CN114966054A - 一种纤维蛋白原检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种纤维蛋白原检测试剂盒，其试剂R1包括氨基乙酸盐缓冲液、葡萄糖、氯化钠和防腐剂，试剂R2包括氨基乙酸盐缓冲液、葡萄糖、羊抗人纤维蛋白原抗体和聚乙二醇；试剂R1和试剂R2中的氨基乙酸盐缓冲液的浓度为0.8‑1.2 mg/ml；氯化钠的浓度为0.1‑0.5M。采用氨基乙酸盐缓冲液，在缓冲液中加入氯化钠利用蛋白质的盐析作用，使样本中的抗原析出，提高了分析灵敏度；此外，在试剂R2中加入促聚剂聚乙二醇，提高抗原抗体亲和力，能够有效提高分析灵敏度，保证测定结果的准确性。
Description
技术领域
本发明涉及临床体外检测试剂技术领域，特别涉及一种纤维蛋白原检测试剂盒，该试剂盒具有检测灵敏度高的特点。
背景技术
这里的陈述仅提供与本发明相关的背景技术，而不必然地构成现有技术。
纤维蛋白原(Fibrinogen，又称为血纤维蛋白原)是由肝细胞合成和分泌的一种糖蛋白(α2β2γ2)，是参与凝血和止血过程中的重要蛋白纤维蛋白。高纤维蛋白原是各种血栓性疾病重要危险因素，在临床中被认为是疾病状态的标志物。
纤维蛋白原在检测时会出现受抗体效价及样本中各因素影响而分析灵敏度降低等问题，目前市面上的检测试剂盒大多价格昂贵，受抗体效价低的影响以及试剂体系配比的因素影响，易导致试剂分析灵敏度低，出现假阴性的情况。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种纤维蛋白原检测试剂盒。该试剂盒采用免疫透射比浊法，可以特异性地检测血浆纤维蛋白原的含量，具有分析灵敏度高等优点。
为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：
一种纤维蛋白原检测试剂盒，其试剂R1包括氨基乙酸盐缓冲液、葡萄糖、氯化钠和防腐剂，试剂R2包括氨基乙酸盐缓冲液、葡萄糖、羊抗人纤维蛋白原抗体和聚乙二醇，所述防腐剂为NaN3；
试剂R1和试剂R2中的氨基乙酸盐缓冲液的浓度为0.8-1.2mg/ml；
氯化钠的浓度为0.1-0.5M；
聚乙二醇在试剂R2中的质量百分数为1％-5％。
上述本发明的有益效果如下：
采用氨基乙酸盐缓冲液，氨基乙酸盐缓冲液属于生物缓冲液，pH范围较广，较其他类别的缓冲液而言，生物缓冲液对生化反应的过程干扰小，对比同生物缓冲液类别的Tris和PBS缓冲液，氨基乙酸盐缓冲液受温度影响较小，不易与其他金属离子发生反应而干扰反应过程，在缓冲液中加入氯化钠，能够利用蛋白质的盐析作用，使样本中的抗原析出，降低抗原在样本中的溶解度，使得抗体与抗原的结合过程更便利，从而提高了分析灵敏度；此外，在试剂R2中加入促聚剂聚乙二醇，提高抗原抗体亲和力，能够有效提高分析灵敏度，保证测定结果的准确性。试剂中采用的防腐剂为NaN3，NaN3的优点在于具有广谱的抗菌活性，不干扰抗原抗体的反应，不干扰仪器的ISE电极，对仪器无腐蚀，且适用pH范围广，具有优良的稳定性能。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1是本发明实施例1分析灵敏度验证实验检测结果与对比例1检测结果相关性；
图2是本发明实施例2准确度验证实验检测结果与对比例1检测结果相关性；
图3是本发明实施例3准确度验证实验检测结果与对比例1检测结果相关性。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本发明使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
一种纤维蛋白原检测试剂盒，其试剂R1包括氨基乙酸盐缓冲液、葡萄糖、氯化钠和防腐剂，试剂R2包括氨基乙酸盐缓冲液、葡萄糖、羊抗人纤维蛋白原抗体和聚乙二醇；
试剂R1和试剂R2中的氨基乙酸盐缓冲液的浓度为0.8-1.2mg/ml；
氯化钠的浓度为0.1-0.5M。
在一些实施例中，所述防腐剂为NaN3。
优选的，防腐剂的浓度为0.4-0.6g/L。
在一些实施例中，聚乙二醇在试剂R2中的质量百分数为1％-5％。
在一些实施例中，葡萄糖的浓度为40-60g/L。
在一些实施例中，羊抗人纤维蛋白原抗体在试剂R2中的质量百分数为2％-5％。
在一些实施例中，所述试剂盒还包括校准品，校准品、试剂R1和试剂R2的体积比为5:150-200:50-70。
优选的，校准品、试剂R1和试剂R2的体积比为1:36:12。
在一些实施例中，检测时，使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定。
优选的，检测主波长为340nm。
下面结合实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
纤维蛋白原检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2。
试剂R1组成为：氨基乙酸盐缓冲液1mg/ml，葡萄糖50g/L，氯化钠0.5M，防腐剂0.5g/L；
试剂R2组成为：氨基乙酸盐缓冲液1mg/ml，葡萄糖50g/L，羊抗人纤维蛋白原抗体3％，聚乙二醇2％；
以上Fb检测试剂，所述防腐剂为NaN3。
检测方法为：在使用时，其测定方法是采用日立7180全自动生化分析仪，利用终点法进行测定，检测主波长为340nm，具体操作如下：
加入生理盐水、样本或校准品5μl，之后再加入试剂1为180μl孵育5min，记录吸光度值A1，加入试剂2为60μl，5分钟后记录吸光度值A2，计算ΔA。
本实施例所使用的校准品为英国朗道公司生产的校准品。
实施例2
一种纤维蛋白原检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2。
试剂R1组成为：氨基乙酸盐缓冲液1mg/ml，葡萄糖50g/L，氯化钠0.3M，防腐剂0.5g/L；
试剂R2组成为：氨基乙酸盐缓冲液1mg/ml，葡萄糖50g/L，羊抗人纤维蛋白原抗体3％，聚乙二醇2％；
以上Fb检测试剂，所述防腐剂为NaN3。
具体检测方法同实施例1。
实施例3
一种纤维蛋白原检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2。
试剂R1组成为：氨基乙酸盐缓冲液1mg/ml，葡萄糖50g/L，氯化钠0.1M，防腐剂0.5g/L；
试剂R2组成为：氨基乙酸盐缓冲液1mg/ml，葡萄糖50g/L，羊抗人纤维蛋白原抗体3％，聚乙二醇2％；
以上Fb检测试剂，所述防腐剂为NaN3。
具体测定方法同实施例1。
对比例1
市场上获得认可的一种纤维蛋白原检测试剂盒。
其试剂R1组成为：
磷酸盐缓冲液(pH7.0)40mol/L；
试剂R2组成为：
磷酸盐缓冲液(pH7.0)40mmol/L，纤维蛋白原抗体0.1％。
具体检测方法同实施例1。
对比例2
与实施例1的区别在于：氨基乙酸盐缓冲液替换为Tris缓冲液。
对比例3
与实施例1的区别在于：氨基乙酸盐缓冲液替换为PBS缓冲液。
对比例4
与实施例1的区别在于：省略氯化钠。
对比例5
与实施例1的区别在于：省略聚乙二醇。
对比例6
与实施例1的区别在于：将防腐剂替换为PC-300。
对比例7
与实施例1的区别在于：将防腐剂替换为苯甲酸钠。
准确度验证实验：
将实施例1、2、3的试剂盒作为实验组，对比例1中市场上获得认可的准确度优异的纤维蛋白原试剂盒作为对照组进行对比实验，对30个样本进行检测，检测的结果如图1-图3。
通过图1-图2的检测数据可知，实施例1、2、3检测试剂盒与对比例1测试剂盒的检测结果线性相关系数r分别为0.9932、0.9972、0.9935，相关性比较好，表明本发明的试剂盒与市场上获得认可的具有优异准确度的纤维蛋白原检测试剂盒有高度一致性，证明本发明试剂盒添加的其他各种成分对其准确性不会造成影响，试剂盒依然保持较好的准确度。
分析灵敏度实验：
找到纤维蛋白原已知浓度在2.5-3.7g/L的样本。利用实施例与对比例1的纤维蛋白原试剂盒进行对照检测。记录在37℃，340nm波长、1cm光径下的吸光度差值，换算为3.1g/L的吸光度差值，结果如表1和表2所示。
表1分析灵敏度验证实验检测结果
表2分析灵敏度验证实验检测结果
上述检测结果显示，实施例1-3、对比例1-7检测结果分析灵敏度均大于0.04，且实施例2的检测结果具有更好的分析灵敏度。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种纤维蛋白原检测试剂盒，其特征在于：其试剂R1包括氨基乙酸盐缓冲液、葡萄糖、氯化钠和防腐剂，试剂R2包括氨基乙酸盐缓冲液、葡萄糖、羊抗人纤维蛋白原抗体和聚乙二醇；
试剂R1和试剂R2中的氨基乙酸盐缓冲液的浓度为0.8-1.2mg/ml；
氯化钠的浓度为0.1-0.5M。
2.根据权利要求1所述的纤维蛋白原检测试剂盒，其特征在于：所述防腐剂为NaN3。
3.根据权利要求2所述的纤维蛋白原检测试剂盒，其特征在于：防腐剂的浓度为0.4-0.6g/L。
4.根据权利要求1所述的纤维蛋白原检测试剂盒，其特征在于：聚乙二醇在试剂R2中的质量百分数为1％-5％。
5.根据权利要求1所述的纤维蛋白原检测试剂盒，其特征在于：葡萄糖的浓度为40-60g/L。
6.根据权利要求1所述的纤维蛋白原检测试剂盒，其特征在于：羊抗人纤维蛋白原抗体在试剂R2中的质量百分数为2％-5％。
7.根据权利要求1所述的纤维蛋白原检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒还包括校准品，校准品、试剂R1和试剂R2的体积比为5:150-200:50-70。
8.根据权利要求7所述的纤维蛋白原检测试剂盒，其特征在于：校准品、试剂R1和试剂R2的体积比为1:36:12。
9.根据权利要求1所述的纤维蛋白原检测试剂盒，其特征在于：检测时，使用全自动生化分析仪利用终点法进行测定。
10.根据权利要求9所述的纤维蛋白原检测试剂盒，其特征在于：检测主波长为340nm。
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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