物的浓度)来测定化合物功效。在Screener(Genedata AG)分析包内使用智能拟合模型计算IC50值。
基本原理：
MCT4主要在正常骨骼肌中被表达并且在一系列实体肿瘤内被上调，在所述实体肿瘤中其具有促进乳酸盐从细胞中流出，由此防止胞内酸化的作用。因此，在肿瘤学环境中，MCT4活性抑制表示潜在治疗机会。MCT1是紧密相关的单羧酸转运蛋白并且因此是MCT4 抑制剂的关键选择性标靶。即使MCT4主要参与乳酸盐的细胞流出，但在如下文关于分析系统(b)和(d)所描述的活体外系统中驱动乳酸盐流入也是有可能的。
这些测试的目的在于识别影响主要表达MCT4的天然糖酵解细胞系中的乳酸盐流出和以下活体外分析系统内乳酸盐向细胞中转运的化合物：
a)SK-Br-3细胞(ATCC HTB-30)—主要表达MCT4的天然糖酵解人类乳腺癌系(通过蛋白质印迹法(Western blotting)确认)
b)NCI-H358细胞(ATCC CRL-5807)—主要表达MCT4、少量MCT2并且不表达 MCT1的人类肺腺癌系(通过蛋白质印迹法确认)
c)K562细胞(ATCC CCL-243)—主要表达MCT1、少量MCT2并且不表达MCT4 的人类红白血病系(通过蛋白质印迹(Western blot)确认)
d)INS-1MCT4细胞(瑞士日内瓦大学(University of Geneva,Switzerland)赠给阿斯利康公司(AstraZeneca)的亲本INS-1系)—天然地不存在所有MCT同种型并且经内部工程改造以稳定表达人类MCT4的大鼠胰腺β-细胞系(通过蛋白质印迹确认)。
分析系统(a)：
通过声音分配(在一定浓度范围内120nl/孔)将含式I化合物的100％DMSO添加到空384孔分析盘(Costar编号3712)中。在含有1％L谷氨酰胺(Sigma编号G7513)和 20％FBS(Sigma编号F7524)的40μl RPMI(Sigma编号R0883)培养基中将SK-Br-3细胞(ATCC HTB-30)以4000个细胞/孔的密度接种到分析盘中—直接接种到测试化合物上。将分析盘加盖并且在37℃和5％CO2下培育4小时。
在与测试化合物一起培育之后，使用自动化尖端基移液平台(CyBio Felix)将5μl培养基转移到二级384孔分析盘(Costar编号3712)中。通过商业乳酸盐检测试剂盒(Trinity Biotech编号735-10)采用以下偶联酶原理定量培养基中所存在的乳酸的量：通过乳酸盐氧化酶将乳酸转化成丙酮酸盐和H2O2；在存在所形成H2O2的情况下，过氧化酶催化色原体前体的氧化缩合以产生具有在540nm处的最大吸收的着色染料(样品内越来越大的吸光度与越来越多的乳酸盐成正比)。随后，在自动化微盘读数仪(PerkinElmer EnVision)上使用535nm过滤器测量吸光度，并且以被DMSO(最大分析信号)或与本专利中所描述的化学物质相关的化学物质(最小分析信号)处理的对照孔标准化OD值—之后拟合浓度反应曲线以测定IC50值。
分析系统(b)、(c)：
通过声音分配(在一定浓度范围内90nl/孔)将含式I化合物的100％DMSO添加到空384孔分析盘(Costar编号3683)中。
将NCI-H358细胞(ATCC CRL-5807)或K562细胞(ATCC CCL-243)直接从冷冻保存中解冻，洗涤并再悬浮于具有1mM[最终]HEPES(Gibco编号15630)的HBSS(Gibco 编号14170)中。
使细胞装载有pH敏感性染料BCECF AM(Invitrogen编号B1150)，之后进行洗涤以去除过量染料，并在具有1mM[最终]HEPES的30μl HBSS中以15,000个细胞/孔 (NCI-H358)或30,000个细胞/孔(K562)的密度接种到分析盘中—直接接种到测试化合物上。将分析盘加盖并在盘离心机中在170g下旋转1分钟。随后，将盘包覆于箔中并在室温下在暗处培育1小时。
在与测试化合物一起培育之后，将于具有1mM[最终]HEPES的HBSS中制造的10μl25mM钠-1-乳酸盐(Sigma编号L7022)直接添加到测试孔内的30μl培养基中—产生6.25 mM[最终]。这次添加直接在FLIPR Tetra平台(分子仪器公司(Molecular Devices))上作为实时动力学读取方案的一部分执行。随着时间推移测量使用过滤器组 Ex470-495_Em515-575的细胞荧光，并且记录从基线(在乳酸盐添加前)到‘乳酸盐添加 +80秒’的变化。计算每个测试孔的相对于基线的变化％，并且以被DMSO(最大分析信号)或与本专利中所描述的化学物质相关的化学物质(最小分析信号)处理的对照孔标准化值—之后拟合浓度反应曲线以测定IC50值。
分析系统(d)：
通过声音分配(在一定浓度范围内90nl/孔)将含式I化合物的100％DMSO添加到空384孔分析盘(Costar编号3683)中。
通过用插入pcDNA3.1(ThermoFisher编号V79020)哺乳动物表达载体中的以下DNA序列转染亲本细胞背景来生成INS-1MCT4细胞：
atgggaggggccgtggtggacgagggccccacaggcgtcaaggcccctgacggcggctggggctgggccgtgctcttcggct gtttcgtcatcactggcttctcctacgccttccccaaggccgtcagtgtcttcttcaaggagctcatacaggagtttgggatcggctacagcga cacagcctggatctcctccatcctgctggccatgctctacgggacaggtccgctctgcagtgtgtgcgtgaaccgctttggctgccggcccg tcatgcttgtggggggtctctttgcgtcgctgggcatggtggctgcgtccttttgccggagcatcatccaggtctacctcaccactggggtcat cacggggttgggtttggcactcaacttccagccctcgctcatcatgctgaaccgctacttcagcaagcggcgccccatggccaacgggctg gcggcagcaggtagccctgtcttcctgtgtgccctgagcccgctggggcagctgctgcaggaccgctacggctggcggggcggcttcct catcctgggcggcctgctgctcaactgctgcgtgtgtgccgcactcatgaggcccctggtggtcacggcccagccgggctcggggccgc cgcgaccctcccggcgcctgctagacctgagcgtcttccgggaccgcggctttgtgctttacgccgtggccgcctcggtcatggtgctggg gctcttcgtcccgcccgtgttcgtggtgagctacgccaaggacctgggcgtgcccgacaccaaggccgccttcctgctcaccatcctgggc ttcattgacatcttcgcgcggccggccgcgggcttcgtggcggggcttgggaaggtgcggccctactccgtctacctcttcagcttctccatg ttcttcaacggcctcgcggacctggcgggctctacggcgggcgactacggcggcctcgtggtcttctgcatcttctttggcatctcctacggc atggtgggggccctgcagttcgaggtgctcatggccatcgtgggcacccacaagttctccagtgccattggcctggtgctgctgatggagg cggtggccgtgctcgtcgggcccccttcgggaggcaaactcctggatgcgacccacgtctacatgtacgtgttcatcctggcgggggccg aggtgctcacctcctccctgattttgctgctgggcaacttcttctgcattaggaagaagcccaaagagccacagcctgaggtggcggccgcggaggaggagaagctccacaagcctcctgcagactcgggggtggacttgcgggaggtggagcatttcctgaaggctgagcctgagaaaa acggggaggtggttcacaccccggaaacaagtgtctga(SEQ ID NO:1)
在含有1％L谷氨酰胺(Sigma编号G7513)、10％FBS(Sigma编号F7524)、10mM[最终]HEPES(Gibco编号15630)、0.004％β-巯基乙醇(Sigma编号M6250)和100pg/ml 遗传霉素(Geneticin)(ThermoFisher编号10131027)的RPMI(Sigma编号R0883)培养基中在抗生素选择下在37℃和5％CO2下持续培养所得细胞池。选择并扩增单独克隆体，之后在多个单独小瓶中冷冻保存以供持续使用。在生物分析中进行测试之前，对单独INS-1 MCT4冷冻小瓶进行解冻并持续传代数周—在先前所描述的遗传霉素选择培养基中—以获得必需细胞数量。在测试点，将细胞从培养烧瓶表面分离，汇集，洗涤并再悬浮于具有1mM [最终]HEPES(Gibco编号15630)的HBSS(Gibco编号14170)中。
使细胞装载有pH敏感性染料BCECF AM(Invitrogen编号B1150)，之后进行洗涤以去除过量染料，并在具有1mM[最终]HEPES的30μl HBSS中以15,000个细胞/孔的密度接种到分析盘中-直接接种到测试化合物上。将分析盘加盖并在盘离心机中在170g下旋转 1分钟。随后，将盘包覆于箔中并在室温下在暗处培育1小时。
在与测试化合物一起培育之后，将于具有1mM[最终]HEPES的HBSS中制造的10μl25mM钠-1-乳酸盐(Sigma编号L7022)直接添加到测试孔内的30μl培养基中-产生6.25 mM[最终]。这次添加直接在FLIPR Tetra平台(分子仪器公司，Molecular Devices)上作为实时动力学读取方案的一部分执行。随着时间推移测量使用过滤器组 Ex470-495_Em515-575的细胞荧光，并且记录从基线(在乳酸盐添加前)到‘乳酸盐添加 +80秒’的变化。计算每个测试孔的相对于基线的变化％，并且以被DMSO(最大分析信号)或与本专利中所描述的化学物质相关的化学物质(最小分析信号)处理的对照孔标准化值—之后拟合浓度反应曲线以测定IC50值。
以下活体内分析用于测量本文所描述的化合物以及其它药剂的作用。
人类肺癌异种移植模型-VEGFR TKI组合
MCT4抑制剂的活体内功效已经在人类异种移植模型中得到测试。NSCLC细胞系NCIH358可以在雌性裸小鼠中以皮下异种移植物形式生长并且由两侧测径规测量法计算肿瘤体积。对于功效研究，在0.1ml体积的无血清培养基(RPM1)和基质胶中将三百万个NCI H358细胞皮下接种到动物左胁腹上。在细胞植入之后14天将动物分派到治疗组中，并使其通过经口管饲接受AZD2171(3mg/kg QD)(Wedge等人,(2005)《癌症研究》 65:4389-4400)、式(I)化合物(100mg/kg BID)或两者组合。每天给药两次，经口给予 0.5％羟丙基甲基纤维素/0.1％Tween 80媒剂对照。给药持续17天，并且在研究的持续时间内每周记录两次肿瘤体积、体重和肿瘤状况。
测试实例62的结果示于图3中。与媒剂组相比，VEGF抑制剂AZD2171有效地展现33％(p≤0.00l)肿瘤消退。AZD2171与MCT4抑制剂实例62的组合展现等于72％肿瘤消退(与对照相比，p≤0.00l)的更剧烈反应，所述反应还与单独给予的AZD2171显著不同 (p＝0.013)。研究终止时的群组大小：媒剂n＝11；实例62n＝4；AZD2171 n＝10；AZD2171 加实例62n＝9。
小鼠同系模型-α-CTLA4抗体组合和αPD-1抗体组合
MCT4抑制剂的活体内功效已经在鼠同系模型中得到测试。为了测试式(I)MCT4抑制剂的选择性影响，使用CRISPR精确基因组编辑将MCT1从MC38同系细胞系模型中敲除(KO)。MC38 MCT1 KO鼠结肠直肠细胞系可以在雌性C57.B16小鼠中皮下生长并且由两侧测径规测量法计算肿瘤体积。对于功效研究，在0.1ml体积的无血清DMEM培养基中将一千万个细胞皮下接种到动物左胁腹上。在细胞植入时根据体重对动物进行随机分组，并在第二天开始治疗。在图4中示出的这些研究中的第一个中，单一疗法治疗组通过经口管饲接受式(I)化合物(100mg/kg BID)或腹膜内接受αCTLA4抗体(抗CTLA-4 9D9 mlgG1抗体，描述于WO200712373中)(10mg/kg每周两次)。组合组由式(I)化合物(100 或10mg/kg PO BID)与αCTLA4抗体(10mg/kg IP每周两次)组成。在图5中示出的这些研究中的第二个中，单一疗法治疗组接受式(I)化合物(30mg/kg PO BID)与αPD-1 抗体(来自Bio X Cell，目录号BE0146，批次665417s1，6.78mg/mL)(10mg/kg IP每周两次)。在两个研究中，给药持续长达6周，并且每周记录三次肿瘤体积、体重和肿瘤状况。在两个研究中，媒剂是通过经口管饲每天给予两次的0.5％羟丙基甲基纤维素/0.1％ Tween 80与每周腹膜内给予两次的PBS/a。
第一同系研究中的测试实例62的结果示于图4中。示出单独肿瘤生长概况，其中使用基于1.5cm3最大肿瘤体积、肿瘤状况或动物福利限制的事件发生时间准则开始动物研究。由于在实验后期期间停止动物研究，所以在第15天计算几何平均抑制％值。与媒剂对照相比，实例62单一疗法(100mg/kg)在该日递送60.0％p≤0.05生长抑制。具有6.1％NS的单一疗法αCTLA4(10mg/kg)是无效的。实例62(10和100mg/kg)与αCTLA4抗体的组合分别展示67.4％p≤0.01和82.2％p≤0.001抑制，其中实例62(100mg/kg BID)加αCTLA4 抗体组合达到相对于单独给予的实例62(100mg/kg BID)的统计显著性(p＝0.0311)。第 15天时的群组大小：媒剂n＝12；实例62(100mg/kg)n＝11；αCTLA4抗体(10mg/kg) n＝11；实例62(100mg/kg)加αCTLA4抗体n＝12；实例62(10mg/kg)加αCTLA4抗体 n＝9。
对于第二同系研究，测试实例62结果示于图5中。同样地，示出单独肿瘤生长概况，其中使用基于1.5cm3最大肿瘤体积、肿瘤状况或动物福利限制的事件发生时间准则开始动物研究。由于在实验后期期间的不同时间动物达到事件发生时间终点，所以在第13天计算几何平均抑制％值。与媒剂对照相比，实例62单一疗法(30mg/kg)在该日递送30.1％(NS)生长抑制。单一疗法αPD-1(10mg/kg)功效是类似的，递送33.4％NS抑制。实例62 (30mg/kg)与αPD-1抗体的组合比展示82.3％p≤0.001生长抑制的单一疗法更有效。第13 天时的群组大小：媒剂n＝8；实例62(30mg/kg)n＝10；αPD-1抗体(10mg/kg)n＝11；实例62(30mg/kg)加αPD-1抗体n＝10。
应注意，图4和5中示出的蜘蛛图表示比较媒剂对照与治疗组生长的单独动物肿瘤生长数据。
以下从分析a)到d)的数据是针对实例生成的(所报告的pIC50值是至少三个重复实验的计算平均值结果，其中pIC50值是两个重复实验的计算平均值结果的标记*的实例32除外)：
Figure BDA0003645404260000341
Figure BDA0003645404260000351
Figure BDA0003645404260000361
短划“-”＝未经测试
数据展示本文所描述的化合物影响从主要表达MCT4的肿瘤细胞系中的两个乳酸盐流出并且在适当条件下抑制乳酸盐向MCT4依赖型细胞中的转运并且因此适用作MCT4抑制剂。
化合物可以基于另外生物或物理性质来进一步选择，所述性质可以通过所属领域中已知的技术来测量并且可以用于评估或选择用于治疗或预防应用的化合物。
由于式(I)化合物和其药学上可接受的盐的MCT4抑制活性，所以预期其可用于疗法中。
术语“疗法”意欲具有其处置疾病以便完全或部分缓解其症状中的一个、一些或全部或校正或补偿基础病理的通常含义。除非存在相反的特定指示，否则术语“疗法”还包括“预防”。术语“治疗性”和“治疗上”应当以对应方式解释。
术语“预防”意欲具有其通常含义并且包括用于预防疾病发展的一级预防和其中疾病已经发展并且暂时地或永久地保护患者以防疾病加剧或恶化或罹患疾病相关新症状的二级预防。
术语“治疗”与“疗法”同义使用。类似地，术语“治疗”可以被视为“施加疗法”，其中“疗法”如本文所定义。
在提及“癌症”的情况下，所述癌症包括非转移癌以及转移癌两者，以使得治疗癌症涉及治疗原发性肿瘤以及肿瘤转移两者。
在一个实施例中，提供用于疗法中的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于制造药剂的用途。
在一个实施例中，提供用于治疗MCT4介导的疾病的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，MCT4介导的疾病是癌症。在一个实施例中，癌症选自由以下组成的组：结肠直肠癌、胶质母细胞瘤、胃癌、卵巢癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性骨髓白血病、头颈部鳞状细胞癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、肝细胞癌、肾癌、甲状腺癌、胰腺癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌。
在一个实施例中，癌症是非小细胞肺癌。
在一个实施例中，癌症是肺腺癌。
在一个实施例中，提供用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于制造用以治疗MCT4 介导的疾病的药剂的用途。在一个实施例中，MCT4介导的疾病是癌症。在一个实施例中，癌症选自由以下组成的组：结肠直肠癌、胶质母细胞瘤、胃癌、卵巢癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性骨髓白血病、头颈部鳞状细胞癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、肝细胞癌、肾癌、甲状腺癌、胰腺癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌。
在一个实施例中，癌症是非小细胞肺癌。
在一个实施例中，癌症是肺腺癌。
在一个实施例中，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于制造用以治疗癌症的药剂的用途。
在一个实施例中，提供用于治疗需要所述治疗的温血动物的其中MCT4抑制具有益处的疾病的方法，所述方法包含向所述温血动物施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。在一个实施例中，疾病是癌症。在一个实施例中，癌症选自由以下组成的组：结肠直肠癌、胶质母细胞瘤、胃癌、卵巢癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性骨髓白血病、头颈部鳞状细胞癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、肝细胞癌、肾癌、甲状腺癌、胰腺癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌。
在一个实施例中，癌症是非小细胞肺癌。
在一个实施例中，癌症是肺腺癌。
在一个实施例中，提供用于治疗需要所述治疗的温血动物的癌症的方法，所述方法包含向所述温血动物施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
相对于MCT1选择性地表达MCT4的肿瘤越来越有可能对用MCT4抑制剂进行的治疗有反应。因此，肿瘤以低水平表达MCT1的患者对MCT4抑制剂的反应有可能比肿瘤以较高水平表达MCT1的那些患者更好。一般来说，肿瘤具有高MCT4:MCTl表达比(归因于低MCT1表达水平)的患者有可能展示更好反应，因此评估MCT1和MCT4两者的相对表达水平提供用于选择进行用MCT4抑制剂进行的治疗的患者的手段。用于测定MCT1 和MCT4的相对表达水平的方法在所属领域中为人所知并且描述于W02010/089580中，所述案以引用的方式并入本文中。
在一个实施例中，提供治疗癌症的方法，其包含(i)测试从患有或有可能患有癌症的患者获得的肿瘤样品相对于MCT1的MCT4选择性表达，和(ii)向患有相对于MCT1选择性地表达MCT4的肿瘤的患者施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐。
在一个实施例中，提供用于治疗患者癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中癌症肿瘤相对于MCT1选择性地表达MCT4。
在一个实施例中，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于制造用以治疗患者癌症的药剂的用途，其中癌症肿瘤相对于MCT1选择性地表达MCT4。
在一个实施例中，提供用于治疗需要所述治疗的温血动物的癌症的方法，其包含向所述温血动物施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中癌症肿瘤相对于 MCT1选择性地表达MCT4。
术语“治疗有效量”是指如本文实施例中的任一个中所描述的式(I)化合物可有效地提供个体的“疗法”或可有效地“治疗”个体的疾病或病症的量。在癌症的情况下，如上文“疗法”、“治疗”和“预防”的定义中所描述，治疗有效量可以引起在个体中可观察到或可测量的变化中的任一种。举例来说，有效量可以减少癌症或肿瘤细胞的数量；减小总体肿瘤尺寸；抑制或阻挡肿瘤细胞浸渗到包括例如软组织和骨骼的外周器官中；抑制并阻挡肿瘤转移；抑制并阻挡肿瘤生长；缓解癌症相关症状中的一个或多个达到某一程度；降低发病率和死亡率；提高生活质量；或所述效应的组合。有效量可以是足以减少对MCT4 活性抑制有反应的疾病症状的量。对于癌症疗法，活体内功效可以例如通过评估存活持续时间、疾病发展发生时间(TTP)、反应率(RR)、反应持续时间和/或生活质量来测量。如所属领域的技术人员所辨识，有效量可以取决于施用途径、赋形剂使用和与其它药剂的共使用而变化。举例来说，在使用组合疗法的情况下，本说明书中所描述的式(I)化合物或药学上可接受的盐的量和一种或多种其它药学活性剂的量在组合时可共同有效地治疗动物患者的靶向病症。在这种情形下，如果组合量在组合时足以减少如上文所描述的对MCT4 活性抑制有反应的疾病症状，那么其呈“治疗有效量”。通常，所述量可以由所属领域的技术人员通过例如以本说明书中针对式(I)化合物或其药学上可接受的盐所描述的剂量范围和一种或多种其它药学活性化合物的一种或多种批准或以其它方式公布的剂量范围为起始来测定。
“温血动物”包括例如人类。
本说明书中所描述的抗癌治疗可以适用作单一疗法，或除了施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐以外，还可以涉及常规手术、放射疗法或化学疗法；或所述额外疗法的组合。所述常规手术、放射疗法或化学疗法可以与用式(I)化合物或其药学上可接受的盐进行的治疗同时、依序或分开施用。
在“同时”施用组合疗法的情况下，所述同时施用包括用包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和额外抗癌物质两者的单剂型(例如锭剂)治疗患者；并且还同时给药各自分别包含相应组合搭配物中的一个的单独剂型。
在“依序”或“分开”施用组合疗法的情况下，所述依序或分开施用包括用包含式(I) 化合物或其药学上可接受的盐的第一剂型(例如锭剂)治疗患者，接着用包含额外抗癌物质的第二剂型治疗同一患者；或用包含特定抗癌物质的单剂型(例如锭剂)治疗患者，接着用包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐的第二剂型治疗同一患者。依序或分开给药之间的间隔可以由熟练执业医生参照本说明书中的信息来判定。
在一个实施例中，提供用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中式 (I)化合物或其药学上可接受的盐是在手术之前施用。
在手术之前施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐以完全或部分去除癌症可以被称作“新辅助疗法”。在此类情境下，施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐的目标一般在于减小靶肿瘤的尺寸以便增加成功切除的机会。因此，在手术之前给药的式(I)化合物或其药学上可接受的盐的时间长度可以由熟练执业医生参照本说明书内的信息来判定。
在一个实施例中，提供用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中式 (I)化合物或其药学上可接受的盐是在手术之后施用。
在一个实施例中，提供用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中式 (I)化合物或其药学上可接受的盐与至少一种额外抗癌物质组合施用。
在一个实施例中，提供用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中式 (I)化合物或其药学上可接受的盐与至少一种额外抗癌物质同时、依序或分开施用。
本文所定义的抗癌治疗可以以单一疗法形式施加，或除了本说明书的化合物以外，还可以涉及常规手术或放射疗法或化学疗法。所述化学疗法可以包括以下类别的抗肿瘤剂中的一种或多种：
(i)如肿瘤医学中所使用的其它抗增生性/抗赘生性药物和其组合，例如烷基化剂(例如顺铂、奥沙利铂(oxaliplatin)、卡铂(carboplatin)、环磷酰胺、氮芥、美法仑(melphalan)、苯丁酸氮芥、白消安、替莫唑胺以及亚硝基脲)；抗代谢物(例如吉西他滨(gemcitabine) 和抗叶酸制剂，例如氟嘧啶(如5-氟尿嘧啶和喃氟啶(tegafur))、雷替曲赛(raltitrexed)、甲氨蝶呤、培美曲塞(pemetrexed)、胞嘧啶阿拉伯糖苷以及羟脲)；抗肿瘤抗生素(例如蒽环霉素，如阿霉素(adriamycin)、博莱霉素(bleomycin)、小红莓、道诺霉素(daunomycin)、表阿霉素(epirubicin)、艾达霉素(idarubicin)、丝裂霉素-C、放线菌素D以及光神霉素 (mithramycin))；抗有丝分裂剂(例如长春花生物碱(如长春新碱、长春碱、长春地辛 (vindesine)以及长春瑞滨(vinorelbine))和紫杉烷类(如紫杉醇和泰索帝(taxotere))以及polo激酶(polokinase)抑制剂)；以及拓扑异构酶抑制剂(例如表鬼臼毒素(如依托泊苷(etoposide)和替尼泊苷(teniposide))、安吖啶、拓朴替康以及喜树碱)；
(ii)抗血管生成剂，例如抑制血管内皮生长因子作用的药剂，例如抗血管内皮细胞生长因子抗体贝伐单抗(bevacizumab)(AvastinTM)和例如VEGF受体酪氨酸激酶抑制剂(例如索拉非尼(sorafenib)、阿西替尼(axitinib)、帕唑帕尼(pazopanib)、舒尼替尼(sunitinib) 和西地尼布(cediranib))；
(iii)免疫疗法方法，包括例如用于增加患者肿瘤细胞的免疫原性的离体和活体内方法，例如用例如白细胞介素2、白细胞介素4或粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子的细胞因子进行的转染；用于减少T细胞无变应性的方法；使用例如被细胞因子转染的树突状细胞的被转染免疫细胞的方法；使用被细胞因子转染的肿瘤细胞系的方法；以及使用抗独特型抗体的方法。具体实例包括靶向PD-1的单克隆抗体(例如纳武单抗(nivolumab)和派姆单抗(pembrolizumab))、靶向PD-L1的单克隆抗体(例如度伐单抗(durvalumab)和阿特珠单抗(atezolizumab))、靶向CTLA4的单克隆抗体(例如替西木单抗(tremelimumab)和伊匹单抗(ipilimumab))或靶向CD73的单克隆抗体(例如奥利克鲁单抗(oleclumab))以及CD40配体融合蛋白和GITR配体融合蛋白；
(iv)乳酸转运蛋白抑制剂，包括例如MCT1抑制剂，例如AZD3965；
(v)靶向肿瘤代谢的药剂，包括GLS1抑制剂、复合物I、线粒体丙酮酸盐载体抑制剂。
因此，在一个实施例中，提供用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种额外抗肿瘤物质。在一个实施例中，提供用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中式(I)化合物或其药学上可接受的盐与额外抗肿瘤物质组合施用。在一个实施例中，存在一种额外抗肿瘤物质。在一个实施例中，存在两种额外抗肿瘤物质。在一个实施例中，存在三种或更多种额外抗肿瘤物质。
在一个实施例中，提供用于同时、分开或依序治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种额外抗肿瘤物质。在一个实施例中，提供用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中式(I)化合物或其药学上可接受的盐与额外抗肿瘤物质同时、分开或依序施用。
在一个实施例中，提供治疗需要所述治疗的温血动物的癌症的方法，其包含向所述温血动物施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种额外抗肿瘤物质，其中式(I) 化合物或其药学上可接受的盐和额外抗肿瘤物质的量共同有效地产生抗癌效应。
在一个实施例中，提供治疗需要所述治疗的温血动物的癌症的方法，其包含向所述温血动物施用式(I)化合物或其药学上可接受的盐，并同时、分开或依序向所述温血动物施用至少一种额外抗肿瘤物质，其中式(I)化合物或其药学上可接受的盐和额外抗肿瘤物质的量共同有效地产生抗癌效应。
在任一个实施例中，额外抗肿瘤物质选自由在上文(i)-(v)点下所列的抗肿瘤物质中的一种或多种组成的组。
在一个实施例中，提供用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种额外抗肿瘤物质，所述至少一种额外抗肿瘤物质选自由以下组成的组：PD-1抗体(例如纳武单抗和派姆单抗)、PD-L1抗体(例如度伐单抗和阿特珠单抗)、CTLA4抗体(例如替西木单抗和伊匹单抗)、CD73抗体(例如奥利克鲁单抗)、CD40配体融合蛋白和GITR配体融合蛋白。
在一个实施例中，提供用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种额外抗肿瘤物质，所述至少一种额外抗肿瘤物质选自由PD-L1抗体(例如度伐单抗和阿特珠单抗)组成的组。
在一个实施例中，提供用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐和度伐单抗。
在一个实施例中，癌症是非小细胞肺癌。在一个实施例中，癌症是肺腺癌。
在一个实施例中，提供用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中式 (I)化合物或其药学上可接受的盐与选自由以下组成的组的至少一种额外抗肿瘤物质同时、分开或依序施用：PD-1抗体(例如纳武单抗和派姆单抗)、PD-L1抗体(例如度伐单抗和阿特珠单抗)、CTLA4抗体(例如替西木单抗和伊匹单抗)、CD73抗体(例如奥利克鲁单抗)、CD40配体融合蛋白和GITR配体融合蛋白。
在一个实施例中，提供用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中式 (I)化合物或其药学上可接受的盐与选自由PD-L1抗体(例如度伐单抗和阿特珠单抗)组成的组的至少一种额外抗肿瘤物质同时、分开或依序施用。
在一个实施例中，提供用于治疗癌症的式(I)化合物或其药学上可接受的盐，其中式 (I)化合物或其药学上可接受的盐与度伐单抗同时、分开或依序施用。
在一个实施例中，癌症是非小细胞肺癌。在一个实施例中，癌症是肺腺癌。
在一个实施例中，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于制造用以治疗癌症的药剂的用途，其中式(I)化合物或其药学上可接受的盐与选自由以下组成的组的至少一种额外抗肿瘤物质同时、分开或依序施用：PD-1抗体(例如纳武单抗和派姆单抗)、PD-L1抗体(例如度伐单抗和阿特珠单抗)、CTLA4抗体(例如替西木单抗和伊匹单抗)、CD73 抗体(例如奥利克鲁单抗)、CD40配体融合蛋白和GITR配体融合蛋白。在一个实施例中，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于制造用以治疗癌症的药剂的用途，其中式(I) 化合物或其药学上可接受的盐与选自由PD-L1抗体(例如度伐单抗和阿特珠单抗)组成的组的至少一种额外抗肿瘤物质同时、分开或依序施用。
在一个实施例中，提供式(I)化合物或其药学上可接受的盐用于制造用以治疗癌症的药剂的用途，其中式(I)化合物或其药学上可接受的盐与度伐单抗同时、分开或依序施用。
在一个实施例中，癌症是非小细胞肺癌。在一个实施例中，癌症是肺腺癌。
在一个实施例中，提供用于治疗需要所述治疗的温血动物的癌症的方法，其包含向所述温血动物同时、分开或依序施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐与选自由以下组成的组的至少一种额外抗肿瘤物质：PD-1抗体(例如纳武单抗和派姆单抗)、 PD-L1抗体(例如度伐单抗和阿特珠单抗)、CTLA4抗体(例如替西木单抗和伊匹单抗)、CD73抗体(例如奥利克鲁单抗)、CD40配体融合蛋白和GITR配体融合蛋白。
在一个实施例中，提供用于治疗需要所述治疗的温血动物的癌症的方法，其包含向所述温血动物同时、分开或依序施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐与选自由PD-L1抗体(例如度伐单抗和阿特珠单抗)组成的组的至少一种额外抗肿瘤物质。
在一个实施例中，提供用于治疗需要所述治疗的温血动物的癌症的方法，其包含向所述温血动物同时、分开或依序施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐与度伐单抗。
在一个实施例中，癌症是非小细胞肺癌。在一个实施例中，癌症是肺腺癌。
在一个实施例中，提供用于治疗癌症的包含式(I)化合物和至少一种额外抗肿瘤物质的药物组合物。在一个实施例中，药物组合物还包含至少一种药学上可接受的赋形剂。在一个实施例中，抗肿瘤物质是抗赘生剂。根据另一个实施例，提供包含以下的试剂盒：
a)呈第一单位剂型的式(I)化合物或其药学上可接受的盐；
b)呈另一个单位剂型的另一种额外抗肿瘤物质；
c)用于含有所述第一单位剂型和另一个单位剂型的容器构件；和任选的
d)使用说明书。
式(I)化合物和其药学上可接受的盐可以作为包含一种或多种药学上可接受的赋形剂的药物组合物来施用。
因此，在一个实施例中，提供包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。组合物可以呈适用于经口使用的形式(例如呈锭剂、口含锭、硬胶囊或软胶囊、水性或油性悬浮液、乳液、可分散粉末或颗粒剂、糖浆或酏剂形式)、适用于局部使用的形式(例如呈乳膏、软膏、凝胶或水性或油性溶液或悬浮液形式)、适用于吸入施用的形式(例如呈精细粉末或液体喷雾剂形式)、适用于吹入施用的形式(例如呈精细粉末形式)或适用于非经肠施用的形式(例如呈用于静脉内、皮下或肌肉内给药的无菌水性或油性溶液形式)或呈用于直肠给药的栓剂形式。组合物可以通过所属领域中熟知的常规程序，使用所属领域中熟知的常规药物赋形剂来获得。因此，意欲用于经口使用的组合物可以含有例如一种或多种着色剂、甜化剂、调味剂和/或防腐剂。
在一个实施例中，提供用于疗法中的包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。
在一个实施例中，提供用于治疗癌症的包含式(I)化合物或其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的赋形剂的药物组合物。在一个实施例中，所述癌症选自由以下组成的组：结肠直肠癌、胶质母细胞瘤、胃癌、卵巢癌、弥漫性大B细胞淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、急性骨髓白血病、头颈部鳞状细胞癌、乳腺癌、前列腺癌、膀胱癌、肝细胞癌、肾癌、甲状腺癌、胰腺癌、小细胞肺癌和非小细胞肺癌。
在一个实施例中，癌症是非小细胞肺癌。
在一个实施例中，癌症是肺腺癌。
式(I)化合物通常以介于2.5-5000mg/m2动物身体区域或约0.05-100mg/kg范围内的单位剂量施用到温血动物，并且这种范围通常提供治疗上有效的剂量。例如锭剂或胶囊的单位剂型通常含有例如0.1-500mg活性成分。日剂量必须取决于所治疗宿主、特定施用途径、共施用的任何疗法和所治疗疾病的严重程度而变化。
实例
本公开的方面可以进一步参照以下非限制性实例来加以界定，所述非限制性实例详细地描述本公开的特定化合物和中间物的制备以及本公开化合物的使用方法。所属领域的技术人员将显而易见，可以在不脱离本公开的范围的情况下对材料和方法两者实施许多修改。
除非另外说明，否则起始材料为市售的。所有溶剂和商业试剂是实验室级别的并且按原样使用。
通用实验
现将于以下实例中说明本发明，在所述实例中，一般来说：
(i)除非另外说明，否则操作在室温(rt)下，即在17℃到25℃范围内并在例如N2或Ar的惰性气体氛围下进行；
(ii)一般来说，通过通常与质谱仪(LCMS)偶联的薄层色谱法(TLC)和/或分析性高效液相色谱法(HPLC或UPLC)追踪反应进程。给定反应时间不必是可达到的最少反应时间；
(iii)必要时，使有机溶液经无水MgSO4或Na2SO4干燥，使用传统相分离技术或通过使用如(xiii)中所描述的SCX进行处理程序，通过在真空中或在Genevac HT-4/EZ-2或Biotage V10中进行旋转蒸发来进行蒸发；
(iv)在存在的情况下，产量不必是可达到的最大产量，并且必要时，如果需要较大量的反应产物，那么重复反应；
(v)一般来说，式(I)最终产物的结构是通过核磁共振(NMR)和/或质谱技术来确认；电喷雾质谱数据是使用与获取正离子和负离子两者数据的Waters单四极质谱仪偶联的Waters Acquity UPLC来获得，并且一般来说，仅报告与母结构相关的离子；质子NMR化学位移值是使用在500MHz场强下操作的Bruker AV500谱仪、在400MHz下操作的Bruker AV400或在300MHz下操作的Bruker AV300以δ尺度测量。除非另外说明，否则NMR谱是在d6-二甲亚砜中在500MHz下获得的。已经使用以下缩写(和其派生词，例如dd，双二重峰等)：s，单重峰；d，二重峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，宽峰；qn，五重峰(quintet)；p，五重峰(pentet)
(vi)除非另外说明，否则含有不对称碳和/或硫原子的化合物未被分解；
(vii)中间物不必完全纯化，但其结构和纯度是通过TLC、分析性HPLC/UPLC和/或NMR分析和/或质谱法来评估；
(viii)除非另外说明，否则快速管柱色谱(fcc)是在Merck Kieselgel二氧化硅(Art.9385) 上、或在反相二氧化硅(Fluka硅胶90C18)上、或在Silicycle滤筒(40-63μm二氧化硅， 4g到330g重量)上、或在Puriflash滤筒(50μm二氧化硅，4g到330g重量)上、或在Grace分解滤筒(4g到120g)上、或在RediSep Rf 1.5快速管柱上、或在RediSep Rf高效Gold快速管柱(150g到415g重量)上、或在RediSep Rf Gold C18反相管柱(20-40μm 二氧化硅)上手动或使用Isco CombiFlash Companion系统或类似系统自动执行；
(ix)制备型反相HPLC(RP HPLC)是在C18反相二氧化硅上通常使用WatersXSelect CSH C18或Phenomenex Gemini-NX axia Prep C18 OBD管柱(5μm二氧化硅，30mm直径，100mm长度)，使用极性渐减的混合物作为洗脱剂，例如使用[含有0.1％甲酸或0.3-0.5％氢氧化铵水溶液(d＝0.91)]作为溶剂A并且使用乙腈作为溶剂B来执行；典型程序如下：从相应地95:5的溶剂A和B混合物到5:95的溶剂A和B混合物(或适当时，替代比率) 在40-50毫升/分钟下的经10-20分钟的溶剂梯度。
(x)使用以下分析性UPLC方法；一般来说，在1毫升/分钟的流动速率的情况下使用反相C18二氧化硅，并且通过电喷雾质谱法和通过记录220-320nm波长范围的UV吸光度进行检测。分析性UPLC是在CSH C18反相二氧化硅上使用尺寸为2.1×50毫米并且粒度为1.7微米的Waters XSelect CSH C18管柱来执行。采用使用极性渐减的混合物作为洗脱剂，例如使用极性渐减的水混合物(含有0.1％甲酸或0.1％氨)作为溶剂A并且使用乙腈作为溶剂B的梯度分析。典型2分钟分析性UPLC方法采用从相应地97:3的溶剂A和B 混合物到3:97的溶剂A和B混合物在约1毫升/分钟下的经1.3分钟的溶剂梯度。
(xi)在获得呈酸加成盐(例如单盐酸盐或二盐酸盐)形式的特定化合物的情况下，盐的化学计量是基于化合物中碱性基团的数量和性质，盐的准确化学计量一般不用例如通过元素分析数据来测定；
(xii)在反应是指微波使用的情况下，使用以下微波反应器中的一个：BiotageInitiator、 Personal Chemistry Emrys Optimizer、Personal Chemistry Smithcreator或CEM Explorer；
(xiii)化合物是通过强阳离子交换(SCX)色谱法使用Isolute SPE快速SCX-2或SCX-3 管柱(International Sorbent Technology Limited,Mid Glamorgan,UK)来纯化；
(xiv)手性制备型色谱是使用HPLC或SFC，使用Waters SFC 100或同等方案进行。选择例如纤维素或直链淀粉手性Daicel管柱或同等物的手性固定相以使样品内的异构体分离达到最佳。半制备型分离通常使用具有30×250毫米尺寸、5微米和100毫升/分钟SFC流动速率或40毫升/分钟HPLC流动速率的手性管柱。检测是通过UV吸光度或质谱检测进行。对于UV检测，使用通常为220nm或254nm的通用波长，或选择一定波长以使产物反应最大化。对于质量检测，采用允许通过靶向MH+反应检测产物的软电离技术，例如电喷雾电离。将样品溶解于可相容溶剂中以用于注射到色谱系统中。对于SFC分离，将柱温保持在约40℃下恒定并且将背压调节到约100-150巴的恒压。
(xv)手性分析是使用SFC或HPLC，使用Waters UPC2 SFC、Agilent 1200HPLC或同等方案进行。选择例如纤维素或直链淀粉手性Daicel管柱或同等物的手性固定相以使样品内的异构体分离达到最佳。分析性分离通常使用具有3.0×150毫米尺寸、3微米和2毫升/分钟SFC流动速率或0.5毫升/分钟HPLC流动速率的手性管柱。检测是通过UV吸光度(DAD)和/或质谱法(全扫描)进行。将样品溶解于浓度为约0.5mg/ml的可相容溶剂中并且直接注射到色谱系统中。对于SFC分离，将柱温保持在约40℃下恒定并且将背压调节到约100-150巴的恒压。
(xvi)一般来说，实例和中间物化合物是使用《ACD名称(ACD Name)》，ChemDrawUltra(CambridgeSoft)的“待命名结构”部分或Biovia Draw 2016来命名；
(xvii)在反应是指脱气的情况下，这种反应可以例如通过用恒定氮气流吹扫反应溶剂达到合适时间段(例如5到10分钟)来执行
(xviii)除了上文所提及的缩写以外，还使用以下缩写：
Figure BDA0003645404260000471
(xix)对于XRPD分析，所用仪器是Bruker D4。通过将结晶材料样品安装在Bruker单硅晶体(SSC)晶片支架上并且借助于显微镜载片将样品展布成薄层来测定X射线粉末衍射图。使样品以30转/分钟旋转(以改进计数统计)并且用由在40kV和40mA下操作的铜制长细聚焦管生成的具有1.5418埃波长的X射线来照射。使准直X射线源穿过设定在V20下的自动可变发散狭缝，并且引导反射的辐射穿过5.89mm防散射狭缝和9.55mm 检测器狭缝。在θ-2θ配置中在2°到40°2θ扫描范围内在反射几何结构中测量样品，其中每0.02°增量具有标称0.12第二曝光。仪器配备有位置敏感性检测器(联凯(Lynxeye))。 X射线粉末衍射领域的技术人员应理解，峰的相对强度可能受例如尺寸超过30微米并且纵横比不统一的晶粒影响，所述晶粒可能影响样品分析。所属领域的技术人员还应理解，反射位置可能受样品在衍射仪中所处的精确高度和衍射仪的零点校准影响。样品的表面平坦度也可以具有细微影响。因此，所呈现的衍射图数据不应被视为绝对值；
(xx)对于差示扫描量热法，所用仪器是TA Instruments Q2000 DSC。通常，在25℃到 300℃的温度范围内以10℃/分钟的恒定加热速率加热含于装配有盖的标准铝盘中的少于3 mg的材料。使用氮气的吹扫气体被使用—流动速率是50毫升/分钟。使用例如来自TA
Figure BDA0003645404260000481
的Universal V.4.5A的标准软件分析热数据。
中间物1：3-(溴甲基)吡咯烷-1-甲酸(R)-叔丁酯
Figure BDA0003645404260000482
在0℃下经5分钟的时段将三苯膦(78g，298.1mmol)分批添加到含3-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸(R)-叔丁酯(50g，248.4mmol)和CBr4(115g，347.8mmol)的DCM(1L) 中。使反应混合物升温到rt，并在室温下搅拌16小时，然后在真空中浓缩并通过fcc，用含0-16％EtOAc的石油醚洗脱来纯化，获得呈无色油状的标题化合物(61.6g，94％)；1H NMR(300MHz,CDCl3)1.47(9H,s),1.72(1H,dq),1.99-2.16(1H,m),2.52-2.68(1H,m), 3.10(1H,dd),3.26-3.44(3H,m),3.49(1H,ddd),3.59(1H,dd)。
中间物2：3-(2-乙酰基-3-氧代丁基)吡咯烷-1-甲酸(R)-叔丁酯
Figure BDA0003645404260000483
在室温下将K2CO3(48.3g，349.8mmol)添加到含3-(溴甲基)吡咯烷-1-甲酸(R)-叔丁酯(61.6g，233.2mmol)和戊烷-2,4-二酮(23.35g，233.2mmol)的DMF(600mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温，用EtOAc(500mL)稀释，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-30％EtOAc的石油醚洗脱来纯化所得粗产物，获得呈淡黄色油状的标题化合物(43.9g，66％)；m/z MH+284。
中间物3：3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸(R)-叔丁酯
Figure BDA0003645404260000491
在室温下将3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-胺(15.20g，154.9mmol)一次性添加到含3-(2- 乙酰基-3-氧代丁基)吡咯烷-1-甲酸(R)-叔丁酯(43.9g，154.9mmol)的AcOH(500mL)中。将反应混合物在80℃下加热16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用5-80％MeOH水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈淡黄色胶状的标题化合物(18.00g，34％)；1H NMR(300MHz,CDCI3)1.45(9H,s),1.70(1H,dt),1.91-2.07(1H, m),2.32-2.44(1H,m),2.60(3H,s),2.67(3H,s),2.78(5H,s),3.06(1H,dt),3.23-3.54(3H,dt)； m/z MH+346。
中间物4：(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(二盐酸盐)
Figure BDA0003645404260000492
将含4M HCl的1,4-二噁烷(200ml，800mmol)添加到含3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸(R)-叔丁酯(18g，52.11mmol)的1,4-二噁烷(50 mL)中。将反应混合物在室温下搅拌16小时。通过过滤收集所得沉淀物，用1,4-二噁烷 (100mL)洗涤并在真空中干燥，获得呈白色固体状的标题化合物(13.80g，83％)，其不经进一步纯化即使用；1H NMR(300MHz,DMSO)1.63(1H,dq),1.90-2.05(1H,m),2.51 (4H,s),2.65(3H,s),2.75-3.13(7H,m),3.26(2H,ddt),7.30(1H,br s)9.28(1H,s),9.52(1H, s)；m/z MH+246。
中间物4B(中间物4的游离碱)：(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基甲基)-[1,2,4]三唑并 [1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000493
在室温下将含1.25M HCl的EtOH(36.4mL，45.51mmol)一次性添加到含3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-甲酸(R)-叔丁酯(2.62g，7.58mmol) 的EtOH(15mL)中。将所得溶液在室温下搅拌5天。在真空中蒸发溶剂，获得呈橙色胶状的粗HCl盐。使用离子交换色谱法，使用SCX管柱将粗产物转化成游离碱。使用1MNH3/MeOH从管柱中洗脱期望产物，并使纯级分蒸发至干，获得呈橙色胶状的标题化合物(1.77g，95％)；1H NMR(500MHz,CDCl3)1.51(1H,dq),1.92(1H,ddd),2.32(1H,p),2.60 (3H,s),2.64(1H,dd),2.69(3H,s),2.80(3H,s),2.82(2H,dd),2.98(1H,dt),3.03-3.13(2H, m)NH未观察到；m/z MH+246。
中间物5：(R)-6-((1-(5-溴代吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并 [1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000501
将DIPEA(4.39mL，25.14mmol)、(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐(2g，6.28mmol)和5-溴-2-氟代吡啶(1.66g，9.43mmol)溶解于正丙醇(10mL)中并密封到微波管中。将反应混合物在微波反应器中在150℃下加热2.5小时并冷却到室温。在减压下移除溶剂。将反应混合物倒入水(100mL)中，用EtOAc(3 ×100mL)萃取，使有机层经Na2SO4干燥，过滤并蒸发，获得黄色固体。通过从EtOAc/ 石油醚结晶来纯化粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(1.30g，52％)；1H NMR(300 MHz,CDCl3)1.90(1H,dq),2.19(1H,dq),2.63(4H,s),2.71(3H,s),2.80(3H,s),2.93(2H, qd),3.24(1H,dd),3.45(1H,q),3.63(2H,q),6.28(1H,d),7.54(1H,dd),8.19(1H,d)；m/z MH+401。
中间物7：1-((6-溴代吡啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪
Figure BDA0003645404260000502
在室温下将6-溴代烟醛(3g，16.13mmol)和1-甲基哌嗪(4.85g，48.39mmol)在 DCM(200mL)中搅拌2小时。添加AcOH(0.097g，1.61mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(6.84g，32.26mmol)并将混合物在室温下搅拌16小时。用饱和NaHCO3水溶液淬灭反应混合物并分离有机层。用EtOAc萃取水层，并将合并有机层干燥(Na2SO4)，过滤并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用0-80％MeOH水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色油状的标题化合物(2.00g，46％)；1H NMR(300MHz,DMSO)2.55(3H,s),2.65 (4H,d),2.91(4H,s),3.49(2H,s),7.37-7.54(2H,m),8.27(1H,d)；m/z MH+270。
中间物8：1-((5-溴代吡啶-2-基)甲基)-4-甲基哌嗪
Figure BDA0003645404260000511
将含5-溴代皮考林醛(3.5g，18.82mmol)和1-甲基哌嗪(5.65g，56.45mmol)的 DCM(20mL)在室温下搅拌2小时。添加AcOH(0.113g，1.88mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(7.98g，37.63mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。在真空中浓缩反应混合物，并通过快速C18色谱法，用0-100％MeOH水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色油状的标题化合物(2.40g，47％)；1H NMR(300MHz,DMSO)2.26(3H,s),2.47(8H, s),3.58(2H,s),7.42(1H,m),8.03(1H,dd),8.62(1H,dd)；m/z MH+270。
中间物9：(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)硼酸
Figure BDA0003645404260000512
在氮气下在室温下将PdCl2(dppf)(21.67mg，0.03mmol)添加到含1-((5-溴代吡啶-2- 基)甲基)-4-甲基哌嗪(160mg，0.59mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼烷)(165mg，0.65mmol)和乙酸钾(116mg，1.18mmol)的1,4-二噁烷(4mL)中。将所得混合物在90℃下搅拌16小时。通过快速C18-快速色谱法、5％到100％MeCN水溶液的洗脱梯度纯化混合物，获得呈黄色胶状的不纯标题化合物(80mg，58％)；m/z MH+236 (基于LCMS数据，化合物被假定为硼酸)。
中间物10：外消旋-6-((1-(5-溴代嘧啶-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000513
在室温下将DIPEA(0.878mL，5.03mmol)添加到含5-溴-2-氯代嘧啶(486mg，2.51mmol)和外消旋-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐(800 mg，2.51mmol)(以与中间物4类似的方式以3-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸外消旋-叔丁酯为起始物在4个步骤中制造)的EtOH(10mL)中。将反应混合物在70℃下加热16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过fcc，用含5-10％MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(350mg，35％)；1H NMR(300MHz,CDCl3)1.79 -1.93(1H,m),2.09-2.27(1H,m),2.49-2.62(1H,m),2.65(3H,s),2.72(3H,s),2.80(3H,s), 2.92(2H,dd),3.30(1H,dd),3.46-3.61(1H,m),3.64-3.81(2H,m),8.31(2H,s)；m/z MH+ 402。
中间物11：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(吡啶-3-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a] 嘧啶
Figure BDA0003645404260000521
将Cs2CO3(1.97g，6.03mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基甲基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(0.74g，3.02mmol)和3-碘代吡啶(0.68g，3.32mmol)的1,4-二噁烷 (10mL)中。使反应混合物脱气并添加RuPhos第3代预催化剂(0.25g，0.30mmol)。将反应混合物在90℃下加热5小时，然后使其冷却到室温并用DCM稀释并过滤。将滤液在真空中浓缩并通过fcc，用含0-5％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化，获得呈黄色固体状的标题化合物(0.413g，43％)；1H NMR(500MHz,CDCl3)1.88(1H,dq),2.18(1H,dtd), 2.58-2.67(4H,m),2.70(3H,s),2.78(3H,s),2.89(1H,dd),2.93-3(1H,m),3.09(1H,dd), 3.31-3.43(2H,m),3.49-3.56(1H,m),6.78(1H,ddd),7.11(1H,ddd),7.92-8(2H,m)；m/z MH+323。
中间物12：(R)-6-((1-(6-溴代吡啶-3-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并 [1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000522
在空气下在0℃下将NBS(229mg，1.28mmol)一次性添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(吡啶-3-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(414mg，1.28mmol)的MeCN (5mL)中。在0℃下搅拌反应混合物并经3小时使其缓慢升温到rt。通过过滤分离所得沉淀物并用MeCN(5mL)洗涤，获得呈白色固体状的标题化合物(298mg，58％)；1H NMR(500MHz,CDCl3)1.88(1H,dq),2.1 1-2.24(1H,m),2.61(3H,s),2.62-2.67(1H,m),2.69(3H,s),2.78(3H,s),2.88(1H,dd),2.95(1H,dd),3.06(1H,dd),3.28-3.41(2H,m),3.48(1H, td),6.69(1H,dd),7.25(1H,dd),7.69(1H,d)；m/z MH+401。
中间物13：3-氯-6-(氯甲基)哒嗪
Figure BDA0003645404260000531
在室温下将1,3,5-三氯-1,3,5-三嗪-2,4,6-三酮(1.808g，7.78mmol)一次性添加到含 3-氯-6-甲基哒嗪(2.00g，15.56mmol)的DCE(100mL)中。将反应混合物在60℃下搅拌2小时，然后使其冷却到室温并过滤。将滤液在真空中浓缩，并通过fcc，用含10-50％ EtOAc的庚烷洗脱来纯化，获得呈淡黄色油状的标题化合物(1.60g，63％)；1H NMR(500 MHz,CDCl3)4.88(2H,s),7.58(1H,d),7.70(1H,d)；m/z MH+163。
中间物14：4-((6-氯代哒嗪-3-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000532
在室温下将吗啉(0.86mL，9.82mmol)一次性添加到含3-氯-6-(氯甲基)哒嗪(1.6g， 9.82mmol)和DIPEA(2.05mL，11.8mmol)的THF(16mL)中。将反应混合物在室温下搅拌3天，然后过滤并用THF洗涤。在真空中浓缩合并滤液，并通过fcc，用含0-5％MeOH 的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(1.380g，66％)；1H NMR(500MHz,CDCl3)2.47-2.56(4H,m),3.68-3.76(4H,m),3.85(2H,s),7.50(1H,d),7.68(1H,d)；m/z MH+214。
中间物15：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a] 嘧啶
Figure BDA0003645404260000533
将Cs2CO3(6.16g，18.91mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基甲基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(2.32g，9.46mmol)和5-溴代嘧啶(1.503g，9.46mmol)的1,4-二噁烷(64mL)中。使反应物脱气并添加RuPhos第3代预催化剂(0.395g，0.47mmol)和RuPhos(0.221g，0.47mmol)。将反应混合物在90℃下搅拌18小时，然后使其冷却到室温，用DCM稀释并过滤。将滤液在真空中浓缩并通过fcc，用含0-5％1M NH3/MeOH的 DCM洗脱来纯化，获得呈黄色固体状的标题化合物(1.160g，38％)；1H NMR(500MHz, CDCI3)1.88-1.95(1H,m),2.20(1H,dtd),2.61(3H,s),2.63-2.68(1H,m),2.70(3H,s),2.80 (3H,s),2.91(1H,dd),2.98(1H,dd),3.12(1H,dd),3.37(1H,dt),3.47(1H,s),3.54(1H,td), 8.05(2H,s),8.60(1H,s)；m/z MH+324。
中间物16：(R)-6-((1-(2-溴代嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并 [1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000541
将(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(1.59 g，4.92mmol)添加到MeCN(80mL)中，并使反应混合物冷却到0℃。然后，一次性添加NBS(1.050g，5.90mmol)。使反应混合物升温到rt并搅拌2小时。过滤所得悬浮液，并收集不纯固体并将其悬浮于MeCN(10mL)中并在回流下加热。使悬浮液冷却到室温并通过过滤收集固体，获得呈黄色固体状的标题化合物(0.652g，33％)；1H NMR(500MHz,CDCl3)1.90(1H,dq),2.16-2.25(1H,m),2.58-2.67(4H,m),2.70(3H,s),2.80(3H,s),2.88-2.94(1H,m),2.98(1H,dd),3.10(1H,dd),3.34(1H,dt),3.44(1H,dd),3.51(1H,td),7.87(2H, s)；m/z MH+402。
中间物17：(S)-2,4-二甲基-1-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)哌嗪
Figure BDA0003645404260000542
在室温下将碳酸钾(2.43g，17.64mmol)一次性添加到含2-(4-(溴甲基)苯基)-4,4,5,5- 四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(1.31g，4.41mmol)和(S)-1,3-二甲基哌嗪二盐酸盐(0.83g，4.41 mmol)的MeCN(40mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌18小时，然后使其冷却到室温并过滤。在真空中浓缩滤液，并通过fcc，用含0-10％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈无色油状的标题化合物(506mg，35％)；m/z MH+331。
中间物18：3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲醛
Figure BDA0003645404260000543
在室温下将PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(92mg，0.13mmol)添加到含4-溴-3-甲基苯甲醛(500mg，2.51mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼烷)(638mg，2.51mmol)和乙酸钾(493mg，5.02mmol)的1,4-二噁烷(10mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空下浓缩。通过fcc，用含10％EtOAc 的石油醚洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(580mg，94％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)1.39(12H,s),2.63(3H,s),7.64-7.70(2H,m),7.92(1H,d),10.03(1H,s)；m/z MH+247。
中间物19：(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基) 嘧啶-2-基)苯甲醛
Figure BDA0003645404260000551
在室温下将Pd(Ph3P)4(0.287g，0.25mmol)添加到含(R)-6-((1-(2-溴代嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(1.00g，2.49mmol)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲醛(0.692g，2.98mmol)和2M碳酸钠水溶液(2.49mL， 4.97mmol)的经脱气的1,4-二噁烷(40mL)和水(7.5mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。将所得残余物溶解于DCM中并穿过相分离滤纸，然后在真空中浓缩并通过fcc，用含0-10％MeOH的DCM洗脱来纯化，获得呈黄色固体状的标题化合物(0.510g，48％)；1H NMR(500MHz,CDCl3)1.88-1.96(1H,m), 2.23(1H,ddd),2.62(3H,s),2.72(4H,s),2.81(3H,s),2.88-3.04(2H,m),3.20(1H,dd),3.45 (1H,dt),3.54(1H,dd),3.63(1H,td),7.9-7.99(2H,m),8.16(2H,s),8.42-8.53(2H,m),10.06(1H,s)；m/z MH+428。
中间物20：4-(2-(二甲氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003645404260000552
在空气下在室温下将HATU(3.74g，9.82mmol)添加到含2-(4-(叔丁氧基羰基)哌嗪-1-基)乙酸(2g，8.19mmol)的DMF(25mL)中，并将反应混合物在室温下搅拌30分钟。在空气下在室温下将二甲胺(12.28mL，24.56mmol)和DIPEA(4.29mL，24.56mmol) 添加到混合物中。将反应混合物在室温下搅拌2小时并且然后倒入饱和NaHCO3水溶液 (200mL)中并用EtOAc(3×100mL)萃取。使合并有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用0-100％MeOH水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(1.65g，74％)；1H NMR(400MHz,MeOD)1.47(9H,s),2.49 (4H,t),2.95(3H,s),3.11(3H,s),3.27(2H,s),3.43-3.50(4H,m)；m/z MH+272。
中间物21：N,N-二甲基-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺二盐酸盐
Figure BDA0003645404260000561
在空气下在室温下将含4M HCl的EtOH(25mL，100mmol)添加到含4-(2-(二甲氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.6g，5.9mmol)的EtOH(25mL)中。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后在真空中浓缩，获得呈白色固体状的标题化合物(1.4g， 100％)；m/zMH+172。
中间物22：2-(4-(4-溴代苄基)哌嗪-1-基)-N,N-二甲基乙酰胺
Figure BDA0003645404260000562
在空气下在室温下将N,N-二甲基-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺二盐酸盐(800mg，3.28mmol) 添加到含4-溴代苯甲醛(606mg，3.28mmol)的THF(25mL)中，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。将三乙酰氧基硼氢化钠(1389mg，6.55mmol)和AcOH(2滴)添加到混合物中，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。将反应混合物用水稀释并在真空中浓缩至几乎干。通过快速C18色谱法，用0-100％MeOH水溶液洗脱来纯化粗产物，获得呈棕色油状的标题化合物(704mg，63％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)2.49(4H,m),2.56(4H, m),2.95(3H,s),3.08(3H,s),3.18(2H,s),3.46(2H,s),7.17-7.25(2H,m),7.40-7.49(2H, m)；m/z MH+340。
中间物23：2-(4-(4-溴代苄基)哌嗪-1-基)乙醇
Figure BDA0003645404260000563
在室温下将2-(哌嗪-1-基)乙醇(1.407g，10.81mmol)添加到含4-溴代苯甲醛(1g，5.40mmol)的THF(25mL)中，并将反应混合物在室温下搅拌1小时。在空气下在室温下将三乙酰氧基硼氢化钠(2.291g，10.81mmol)和AcOH(2滴)添加到混合物中，并将反应混合物在室温下搅拌16小时，然后倒入水(20mL)中并在真空中浓缩至几乎干。通过快速C18色谱法，用0-100％MeOH水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈棕色油状的标题化合物(1.20g，74％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)2.23-2.57(11H,m),3.48(2H,s),3.63 (2H,t),7.22(2H,d),7.46(2H,d)；m/z MH+299。
中间物24：4-(4-(5-溴代嘧啶-2-基)苄基)吗啉
Figure BDA0003645404260000571
将Pd(Ph3P)4(578mg，0.50mmol)添加到含4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2- 基)苄基)吗啉(1516mg，5.00mmol)、5-溴-2-碘代嘧啶(1424mg，5mmol)和Na2CO3(1060mg，10.00mmol)的甲苯(20mL)和水(4mL)中，并将反应混合物在120℃下搅拌3 天，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。将残余物溶解于EtOAc(100mL)中并依序用水(2×20mL)洗涤。将有机层分离并经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过快速 C18色谱法，用5-50％MeOH水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(510mg，31％)；m/z MH+334。
中间物25：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-苯基吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000572
将经脱气的叔丁醇(5mL)添加到溴代苯(74pL，0.7mmol)、(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐(267mg，0.84mmol)、Cs2CO3(1368mg， 4.20mmol)、RuPhos(65mg，0.14mmol)和RuPhos第3代预催化剂(59mg，0.07mmol)中。将反应混合物在90℃下加热隔夜，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。将残余物溶解于DCM(30mL)中并用水(30mL)洗涤。用DCM(30mL)再萃取水层，并使合并有机层穿过疏水(相分离)玻璃料并在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(72mg，32％)；1H NMR(500MHz,CDCl3)1.78-1.9(1H, m),2.1-2.21(1H,m),2.55-2.64(4H,m),2.69(3H,s),2.78(3H,s),2.83-2.98(2H,m),3.08 (1H,dd),3.28-3.39(2H,m),3.45-3.55(1H,m),6.54(2H,dd),6.70(1H,tt),7.23(2H,dd)； m/z MH+322。
中间物26：(R)-6-((1-(4-溴代苯基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a] 嘧啶
Figure BDA0003645404260000581
将NBS(0.460g，2.58mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-苯基吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(0.83g，2.58mmol)的THF(50mL)中。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用0-90％MeOH水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(0.750g，73％)；m/z MH+400。
中间物27：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000582
在室温下将PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(94mg，0.11mmol)添加到含(R)-6-((1-(4-溴代苯基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(460mg，1.15mmol)、 4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼烷)(292mg，1.15mmol)和乙酸钾(226mg， 2.30mmol)的1,4-二噁烷(5mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过fcc，用EtOAc洗脱来纯化所得粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(350mg，68％)；m/z MH+448。
中间物28：2-溴-5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡嗪
Figure BDA0003645404260000583
在空气下将碘化钾(0.659g，3.97mmol)添加到含1-甲基哌嗪(0.398g，3.97mmol)、2-溴-5-(溴甲基)吡嗪(1g，3.97mmol)和K2CO3(0.549g，3.97mmol)的DMF(30mL) 中。将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用0-100％MeOH水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色油状的标题化合物(0.520g，48％)； m/z MH+271。
中间物29：5-溴-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶
Figure BDA0003645404260000591
将碘化钾(758mg，4.57mmol)添加到含5-溴-2-(溴甲基)嘧啶(767mg，3.04mmol)、1-甲基哌嗪(457mg，4.57mmol)和K2CO3(631mg，4.57mmol)的DMF(15mL)中。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用0-100％ MeOH水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(340mg，41％)； m/z MH+271。
中间物30：4-((6-溴代吡啶-3-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000592
将碘化钾(1.985g，11.96mmol)添加到含2-溴-5-(溴甲基)吡啶(3g，11.96mmol)、吗啉(1.042g，11.96mmol)和K2CO3(1.652g，11.96mmol)的DMF(25mL)中，并将反应混合物在室温下搅拌16小时，然后倒入水(150mL)中并用EtOAc(3×50mL) 萃取。使合并有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-75％EtOAc 的石油醚洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(2.60g，85％)；1H NMR (400MHz,CDCl3)2.41-2.48(4H,m),3.48(2H,s),3.68-3.75(4H,m),7.46(1H,d),7.58(1H, dd),8.31(1H,d)；m/z MH+257。
中间物31：4-((6-(4-溴代苯基)吡啶-3-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000593
在室温下将Pd(Ph3P)4(0.674g，0.58mmol)添加到含4-((6-溴代吡啶-3-基)甲基)吗啉 (1.5g，5.83mmol)、(4-溴代苯基)硼酸(1.289g，6.42mmol)和Na2CO3(1.237g，11.67mmol) 的1,4-二噁烷(14mL)和水(7.00mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌5小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过fcc，用含50％EtOAc的石油醚洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(1.28g，66％)；1H NMR(400MHz,DMSO)2.39(4H,dd),3.49-3.64(6H,m),7.58-7.76(2H,m),7.82(1H,dd),7.93-8.01(1H,m),8.01-8.09(2H,m),8.59(1H,d)；m/z MH+333。
中间物32：3-氯-6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)哒嗪
Figure BDA0003645404260000601
将碘化钾(1.200g，7.23mmol)添加到含3-(溴甲基)-6-氯代哒嗪(1g，4.82mmol)、1-甲基哌嗪(0.724g，7.23mmol)和K2CO3(0.999g，7.23mmol)的DMF(15mL)中。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后用水稀释，并通过快速C18色谱法，用0-100％ MeOH水溶液洗脱来纯化所得溶液，获得呈白色固体状的标题化合物(300mg，28％)；1H NMR(300MHz,DMSO)2.19(3H,s),2.40(8H,m),3.77(2H,s),7.76(1H,d),7.88(1H,d)； m/z MH+227。
中间物33：2-(4-溴代苯基)-5-甲基嘧啶
Figure BDA0003645404260000602
在空气下将Pd(Ph3P)4(1.002g，0.87mmol)添加到含2-溴-5-甲基嘧啶(1.5g，8.67mmol)、(4-溴代苯基)硼酸(1.74g，8.7mmol)和Na2CO3(1.84g，17.3mmol)的1,4-二噁烷(35mL)和水(7mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过fcc，用含2-5％EtOAc的石油醚洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(1.00g，46％)；1H NMR(300MHz,CDCl3)2.37(3H,s),7.55 (2H,d),8.30(2H,d),8.64(2H,s)；m/z MH+249。
中间物34：5-(溴甲基)-2-(4-溴代苯基)嘧啶
Figure BDA0003645404260000603
在空气下将过氧化苯甲酰(58.3mg，0.24mmol)添加到含2-(4-溴代苯基)-5-甲基嘧啶 (600mg，2.41mmol)和NBS(429mg，2.41mmol)的CCI4(12mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌4小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用 5-100％MeOH水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色油状的标题化合物(310mg， 39％)；m/z MH+327。
中间物35：2-(4-溴代苯基)-5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶
Figure BDA0003645404260000611
在空气下将碘化钾(152mg，0.91mmol)添加到含5-(溴甲基)-2-(4-溴代苯基)嘧啶(300 mg，0.91mmol)、1-甲基哌嗪(82mg，0.82mmol)和K2CO3(126mg，0.91mmol)的 DMF(10mL)中。将所得混合物在室温下搅拌2小时。在真空中移除溶剂。通过快速C18 色谱法，用0-100％MeOH水溶液洗脱来纯化粗产物，获得呈黄色油状的标题化合物(195 mg，61％)；1HNMR(300MHz,CDCI3)2.61(3H,s),2.76-3.20(8H,m),3.61(2H,s),7.54(2H, d),8.33(2H,d),8.73(2H,s)；m/z MH+347。
中间物36：4-((6-溴代吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003645404260000612
在20℃下将三乙酰氧基硼氢化钠(4.56g，21.50mmol)添加到含6-溴代烟醛(2.00g，10.75mmol)、哌嗪-1-甲酸叔丁酯(4.01g，21.50mmol)和AcOH(0.062mL，1.08mmol)的DCM(100mL)中。将所得溶液在室温下搅拌2小时。将反应混合物用饱和NaHCO3洗涤，穿过相分离滤纸，并在真空中移除溶剂。通过fcc，用含0％到70％EtOAc的庚烷洗脱来纯化粗产物，获得呈无色油状的标题化合物(2.80g，73.1％)，其在静置时结晶；1H NMR (500MHz,CDCl3)1.45(9H,s),2.31-2.43(4H,m),3.39-3.44(4H,m),3.47(2H,s),7.45(1H, dd),7.55(1H,dd),8.29(1H,dd)；m/z MH+356。
中间物37：4-((6-(4-溴代苯基)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003645404260000613
在室温下将Pd(Ph3P)4(0.389g，0.34mmol)添加到含4-((6-溴代吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(2.40g，6.74mmol)、(4-溴代苯基)硼酸(1.35g，6.74mmol)和碳酸钾(2.79 g，20.2mmol)的经脱气的1,4-二噁烷(12mL)和水(3mL)中。将反应混合物在微波反应器中在85℃下加热3小时，然后使其冷却到室温并用EtOAc稀释。使有机相穿过相分离器并且然后在真空中浓缩。通过fcc，用含0-5％MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色油状的标题化合物(1.20g，41％)，其在静置时凝固；1H NMR(500MHz,CDCl3) 1.46(9H,s),2.36-2.47(4H,m),3.4-3.47(4H,m),3.55(2H,s),7.56-7.62(2H,m),7.67(1H, dd),7.74(1H,dd),7.84-7.91(2H,m),8.57-8.63(1H,m)；m/z MH+432。
中间物38：4-((5-溴代嘧啶-2-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000621
将碘化钾(758mg，4.57mmol)添加到含5-溴-2-(溴甲基)嘧啶(767mg，3.04mmol)、吗啉(398mg，4.57mmol)和K2CO3(631mg，4.57mmol)的DMF(15mL)中。将反应混合物在室温下搅拌2小时，然后用水稀释并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用 0-100％MeOH水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(720mg， 92％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)2.55-2.63(4H,m),3.74-3.82(6H,m),8.79(2H,s)；m/z MH+258。
中间物39：4-((5-(4-溴代苯基)嘧啶-2-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000622
在室温下将Pd(Ph3P)4(179mg，0.15mmol)添加到含4-((5-溴代嘧啶-2-基)甲基)吗啉 (400mg，1.55mmol)、(4-溴代苯基)硼酸(31 1mg，1.55mmol)和Na2CO3(328mg，3.10 mmol)的1,4-二噁烷(5mL)和水(2.5mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用0-100％MeOH水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(330mg，64％)；1H NMR(400MHz, CDCI3)2.62-2.69(4H,m),3.78-3.86(4H,m),3.90(2H,s),7.42-7.53(2H,m),7.63-7.74 (2H,m),8.93(2H,s)；m/z MH+334。
中间物40：1-溴-4-(溴甲基)-2-甲氧基苯
Figure BDA0003645404260000623
在0℃下经2分钟的时段将三苯膦(5.53ml，23.9mmol)分批添加到含(4-溴-3-甲氧基苯基)甲醇(4.32g，20.0mmol)和四溴化碳(7.26g，21.9mmol)的DCM(100mL)中。使反应混合物升温到rt并在室温下搅拌18小时，然后在真空中浓缩。通过fcc，用含0-50％DCM的庚烷洗脱来纯化所得粗产物，获得呈无色胶状的标题化合物(5.57g，100％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)3.91(3H,s),4.44(2H,s),6.86(1H,dd),6.92(1H,d),7.49(1H,d)。
中间物41：1-(4-溴-3-甲氧基苄基)-4-甲基哌嗪
Figure BDA0003645404260000631
将碘化钾(2.135g，12.86mmol)添加到含1-溴-4-(溴甲基)-2-甲氧基苯(3g，10.7mmol)、 1-甲基哌嗪(1.29g，12.9mmol)和K2CO3(1.78g，12.9mmol)的DMF(50mL)中。将反应混合物在室温下搅拌16小时，然后倒入水(200mL)中并用EtOAc(3×100mL) 萃取。使合并有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-5％MeOH 的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈淡黄色油状的标题化合物(1.70g，53％)；1H NMR (400MHz,CDCI3)2.34(3H,s),2.50(8H,br m),3.48(2H,s),3.91(3H,s),6.82(1H,dd),6.91 (1H,d),7.46(1H,dd)；m/z MH+299。
中间物42：(2-甲氧基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)硼酸
Figure BDA0003645404260000632
在室温下将PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.464g，0.57mmol)添加到含1-(4-溴-3-甲氧基苄基)-4-甲基哌嗪(1.7g，5.68mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼烷)(2.89g，11.4mmol)和乙酸钾(1.67g，17.1mmol)的1,4-二噁烷(25mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌48小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用0-100％MeOH水溶液(具有0.5％NH4HCO3)洗脱来纯化所得粗产物，获得呈红色固体状的标题化合物(1.10g，73％)；m/z MH+265。
中间物43：(R)-6-((1-(6-氯代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并 [1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000633
将三乙胺(2.10mL，15.1mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基甲基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐(1.2g，3.77mmol)和2,6-二氯代吡嗪(0.562g，3.77mmol) 的正丙醇(20mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。将水(50mL)添加到残余物中并用EtOAc(3×50mL)萃取。使合并有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-5％MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(1.10g，82％)；1H NMR(300MHz,DMSO) 1.81(1H,dq),2.07(1H,m),2.46(3H,s),2.62(4H,s),2.73(3H,s),2.91(2H,d),3.18(1H,m), 3.35(1H,q),3.61(2H,td),7.75(1H,m),7.90(1H,m)；m/z MH+358。
中间物44：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(6-甲基吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并 [1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000641
将Pd(Ph3P)4(0.355g，0.31mmol)添加到含(R)-6-((1-(6-氯代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基) 甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(1.1g，3.07mmol)、含2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6- 三氧杂三硼杂环己烷的THF(50％wt)(1.54g，6.15mmol)和Na2CO3(1.30g，12.3mmol) 的1,4-二噁烷(6mL)和水(3mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过fcc，用含1-5％MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(1.00g，96％)；1H NMR(300MHz,DMSO)1.81(1H,dq), 2.06(1H,dq),2.26(3H,s),2.54(6H,d),2.73(3H,s),2.92(2H,m),3.17(1H,m),3.36(2H,m),3.59(2H,tt),7.63(1H,s),7.73(1H,s)；m/z MH+338。
中间物45：(R)-6-((1-(5-溴-6-甲基吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000642
在空气下在0℃下将NBS(0.527g，2.96mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(6-甲基吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(1g，2.96mmol)的DCM(10mL) 中。将反应混合物在0℃下搅拌1小时，然后添加水(25mL)，并用DCM(3×25mL) 萃取混合物。使合并有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含1-2％ MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(0.90g，73％)；1H NMR(300MHz,DMSO)1.81(1H,dq),2.06(1H,dq),2.39(3H,s),2.48(3H,s),2.55(1H, m),2.62(3H,s),2.73(3H,s),2.92(2H,m),3.15(1H,m),3.33(1H,q),3.58(2H,ddd),7.58 (1H,s)；m/z MH+416。
中间物46：(R)-6-((1-(5-溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并 [1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000651
在室温下将2,5-二溴代吡嗪(3.74g，15.7mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷 -3-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐(5.00g，15.7mmol)和DIPEA(13.7mL， 78.6mmol)的正丁醇(60mL)中。将反应混合物在回流下加热2小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。将所得粗产物与水一起研磨并过滤，获得呈乳膏固体状的标题化合物(4.86g，77％)；1H NMR(500MHz,CDCl3)1.89(1H,dq),2.16-2.24(1H,m),2.61(4H,s),2.70(3H,s),2.79(3H,s),2.93(2H,tt),3.23(1H,dd),3.45(1H,dt),3.6-3.68(2H,m),7.61(1H,d),8.10(1H,d)；m/z MH+402。
中间物47：(R)-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基) 吡嗪-2-基)苯基)甲醇
Figure BDA0003645404260000652
将(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)甲醇(165mg，0.71mmol)、(R)-6-((1-(5-溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(237 mg，0.59mmol)和Cs2CO3(384mg，1.18mmol)添加到1,4-二噁烷(6.2mL)和水(3.1mL)中，并使反应混合物脱气10分钟。添加XPhos第2代预催化剂(23mg，0.03mmol) 并将反应物在90℃下搅拌2小时，然后使其冷却到室温。用EtOAc(50mL)稀释反应混合物。将有机层分离并用饱和盐水洗涤并经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-4％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色泡沫状的标题化合物(200mg，79％)；1H NMR(500MHz,CDCl3)1.74(1H,t),1.92(1H,dq),2.18-2.27(1H,m), 2.62(4H,s),2.71(3H,s),2.80(3H,s),2.87-3.02(2H,m),3.33(1H,dd),3.55(1H,dt),3.68- 3.8(2H,m),4.74(2H,d),7.41-7.47(2H,m),7.84-7.91(2H,m),7.95(1H,d),8.51(1H,d)； m/z MH+430。
中间物48：(R)-6-((1-(5-(4-(氯甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基 -[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000661
将(R)-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2- 基)苯基)甲醇(200mg，0.47mmol)溶解于DCM(7mL)和DMF(0.34mg，4.66μmol) 中。使反应混合物冷却到0℃并逐滴添加亚硫酰氯(0.037mL，0.51mmol)。使反应混合物升温到rt并在室温下搅拌3小时，然后用DCM(50mL)稀释并用Na2CO3(2M水溶液) 调节到pH8-9。将有机层分离并用饱和盐水洗涤，穿过相分离滤筒并在真空中浓缩，获得呈黄色固体状的标题化合物(181mg，87％)，其不经进一步纯化即使用；m/z MH+448。
中间物49：(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基) 吡嗪-2-基)苯甲醛
Figure BDA0003645404260000662
将Pd(Ph3P)4(0.373g，0.32mmol)添加到含(4-甲酰基苯基)硼酸(0.485g，3.23mmol)、 (R)-6-((1-(5-溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(1.30 g，3.23mmol)和Na2CO3(0.685g，6.46mmol)的1,4-二噁烷(10mL)和水(2mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18 色谱法，用5-80％MeOH水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物 (1.20g，87％)；1H NMR(300MHz,CDCl3)1.94(1H,dq),2.25(1H,dq),2.57-3.07(12H,m), 3.24-3.42(1H,m),3.45-3.87(3H,m),7.79-8.18(5H,m),8.60(1H,d),10.04(1H,s)；m/z MH+428。
中间物50：1-(4-溴-2-甲基苄基)-4-甲基哌嗪
Figure BDA0003645404260000663
将4-溴-2-甲基苯甲醛(1g，5.02mmol)和1-甲基哌嗪(0.503g，5.02mmol)与MeOH(20mL)组合，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。添加NaCNBH4(0.631g，10.1mmol) 和AcOH(0.030g，0.50mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时，然后在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用1-70％MeOH水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(1.00g，70％)；m/z MH+283。
中间物51：1-甲基-4-(2-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)哌嗪
Figure BDA0003645404260000671
在室温下将PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(0.058g，0.07mmol)添加到含l-(4-溴-2-甲基苄基)-4-甲基哌嗪(0.2g，0.71mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼烷) (0.215g，0.85mmol)和乙酸钾(0.139g，1.41mmol)的1,4-二噁烷(10mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过fcc，用含 0-50％EtOAc的石油醚洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(70mg，30％)；m/z MH+331。
中间物52：1-(4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)哌嗪-1-基)乙酮
Figure BDA0003645404260000672
在室温下将碳酸钾(2.23g，16.2mmol)一次性添加到含2-(4-(溴甲基)苯基)-4,4,5,5- 四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(2.4g，8.08mmol)和1-(哌嗪-1-基)乙酮(1.04g，8.08mmol) 的MeCN(70mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌18小时，然后使其冷却到室温并过滤。在真空中浓缩滤液，并通过fcc，用含0-5％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈无色油状的标题化合物(2.73g，98％)；1H NMR(500MHz,CDCl3)1.34(12H,s),2.07(3H,s),2.41(4H,dq),3.42-3.46(2H,m),3.53(2H,s),3.59-3.64(2H,m),7.33(2H,d),7.72-7.81(2H,m)；m/z MH+345。
中间物53：(R)-6-((1-(6-氯代哒嗪-3-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并 [1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000673
在空气下在室温下将三乙胺(1.75mL，12.6mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐(1g，3.14mmol)、3,6-二氯代哒嗪(0.468 g，3.14mmol)的正丙醇(10mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中部分浓缩。将沉淀物通过过滤收集，用水(50mL)和MeOH(10mL) 洗涤并在真空中干燥，获得呈棕色固体状的标题化合物(0.610g，54％)，其不经进一步纯化即使用；1H NMR(400MHz,DMSO)1.85(1H,dq),2.11(1H,ddd),2.48(3H,s),2.53-2.63 (1H,m),2.64(3H,s),2.75(3H,s),2.94(2H,d),3.14-3.23(1H,m),3.40(1H,dt),3.49-3.93 (2H,m),7.00(1H,d),7.47(1H,d)；m/z MH+358。
中间物54：苯甲酸2,4-二氧代戊烷-3-基酯
Figure BDA0003645404260000681
在室温下将氢氧化钾(50.5g，901mmol)添加到含苯甲酸(100g，819mmol)的DMF(1L)中。将反应混合物在50℃下搅拌1小时，然后添加3-氯代戊烷-2,4-二酮(110g，819mmol)，并将反应混合物在50℃下搅拌隔夜。使反应混合物冷却到室温，用EtOAc(3L) 稀释，并依序用水(1L×2)、饱和NH4CI水溶液(500mL)和饱和盐水(500mL)洗涤。使有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-20％EtOAc的石油醚洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色油状的标题化合物(130g，72％)；m/z MH+221。
中间物55：2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基苯甲酸酯
Figure BDA0003645404260000682
在室温下将苯甲酸2,4-二氧代戊烷-3-基酯(58g，263mmol)添加到含3-甲基-1H-1,2,4- 三唑-5-胺(27.1g，277mmol)的AcOH(300mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌10 小时，然后使其冷却到室温，在真空中浓缩并用饱和NaHCO3水溶液调节到pH>7。用EtOAc (3×500mL)萃取混合物。将合并有机层用饱和盐水洗涤，穿过相分离滤纸并在真空中浓缩，获得呈米色固体状的标题化合物(52.0g，70％)；1H NMR(400MHz,CDCI3)2.57(3H, s),2.66(3H,s),2.70(3H,s),7.54-7.65(2H,m),7.71-7.80(1H,m),8.24-8.31(2H,m)；m/z MH+283。
中间物56：2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-醇
Figure BDA0003645404260000691
在室温下将1M NaOH水溶液(177mL，177.11mmol)添加到含苯甲酸2,5,7-三甲基 -[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基酯(50g，177mmol)的EtOH(500mL)中。将反应混合物在室温下搅拌3小时，然后在真空中部分浓缩，并缓慢地用6M HCl水溶液酸化溶液直到形成沉淀物(～pH7)为止。将沉淀物通过过滤分离，用水洗涤并在真空中干燥，获得呈乳膏固体状的标题化合物(24g，76％)；m/z MH+179。
中间物57：(R)-3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯
Figure BDA0003645404260000692
在室温下经2小时的时段将偶氮二羧酸二异丙酯(52.4mL，269mmol)逐滴添加到含2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-醇(40g，224mmol)、(S)-3-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(46.2g，247mmol)和三苯膦(70.7g，269mmol)的THF(800mL)中，并将反应混合物在室温下搅拌10分钟并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-100％EtOAc的石油醚洗脱来纯化所得粗产物，获得呈浅黄色油状的标题化合物(62.0g，80％)；1H NMR(400MHz, DMSO)1.42(9H,d),2.07-2.14(1H,m),2.20-2.23(1H,m),2.47(3H,s),2.51-2.54(3H,m), 2.63(3H,d),3.34(2H,s),3.43-3.56(2H,m),4.74(1H,s)；m/z MH+348。
中间物58：(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐
Figure BDA0003645404260000693
将含4M HCl的1,4-二噁烷(150mL，600mmol)添加到含(R)-3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(52g，149.7mmol)的MeOH(200mL) 中，并将反应混合物在室温下搅拌2小时并且然后在真空中浓缩。将丙酮添加到残余物中并搅拌30分钟。通过过滤收集沉淀物，获得呈白色固体状的标题化合物(26g，55％)；1H NMR(400MHz,DMSO)2.03-2.13(1H,m),2.22-2.28(1H,m),2.51-2.54(3H,m),2.62 (3H,d),2.74(3H,s),3.32-3.45(3H,m),3.46-3.56(1H,m),4.90(1H,s),9.91(2H,s)；m/z MH+248。
中间物58B(中间物58的游离碱)：(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000701
将(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐(4.12g，16.7 mmol)溶解于MeOH中并装载到50g SCX管柱上。将管柱用MeOH洗涤，然后用含1M NH3的MeOH洗脱。在真空中移除溶剂，获得呈橙色胶状的标题化合物(2.73g，66％)，其不经纯化即用于下一个步骤中；1H NMR(400MHz,CDCl3)1.97-2.16(2H,m),2.60(3H, s),2.65(3H,s),2.76(3H,s),3.08(2H,ddd),3.19(1H,s),3.24-3.37(2H,m),4.62(1H,ddt)；m/z MH+248。
中间物59：(R)-6-((1-(5-溴代吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并 [1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000702
在室温下将DIPEA(0.282mL，1.62mmol)一次性添加到含5-溴-2-氟代吡啶(0.166mL， 1.62mmol)和(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(400mg，1.62 mmol)的正丁醇(4mL)中。将反应混合物在微波反应器中在150℃下加热2小时，然后使其冷却到室温，用EtOAc(50mL)稀释，并依序用水(20mL)和饱和盐水(20mL)洗涤。使有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-5％MeOH的DCM 洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(346mg，53％)；m/z MH+403。
中间物60：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a] 嘧啶
Figure BDA0003645404260000703
将Cs2CO3(1.98g，6.07mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(500mg，2.02mmol)和5-溴代嘧啶(321mg，2.02mmol)的1,4-二噁烷(20mL)中。使反应混合物脱气并添加RuPhos第3代预催化剂(169mg，0.20mmol) 和RuPhos(189mg，0.40mmol)。将所得悬浮液在90℃下搅拌18小时，然后使其冷却到室温。将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释并用水(30mL)和饱和盐水(25mL)洗涤。使有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-5％1M NH3/MeOH的 DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈橙色胶状的标题化合物(291mg，44％)；1H NMR(500 MHz,CDCl3)2.32(1H,dtd),2.46-2.55(1H,m),2.60(3H,s),2.62(3H,s),2.67(3H,s),3.5- 3.62(3H,m),3.7-3.81(1H,m),4.86(1H,s),8.12(2H,s),8.66(1H,s)；m/z MH+326。
中间物61：(R)-6-((1-(2-溴代嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并 [1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000711
在空气下在0℃下经10分钟的时段将NBS(159mg，0.89mmol)分批添加到含(R)-2,5,7- 三甲基-6-((1-(嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(291mg，0.89mmol) 的MeCN(10mL)中。将反应混合物在0℃下搅拌3小时，然后用DCM(50mL)稀释，并依序用水(20mL)和饱和盐水(20mL)洗涤。将有机层分离并经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-4％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈无色胶状的标题化合物(140mg，39％)；m/z MH+404。
中间物62：(R)-6-((1-(5-溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并 [1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000712
在室温下将DIPEA(1.55mL，8.92mmol)一次性添加到含2,5-二溴代吡嗪(1.06g，4.46mmol)和(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(735mg，2.97 mmol)的正丁醇(7mL)中。将反应混合物在120℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-4％MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色泡沫状的标题化合物(740mg，62％)；1H NMR(500MHz,CDCl3)2.33(1H,dtd),2.52 (1H,ddq),2.60(3H,s),2.61(3H,s),2.65(3H,s),3.55(1H,dd),3.72(1H,td),3.75-3.88(2H,m),4.81(1H,tt),7.70(1H,d),8.14(1H,d)；m/z MH+404。
中间物63：1-(4-溴代苯基)-1,4-戊二酮
Figure BDA0003645404260000721
根据参考文献Ryzhkov,I.O.等人《杂环化合物的化学反应(Chemistry ofHeterocyclic Compounds)》,47(2),182-193；2011合成标题化合物。
中间物64：3-(4-溴代苯基)-6-甲基哒嗪
Figure BDA0003645404260000722
将1-(4-溴代苯基)-1,4-戊二酮(183g，0.717mol)溶解于AcOH(1.8L)中并冷却到0℃。然后添加单水合肼(35mL，0.717mol)并将混合物搅拌30分钟。经30分钟分批添加2,3-二氯-5,6-二氰基苯醌(244g，1.08mol)并将反应物在室温下搅拌40分钟，然后在真空中浓缩。将残余物分配于EtOAc(4L)与饱和NaHCO3水溶液(4L)之间。分离有机层，并用EtOAc(2L)萃取水层。将合并有机层用饱和NaHCO3水溶液(10×2L)洗涤并经MgSO4干燥，然后在真空中浓缩。将所得粗产物通过抽吸管柱(4L烧结物、～一半二氧化硅、1L级分、通过溶解于DCM中装载到管柱上的产物)，用40-60％EtOAc/石油醚洗脱来进行纯化。将所得不纯产物在二乙醚(340mL)中搅拌30分钟，然后过滤并用Et2O(2×75mL)、接着石油醚(2×75mL)洗涤并进行空气干燥，获得呈米色固体状的标题化合物(91.2g，51％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)2.75(3H,s),7.38(1H,d),7.65-7.60 (2H,m),7.71(1H,d),7.96-7.91(2H,m)；13C NMR(400MHz,CDCI3)22.1,123.5,124.4, 127.3,128.4,132.2,135.4,156.2,158.6。
中间物65：4-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000723
在室温下将1,3,5-三氯-1,3,5-三嗪-2,4,6-三酮(20.4g，87.8mmol)分批添加到含3-(4- 溴代苯基)-6-甲基哒嗪(中间物64)(50g，200.7mmol)的DCM(600mL)中。将反应混合物在室温下搅拌1小时，然后添加另一批1,3,5-三氯-1,3,5-三嗪-2,4,6-三酮(0.7g)并将反应混合物搅拌30分钟，然后添加吗啉(87mL，1003.6mmol)并将反应混合物搅拌 18小时。用300mL水稀释反应混合物。将有机层分离并用水(300mL)洗涤并在真空中浓缩。使所得残余物在回流EtOAc(150mL)中成浆液，冷却到室温并过滤。将过滤过的固体用200mL MTBE洗涤并在真空中干燥，获得呈白色固体状的标题化合物(53.4g， 80％)；1H NMR(400MHz,CDCI3)2.56(4H,m),3.73(4H,m),3.91(2H,s),7.64(2H,m),7.73 (1H,d),7.81(1H,d),7.96(2H,m)；m/z MH+334。
中间物66：8-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基)甲基)-3-甲基-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷
Figure BDA0003645404260000731
在空气下在室温下将三氯异氰脲酸(65.3mg，0.28mmol)一次性添加到3-(4-溴代苯基)-6-甲基哒嗪(中间物64)(200mg，0.80mmol)于DCE(5.9mL)中的溶液中，并将反应混合物在室温下搅拌30分钟。LCMS确认氯中间物已经形成。添加3-甲基-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷(101mg，0.80mmol)并将反应混合物在室温下搅拌18小时。将反应混合物用DCM(50mL)稀释，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-10％1M NH3/MeOH 的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(193mg，64％)；1H NMR (400MHz,DMSO)1.93(2H,q),2.12(2H,dd),2.32(3H,s),2.37(2H,d),3.29(2H,s),4.01 (2H,s),7.92-7.97(2H,m),8.08(1H,d),8.29(2H,d),8.41(1H,d),2H错失假定处于DMSO 峰下；m/z MH+372。
中间物67：(R)-2-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基)甲基)八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪
Figure BDA0003645404260000732
在空气下在室温下将三氯异氰脲酸(65.3mg，0.28mmol)一次性添加到3-(4-溴代苯基)-6-甲基哒嗪(中间物64)(200mg，0.80mmol)于DCE(5.2mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。LCMS确认氯中间物已经形成。添加DIPEA(0.7mL， 4.01mmol)和(R)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪二盐酸盐(240mg，1.20mmol)并将反应混合物在室温下搅拌18小时，然后用DCM(50mL)稀释，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-10％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(189mg，63％)；1H NMR(400MHz,DMSO)1.19-1.31(lH,m),1.66(3H,ddt),1.89-2.09 (3H,m),2.14(1H,td),2.27(1H,td),2.73(1H,d),2.86-2.98(3H,m),3.83-3.94(2H,m),7.74 -7.8(3H,m),8.09-8.14(2H,m),8.23(1H,d)；m/z MB+373。
中间物68：(S)-2-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基)甲基)八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪
Figure BDA0003645404260000741
在空气下在室温下将三氯异氰脲酸(65.3mg，0.28mmol)一次性添加到3-(4-溴代苯基)-6-甲基哒嗪(中间物64)(200mg，0.80mmol)于DCE(5.3mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。LCMS确认氯已经形成。添加DIPEA(0.6mL，3.21mmol) 和(S)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪氢溴酸盐(166mg，0.80mmol)并将反应混合物在室温下搅拌3天，然后用DCM(50mL)稀释，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-10％1M NH3 /MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(299mg，100％)； m/z MH+373。
中间物69：1-(4-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基)甲基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0003645404260000742
在空气下在室温下将三氯异氰脲酸(65.3mg，0.28mmol)一次性添加到3-(4-溴代苯基)-6-甲基哒嗪(中间物64)(200mg，0.80mmol)于DCE(5.9mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。添加另一0.15eq三氯异氰脲酸并将反应混合物搅拌30 分钟。添加1-(哌嗪-1-基)乙-1-酮(515mg，4.01mmol)并将反应混合物在室温下搅拌18 小时，然后用DCM(20mL)稀释，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-4％1M NH3/ MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(246mg，82％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)2.09(3H,s),2.56(4H,dt),3.45-3.51(2H,m),3.62-3.68(2H,m), 3.94(2H,s),7.63-7.69(2H,m),7.71(1H,d),7.83(1H,d),7.94-8.02(2H,m)；m/z MH+375。
中间物70：3-(4-溴代苯基)-6-(哌啶-1-基甲基)哒嗪
Figure BDA0003645404260000743
在空气下在室温下将三氯异氰脲酸(65.3mg，0.28mmol)一次性添加到3-(4-溴代苯基)-6-甲基哒嗪(中间物64)(200mg，0.80mmol)于DCE(5.5mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。添加另一0.15eq三氯异氰脲酸并将反应混合物搅拌30 分钟。添加哌啶(397μl，4.01mmol)并将反应混合物在室温下搅拌18小时，然后用DCM (20mL)稀释，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-4％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(246mg，92％)；1H NMR(400MHz, DMSO)1.43(2H,q),1.54(4H,p),2.38-2.48(4H,m),3.81(2H,s),7.76-7.81(3H,m),8.09- 8.16(2H,m),8.23(1H,d)；m/z MH+332。
中间物71：3-(4-溴代苯基)-6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)哒嗪
Figure BDA0003645404260000751
在空气下在室温下将三氯异氰脲酸(65.3mg，0.28mmol)一次性添加到3-(4-溴代苯基)-6-甲基哒嗪(中间物64)(200mg，0.80mmol)于DCE(5.5mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。添加另一0.15eq三氯异氰脲酸并将反应混合物搅拌30 分钟。添加1-甲基哌嗪(445μl，4.01mmol)并将反应混合物在室温下搅拌18小时，然后用DCM(50mL)稀释，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-10％1M NH3/MeOH 的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(237mg，85％)；1H NMR (400MHz,DMSO)2.16(3H,s),2.28-2.4(4H,m),2.47(4H,s),3.83(2H,s),7.74-7.8(3H, m),8.09-8.14(2H,m),8.23(1H,d)；m/z MH+347。
中间物72：3-(4-溴代苯基)-6-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)哒嗪
Figure BDA0003645404260000752
在空气下在室温下将三氯异氰脲酸(0.327g，1.40mmol)一次性添加到3-(4-溴代苯基)-6-甲基哒嗪(中间物64)(1g，4.01mmol)于DCE(27.0mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。添加1-乙基哌嗪(2.55mL，20.1mmol)并将反应混合物在室温下搅拌18小时，然后用DCM(20mL)稀释，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用0-10％ 1M NH3/MeOH洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(125mg，9％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)1.08(3H,t),2.42(2H,q),2.50(4H,s),2.62(4H,s),3.93(2H,s), 7.63-7.68(2H,m),7.71(1H,d),7.80(1H,d),7.94-8.00(2H,m)；m/z MH+361。
中间物73：3-(4-溴代苯基)-6-((4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)甲基)哒嗪
Figure BDA0003645404260000761
在空气下在室温下将三氯异氰脲酸(0.327g，1.40mmol)一次性添加到3-(4-溴代苯基)-6-甲基哒嗪(中间物64)(1g，4.01mmol)于DCE(26.5mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。添加1-(2-甲氧基乙基)哌嗪(2.98mL，20.1mmol)并将反应混合物在室温下搅拌18小时，然后用DCM(20mL)稀释，过滤并在真空中浓缩。通过 fcc，用含0-10％1MNH3/MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(525mg，33％)；1HNMR(400MHz,CDCl3)2.61(10H,dt),3.35(3H,s),3.5-3.55 (2H,m),3.93(2H,s),7.62-7.67(2H,m),7.70(1H,d),7.80(1H,d),7.94-8(2H,m)；m/z MH+ 391。
中间物74：4-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基)甲基)-1,4-氧氮杂环庚烷
Figure BDA0003645404260000762
在空气下在室温下将三氯异氰脲酸(65.3mg，0.28mmol)一次性添加到3-(4-溴代苯基)-6-甲基哒嗪(中间物64)(200mg，0.80mmol)于DCE(5.9mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。添加另一0.15eq三氯异氰脲酸并将反应混合物搅拌30 分钟。添加1,4-氧氮杂环庚烷(406mg，4.01mmol)并将反应混合物在室温下搅拌18小时，然后用DCM(50mL)稀释，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-4％1M NH3/MeOH 的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(200mg，72％)；1H NMR (400MHz,DMSO)1.83(2H,p),2.72(4H,q),3.6-3.67(2H,m),3.72(2H,t),4.01(2H,s),7.73 -7.81(2H,m),7.83(1H,d),8.07-8.16(2H,m),8.24(1H,d)；m/z MH+348。
中间物75：1-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基)甲基)氮杂环庚烷
Figure BDA0003645404260000771
在空气下在室温下将三氯异氰脲酸(65.3mg，0.28mmol)一次性添加到3-(4-溴代苯基)-6-甲基哒嗪(中间物64)(200mg，0.80mmol)于DCE(5.5mL)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。添加另一0.15eq三氯异氰脲酸并将反应混合物搅拌30 分钟。添加氮杂环庚烷(452μl，4.01mmol)并将反应混合物在室温下搅拌3天，然后用 DCM(50mL)稀释，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-4％1M NH3/MeOH的DCM 洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(88mg，32％)；1H NMR(400 MHz,DMSO)1.59(8H,s),2.64-2.7(4H,m),3.98(2H,s),7.74-7.79(2H,m),7.82(1H,d), 8.09-8.14(2H,m),8.23(1H,d)；m/zMH+346。
中间物76：4-((5-氯代吡嗪-2-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000772
在室温下将三乙酰氧基硼氢化钠(4.46g，21.1mmol)添加到含5-氯代吡嗪-2-甲醛(1 g，7.02mmol)和吗啉(0.614mL，7.02mmol)的DCM(10mL)中并将反应混合物在室温下搅拌4小时。将反应混合物用饱和NaHCO3水溶液稀释并搅拌10分钟，然后穿过相分离滤纸并在真空中浓缩，获得呈无色油状的标题化合物(1.180g，79％)；1H NMR(400 MHz,CDCl3)2.49-2.55(4H,m),3.69(2H,s),3.71-3.77(4H,m),8.47(1H,d),8.55(1H,d)； m/z MH+214。
中间物77：4-((5-(4-溴代苯基)吡嗪-2-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000773
在室温下将Pd(Ph3P)4(135mg，0.12mmol)一次性添加到(4-溴代苯基)硼酸(470mg，2.34mmol)、4-((5-氯代吡嗪-2-基)甲基)吗啉(500mg，2.34mmol)和2M Na2CO3水溶液(2.34mL，4.68mmol)于1,4-二噁烷(7.8mL)和水(1.5mL)中的脱气混合物中。将反应混合物在80℃下搅拌2小时，然后使其冷却到室温，用EtOAc(75mL)稀释，并依序用水(20mL)和饱和盐水(20mL)洗涤。使有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-3％MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(730mg，93％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)2.57(4H,q),3.72-3.79(6H,m),7.62 -7.66(2H,m),7.88-7.93(2H,m),8.71(1H,d),8.95(1H,d)；m/z MH+334。
中间物78：2-溴-5-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶
Figure BDA0003645404260000781
将碘化钾(331mg，1.99mmol)添加到含2-溴-5-(溴甲基)吡啶(500mg，1.99mmol)、吡咯烷(142mg，1.99mmol)和K2CO3(275mg，1.99mmol)的DMF(10mL)中。将反应混合物在室温下搅拌16小时，然后用水(50mL)稀释，用EtOAc(3×50mL)萃取，并将合并有机层用饱和盐水(3×50mL)洗涤并经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩，获得呈黄色油状的标题化合物(470mg，98％)；m/z MH+241。
中间物79：5-溴-2-(溴甲基)吡啶
Figure BDA0003645404260000782
在15℃下将过氧化苯甲酰(0.063g，0.26mmol)添加到含5-溴-2-甲基吡啶(0.9g，5.23mmol)和NBS(0.978g，5.49mmol)的CCl4(10mL)中。将反应混合物在回流下加热15小时，然后使其冷却到室温。将反应混合物用DCM(100mL)稀释，并依序用水 (50mL)和饱和盐水(50mL)洗涤。使有机层经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含5％EtOAc的石油醚洗脱来纯化所得粗产物，获得呈不纯紫色油状的标题化合物(如果纯，那么0.440g，34％)；m/z MH+250。
中间物80：5-溴-2-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶
Figure BDA0003645404260000783
将碘化钾(437mg，2.63mmol)添加到含5-溴-2-(溴甲基)吡啶(660mg，2.63mmol)、吡咯烷(187mg，2.63mmol)和K2CO3(364mg，2.63mmol)的DMF(10mL)中。将反应混合物在室温下搅拌16小时，然后用水(50mL)淬灭并用EtOAc(3×50mL)萃取。将合并有机层用饱和盐水(3×50mL)洗涤并经Na2SO4干燥，过滤并在真空中浓缩，获得呈黑色油状的标题化合物(570mg，90％)：m/z MH+241。
中间物81：(R)-3-甲基-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)嘧啶-2-基)苯甲醛
Figure BDA0003645404260000791
在室温下将XPhos钯(II)联苯-2-胺氯化物(20mg，0.02mmol)添加到含
(R)-6-((1-(2-溴代嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶 (中间物16)(200mg，0.50mmol)、3-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯甲醛(中间物18)(122mg，0.50mmol)和Cs2CO3(324mg，0.99mmol)的1,4-二噁烷(3 mL)和水(1.5mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(75mg，34％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)1.90(1H,s),2.27 (1H,s),2.66(7H,d),2.77(3H,s),2.86(3H,s),2.92-3.1 1(2H,m),3.24(1H,s),3.45-3.54 (1H,m),3.59(1H,s),3.67(1H,s),7.82(2H,dt),7.98(1H,d),8.24(2H,s),10.06(1H,s)；m/z MH+442。
中间物82：4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基) 苯基)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-甲酸(R)-叔丁酯
Figure BDA0003645404260000792
将经脱气的1,4-二噁烷(15mL)添加到(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基甲基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐(中间物4)(500mg，2.04mmol)和4-((6-(4-溴代苯基)吡啶-3- 基)甲基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(中间物37)(881mg，2.04mmol)中。然后添加Cs2CO3(1.99 g，6.11mmol)，接着为RuPhos(190mg，0.41mmol)和RuPhos第3代预催化剂(341mg， 0.41mmol)。将反应混合物在90℃下加热24小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。将残余物溶解于DCM中，通过硅藻土过滤，在真空中浓缩，并通过fcc，用含0-10％MeOH的DCM洗脱来纯化，获得呈米色固体状的标题化合物(290mg，24％)；1H NMR(500MHz, CDCI3)1.45(9H,s),1.82-1.94(1H,m),2.13-2.23(1H,m),2.41(4H,s),2.62(4H,s),2.70 (3H,s),2.78(3H,s),2.86-2.99(2H,m),3.14(1H,dd),3.37-3.47(6H,m),3.52(2H,s),3.57 (1H,td),6.58-6.64(2H,m),7.60(1H,dd),7.64(1H,dd),7.86-7.96(2H,m),8.51(1H,d)；m/z MH+597。
实例1：(R)-4-((6'-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1- 基)-[3,3'-联吡啶]-6-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000801
将XPhos第2代预催化剂(29.4mg，0.04mmol)添加到含(R)-6-((1-(5-溴代吡啶-2-基) 吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物5)(150mg，0.37mmol)、 (6-(吗啉代甲基)吡啶-3-基)硼酸(商业来源)(83mg，0.37mmol)和Cs2CO3(244mg，0.75 mmol)的1,4-二噁烷(2mL)和水(1mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌3小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物的甲酸盐(80mg，36％)；1H NMR(300MHz,MeOD)1.89-2.08(1H,m), 2.19-2.33(1H,m),2.56(3H,s),2.71-2.73(4H,m),2.77-2.89(7H,m),3.04(2H,d),3.24- 3.33(1H,m),3.44-3.57(1H,m),3.57-3.75(1H,m),3.71-3.85(5H,m),3.98(2H,d),6.67 (1H,d),7.58(1H,d),7.89(1H,dd),8.04(1H,dd),8.18(2H,s,等同于甲酸盐的2种同等物),8.33(1H,d),8.76(1H,d)m/z MH+499。
实例4：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(6'-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-[3,3'-联吡啶]-6-基)吡咯烷-3- 基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000802
将Pd(Ph3P)4(72.9mg，0.06mmol)添加到含(R)-6-((1-(5-溴代吡啶-2-基)吡咯烷-3-基) 甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物5)(253mg，0.63mmol)、(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)硼酸(中间物9)(200mg，0.85mmol)和Na2CO3(134mg，1.26 mmol)的甲苯(10mL)和水(2mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物的甲酸盐(60mg，17％)；1H NMR(300MHz,DMSO)1.84(1H,m),2.10(1H,m),2.20 (3H,s),2.30-2.50(12H,m),2.63(3H,s),2.74(3H,s),2.92(2H,d),3.18(1H,dd),3.38(1H,dt),3.57(4H,m),6.55(1H,d),7.42(1H,d),7.84(1H,dd),7.96(1H,dd),8.20(1H,s),8.43(1H,d), 8.72(1H,dd)；m/z MH+512。
实例5：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡啶-2-基)吡咯烷-3- 基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000811
在室温下将Pd(Ph3P)4(17mg，0.01mmol)添加到含1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2- 二氧杂硼烷-2-基)苄基)哌嗪(商业来源)(95mg，0.30mmol)、(R)-6-((1-(5-溴代吡啶-2-基) 吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物5)(120mg，0.30mmol) 和Na2CO3(63.4mg，0.60mmol)的1,4-二噁烷(3mL)和水(1.5mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并且然后在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN水溶液(+0.1％FA)洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物的甲酸盐(55mg，33％)；1H NMR(400MHz,MeOD)1.99(1H,dq),2.26(1H,dq),2.57 (3H,s),2.70(1 1H,m),2.85(3H,s),3.05(6H,m),3.25-3.34(2H,m),3.50(1H,m),3.60(1H, m),3.70(3H,m),6.63(1H,d),7.42(2H,d),7.55(2H,d),7.84(1H,dd),8.28(1H,d),8.47(1H,s)；m/z MH+511。
实例6：(R)-4-(4-(2-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基) 嘧啶-5-基)苄基)吗啉
Figure BDA0003645404260000812
在室温下将XPhos第2代预催化剂(34mg，0.04mmol)添加到含外消旋-6-((1-(5-溴代嘧啶-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物10)(350mg， 0.87mmol)、4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)吗啉(商业来源)(264mg， 0.87mmol)和Cs2CO3(567mg，1.74mmol)的1,4-二噁烷(3mL)和水(1.5mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。将所得粗产物通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN水溶液(+0.08％NH4CO3)洗脱来纯化。将所得外消旋产物(390mg)通过制备型手性-HPLC在Chiralpak IA管柱上，用作为洗脱剂的含 50％EtOH的TBME(被DEA改性)洗脱来分离，获得呈白色固体状的标题化合物(120mg，31％)；1H NMR(400MHz,MeOD)1.90-2.04(1H,m),2.23(1H,dt),2.50(4H,t),2.57(3H,s), 2.74(4H,s),2.86(3H,s),3.05(2H,d),3.39(1H,dd),3.60(3H,d),3.68-3.79(5H,m),3.86 (1H,ddd),7.45(2H,d),7.55(2H,d),8.61(2H,s)；m/z MH+499。
实例7：(R)-4-((5-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基) 吡啶-2-基)吡嗪-2-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000821
在室温下将Pd(Ph3P)4(46.1mg，0.04mmol)添加到含4-((5-氯代吡嗪-2-基)甲基)吗啉 (中间物76)(85mg，0.40mmol)、(R)-6-((1-(6-溴代吡啶-3-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物12)(160mg，0.40mmol)和1,1,1,2,2,2-六甲基二锡(131mg，0.40mmol)的1,4-二噁烷(5mL)中。将反应混合物在110℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN水溶液(+0.1％FA)洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(87mg，43％)；1H NMR(300MHz,MeOD)1.89-2.08(1H,m),2.18-2.31(1H,m),2.56(3H,s),2.60-2.87 (10H,m),3.05(2H,dd),3.23(1H,dd),3.37-3.85(10H,m),7.10(1H,dd),8.03(1H,d),8.20 (1H,d),8.66(1H,d),9.31(1H,d)；m/z MH+500。
实例8：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(6-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡啶-3-基)吡咯烷-3- 基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000822
在室温下将Pd(Ph3P)4(202mg，0.17mmol)添加到含(R)-6-((1-(6-溴代吡啶-3-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物12)(700mg，1.74mmol)、 1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)哌嗪(商业来源)(607mg，1.92 mmol)和1M Na2CO3水溶液(3.49mL，3.49mmol)的经脱气的1,4-二噁烷(7mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌18小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。将残余物溶解于DCM中，过滤，并将所得粗产物通过fcc，用含0-10％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化，然后通过由EtOAc(和少量MeOH)进行的再结晶进一步纯化，获得呈淡黄色结晶固体状的标题化合物(240mg，27％)；1H NMR(500MHz,CDCl3)1.86-1.94(1H,m), 2.14-2.23(1H,m),2.28(3H,s),2.49(8H,s),2.62(4H,s),2.71(3H,s),2.79(3H,s),2.86-3.01 (2H,m),3.14(1H,dd),3.37-3.48(2H,m),3.54(2H,s),3.55-3.61(1H,m),6.86(1H,dd),7.37 (2H,d),7.59(1H,dd),7.82-7.88(2H,m),8.06(1H,d)；m/z MH+511。
实例9：(R)-4-((6-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基) 吡啶-2-基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000831
在室温下将Pd(Ph3P)4(343mg，0.30mmol)一次性添加到含4-((6-氯代哒嗪-3-基)甲基)吗啉(中间物14)(634mg，2.97mmol)、(R)-6-((1-(6-溴代吡啶-3-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物12)(1.19g，2.97mmol)和1,1,1,2,2,2- 六甲基二锡(0.615mL，2.97mmol)的1,4-二噁烷(30mL)中。将反应混合物在100℃下搅拌20小时，然后使其冷却到室温，过滤并用DCM(20mL)洗涤。在真空中浓缩滤液，并将所得粗产物通过fcc，用含0-10％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化，然后通过制备型HPLC进一步纯化，然后溶解于MeOH中并装载到50g SCX管柱上。将管柱用MeOH (2×管柱体积)洗涤，然后用1M NH3/MeOH洗脱。将所得胶与Et2O一起研磨，得到固体，将其过滤并在真空中干燥，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(608mg，41％)；1H NMR (500MHz,DMSO)1.87(1H,dq),2.06-2.22(1H,m),2.45(7H,d),2.64(4H,s),2.74(3H,s), 2.93(2H,d),3.12(1H,dd),3.33-3.38(1H,m),3.48(1H,dd),3.51-3.64(5H,m),3.79(2H,s), 7.06(1H,dd),7.71(1H,d),8.05(1H,d),8.33(2H,dd)；m/z MH+500。
实例10：6-(((R)-1-(2-(4-(((S)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基) 甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000832
将(R)-6-((1-(2-溴代嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶 (中间物16)(300mg，0.75mmol)、(S)-2,4-二甲基-1-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2- 基)苄基)哌嗪(中间物17)(296mg，0.89mmol)、Pd(Ph3P)4(86mg，0.07mmol)和碳酸钾(206mg，1.49mmol)溶解于1,4-二噁烷(12mL)和水(4mL)中并在80℃下加热18 小时。使反应混合物冷却到室温，然后倒入DCM(50mL)中。将水层分离，然后用20％MeOH/DCM萃取。使合并有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含 0-5％1MNH3/MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物。将所得胶与EtOAc一起研磨，并将所得固体过滤并在真空中干燥，获得呈白色固体状的标题化合物(52mg，13％)；1H NMR (500MHz,DMSO)1.06(3H,d),1.78-1.9(2H,m),1.98(1H,d),2.10(5H,s),2.41(1H,s),2.47 (4H,s),2.55(2H,d),2.64(4H,s),2.74(3H,s),2.92(2H,d),3.04-3.18(2H,m),3.34(1H,d), 3.46(1H,dd),3.5-3.58(1H,m),3.97(1H,d),7.33(2H,d),8.16(2H,d),8.20(2H,s)；m/z MH+ 526。
实例11：(R)-4-((5-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1- 基)嘧啶-2-基)吡啶-2-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000841
在室温下将XPhos第2代预催化剂(9mg，0.01mmol)添加到含(R)-6-((1-(2-溴代嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物16)(90mg，0.22 mmol)、(6-(吗啉代甲基)吡啶-3-基)硼酸(商业来源)(50mg，0.22mmol)和Cs2CO3(146 mg，0.45mmol)的1,4-二噁烷(3mL)和水(1.5mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN 水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(22mg，20％)；1H NMR(400MHz,MeOD)2.00(1H,dq),2.26(1H,dq),2.57(3H,s),2.64(4H,s),2.75(4H,s),2.86(3H,s),3.08(2H,h),3.25(1H,dd),3.46(1H,dt),3.54-3.72(2H,m),3.72-3.83(6H,m),7.63 (1H,d),8.24(2H,s),8.61(1H,dd),9.34(1H,d)；m/z MH+500。
实例12：(R)-6-((1-(2-(2-甲氧基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基) 甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000842
在室温下将XPhos第2代预催化剂(20mg，0.02mmol)添加到含(R)-6-((1-(2-溴代嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物16)(200mg，0.50 mmol)、(2-甲氧基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)硼酸(中间物42)(131mg，0.50mmol) 和Cs2CO3(324mg，0.99mmol)的1,4-二噁烷(3mL)和水(1.5mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用 5-100％MeCN水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物的甲酸盐(56mg，19％)；1H NMR(400MHz,MeOD)2.00(1H,dq),2.25(1H,ddd),2.57(3H,s),2.72 (10H,m),2.87(3H,s),2.99-3.15(7H,m),3.22(1H,dd),3.44(1H,dt),3.51-3.72(4H,m), 3.83(3H,s),7.04(1H,dd),7.14(1H,d),7.49(1H,d),8.19(2H,s),8.49(1H,s)；m/z MH+542。
实例13：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(2-(2-甲基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)嘧啶-5-基) 吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000851
在空气下在室温下将1-甲基哌嗪(34mg，0.34mmol)添加到含(R)-3-甲基 -4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)嘧啶-2-基)苯甲醛 (75mg，0.17mmol)的DCM(0.5mL)中，并将反应混合物搅拌2小时。添加三乙酰氧基硼氢化钠(180mg，0.85mmol)并将反应混合物在室温下搅拌50小时，然后在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(60mg，67％)；1H NMR(400MHz,MeOD)2.00(1H,dq),2.26(1H, ddd),2.42(3H,s),2.57(3H,s),2.72(10H,m),2.87(3H,s),3.06(7H,m),3.23(1H,dd),3.44 (1H,dt),3.52-3.70(4H,m),7.24-7.32(2H,m),7.54(1H,d),8.23(2H,s)；m/z MH+526。
实例14：6-(((R)-1-(2-(4-(((3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)嘧啶-5-基)吡咯烷-3- 基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000852
将(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)嘧啶-2- 基)苯甲醛(中间物19)(120mg，0.28mmol)添加到含(2R,6S)-2,6-二甲基哌嗪(商业来源) (32mg，0.28mmol)的DCM(3mL)中，并将反应混合物在室温下搅拌2小时。添加AcOH(1.607μl，0.03mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(178mg，0.84mmol)并将反应混合物搅拌2小时，然后在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(16mg，11％)；1H NMR(300MHz,MeOD)1.18(6H,s),1.94(3H,ddd), 2.21(1H,m),2.56(3H,s),2.73(4H,m),2.84(3H,s),3.08(4H,m),3.18(3H,m),3.58(2H,m), 3.62(4H,m),7.41(2H,dd),8.17(4H,dt)；m/z MH+526。
实例15：(R)-N,N-二甲基-2-(4-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)嘧啶-2-基)苄基)哌嗪-1-基)乙酰胺
Figure BDA0003645404260000861
在室温下将PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(168mg，0.21mmol)添加到含2-(4-(4-溴代苄基)哌嗪-1-基)-N,N-二甲基乙酰胺(中间物22)(700mg，2.06mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’- 八甲基-2,2’-联(1,3,2-二氧杂硼烷)(627mg，2.47mmol)和乙酸钾(404mg，4.11mmol)的1,4-二噁烷(10mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用0-100％MeOH水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得(4-((4-(2-(二甲氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)硼酸(186mg，30％)，其不经表征即直接使用。在室温下将Pd(Ph3P)4(31.6mg，0.03mmol)添加到含(4-((4-(2-(二甲氨基)-2-氧代乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)硼酸(92mg，0.30mmol)、(R)-6-((1-(2-溴代嘧啶-5- 基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物16)(110mg，0.27mmol)和Na2CO3(58.0mg，0.55mmol)的1,4-二噁烷(2mL)和水(1mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。将所得粗产物通过快速C18色谱法，用0-100％MeCN水溶液(+0.1％FA)洗脱来纯化，然后通过制备型 HPLC进一步纯化，获得呈白色固体状的标题化合物(50mg，31％)；1H NMR(300MHz, MeOD)1.98(1H,dt),2.16-2.34(1H,m),2.43-2.64(10H,m),2.73(4H,s),2.84(3H,s),2.93 (3H,s),2.97-3.15(5H,m),3.22(3H,d),3.33-3.49(2H,m),3.48-3.70(4H,m),7.41(2H,d), 8.1 1-8.21(4H,m)；m/zMH+583。
实例16：(R)-2-(4-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1- 基)嘧啶-2-基)苄基)哌嗪-1-基)乙醇
Figure BDA0003645404260000862
在室温下将PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(164mg，0.20mmol)添加到含2-(4-(4-溴代苄基)哌嗪-1-基)乙醇(中间物23)(600mg，2.01mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2- 二氧杂硼烷)(611mg，2.41mmol)和乙酸钾(394mg，4.01mmol)的1,4-二噁烷(10mL) 中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用0-100％MeOH水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈棕色固体状的(4-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)硼酸(143mg，27％)，其不经表征即直接使用。在室温下将Pd(Ph3P)4(31.6mg，0.03mmol)添加到含(4-((4-(2-羟乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基) 硼酸(87mg，0.33mmol)、(R)-6-((1-(2-溴代嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物16)(110mg，0.27mmol)和Na2CO3(58.0mg，0.55mmol) 的1,4-二噁烷(2mL)和水(1mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。将所得粗产物通过快速C18色谱法，用0-100％MeCN水溶液(+0.1％FA)洗脱来纯化，然后通过制备型HPLC进一步纯化，获得呈白色固体状的标题化合物(50mg，34％)；1H NMR(300MHz,CDCl3)1.88-2.02(1H,m),2.15-2.26(1H,m), 2.68(18H,m),2.82(3H,s),2.87-3.05(2H,m),3.18(1H,dd),3.36-3.58(2H,m),3.58-3.71 (5H,m),7.41(2H,d),8.14(2H,s),8.21-8.30(2H,m)；m/z MH+542。
实例17：(R)-1-(4-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1- 基)嘧啶-2-基)苄基)哌嗪-1-基)乙酮
Figure BDA0003645404260000871
将Pd(Ph3P)4(28.7mg，0.02mmol)添加到含1-(4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷 -2-基)苄基)哌嗪-1-基)乙酮(中间物52)(86mg，0.25mmol)、(R)-6-((1-(2-溴代嘧啶-5-基) 吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物16)(100mg，0.25mmol) 和Na2CO3(53mg，0.50mmol)的1,4-二噁烷(5mL)和水(1mL)中。将反应混合物在 80℃下搅拌16小时，然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(50mg，37％)；1H NMR(300MHz,MeOD)1.96 (1H,dq),2.10(3H,s),2.22(1H,m),2.64(1 1H,m),2.84(3H,s),3.03(2H,dd),3.20(1H,dd),3.60(9H,m),7.43(2H,m),8.19(4H,d)；m/z MH+540。
实例18：(R)-6-((1-(2-(4-((4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)嘧啶-5-基)吡咯烷-3- 基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000881
在室温下将三乙酰氧基硼氢化钠(283mg，1.33mmol)添加到含(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)嘧啶-2-基)苯甲醛(中间物19)(190 mg，0.44mmol)和1-(2-甲氧基乙基)哌嗪(77mg，0.53mmol)以及AcOH(0.013mL， 0.22mmol)的DCM(20mL)中。将反应混合物在室温下搅拌4小时，然后在真空中浓缩，用1M NH3/MeOH中和并在真空中浓缩。将所得残余物溶解于DCM中，过滤，并通过fcc，用含0-5％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(175mg，71％)；1H NMR(500MHz,CDCl3)1.86-1.96(1H,m),2.14-2.25(1H,m),2.39 -2.6(10H,m),2.62(3H,s),2.64-2.69(1H,m),2.71(3H,s),2.80(3H,s),2.87-3.02(2H,m), 3.17(1H,dd),3.34(3H,s),3.39-3.46(1H,m),3.47-3.53(3H,m),3.56(2H,s),3.59(1H,td), 7.39(2H,d),8.13(2H,s),8.23(2H,d)；m/z MH+556。
实例19：(R)-4-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基) 嘧啶-2-基)苄基)吗啉
Figure BDA0003645404260000882
在室温下将RuPhos第3代预催化剂(50mg，0.06mmol)添加到含4-(4-(5-溴代嘧啶-2-基)苄基)吗啉(中间物24)(200mg，0.60mmol)、(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶.2HCl(中间物4)(190mg，0.60mmol)、Cs2CO3(780mg，2.39mmol)和RuPhos(55.8mg，0.12mmol)的1,4-二噁烷(8mL)中。将反应混合物在 90℃下搅拌6小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用0-100％ MeOH水溶液(+0.1％FA)洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(180 mg，60％)；1H NMR(300MHz,MeOD)1.87-2.06(1H,m),2.16-2.27(1H,m),2.53-2.62 (7H,m),2.73(4H,s),2.84(3H,s),3.04(2H,dd),3.20(1H,dd),3.41(1H,dt),3.49-3.71(4H, m),3.71-3.77(4H,m),7.43(2H,d),8.13-8.22(4H,m)；m/z MH+499。
实例20：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)嘧啶-5-基)吡咯烷-3- 基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000891
在室温下将Pd(Ph3P)4(43.1mg，0.04mmol)添加到含(R)-6-((1-(2-溴代嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物16)(300mg，0.75mmol)、1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)哌嗪(商业来源)(236mg，0.75 mmol)和Na2CO3(158mg，1.49mmol)的1,4-二噁烷(10mL)和水(5mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN水溶液(+0.1mmol/L NH4HCO3)洗脱来纯化粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(285mg，75％)；1H NMR(400MHz,MeOD)1.94-2.05(1H,m),2.31(4H, s),2.57(1 1H,s),2.75(4H,s),2.86(3H,s),3.06(2H,p),3.22(1H,dd),3.38-3.49(1H,m), 3.51-3.69(4H,m),7.42(2H,d),8.14-8.22(4H,m)；m/z MH+512。
实例21：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡嗪-2-基)苯基)吡咯烷-3- 基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000892
将Pd(Ph3P)4(51.7mg，0.04mmol)添加到含2-溴-5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡嗪(中间物28)(121mg，0.45mmol)、(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷 -2-基)苯基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物27)(200mg，0.45mmol) 和Na2CO3(95mg，0.89mmol)的甲苯(0.2mL)和水(1mL)中。将反应混合物在80 ℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用0-100％MeCN 水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(11mg，5％)；1H NMR(300MHz,CDCl3)1.91(1H,dq),2.21(1H,dq),2.40(3H,s),2.67(14H,d),2.80(3H,s),2.95(3H,s),3.16(1H,dd),3.35-3.67(3H,m),3.73(2H,s),6.59-6.68(2H,m),7.87-7.99(2H,m), 8.56(1H,d),8.90(1H,d)；m/z MH+512。
实例22：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶-5-基)苯基)吡咯烷-3- 基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000901
将Pd(Ph3P)4(63.9mg，0.06mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(4,4,5,5-四甲基 -1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物27)(247 mg，0.55mmol)、5-溴-2-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶(中间物29)(150mg，0.55mmol) 和Na2CO3(117mg，1.11mmol)的1,4-二噁烷(2mL)和水(1mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(40mg，14％)；1H NMR(300MHz,DMSO)1.85(1H, dq),2.10(1H,dq),2.26(3H,s),2.49(4H,m),2.63(8H,m),2.74(3H,s),2.92(2H,d),3.06(1H,dd),3.26(6H,m),3.70(2H,s),6.64(2H,d),7.62(2H,d),8.99(2H,s)；m/z MH+512。
实例23：(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1- 基)苯基)吡啶-3-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000902
在室温下将RuPhos第3代预催化剂(39mg，0.05mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐(中间物4)(150mg，0.47mmol)、4-((6-(4- 溴代苯基)吡啶-3-基)甲基)吗啉(中间物31)(157mg，0.47mmol)、Cs2CO3(768mg，2.36 mmol)和RuPhos(44mg，0.09mmol)的1,4-二噁烷(3mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(54mg，23％)；1H NMR(300MHz,MeOD)1.87-2.05(1H, m),2.22(1H,dq),2.50(4H,dd),2.55(3H,s),2.71(4H,s),2.82(3H,s),2.94-3.09(2H,m),3.16(1H,dd),3.32-3.51(2H,m),3.54-3.63(3H,m),3.63-3.76(4H,m),6.61-6.73(2H,m),7.67-7.87(4H,m),8.44(1H,d)；m/z MH+498。
实例24：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3- 基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000903
将Pd(Ph3P)4(26mg，0.02mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(4,4,5,5-四甲基 -1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物27)(100 mg，0.22mmol)、3-氯-6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)哒嗪(中间物32)(51mg，0.22mmol) 和Na2CO3(47mg，0.45mmol)的1,4-二噁烷(5mL)和水(1mL)中。将反应混合物在 80℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(35mg，31％)；1H NMR(300MHz,DMSO)1.87(1H, m),2.15(4H,m),2.20-2.50(1 1H,m),2.64(4H,m),2.75(3H,s),2.93(2H,d),3.09(1H,dd),3.30-3.60(3H,m),3.74(2H,s),6.65(2H,m),7.59(1H,d),8.00(3H,m)；m/z MH+512。
实例25：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶-2-基)苯基)吡咯烷-3- 基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000911
将RuPhos第3代预催化剂(36mg，0.04mmol)和RuPhos(20mg，0.04mmol)添加到含2-(4-溴代苯基)-5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)嘧啶(中间物35)(150mg，0.43mmol)、 (R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐(中间物4)(137mg，0.43mmol)和Cs2CO3(563mg，1.73mmol)的1,4-二噁烷(5mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用 0-100％MeCN水溶液洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(58mg， 26％)；1H NMR(300MHz,CDCl3)1.81-1.99(2H,m),2.19(1H,dt),2.35(3H,s),2.67(14H, m),2.76-3.04(5H,m),3.18(1H,dd),3.36-3.68(5H,m),6.55-6.66(2H,m),8.26-8.38(2H, m),8.64(2H,s)；m/zMH+512。
实例26：(R)-4-((5-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1- 基)苯基)吡嗪-2-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000912
将Pd(Ph3P)4(34mg，0.03mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(4,4,5,5-四甲基 -1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物27)(130 mg，0.29mmol)、4-((5-氯代吡嗪-2-基)甲基)吗啉(中间物76)(62mg，0.29mmol)和Na2CO3 (62mg，0.58mmol)的1,4-二噁烷(3mL)和水(1.5mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用0-100％MeCN水溶液(+0.1％FA)洗脱来纯化所得粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(70mg，48％)；1H NMR(300MHz,CDCl3)1.91(1H,dq),2.21(1H,dq),2.67(1 1H,m),2.80(3H,s),2.95(2H,m),3.16(1H,dd),3.35-3.54(2H,m),3.60(1H,td),3.71(2H,s),3.77(4H,t),6.58- 6.69(2H,m),7.88-8.00(2H,m),8.60(1H,s),8.91(1H,d)；m/z MH+499。
实例27：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)苯基)吡咯烷-3- 基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000921
在室温下将甲醛(于水中37％)(5mL，67.2mmol)一次性添加到含4-((6-(4-(3-((2,5,7- 三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)苯基)吡啶-3-基)甲基)哌嗪-1-甲酸 (R)-叔丁酯(中间物82)(290mg，0.49mmol)的甲酸(10mL)中。将反应混合物在55 ℃下搅拌4小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。将残余物再溶解于2M NH3/MeOH中并通过制备型HPLC纯化，获得呈白色固体状的标题化合物(58mg，26％)；1H NMR(500MHz,CDCl3)1.83-1.93(1H,m),2.12-2.22(1H,m),2.29(3H,s),2.53(8H,d),2.62(4H,s),2.70(3H,s),2.79(3H,s),2.85-2.99(2H,m),3.14(1H,dd),3.37-3.47(2H,m),3.52(2H,s),3.57(1H,td),6.55-6.65(2H,m),7.59(1H,dd),7.65(1H,dd),7.87-7.95(2H,m),8.51(1H,d)；m/z MH+511。
实例28：(R)-4-((5-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1- 基)苯基)嘧啶-2-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000922
将RuPhos第3代预催化剂(53mg，0.06mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷 -3-基甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐(中间物4)(200mg，0.63mmol)、4-((5-(4- 溴代苯基)嘧啶-2-基)甲基)吗啉(中间物39)(231mg，0.69mmol)、Cs2CO3(819mg，2.51 mmol)和Ruphos(59mg，0.13mmol)的1,4-二噁烷(8mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用0-100％MeCN 水溶液(+0.1％FA)洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(180mg， 57％)；1H NMR(300MHz,MeOD)1.88-2.06(1H,m),2.22(1H,dq),2.55(3H,s),2.60-2.69 (4H,m),2.71(4H,m),2.82(3H,s),3.02(2H,dd),3.15(1H,dd),3.31-3.50(2H,m),3.52-3.66 (1H,m),3.69-3.79(4H,m),3.83(2H,s),6.67-6.77(2H,m),7.52-7.63(2H,m),8.97(2H,s)； m/z MH+499。
实例29：(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1- 基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000931
将经脱气的1,4-二噁烷(10mL)添加到(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基甲基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物4)(257mg，1.05mmol)和4-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基)甲基) 吗啉(中间物65)(350mg，1.05mmol)中。然后添加Cs2CO3(1.02g，3.14mmol)，接着为RuPhos(24mg，0.05mmol)和RuPhos第3代预催化剂(44mg，0.05mmol)。将反应混合物在90℃下加热6小时，使其冷却到室温，用DCM(50mL)稀释并过滤。在真空中浓缩滤液。通过fcc，用含0-5％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物。将所得油与EtOAc:庚烷(4:1，10mL)一起研磨，并将沉淀物通过过滤分离并在真空中干燥，获得呈黄色固体状的标题化合物(270mg，52％)；1H NMR(500MHz,CDCl3)1.90(1H,dq), 2.20(1H,td),2.56(4H,q),2.62(4H,s),2.70(3H,s),2.79(3H,s),2.93(2H,qd),3.15(1H,dd), 3.37-3.49(2H,m),3.55-3.63(1H,m),3.69-3.77(4H,m),3.87(2H,s),6.59-6.68(2H,m), 7.59(1H,d),7.75(1H,d),7.98-8.06(2H,m)；m/z MH+499。
实例30：(S)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基) 苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260000932
以与实例29类似之方式在5个步骤中由市售3-(羟基甲基)吡咯烷-1-甲酸(S)-叔丁酯制备实例30，获得呈白色固体状的标题化合物(122mg，最终步骤30％)；1H NMR(500MHz, DMSO)1.86(1H,dq),2.07-2.16(1H,m),2.38-2.45(4H,m),2.47(3H,s),2.59(1H,d),2.64 (3H,s),2.74(3H,s),2.93(2H,d),3.09(1H,dd),3.32(1H,d),3.43(1H,dd),3.46-3.53(1H, m),3.54-3.63(4H,m),3.75(2H,s),6.65(2H,d),7.62(1H,d),7.98(2H,d),8.02(1H,d)；m/z MH+499。
实例31：(R)-6-((1-(5-(2-甲氧基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)-6-甲基吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000941
在室温下将XPhos第2代预催化剂(30mg，0.04mmol)添加到含(2-甲氧基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)硼酸(中间物42)(112mg，0.42mmol)、(R)-6-((1-(5-溴-6-甲基吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物45)(160mg，0.38 mmol)和Cs2CO3(250mg，0.77mmol)的1,4-二噁烷(2mL)和水(1mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(90mg，42％)；1H NMR(300MHz,CDCI3) 1.78-2.24(3H,m),2.27(3H,s),2.31-2.77(17H,m),2.82(3H,s),2.87-3.06(2H,m),3.34 (1H,dd),3.45-3.61(3H,m),3.66-3.83(5H,m),6.93-7.04(2H,m),7.22(1H,d),7.77(1H, s)；m/z MH+556。
实例32：2,5,7-三甲基-6-(((R)-1-(5-(4-(((3R,5S)-3,4,5-三甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪 -2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000942
在空气下在室温下将(2S,6R)-1,2,6-三甲基哌嗪(商业来源)(104mg，0.81mmol)一次性添加到含(R)-6-((1-(5-(4-(氯甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基 -[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物48)(181mg，0.40mmol)和三乙胺(0.28mL，2.02mmol) 的THF(5mL)中。将反应混合物在60℃下搅拌24小时，使其冷却到室温，并用EtOAc (50mL)和水(15mL)稀释。将有机层分离并用饱和盐水(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-4％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(115mg，53％)；1H NMR(500MHz,DMSO) 0.92(6H,d),1.75(2H,t),1.8-1.91(1H,m),2.06-2.16(5H,m),2.46(3H,s),2.5-2.52(1H, m),2.63(6H,d),2.74(3H,s),2.93(2H,d),3.2-3.26(1H,m),3.37-3.47(3H,m),3.63(1H, dd),3.66-3.73(1H,m),7.32(2H,d),7.87(2H,d),8.02(1H,d),8.61(1H,d)；m/z MH+540。
实例33：6-(((R)-1-(5-(4-(((R)-3,4-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基) 甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000951
将含(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2- 基)苯甲醛(中间物49)(200mg，0.47mmol)和(R)-1,2-二甲基哌嗪(商业来源)(267mg， 2.34mmol)的MeOH(10mL)在室温下搅拌1小时，然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(397 mg，1.87mmol)和AcOH(2.81mg，0.05mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时，然后在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(126mg，51％)；1H NMR(300MHz,CDCl3)1.06(3H,d),1.93(2H,dq),2.22(3H,dt),2.33 (4H,s),2.56-3.06(15H,m),3.34(1H,dd),3.56(3H,d),3.67-3.84(2H,m),7.40(2H,d),7.78 -7.88(2H,m),7.95(1H,d),8.51(1H,d)；m/z MH+526。
实例34：6-(((R)-1-(5-(4-(((R)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基) 甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000952
在空气下在室温下将(R)-1,3-二甲基哌嗪二盐酸盐(商业来源)(167mg，0.89mmol) 一次性添加到含(R)-6-((1-(5-(4-(氯甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基 -[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物48)(200mg，0.45mmol)和三乙胺(0.31mL，2.23mmol) 的1,4-二噁烷(5mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌24小时，使其冷却到室温并用EtOAc (50mL)和水(15mL)稀释。将有机层分离并用饱和盐水(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将所得粗产物通过fcc，用含0-4％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化，然后通过制备型HPLC进一步纯化，获得呈黄色泡沫状的标题化合物(32mg， 14％)；1H NMR(500MHz,DMSO)1.06(3H,d),1.79-1.91(2H,m),1.99(1H,s),2.10(5H,s), 2.41(1H,s),2.46(4H,s),2.52-2.62(3H,m),2.63(3H,s),2.74(3H,s),2.93(2H,d),3.12(1H,d),3.23(1H,dd),3.4-3.49(1H,m),3.63(1H,dd),3.65-3.74(1H,m),3.95(1H,d),7.32(2H,d),7.82-7.90(2H,m),8.02(1H,d),8.60(1H,d)；m/z MH+526。
实例35：2,5,7-三甲基-6-(((R)-1-(5-(4-(((2R,5R)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪 -2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000961
在空气下在室温下将(2R,5R)-1,2,5-三甲基哌嗪盐酸盐(商业来源)(147mg，0.89mmol) 一次性添加到含(R)-6-((1-(5-(4-(氯甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基 -[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物48)(200mg，0.45mmol)和三乙胺(0.31mL，2.23mmol) 的1,4-二噁烷(5mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌24小时，使其冷却到室温并用EtOAc (50mL)和水(15mL)稀释。将有机层分离并用饱和盐水溶液(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中干燥。将所得粗产物通过fcc，用含0-4％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化，然后通过与MeOH一起进行的研磨进一步纯化，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(78mg，32％)；1H NMR(500MHz,DMSO)0.90(3H,d),1.03(3H,d),1.8-1.91(lH, m),2.10(5H,s),2.22-2.32(3H,m),2.46(4H,s),2.57-2.61(1H,m),2.63(3H,s),2.74(4H,s), 2.93(2H,d),3.23(1H,dd),3.41-3.48(2H,m),3.55-3.66(2H,m),3.66-3.73(1H,m),7.35 (2H,d),7.86(2H,d),8.02(1H,d),8.60(1H,d)；m/z MH+540。
实例36：2,5,7-三甲基-6-(((R)-1-(5-(4-(((2S,5R)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪 -2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000962
在空气下在室温下将(2R,5S)-1,2,5-三甲基哌嗪二盐酸盐(商业来源)(180mg，0.89 mmol)一次性添加到含(R)-6-((1-(5-(4-(氯甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物48)(200mg，0.45mmol)和三乙胺(0.31mL，2.23 mmol)的1,4-二噁烷(5mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌24小时，使其冷却到室温并用EtOAc(50mL)和水(15mL)稀释。将有机层分离并用饱和盐水溶液(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将所得粗产物通过fcc，用含0-4％1M NH3/MeOH 的DCM洗脱来纯化，然后通过制备型HPLC进一步纯化，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(81mg，34％)；1H NMR(500MHz,DMSO)0.83(3H,d),1.07(3H,d),1.73(1H,t),1.80 -1.93(3H,m),2.09(4H,s),2.35(1H,s),2.46(3H,s),2.63(5H,s),2.74(3H,s),2.93(2H,d), 3.01(1H,d),3.20-3.26(1H,m),3.43(1H,d),3.59-3.74(2H,m),4.02(1H,d),7.32(2H,d), 7.86(2H,d),8.02(1H,s),8.61(1H,s),1H错失假定处于DMSO峰下；m/z MH+540。
实例37：2,5,7-三甲基-6-[[(3R)-1-[5-[4-(1-哌啶基甲基)苯基]吡嗪-2-基]吡咯烷-3-基]甲基]-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000971
将(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2- 基)苯甲醛(中间物49)(30mg，0.07mmol)、哌啶(12mg，0.14mmol)、DCM(2mL) 和AcOH(2滴)组合并将反应混合物在室温下搅拌5小时。添加三乙酰氧基硼氢化钠(45 mg，0.21mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得标题化合物(15mg，44％)；1H NMR(400MHz,DMSO)1.47(6H,d),1.82-1.92(1H, m),2.12(1H,dd),2.36(4H,s),2.48(3H,s),2.65(4H,s),2.76(3H,s),2.95(2H,d),3.25(2H,dd),3.41-3.51(2H,m),3.62-3.75(2H,m),7.37(2H,s),7.90(2H,s),8.04(1H,d),8.64(1H,s)；m/z MH+497。
实例38：(R)-6-((1-(5-(4-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000972
在室温下将1-乙基哌嗪(136mg，1.19mmol)添加到含(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2-基)苯甲醛(中间物49)(170mg，0.40 mmol)的MeOH(5mL)中，并将反应混合物搅拌1小时。添加三乙酰氧基硼氢化钠(421 mg，1.99mmol)。将反应混合物在室温下搅拌60小时，然后在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN水溶液(+0.1％FA)洗脱来纯化所得粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物的甲酸盐(114mg，51％)；1H NMR(300MHz,CDCl3)1.25(3H,t),1.93 (1H,dq),2.15-2.32(1H,m),2.56-3.06(22H,m),3.34(1H,dd),3.48-3.65(3H,m),3.76(2H, ddt),7.34-7.44(2H,m),7.78-7.89(2H,m),7.95(1H,d),8.47-8.55(2H,m)；m/z MH+526。
实例39：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(5-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-2-基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000981
在室温下将双(三苯基正膦基)氯化钯(IV)(35mg，0.05mmol)添加到含1-((6-溴代吡啶-3-基)甲基)-4-甲基哌嗪(中间物7)(135mg，0.50mmol)、1,1,1,2,2,2-六甲基二锡(180 mg，0.55mmol)的THF(3mL)中。将反应混合物在85℃下搅拌16小时。添加(R)-6-((1-(5- 溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物46)(200 mg，0.50mmol)和Pd(Ph3P)4(57.4mg，0.05mmol)以及THF(5mL)。将反应混合物转移到微波小瓶中，并在微波反应器中在100℃下加热10小时，并且然后使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN水溶液(+0.1％FA)洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(59mg，23％)；1H NMR(400MHz,CDCl3) 1.95(1H,dq),2.25(1H,tt),2.47(3H,s),2.60-2.75(15H,m),2.82(3H,s),2.97(2H,qd),3.38 (1H,dd),3.54-3.65(3H,m),3.80(2H,td),7.73(1H,dd),7.92(1H,d),8.11(1H,d),8.53-8.59 (1H,m),9.09(1H,d)；m/z MH+513。
实例40：6-(((R)-1-(5-(4-(((3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3- 基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000982
将(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2- 基)苯甲醛(中间物49)(200mg，0.47mmol)添加到含(2R,6S)-1,2,6-三甲基哌嗪(商业来源)(120mg，0.94mmol)的DCM(10mL)中。将反应混合物在室温下搅拌2小时。添加AcOH(2.7μl，0.05mmol)和氰基硼氢化钠(118mg，1.87mmol)并将反应混合物搅拌16小时，然后在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(75mg，31％)；1H NMR(300MHz,CDCl3)1.06(6H,d),1.73(2H,t),1.93(1H, dq),2.23(1H,dq),2.82(17H,m),3.34(1H,dd),3.55(3H,d),3.75(2H,m),7.40(2H,m),7.83 (2H,m),7.95(1H,d),8.51(1H,d)；m/z MH+526。
实例41：2-{4-[4-(5-{(3R)-3-[(2,5,7-三甲基[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基]吡咯烷-1- 基}吡嗪-2-基)苄基]哌嗪-1-基}乙醇
Figure BDA0003645404260000991
将(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2- 基)苯甲醛(中间物49)(30mg，0.07mmol)、2-哌嗪-1-基乙醇(18.23mg，0.14mmol)、 DCM(2mL)和AcOH(2滴)组合并将反应混合物在室温下搅拌5小时。然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(45mg，0.21mmol)，并将反应混合物在室温下搅拌16小时。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得标题化合物(8mg，20％)；1H NMR(400MHz,DMSO)1.81 -1.93(1H,m),2.12(1H,d),2.31-2.44(10H,m),2.48(3H,s),2.65(4H,s),2.76(3H,s),2.95 (2H,d),3.22-3.27(2H,m),3.47(4H,s),3.62-3.76(2H,m),4.32(1H,s),7.34(2H,d),7.88 (2H,d),8.04(1H,d),8.62(1H,d)；m/z MH+542。
实例42：(R)-6-((1-(5-(4-((4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3- 基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260000992
在空气下在室温下将1-(2-甲氧基乙基)哌嗪(202mg，1.40mmol)添加到含 (R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2-基)苯甲醛(中间物49)(200mg，0.47mmol)的DCM(5mL)中，并将反应混合物搅拌1小时。添加三乙酰氧基硼氢化钠(496mg，2.34mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时，然后在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN水溶液(+0.1％FA)洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物的甲酸盐(194mg，70％)；1H NMR(400 MHz,CDCl3)1.89-2.01(1H,m),2.18-2.31(1H,m),2.59-3.05(22H,m),3.35(4H,s),3.52- 3.67(3H,m),3.67-3.83(4H,m),7.38-7.46(2H,m),7.82-7.90(2H,m),7.97(1H,s),8.45 (1H,s),8.54(1H,d)；m/zMH+556。
实例43：(R)-6-((1-(5-(2-甲氧基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基) 甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001001
在室温下将XPhos第2代预催化剂(14.7mg，0.02mmol)添加到含(R)-6-((1-(5-溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物46)(150mg， 0.37mmol)、(2-甲氧基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)硼酸(中间物42)(108mg，0.41 mmol)和Cs2CO3(243mg，0.75mmol)的1,4-二噁烷(3mL)和水(1.5mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌4小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN水溶液(+0.1％FA)洗脱来纯化所得粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物的甲酸盐(168mg，79％)；1H NMR(400MHz,CDCI3)1.93(1H,dq),2.23(1H,dq), 2.54-3.05(24H,m),3.34(1H,dd),3.51-3.65(3H,m),3.76(2H,ddd),3.89(3H,s),6.96-7.06 (2H,m),7.73(1H,d),7.98(1H,d),8.69(1H,d)；m/z MH+542。
实例44：{1-[4-(5-{(3R)-3-[(2,5,7-三甲基[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基]吡咯烷-1- 基}吡嗪-2-基)苄基]哌啶-4-基}甲醇
Figure BDA0003645404260001002
将(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2- 基)苯甲醛(中间物49)(30mg，0.07mmol)、4-哌啶基甲醇(16.12mg，0.14mmol)、DCM (2mL)和AcOH(2滴)组合，并将反应混合物在室温下搅拌5小时。然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(45mg，0.21mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。通过制备型HPLC 纯化混合物，获得标题化合物(17.4mg，47％)；1H NMR(400MHz,DMSO)1.07-1.2(2H,m),1.34(1H,s),1.62(2H,d),1.85-1.95(3H,m),2.12(1H,dd),2.48(3H,s),2.65(4H,s),2.76 (3H,s),2.82(2H,d),2.95(2H,d),3.21-3.28(4H,m),3.45(2H,s),3.62-3.75(2H,m),4.37 (1H,s),7.34(2H,d),7.88(2H,d),8.04(1H,d),8.62(1H,d)；m/z MH+527。
实例45：6-{[(3R)-1-(5-{4-[(1,1-二氧化硫代吗啉-4-基)甲基]苯基}吡嗪-2-基)吡咯烷-3- 基]甲基}-2,5,7-三甲基[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001011
将(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2- 基)苯甲醛(中间物49)(30mg，0.07mmol)、1,1-二氧化1,4-噻嗪盐酸盐(24.03mg，0.14 mmol)、DCM(2mL)和AcOH(2滴)组合并将混合物在室温下搅拌5小时。然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(45mg，0.21mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。通过制备型HPLC纯化混合物，获得标题化合物(12mg，30％)；1H NMR(400MHz,DMSO)1.87 (1H,dd),2.12(1H,dd),2.48(3H,s),2.65(4H,s),2.76(3H,s),2.86-2.93(4H,m),2.95(2H, d),3.09-3.14(4H,m),3.25(1H,dd),3.45(1H,dt),3.62-3.76(4H,m),7.39(2H,d),7.91(2H,d),8.04(1H,d),8.64(1H,d)；m/z MH+547。
实例46：2,5,7-三甲基-6-({(3R)-1-[5-(4-{[4-(甲基磺酰基)哌啶-1-基]甲基}苯基)吡嗪-2- 基]吡咯烷-3-基}甲基)[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001012
将(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2- 基)苯甲醛(中间物49)(30mg，0.07mmol)、4-甲基磺酰基哌啶(22.9mg，0.14mmol)、 DCM(2mL)和AcOH(2滴)组合并将混合物在室温下搅拌5小时。然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(45mg，0.21mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。通过制备型HPLC 纯化混合物并冻干，获得标题化合物(15mg，38％)；1H NMR(500MHz,DMSO)1.56(2H, tt),1.76-1.85(1H,m),1.92(4H,t),2.05(1H,dd),2.41(3H,s),2.58(4H,s),2.69(3H,s),2.84(3H,s),2.88(4H,d),2.98(1H,ddt),3.18(1H,dd),3.38(1H,dt),3.44(2H,s),3.55-3.68(2H, m),7.28(2H,d),7.82(2H,d),7.97(1H,d),8.55(1H,d)；m/z MH+575。
实例47：(R)-4-((6-(3-甲基-5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2-基)吡啶-3-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260001021
在室温下将双(三苯基正膦基)氯化钯(IV)(164mg，0.23mmol)添加到含4-((6-溴代吡啶-3-基)甲基)吗啉(中间物30)(600mg，2.33mmol)、1,1,1,2,2,2-六甲基二锡(841mg，2.57mmol)的THF(8mL)中。将反应混合物在85℃下搅拌16小时。添加(R)-6-((1-(5- 溴-6-甲基吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物45) (300mg，0.72mmol)和Pd(Ph3P)4(83mg，0.07mmol)，并将混合物转移到具有THF(10 mL)的微波管中。将反应混合物在微波反应器中在100℃下加热5小时并使其冷却到室温，然后在真空中浓缩。将所得粗产物通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN水溶液(+0.1％ FA)洗脱来纯化，然后通过制备型HPLC进一步纯化，获得呈白色固体状的标题化合物(160 mg，43％)；1H NMR(300MHz,MeOD)1.97(1H,dq),2.24(1H,dq),2.47-2.59(10H,m),2.73 (4H,s),2.84(3H,s),3.04(2H,dd),3.32-3.42(1H,m),3.47-3.66(3H,m),3.66-3.87(6H,m),7.72(1H,dd),7.81(1H,s),7.91(1H,dd),8.53-8.60(1H,m)；m/z MH+514。
实例48：6-(((R)-1-(5-(4-(((S)-3,4-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基) 甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001022
将(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2- 基)苯甲醛(中间物49)(200mg，0.47mmol)添加到含(S)-1,2-二甲基哌嗪二盐酸盐(350 mg，1.87mmol)的MeOH(10mL)中。将反应混合物在室温下搅拌2小时。添加AcOH (2.81mg，0.05mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(397mg，1.87mmol)并将反应混合物搅拌16小时。用水淬灭反应混合物，并通过制备型HPLC纯化所得溶液，获得呈白色固体状的标题化合物(132mg，54％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)1.07(3H,d),1.94(2H,dq),2.18- 2.35(6H,m),2.39(1H,s),2.59-2.85(13H,m),2.97(2H,qd),3.35(1H,dd),3.56(3H,d),3.76 (2H,ddt),7.38-7.45(2H,m),7.80-7.88(2H,m),7.96(1H,d),8.52(1H,d)；m/z MH+526。
实例49：(R)-4-((5-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1- 基)吡嗪-2-基)吡啶-2-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260001031
在室温下将XPhos第2代预催化剂(19.6mg，0.02mmol)添加到含(R)-6-((1-(5-溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物46)(200mg， 0.50mmol)、(6-(吗啉代甲基)吡啶-3-基)硼酸(商业来源)(110mg，0.50mmol)和Cs2CO3 (324mg，0.99mmol)的1,4-二噁烷(4mL)和水(2mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物(172mg，69％)；1H NMR(400MHz,MeOD)1.91-2.06(1H,m), 2.23-2.29(1H,m),2.53-2.57(7H,m),2.66-2.74(4H,m),2.85(3H,d),2.97-3.1 1(2H,m), 3.35-3.38(1H,m),3.53-3.59(1H,m),3.67-3.85(8H,m),7.61(1H,d),8.05(1H,s),8.30 (1H,dd),8.56(1H,s),9.01-9.02(1H,m)；m/z MH+500。
实例50：6-(((R)-1-(5-(4-(((S)-2,4-二甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基) 甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001032
在空气下在室温下将(S)-1,3-二甲基哌嗪二盐酸盐(167mg，0.89mmol)一次性添加到含(R)-6-((1-(5-(4-(氯甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并 [1,5-a]嘧啶(中间物48)(200mg，0.45mmol)和三乙胺(0.31mL，2.23mmol)的1,4- 二噁烷(5mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌24小时，使其冷却到室温并用EtOAc(50 mL)和水(15mL)稀释。将有机层分离并用饱和盐水(15mL)洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-4％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(54mg，23％)；1H NMR(500MHz,DMSO)1.06(3H, d),1.80-1.91(2H,m),1.94-2.04(1H,m),2.05-2.14(5H,m),2.37-2.43(1H,m),2.46(4H, s),2.52-2.61(3H,m),2.63(3H,s),2.74(3H,s),2.93(2H,d),3.12(1H,d),3.23(1H,dd),3.43 (1H,dt),3.63(1H,dd),3.66-3.73(1H,m),3.95(1H,d),7.33(2H,d),7.82-7.91(2H,m),8.02 (1H,d),8.60(1H,d)；m/z MH+526。
实例51：(R)-4-(4-(3-甲基-5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2-基)苄基)吗啉
Figure BDA0003645404260001041
将XPhos第2代预催化剂(11.3mg，0.01mmol)添加到含4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2- 二氧杂硼烷-2-基)苄基)吗啉(商业来源)(87mg，0.29mmol)、(R)-6-((1-(5-溴-6-甲基吡嗪 -2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物45)(120mg，0.29 mmol)和Cs2CO3(188mg，0.58mmol)的1,4-二噁烷(4mL)和水(1.5mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并通过硅藻土过滤。在真空中浓缩滤液并通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(49mg，31％)；1HNMR(300MHz,MeOD)1.92-1.99(1H,m),2.17-2.27(1H,m),2.41(3H,s),2.55(3H,s), 2.61-2.83(11H,m),2.96-3.03(2H,m),3.29-3.35(1H,m),3.47-3.55(1H,m),3.65-3.79 (6H,m),3.86(2H,s),7.47-7.53(4H,m),7.75(1H,s)；m/z MH+513。
实例52：2,5,7-三甲基-6-({(3R)-1-[5-(4-{[4-(甲基磺酰基)哌嗪-1-基]甲基}苯基)吡嗪-2- 基]吡咯烷-3-基}甲基)[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001042
将(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2- 基)苯甲醛(中间物49)(30mg，0.07mmol)、1-甲基磺酰基哌嗪(22.99mg，0.14mmol)、 DCM(2mL)和AcOH(2滴)组合并将混合物在室温下搅拌5小时。然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(45mg，0.21mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。通过制备型HPLC 纯化混合物，获得标题化合物(11.9mg，30％)；1H NMR(400MHz,DMSO)1.87(1H,dd), 2.12(1H,dd),2.48(7H,s),2.65(4H,s),2.76(3H,s),2.87(3H,s),2.95(2H,d),3.09-3.16(4H, m),3.25(1H,dd),3.41-3.50(1H,m),3.55(2H,s),3.62-3.75(2H,m),7.37(2H,d),7.90(2H,d),8.04(1H,d),8.63(1H,d)；m/z MH+576。
实例53：(R)-N,N-二甲基-2-(4-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2-基)苄基)哌嗪-1-基)乙酰胺
Figure BDA0003645404260001051
在室温下将N,N-二甲基-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺(中间物21)(240mg，1.40mmol)添加到含(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2-基) 苯甲醛(中间物49)(200mg，0.47mmol)的DCM(5mL)中，并将反应混合物搅拌1 小时。添加三乙酰氧基硼氢化钠(496mg，2.34mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16 小时，然后在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN水溶液(+0.1％FA) 洗脱来纯化所得粗产物，获得呈黄色固体状的标题化合物的部分(0.6当量)甲酸盐(172 mg，60％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)1.87-2.01(1H,m),2.18-2.30(1H,m),2.64(3H,s), 2.60-2.71(1H,m),2.72-2.78(1 1H,m),2.83(3H,s),2.96(3H,s),2.88-3.05(2H,m),3.05 (3H,s),3.24(2H,s),3.35(1H,dd),3.52-3.63(1H,m),3.72-3.81(1H,m),3.78(3H,s),7.45 (2H,d),7.87(2H,d),7.97(1H,d),8.42(0.6H,s,等同于0.6eq.甲酸盐),8.52(1H,d)；m/z MH+ 583。
实例54：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(6-甲基-5-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基) 吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001052
在室温下将XPhos第2代预催化剂(28mg，0.04mmol)添加到含1-甲基-4-(4-(4,4,5,5- 四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)哌嗪(125mg，0.40mmol)、(R)-6-((1-(5-溴-6-甲基吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物45)(150mg，0.36 mmol)和Cs2CO3(235mg，0.72mmol)的1,4-二噁烷(3mL)和水(1.5mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(110mg，58％)；1H NMR(300MHz,CDCl3)1.81-2.00(1H,m),2.20(1H,dq),2.31-2.76(21H,m),2.82(3H,s),2.94(2H,qd),3.34(1H,dd),3.46-3.61(3H,m),3.74(2H,ddd),7.38(2H,d),7.43-7.53(2H,m),7.79(1H,s)；m/z MH+526。
实例55：N,N-二甲基-4-[4-(5-{(3R)-3-[(2,5,7-三甲基[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基] 吡咯烷-1-基}吡嗪-2-基)苄基]哌嗪-1-甲酰胺
Figure BDA0003645404260001061
将(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2- 基)苯甲醛(中间物49)(30mg，0.07mmol)、N,N-二甲基哌嗪-1-甲酰胺(23mg，0.14mmol)、 DCM(2mL)和AcOH(2滴)组合并将混合物在室温下搅拌5小时。然后添加三乙酰氧基硼氢化钠(45mg，0.21mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。通过制备型HPLC 纯化混合物，获得标题化合物(13mg，33％)；1H NMR(400MHz,DMSO)1.82-1.92(1H,m),2.07-2.17(1H,m),2.35-2.41(4H,m),2.48(3H,s),2.65(4H,s),2.72(6H,s),2.76(3H,s), 2.95(2H,d),3.07-3.15(4H,m),3.22-3.27(1H,m),3.41-3.54(3H,m),3.68(2H,ddd),7.36 (2H,d),7.89(2H,d),8.04(1H,d),8.63(1H,d)；m/z MH+569。
实例56：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(3-甲基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基) 吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001062
将Pd(Ph3P)4(35mg，0.03mmol)添加到含(R)-6-((1-(5-溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基) 甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物46)(122mg，0.30mmol)、1-甲基-4-(2- 甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)哌嗪(中间物51)(100mg，0.30mmol) 和Na2CO3(64.2mg，0.61mmol)的甲苯(4mL)和水(1mL)中。将反应混合物在80 ℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(15mg，9％)；1H NMR(300MHz,CDCl3)1.94(1H,m), 2.22(1H,dt),2.30-2.75(21H,m),2.81(3H,s),2.95(2H,t),3.34(1H,dd),3.54(3H,m),3.75(2H,m),7.34(1H,m),7.65(2H,m),7.94(1H,d),8.50(1H,s)；m/z MH+526。
实例57：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001071
在室温下将XPhos第2代预催化剂(10.76mg，0.01mmol)添加到含(R)-6-((1-(5-溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物46)(110mg， 0.27mmol)、(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)吡啶-3-基)硼酸(中间物9)(71mg，0.30mmol) 和Cs2CO3(178mg，0.55mmol)的1,4-二噁烷(3mL)和水(1.5mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌4小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN水溶液(+0.1％FA)洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物的部分(0.5eq.)甲酸盐(141mg，96％)；1H NMR(400MHz,CDCI3)1.96(1H,dq),2.25(1H,dt), 2.62-2.76(10H,m),2.83(3H,s),2.89-3.06(10H,m),3.36(1H,dd),3.59(1H,dt),3.71-3.84(4H,m),7.41(1H,d),7.99(1H,d),8.18(1H,dd),8.40(0.5H,s,来自0.5eq.甲酸盐),8.53(1H, d),9.1 1(1H,d)；m/z MH+513。
实例58：(R)-1-(4-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1- 基)吡嗪-2-基)苄基)哌嗪-1-基)乙酮
Figure BDA0003645404260001072
将1-(4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)哌嗪-1-基)乙酮(中间物52)(667 mg，1.94mmol)、(R)-6-((1-(5-溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并 [1,5-a]嘧啶(中间物46)(600mg，1.49mmol)和Cs2CO3(972mg，2.98mmol)添加到 1,4-二噁烷(30mL)和水(15mL)中，并使混合物脱气10分钟。添加XPhos第2代预催化剂(59mg，0.07mmol)并将反应混合物在90℃下搅拌18小时，然后使其冷却到室温并用EtOAc(50mL)稀释。将有机层分离并用饱和盐水溶液洗涤并经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-4％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物。将产物溶解于EtOAc(2mL)中并搅拌2小时，并将所得沉淀物通过过滤分离并在真空中干燥，获得呈白色固体状的标题化合物(209mg，26％)；1H NMR(500MHz,DMSO)1.78 -1.91(1H,m),1.96(3H,s),2.03-2.16(1H,m),2.26-2.33(2H,m),2.34-2.4(2H,m),2.46 (3H,s),2.55-2.67(4H,m),2.74(3H,s),2.93(2H,d),3.2-3.26(1H,m),3.35-3.47(5H,m), 3.50(2H,s),3.59-3.75(2H,m),7.34(2H,d),7.88(2H,d),8.02(1H,s),8.62(1H,s)；m/z MEL 540。
实例59：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3- 基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001081
将XPhos第2代预催化剂(0.780g，0.99mmol)添加到(R)-6-((1-(5-溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物46)(7.98g，19.84mmol)、 1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)哌嗪(商业来源)(7.53g，23.8 mmol)和Cs2CO3(12.93g，39.7mmol)于1,4-二噁烷(187mL)和水(75mL)中的混合物中。将反应混合物在90℃下加热3小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。将残余物溶解于水(1L)中并用DCM(3×800mL)萃取。将合并有机层用水、饱和盐水洗涤，经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，用含0-15％MeOH的DCM洗脱来纯化所得粗产物。将产物在超声处理之后溶解于MeCN(150ml)中并搅拌2小时。将所得沉淀物通过过滤分离，用二乙醚洗涤并且然后用正庚烷洗涤，并在真空中干燥，获得呈淡乳膏固体状的标题化合物(6.30g，62％)；1H NMR(500MHz,DMSO)1.82-1.88(1H,m),2.10 -2.14(1H,m),2.15(3H,s),2.30-2.34(4H,m),2.37-2.41(4H,m),2.47(3H,s),2.58-2.64 (1H,m),2.64(3H,s),2.75(3H,s),2.91-2.95(2H,m),3.23-3.26(1H,m),3.43-3.46(1H,m), 3.47(2H,s),3.64-3.67(1H,m),3.68-3.72(1H,m),7.32(2H,d),7.85(2H,d),8.00(1H,s), 8.56(1H,s)；m/z MH+512。
实例60：(R)-4-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基) 吡嗪-2-基)苄基)吗啉
Figure BDA0003645404260001091
在室温下将XPhos第2代预催化剂(24.45mg，0.03mmol)添加到含(R)-6-((1-(5-溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物46)(250mg， 0.62mmol)、4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)吗啉(商业来源)(188mg， 0.62mmol)和Cs2CO3(405mg，1.24mmol)的1,4-二噁烷(5mL)和水(2.5mL)中。将反应混合物在80℃下搅拌16小时，使其冷却到室温，通过硅藻土过滤并在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(191mg，56％)；1H NMR(300MHz,MeOD)1.93-2.02(1H,m),2.18-2.28(1H,m),2.55(3H,s),2.65-2.74 (4H,m),2.78-2.83(7H,m),3.02-3.04(2H,m),3.29-3.35(1H,m),3.49-3.58(1H,m),3.66 -3.81(6H,m),3.86(2H,s),7.47(2H,d),7.90(2H,d),7.99(1H,s),8.49(1H,s)；m/z MH+499。
实例61：(R)-4-(4-(6-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基) 哒嗪-3-基)苄基)吗啉
Figure BDA0003645404260001092
在室温下将XPhos第2代预催化剂(11mg，0.01mmol)添加到含(R)-6-((1-(6-氯代哒嗪-3-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物53)(100mg，0.28 mmol)、4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)吗啉(商业来源)(85mg，0.28 mmol)和Cs2CO3(182mg，0.56mmol)的1,4-二噁烷(2mL)和水(1mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌2小时，使其冷却到室温并在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用 5-100％MeCN水溶液(+0.08％NH4HCO3)洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(101mg，73％)；1H NMR(400MHz,MeOD)2.01(1H,dq),2.26(1H,dt),2.54 (7H,d),2.75(4H,s),2.86(3H,s),3.07(2H,dd),3.38(1H,dd),3.52-3.63(3H,m),3.68-3.86 (6H,m),7.04(1H,d),7.44-7.51(2H,m),7.82-7.95(3H,m)；m/z MH+499。
实例62：(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1- 基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260001101
将Cs2CO3(50g，153mmol)、4-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉(10g，29.80mmol) (中间物65)和(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐(中间物58)(10g，29.80mmol)、RuPhos第3代预催化剂(1.87g，2.24mmol)和RuPhos (1.04g，2.24mmol)组合。添加2-甲基四氢呋喃(80mL)与水(40mL)的脱气混合物，并将反应混合物在回流下加热17小时，然后使其冷却到室温并用DCM(250mL)和水(250 mL)稀释。将有机层分离并用1:1饱和盐水:水(100mL)洗涤，然后过滤通过二氧化硅垫，然后在真空中浓缩，获得粗产物。然后使用以下重复反应：含Cs2CO3(75g，230mmol)、 4-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉(15g，44.70mmol)、(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3- 基氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐(15g，44.7mmol)、RuPhos第3代预催化剂(2.80g，3.35mmol)和RuPhos(1.56g，3.35mmol)的2-甲基四氢呋喃(120mL)与水(60mL) 的脱气混合物。第二反应的处理方式与针对第一反应所描述的处理方式一致。将两批粗产物组合并通过SFC(Kromasil SIL管柱250×50毫米，10μm，流动速率为450毫升/分钟，在130巴和30℃烘箱温度下使用含33％MeOH的scCO2)纯化，获得呈白色固体状的标题化合物(基于组合两批粗产物，29g，产率80％)；1H NMR(600MHz,DMSO)2.31(1H,dtd), 2.42(5H,d),2.46(3H,s),2.52(3H,s),2.58(3H,s),3.45(1H,dd),3.54(1H,td),3.58(5H,q), 3.62-3.68(1H,m),3.77(2H,s),4.96(1H,s),6.74(2H,d),7.65(1H,d),8.03(2H,d),8.07(1H, d)；m/z MH+501。
形式A
通过XRPD和DSC分析最终产物(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉，并发现其为结晶。材料样品的XRPD 产生如图1中所示的衍射图。(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基) 氧基)吡咯烷-1-基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉，形式A特征在于使用CuKα辐射测量的在7.8°或19.0°的2θ值下的至少一个峰。十个最显著的XRPD峰示于表A中。
表A：形式A，(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6- 基)氧基)吡咯烷-1-基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉的十个最显著的XRPD峰
角2θ(2-Theta) 强度％
7.8 100
19.0 59
18.3 54.7
9.2 49.3
15.8 38.8
11.6 32.6
9.5 31.4
10.4 31.4
25.3 29.2
22.3 29
实例62.1：(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1- 基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉的按比例增加
第1组会聚途径：
Figure BDA0003645404260001111
阶段1：1-(4-溴代苯基)-1,4-戊二酮(中间物63)
Figure BDA0003645404260001112
在室温下使2-溴-1-(4-溴代苯基)乙烯酮(12.2Kg，43.89mol)、2,4-戊二酮(9.2Kg， 91.89mol)和碳酸钾(12.2Kg，88.27mol)在乙醇(72.25L)中成浆液约24小时。添加乙酸乙酯(84.26L)和水(74L)，得到相分离，其中下层相被丢弃。将有机相替换成正庚烷(2×84.8L和1×73.1L)的溶剂产生固体，将其通过过滤分离，并用正庚烷(17.54L) 洗涤，获得标题化合物(基于91.6％w/w分析值，7.26Kg，产率59.4％)。1H NMR(400MHz, CDCl3)2.15(3H,s),2.56(2H,t),3.07(2H,t),7.44(2H,d),7.89(2H,d)。
阶段2：3-(4-溴代苯基)-6-甲基哒嗪(中间物64)
Figure BDA0003645404260001121
在室温下将1-(4-溴代苯基)-1,4-戊二酮(13.2Kg，51.74mol)和水合肼(10.9Kg，217.74 mol)在乙醇(54.5L)中混合约6小时。添加水，得到固体，将其通过过滤分离并用水(3 ×66L)和正庚烷(2×36.5L)洗涤。在室温下将固体与四氯-1,4-苯醌(14.5Kg，58.97mol) 和乙腈(137.4L)混合约6小时。用12.5％w/w亚硫酸钠溶液(85L)淬灭反应，并通过蒸馏移除乙腈。添加水(66L)和2M氢氧化钠溶液(66L)，得到固体，将其通过过滤分离并用2M氢氧化钠(2×40L)和水(2×145L)洗涤。将固体与二氯甲烷(140L)混合并再次过滤，之后用水(3×145L)洗涤。然后，将有机相用活性炭处理，接着将溶剂替换成甲基叔丁醚(100L)并且最后用甲基叔丁醚(2×55L)洗涤。此举获得标题化合物(基于95.2％w/w分析值，8.25Kg，产率61％)。1H NMR(400MHz,CDCI3)2.75(3H,s), 7.38(1H,d),7.65-7.60(2H,m),7.71(1H,d),7.96-7.91(2H,m)；13C NMR(400MHz,CDCI3) 22.1,123.5,124.4,127.3,128.4,132.2,135.4,156.2,158.6。
阶段3：4-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉(中间物65)
Figure BDA0003645404260001122
在室温下将1,3,5-三氯-1,3,5-三嗪-2,4,6-三酮(2.8Kg，12.05mol)分批添加到含3-(4- 溴代苯基)-6-甲基哒嗪(中间物64)(7.15Kg，27.32mol)的DCM(338.35L)中。将反应混合物在室温下搅拌3小时，然后添加另一批1,3,5-三氯-1,3,5-三嗪-2,4,6-三酮(0.31Kg， 1.33mol)，并将反应混合物在室温下搅拌3小时。过滤反应混合物，并用水(68L)洗涤有机滤液，之后将溶剂替换成乙腈(55L)。添加吗啉(4.75Kg，54.52mol)，并将混合物加热4小时，之后浓缩并过滤，得到固体，将其用乙腈(6L)和水(6L)洗涤。使用4N 盐酸(7.5Kg)和水(45L)溶解固体。用乙酸乙酯(2×2.5L)洗涤酸性溶液，之后用 15％w/w氢氧化钠(11Kg)调节pH，得到固体，将其通过过滤分离。此举获得标题化合物(基于98.7％w/w分析值，6.2Kg，产率67％)。1H NMR(400MHz,CDCI3)2.56(4H,m), 3.73(4H,m),3.91(2H,s),7.64(2H,m),7.73(1H,d),7.81(1H,d),7.96(2H,m)；m/z MH+334。
第2组会聚途径：
Figure BDA0003645404260001131
阶段4：3-甲基-1H-1,2,4-三唑-5-胺
Figure BDA0003645404260001132
在90℃下将氨基胍碳酸氢盐(17.7Kg，130.04mol)与含硝酸(165g，2.62mol)的乙酸(29.8L，521.21mol)混合64小时。将混合物冷却并用乙酸异丙酯(30L)稀释并过滤，获得标题化合物。粗材料(基于33.7％w/w分析，13.9Kg，产率36.7％)直接用于阶段5中。
阶段5：2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-醇(中间物56)
Figure BDA0003645404260001141
在乙腈(39.44L)中冷却2,4-戊二酮(5.6Kg，55.93mol)和四正丁基溴化铵(0.9Kg，2.79mol)。缓慢添加三甲基氯硅烷(7.3Kg，67.19mol)和二甲亚砜(4.4Kg，56.32mol)，得到呈乙腈溶液状的中间物3-氯-2,4-戊二酮。向这种溶液中装填苯甲酸(4.9Kg，40.12mol) 和二异丙基乙胺(8.6Kg，66.54mol)，得到苯甲酸2,4-二氧代戊烷-3-基酯(中间物54)。用2-甲基四氢呋喃(28.1L)替换溶剂，接着用5％硫酸钠洗涤，接着添加3-甲基-1H-1,2,4- 三唑-5-胺(12.8Kg，43.97mol)。添加乙酸(32.19L)并在90℃下加热20小时，得到苯甲酸2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基酯(中间物55)。用甲苯(25L)替换溶剂并在室温下与处于室温下的5M氢氧化钠(63L)一起搅拌20小时，获得标题化合物。添加6M盐酸，产生固体，将其通过过滤分离并用水(16L)洗涤。使固体在水(40L) 和甲苯(15L)中成浆液并过滤，然后用水(16L)洗涤并干燥，得到5.8Kg(94.6％w/w 分析，30.79mol，相对于苯甲酸，产率76.7％)。
阶段6：中间物58：(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐(中间物58)
Figure BDA0003645404260001142
在0℃下将含偶氮二羧酸二异丙酯(6.9Kg，34.12mol)的THF(14.62)逐滴添加到含2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-醇(4.55Kg，24.16mol)、(S)-3-羟基吡咯烷-1- 甲酸叔丁酯(5.3Kg，28.31mol)和三苯膦(7.3Kg，27.83mol)的THF(85.49L)中，并且然后在室温下搅拌20小时。在此举之后，将溶剂替换成2-甲基THF(46.84L)，并用25％w/w氯化钠(2×22Kg)洗涤。通过将溶剂替换成异丙醇(45L)来去除2-甲基THF，并通过添加含15％盐酸的异丙醇(73.8Kg)并在室温下搅拌15小时来去除Boc基团。冷却并添加晶种(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐(120 g，370mmol)，得到固体，将其通过过滤分离，并用异丙醇洗涤。最后，使固体在乙酸乙酯(45L)中成浆液，之后进行最终过滤并用乙酸乙酯(45L)洗涤，得到5.35Kg(74％ w/w分析*，16.01mol，产率66％)。1H NMR(400MHz,DMSO)2.03-2.13(1H,m),2.22-2.28 (1H,m),2.51-2.54(3H,m),2.62(3H,d),2.74(3H,s),3.32-3.45(3H,m),3.46-3.56(1H,m), 4.90(1H,s),9.91(2H,s)；m/z MH+248.*分析基于游离碱当量。
会聚：
阶段7：(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基) 苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉(实例62)
Figure BDA0003645404260001151
将Cs2CO3(23.8Kg，73.0mol)、4-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉(4.89Kg，14.63mol)(中间物65)和(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶二盐酸盐(中间物58)(4.33Kg，17.51mol*)、2-二叔丁基膦基-2'-甲基联苯(0.23Kg，736mmol) 和三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.33Kg，360mmol)组合。添加2-甲基四氢呋喃(80L)与水(40L)的脱气混合物，并将反应混合物在回流下加热24小时，然后使其冷却到室温并用DCM(100L)和水(50L)稀释。过滤反应混合物，并且有机相是被替换成乙酸乙酯以得到8.4Kg粗材料的溶剂。将此物质溶解于DCM(200L)中并依序用2M盐酸(2×90 L)、2M氢氧化钠(140L)和5％硫代硫酸钠(2×50L)洗涤。使所得DCM溶液透过二氧化硅硫醇树脂(0.5Kg)，之后将溶剂替换成乙酸乙酯，得到5Kg粗材料。将此物质溶解于DCM(25L)中，并通过添加正庚烷(25L)生成正确形式A，并且使用晶种 ((R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉形式A)以控制成核点。过滤并干燥(30℃)，获得呈白色固体状的标题化合物(4.06Kg，8.11mol，产率55％)；1H NMR(600MHz,DMSO)2.31(1H,dtd),2.42(5H, d),2.46(3H,s),2.52(3H,s),2.58(3H,s),3.45(1H,dd),3.54(1H,td),3.58(5H,q),3.62-3.68 (1H,m),3.77(2H,s),4.96(1H,s),6.74(2H,d),7.65(1H,d),8.03(2H,d),8.07(1H,d)；m/z MH+501.*电荷是调节到中间物58的游离碱的强度-体电荷＝5.85Kg二盐酸盐。
实例63：(S)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基) 苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260001161
以与实例62类似之方式在3个步骤中由市售(R)-3-羟基吡咯烷-1-甲酸叔丁酯来制备实例63，获得呈白色固体状的标题化合物(125mg，最终步骤31％)；1H NMR(400MHz,DMSO)2.26-2.47(9H,m),2.52(3H,s),2.58(3H,s),3.45(1H,dd),3.5-3.61(6H,m),3.61-3.69(1H,m),3.77(2H,s),4.96(1H,s),6.73(2H,d),7.64(1H,d),8.04(3H,dd)；m/z MH+501。
实例64：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(6-(哌啶-1-基甲基)哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3-基)氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001162
将Cs2CO3(593mg，1.82mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物58B)(150mg，0.61mmol)和3-(4-溴代苯基)-6-(哌啶-1-基甲基)哒嗪(中间物70)(202mg，0.61mmol)的2-甲基四氢呋喃(1.6mL)和水(0.8mL) 中。使反应物脱气并添加RuPhos第3代预催化剂(38mg，0.05mmol)和RuPhos(21mg， 0.05mmol)。将反应混合物在回流下加热18小时，使其冷却到室温并且然后用DCM(10 mL)和水(5mL)稀释并穿过相分离滤筒。在真空中浓缩所得DCM层。通过制备型HPLC 纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(83mg，27％)；1H NMR(400MHz, DMSO)1.37-1.45(2H,m),1.52(4H,p),2.32(1H,dt),2.40(5H,s),2.47(3H,s),2.53(3H,s), 2.59(3H,s),3.46(1H,dd),3.51-3.61(2H,m),3.66(1H,q),3.74(2H,s),4.98(1H,s),6.75 (2H,d),7.63(1H,d),8-8.07(3H,m)；m/z MH+499。
实例65：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(4-(6-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3- 基)氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001171
将Cs2CO3(593mg，1.82mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物58B)(150mg，0.61mmol)和3-(4-溴代苯基)-6-((4-甲基哌嗪 -1-基)甲基)哒嗪(中间物71)(211mg，0.61mmol)的2-甲基四氢呋喃(1.6mL)和水(0.8 mL)中。使反应物脱气并添加RuPhos第3代预催化剂(38mg，0.05mmol)和RuPhos(21mg，0.05mmol)。将反应混合物在回流下加热18小时，使其冷却到室温并且然后用 DCM(10mL)和水(5mL)稀释并穿过相分离滤筒。在真空中浓缩所得DCM层。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈乳膏固体状的标题化合物(154mg，49％)；1H NMR (400MHz,DMSO)2.16(3H,s),2.27-2.38(5H,m),2.38-2.48(8H,m),2.53(3H,s),2.59(3H, s),3.46(1H,dd),3.51-3.61(2H,m),3.66(1H,q),3.77(2H,s),4.97(1H,s),6.74(2H,d),7.62 (1H,d),8.01-8.09(3H,m)；m/z MH+514。
实例66：2,5,7-三甲基-6-(((3R)-1-(4-(6-((3-甲基-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-8-基)甲基) 哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3-基)氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001172
将Cs2CO3(494mg，1.52mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物58B)(125mg，0.51mmol)和8-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基)甲基)-3-甲基-3,8-二氮杂二环[3.2.1]辛烷(中间物66)(189mg，0.51mmol)的2-甲基四氢呋喃(1.6mL)和水(0.8mL)中。使反应物脱气并添加RuPhos第3代预催化剂(31.7mg，0.04mmol)和RuPhos(17.69mg，0.04mmol)。将反应混合物在回流下加热18小时，使其冷却到室温，然后用DCM(10mL)和水(5mL)稀释并穿过相分离滤筒。在真空中浓缩所得DCM层。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈乳膏固体状的标题化合物(121 mg，44％)；1H NMR(400MHz,CDCI3)1.86(2H,q),2.05(2H,dd),2.23(3H,s),2.27-2.39 (3H,m),2.46-2.54(1H,m),2.57-2.63(8H,m),2.65(3H,s),3.13(2H,s),3.48-3.65(3H,m), 3.73-3.82(1H,m),3.87(2H,s),4.85(1H,s),6.68(2H,d),7.74-7.82(2H,m),8.04(2H,d)；m/z MH+540。
实例67：6-(((R)-1-(4-(6-(((R)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)甲基)哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3-基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001181
将Cs2CO3(494mg，1.52mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物58B)(125mg，0.51mmol)和(R)-2-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基) 甲基)八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪(中间物67)(189mg，0.51mmol)的2-甲基四氢呋喃(1.6mL) 和水(0.8mL)中。使反应物脱气并添加RuPhos第3代预催化剂(31.7mg，0.04mmol) 和RuPhos(17.7mg，0.04mmol)。将反应混合物在回流下加热18小时，使其冷却到室温并且然后用DCM(10mL)和水(5mL)稀释并穿过相分离滤筒。在真空中浓缩所得DCM 层。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈乳膏固体状的标题化合物(33mg，12％)；1H NMR(400MHz,DMSO)1.20-1.31(1H,m),1.66(3H,ttd),1.87-2.06(3H,m),2.14(1H, td),2.25(1H,td),2.33(1H,dtd),2.42(1H,dd),2.47(3H,s),2.53(3H,s),2.59(3H,s),2.73(1H,d),2.86-2.98(3H,m),3.46(1H,dd),3.51-3.62(2H,m),3.62-3.71(1H,m),3.77-3.87(2H,m),4.97(1H,s),6.75(2H,d),7.62(1H,d),8.05(3H,t)；m/z MH+540。
实例68：6-(((R)-1-(4-(6-(((S)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基)甲基)哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3-基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001182
将Cs2CO3(494mg，1.52mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物58B)(125mg，0.51mmol)和(S)-2-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基) 甲基)八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪(中间物68)(189mg，0.51mmol)的2-甲基四氢呋喃(1.6mL) 和水(0.8mL)中。使反应物脱气并添加RuPhos第3代预催化剂(31.7mg，0.04mmol) 和RuPhos(17.7mg，0.04mmol)。将反应混合物在回流下加热18小时，使其冷却到室温，然后用DCM(10mL)和水(5mL)稀释并穿过相分离滤筒。在真空中浓缩所得DCM层。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈乳膏固体状的标题化合物(76mg，28％)；1H NMR(400MHz,DMSO)1.20-1.32(1H,m),1.66(3H,dqd),1.88-2.06(3H,m),2.14(1H,td), 2.25(1H,td),2.3-2.37(1H,m),2.42(1H,d),2.47(3H,s),2.53(3H,d),2.60(3H,s),2.73(1H,d),2.85-2.98(3H,m),3.47(1H,dd),3.51-3.62(2H,m),3.66(1H,q),3.77-3.87(2H,m),4.98(1H,s),6.75(2H,d),7.62(1H,d),8.01-8.09(3H,m)；m/z MH+540。
实例69：(R)-4-((5-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1- 基)苯基)嘧啶-2-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260001191
将Cs2CO3(401mg，1.23mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物58B)(101mg，0.41mmol)和4-((5-(4-溴代苯基)嘧啶-2-基)甲基)吗啉(中间物39)(137mg，0.41mmol)的2-甲基四氢呋喃(1.4mL)和水(0.7mL)中。使反应物脱气并添加RuPhos第3代预催化剂(25.7mg，0.03mmol)和RuPhos(14.4 mg，0.03mmol)。将反应混合物在回流下加热18小时，使其冷却到室温，然后用DCM(10 mL)和水(5mL)稀释并穿过相分离滤筒。在真空中浓缩所得DCM层。通过制备型HPLC 纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物(82mg，40％)；1H NMR(400MHz, CDCl3)2.34(1H,dp),2.47-2.55(1H,m),2.60(3H,s),2.61-2.65(7H,m),2.65(3H,s),3.45- 3.54(2H,m),3.58(1H,td),3.72-3.78(1H,m),3.78-3.83(4H,m),3.85(2H,s),4.83-4.89 (1H,m),6.65-6.72(2H,m),7.46-7.53(2H,m),8.89(2H,s)；m/z MH+501。
实例70：(R)-4-((5-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1- 基)苯基)吡嗪-2-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260001192
将Cs2CO3(668mg，2.05mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物58B)(169mg，0.68mmol)和4-((5-(4-溴代苯基)吡嗪-2-基)甲基)吗啉(中间物77)(228mg，0.68mmol)的2-甲基四氢呋喃(2.3mL)和水(1.1mL)中。使反应物脱气并添加RuPhos第3代预催化剂(42.9mg，0.05mmol)和RuPhos(23.9 mg，0.05mmol)。将反应混合物在回流下加热18小时，使其冷却到室温，然后用DCM(10 mL)和水(5mL)稀释并穿过相分离滤筒。在真空中浓缩所得DCM层。通过制备型HPLC 纯化所得粗产物，获得呈乳膏固体状的标题化合物(104mg，30％)；1H NMR(400MHz, CDCl3)2.33(1H,dtd),2.50(1H,dd),2.53-2.57(4H,m),2.60(3H,s),2.61(3H,s),2.64(3H, s),3.46-3.6(2H,m),3.61(1H,td),3.70(2H,s),3.72-3.83(5H,m),4.85(1H,dt),6.63-6.71 (2H,m),7.91-8.00(2H,m),8.60(1H,d),8.91(1H,d)；m/z MH+501。
实例71：(R)-1-(4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1- 基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)哌嗪-1-基)乙-1-酮
Figure BDA0003645404260001201
将Cs2CO3(632mg，1.94mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物58B)(160mg，0.65mmol)和1-(4-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基) 甲基)哌嗪-1-基)乙-1-酮(中间物69)(243mg，0.65mmol)的2-甲基四氢呋喃(1.7mL) 和水(0.9mL)中。使反应物脱气并添加RuPhos第3代预催化剂(40.6mg，0.05mmol)和RuPhos(22.6mg，0.05mmol)。将所得悬浮液在回流下加热18小时，使其冷却到室温，用DCM(10mL)和水(5mL)稀释并穿过相分离滤筒。在真空中浓缩所得DCM层。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(154mg，44％)；1H NMR(400MHz,DMSO)1.99(3H,s),2.33(1H,d),2.37-2.43(3H,m),2.47(5H,s),2.53(3H, s),2.59(3H,s),3.46(5H,dd),3.56(2H,q),3.66(1H,q),3.82(2H,s),4.98(1H,s),6.75(2H,d), 7.66(1H,d),8.06(3H,dd)；m/z MH+542。
实例72：(R)-6-((1-(4-(6-((4-乙基哌嗪-1-基)甲基)哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3-基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001202
将Cs2CO3(336mg，1.03mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物58B)(85mg，0.34mmol)和3-(4-溴代苯基)-6-((4-乙基哌嗪-1- 基)甲基)哒嗪(中间物72)(124mg，0.34mmol)的2-甲基四氢呋喃(0.9mL)和水(0.5 mL)中。使反应物脱气并添加RuPhos第3代预催化剂(21.6mg，0.03mmol)和RuPhos(12.0mg，0.03mmol)。将反应混合物在回流下加热18小时，使其冷却到室温，用DCM (10mL)和水(5mL)稀释并穿过相分离滤筒。在真空中浓缩所得DCM层。通过制备型 HPLC纯化所得粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(65mg，36％)；1H NMR(400 MHz,CDCI3)1.08(3H,t),2.33(1H,dtd),2.42(3H,q),2.45-2.54(4H,m),2.57-2.64(10H, m),2.65(3H,s),3.52(2H,dd),3.57-3.65(1H,m),3.78(1H,td),3.89(2H,s),4.85(1H,dt), 6.68(2H,d),7.60(1H,d),7.74(1H,d),8-8.08(2H,m)；m/z MH+528。
实例73：(R)-6-((1-(4-(6-((4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)甲基)哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3- 基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001211
将Cs2CO3(870mg，2.67mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物58B)(220mg，0.89mmol)和3-(4-溴代苯基)-6-((4-(2-甲氧基乙基)哌嗪-1-基)甲基)哒嗪(中间物73)(348mg，0.89mmol)的2-甲基四氢呋喃(2.4mL) 和水(1.1mL)中。使反应物脱气并添加RuPhos第3代预催化剂(55.8mg，0.07mmol)和RuPhos(31.1mg，0.07mmol)。将反应混合物在回流下加热18小时，使其冷却到室温，用DCM(10mL)和水(5mL)稀释并穿过相分离滤筒。在真空中浓缩所得DCM层。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈淡黄色泡沫状固体状的标题化合物(211mg， 43％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)2.33(1H,dtd),2.49(1H,dd),2.51-2.64(16H,m),2.65 (3H,s),3.35(3H,s),3.46-3.56(4H,m),3.57-3.64(1H,m),3.78(1H,td),3.89(2H,s),4.84 (1H,dd),6.68(2H,d),7.59(1H,d),7.74(1H,d),8.00-8.07(2H,m)；m/z MH+558。
实例74：(R)-4-((6'-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1- 基)-[2,3'-联吡啶]-5-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260001212
在微波小瓶中向含(R)-6-((1-(5-溴代吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物59)(190mg，0.47mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2- 二氧杂硼烷)(144mg，0.57mmol)和乙酸钾(92mg，0.94mmol)的1,4-二噁烷(5mL) 中添加PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(19mg，0.02mmol)，并将反应物在90℃下加热隔夜，然后使其冷却到室温。添加4-((6-溴代吡啶-3-基)甲基)吗啉(中间物30)(121mg，0.47 mmol)，接着为Cs2CO3(307mg，0.94mmol)、XPhos第2代预催化剂(74mg，0.05mmol) 和水(3mL)。将反应混合物在90℃下加热18小时，然后使其冷却到室温并用EtOAc(50 mL)和水(10mL)稀释，并分离各层。用DCM(50mL)进一步萃取水层，并使合并有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，获得呈淡棕色泡沫状的标题化合物(44mg，19％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)2.34(1H,dtd),2.42- 2.56(5H,m),2.60(3H,s),2.61(3H,s),2.64(3H,s),3.53(2H,s),3.61(1H,dd),3.68-3.73 (4H,m),3.74-3.92(3H,m),4.82(1H,s),6.51(1H,d),7.60(1H,d),7.70(1H,dd),8.21(1H, dd),8.55(1H,d),8.76(1H,d)；m/z MH+501。
实例75：(R)-4-((6'-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1- 基)-[3,3'-联吡啶]-6-基)甲基)吗啉
Figure BDA0003645404260001221
将Cs2CO3(242mg，0.74mmol)添加到含(6-(吗啉代甲基)吡啶-3-基)硼酸(83mg，0.37mmol)和(R)-6-((1-(5-溴代吡啶-2-基)吡咯烷-3-基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并 [1,5-a]嘧啶(中间物59)(150mg，0.37mmol)的1,4-二噁烷(2.5mL)和水(1.2mL)中。使反应物脱气并添加XPhos第2代预催化剂(59mg，0.04mmol)。将反应混合物在80℃下搅拌18小时，使其冷却到室温，用DCM(10mL)和水(5mL)稀释并穿过相分离滤筒。在真空中浓缩所得DCM层。将所得粗产物溶解于DMSO(2mL)中并通过制备型 HPLC纯化，然后通过fcc，用含0-3％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来进一步纯化，获得呈无色胶状的标题化合物(18mg，10％)；1HNMR(400MHz,CDCI3)2.34(1H,dtd),2.48- 2.53(1H,m),2.52-2.57(4H,m),2.60(3H,s),2.62(3H,s),2.65(3H,s),3.60(1H,dd),3.69 (2H,s),3.76(5H,h),3.8-3.89(2H,m),4.83(1H,dt),6.48-6.54(1H,m),7.46(1H,d),7.72 (1H,dd),7.78(1H,dd),8.41(1H,dd),8.74(1H,dd)；m/z MH+501。
实例76：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(2-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)嘧啶-5-基)吡咯烷-3- 基)氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001231
将1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)哌嗪(131mg，0.42mmol)、 (R)-6-((1-(2-溴代嘧啶-5-基)吡咯烷-3-基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物61)(140mg，0.35mmol)和Cs2CO3(226mg，0.69mmol)添加到1,4-二噁烷(3.7mL) 和水(1.8mL)中，并使混合物脱气10分钟。添加XPhos第2代预催化剂(13.62mg，0.02 mmol)并将反应混合物在85℃下搅拌2小时，使其冷却到室温并倒入水(25mL)中，并用EtOAc(2×50mL)萃取。使合并有机层经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过制备型HPLC纯化所得粗产物，然后通过fcc，用含0-5％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来进一步纯化，获得呈白色泡沫状的标题化合物(54mg，30％)；1H NMR(500MHz,DMSO) 2.16(3H,s),2.24-2.46(9H,m),2.48(3H,s),2.52-2.54(1H,m),2.55(3H,s),2.60(3H,s), 3.44-3.52(3H,m),3.57-3.64(1H,m),3.69(2H,dd),5.00(1H,s),7.37(2H,d),8.18-8.24 (2H,m),8.31(2H,s)；m/z MH+514。
实例77：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3- 基)氧基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001232
在室温下将乙酸钯(II)(3.2mg，0.01mmol)添加到含(R)-6-((1-(5-溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物62)(115mg，0.28mmol)、 1-甲基-4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)哌嗪(117mg，0.37mmol)、磷酸钾(151mg，0.71mmol)和二环己基(2',4',6'-三异丙基-[1,1'-联苯基]-2-基)膦(13.6mg，0.03 mmol)的经脱气的水(1.6mL)和THF(5mL)中。将反应混合物在回流下加热1小时，使其冷却到室温，用EtOAc(50mL)稀释并用水(50mL)洗涤。将有机层分离并经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将所得粗产物溶解于DCM(1mL)中并通过fcc，用含0-5％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化，获得呈黄色泡沫状的标题化合物(83mg，57％)；1H NMR(500MHz,CDCl3)2.29(3H,s),2.3-2.59(10H,m),2.60(3H,s),2.63(3H,s),2.66(3H, s),3.55(2H,s),3.63(1H,dd),3.78-3.93(3H,m),4.84(1H,s),7.41(2H,d),7.79-7.88(2H,m),8.02(1H,d),8.53(1H,d)；m/z MH+514。
实例78：(R)-4-(4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基) 吡嗪-2-基)苄基)吗啉
Figure BDA0003645404260001241
在室温下将乙酸钯(II)(6.9mg，0.03mmol)添加到含(R)-6-((1-(5-溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物62)(250mg，0.62mmol)、 4-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)吗啉(225mg，0.74mmol)、磷酸钾(328 mg，1.55mmol)和二环己基(2',4',6'-三异丙基-[1,1'-联苯基]-2-基)膦(29.5mg，0.06mmol) 的经脱气的水(3.33mL)和THF(10mL)中。将反应混合物在回流下加热1小时，使其冷却到室温，用EtOAc(50mL)稀释并用水(50mL)洗涤。将有机层分离并经MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。将所得粗产物溶解于DCM(1mL)中并通过fcc，用含0-5％1M NH3/MeOH的DCM洗脱来纯化，获得呈黄色泡沫状的标题化合物(58mg，19％)；1H NMR(500MHz,CDCI3)2.35(1H,dtd),2.44-2.5(4H,m),2.50-2.58(1H,m),2.60(3H,s), 2.62(3H,s),2.66(3H,s),3.54(2H,s),3.63(1H,dd),3.70-3.75(4H,m),3.82(1H,td),3.85-3.93(2H,m),4.83(1H,d),7.42(2H,d),7.81-7.88(2H,m),8.02(1H,d),8.53(1H,d)；m/z MH+501。
实例79：1-[4-[[4-[5-[(3R)-3-[(2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基]吡咯烷-1-基]吡嗪-2-基]苯基]甲基]-1,4-二氮杂环庚烷-1-基]乙酮
Figure BDA0003645404260001242
将(R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2- 基)苯甲醛(中间物49)(30mg，0.07mmol)、1-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)乙酮(19.9mg， 0.14mmol)、DCM(2mL)和AcOH(2滴)组合，并将反应混合物在室温下搅拌5小时。添加三乙酰氧基硼氢化钠(45mg，0.21mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时。通过制备型HPLC纯化所得混合物，获得标题化合物(18mg，47％)；1H NMR(400MHz, DMSO)1.71(1H,s),1.81(1H,d),1.87(1H,dd),2.00(3H,d),2.14(1H,dd),2.48(3H,s),2.54- 2.62(4H,m),2.65-2.69(4H,m),2.76(3H,s),2.95(2H,d),3.25(1H,dd),3.41-3.52(5H,m),3.61-3.75(4H,m),7.37(2H,dd),7.89(2H,dd),8.04(1H,d),8.63(1H,d)；m/z MH+554。
实例80：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(4-(吡咯烷-1-基甲基)苯基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基) 甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001251
在室温下将XPhos第2代预催化剂(19.56mg，0.02mmol)添加到含(R)-6-((1-(5-溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(200mg，0.50mmol)、 1-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苄基)吡咯烷(143mg，0.50mmol)和Cs2CO3 (324mg，0.99mmol)的经脱气的1,4-二噁烷(4mL)和水(2mL)中。将反应混合物在 90℃下搅拌16小时，使其冷却到室温并通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN水溶液(+ 0.08％NH4HCO3)洗脱来纯化，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(63mg，26％)；1H NMR(400MHz,MeOD)1.85(4H,p),1.99(1H,dq),2.26(1H,dq),2.59(7H,d),2.75(4H,s),2.86(3H,s),3.05(2H,dt),3.33-3.42(1H,m),3.56(1H,dt),3.66-3.85(4H,m),7.41-7.48(2H,m),7.81-7.90(2H,m),8.01(1H,d),8.50(1H,d)；m/z MH+483。
实例81：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(5-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-2-基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3- 基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001252
在室温下将双(三苯膦)氯化钯(II)(137mg，0.19mmol)添加到含2-溴-5-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶(中间物78)(470mg，1.95mmol)、1,1,1,2,2,2-六甲基二锡(702mg，2.14mmol) 的THF(6mL)中。将反应混合物在85℃下搅拌16小时。将反应混合物转移到微波小瓶中并添加(R)-6-((1-(5-溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(300mg，0.75mmol)和Pd(Ph3P)4(86mg，0.07mmol)。将反应混合物在微波反应器中在100℃下加热5小时，然后使其冷却到室温。将所得混合物通过快速C18色谱法，用 5-100％MeCN水溶液(+0.1％FA)洗脱来纯化，然后通过制备型HPLC，用水(含有10mmolNH4HCO3)与MeCN的极性渐减的混合物洗脱来进一步纯化，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(115mg，32％)；1H NMR(400MHz,MeOD)1.86(4H,p),2.00(1H,dq),2.26(1H,dq), 2.60(7H,d),2.75(4H,s),2.86(3H,s),3.07(2H,dd),3.38(1H,dd),3.58(1H,dt),3.71-3.88(4H,m),7.87(1H,dd),8.04(1H,d),8.14(1H,d),8.51-8.57(1H,m),8.92(1H,d)；m/z MH+484。
实例82：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(6-(吡咯烷-1-基甲基)吡啶-3-基)吡嗪-2-基)吡咯烷-3- 基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001261
在室温下将PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(85mg，0.12mmol)添加到含5-溴-2-(吡咯烷 -1-基甲基)吡啶(中间物80)(560mg，2.32mmol)、4,4,4’,4’,5,5,5’,5’-八甲基-2,2’-联(1,3,2- 二氧杂硼烷)(590mg，2.32mmol)和乙酸钾(456mg，4.64mmol)的1,4-二噁烷(10mL) 中。将反应混合物在90℃下搅拌16小时，并使其冷却到室温。通过快速C18色谱法，用 5-100％MeOH水溶液洗脱来纯化反应混合物，获得呈黄色固体状的不纯2-(吡咯烷-1-基甲基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)吡啶(如果纯，那么280mg，42％)。在室温下将XPhos第2代预催化剂(29.3mg，0.04mmol)添加到含(R)-6-((1-(5-溴代吡嗪-2-基) 吡咯烷-3-基)甲基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(300mg，0.75mmol)、来自第一步骤的不纯2-(吡咯烷-1-基甲基)-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)吡啶(如果纯，那么258mg，0.89mmol)和Cs2CO3(486mg，1.49mmol)的1,4-二噁烷(4mL)和水 (2mL)中。将反应混合物在90℃下搅拌16小时。通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN 水溶液(+0.1％FA)洗脱来纯化粗产物，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(54mg，15％)；1HNMR(400MHz,MeOD)1.87-2.07(5H,m),2.27(1H,dq),2.57(3H,s),2.67-2.89(1 1H, m),3.07(2H,dd),3.34-3.42(1H,m),3.54-3.64(1H,m),3.69-3.88(2H,m),3.98(2H,s), 7.58(1H,d),8.08(1H,d),8.33(1H,dd),8.54-8.61(1H,m),9.06(1H,dd)；m/z MH+484。
实例83：(R)-2,5,7-三甲基-6-((1-(5-(4-((4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)甲基)苯基)吡嗪 -2-基)吡咯烷-3-基)甲基)-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001262
在空气下在室温下将1-甲基-1,4-二氮杂环庚烷(53mg，0.47mmol)添加到含 (R)-4-(5-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)甲基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2-基)苯甲醛(中间物49)(200mg，0.47mmol)的DCM(5mL)中，并将反应混合物搅拌1小时。添加三乙酰氧基硼氢化钠(496mg，2.34mmol)并将反应混合物在室温下搅拌16小时，然后在真空中浓缩。通过快速C18色谱法，用5-100％MeCN水溶液(+0.1％FA)洗脱来纯化所得粗产物，获得呈白色固体状的标题化合物的甲酸盐(129mg，48％)；1H NMR(400 MHz,CDCl3)1.88-2.02(1H,m),2.08(2H,dt),2.25(1H,dq),2.60-2.76(10H,m),2.79-3.06 (1 1H,m),3.14-3.22(2H,m),3.35(1H,dd),3.58(1H,dt),3.69-3.84(4H,m),7.38-7.45(2H, m),7.81-7.89(2H,m),7.97(1H,d),8.52(1H,d),8.60(1H,s)；m/z MH+526。
实例84：(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1- 基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)-1,4-氧氮杂环庚烷
Figure BDA0003645404260001271
将Cs2CO3(553mg，1.70mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物58B)(140mg，0.57mmol)和4-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基)甲基)-1,4-氧氮杂环庚烷(中间物74)(197mg，0.57mmol)的2-甲基四氢呋喃(1.5mL)和水(0.76mL)中。使反应物脱气并添加RuPhos第3代预催化剂(35.5mg，0.04mmol) 和RuPhos(19.8mg，0.04mmol)。将反应混合物在88℃下搅拌18小时，使其冷却到室温，用DCM(10mL)和水(5mL)稀释并穿过相分离滤筒。在真空中浓缩所得DCM层。将所得粗产物溶解于DMSO(2mL)中并通过制备型HPLC纯化，获得呈淡黄色固体状的标题化合物(136mg，47％)；1HNMR(400MHz,DMSO)1.84(2H,p),2.35(1H,tt),2.43(1H, dd),2.48(3H,s),2.54(3H,s),2.60(3H,s),2.72(4H,q),3.47(1H,dd),3.56(2H,dd),3.60- 3.69(3H,m),3.72(2H,t),3.95(2H,s),4.98(1H,s),6.75(2H,d),7.69(1H,d),8.02-8.11(3H, m)；m/z MH+515。
实例85：(R)-6-((1-(4-(6-(氮杂环庚烷-1-基甲基)哒嗪-3-基)苯基)吡咯烷-3-基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶
Figure BDA0003645404260001272
将Cs2CO3(249mg，0.76mmol)添加到含(R)-2,5,7-三甲基-6-(吡咯烷-3-基氧基)-[1,2,4] 三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物58B)(63mg，0.25mmol)和1-((6-(4-溴代苯基)哒嗪-3-基)甲基)氮杂环庚烷(中间物75)(88mg，0.25mmol)的2-甲基四氢呋喃(0.6mL)和水(0.3mL)中。使反应物脱气并添加RuPhos第3代预催化剂(16mg，0.02mmol)和RuPhos (9mg，0.02mmol)。将反应混合物在88℃下搅拌18小时，使其冷却到室温，用DCM(10 mL)和水(5mL)稀释并穿过相分离滤筒。在真空中浓缩所得DCM层。将所得粗产物溶解于DMSO(2mL)中并通过制备型HPLC纯化。将所得产物装载到5g SCX管柱上，用 MeOH(2×管柱体积)洗涤，然后用含1M NH3的MeOH(2×管柱体积)洗脱，并在真空中浓缩，获得呈白色固体状的标题化合物(35mg，27％)；1H NMR(400MHz,DMSO)1.60 (8H,s),2.3-2.37(1H,m),2.43(1H,d),2.48(3H,s),2.54(3H,d),2.61(3H,s),2.66(4H,d), 3.48(1H,dd),3.52-3.63(2H,m),3.67(1H,q),3.92(2H,s),4.99(1H,s),6.76(2H,d),7.68 (1H,d),8.01-8.11(3H,m)；m/z MH+513。
实例86和87：4-[(1R)-1-[4-[5-[(3R)-3-[(2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基]吡咯烷-1-基]吡嗪-2-基]苯基]乙基]吗啉和4-[(1S)-1-[4-[5-[(3R)-3-[(2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基]吡咯烷-1-基]吡嗪-2-基]苯基]乙基]吗啉
Figure BDA0003645404260001281
在氮气下将四(三苯膦)钯(0)(157mg，0.14mmol)添加到含4-(1-(4-(4,4,5,5-四甲基 -1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)苯基)乙基)吗啉(商业来源)(432mg，1.36mmol)、(R)-6-((1-(5- 溴代吡嗪-2-基)吡咯烷-3-基)氧基)-2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶(中间物62)(550 mg，1.36mmol)与碳酸钠(2.0mL，4.1mmol)的经脱气溶液的1,4-二噁烷(7.7mL)和水(3.9mL)中。将所得溶液在80℃下搅拌2小时，然后使其冷却到室温。将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释，并依序用水(25mL)和饱和盐水(25mL)洗涤。使有机层经 MgSO4干燥，过滤并在真空中浓缩。通过fcc，含0-5％MeOH的DCM洗脱梯度来纯化所得粗产物，获得呈两种非对映体混合物形式的标题化合物(355mg)。通过手性SFC (Phenomonex C1，30×250毫米，5微米管柱，流动速率为80毫升/分钟，在120巴和40 ℃柱温下使用40％IPA+0.1％DEA/60％scCO2)分离异构体，获得4-(1-(4-(5-((R)-3-((2,5,7- 三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2-基)苯基)乙基)吗啉的单非对映体(吗啉的未知手性α)(62mg，18％)；1H NMR(400MHz,CDCl3)1.38(3H,d),2.28 -2.47(3H,m),2.47-2.58(3H,m),2.60(3H,s),2.62(3H,s),2.66(3H,s),3.35(1H,q),3.59- 3.75(5H,m),3.77-3.96(3H,m),4.84(1H,s),7.40(2H,d),7.84(2H,d),8.01(1H,d),8.52 (1H,d)；m/z MH+515；接着为4-(1-(4-(5-((R)-3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基) 氧基)吡咯烷-1-基)吡嗪-2-基)苯基)乙基)吗啉的第二非对映体(吗啉的未知手性α)(68mg， 19％)；1H NMR(400MHz,CDCI3)1.38(3H,d),2.27-2.46(3H,m),2.46-2.58(3H,m),2.60 (3H,s),2.62(3H,s),2.66(3H,s),3.35(1H,q),3.57-3.76(5H,m),3.77-3.96(3H,m),4.84 (1H,s),7.40(2H,d),7.84(2H,d),8.01(1H,d),8.52(1H,d)；m/z MH+515。
序列表
<110> 迪哲（江苏）医药股份有限公司
<120> 三唑并嘧啶化合物和其用于治疗癌症的用途
<130> 200746-WO-PCT
<150> US62/670,075
<151> 2018-05-11
<160> 1
<170> BiSSAP 1.3.6
<210> 1
<211> 1398
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> DNA encoding human MCT4
<400> 1
atgggagggg ccgtggtgga cgagggcccc acaggcgtca aggcccctga cggcggctgg 60
ggctgggccg tgctcttcgg ctgtttcgtc atcactggct tctcctacgc cttccccaag 120
gccgtcagtg tcttcttcaa ggagctcata caggagtttg ggatcggcta cagcgacaca 180
gcctggatct cctccatcct gctggccatg ctctacggga caggtccgct ctgcagtgtg 240
tgcgtgaacc gctttggctg ccggcccgtc atgcttgtgg ggggtctctt tgcgtcgctg 300
ggcatggtgg ctgcgtcctt ttgccggagc atcatccagg tctacctcac cactggggtc 360
atcacggggt tgggtttggc actcaacttc cagccctcgc tcatcatgct gaaccgctac 420
ttcagcaagc ggcgccccat ggccaacggg ctggcggcag caggtagccc tgtcttcctg 480
tgtgccctga gcccgctggg gcagctgctg caggaccgct acggctggcg gggcggcttc 540
ctcatcctgg gcggcctgct gctcaactgc tgcgtgtgtg ccgcactcat gaggcccctg 600
gtggtcacgg cccagccggg ctcggggccg ccgcgaccct cccggcgcct gctagacctg 660
agcgtcttcc gggaccgcgg ctttgtgctt tacgccgtgg ccgcctcggt catggtgctg 720
gggctcttcg tcccgcccgt gttcgtggtg agctacgcca aggacctggg cgtgcccgac 780
accaaggccg ccttcctgct caccatcctg ggcttcattg acatcttcgc gcggccggcc 840
gcgggcttcg tggcggggct tgggaaggtg cggccctact ccgtctacct cttcagcttc 900
tccatgttct tcaacggcct cgcggacctg gcgggctcta cggcgggcga ctacggcggc 960
ctcgtggtct tctgcatctt ctttggcatc tcctacggca tggtgggggc cctgcagttc 1020
gaggtgctca tggccatcgt gggcacccac aagttctcca gtgccattgg cctggtgctg 1080
ctgatggagg cggtggccgt gctcgtcggg cccccttcgg gaggcaaact cctggatgcg 1140
acccacgtct acatgtacgt gttcatcctg gcgggggccg aggtgctcac ctcctccctg 1200
attttgctgc tgggcaactt cttctgcatt aggaagaagc ccaaagagcc acagcctgag 1260
gtggcggccg cggaggagga gaagctccac aagcctcctg cagactcggg ggtggacttg 1320
cgggaggtgg agcatttcct gaaggctgag cctgagaaaa acggggaggt ggttcacacc 1380
ccggaaacaa gtgtctga 1398

Claims (16)

1.一种(R)-4-((6-(4-(3-((2,5,7-三甲基-[1,2,4]三唑并[1,5-a]嘧啶-6-基)氧基)吡咯烷-1-基)苯基)哒嗪-3-基)甲基)吗啉的结晶形式A，其特征在于，所述结晶形式A的X-射线粉末衍射图谱具有至少一个选自以下的峰：7.8°和19.0°(±0.2°2θ)。
2.根据权利要求1所述的结晶形式A，其特征在于，所述结晶形式A的X-射线粉末衍射图谱还具有一个或多个选自以下的峰：9.2°、15.8°和18.3°(±0.2°2θ)。
3.根据权利要求1或2所述的结晶形式A，其特征在于，所述结晶形式A的X-射线粉末衍射图谱还具有一个或多个选自以下的峰：9.5°、10.4°、11.6°、22.3°和25.3°(±0.2°2θ)。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的结晶形式A，其特征在于，所述结晶形式A的X-射线粉末衍射图谱具有选自下组的峰：
Figure FDA0003645404250000011
5.根据权利要求1-4中任一项所述的结晶形式A，其特征在于，所述结晶形式A的X-射线粉末衍射图谱实质上如图1所示。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的结晶形式A，其特征在于，所述结晶形式A的差示扫描量热(DSC)图谱包括于约210.2℃的始点和在约213.2℃下的峰的熔化吸热。
7.根据权利要求6所述的结晶形式A，其特征在于，所述结晶形式A的差示扫描量热(DSC)图谱实质上如图2所示。
8.一种制备式(I)化合物或其药学上可接受的盐的方法，
Figure FDA0003645404250000012
所述方法包括使式(II)化合物
Figure FDA0003645404250000021
或其盐与式(III)化合物
Figure FDA0003645404250000022
或其盐反应，其中
R1和R2各自独立地表示氢或甲基；
X表示O；
环A和环B各自独立地表示选自苯基、吡啶基、吡嗪基、嘧啶基和哒嗪基的环，其中环A和环B中的每一个独立地任选地被一个或多个选自C1-3烷基和C1-3烷氧基的取代基取代；
环C表示任选地含有一个或多个独立地选自O、N和S的额外杂原子的5元到9元单环或双环饱和杂环烷基，其中杂环烷基任选地被一个或多个选自以下的取代基取代：任选地被甲氧基或羟基取代的C1-3烷基、二氧代基、C0-2烷基-C(O)N(Me)2、C(O)C1-2烷基和S(O)2C1-2烷基；
W是离去基。
9.根据权利要求8所述的方法，其中W选自由以下组成的组：Cl、Br、I和OTf。
10.根据权利要求8所述的方法，其中式(II)化合物通过以下方案1来制备：
Figure FDA0003645404250000031
其中PG是氮保护基。
11.根据权利要求8所述的方法，其中PG是Boc。
12.根据权利要求8所述的方法，其中R1和R2是氢的式(III)化合物通过在室温下使式(IV)化合物
Figure FDA0003645404250000032
或其盐与氯化试剂在溶剂中反应，接着与环C基胺反应来制备。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述氯化试剂是三氯异氰脲酸。
14.根据权利要求12所述的方法，其中所述溶剂是二氯乙烷。
15.根据权利要求12所述的方法，其中所述环C基胺是吗啉。
16.根据权利要求12所述的方法，其中环A是苯基，环B是哒嗪基。
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