CN115010772A - 含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液、提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液、提取物及其制备方法，涉及分离纯化技术领域。本发明提供的含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液的制备方法，以破壁松花粉为原料，以特定配比的有机酸和EDTA的水溶液作为提取溶剂，其中有机酸为乙酸或者甲酸中的至少一种，该制备方法简单，大大促进了松花粉中烟酰胺单核苷酸的溶出，且不影响后续的纯化过程。本发明提供的含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物的制备方法，以上述制备得到的松花粉提取液依次经过浓缩、萃取、醇沉和干燥步骤制备得到，在保证烟酰胺单核苷酸高提取率的前提下，有效提高了松花粉提取物中烟酰胺单核苷酸的纯度。
Description
技术领域
本发明涉及分离纯化技术领域，尤其是涉及一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液、提取物及其制备方法。
背景技术
烟酰胺单核苷酸(Nicotinamide mononucleotide，NMN)，是一种内源性生物活性核苷酸，是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+)的关键前体之一，具有抗氧化、减少氧化应激的作用，可以减缓生物体的生理衰退，增强能量代谢，延长寿命，在保健领域具有广阔的前景。
目前，烟酰胺单核苷酸主要通过微生物发酵、化学合成或体外酶催化制备。烟酰胺单核苷酸也富含在一些水果和蔬菜中，包括西兰花、卷心菜、黄瓜、毛豆、鳄梨等。
现代研究表明，松花粉富含人体所需的多种微量营养素，具有增强免疫力、调节代谢、抗氧化、抗衰老、排重金属等功效。本实验室发现松花粉中也含有烟酰胺单核苷酸，并且含量高于西蓝花、牛油果和毛豆等。
CN202010472425.8提供了一种从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸的方法，采用提取溶剂协同超声波辅助、超滤浓缩等方式从牛油果中提取烟酰胺单核苷酸，含量为13.3～16.1μg/g，提取率有待提高。
CN201910811841.3提供了一种西蓝花提取物及制备方法和用途，采用超声波和超滤等方式提取烟酰胺单核苷酸，含量为13.724μg/mg。
CN201910841351.8提供了一种毛豆提取物及其制备方法和应用，采用超声波辅助复合酶、超滤浓缩等方法提取烟酰胺单核苷酸，含量为8.072ug/mL。
然而上述三个方法中烟酰胺单核苷酸的提取率不高，还有待提升。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液的制备方法，以解决上述问题中的至少一种。
本发明的第二目的在于提供一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液。
本发明的第三目的在于提供一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物的制备方法。
本发明的第四目的在于提供一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物。
第一方面，本发明提供了一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液的制备方法，包括如下步骤：
将破壁松花粉采用提取溶剂提取，制备得到含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液；
所述提取溶剂为含有有机酸和EDTA的水溶液；
所述提取溶剂中，有机酸的体积百分比为0.05％-0.1％，EDTA的质量百分比为0.2％-0.6％；
所述有机酸为甲酸或乙酸中的至少一种。
作为进一步技术方案，所述提取为在超声条件下进行；
优选地，所述提取的时间为60-90min；
优选地，所述提取的温度为30-40℃。
作为进一步技术方案，所述破壁松花粉和提取溶剂的比例为1g:60mL-1g:100mL。
作为进一步技术方案，提取结束后还包括除杂；
优选地，所述除杂的方法包括离心或者过滤；
优选地，所述离心的转速为8000-12000r/min，离心的时间为8-12min。
第二方面，本发明提供了一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液，采用所述的制备方法制备得到。
第三方面，本发明提供了一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物的制备方法，包括如下步骤：
a.将所述的松花粉提取液浓缩后进行萃取，保留水相；
b.将a步骤得到的水相进行醇沉，保留清液，干燥后制备得到含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物。
作为进一步技术方案，所述萃取的萃取溶剂包括乙酸乙酯、正戊烷或二氧六环中的至少一种；
优选地，所述萃取溶剂为乙酸乙酯和二氧六环；
优选地，所述萃取溶剂中乙酸乙酯和二氧六环的体积比为1:1-1:3。
作为进一步技术方案，所述醇沉的醇沉溶剂包括乙醇；
优选地，醇沉过程中，乙醇的终体积百分比为60％-80％。
作为进一步技术方案，所述浓缩为将松花粉提取液浓缩至原体积的1/5-1/20，优选为1/10；
优选地，浓缩后的松花粉提取液和萃取溶剂的体积比为1:2-2:1。
第四方面，本发明提供了一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物，采用所述的制备方法制备得到。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明提供的含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液的制备方法，以破壁松花粉为原料，以特定配比的有机酸和EDTA的水溶液作为提取溶剂，其中EDTA可增加NMN的稳定性，有机酸为乙酸或者甲酸中的至少一种，能够调节提取溶剂的离子强度和酸碱度，增加NMN的溶解度，将二者按照特定比例混合作为提取溶剂充分发挥了EDTA和乙酸或甲酸之间的协同配合作用。该制备方法简单，大大促进了松花粉中烟酰胺单核苷酸的溶出，且不影响后续的纯化过程。
本发明提供的含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物的制备方法，以上述制备得到的松花粉提取液依次经过浓缩、萃取、醇沉和干燥步骤制备得到，其中萃取过程，可有效除去色素和酚酸等非极性或弱极性物质；醇沉过程，可有效除去多糖和蛋白质等大分子等醇不溶性物质；萃取和醇沉相互配合，在保证烟酰胺单核苷酸高提取率的前提下，有效提高了松花粉提取物中烟酰胺单核苷酸的纯度。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为烟酰胺单核苷酸SRM谱图。
具体实施方式
下面将结合实施方式和实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施方式和实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
第一方面，本发明提供了一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液的制备方法，包括如下步骤：
将破壁松花粉采用提取溶剂提取，制备得到含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液；
所述提取溶剂为含有有机酸和EDTA的水溶液；其中有机酸为甲酸或乙酸中的至少一种。经发明人研究发现，特定配比的甲酸或乙酸能够与EDTA配合，进一步提高松花粉中烟酰胺单核苷酸的溶出，而其他类型的有机酸或者无机酸与EDTA没有配合作用或者作用不显著。
所述提取溶剂中，有机酸的体积百分比例如可以为，但不限于0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％，EDTA的质量百分比例如可以为，但不限于0.2％、0.3％、0.4％、0.5％或0.6％。
本发明提供的含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液的制备方法，以破壁松花粉为原料，以特定配比的有机酸和EDTA的水溶液作为提取溶剂，其中EDTA可增加NMN的稳定性，有机酸调节提取溶剂的离子强度和酸碱度，增加NMN的溶解度，将二者按照特定比例混合作为提取溶剂充分发挥了EDTA和有机酸之间的协同配合作用。该制备方法简单，大大促进了松花粉中烟酰胺单核苷酸的溶出，且不影响后续的纯化过程。
在一些优选的实施方式中，所述提取为在超声条件下进行；
优选地，所述提取的时间例如可以为，但不限于60min、65min、70min、75min、80min、85min或90min；
优选地，所述提取的温度例如可以为，但不限于30℃、32℃、34℃、36℃、38℃或40℃。
在一些优选的实施方式中，所述破壁松花粉和提取溶剂的比例例如可以为，但不限于1g:60mL、1g:70mL、1g:80mL、1g:90mL或1g:100mL。
通过对提取条件的进一步优化和调整，使得松花粉中的烟酰胺单核苷酸充分溶出。
在一些优选的实施方式中，提取结束后还包括除杂，以去除不溶性固体颗粒物质。
优选地，所述除杂的方法包括但不限于离心或者过滤；
优选地，所述离心的转速例如可以为，但不限于8000r/min、9000r/min、10000r/min、11000r/min或12000r/min，离心的时间例如可以为，但不限于8min、9min、10min、11min或12min。
第二方面，本发明提供了一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液，采用所述的制备方法制备得到。该松花粉提取液中烟酰胺单核苷酸的含量高。
第三方面，本发明提供了一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物的制备方法，包括如下步骤：
a.将所述的松花粉提取液浓缩后进行萃取，保留水相；
b.将a步骤得到的水相进行醇沉，保留清液，干燥后制备得到含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物。
本发明提供的含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物的制备方法，以上述制备得到的松花粉提取液依次经过浓缩、萃取、醇沉和干燥步骤制备得到，其中萃取过程，可有效除去色素和酚酸等非极性或弱极性物质；醇沉过程，可有效除去多糖和蛋白质等大分子等醇不溶性物质；萃取和醇沉相互配合，在保证烟酰胺单核苷酸高提取率的前提下，有效提高了松花粉提取物中烟酰胺单核苷酸的纯度。
在一些优选的实施方式中，所述浓缩为将松花粉提取液浓缩至原体积的1/5-1/20，例如可以为1/5、1/10、1/15或1/20，优选为1/10。通过浓缩，有利于提高萃取和醇沉的纯化效果，减少萃取溶剂和醇的用量。
优选地，浓缩后的松花粉提取液和萃取溶剂的体积比例如可以为，但不限于1:2、1:1或2:1，通过对萃取剂用量和萃取效果的综合考虑，优选为1:1。
在一些优选的实施方式中，所述萃取的萃取溶剂包括乙酸乙酯、正戊烷或二氧六环中的至少一种；
优选地，所述萃取溶剂为乙酸乙酯和二氧六环；
优选地，所述萃取溶剂中乙酸乙酯和二氧六环的体积比例如可以为，但不限于1:1、1:2或1:3。
经发明人研究发现，当萃取剂中乙酸乙酯和二氧六环的体积比在1:1-1:3范围时，对于烟酰胺单核苷酸的纯化效果更好。
在一些优选的实施方式中，所述醇沉的醇沉溶剂包括乙醇；
优选地，醇沉过程中，乙醇的终体积百分比例如可以为，但不限于60％、65％、70％、75％或80％。
经发明人研究发现，醇沉过程中，乙醇的终体积百分比在60％-80％范围内时，对于烟酰胺单核苷酸的纯化效果更好。
第四方面，本发明提供了一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物，采用所述的制备方法制备得到，该松花粉提取物中烟酰胺单核苷酸含量高。
下面通过具体的实施例和对比例进一步说明本发明，但是，应当理解为，这些实施例仅仅是用于更详细地说明之用，而不应理解为用于以任何形式限制本发明。
实施例1
一种松花粉提取液的制备方法，包括以下步骤：
S1)取干燥除杂后的松花粉，低温高速旋风粉碎处理后得到破壁松花粉；
S2)准确称取上述松花粉10.00g，加入提取溶剂，控制料液比为1g：60mL，超声时间为90min，超声温度为40℃，收集提取液；
其中提取溶剂为含有0.05％乙酸(V/V)的水溶液。
实施例2
与实施例1的区别在于，提取溶剂为含有0.05％乙酸(V/V)和0.2wt％EDTA的水溶液。
实施例3
与实施例1的区别在于，提取溶剂为含有0.05％乙酸(V/V)和0.4wt％EDTA的水溶液。
实施例4
与实施例1的区别在于，提取溶剂为含有0.05％乙酸(V/V)和0.6wt％EDTA的水溶液。
实施例5
与实施例1的区别在于，提取溶剂为含有0.08％乙酸(V/V)和0.4wt％EDTA的水溶液。
实施例6
与实施例1的区别在于，提取溶剂为含有0.10％乙酸(V/V)和0.4wt％EDTA的水溶液。
实施例7
与实施例1的区别在于，提取溶剂为含有0.4wt％EDTA的水溶液。
实施例8
一种松花粉提取液的制备方法，包括以下步骤：
S1)取干燥除杂后的松花粉，低温高速旋风粉碎处理后得到破壁松花粉；
S2)准确称取上述松花粉10.00g，加入提取溶剂，控制料液比为1g：20mL，超声时间为90min，超声温度为40℃，收集提取液；
其中提取溶剂为含有0.08％乙酸(V/V)和0.4wt％EDTA的水溶液。
实施例9
与实施例8的区别在于，控制料液比为1g：40mL。
实施例10
与实施例8的区别在于，控制料液比为1g：60mL。
实施例11
与实施例8的区别在于，控制料液比为1g：80mL。
实施例12
与实施例8的区别在于，控制料液比为1g：100mL。
实施例13
一种松花粉提取液的制备方法，包括以下步骤：
S1)取干燥除杂后的松花粉，低温高速旋风粉碎处理后得到破壁松花粉；
S2)准确称取上述松花粉10.00g，加入提取溶剂，控制料液比为1g：60mL，超声时间为10min，超声温度为40℃，收集提取液；
其中提取溶剂为含有0.08％乙酸(V/V)和0.4wt％EDTA的水溶液。
实施例14
与实施例13的区别在于，超声时间为30min。
实施例15
与实施例13的区别在于，超声时间为60min。
实施例16
与实施例13的区别在于，超声时间为90min。
实施例17
与实施例13的区别在于，超声时间为120min。
实施例18
一种松花粉提取液的制备方法，包括以下步骤：
S1)取干燥除杂后的松花粉，低温高速旋风粉碎处理后得到破壁松花粉；
S2)准确称取上述松花粉10.00g，加入提取溶剂，控制料液比为1g：60mL，超声时间为90min，超声温度为30℃，收集提取液；
其中提取溶剂为含有0.08％乙酸(V/V)和0.4wt％EDTA的水溶液。
实施例19
与实施例18的区别在于，超声温度为40℃。
实施例20
与实施例18的区别在于，超声温度为50℃。
实施例21
与实施例18的区别在于，超声温度为60℃。
实施例22
与实施例18的区别在于，超声温度为70℃。
实施例23
一种松花粉提取物的制备方法，包括以下步骤：
S1)取干燥除杂后的松花粉，低温高速旋风粉碎处理后得到破壁松花粉；
S2)准确称取上述松花粉10.00g，加入提取溶剂，控制料液比为1g：60mL，超声时间为90min，超声温度为40℃，收集提取液；
其中提取溶剂为含有0.08％乙酸(V/V)和0.4wt％EDTA的水溶液。
S3)将提取液以10000r/min离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/10、加入等体积混合溶剂萃取2次、保留水相，加入无水乙醇，控制乙醇终浓度为80％(V/V)醇沉2h，取上清液浓缩；
S4)将浓缩液进行真空冷冻干燥，得松花粉提取物；
其中，萃取溶剂为乙酸乙酯。
实施例24
与实施例23的区别在于，萃取溶剂为正戊烷。
实施例25
与实施例23的区别在于，萃取溶剂为二氧六环。
实施例26
与实施例23的区别在于，萃取溶剂为体积比为1:1的乙酸乙酯和正戊烷。
实施例27
与实施例23的区别在于，萃取溶剂为体积比为1:1的正戊烷和二氧六环。
实施例28
与实施例23的区别在于，萃取溶剂为体积比为1:1的乙酸乙酯和二氧六环。
实施例29
与实施例23的区别在于，萃取溶剂为体积比为1:2的乙酸乙酯和二氧六环。
实施例30
与实施例23的区别在于，萃取溶剂为体积比为1:3的乙酸乙酯和二氧六环。
实施例31
与实施例23的区别在于，萃取溶剂为体积比为1:4的乙酸乙酯的二氧六环。
实施例32
与实施例23的区别在于，萃取溶剂为体积比为2:1的乙酸乙酯和二氧六环。
实施例33
一种松花粉提取物的制备方法，包括以下步骤：
S1)取干燥除杂后的松花粉，低温高速旋风粉碎处理后得到破壁松花粉；
S2)准确称取上述松花粉10.00g，加入提取溶剂，控制料液比为1g：60mL，超声时间为90min，超声温度为40℃，收集提取液；
其中提取溶剂为含有0.08％乙酸(V/V)和0.4wt％EDTA的水溶液。
S3)将提取液以10000r/min离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/10、加入等体积混合溶剂萃取2次、保留水相，加入无水乙醇，控制乙醇终浓度为50％(V/V)醇沉2h，取上清液浓缩；
S4)将浓缩液进行真空冷冻干燥，得松花粉提取物；
其中，萃取溶剂为体积比为1:3的乙酸乙酯和二氧六环。
实施例34
与实施例33的区别在于，控制乙醇终浓度为60％(V/V)。
实施例35
与实施例33的区别在于，控制乙醇终浓度为70％(V/V)。
实施例36
与实施例33的区别在于，控制乙醇终浓度为80％(V/V)。
实施例37
与实施例33的区别在于，控制乙醇终浓度为90％(V/V)。
试验例1
对上述实施例1-37提供的松花粉提取液和松花粉提取物中NMN含量进行检测，结果如表1和表2所示。
检测方法
仪器设备及参数
三重四级杆液质联用仪，配ESI离子源。色谱柱为AQC18(100×2.1mm,2μm)。质谱条件：电喷雾电离(ESI)正离子进行检测。ESI源条件如下：Positive Ion(V)3800，NegativeIon(V)3000，Sheath Gas(Arb)10，Aux Gas(Arb)8，Ion Transfer Tube Temp(℃)325,Vaporizer Temp(℃)300。SRM扫描方式，母离子335，子离子123、97。
化合物优化
准确称取烟酰胺单核苷酸标准品，10％甲醇溶解，过0.22μm滤器，化合物优化。烟酰胺单核苷酸SRM谱图如图1所示。
样品测定
取1mL松花粉提取液，10％甲醇稀释定容至10mL，过0.22μm滤器，上机检测。
准确称取松花粉提取物100mg，10％甲醇溶解，定容至10mL，稀释100倍后，过0.22μm滤器，上机检测。
将NMN标准品稀释成不同浓度，随样品一同检测。
表1不同提取剂、提取时间、提取温度对松花粉提取液中NMN含量的影响
表2不同萃取溶剂、醇沉浓度对冷冻干燥后松花粉提取物中NMN含量的影响
由表1可知，不同提取剂、提取时间、料液比、提取温度均对松花粉提取液中NMN含量存在影响，含有乙酸和EDTA的水溶液作为提取溶剂，比单一存在时，提取率高；并且不同含量对结果影响显著。料液比越大，NMN含量越高。提取时间在60～90min内，NMN含量较高。提取温度在30～40℃内，NMN含量较高，温度过高会造成NMN被分解破坏。
采用含有0.08％乙酸(V/V)和0.4wt％EDTA的水溶液作为提取溶剂，料液比1:60，超声提取90min，提取温度为40℃，经离心、浓缩、可获得高NMN含量的松花粉提取液。
松花粉提取液经萃取、醇沉、冷冻干燥获得固形物。由表2可知，萃取溶剂采用乙酸乙酯:二氧六环1:1～1:3，松花粉提取物中NMN含量优于其他萃取溶剂。醇沉浓度控制在60～80％(V/V)，松花粉提取物中NMN含量优于其他醇沉浓度。
实施例38
一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物的制备方法，包括如下步骤：
S1)取干燥除杂后的松花粉，低温高速旋风粉碎处理后得到破壁松花粉；
S2)准确称取上述松花粉10.00g，加入含有0.05％乙酸(V/V)和0.6wt％EDTA的水溶液作为提取溶剂，料液比1:60，超声提取90min，提取温度为40℃；
S3)将提取液以10000r/min离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/10、加入等体积的乙酸乙酯:二氧六环1:1作为萃取溶剂萃取2次、保留水相，加入无水乙醇，控制乙醇终浓度为60％(V/V)醇沉2h，取上清液浓缩；
S4)将浓缩液进行真空冷冻干燥，得松花粉提取物。
实施例39
一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物的制备方法，包括如下步骤：
S1)取干燥除杂后的松花粉，低温高速旋风粉碎处理后得到破壁松花粉；
S2)准确称取上述松花粉10.00g，加入含有0.1％乙酸(V/V)和0.4wt％EDTA的水溶液作为提取溶剂，料液比1:60，超声提取90min，提取温度为40℃；
S3)将提取液以10000r/min离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/10、加入等体积的乙酸乙酯:二氧六环1:2作为萃取溶剂萃取2次、保留水相，加入无水乙醇，控制乙醇终浓度为70％(V/V)醇沉2h，取上清液浓缩；
S4)将浓缩液进行真空冷冻干燥，得松花粉提取物。
实施例40
一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物的制备方法，包括如下步骤：
S1)取干燥除杂后的松花粉，低温高速旋风粉碎处理后得到破壁松花粉；
S2)准确称取上述松花粉10.00g，加入含有0.07％乙酸(V/V)和0.2wt％EDTA的水溶液作为提取溶剂，料液比1:60，超声提取90min，提取温度为40℃；
S3)将提取液以10000r/min离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/10、加入等体积的乙酸乙酯:二氧六环1:2作为萃取溶剂萃取2次、保留水相，加入无水乙醇，控制乙醇终浓度为80％(V/V)醇沉2h，取上清液浓缩；
S4)将浓缩液进行真空冷冻干燥，得松花粉提取物。
实施例41
一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物的制备方法，包括如下步骤：
S1)取干燥除杂后的松花粉，低温高速旋风粉碎处理后得到破壁松花粉；
S2)准确称取上述松花粉10.00g，加入含有0.05％乙酸(V/V)和0.2wt％EDTA的水溶液作为提取溶剂，料液比1:60，超声提取90min，提取温度为40℃；
S3)将提取液以10000r/min离心10min，取上清液浓缩至原体积的1/10、加入等体积的乙酸乙酯:二氧六环1:3作为萃取溶剂萃取2次、保留水相，加入无水乙醇，控制乙醇终浓度为80％(V/V)醇沉2h，取上清液浓缩；
S4)将浓缩液进行真空冷冻干燥，得松花粉提取物。
试验例2
采用液质联用仪对实施例38-41提供的松花粉提取物中NMN含量进行检测，结果如表3所示。
表3松花粉提取物中NMN含量
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (10)
1.一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将破壁松花粉采用提取溶剂提取，制备得到含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液；
所述提取溶剂为含有有机酸和EDTA的水溶液；
所述提取溶剂中，有机酸的体积百分比为0.05％-0.1％，EDTA的质量百分比为0.2％-0.6％；
所述有机酸为甲酸或乙酸中的至少一种。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述提取为在超声条件下进行；
优选地，所述提取的时间为60-90min；
优选地，所述提取的温度为30-40℃。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述破壁松花粉和提取溶剂的比例为1g:60mL-1g:100mL。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，提取结束后还包括除杂；
优选地，所述除杂的方法包括离心或者过滤；
优选地，所述离心的转速为8000-12000r/min，离心的时间为8-12min。
5.一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取液，其特征在于，采用权利要求1-4任一项所述的制备方法制备得到。
6.一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
a.将权利要求5所述的松花粉提取液浓缩后进行萃取，保留水相；
b.将a步骤得到的水相进行醇沉，保留清液，干燥后制备得到含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述萃取的萃取溶剂包括乙酸乙酯、正戊烷或二氧六环中的至少一种；
优选地，所述萃取溶剂为乙酸乙酯和二氧六环；
优选地，所述萃取溶剂中乙酸乙酯和二氧六环的体积比为1:1-1:3。
8.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述醇沉的醇沉溶剂包括乙醇；
优选地，醇沉过程中，乙醇的终体积百分比为60％-80％。
9.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述浓缩为将松花粉提取液浓缩至原体积的1/5-1/20，优选为1/10；
优选地，浓缩后的松花粉提取液和萃取溶剂的体积比为1:2-2:1。
10.一种含烟酰胺单核苷酸的松花粉提取物，其特征在于，采用权利要求6-9任一项所述的制备方法制备得到。
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| Title |
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| HIROSHI ASHIHARA等: "Comparison of the formation of nicotinic acid conjugates in leaves of different plant species", 《PLANT PHYSIOLOGY AND BIOCHEMISTRY》, vol. 60, pages 190 - 195, XP028943852, DOI: 10.1016/j.plaphy.2012.08.007 * |
| MICHAEL KRACHLER等: "Extraction of antimony and arsenic from fresh and freeze-dried plant samples as determined by HG-AAS", 《FRESENIUS\' JOURNAL OF ANALYTICAL CHEMISTRY 》, vol. 368, pages 702 - 707 * |
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