CN115006451A - 藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，其包括以下步骤：步骤一、将绿绒蒿花洗净浸泡至清水中，浸泡40～60min后取出得洗净的绿绒蒿花；步骤二、向洗净的绿绒蒿花内加入液氮，使得液氮淹没绿绒蒿花，搅拌至液氮完全蒸发，得速冻后的绿绒蒿花；步骤三、将速冻后的绿绒蒿花与氧化石墨烯混合置于粉碎机内粉碎，得绿绒蒿花粉；步骤四、将绿绒蒿花粉加入乙醇水溶液中进行提取，收集醇提液；步骤五、对醇提液依次进行萃取、浓缩去除溶剂，得粗提物；步骤六、对粗提物依次进行膜过滤和柱层析吸附，得绿绒蒿总黄酮。本发明能够提高绿绒蒿总黄酮的提取率和提取纯度。
Description
技术领域
本发明涉及黄酮提取工艺技术领域。更具体地说，本发明涉及一种藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺。
背景技术
绿绒蒿为罂粟科绿绒蒿属植物。全世界共有49种，主要产于亚洲中南部，以中国最为丰富，除一种长于西欧外，其余均分布在中国喜马拉雅山和横断山脉。有40种分布在中国藏、滇、川、青、甘、陕等省、区，其中仅云南就分布有17种，丽江有8种。多集中分布在滇西北海拔3000～5000米的高山草甸和灌丛中。绿绒蒿不仅花色艳丽具有很高的观赏价值，有些种类还可入药治病。如:全缘绿绒蒿(丽江又名"黄芙蓉")、尼泊尔绿绒蒿(禄劝又名"山窝笋")全草入药，具有清热解毒的功效，清热止咳；花前采叶治胃中反酸；花退热催吐、消炎，还治跌打骨折。总状绿绒蒿，兄弟民族又称"红毛洋参"、"雪参"，根入药，治气虚、浮肿、哮喘等症，具有补中益气的作用。
绿绒蒿的话向下成分主要为黄酮、生物碱和挥发油，其中以黄酮类化合物居多，现有的绿绒蒿总黄酮提取方法得到的总黄酮多为粗提物，总黄酮的纯度不高且总黄酮的提取率较低。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明还有一个目的是提供一种藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，其能够提高绿绒蒿总黄酮的提取率和提取纯度。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，其包括以下步骤：
步骤一、将绿绒蒿花洗净浸泡至清水中，浸泡40～60min后取出得洗净的绿绒蒿花；
步骤二、向洗净的绿绒蒿花内加入液氮，使得液氮淹没绿绒蒿花，搅拌至液氮完全蒸发，得速冻后的绿绒蒿花；
步骤三、将速冻后的绿绒蒿花与氧化石墨烯混合置于粉碎机内粉碎，得绿绒蒿花粉；
步骤四、将绿绒蒿花粉加入乙醇水溶液中进行提取，收集醇提液；
步骤五、对醇提液依次进行萃取、浓缩去除溶剂，得粗提物；
步骤六、对粗提物依次进行膜过滤和柱层析吸附，得绿绒蒿总黄酮。
优选的是，所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，绿绒蒿花粉在进行步骤四之前，还包括：将绿绒蒿花粉压制成薄片，对薄片进行交替执行升温、降温处理，随后将薄片再次置于粉碎机内粉碎，即得绿绒蒿花粉。
优选的是，所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，对薄片进行交替执行升温、降温处理包括：将薄片升温至100～120℃，然后在-18～-10℃的环境中冷却，重复执行2～3次。
优选的是，所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，氧化石墨烯的添加量为速冻后的绿绒蒿花的重量的0.003～0.005％。
优选的是，所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，步骤四中将绿绒蒿花粉加入乙醇水溶液中进行提取，收集醇提液，其中所用乙醇水溶液的乙醇的体积浓度为55％，提取温度为75℃，提取时间为5h。
优选的是，所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，步骤五中萃取包括依次用乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，合并乙酸乙酯和正丁醇的萃取液，经减压浓缩去除溶剂后得粗提物。
优选的是，所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，步骤六中的膜过滤包括：将粗提物与乙醇按重量比为1:10进行混合，然后经陶瓷超滤膜进行过滤，用乙醇洗涤陶瓷超滤膜3次，收集滤液和洗涤液，减压浓缩干燥后得总黄酮粗品。
优选的是，所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，步骤六中柱层析吸附包括：将总黄酮粗品与甲醇按重量比为1:5进行混合加入至层析柱的顶部，用甲醇洗脱液进行洗脱，收集黄色色带的洗脱液，经减压浓缩干燥得绿绒蒿总黄酮。
优选的是，所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，层析柱的吸附剂为葡聚糖凝胶LX-20。
本发明至少包括以下有益效果：
1、本发明将经过浸泡吸满水分的绿绒蒿花进行液氮速冻，绿绒蒿花表面和内部的水分在液氮快速蒸发的过程中快速膨胀，能够快速的破碎绿绒蒿花的细胞膜、细胞壁和表皮组织，击穿细胞壁和细胞膜，有利于后续提取过程中黄酮的溶出；且液氮蒸发完全后，绿绒蒿花本体变脆易于后续的粉碎；
2、绿绒蒿花中总黄酮的提取中，细胞壁是细胞内黄酮类化合物提取的主要障碍，因此破裂细胞壁是生物活性成分快速高效提取的关键环节，细胞壁的破裂程度越大，后续绿绒蒿花中总黄酮的提取的速度越快，活性成分的得率越高；本发明将速冻后的绿绒蒿花与氧化石墨烯进行混合，一并置于粉碎机内进行粉碎成粉末，在粉碎机内进行粉碎过程中，氧化石墨烯在来回摩擦接触过程中可进一步破坏绿绒蒿花的细胞壁，增加植物孔隙率，提高物质传质过程，促进后续提取过程中黄酮的溶出；
3、将由绿绒蒿花粉碎物与氧化石墨烯混合形成的绿绒蒿粉进行乙醇提取，氧化石墨烯单片上随机分布着羟基和环氧基，单片的边缘则引入了羧基和羰基，表现出强酸性，提取过程中，对细胞壁进一步酸解破坏，加快细胞壁内黄酮类物质的溶出速率，提高总黄酮得率；进一步，氧化石墨烯上大量的氧基功能团能够与黄酮类化合物结合，提高了黄酮类化合物提取的针对性，有利于将黄酮类化合物与其他物质的分离，提高了总黄酮提取的纯度；将醇提液一次进行萃取、膜过滤和柱层析吸附，进一步去除提取物中的杂质，提高总黄酮提取的纯度；
4、本发明在绿绒蒿花粉进行乙醇水溶液提取之前，还经过了进一步处理，具体将绿绒蒿花粉压片，交替执行升温、降温，然后再次进行粉碎，经粉碎机处理的绿绒花粉中氧化石墨烯与绿绒蒿花粉碎物均匀混合，压成薄片利用绿绒蒿花粉碎物与氧化石墨烯的导热性能差别，对薄片执行升温、降温处理，使得氧化石墨烯对绿绒蒿花表面产生缝隙，增加细胞孔隙率，进一步提高物质传质过程，有利于黄酮物质的浸出，提高总黄酮的提取率。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
本发明提供一种藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，其包括以下步骤：
步骤一、将绿绒蒿花洗净浸泡至清水中，浸泡40～60min后取出得洗净的绿绒蒿花；
步骤二、向洗净的绿绒蒿花内加入液氮，使得液氮淹没绿绒蒿花，搅拌至液氮完全蒸发，得速冻后的绿绒蒿花；
步骤三、将速冻后的绿绒蒿花与氧化石墨烯混合置于粉碎机内粉碎，得绿绒蒿花粉；
步骤四、将绿绒蒿花粉加入乙醇水溶液中进行提取，收集醇提液；
步骤五、对醇提液依次进行萃取、浓缩去除溶剂，得粗提物；
步骤六、对粗提物依次进行膜过滤和柱层析吸附，得绿绒蒿总黄酮。
另一个实施例中，所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，绿绒蒿花粉在进行步骤四之前，还包括：将绿绒蒿花粉压制成薄片，对薄片进行交替执行升温、降温处理，随后将薄片再次置于粉碎机内粉碎，即得。
另一个实施例中，所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，对薄片进行交替执行升温、降温处理包括：将薄片升温至100～120℃，然后在-18～-10℃的环境中冷却，重复执行2～3次。
另一个实施例中，所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，氧化石墨烯的添加量为速冻后的绿绒蒿花的重量的0.003～0.005％。
另一个实施例中，所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，步骤四中将绿绒蒿花粉加入乙醇水溶液中进行提取，收集醇提液，其中所用乙醇水溶液的乙醇的体积浓度为55％，提取温度为75℃，提取时间为5h。
另一个实施例中，所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，步骤五中萃取包括依次用乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，合并乙酸乙酯和正丁醇的萃取液，经减压浓缩去除溶剂后得粗提物。
另一个实施例中，所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，步骤六中的膜过滤包括：将粗提物与乙醇按重量比为1:10进行混合，然后经陶瓷超滤膜进行过滤，用乙醇洗涤陶瓷超滤膜3次，收集滤液和洗涤液，减压浓缩干燥后得总黄酮粗品。
另一个实施例中，所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，步骤六中柱层析吸附包括：将总黄酮粗品与甲醇按重量比为1:5进行混合加入至层析柱的顶部，用甲醇洗脱液进行洗脱，收集黄色色带的洗脱液，经减压浓缩干燥得绿绒蒿总黄酮。
另一个实施例中，所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，层析柱的吸附剂为葡聚糖凝胶LX-20。
以下以具体实施例说明：
<实施例1>
一种藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，其包括以下步骤：
步骤一、将绿绒蒿花洗净浸泡至清水中，浸泡50min后取出得洗净的绿绒蒿花；
步骤二、向洗净的绿绒蒿花内加入液氮，使得液氮淹没绿绒蒿花，搅拌至液氮完全蒸发，得速冻后的绿绒蒿花；
步骤三、将速冻后的绿绒蒿花与氧化石墨烯混合置于粉碎机内粉碎，得粉碎物；
步骤四、将粉碎物压制成薄片，对薄片进行交替执行升温、降温处理，随后将薄片再次置于粉碎机内粉碎，得绿绒蒿花粉；对薄片进行交替执行升温、降温处理包括：将薄片升温至110℃，然后在-14℃的环境中冷却，重复执行3次；其中，氧化石墨烯的添加量为速冻后的绿绒蒿花的重量的0.004％；
步骤五、将绿绒蒿花粉加入乙醇水溶液中进行提取，收集醇提液；所用乙醇水溶液的乙醇的体积浓度为55％，提取温度为75℃，提取时间为5h；
步骤六、对醇提液依次乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，合并乙酸乙酯和正丁醇的萃取液，经减压浓缩去除溶剂后得粗提物；
步骤七、将粗提物与乙醇按重量比为1:10进行混合，然后经陶瓷超滤膜进行过滤，用乙醇洗涤陶瓷超滤膜3次，收集滤液和洗涤液，减压浓缩干燥后得总黄酮粗品；
步骤八、将总黄酮粗品与甲醇按重量比为1:5进行混合加入至填充有葡聚糖凝胶LX-20吸附剂的层析柱的顶部，用甲醇洗脱液进行洗脱，收集黄色色带的洗脱液，经减压浓缩干燥得绿绒蒿总黄酮。
<实施例2>
一种藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，其包括以下步骤：
步骤一、将绿绒蒿花洗净浸泡至清水中，浸泡40min后取出得洗净的绿绒蒿花；
步骤二、向洗净的绿绒蒿花内加入液氮，使得液氮淹没绿绒蒿花，搅拌至液氮完全蒸发，得速冻后的绿绒蒿花；
步骤三、将速冻后的绿绒蒿花与氧化石墨烯混合置于粉碎机内粉碎，得粉碎物；
步骤四、将粉碎物压制成薄片，对薄片进行交替执行升温、降温处理，随后将薄片再次置于粉碎机内粉碎，得绿绒蒿花粉；对薄片进行交替执行升温、降温处理包括：将薄片升温至100℃，然后在-18℃的环境中冷却，重复执行2次；其中，氧化石墨烯的添加量为速冻后的绿绒蒿花的重量的0.003％；
步骤五、将绿绒蒿花粉加入乙醇水溶液中进行提取，收集醇提液；所用乙醇水溶液的乙醇的体积浓度为55％，提取温度为75℃，提取时间为5h；
步骤六、对醇提液依次乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，合并乙酸乙酯和正丁醇的萃取液，经减压浓缩去除溶剂后得粗提物；
步骤七、将粗提物与乙醇按重量比为1:10进行混合，然后经陶瓷超滤膜进行过滤，用乙醇洗涤陶瓷超滤膜3次，收集滤液和洗涤液，减压浓缩干燥后得总黄酮粗品；
步骤八、将总黄酮粗品与甲醇按重量比为1:5进行混合加入至填充有葡聚糖凝胶LX-20吸附剂的层析柱的顶部，用甲醇洗脱液进行洗脱，收集黄色色带的洗脱液，经减压浓缩干燥得绿绒蒿总黄酮。
<实施例3>
一种藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，其包括以下步骤：
步骤一、将绿绒蒿花洗净浸泡至清水中，浸泡60min后取出得洗净的绿绒蒿花；
步骤二、向洗净的绿绒蒿花内加入液氮，使得液氮淹没绿绒蒿花，搅拌至液氮完全蒸发，得速冻后的绿绒蒿花；
步骤三、将速冻后的绿绒蒿花与氧化石墨烯混合置于粉碎机内粉碎，得粉碎物；
步骤四、将粉碎物压制成薄片，对薄片进行交替执行升温、降温处理，随后将薄片再次置于粉碎机内粉碎，得绿绒蒿花粉；对薄片进行交替执行升温、降温处理包括：将薄片升温至120℃，然后在-10℃的环境中冷却，重复执行3次；其中，氧化石墨烯的添加量为速冻后的绿绒蒿花的重量的0.005％；
步骤五、将绿绒蒿花粉加入乙醇水溶液中进行提取，收集醇提液；所用乙醇水溶液的乙醇的体积浓度为55％，提取温度为75℃，提取时间为5h；
步骤六、对醇提液依次乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，合并乙酸乙酯和正丁醇的萃取液，经减压浓缩去除溶剂后得粗提物；
步骤七、将粗提物与乙醇按重量比为1:10进行混合，然后经陶瓷超滤膜进行过滤，用乙醇洗涤陶瓷超滤膜3次，收集滤液和洗涤液，减压浓缩干燥后得总黄酮粗品；
步骤八、将总黄酮粗品与甲醇按重量比为1:5进行混合加入至填充有葡聚糖凝胶LX-20吸附剂的层析柱的顶部，用甲醇洗脱液进行洗脱，收集黄色色带的洗脱液，经减压浓缩干燥得绿绒蒿总黄酮。
<对比例1>
绿绒蒿花不经过液氮速冻，不执行步骤一、二，洗净的绿绒蒿花直接进入步骤三；其余步骤和参数同实施例1。
<对比例2>
不执行步骤三、四，其余步骤和参数同实施例1。
<对比例3>
不执行步骤四，其余步骤和参数同实施例1。
<对比例4>
不执行步骤一～四，即将洗净的绿绒蒿花进行粉碎，直接进入步骤五，其余步骤和参数同实施例1。
试验：
统计实施例1～3、对比例1～4的绿绒蒿总黄酮提取率【提取率＝提取得到的绿绒蒿总黄酮质量/绿绒蒿花中含有的总黄酮质量)×100】和提取得到的总黄酮的纯度(经HPLC检测)，结果如表1所示；
表1绿绒蒿总黄酮提取率和提取纯度
由表1可知，本发明实施例1～3相较于对比例1～4，不仅具有较高的总黄酮提取率，得到的提取产物总黄酮还具有较高的纯度，实施例1显著提高了绿绒蒿总黄酮的提取率和提取纯度，上述提高归功于对绿绒蒿花进行液氮速冻，与氧化石墨烯进行混合，并进行升温、降温交替处理，最大幅度破坏细胞壁，促进黄酮化合物的溶出，进而提高黄酮提取率，将黄酮化合物与其他物质进行分离，更加有针对性的进行黄酮提取，较大程度的提高了提取产品总黄酮的纯度。
这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明的。对本发明的应用、修改和变化对本领域的技术人员来说是显而易见的。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。
Claims (9)
1.藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、将绿绒蒿花洗净浸泡至清水中，浸泡40～60min后取出得洗净的绿绒蒿花；
步骤二、向洗净的绿绒蒿花内加入液氮，使得液氮淹没绿绒蒿花，搅拌至液氮完全蒸发，得速冻后的绿绒蒿花；
步骤三、将速冻后的绿绒蒿花与氧化石墨烯混合置于粉碎机内粉碎，得绿绒蒿花粉；
步骤四、将绿绒蒿花粉加入乙醇水溶液中进行提取，收集醇提液；
步骤五、对醇提液依次进行萃取、浓缩去除溶剂，得粗提物；
步骤六、对粗提物依次进行膜过滤和柱层析吸附，得绿绒蒿总黄酮。
2.如权利要求1所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，其特征在于，绿绒蒿花粉在进行步骤四之前，还包括：将绿绒蒿花粉压制成薄片，对薄片进行交替执行升温、降温处理，随后将薄片再次置于粉碎机内粉碎，即得。
3.如权利要求2所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，其特征在于，对薄片进行交替执行升温、降温处理包括：将薄片升温至100～120℃，然后在-18～-10℃的环境中冷却，重复执行2～3次。
4.如权利要求1所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，其特征在于，氧化石墨烯的添加量为速冻后的绿绒蒿花的重量的0.003～0.005％。
5.如权利要求1所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，其特征在于，步骤四中将绿绒蒿花粉加入乙醇水溶液中进行提取，收集醇提液，其中所用乙醇水溶液的乙醇的体积浓度为55％，提取温度为75℃，提取时间为5h。
6.如权利要求1所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，其特征在于，步骤五中萃取包括依次用乙酸乙酯和正丁醇进行萃取，合并乙酸乙酯和正丁醇的萃取液，经减压浓缩去除溶剂后得粗提物。
7.如权利要求1所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，其特征在于，步骤六中的膜过滤包括：将粗提物与乙醇按重量比为1:10进行混合，然后经陶瓷超滤膜进行过滤，用乙醇洗涤陶瓷超滤膜3次，收集滤液和洗涤液，减压浓缩干燥后得总黄酮粗品。
8.如权利要求7所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，其特征在于，步骤六中柱层析吸附包括：将总黄酮粗品与甲醇按重量比为1:5进行混合加入至层析柱的顶部，用甲醇洗脱液进行洗脱，收集黄色色带的洗脱液，经减压浓缩干燥得绿绒蒿总黄酮。
9.如权利要求8所述的藏药绿绒蒿总黄酮的提取工艺，其特征在于，层析柱的吸附剂为葡聚糖凝胶LX-20。
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