CN115025091B - 莲心碱在制备抗非洲猪瘟病毒药物中的用途 - Google Patents

莲心碱在制备抗非洲猪瘟病毒药物中的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN115025091B
CN115025091B CN202210955311.8A CN202210955311A CN115025091B CN 115025091 B CN115025091 B CN 115025091B CN 202210955311 A CN202210955311 A CN 202210955311A CN 115025091 B CN115025091 B CN 115025091B
Authority
CN
China
Prior art keywords
liensinine
swine fever
african swine
fever virus
concentration
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210955311.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN115025091A (zh
Inventor
薛峰
钱炳旭
吴晓东
钱莺娟
戴建君
汤芳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanjing Agricultural University
Original Assignee
Nanjing Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanjing Agricultural University filed Critical Nanjing Agricultural University
Priority to CN202210955311.8A priority Critical patent/CN115025091B/zh
Publication of CN115025091A publication Critical patent/CN115025091A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN115025091B publication Critical patent/CN115025091B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/472—Non-condensed isoquinolines, e.g. papaverine
    • A61K31/4725—Non-condensed isoquinolines, e.g. papaverine containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供莲心碱在制备抗非洲猪瘟病毒药物中的用途，属于抗病毒应用领域。通过实验证明，莲心碱在体外实验中展现出显著的抗病毒活性，在5μM的浓度下即可展现出极强的抗非洲猪瘟病毒感染作用。莲心碱是提取自中药莲子的天然产物，具有降压、抑制平滑肌收缩等作用，相比于激素、抗生素、化学合成药等，对机体生理功能无明显损伤等毒副作用。因此，莲心碱在制备抗非洲猪瘟病毒药物中有良好的前景。

Description

莲心碱在制备抗非洲猪瘟病毒药物中的用途
技术领域
本发明属于抗病毒应用领域，具体涉及莲心碱在制备抗非洲猪瘟病毒药物中的用途。
背景技术
非洲猪瘟（African swine fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fevervirus，ASFV）感染导致的一种急性、烈性传染病，致死率高达100%。ASF于1921年在肯尼亚首次被发现，随后逐步蔓延至撒哈拉以南的非洲区域及欧洲、美洲、亚洲等60多个国家和地区，且流行面积不断增大，是全球养猪业的头号威胁。2018年8月，我国首次出现ASF疫情，之后迅速蔓延至全国，严重损害了我国养猪业的经济利益。
ASFV是一种核质巨DNA病毒，属于DNA病毒目、非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属，为该科唯一成员，且是目前唯一已知的虫媒DNA病毒。ASFV病毒粒子具有双层囊膜二十面体结构，由内核、内核心壳、内膜、衣壳、囊膜组成，基因组为线性双链DNA分子，大小为170-193kb。ASFV基因组编码150-167个开放阅读框，编码68种结构蛋白和100多种非结构蛋白。
莲心碱（Liensinine，LIEN），化学结构式如图1，分子式C37H42N2O6，是一种双苄基四氢异喹啉生物碱。莲心碱是莲子中重要的功能性化合物，其生理活性广泛，具有抑制平滑肌收缩、降压、抗心律失常的活性作用。莲子作为一种常用的中草药，可以清心醒脾，补脾止泻，养心安神、明目、补中养神，止泻固精，益肾涩精止带，滋补元气，在临床上具有实际应用效果，但在抗病毒领域，鲜有相关报道。
ASFV的防控缺乏有效的疫苗和抗病毒药物，其中，安全有效的抗病毒药物可有效提高感染猪的存活率，减少经济损失，阻止病毒的传播。在现如今疫苗研发陷入困局的前提下，研制抗ASFV药物对ASFV疫情防控具有重大意义。
发明内容
本发明的目的是针对非洲猪瘟病毒流行的问题，提供莲心碱在制备抗非洲猪瘟病毒药物中的用途。
本发明的目的可通过如下技术方案实现：
莲心碱在制备抗非洲猪瘟病毒药物中的用途。
一种抗非洲猪瘟病毒药物，含有莲心碱。
在本发明中，所述药物还含有药学上可接受的载体。
有益效果：实验证明莲心碱在体外实验中展现出显著的抗病毒活性，在5μM的浓度下即可展现出极强的抗非洲猪瘟病毒（MOI=1）感染作用。莲心碱是提取自中药莲子的天然产物，具有清暑利湿、止血，宽中理气的功效，相比于激素、抗生素、化学合成药等，对机体生理功能无明显损伤等毒副作用。因此，莲心碱在制备抗非洲猪瘟病毒药物中有良好的前景。
附图说明
图1是莲心碱的化学结构式。
图2是莲心碱作用于PAM细胞的细胞存活率，横坐标为莲心碱浓度，单位是μM；纵坐标为细胞存活率，单位是%。
图3是莲心碱在PAM细胞上CC50值的拟合结果，横坐标为Log10(莲心碱浓度)；纵坐标为细胞存活率，单位是%。其中莲心碱浓度单位是μM。
图4是Western Blot法测定莲心碱、长叶薄荷酮和醉椒素在PAM细胞上抑制非洲猪瘟病毒感染的活性。
图5是Western Blot法测定莲心碱在PAM细胞上抑制非洲猪瘟病毒感染的活性。其中Mock为对照组，0.5μM、1μM、2.5μM和5μM是各泳道对应样品中莲心碱的干预浓度。
图6是通过Image J软件分析Western Blot蛋白条带的灰度值，计算相应浓度的抑制率，拟合的IC50数值。横坐标为Log10(莲心碱浓度)，其中莲心碱浓度的单位是μM；纵坐标为抑制率，单位是%。
图7荧光定量PCR测定莲心碱在PAM细胞上抑制非洲猪瘟病毒感染的活性，横坐标为莲心碱浓度，单位是μM，其中莲心碱浓度为0是对照组；纵坐标为ASFV-B646L基因的相对转录水平（莲心碱干预的试验孔中ASFV-B646L基因的转录水平/对照组中ASFV-B646L基因的转录水平）。
图8红细胞吸附试验测定莲心碱在PAM细胞上抑制非洲猪瘟病毒感染的活性，横坐标为莲心碱浓度，单位是μM，其中莲心碱浓度为0是对照组；纵坐标为病毒滴度，是Log10(半数红细胞吸附量）。
具体实施方式
下面结合附图详细说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。
试验材料
所有试验均在生物安全防护三级实验室（Biological safety protectionthird-level laboratory，BSL-3）内按标准操作进行。非洲猪瘟毒株CN2018株由中国动物卫生与流行病学中心分离、保存；猪肺泡巨噬细胞（Porcine alveolar macrophage, PAM）由PBS冲洗无菌摘取的猪肺脏制成；其他所用化学试剂、实时荧光定量PCR引物及试剂盒均购自诺唯赞（Vazyme）公司；莲心碱、长叶薄荷酮和醉椒素均购自Selleck公司。
实施例1 莲心碱在PAM细胞上细胞毒性的测定结果
PAM细胞计数后用含10%（体积百分浓度）胎牛血清(FBS)的DMEM培养液稀释，以1×105个/孔的浓度加入96孔板内，置于37℃、5%CO2培养箱中培养，待PAM细胞完全贴壁（约6-8h）后，弃去DMEM培养液。每孔分别加入100μL以DMEM培养液为溶剂配制的1μM、5μM、10μM、25μM、50μM、100μM莲心碱溶液，每个浓度做三个重复孔（记为莲心碱处理孔）；设置未经莲心碱处理的细胞孔阴性对照孔，与莲心碱处理孔相比，不同之处仅在于采用100μL的DMEM培养液替代莲心碱溶液；设置空白对照孔，该孔内不含莲心碱和细胞，仅含有100μL的DMEM培养液。将96孔板置于37℃、5%CO2培养箱中孵育24h后，每孔加入10μL的CCK-8（Cell CountingKit-8，细胞计数试剂），37℃孵育1-2h。孵育结束后，采用酶标仪读取450nm处的吸光度0D450nm，按照如下公式计算细胞存活率（%）：细胞存活率=[（As-Ab）/（An-Ab）]×100，As是莲心碱处理孔吸光度，An是阴性对照孔吸光度，Ab是空白对照孔吸光度，结果如图2。拟合莲心碱的CC50值（半数细胞毒性浓度，指对半数细胞产生毒性作用所需浓度），结果如图3，可以看到莲心碱对PAM细胞的CC50值为29.22μM，且在莲心碱浓度小于10μM时，对PAM细胞不具有明显细胞毒性（细胞存活率＞90%）。因此，莲心碱浓度小于10μM时，莲心碱处理的PAM细胞组与未处理的PAM细胞存活率无明显差别。
实施例2 测定莲心碱在PAM细胞上抑制非洲猪瘟病毒感染的活性
本实施例考察莲心碱、长叶薄荷酮和醉椒素以及不同浓度的莲心碱在PAM细胞上抑制非洲猪瘟病毒感染的活性。
PAM细胞计数后用含10％（体积百分浓度）胎牛血清(FBS)的DMEM培养液稀释到适当密度后，以2×106个/孔的浓度加于6孔板，置于37℃、5%CO2培养箱中培养，待PAM细胞完全贴壁（约6-8h）后，弃去DMEM培养液，每孔分别加入2mL的DMEM培养液（对照孔）、以DMEM培养液为溶剂配制的浓度为5μM的莲心碱溶液、10μM的长叶薄荷酮溶液、10μM的醉椒素溶液，预处理PAM细胞2h，弃去孔内培养液，随后加入2mL的DMEM培养液（对照孔）、以DMEM培养液为溶剂配制的同时含有药物和非洲猪瘟CN2018株的悬浮液（各孔中药物种类和浓度与预处理时一致），其中各孔中病毒接种量均为MOI=1。将6孔板置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h后，收取细胞样品，采用Western Blot检测p72蛋白的表达情况，以β-actin蛋白为内参，其中一抗分别为ASFV p72蛋白鼠源单克隆抗体（购自云之语生物公司）和β-actin蛋白兔源多克隆抗体（购买自Proteintech，货号为20536-1-AP），二抗分别为辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG抗体（购买自Bioworld，货号为BS12478）和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG抗体（购买自Bioworld，货号为BS13278），结果如图4所示，莲心碱相比于其他药物和对照可以显著抑制非洲猪瘟病毒的复制。
PAM细胞计数后用含10％（体积百分浓度）胎牛血清(FBS)的DMEM培养液稀释到适当密度后，以2×106个/孔的浓度加于6孔板，置于37℃、5％CO2培养箱中培养，待细胞完全贴壁(约6-8h)后，每孔分别加入100μL的DMEM培养液（对照组）、以DMEM培养液为溶剂配制的浓度为0.5μM、1μM、2.5μM和5μM的莲心碱溶液（实验组），于37℃预先处理PAM细胞2h后，每孔按照MOI＝1接种非洲猪瘟病毒CN2018株，置于37℃、5％CO2培养箱中吸附1h，吸弃孔内培养液，用PBS缓冲液清洗二遍，加入2mL的DMEM培养液（对照组）或以DMEM培养液为溶剂配制的浓度为0.5μM、1μM、2.5μM和5μM的莲心碱溶液（各孔中莲心碱浓度与预处理时一致），置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h后，收取细胞样品，采用Western Blot检测p72蛋白的表达情况，以β-actin蛋白为内参，其中一抗分别为ASFV p72蛋白鼠源单克隆抗体（购自云之语生物公司）和β-actin蛋白兔源多克隆抗体（购买自Proteintech，货号为20536-1-AP），二抗分别为辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG抗体（购买自Bioworld，货号为BS12478）和辣根过氧化物酶标记的羊抗兔IgG抗体（购买自Bioworld，货号为BS13278）。结果如附图5所示。使用Image J分析蛋白条带灰度值，获得各个泳道的目的条带（p72蛋白）灰度值/内参条带灰度值，计算莲心碱各个浓度下对ASFV的抑制率，公式：抑制率=1-[（试验组的目的条带灰度值/试验组内参条带灰度值）/（对照组的目的条带灰度值/对照组内参条带灰度值）]，并根据抑制率拟合莲心碱的IC50（Inhibitory concentration 50）值，IC50是半数抑制浓度，指的是抑制半数ASFV的莲心碱浓度。由图6可知，莲心碱的IC50=1.512μM。选择性指数SI（Seletivity index,SI）= CC50/IC50，SI的数值越大，药物的抑制作用越强，安全浓度更高。莲心碱的SI值为29.22/1.512=19.33，SI值远大于其他已报道的抗ASFV药物。
实施例3 荧光定量PCR测定莲心碱在PAM细胞上抑制非洲猪瘟病毒感染的活性
PAM细胞计数后，用含10％（体积百分浓度）胎牛血清(FBS)的DMEM培养液稀释到适当密度后，以2×106个/孔的浓度加于6孔板，置于37℃、5％CO2培养箱中培养，待细胞完全贴壁(培养时间约6-8h)后，去除培养液，将2mL的DMEM培养液（对照组）、以DMEM培养液为溶剂配制的5μM的莲心碱溶液分别于37℃预处理PAM细胞2h后，按照MOI＝1接种非洲猪瘟CN2018株，置于37℃、5％CO2培养箱中吸附1h，吸弃孔内培养基，用PBS缓冲液清洗两遍，加入DMEM培养液2mL（对照组）或以DMEM培养液为溶剂配制的5μM的莲心碱溶液（各孔中莲心碱浓度与预处理时一致），置于37℃、5％CO2培养箱中培养24h后，用TRIzol（总RNA抽提试剂，购自Solarbio）收取细胞样品，提取RNA，按照常规方法将RNA反转录为cDNA，使用Actin基因作为内参，采用实时荧光定量PCR检测ASFV的p72蛋白mRNA水平的变化，即ASFV-B646L基因的转录水平上的变化。其中，Actin基因的PCR扩增引物包括Actin-F和Actin-R，ASFV-B646L基因的PCR扩增引物包括ASFV-B646L-F和ASFV-B646L-R，各引物的具体序列如下：
Actin-F：5'-CACGCCATCCTGCGTCTGGA-3'；
Actin-R：5'-AGCACCGTGTTGGCGTAGAG-3'；
ASFV-B646L-F：5'-GTGGTGAGTGGGCTGCATAA-3'；
ASFV-B646L-R：5'-TAAAACCTACCTGGAACATCTCC-3'。
其中PCR反应体系包含：10μL的AceQ qPCR SYBR Green Master Mix (High ROXPremixed)，0.4μL上游引物(10μM)，0.4μL下游引物(10μM)，2μL模板DNA（即反转录所得cDNA）以及7.2μL灭菌蒸馏水。PCR反应程序为：95℃预变性5min；95℃ 10s、60℃ 30s，共40个循环。反应结束后溶解曲线测定，反应条件为：95℃ 15s、60℃ 60s、95℃ 15s。其中AceQqPCR SYBR Green Master Mix (High ROX Premixed)购自南京诺唯赞生物科技股份有限公司，货号为Q141-02。
本实验通过2-ΔΔCt法进行ASFV-B646L基因的相对定量，结果如图7所示，显示莲心碱在PAM细胞上显著抑制非洲猪瘟病毒感染的活性，与对照组之间有显著差异性（P＜0.0001）。
实施例4 红细胞吸附试验（Hemadsorption，HAD）测定莲心碱在PAM细胞上抑制非洲猪瘟病毒感染的活性
PAM细胞计数后，用含10％（体积百分浓度）胎牛血清(FBS)的DMEM培养液稀释到适当密度后，以1×105个/孔的浓度加于96孔板，置于37℃、5％CO2培养箱中培养至细胞完全贴壁(约6-8h)，去除培养液，每孔分别加入100μL的DMEM培养液（对照组）、以DMEM培养液为溶剂配制的5μM的莲心碱溶液（试验组），预处理PAM细胞2h，随后将ASFV CN2018株病毒原液（1×107 HAD50/mL）按稀释度为10-1、10-2…10-8的浓度梯度进行稀释，每个浓度病毒液按100μL/孔分别加入到96孔板的对照组和实验组中，每个浓度设置8个重复；ASFV病毒吸附1h后，弃去孔内培养液，PBS缓冲液清洗二遍，对照组每孔加入100μL的DMEM培养液，试验组每孔加入100μL浓度为5μM的莲心碱溶液（溶剂为DMEM培养液），然后每孔加入25μL的1%猪红细胞悬浮液，置于37℃、5％CO2培养箱中培养7-10d，并逐日显微镜下观察红细胞吸附情况，对细胞周围有大量猪红细胞附着，形成玫瑰花状或桑葚体状的细胞孔计数，按Karber法计算HAD50（半数红细胞吸附量），结果如附图8所示，莲心碱可显著抑制非洲猪瘟病毒的感染，试验组相比于对照组，病毒滴度由1×107 HAD50/mL降为1×103.67 HAD50/mL，两组之间有显著差异性（P＜0.0001）。

Claims (2)

1.莲心碱在制备抗非洲猪瘟病毒药物中的用途。
2.根据权利要求1所述用途，其特征在于所述莲心碱加入药学上可接受的载体。
CN202210955311.8A 2022-08-10 2022-08-10 莲心碱在制备抗非洲猪瘟病毒药物中的用途 Active CN115025091B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210955311.8A CN115025091B (zh) 2022-08-10 2022-08-10 莲心碱在制备抗非洲猪瘟病毒药物中的用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210955311.8A CN115025091B (zh) 2022-08-10 2022-08-10 莲心碱在制备抗非洲猪瘟病毒药物中的用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN115025091A CN115025091A (zh) 2022-09-09
CN115025091B true CN115025091B (zh) 2022-11-08

Family

ID=83129900

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210955311.8A Active CN115025091B (zh) 2022-08-10 2022-08-10 莲心碱在制备抗非洲猪瘟病毒药物中的用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN115025091B (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009150281A1 (es) * 2008-06-12 2009-12-17 Consejo Superior De Investigaciones Científicas Empleo de lauril galato en la prevención y tratamiento de infecciones causadas por el virus de la peste porcina africana (vppa)
CN110786414A (zh) * 2019-12-03 2020-02-14 六安恒佳生物科技有限公司 一种预防非洲猪瘟的发酵中药添加剂及其制备方法
CN111228428A (zh) * 2020-04-08 2020-06-05 杨作丰 一种预防非洲猪瘟的液体中药制剂及其方法
CN112691105A (zh) * 2020-07-02 2021-04-23 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 甲基莲心碱抑制SARS-CoV及SARS-CoV-2感染的新用途

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX2020008958A (es) * 2018-03-02 2020-10-05 Univ Kansas State Mitigacion quimica del virus de la peste porcina africana y del virus de la peste porcina clasica.

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2009150281A1 (es) * 2008-06-12 2009-12-17 Consejo Superior De Investigaciones Científicas Empleo de lauril galato en la prevención y tratamiento de infecciones causadas por el virus de la peste porcina africana (vppa)
CN110786414A (zh) * 2019-12-03 2020-02-14 六安恒佳生物科技有限公司 一种预防非洲猪瘟的发酵中药添加剂及其制备方法
CN111228428A (zh) * 2020-04-08 2020-06-05 杨作丰 一种预防非洲猪瘟的液体中药制剂及其方法
CN112691105A (zh) * 2020-07-02 2021-04-23 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 甲基莲心碱抑制SARS-CoV及SARS-CoV-2感染的新用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN115025091A (zh) 2022-09-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN100475976C (zh) 一种同步扩增检测肝炎及艾滋病毒核酸的试剂盒
CN108478562A (zh) 麦考酚酸及其衍生物吗替麦考酚酯在制备广谱抗冠状病毒药物中的应用
CN112359139A (zh) 利用组织半数感染法染色测定异嗜性鼠白血病病毒滴度的方法
CN101220351A (zh) 利用Nsp2基因缺失构建PRRSV基因缺失疫苗毒株的方法及其应用
CN115025091B (zh) 莲心碱在制备抗非洲猪瘟病毒药物中的用途
CN102154512B (zh) 兔出血症病毒荧光定量rt-pcr检测方法
CN102212617A (zh) 用于检测猪瘟病毒野毒株的引物对、探针、以及试剂盒
CN103146842A (zh) 兔出血症病毒rt-pcr检测方法
CN113018303A (zh) 丹参酮iia磺酸钠注射液在制备抗病毒的药物中的应用
Barahona et al. Isolation and characterization of a lymphocyte associated foamy virus from a red Uakari monkey
CN104758282B (zh) 小檗碱用于制备治疗柯萨奇病毒b3所致病毒性心肌炎疾病的药物的用途
CN106754900B (zh) 一种核酸封装试剂及其应用
CN117695295B (zh) 磷酸吡哆醛在制备预防或治疗家蚕核型多角体病毒病药物中的应用
CN113876751B (zh) 竹红菌乙素在制备防治非洲猪瘟的药物中的应用
CN113244276B (zh) 桑黄或桑黄提取物作为新型冠状病毒治疗药物或抗病毒制剂的用途
CN117618439A (zh) EHop-016抑制猪流行性腹泻病毒体外感染的方法及应用
CN101380330A (zh) 连翘酯苷诱生IFN-α抗PCV2和PRRSV的研究方法
Ranjan et al. Optimization and Development of Protocol for Detection of Foot-And-Mouth Disease Virus by Negative Staining Using Transmission Electron Microscopy
CN118021787A (zh) 紫草酸在制备抗登革病毒及病毒所致疾病的防治药物中的应用
CN1472342A (zh) 一种定量检测传染性非典型肺炎冠状病毒拷贝数的试剂盒
AU719795B2 (en) Cell line and processes for replicating rabies viruses and detecting them quantitatively
CN110938710A (zh) 一种轮状病毒和肠道腺病毒联合检测胶体金层析试剂盒及其应用
CN115887459A (zh) 千金藤素及其药物组合物在制备抗非洲猪瘟病毒药物中的应用
CN117982563A (zh) 一种中药组合物在制备抗登革病毒药物中的应用
Hayashi et al. Preparation of primary human amnion cells by pancreatin procedure and their susceptibility to enteroviruses

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant