CN1149338A - 细胞悬浮液的制备和稳定化 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种制备稳定化细胞悬浮液的方法，它包括用1)重金属化合物水溶液；和2)聚甲醛处理细胞。稳定化的细胞悬浮液可以是用于质量控制程序的稳定化全血制剂。

Description

细胞悬浮液的制备和稳定化
发明背景
本发明涉及细胞悬浮液的制备和稳定化，具体涉及一种新的细胞悬浮液的制备和稳定化方法，同时涉及新的稳定化细胞悬浮液制剂在UV显微镜检术和在流式细胞计量术的白细胞免疫表型技术等分析技术的质量控制中的应用以及在固定化抗体/抗原检测系统、血液学分析仪和血液检测技术如含锌原卟啉(zinc protoporphyrin，ZPP)、红细胞叶酸盐和血糖测定等中的应用。
UV显微镜检术和流式细胞计量术是用于诊断血液恶性肿瘤的技术。它们还被用于监测感染了人类免疫缺陷病毒(HIV)的病人的病情发展，以确定是无症状还是患有AIDS相关综合症(ARC)或是晚期AIDS。这两项技术的质量控制(QC)对于作出正确诊断和监测有效的治疗方法是极端重要的。现有的QC方法使用新鲜抽取的血液或包被有荧光染料的微球体。
每天使用新鲜血液不能提供技术或设备的日常变动信息。而且，包被有荧光染料的微球体虽然可提供对流式细胞仪操作的日常监测，但不能用于UV显微镜检术。另外，它们都不能用于为白细胞标记技术提供质量控制。
利用诸如聚甲醛(paraformaldehyde)之类化合物进行的正常白细胞的固定虽然可提供5-7天的稳定性，但增加了细胞的自身荧光。这使制剂不适合用作长期的质量控制物质。而且，利用全血裂解技术进行的红细胞裂解需要一种可对该过程进行质量控制的制剂。现有的白细胞固定方法会抑制此裂解过程，导致干扰测试的细胞碎片显著增加。
其他需要使用全血样品或血制品来校准的QC设备包括血液学分析仪，其中由于目前无法获得合适的稳定化的人血液源而使用来自驴和火鸡的固定血。含锌原卟啉(ZPP)和红细胞叶酸盐检测技术也需要用新鲜的红细胞悬浮液来校准，这仍然是因为没有合适的稳定化的血液源。最终，因为缺乏用于校准的稳定化的人全血源，所以限制了糖尿病患者在家中进行血糖监测的可能性。
在国际申请No.PCT/US91/03236(该文献公开内容在此引用作为参考)中，描述了一种用于白细胞差异测定的血液稀释液和裂解剂，其中以重氮烷基脲(diazolidinylurea)为稳定剂。这类白细胞制剂还不能作为流式细胞计量术的制剂，这可能是因为对于需要评估来自大量实验室结果的日常质量控制方法而言，它们不够稳定而且缺乏特异性抗原活性。
国际申请No.PCT/US92/03758公开了使用重氮烷基脲、咪唑烷基脲、二甲基醇-5，5-二甲基乙内酰脲、二羟甲基脲、2-溴-2-硝基丙烷-1，3-二醇和季金刚烷(quaternary adamantane)作为组织稳定剂，这些试剂不含醛。这些制剂中可含有媒染剂，诸如锌、锶、钙、钡和铬盐。但是，并未提及这些盐都具有稳定特性。
GB1563839提供了一种制备稳定化的红细胞制剂的方法。在该方法中，处于等渗水溶液中的红细胞悬浮液同时或以任何次序依次与脂族醛和水溶性2价或3价铬盐反应。在实施例中，用甲醛和戊二醛处理红细胞，然后再用三氯化铬水溶液处理。
已经发现，含有用这种方法处理过的红细胞的悬浮液不再适合用于全血裂解技术，因此GB1563839的方法不能用于制备稳定化的全血样品，例如用于流式细胞计量术质量控制的全血样品。
GB2001757描述了一种制备稳定的血小板悬浮液的方法，它包括：向富含血小板的血浆中加入铬离子，然后向含铬的富含血小板的血浆混合物中加入至少一种有机醛。在实施例中，用重铬酸钾和戊二醛溶液处理富含血小板的血浆。如果将该方法用于白细胞，会大大增加自身荧光并使悬浮液不适合用于流式细胞计量术。
上述专利和专利申请的全部公开内容在此引用作为参考。
由上可知，需要有一种更好的稳定细胞悬浮液、尤其全血和血制品的方法，从而得到仍能裂解的细胞制剂以用于各种质量控制、监测和校准用途。
在英国专利申请No.9313962.4和9315871.5中公开，某些重金属化合物可稳定从裂解全血制得的白细胞制剂，而且可将这种稳定化制剂加至缺乏白细胞的血液中，从而提供高抗原活性的稳定化全血制剂。这两份申请的全部公开内容在此引用作为参考。
发明目的
本发明目的之一是提供改良的、仍能裂解的稳定化细胞悬浮液制剂和产生这种稳定化细胞悬浮液的改进方法。
本发明目的之二是提供一种仍能裂解的稳定化全血制剂和制造该制剂的方法。
本发明的目的之三是提供可广泛用于质量控制、分析和监测技术的稳定的质量控制材料。发明概述
现在发现，许多含有能裂解细胞的悬浮液，可通过向悬浮液中依次加入有效量的重金属化合物和聚甲醛而稳定，而且这种稳定化细胞悬浮液维持活性的时间比迄今为止所知的要长得多。
一方面，本发明提供一种处理能裂解的细胞悬浮液，从而产生仍能裂解的稳定化细胞悬浮液的方法，该方法包括：
在pH为6.5-7.5的水性介质中，依次用下列物质处理细胞悬浮液：
1)老化的重金属化合物水溶液，该溶液的pH为6.5-7.5，而且该溶液已经在pH6.5-7.5条件下维持了足够长的一段时间以形成沉淀，和
2)聚甲醛水溶液，该溶液的pH为6.5-7.5。
本发明对全血和血制品的稳定化尤其具有实用性，并将就此作更具体的描述。但是，必须理解，本发明并不限于这些物质的稳定化，而是可广泛适用于各种能裂解的细胞悬浮液。
所以另一方面，本发明还提供了一种能裂解的未分离的稳定化全血制剂，其中的稳定剂含有有效量的重金属化合物(尤其是重金属盐)和聚甲醛，同时提供了一种通过加入有效量的该化合物和聚甲醛来稳定能裂解的全血制剂的方法。本发明的详细说明
在英国专利申请No.9313962.4和No.9315871.5中，从裂解全血中分离出的白细胞制剂先通过加入稳定剂而稳定化，然后再将其加至缺乏白细胞的全血(或红血细胞)中，形成稳定化全血制剂。本发明提供了另一种制备稳定化全血的方法，在该方法中省去了裂解和分离步骤。
现在本发明将具体就用于实验室质量控制过程的稳定化全血制剂的制备过程进行描述，但是必须理解，本发明并不仅限于此，例如，稳定化的全血制剂可能还具有其他用途，而且该稳定化过程可以用于从血液以外的其他来源例如微生物细胞、植物细胞和来自活体组织的类似物质中产生稳定化的细胞悬液。
在本说明书中，能够裂解的细胞悬浮液被定义为这样的细胞悬浮液，例如人全血，其中特定的细胞群能用红细胞裂解剂选择性地裂解。裂解包括细胞膜的破裂和细胞内含物的释放。适用于选择性地裂解人全血的红细胞组份的裂解剂和条件包括，例如用氯化铵的铵盐水溶液、或季铵盐和脲、或取代脲、或脲衍生物的水溶液处理，正如英国专利申请No.9313962.4和No.9315871.5中所述。
本说明中的全血制剂包括基本含有新鲜血液全部组分的制剂和基本含有除血浆以外的新鲜血液全部组分的制剂。
实现全血稳定化的方法使用了一系列包含加入有机和无机化合物的步骤。开始时抽取一定单位量血液的方法在文献中有充分记载而且可以是任何一种用于静脉切开放血术工艺的方法。最好使用抗凝血液，多种合适的抗凝剂都可以购得。但是，最好使用EDTA钾盐。
稳定全血样品的过程通常在静脉切开放血术后24小时内进行，但最好在2小时内进行。
先将含有抗凝剂的新鲜血液离心，然后将血浆取出并保留。
洗涤剩余细胞，然后用重金属化合物尤其重金属盐的老化水溶液处理。合适的重金属是那些具有络合特性且原子量大于20的重金属，例如铝和过渡金属如铬和镁。合适的金属化合物包括无机酸盐尤其是金属氯化物。
使用铬化合物例如氯化铬(CrCl3)之类的铬盐，以及使用铝化合物如氯化铝(AlCl3)时，获得了特别好的结果。
重金属化合物最好以适当浓度溶解于水溶液中。水溶液的pH值被缓冲在6.5-7.5之间，较佳为6.7-7.4，最佳为7.2附近，并且老化足够长一段时间以形成所有沉淀。合适的缓冲水溶液包括，例如磷酸盐缓冲液。
然而，重金属化合物的溶液最好以浓缩液形式贮存，例如以1％w/v浓度储存，并在使用前用合适缓冲液稀释至所需的浓度。当用较佳的重金属化合物时，发现浓缩的溶液是稳定的，但在稀释时，随pH升高，会形成沉淀。因此，应有足够的时间使溶液老化并在溶液使用前使沉淀产生。
因此，在使用前放置重金属化合物的稀释水溶液至少一周，较佳地是放置一周至一月。静置改善溶液性能的原因尚不明了，但可能是因为在溶液中形成了水合的金属羟基离子物质。在某些铬化合物的缓冲溶液中已经观察到，例如在24小时后，新鲜制备的溶液在形成可能是铬羟化物聚合体沉淀的同时由绿色变为紫色，这表明带电络合离子存在。使用前最好将该沉淀从溶液中滤去。沉淀的形成当然会降低溶液中重金属离子的浓度，如果这种现象发生，必须对溶液进行分析以确定重金属化合物的浓度是否还在优选范围内。
虽然重金属化合物的老化溶液(陈溶液)可在相当长的时间后仍保持其作用，但仍以在12个月后丢弃为宜，最好是在6个月后。
重金属化合物的水溶液最好以等渗溶液的形式加入全血制剂中，其中重金属化合物的最适终浓度以低于1％w/v为宜，以0.005％-0.75％w/v更好，以0.01％-0.5％w/v还要好，以0.05％-0.25％w/v最好，例如0.1％w/v。加入前，水溶液的pH以6.5-7.0为宜，更佳为6.7-7.4。全血制剂优选地暴露于重金属化合物的孵育时间为5分钟至18小时，例如约60分钟。
孵育温度以0℃-8℃为宜，更佳为2-6℃，例如约4℃。
在初孵育之后，用聚甲醛水溶液处理全血，其优选浓度可以是1％w/v以内，更佳为0.1％-0.5％w/v，例如0.35％w/v。
制备聚甲醛溶液时，优选将温度保持在60℃以下，更佳为50℃以下，以免聚甲醛转变为甲醛并形成甲酸。已发现聚甲醛溶液的老化时间是至关重要的，优选大于一周并且小于一个月，更佳小于二周。
在本发明的优选方面，已发现将聚甲醛(最好以水溶液形式)和重金属化合物的老化水溶液混合时，可获得非常好的结果。
重金属化合物的老化水溶液可以是前面提及的任何一种，而且在混合溶液中重金属的含量可以是0.01％-0.5％w/v。较佳地，溶液中重金属化合物与聚甲醛的比值以在5∶1-1∶50范围内为宜，例如约1∶3.5。
聚甲醛水溶液pH优选为6.5-7.0，更佳地为6.7-7.4，并且可含有适当的等渗缓冲液。优选溶液可以是例如0.85％的磷酸盐缓冲液。
优选的混合聚甲醛/重金属化合物溶液的制备可以通过：将0.7％w/v聚甲醛溶液和等体积的0.2％w/v重金属化合物溶液进行混合。
暴露于聚甲醛或混合溶液最好在0-8℃温度，更佳为2-6℃例如约4℃下进行6至24小时。
在依次的1)和2)处理阶段之间的间隔以至少30分钟为宜，更好的至少1小时，最好至少12小时，例如24小时。
在用等渗磷酸盐缓冲液洗涤后，可将先前移去的血浆重新加回至稳定化的全血制剂中。该血浆可以是(但不必一定是)来自最初样品的。最好再向最终制剂中加入细菌生长抑制剂如庆大霉素。使用前将该溶液在0℃-8℃保存1-5天。
所有上述步骤都宜在无菌条件下进行，而且最好整个过程都在采集血样的静脉切开放血包(pack)中进行。
在根据本发明进行稳定化全血制剂的商业生产中，可以同时也优选地混合若干单位的不同血源的血液，然后稳定形成的混合血液。
在本发明的另一方面，可以在稳定全血制剂之前或之后向全血制剂中再加入其他细胞系。例如，可向正常全血中加入额外的处于细胞系KG1形式或人脐带血(富含CD34+细胞)形式的CD34+细胞，以提供测量CD34+细胞时的质量控制。
该稳定化方法既可用于正常细胞也可用于白血病细胞，以提供一种已知的正常对照和异常(白血病的)对照。已经发现对于正常细胞，用氯化铬作为金属化合物时一般获得最佳结果。然而对于白血病细胞，用氯化铝常得到最佳结果。
本发明提供了一种稳定人全血制剂的方法，它不必分开地裂解红细胞(红血球)和稳定白细胞。
本发明的稳定化的全血制剂可提供一种极稳定的质量控制和参照物质，可用于通过UV显微镜检术和流式血细胞计量术进行的白细胞免疫表型(分析)。该制剂在没有碎片的过度污染的全血裂解过程的质量控制方面很有价值。稳定化的样品中可含有全部正常的外周血白细胞(粒细胞、单核细胞、淋巴细胞)或它们的亚类。在最适条件下，该过程可以保留白细胞的抗原分布格局以确保过程的表型(分析)和质量控制。可对常用抗原决定簇进行测定，这些值可在300多天内保持稳定。研究者还可以成功地得出可能具有特殊意义的其他抗原数据。而且，该制剂还可用于由流式细胞仪获得的差异质量控制。这是一个检测HIV感染个体的抗病毒治疗的参数。
正在开发对血液样品进行表型(分析)的新方法，该方法在染色后无需用裂解剂处理样品。这些技术被称为非洗、非裂解技术。本发明的全血制剂可用于为这些技术提供质量控制，也可用在分析非洗、非裂解过程的流式细胞仪方面。
通常地，本发明的稳定化的全血制剂可用于UV显微镜检术和流式细胞计量术的免疫表型技术的质量控制中，可采用全血裂解和全血非裂解技术。
对本发明的稳定化全血制剂优选例子的研究表明，它们还适合用于诸如碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶(APAAP)的免疫细胞化学技术分析中，并可用于例如测定外周血涂片上的白细胞抗原分布格局。它们可被用作日常参照物质或外部的(实验室间)质量控制。可预先制备多个涂片，然后保存于-20℃直至使用。这些涂片可进行日常染色或在染色其他涂片时用作参照。
本发明的稳定化的全血制剂还可用作酶联免疫吸附测定(ELISA)和免疫放射测定技术中的标准参照物。
本发明的稳定化全血制剂在实验室中的其他应用还包括作为血液分析仪的质量控制和校准物，作为利用含锌原卟啉(ZPP)进行的缺铁性检测的质量控制物质，和作为红细胞叶酸盐技术中的质量控制物质。最后，更广泛地说，本发明的稳定化的全血制剂可用于血糖水平测定的质量控制，由此可使糖尿病人可在自己的家中进行该项测定。
以下通过实施例阐述本发明。实施例1
如下配制一种稳定化的全血制剂并与相似的未处理过的全血样品比较其衰老(ageing)特性。
制备
1.利用静脉切开术将500ml血液采入含有溶于50ml磷酸盐缓冲液(PBS)的600mg乙二胺四乙酸(二钠盐或三钾盐)的无菌静脉切开放血包中。
2.在800g离心1小时。移去并保留血浆。
3.以无菌磷酸盐缓冲液(PBS)将留下的细胞洗涤2次。
4.除去上清液PBS。
5.加入300ml已过滤的、储存期超过1个月的0.1％六水合氯化铬(pH6.7)的PBS溶液，并在4℃避光培育1小时，间断地加以混合。
6.在800g离心45分钟并倾析上清液。
7.将沉淀重悬于300ml已过滤的、储存期超过1个月的0.1％六水合氯化铬(pH6.7)且同时含有0.35％聚甲醛的PBS溶液。在4℃避光培育16-22小时。
8.在800g离心45分钟并倾析上清液。
9.用磷酸盐缓冲液(PBS)离心洗涤2次。倾析最后的上清液。
10.将稳定化的全血重悬于步骤2所述的血浆中。加入庆大霉素、环丙氟哌酸(环丙沙星)之类的广谱抗生素。
12.使用前在4℃放置2-3天。
          磷酸盐缓冲液pH7.2
          7.83g/l    氯化钠
          0.36g/l    EDTA二钠
          0.28g/l    氯化钾
          0.26g/l    磷酸二氢钾(单碱)
          2.35g/l    磷酸氢二钠(二碱)
比较结果由附图说明，其中：
图1所示为“新鲜”血液染色后对抗原CD3、CD4、CD8、CD20的流式细胞计量术特性。使用全血裂解技术进行染色，阳性水平与阴性对照的关系(a)前向和侧向散射(FSC和SSC)特性，(b)CD3磷脂酰乙醇胺(PE)和CD20异硫氰酸荧光素(FITC)，(c)CD3异硫氰酸荧光素(FITC)和CD4磷脂酰乙醇胺(PE)，(d)CD3异硫氰酸荧光素(FITC)和CD8磷脂酰乙醇胺(PE)。
图2所示为8天内“新鲜”未稳定化血液的流式细胞计量术FSC和SSC的衰老效应。(a)第一天，(b)第二天，(c)第三天，(d)第八天。
图3a和图3b所示为10天内图1b、c和d中描述的抗原表达的衰老效应。3a(i)(ii)(iii)第一天，3b(i)(ii)(iii)第十天。
图4a和图4b所示为由流式细胞计量术测定的稳定化全血制剂60天内的FSC、SSC和阴性对照特性的稳定性。4a第3天，4b第60天。
图5a和图5b所示为由流式细胞计量术测定的60天内的抗原CD3、CD4、CD8、CD19和CD16＋CD56的稳定性。5a第3天，5b第60天。
图6所示为8天中“新鲜”血液流式细胞计量术白细胞差异的贮存效应。  由于样品严重变质，无法进行8天后的进一步分析。使用FACScan流式细胞仪进行分析。
图7所示为稳定化的血液制剂25天流式细胞计量术的(白细胞)差异的稳定性。使用FACScan流式细胞仪进行分析。
图8所示为某稳定化的全血制剂样品中含锌原卟啉(ZPP)含量36天的稳定性，单位为μmolZPP/mol血红蛋白。
图9所示为用Toa(Sysmex)NE8000血液学分析仪测定的某稳定化的全血制剂样品中的全部白细胞量和全部淋巴细胞量117天的稳定性。
最后，图10所示为50天内稳定化的全血制剂样品和新鲜贮存的全血样品中红细胞叶酸盐的测定值。
图1中的流式细胞计量术图显示了在红细胞裂解后淋巴细胞、单核细胞和粒细胞的正常位置。图1b、c、d和e还显示了抗原染色特性。流式细胞计量术和抗原表达特性随样品贮存时间增加而改变。8天时的碎片量令人无法进行满意的分析。如图3所示，荧光标记特性也变差。
图4显示了第3天和第60天稳定化的样品的前向和侧向散射特征及其阴性对照。一经稳定化后，各(细胞)群体保持它们各自的位置。保存了60天后，制剂的流式细胞计量术的前向和侧向散射特征维持原样(图4b)。另外，这段时间内的抗原表达特征仍保持不变(图5)。全过程中仪器的设定保持不变。
稳定化的全血制剂可用于检测白细胞差异。使用直接抗CD14和CD45抗原的特异性组合抗体可形成三组群体差异。图7显示了这一参数25天的稳定性，而图6则显示了8天中“新鲜”全血的不稳定性。这段时间后的分析由于过量碎片的污染而被放弃。
如图8所示，稳定化的全血制剂中ZPP含量基本恒定，只在36天后略有升高。同样，如图9所示，在117天内，全部白细胞量和全部淋巴细胞量基本不受时间的影响。
图10显示了根据本发明使用稳定化的全血制剂后，红细胞叶酸盐值稳定性的显著改进。实施例2
按实施例1所述方式制备稳定化全血制剂，不同点在于：与六水合氯化铬的反应以及与六水合氯化铬和聚甲醛的混合物的反应是在pH7.2的磷酸盐缓冲溶液中进行。
图11显示了在稳定化后11天FSC、SSC(图11a)和阴性对照(图11b)各特性的稳定性，使用流式细胞计量术测定稳定化全血制剂而确定。
图12(a)、(b)和(c)显示了由流式细胞计量术测出的、稳定化11天后抗原CD3、CD4、CD8和CD19的稳定性。
图13(a)和(b)显示了在稳定化后29天FSC、SSC和阴性对照各特性的稳定性，使用流式细胞计量术测定稳定化全血制剂而确定。
图14(a)、(b)和(c)显示了由流式细胞计量术测出的、稳定化29天后抗原CD3、CD4、CD8和CD19的稳定性。实施例3
按实施例1所述方式制备稳定化全血制剂，不同点在于：用六水合氯化铝代替六水合氯化铬，而且与六水合氯化铝的反应以及与六水合氯化铝和聚甲醛的混合物的反应是在pH7.2的磷酸盐缓冲溶液中进行。
图15(a)和(b)显示了在稳定化后11天，FSC、SSC和阴性对照各特性的稳定性，使用流式细胞计量术测定稳定化全血制剂而确定。
图16(a)、(b)和(c)显示了由流式细胞计量术测出的、稳定化11天后抗原CD3、CD4、CD8和CD19的稳定性。
图17(a)和(b)显示了在稳定化后29天，FSC、SSC和阴性对照各特性的稳定性，使用流式细胞计量术测定稳定化全血制剂而确定。
图18(a)、(b)和(c)显示了由流式细胞计量术测出的、稳定化29天后抗原CD3、CD4、CD8和CD19的稳定性。
结果表明，该全血制剂的稳定性非常好，甚至在29天后仍只有少量碎片而且很好地保留了抗原特性。
请读者注意与本说明书一同递交及与本说明书一同公开以接受公众审议的所有文献，所有这些文献的内容都在此参考引用。
在本说明书(包括所附的权利要求、摘要和附图)中揭示的所有特征和/或任一方法中的所有步骤可以任何方式组合，除了那些至少有部分这样的特征和/或步骤是互不相容的组合。
在本说明中的每一特征(包括所附的权利要求、摘要和附图)，除非有明确的声明，都可以被用于达到相同、相当或相似目的的不同特征所取代。所以，除非有明确的声明，所揭示的每一特征只是普通的一系列相当或相似特征中的一个举例。
本发明并不局限于上述实例的细节。本发明扩展至在本说明书(包括所附的权利要求、摘要和附图)中所揭示特征的任何新的特征或特征的组合，还扩展至这样公开的方法的任一新步骤或步骤的组合。

Claims (31)

1.一种处理能裂解的细胞悬浮液、从而产生仍能裂解的稳定化细胞悬浮液的方法，其特征在于，该方法包括：
在pH为6.5-7.5的水性介质中，依次用下列物质处理细胞悬浮液：
1)老化的重金属化合物水溶液，该溶液的pH为6.5-7.5而且该溶液已经在pH6.5-7.5条件下维持了足够长的一段时间以形成沉淀，和
2)聚甲醛水溶液，该溶液的pH为6.5-7.5。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，细胞悬浮液是全血制剂。
3.如权利要求1或2所述的方法，其特征在于，重金属是铝或过渡金属。
4.如权利要求1-3中任一权利要求所述的方法，其特征在于，重金属化合物是金属盐。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，金属盐是氯化铬。
6.如权利要求4所述的方法，其特征在于，金属盐是氯化铝。
7.如权利要求1-6中任一权利要求所述的方法，其特征在于，重金属化合物水溶液的pH为6.7-7.4。
8.如前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其特征在于，重金属化合物以较高浓度的溶液形式储存，并且在使用前用缓冲水溶液稀释。
9.如前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其特征在于，在使用之前，重金属化合物水溶液通过放置至少一周而老化。
10.如前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其特征在于，重金属化合物水溶液以0.01-0.5％w/v溶液形式加至细胞悬浮液。
11.如前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其特征在于，细胞在0-8℃温度下，暴露于重金属化合物水溶液5分钟-18小时。
12.如前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其特征在于，聚甲醛以0.1-0.5％w/v水溶液形式加入。
13.如前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其特征在于，聚甲醛水溶液的pH为6.7-7.4。
14.如前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其特征在于，聚甲醛水溶液与pH6.5-7.5老化的重金属化合物水溶液混合。
15.如权利要求14所述的方法，其特征在于，重金属化合物与聚甲醛的比率为5∶1-1∶50。
16.如前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其特征在于，细胞悬浮液暴露于聚甲醛溶液或混合溶液是在0-8℃下进行6-24小时。
17.如前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其特征在于，步骤1)和2)依次进行的时间间隔为1-24小时。
18.如前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其特征在于，在稳定全血制剂之前或之后，向全血制剂中加入其他细胞系。
19.如权利要求18所述的方法，其特征在于，该细胞系包括CD34+细胞。
20.如前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其特征在于，它基本上如实施例1所述。
21.如权利要求1-19中任一权利要求所述的方法，其特征在于，它基本上如实施例2和3所述。
22.如前述权利要求中任一权利要求所述的方法，其特征在于，它基本上如前面所述。
23.如权利要求2所述的方法，其特征在于，全血制剂是通过混合不同血源的样品而获得。
24.一种用上述任一权利要求所述的方法制备的稳定化细胞悬浮液。
25.一种基本上如实施例1中所述的稳定化全血制剂。
26.一种基本上如前所述的稳定化全血制剂。
27.一种未分离的、能裂解的稳定化全血制剂，其特征在于，其中的稳定剂包括有效量的重金属化合物和聚甲醛。
28.一种用于白细胞免疫表型技术的质量控制材料，其特征在于，包括权利要求27所述的稳定化全血制剂。
29.一种白细胞免疫表型技术的质量控制方法，其特征在于，将权利要求27所述的稳定化全血制剂用作质量控制参照材料。
30.一种用于任何含锌原卟啉、红细胞叶酸盐、总白细胞计数和淋巴细胞计数血液监测技术的质量控制方法，其特征在于，将权利要求27所述的稳定化全血制剂用作质量控制参照材料。
31.一种在治疗糖尿病中监测血糖水平的方法，其特征在于，将权利要求27所述的稳定化全血制剂用作校准材料。
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