CN114958839A - 抑制肌肉瘤细胞中FOXO1基因表达的siRNA序列及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种抑制FOXO1基因表达的siRNA及其前体和应用，具体地，本发明提供了一种siRNA前体序列以及由其产生的siRNA，本发明的siRNA及其前体可有效治疗FOXO1基因相关的疾病。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域。具体地说，本发明涉及抑制FOXO1基因表达的siRNA及其前体和应用。
背景技术
FOXO1(FKHR)是叉头(forkhead)蛋白O(FoxO)家族中的一种重要转录因子，其参与涉及多种疾病基因的表达调控，从而对细胞的生长、分化、衰老等多种生理代谢功能起着重要的调节作用。
基于短片段的双链RNA分子抑制目的基因正常表达的siRNA干扰技术，是一种在基因表达调控和功能的研究中的广泛使用的重要工具。目前，已有各种不同的siRNA双链核苷酸序列在多种蛋白基因的研究乃至疾病的治疗中得到验证和应用。然而，在这些研究和应用中，siRNA干扰也具有一定的局限性。例如不稳定性、表达沉默的短时性、细胞膜的通透性及存在脱靶效应等等。
因此，针对同一目的基因的一种siRNA不可能用于不同内容和条件的研究中，本领域需要开发一种能够调控FOXO1基因表达的siRNA。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能够调控FOXO1基因表达的siRNA。
本发明还有一目的在于提供一种能够调控FOXO1基因表达的siRNA的前体。
本发明还有一目的在于提供所述siRNA及其前体在调控FOXO1基因表达，进而治疗横纹肌肉瘤，特别是腺泡型横纹肌肉瘤中的用途。
本发明还有一目的在于提供利用所述siRNA及其前体调控FOXO1基因表达，进而治疗横纹肌肉瘤，特别是腺泡型横纹肌肉瘤的方法。
在第一方面，本发明提供一种siRNA前体序列，其5’至3’端具有式I所示的结构：
其中B1为包括siRNA正义链序列的第一核糖核酸序列；
B2为与B1基本互补或完全互补的序列，且B2与C不互补；
C为茎环结构序列；
其中，所述siRNA正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
在具体的实施方式中，所述前体序列中B1如SEQ ID NO:1所示；B2如SEQ ID NO:2所示。
在优选的实施方式中，所述前体序列用于预防或治疗FOXO1基因相关的疾病。
在优选的实施方式中，所述FOXO1基因相关的疾病是横纹肌肉瘤。
在优选的实施方式中，所述横纹肌肉瘤是胚胎型横纹肌肉瘤、腺泡型横纹肌肉瘤或多型性横纹肌肉瘤；优选腺泡型横纹肌肉瘤。
在第二方面，本发明提供一种多核苷酸，所述多核苷酸能被宿主转录形成第一方面所述的前体序列。
在优选的实施方式中，所述多核苷酸用于预防或治疗FOXO1基因相关的疾病。
在优选的实施方式中，所述FOXO1基因相关的疾病是横纹肌肉瘤。
在优选的实施方式中，所述横纹肌肉瘤是胚胎型横纹肌肉瘤、腺泡型横纹肌肉瘤或多型性横纹肌肉瘤；优选腺泡型横纹肌肉瘤。
在第三方面，本发明提供一种表达载体，所述表达载体包含第一方面所述的前体序列或第二方面所述的多核苷酸。
在优选的实施方式中，所述的表达载体包括病毒载体、非病毒载体。
在优选的实施方式中，所述的表达载体为质粒。
在优选的实施方式中，所述表达载体用于预防或治疗FOXO1基因相关的疾病。
在优选的实施方式中，所述FOXO1基因相关的疾病是横纹肌肉瘤。
在优选的实施方式中，所述横纹肌肉瘤是胚胎型横纹肌肉瘤、腺泡型横纹肌肉瘤或多型性横纹肌肉瘤；优选腺泡型横纹肌肉瘤。
在第四方面，本发明提供一种抑制FOXO1基因表达的siRNA，所述siRNA的正义链核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
在具体的实施方式中，所述siRNA的反义链核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
在优选的实施方式中，所述siRNA用于预防或治疗FOXO1基因相关的疾病。
在优选的实施方式中，所述FOXO1基因相关的疾病是横纹肌肉瘤。
在优选的实施方式中，所述横纹肌肉瘤是胚胎型横纹肌肉瘤、腺泡型横纹肌肉瘤或多型性横纹肌肉瘤；优选腺泡型横纹肌肉瘤。
在第五方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物含有第一方面所述的前体序列、第二方面所述的多核苷酸、第三方面所述的表达载体或第四方面所述的siRNA以及任选的药学上可接受的载体。
在优选的实施方式中，所述药物组合物用于抑制FOXO1基因表达，或预防或治疗横纹肌肉瘤。
在优选的实施方式中，所述药物组合物还包括其它预防或治疗FOXO1基因相关的疾病的药物。
在优选的实施方式中，所述FOXO1基因相关的疾病是横纹肌肉瘤。
在优选的实施方式中，所述横纹肌肉瘤是胚胎型横纹肌肉瘤、腺泡型横纹肌肉瘤或多型性横纹肌肉瘤；优选腺泡型横纹肌肉瘤。
在优选的实施方式中，所述其它治疗横纹肌肉瘤的药物选自：细胞毒素性化疗药物，例如长春新碱和更生霉素、环磷酰胺、异环磷酰胺。
在第六方面，本发明提供第一方面所述的前体序列、第二方面所述的多核苷酸、第三方面所述的表达载体或第四方面所述的siRNA在制备抑制FOXO1基因表达，或预防或治疗FOXO1基因相关的疾病的药物中的用途。
在具体的实施方式中，所述FOXO1基因相关的疾病是横纹肌肉瘤。
在具体的实施方式中，所述所述横纹肌肉瘤是胚胎型横纹肌肉瘤、腺泡型横纹肌肉瘤或多型性横纹肌肉瘤；优选腺泡型横纹肌肉瘤。
在第七方面，本发明提供一种抑制FOXO1基因表达，或预防或治疗FOXO1基因相关的疾病的方法，所述方法包括将将治疗有效量的第一方面所述的前体序列、第二方面所述的多核苷酸、第三方面所述的表达载体、第四方面所述的siRNA或第五方面所述的药物组合物给予有此需要的对象，从而抑制FOXO1基因表达，或预防或治疗FOXO1基因相关的疾病。
在优选的实施方式中，所述FOXO1基因相关的疾病是横纹肌肉瘤。
在优选的实施方式中，所述所述横纹肌肉瘤是胚胎型横纹肌肉瘤、腺泡型横纹肌肉瘤或多型性横纹肌肉瘤；优选腺泡型横纹肌肉瘤。
在优选的实施方式中，所述对象是哺乳动物，更优选人。
在优选的实施方式中，所述方法包括对有此需要的对象同时给予化疗、放疗或磁感应治疗；例如同时给予细胞毒素性化疗药物，如长春新碱和更生霉素、环磷酰胺、异环磷酰胺。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1显示了腺泡型横纹肌肉瘤细胞RH4在转染siFX2后，人FOXO1基因的定量PCR(QRT-PCR)分析结果；其中内参为：18S rRNA。
图2显示了腺泡型横纹肌肉瘤细胞RH4在转染siFX2后，FOXO1及PAX3-FOXO1基因的蛋白表达分析(左侧)；其中α-Tubulin为蛋白内参。右图为蛋白表达的相对定量分析。
图3显示了腺泡型横纹肌肉瘤细胞RH4在转染FOXO1基因的已知干扰序列siFX4后，FOXO1及PAX3-FOXO1基因的蛋白表达分析(左侧)；其中α-Tubulin为蛋白内参。右图为蛋白表达的相对定量分析。
具体实施方式
发明人经过广泛而深入的研究，根据人FOXO1基因mRNA序列，设计出了全新的siRNA双链短片段序列(siFX2)。经过测试分析表明，该序列能够特异性降低FOXO1 mRNA和蛋白的表达水平(图1，图2)。此外，和其它已知的siRNA序列相比，本发明的siRNA具有更强的抑制、敲降效应。特别是，在腺泡型横纹肌肉瘤细胞的研究中，本发明的siRNA具有极强的特异性，没有检测到与其它已知的siRNA序列类似的脱靶效应(图3)。因此，本发明的siRNA对腺泡型横纹肌肉瘤以及含有FOXO1融合基因的细胞或疾病的基础研究具有重要的价值。在此基础上完成了本发明。
横纹肌肉瘤
本文所述的横纹肌肉瘤具有本领域技术人员常规理解的含义。具体地说，横纹肌肉瘤是起源于横纹肌细胞或向横纹肌细胞分化的间叶细胞的一种恶性肿瘤，是儿童软组织肉瘤中最常见的一种。横纹肌肉瘤发病率次于恶性纤维组织细胞瘤和脂肪肉瘤，居软组织肉瘤的第三位。横纹肌肉瘤分为胚胎型横纹肌肉瘤、腺泡型横纹肌肉瘤和多型性横纹肌肉瘤。横纹肌肉瘤的发病原因尚不清楚，其是由各种不同分化程度的横纹肌母细胞组成的软组织恶性肿瘤，可能与遗传因素、染色体异常、基因融合等因素有关。
腺泡型横纹肌肉瘤(Alveolar rhabdomyosarcoma,aRMS)是横纹肌肉瘤的一种主要病理类型，是恶性软组织肿瘤。腺泡型横纹肌肉瘤多见于青少年，主要症状是痛性或无痛性肿块，肿瘤压迫周围神经和侵犯周围组织器官时可引起疼痛、压迫症状和感觉障碍。早期即可出现淋巴结转移和血行播散，血行播散至肺。因此，发生转移或复发的该型肿瘤的五年生存率不到10％。
目前，针对这种疾病的发生机制仍不完全清楚，在该型疾病的诊断、治疗和预后等方面也无确切有效的方法和手段。因此，本领域急需有效的诊断、预防和治疗横纹肌肉瘤，特别是腺泡型横纹肌肉瘤的技术手段。
siRNA及其前体
如本文所用，所述的“siRNA”是指一类RNA分子，从可形成siRNA前体的转录物加工而来。成熟的siRNA通常具有18-26个核苷酸(nt)(更特别的约19-22nt)，也不排除具有其它数目核苷酸的siRNA分子。siRNA通常可被Northern印迹检测到。
人来源的siRNA可被从人细胞中分离。如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。
siRNA可从前体siRNA加工而来，所述的前体siRNA可折叠成一种稳定的茎环(发夹)结构，所述的茎环结构长度一般在50-100bp之间。所述的前体siRNA可折叠成稳定的茎环结构，茎环结构的茎部两侧包含基本上互补的两条序列。
在本发明中，所述的前体siRNA为人工合成的前体siRNA，且所述的前体siRNA具有式I所示的结构：
作为代表性的例子，B1为siRNA正义链序列；
B2为与B1互补(包括基本互补和完全互补)的序列；
C为茎环结构序列。
其中，所示的前体siRNA能在宿主中加工形成siRNA。
在本发明中，所述的siRNA前体可被剪切生成调节FOXO1基因表达的siRNA。
在式I中，B2和B1为基本互补。如本文所用，“基本上互补”是指核苷酸的序列是足够互补的，可以以一种可预见的方式发生相互作用，如形成二级结构(如茎环结构)。通常，两条“基本上互补”的核苷酸序列互相之间至少有70％的核苷酸是互补的；优选的，至少有80％的核苷酸是互补的；更优选的，至少有90％的核苷酸是互补的。一般地，两条足够互补的分子之间可以具有最多8个不匹配的核苷酸，优选地，具有1、2、3、4、5个不匹配的核苷酸。
如本申请所用，“茎环”结构也被称作“发夹”结构，是指一种核苷酸分子，其可形成一种包括双链区域(茎部)的二级结构，所述的双链区域由该核苷酸分子的两个区域(位于同一分子上)形成，两个区域分列双链部分的两侧；其还包括至少一个“环”结构，包括非互补的核苷酸分子，即单链区域。即使该核苷酸分子的两个区域不是完全互补的，核苷酸的双链部分也可保持双链状态。例如，插入、缺失、取代等可导致一个小区域的不互补或该小区域自身形成茎环结构或其它形式的二级结构，然而，该两个区域仍可基本上互补，并在可预见的方式中发生相互作用，形成茎环结构的双链区域。茎环结构是本领域技术人员所熟知的，通常在获得了一条具有一级结构的核苷酸序列的核酸后，本领域技术人员能够确定该核酸是否能形成茎环结构。
本发明中，“茎环结构”可存在于式I所示前体siRNA的末端，例如由于B1和B2形成基本互补后，C会形成一固定的末端茎环结构；所述的“茎环结构”还可存在于式I所式前体siRNA内部，例如由于B1和B2之间并非完全互补，造成未互补结合的B1或B2的碱基会形成一内部的茎环(internal loop)。
根据本发明所提供的siRNA序列，可设计出在被导入后可被加工成可影响相应的mRNA表达的miRNA的多核苷酸构建物，也即所述多核苷酸构建物能够在体内上调相应的EGFR siRNA的量，从而降低EGFR的表达量。因此，本发明提供了一种分离的多核苷酸(构建物)，所述的多核苷酸(构建物)可被人细胞转录成前体siRNA，所述的前体siRNA可被人细胞剪切且表达成所述的siRNA。
在一优选例中，所述前体序列中B1如SEQ ID NO:1(5’-UCAUGAGCAACCU GAGCUUdTdT-3’)所示；B2如SEQ ID NO:2(5’-AAGCUCAGGUUGCUCAUGA dTdT-3’)所示。
多核苷酸构建物
根据本发明所提供的siRNA序列，可设计出在被导入后可被加工成可影响相应的mRNA表达的siRNA的多核苷酸构建物，也即所述多核苷酸构建物能够在体内上调相应的siRNA的量。因此，本发明提供了一种分离的多核苷酸构建物，所述的多核苷酸构建物可被人细胞转录成前体RNA，所述的前体RNA可被人细胞剪切且表达成所述的siRNA。
在优选的实施方式中，所述的多核苷酸构建物含有一个或多个式II所示的结构单元：
Seq正向-X-Seq反向(式II)
式II中，
Seq正向为可在细胞中表达成所述的抑制FOXO1的siRNA的核苷酸序列，Seq反向为与Seq正向基本上互补的核苷酸序列；或者，Seq反向为可在细胞中表达成所述的siRNA的核苷酸序列，Seq正向为与Seq正向基本上互补的核苷酸序列；X为位于Seq正向和Seq反向之间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seq正向和Seq反向不互补；
其中，各结构单元可表达相同或不同的siRNA；
式II所示的结构在转入细胞后，形成式III所示的二级结构：
式III中，Seq正向、Seq反向和X的定义如上述；
||表示在Seq正向和Seq反向之间形成的碱基互补配对关系。
通常，所述的多核苷酸构建物位于表达载体上。因此，本发明还包括一种载体，它含有所述的siRNA，或所述的多核苷酸构建物。所述的表达载体通常还含有启动子、复制起点和/或标记基因等。本领域的技术人员熟知的方法能用于构建本发明所需的表达载体。这些方法包括体外重组DNA技术、DNA合成技术、体内重组技术等。所述的表达载体优选地包含一个或多个选择性标记基因，以提供用于选择转化的宿主细胞的表型性状，如卡拉霉素、庆大霉素、潮霉素、氨苄青霉素抗性。
药物组合物
在上述siRNA、siRNA前体、多核苷酸构建物、表达载体的基础上，本发明还提供了一种药物组合物。所述药物组合物包含上述siRNA、siRNA前体、多核苷酸构建物、表达载体以及任选的药学上可接受的载体。
如本文所用，术语“有效量”或“有效剂量”或“治疗有效量”具有相同的含义，均是指可对人和/或动物产生功能或活性的且可被人和/或动物所接受的量。
如本文所用，术语“药学上可接受的”的成分是适用于人和/或哺乳动物而无过度不良副反应(如毒性、刺激和变态反应)的，即具有合理的效益/风险比的物质。术语“药学上可接受的载体”指用于治疗剂给药的载体，包括各种赋形剂和稀释剂。
本发明的药物组合物含有安全有效量的本发明的活性成分以及药学上可接受的载体。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。通常药物制剂应与给药方式相匹配，本发明的药物组合物的剂型为注射剂、口服制剂(片剂、胶囊、口服液)、透皮剂、缓释剂。例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。所述的药物组合物宜在无菌条件下制造。
本发明所述的活性成分的有效量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度等而变化。优选的有效量的选择可以由本领域普通技术人员根据各种因素来确定(例如通过临床试验)。所述的因素包括但不限于：所述的活性成分的药代动力学参数例如生物利用率、代谢、半衰期等；患者所要治疗的疾病的严重程度、患者的体重、患者的免疫状况、给药的途径等。根据具体的治疗状况，还可以每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。
治疗方法
在本发明人在早先的依旧中发现，FOXO1基因与横纹肌肉瘤，特别是腺泡型横纹肌肉瘤之间具备相关性(CN 109609644 A，该文献的全部内容通过引用纳入本文)。因此，本领域技术人员可以合理知晓能够抑制FOXO1基因表达的本发明siRNA以及siRNA前体、多核苷酸构建物、表达载体和药物组合物还能够预防或治疗FOXO1基因相关的疾病，例如横纹肌肉瘤。
在具体的实施方式中，所述FOXO1基因相关的疾病是横纹肌肉瘤。在优选的实施方式中，所述所述横纹肌肉瘤是胚胎型横纹肌肉瘤、腺泡型横纹肌肉瘤或多型性横纹肌肉瘤；更优选腺泡型横纹肌肉瘤。
所述方法包括将治疗有效量的本发明的siRNA以及siRNA前体、多核苷酸构建物、表达载体或药物组合物给予有此需要的对象，从而治疗所述FOXO1基因相关的疾病。
本发明的优点：
1.本发明开发了针对FOXO1基因的全新特异性siRNA序列；
2.利用本发明的siRNA序列抑制FOXO1基因表达的干扰效率高、特异性强；
3.利用本发明的siRNA序列抑制FOXO1基因表达的不存在脱靶效应；
4.本发明为FOXO1基因相关的疾病，特别是腺泡型横纹肌肉瘤的药物开发奠定了新的物质基础。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor LaboratoryPress,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
实施例
实施例1.本发明的siRNA的获得
针对人FOXO1基因，本发明设计并获得了特异性siRNA(siFX2)。所述该双链siRNA的核苷酸序列如下所示：
siFX2-s：5’-UCAUGAGCAACCUGAGCUUdTdT-3’(SEQ ID NO:1)
siFX2-as：5’-AAGCUCAGGUUGCUCAUGAdTdT-3’(SEQ ID NO:2)
实施例2.siFX2在转录水平对FOXO1基因的抑制效应
在本实施例中，发明人测试了siFX2对FOXO1基因在腺泡型横纹肌肉瘤细胞株中的转录水平的抑制效应：
具体地说，用实施例1获得的siFX2及相应的对照siRNA(PMID 27924058)转染现腺泡型横纹肌肉瘤细胞，经60-72小时无血清条件下培养后，提取细胞总RNA，进行反转录反应。利用FOXO1基因的特异性引物，进行定量PCR(QRT-PCR)分析，检测FOXO1在转录水平上的变化。
其中，对照siRNA的序列如下所示：
siCON-s：5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUdTdT-3’(SEQ ID NO:3)
siCON-as：5’-ACGUGACACGUUCGGAGAAdTdT-3’(SEQ ID NO:4)。
结果如图1所示，可以看出在腺泡型横纹肌肉瘤细胞株中，siFX2在转录水平明显抑制FOXO1基因的表达。
实施例3.siFX2在蛋白水平对FOXO1基因的抑制效应
在本实施例中，发明人测试了siFX2对FOXO1基因在蛋白水平上的抑制效应。
具体地说，用实施例1所得的siFX2及相应对照siRNA转染现腺泡型横纹肌肉瘤细胞，经60-72小时无血清条件下培养后，提取细胞总蛋白和测定蛋白浓度，取同样含量的蛋白样本，SDS-PAGE电泳，选取合适的FOXO1抗体和对照抗体(α-Tubulin)，进行western blot分析。对western blot结果中的蛋白条带拍照，利用image J软件分析相对表达情况。
结果如图2所示，可以看出在腺泡型横纹肌肉瘤细胞株中，siFX2在蛋白水平明显抑制FOXO1基因的表达。
实施例4.已有的FOXO1 siRNA序列(siFX4)对人FOXO1表达蛋白的抑制
在本实施例中，发明人测试在已有的特异性FOXO1 siRNA序列(siFX4，oncotarget2017vol.8(1):1703-.PMID 27924058)对人FOXO1表达蛋白的抑制作用。
siFX4的序列如下所示：
1.siFX-4s：5’-GGAGGUAUGAGUCAGUAUAdTdT-3’(SEQ ID NO:5)；
2.siFX-4as：5’-UAUACUGACUCAUACCUCCdTdT-3’(SEQ ID NO:6)。
结果如图3所示，可以看出已有的特异性FOXO1 siRNA序列对融合基因PAX3-FOXO1的表达表现出抑制作用，从而存在一定的脱靶效应。
综合以上实施例可以表明，相比于已有的FOXO1 siRNA，本发明的人FOXO1基因特异性siRNA序列具有干扰效率高、特异性强等优点。本发明的siRNA序列只干扰或抑制FOXO1的转录和蛋白表达，而不抑制融合基因PAX3-FOXO1的表达，从而不存在脱靶效应。
同时，本发明人发现，转染siFX2 siRNA后，细胞中PAX3-FOXO1表达有所增加，但这并非脱靶效应，而是FOXO1与PAX3-FOXO1之间本身存在着的一种互作关系的反映。通过搜索siRNA数据库及其它可查的文献信息，目前没有发现与siRNA(siFX2)相同的短片段核苷酸干扰序列。因此，siFX2为一个新的人FOXO1基因的特异性siRNA干扰序列。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
<110> 胡, 千德
<120> 抑制肌肉瘤细胞中FOXO1基因表达的siRNA序列及应用
<130> P2021-0364
<160> 6
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 1
ucaugagcaa ccugagcuut t 21
<210> 2
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 2
aagcucaggu ugcucaugat t 21
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 3
uucuccgaac gugucacgut t 21
<210> 4
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 4
acgugacacg uucggagaat t 21
<210> 5
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 5
ggagguauga gucaguauat t 21
<210> 6
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成的多核苷酸
<400> 6
uauacugacu cauaccucct t 21
Claims (10)
1.一种siRNA前体序列，其5’至3’端具有式I所示的结构：
其中B1为包括siRNA正义链序列的第一核糖核酸序列；
B2为与B1基本互补或完全互补的序列，且B2与C不互补；
C为茎环结构序列；
其中，所述siRNA正义链的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
2.如权利要求1所述的siRNA前体序列，其特征在于，所述前体序列中B1如SEQ ID NO:1所示；B2如SEQ ID NO:2所示。
3.一种多核苷酸，所述多核苷酸能被宿主转录形成权利要求1或2所述的前体序列。
4.一种表达载体，所述表达载体包含权利要求1或2所述的前体序列或权利要求3所述的多核苷酸。
5.一种抑制FOXO1基因表达的siRNA，其特征在于，所述siRNA的正义链核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。
6.如权利要求5所述的siRNA，其特征在于，所述siRNA的反义链核苷酸序列如SEQ IDNO:2所示。
7.一种药物组合物，所述药物组合物含有权利要求1或2所述的前体序列、权利要求3所述的多核苷酸、权利要求4所述的表达载体或权利要求5或6所述的siRNA以及任选的药学上可接受的载体。
8.权利要求1或2所述的前体序列、权利要求3所述的多核苷酸、权利要求4所述的表达载体或权利要求5或6所述的siRNA在制备抑制FOXO1基因表达，或预防或治疗FOXO1基因相关的疾病的药物中的用途。
9.如权利要求8所述的用途，其特征在于，所述FOXO1基因相关的疾病是横纹肌肉瘤。
10.如权利要求9所述的用途，其特征在于，所述所述横纹肌肉瘤是胚胎型横纹肌肉瘤、腺泡型横纹肌肉瘤或多型性横纹肌肉瘤；优选腺泡型横纹肌肉瘤。
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