CN115024996A - 用于改善表情纹的复合多肽及其应用和化妆品组合物 - Google Patents
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Abstract
一种用于改善表情纹的复合多肽及其应用和化妆品组合物，属于化妆品领域。用于改善表情纹的复合多肽由作为有效成分的六肽‑9和铜三肽‑1组成。也即是，将六肽‑9和铜三肽‑1联用不仅无毒，而且二者互相协同，可有效抑制SNARE复合体的形成，不仅具有与肉毒杆菌素类似的效果，有效改善表情纹，同时使用安全，因此尤其适用于制作改善表情纹的化妆品，以及缓解或治疗由肌肉收缩导致的状态和/或疾病的外用制剂。
Description
技术领域
本申请涉及化妆品领域，具体而言，涉及一种用于改善表情纹的复合多肽及其应用和化妆品组合物。
背景技术
皮肤作为人体的第一道屏障，从温度及湿度变化和紫外线、污染物等外部环境的刺激保护体内各器官，并对于体温调节等。
皮肤老化现象的原因大可分为两种，即基于细胞基因突变等的内部原因以及紫外线、湿度等的外部原因(Masamitsu Ichihashi，Fragrance Journal，Vol.32，No 5，24～30)。尤其，基于紫外线的老化现象被称为光老化，这种光老化现象是通过以下方式进行的，即因紫外线细胞内部生成活性氧自由基，且活性氧通过引起炎症反应的信号传递体系促进用于分解作为真皮层的弹性纤维的胶原蛋白、弹性蛋白等的蛋白质的MMP-1、MMP-3、MMP-9等酶的合成(Fisher G.J.at al，Nature，379，335～339)，最终降低真皮层的弹性，从而导致皮肤皱纹。
表情纹是由于肌肉向特定方向移动而形成，且表情纹是基于很长一段时间的累积而产生的结果。
肉毒杆菌素(Botulinum Toxin)作为通过肌肉麻痹来改善表情纹的物质，其通过干扰参与神经传导途径的SNARE(soluble-N-ethylmaleimide-sensitive factorattachment protein receptor，其为存在于在细胞内参与物质输送的囊泡表面的识别受体)复合体的形成来抑制儿茶酚胺的释放，由此抑制肌肉的收缩，从而在涂敷在皮肤时，具有改善表情纹的效果。
肉毒杆菌素是喜欢在腐烂的罐头或腐烂的肉中生长的肉毒杆菌中产生的神经毒素，于1989年获得美国食品及药物管理局的批准后，被用作眼科斜视治疗剂以来，肉毒杆菌素被用于治疗面部痉挛、肌肉强直等神经肌肉疾病，且近年来被用于去除表情纹的施术中。众所周知，肉毒杆菌素是通过使面部表情肌肉麻痹来拉伸表情纹，对粗表情纹尤其有效。然而，由于肉毒杆菌素具有毒性强的缺点以及因肌肉麻痹等导致的副作用等，因此需要由专科医师施术。
发明内容
本申请提供了一种用于改善表情纹的复合多肽及其应用和化妆品组合物。
本申请的实施例是这样实现的：
在第一方面，本申请示例提供了一种用于改善表情纹的复合多肽，其由作为有效成分的六肽-9和铜三肽-1组成。
发明人在实际的研究中发现，联用的六肽-9和铜三肽-1之间具有协同作用，能够有效抑制SNARE复合体的形成，进而通过抑制SNARE复合体的形成来抑制儿茶酚胺的释放，由此抑制肌肉的收缩，而表情纹的产生是肌肉长期运动的结果，因此，在上述示例中，利用这一新发现，获得由六肽-9和铜三肽-1组成的复合多肽，其具有与肉毒杆菌素类似的效果，能够有效减少表情纹的产生以改善表情纹，同时，相比于现有的肉毒杆菌素，安全系数高，且便于操作。
在第二方面，本申请示例提供了用于改善表情纹的化妆品组合物，其包括：本申请第一方面提供的复合多肽，以及至少一种化妆品可接受的赋形剂。
也即是，利用由六肽-9和铜三肽-1组成的复合多肽能够抑制SNARE复合体的形成的这一新用途，将上述复合多肽作为改善表情纹的有效物质添加至化妆品组合物中，可有效改善表情纹，具有与肉毒杆菌素类似的效果，同时，相比于现有的肉毒杆菌素，使用方便且安全。
第三方面，本申请提供上述复合多肽在制备用于抑制SNARE复合体形成的皮肤外用制剂中的应用。
也即是，将六肽-9和铜三肽-1联用并应用于皮肤外用制剂中，联用的六肽-9和铜三肽-1作为有效成分协同作用，具有抑制SNARE复合体形成的作用，进而改善或调节与SNARE复合体表达相关的状态或疾病，具体例如改善表情纹。
第四方面，本申请提供一种用于抑制SNARE复合体形成的皮肤外用制剂，其包括作为有效成分的上述复合多肽。
也即是，利用联用的六肽-9和铜三肽-1作为有效成分，具有抑制SNARE复合体形成的作用。
第五方面，本申请提供一种缓解或治疗由肌肉收缩导致的状态和/或疾病的外用制剂，其包括作为有效成分的上述复合多肽。
附图说明
为了更清楚地说明本申请实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本申请的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为实施例1提供的空白对照组及试验组1-3抑制SNAP 25基因表达效果的对比示意图；
图2为实施例2提供的空白对照组及试验组1-3抑制SNAP 25蛋白质表达的对比示意图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本申请的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本申请，而不应视为限制本申请的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
其中，六肽-9是指以甘氨酰-L-脯氨酰-L-谷氨酰胺-甘氨酰-L-脯氨酰-L-谷氨酰胺(glycyl-L-prolyl-L-glutaminyl-glycyl-L-prolyl-L-glutamine)的顺序结合的6个氨基酸。
铜三肽-1是指：铜结合的三肽，三肽由甘氨酰-L-组氨酰-L-赖氨酸顺序结合所得。
以下针对本申请实施例的用于改善表情纹的复合多肽及其应用和化妆品组合物进行具体说明：
作为通过本申请的实验例1来研究复合物抑制SNARE复合体生成效果的实验结果，与单独使用各个物质的情况相比，当用复合多肽处理时，形成人神经内SNARE复合体的SNAP25的基因表达显著降低。并且，作为通过实验例2来研究复合物对SNAP 25的蛋白质表达量产生的效果的结果，与单独使用各个物质的情况相比，当用复合多肽处理时，构成人神经细胞内SNARE复合体的SNAP 25的蛋白质表达显著降低。
也即是，由六肽-9与铜三肽-1组成的复合多肽能够抑制SNARE复合体的形成，进而通过抑制SNARE复合体的形成来抑制儿茶酚胺的释放，由此抑制肌肉的收缩，与现有的使用肉毒杆菌素的皮肤美容术相比，其更安全，且具有与肉毒杆菌素类似的效果，能减少皮肤肌肉的活动并改善皮肤表情纹。
因此，本申请提供一种用于改善表情纹的复合多肽，其由作为有效成分的六肽-9和铜三肽-1组成。
其中，六肽-9和铜三肽-1均为冻干粉剂，可直接购买于市面。
可选地，六肽-9和铜三肽-1的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5，例如六肽-9和铜三肽-1的质量比为0.5:1、0.6:0.9、0.7:1、0.9:1、1:1、1:0.9或1:0.7等。
可选地，六肽-9和铜三肽-1的质量比为1:1。
采用上述特定比例的六肽-9和铜三肽-1作为有效成分，当其适用于皮肤时，能够互相协同，抑制神经细胞内SNARE复合体的生成，从而抑制肌肉的运动，由此可缓解及改善表情纹。上述含量比是用于确保改善表情纹取得的效果的范围。
进一步地，本申请还提供一种用于改善表情纹的化妆品组合物，其包括：上述复合多肽，以及至少一种化妆品可接受的赋形剂。
可选地，复合多肽在化妆品组合物中的含量为0.0001wt％-30.0wt％。当该含量低于建议范围的情况下，难以表现出预期效果，相反，在超过建议范围的情况下，与含量的增加相比，难以预期效果的增加，且可引起一些细胞毒性。
可选地，复合多肽在化妆品组合物中的含量为0.001wt％-30.0wt％，例如复合多肽在化妆品组合物中的含量为0.001wt％、0.005wt％、0.01wt％、0.1wt％、1wt％、3wt％、5wt％、10wt％、15wt％、20wt％、25wt％或30.0wt％等。
具体地，本申请对于化妆品组合物的剂型没有特别限制，本申请的化妆品组合物可以以本领域中通常制备的任何剂型进行制备，例如，可以被制剂化为溶液、悬浮液、乳状液、糊剂、凝胶、乳霜剂、乳液、粉末、肥皂、含表面活性剂的洁面用品、油、粉末状粉底、乳状液粉底、蜡粉底以及喷雾等，但不限于此。
可选地，化妆品组合物的剂型包括糊剂、粉末剂、悬浮液剂、软膏剂、凝胶剂、乳霜剂、贴剂或喷雾剂中的任一种。
更详细地，本申请的化妆品组合物可以被制剂化为柔软化妆水、营养化妆水、营养乳霜剂、按摩乳霜剂、精华液、眼霜、洁面霜、洁面泡沫、洁肤水、面膜、喷雾或粉末。
进一步地，上述化妆品组合物中，具体赋形剂的选择可根据具体剂型的需求进行选择，也即是各剂型的组成可包含其剂型的制剂化所必须且适合的各种基质和添加剂，在不降低用于改善表情纹的化妆品组合物的效果的范围内，可包含非离子表面活性剂、硅聚合物、体质颜料、香料、防腐剂、杀菌剂、氧化稳定剂、有机溶剂、离子或非离子增稠剂、软化剂、抗氧化剂、自由基清除剂、遮光剂、稳定剂、润肤剂、硅树脂、α-羟基酸、消泡剂、保湿剂、维生素、驱虫剂、香料、保存剂、表面活性剂、消炎剂、P物质拮抗剂、填充剂、共聚物、推进剂、碱化剂或酸化剂、或着色剂等公知的化合物来制备。
除此以外，根据本申请的化妆品组合物的用途，用于改善表情纹的化妆品组合物还可在不影响作为本申请目的的主要效果的范围内包括可提升主要效果或丰富效果的辅助有效成分，例如抗皱剂、美白剂、抗老化剂等等，在此不做限定。
具体例如，具体例如，当上述化妆品组合物的剂型为糊剂、乳霜剂或凝胶剂的情况下，化妆品组合物可以添加作为赋形剂的动物油、植物油、蜡、石蜡、淀粉、胺黄树胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅树脂、膨润土、二氧化硅、滑石粉或氧化锌等载体成分。
由于SNARE复合体参与神经递质的传递，因此SNARE复合体的形成不仅仅与表情纹的产生相关，同时与其他由SNARE复合体参与及导致的肌肉收缩导致的状态和/或疾病也相关。
因此，本申请还提供了上述复合多肽在制备用于抑制SNARE复合体形成的皮肤外用制剂中的应用。
进一步地，本申请还提供一种用于抑制SNARE复合体形成的皮肤外用制剂，其包括作为有效成分的上述复合多肽。
其中，上述制剂包括但不局限于化妆品组合物，还可以为药品，此时，制剂除了包括作为有效成分的复合多肽，还可以包括化妆品或药学可用的赋形剂。
进一步地，本申请还提供一种缓解或治疗由肌肉收缩导致的状态和/或疾病的制剂，其包括作为有效成分的上述复合多肽。
其中，肌肉收缩导致的状态和/或疾病包括但不局限于毛孔扩大、肌肉紧张以及肌肉痉挛中的至少一种。
以下结合实施例对本申请的用于改善表情纹的复合多肽及其应用和化妆品组合物作进一步的详细描述。
实施例1
1.人神经细胞的培养
人神经细胞IMR-32购自韩国细胞株银行。细胞在RPMI培养基中，于37℃下培养，每两天更换一次培养基，培养至附着的细胞达到80％汇合时进行传代培养。
传代培养如下：用磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗涤去除了培养液的培养瓶，用0.25％的胰蛋白酶-EDTA(Gibco BRL，Grand Island，NY，USA)使细胞脱落后，对细胞悬浮液进行离心，之后测量细胞数量，并通过培养液以3倍进行传代培养。
2.确认六肽-9和铜三肽-1及它们的复合物对人神经细胞内SNAP 25基因表达产生的影响的基因表达抑制实验
将人神经细胞IMR-32等量接种在6孔板后，培养24小时，以使细胞贴附到板上，去除孔内培养基并用磷酸盐缓冲液(PBS)进行洗涤，向各孔内分别加入等量的培养基，其中一组培养基仅为样品处理培养基(作为空白对照组)，余下的三组分别添加含有六肽-90.5wt％的样品处理培养基(作为试验组1)、含有铜三肽0.5wt％的样品处理培养基(作为试验组2)、含有由重量比为1：1的比率混合的六肽-9和铜三肽-1的多肽复合物0.5wt％(作为试验组3)的方式进行稀释处理，培养24小时。去除孔内培养基后用磷酸盐缓冲液进行洗涤。使用Takara MiniBEST universaol RNA提取试剂盒提取RNA。每个样品使用1ug的总RNA合成cDNA。使用合成的cDNA进行了实时聚合酶链式反应。
具体地，使用SYBR Green荧光染料进行实时聚合酶链式反应定量。人SNAP25的具体引物序列是正向引物5'-CCC GAG AAG CCC AGG TAA GA-3'及反向引物5'-AGA CGT GCACAC ACG GAA TA-3'。将磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)用作PCR反应的内部对照组，具体聚合酶链式反应(PCR)条件为在95℃下进行15分钟后，以在95℃下进行15秒、在60℃下进行45秒的方式共进行40个循环。将结果示于图1。
参照图1，试验组3相比于空白对照组组1，以及试验组1、2，形成SNARE复合体的SNAP25基因的mRNA表达显著降低，并且试验组3在使用量相比于试验组1和2的总使用量小的前提下，试验组3形成SNARE复合体的SNAP25基因的mRNA表达量的降低量小于试验组1和2的总降低量。
也即是，联用的六肽-9和铜三肽之间具有协同作用，可有效抑制SNARE复合体的生成，从而能抑制肌肉的运动，由此可抑制表情纹的产生。
实施例2
使用蛋白免疫印迹法测量了六肽-9和铜三肽-1及它们的复合物在神经细胞的信号传递中抑制SNARE复合体的形成的效果。
神经递质是由突触小泡的胞外分泌调节来介导。SNARE复合体参与神经元的胞外分泌，由作为小泡蛋白的小泡膜蛋白(VAMP)、作为原生质膜结合蛋白的突触融合蛋白-1以及SNAP-25组成。在本实验中，使用SNAP-25抗体进行蛋白免疫印迹，以确认六肽-9和铜三肽-1复合物是否抑制SNAP-25蛋白质的生成。
具体地：将人神经细胞IMR-32接种在6孔板后，培养48小时，以使细胞贴附到板上，去除孔内培养基并用磷酸盐缓冲液(PBS)进行洗涤。向各孔内分别加入样品处理培养基(作为空白对照组)、含有六肽-9 0.5wt％的样品处理培养基(作为试验组1)、含有铜三肽0.5wt％的样品处理培养基(作为试验组2)、含有由重量比为1：1的比率混合的六肽-9和铜三肽-1的多肽复合物0.5wt％(作为试验组3)的方式进行稀释处理，培养48小时后，去除培养基并用磷酸盐缓冲溶液洗涤2次后，用包含蛋白酶、磷酸酶抑制剂的Ripa缓冲液收集各自的细胞。
将细胞液以14000rpm离心分离10分钟，去除细胞核和未破裂的细胞，并收集上清液。用SDS-样品缓冲液处理上述上清液，用标准方法进行十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。将SNAP-25抗体用作一抗，将辣根过氧化物酶结合的IgG用作二抗。实验结果如图2所示。
根据图2，与空白对照组及试验组1、试验组2相比，在用六肽-9和铜三肽-1复合物处理的试验组3中，SNAP-25的条带强度最弱。
由此可知，联用的六肽-9和铜三肽-1协同作用，显著抑制了SNARE复合体的组成。
综上，用于改善表情纹的复合多肽由作为有效成分的六肽-9和铜三肽-1组成，六肽-9和铜三肽-1联用不仅无毒，而且二者互相协同，可有效抑制SNARE复合体的形成，进而该复合多肽具有与肉毒杆菌素类似的效果，能减少皮肤肌肉的活动并改善皮肤表情纹，且相比于肉毒杆菌素，使用更为方便且更加安全，因此尤其适用于制作改善表情纹的化妆品，以及缓解或治疗由肌肉收缩导致的状态和/或疾病的外用制剂，利用抑制SNARE复合体的形成以抑制肌肉收缩，进而达到预期效果。
以上仅为本申请的具体实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种用于改善表情纹的复合多肽，其特征在于，由作为有效成分的六肽-9和铜三肽-1组成。
2.根据权利要求1所述的复合多肽，其特征在于，所述六肽-9和所述铜三肽-1的质量比为0.5-1.5:0.5-1.5。
3.根据权利要求1所述的复合多肽，其特征在于，所述六肽-9和所述铜三肽-1的质量比为1:1。
4.一种用于改善表情纹的化妆品组合物，其特征在于，包括：权利要求1-3任意一项所述的复合多肽，以及至少一种化妆品可接受的赋形剂。
5.根据权利要求4所述的化妆品组合物，其特征在于，所述复合多肽在所述化妆品组合物中的含量为0.0001wt％-30.0wt％。
6.根据权利要求4所述的化妆品组合物，其特征在于，所述复合多肽在所述化妆品组合物中的含量为0.001wt％-30.0wt％。
7.根据权利要求4-6任意一项所述的化妆品组合物，其特征在于，所述化妆品组合物的剂型为软膏剂、凝胶剂、乳霜剂、贴剂或喷雾剂。
8.如权利要求1-3任意一项所述的复合多肽在制备用于抑制SNARE复合体形成的皮肤外用制剂中的应用。
9.一种用于抑制SNARE复合体形成的皮肤外用制剂，其特征在于，包括作为有效成分的如权利要求1-3任意一项所述的复合多肽。
10.一种缓解或治疗由肌肉收缩导致的状态和/或疾病的外用制剂，其特征在于，包括作为有效成分的如权利要求1-3任意一项所述的复合多肽；
可选地，所述肌肉收缩导致的状态和/或疾病包括毛孔扩大、肌肉紧张以及肌肉痉挛中的至少一种。
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| 汉泰⽣物: "神奇的铜肽——⽪肤修复肽", pages 1 - 4, Retrieved from the Internet <URL:https://mp.weixin.qq.com/s/ztL4ShQDRv_xryfcy0mq6Q> * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN115024996B (zh) | 2024-05-24 |
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