CN115011586A - 一种提高固定化尿酸酶酶活力的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种提高固定化尿酸酶酶活力的方法,该方法包括将葡聚糖和海藻糖施于所述固定化尿酸酶的表面。与现有技术相比,本发明的方法操作简单、成本低,可能很好地提高固定化尿酸酶的酶活力,在很大程度上提高了固定化尿酸酶的使用效率,缩短了高血酸症、痛风人群血液灌流的治疗时间。

Description

一种提高固定化尿酸酶酶活力的方法
技术领域
本发明属于固定化尿酸酶领域,具体涉及一种提高固定化尿酸酶酶活力的方法。
背景技术
尿酸酶能使尿酸迅速氧化变成尿囊酸,将其固定于大孔吸附树脂或活性炭等载体上可用于高血酸症、痛风人群血液灌流的治疗。常用的固定化方法有吸附法、共价结合法、包埋法,吸附-包埋法。由于在实际固定化尿酸酶的过程中会发生一系列的物理化学变化,常常会使尿酸酶酶活性中心的分子构象发生变化,导致其固定化后活力损耗严重的问题。
通过改善固定化酶的通透性,超声波处理,定向固定,新载体的使用等方法可以提高固定化酶的活力(张莤等,酿酒,第35卷第1期,p15-17,2008年1月),但这些方法操作复杂、成本高。
现有研究表明一些化学试剂对酶进行促进或者钝化的效果,但现有技术关于尿酸酶在这方面的研究非常少。
发明内容
为了解决尿酸酶固定化后酶活力损耗严重的问题,本发明提供一种提高固定化尿酸酶酶活力的方法。
为实现上述目的,本发明采用如下的技术方案:
一种提高固定化尿酸酶酶活力的方法,包括:将葡聚糖和海藻糖施于固定化尿酸酶的表面。
优选地,所述葡聚糖、海藻糖和尿酸酶的质量比为1~2:1.5:1~4。更优选地,所述葡聚糖、海藻糖和尿酸酶的质量比为1:1:1时能获得最佳酶活性效果。
优选地,将葡聚糖和海藻糖溶于碱性溶液,再喷施于所述固定化尿酸酶的表面。
更优选地,碱性溶液为pH为7.5~10的磷酸盐缓冲液。pH在8~9范围内能获得最佳的酶活性。
优选地,所述固定化尿酸酶的制备过程包括:将载体与胶黏剂混合,然后与尿酸酶混合,得到固定化尿酸酶。
更优选地,所述载体为聚苯乙烯树脂,所述胶黏剂为聚氨酯胶黏剂。
更优选地,载体与胶黏剂、尿酸酶的混合在10℃以下进行。
最优选地,混合在2~6℃进行能获得最佳的酶活性。
一种依上述方法制备得到的固定化尿酸酶。
一种组合物作为尿酸酶酶活促进剂在制备固定化尿酸酶中的应用,所述组合物由葡聚糖和海藻糖组成。
优选地,所述葡聚糖和海藻糖的质量比为1~2:1.5。
上述组合物的使用方法,包括将所述组合物溶于碱性溶液后,施于固定化尿酸酶表面。
优选地,碱性溶液为pH为7.5~10的磷酸盐缓冲液,更优选地,pH为8~9。
优选地,葡聚糖、海藻糖和尿酸酶的用量比为1~2:1.5:1~4。
优选地,碱性溶液中葡聚糖的浓度为20~50mg/L。
有益效果:
本发明方法操作简单,成本低,能够很好地提高固定化尿酸酶的酶活力,在很大程度上提高了固定化尿酸酶的使用效率,缩短了高血酸症、痛风人群血液灌流的治疗时间。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案做进一步详细说明。
实施例1
(1)固定尿酸酶的制备过程:取洗好和低温烘干的聚苯乙烯树脂颗粒100g,加入聚氨酯胶黏剂80ml,在4摄氏度的条件下混合固化12小时,然后加入尿酸酶干粉(酶活力:16U/mg)25mg,往复式摇床以120r/min速率的震荡使尿酸酶均匀地黏在树脂颗粒的表面,继续在4摄氏度的条件下固化12小时,测其尿酸酶的活性损失55%。
(2)在每升pH=8.5的PBS缓冲液中添加海藻糖30mg和葡聚糖30mg,配制酶活促进液。
(3)按海藻糖、葡聚糖和尿酸酶的质量比为1:1:1取酶活促进液,以100ml/min速率喷洒在树脂颗粒表面。
对比例1
制备过程同实施例1,区别只在于:步骤(3)用不添加葡聚糖和海藻糖的PBS缓冲液(pH=8.5)替代酶活促进液。
对比例2
(1)步骤(1)与实施例1的步骤(1)相同。
(2)在每升pH=8.5的PBS缓冲液中添加葡聚糖60mg,配制酶活促进液。
(3)按葡聚糖和尿酸酶的质量比为2:1取酶活促进液,以100ml/min速率喷洒在树脂颗粒表面。
对比例3
(1)步骤(1)与实施例1的步骤(1)相同。
(2)在每升pH=8.5的PBS缓冲液中添加海藻糖60mg,配制酶活促进液。
(3)按海藻糖和尿酸酶的质量比为2:1取酶活促进液,以100ml/min速率喷洒在树脂颗粒表面。
酶活力测试
分别取上述处理过的固定化尿酸酶150g装填在血液灌流器(实验品)中,对含有一定尿酸的血浆进行净化处理,在血浆处理量分别累积达到500ml、1000ml、1500ml和2000ml时,分别取样测试血浆中尿酸的浓度。具体结果如下:
表1固定化尿酸酶对血浆中尿酸的净化效果
Figure BDA0003761202990000041
由上述测试结果可以看出,固定化尿酸酶喷施一定比例的葡聚糖和海藻糖后酶活力得到显著的提高。与单独使用相比,葡聚糖和海藻糖具体协同作用。
实施例2
取洗好和低温烘干的聚苯乙烯树脂颗粒100g,加入聚氨酯胶黏剂80ml,在4摄氏度的条件下混合固化12小时,然后加入尿酸酶干粉(酶活力:16U/mg)25mg,往复式摇床以120r/min速率的震荡使尿酸酶均匀地黏在树脂颗粒的表面,继续在4摄氏度的条件下固化12小时。
在pH=8的PBS缓冲液中添加葡聚糖(25mg/L)和海藻糖,溶解后,以100ml/L的速率喷洒在树脂颗粒表面,其中,葡聚糖、海藻糖和尿酸酶的质量比为1:1.5:1。
实施例3
取洗好和低温烘干的聚苯乙烯树脂颗粒100g,加入聚氨酯胶黏剂80ml,在6摄氏度的条件下混合固化12小时,然后加入尿酸酶干粉(酶活力:16U/mg)25mg,往复式摇床以120r/min速率的震荡使尿酸酶均匀地黏在树脂颗粒的表面,继续在6摄氏度的条件下固化12小时。
在pH=8.5的PBS缓冲液中添加葡聚糖(50mg/L)和海藻糖,溶解后,以100ml/L的速率喷洒在树脂颗粒表面,其中,葡聚糖、海藻糖和尿酸酶的质量比为2:1.5:1。
实施例4
取洗好和低温烘干的聚苯乙烯树脂颗粒100g,加入聚氨酯胶黏剂80ml,在2摄氏度的条件下混合固化12小时,然后加入尿酸酶干粉(酶活力:16U/mg)40mg,往复式摇床以120r/min速率的震荡使尿酸酶均匀地黏在树脂颗粒的表面,继续在2摄氏度的条件下固化12小时。
在pH=9的PBS缓冲液中添加葡聚糖(30mg/L)和海藻糖,溶解后,以100ml/L的速率喷洒在树脂颗粒表面,其中,葡聚糖、海藻糖和尿酸酶的质量比为1.5:1.5:4。
最后应说明的是:以上所述仅为本发明的优选实施例而已,并不用于限制本发明,尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明,对于本领域的技术人员来说,其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改,或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种提高固定化尿酸酶酶活力的方法,包括:将葡聚糖和海藻糖施于固定化尿酸酶的表面。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述葡聚糖、海藻糖和尿酸酶的质量比为1~2:1.5:1~4。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述葡聚糖、海藻糖和尿酸酶的质量比为1:1:1。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:将葡聚糖和海藻糖溶于碱性溶液,再施于所述固定化尿酸酶的表面。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于:碱性溶液为pH为7.5~10的磷酸盐缓冲液,优选地,pH为8~9;
优选地,碱性溶液中葡聚糖的浓度为20~50mg/L。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述固定化尿酸酶的制备过程包括:将载体与胶黏剂混合,然后与尿酸酶混合,得到固定化尿酸酶;
优选地,所述载体为聚苯乙烯树脂,所述胶黏剂为聚氨酯胶黏剂。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:载体与胶黏剂、尿酸酶的混合在10℃以下进行;
优选地,混合在2~6℃进行。
8.依权利要求1~7任一所述方法制备得到的固定化尿酸酶。
9.组合物作为尿酸酶酶活促进剂在制备固定化尿酸酶中的应用,其特征在于,所述组合物由葡聚糖和海藻糖组成;
优选地,所述葡聚糖和海藻糖的质量比为1~2:1.5。
10.权利要求9所述组合物的使用方法,其特征在于:将所述组合物溶于碱性溶液后,施于固定化尿酸酶表面;
优选地,碱性溶液为pH为7.5~10的磷酸盐缓冲液,更优选地,pH为8~9;
优选地,葡聚糖、海藻糖和尿酸酶的用量比为1~2:1.5:1~4;
优选地,碱性溶液中葡聚糖的浓度为20~50mg/L。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4460683A (en) * 1981-07-07 1984-07-17 Boehringer Mannheim Gmbh Soluble liver uricase with a process for the preparation thereof and with the use thereof
SU1730145A1 (ru) * 1990-05-04 1992-04-30 Всесоюзный научно-исследовательский институт текстильно-галантерейной промышленности Способ стабилизации уриказы
JPH06102229A (ja) * 1992-09-18 1994-04-15 Daikin Ind Ltd 半透性膜およびその製造方法
US5643721A (en) * 1994-02-09 1997-07-01 Abbott Laboratories Bioreagent immobilization medium

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4460683A (en) * 1981-07-07 1984-07-17 Boehringer Mannheim Gmbh Soluble liver uricase with a process for the preparation thereof and with the use thereof
SU1730145A1 (ru) * 1990-05-04 1992-04-30 Всесоюзный научно-исследовательский институт текстильно-галантерейной промышленности Способ стабилизации уриказы
JPH06102229A (ja) * 1992-09-18 1994-04-15 Daikin Ind Ltd 半透性膜およびその製造方法
US5643721A (en) * 1994-02-09 1997-07-01 Abbott Laboratories Bioreagent immobilization medium

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
杜雪飞;王文君;李雪玉;周华;: "葡聚糖在酶催化中的应用进展", 食品工业科技, no. 12, 14 February 2020 (2020-02-14), pages 2 *
杨基础等: "海藻糖对固定化酶的保护作用", 化工学报, vol. 51, no. 02, 25 April 2000 (2000-04-25), pages 193 - 197 *
杨基础等: "海藻糖对固定化酶的保护作用", 化工学报, vol. 51, no. 02, pages 193 - 197 *

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