JP4898915B2 - 血液学的対照用の赤血球成分の調製 - Google Patents
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Description
本出願は、2006年7月17日に出願された米国仮特許出願第60/807,585号に基づく利益を主張し、この内容は、参照により全体として本明細書中に援用される。
本発明は、対照物質の赤血球成分に特に着目して、血液学的機器類のための対照物質の分野に属する。
血液ドナー部位で典型的に回収されパックされたヒト赤血球
パックされたヒト赤血球を洗浄するための流動体
洗浄されたパックされたヒト赤血球の一次固定のための流動体
一次固定された細胞を洗浄するための流動体
洗浄された一次固定された細胞を懸濁させるための流動体
任意:洗浄された一次固定された細胞の二次固定のための流動体。及び二次固定された細胞を洗浄するための流動体
一次(又は二次)洗浄され固定された細胞を保存するための流動体
下記の実施例は、複数の血液学技術プラットフォームにわたって、均一な赤血球値を提供する市販の血液対照製造物における使用のためのA型赤血球成分の調製を例示する。本実施例で使用される手法は、非RBC領域(即ち、白血球及び血小板分析領域)における分散した粒子からの干渉を作らない対照製造物に帰着した。この実施例は、Bayer(以前、Technicon)のH1−E機器からの例示プロフィールを用いて、Bayer 5パート機器での使用のために最適化された。この手法は、より低い血小板カウント領域における粒状物質の形成を妨害するが、機器の種間での一致したRBCパラメータを有する血液対照のための赤血球成分を提供する。これは、RBC体積、分布幅、及び細胞のヘモグロビン含有量を評価するためのこれらの機器によって使用される独特の方法に起因して、Bayer機器に対して重要な区別である。
1.1Lの遠心ボトルにドナー側のパックされたRBCを添加し、2×106/μL〜4×106/μL、好ましくは3×106/μLのカウントになるように等浸透の平衡化されたクエン酸塩洗浄溶液を添加する。
2.10〜30分間、好ましくは20分間、2,000〜4,000RPM、好ましくは3,000RPMで遠心分離し、上清を吸引除去し、2×106/μL〜4×106/μL、好ましくは3×106/μLのカウントになるようにクエン酸塩洗浄溶液で充填する。
3.クエン酸塩洗浄を繰り返し、2×106/μL〜4×106/μL、好ましくは3×106/μLのカウントになるようにクエン酸塩洗浄溶液で再懸濁する。
4.ストック溶液である24%グルタルアルデヒドの1%に釣り合うように十分なグルタルアルデヒドを含む第2の1Lボトルに再懸濁させたRBCを注ぐ。
6.上述されるようにクエン酸塩洗浄溶液で洗浄する。
7.12〜20時間、好ましくは16時間、人工血漿に再懸濁させる。
8.10〜30分間、好ましくは20分間、2,000〜4,000RPM、好ましくは3,000RPMで遠心分離し、上清を吸引除去し、2×106/μL〜5×106/μL、好ましくは2×106/μLの赤血球カウントになるように人工血漿溶液で充填する。
10.標的値に依存して約0.5〜約7×106/μLの範囲の最終血液対照生成物に必要とされるRBCカウントになるように上清を吸引除去する。例えば、レベル1は0.5〜4×106/μLであり、レベル2は2〜5×106/μLであり、及びレベル3対照は3〜7×106/μLである。
11.固定された脊椎動物の白血球の形態である白血球成分(単数又は複数)(WBC)、固定された脊椎動物のRBCの形態、及び/又はラテックス粒子及び花粉としての他の粒子型の形態であるWBC類似体を添加する。
12.血小板成分、例えば、抗凝血剤において調製される天然の哺乳動物の血小板又は動物供給源から調製される血小板類似体を添加する。好ましい血小板成分は、Hunt,米国特許第4,179,398号に開示されているヤギ赤血球などの動物供給源由来である。
13.正常及び異常な血液学条件を用いて、血液対照の製造に必要とされる細胞カウント及び細胞サイズを調整する。
この実施例は、非RBC(即ち、白血球及び血小板分析)領域における分散された粒子がほとんどない状態で、複数の血液学技術プラットフォームにわたって、均一な赤血球値を提供するB1型の赤血球成分の調製物を調製するための手法を例示する。この実施例における手法は、Abbott CD4000 5パート機器における使用のために最適化された。この手法は、光学的な血小板及び光学的なWBCカウント領域における粒状物質の形成を妨害するが、機器タイプ間の一致したRBCパラメータを有する血液対照について、赤血球成分を提供する。これは、RBC、血小板、及びWBCパラメータを評価するために用いられる方法に起因して、Abbott機器に対する重要な区別である。下記に概説される手法は、B1型のRBCのためのものであり、グルタルアルデヒドの超低の短い照射を用いた一次固定、その後、非グルタルアルデヒド固定剤、この場合は、環境への関心により相対的に安全であり、ホルムアルデヒド及びグルタルアルデヒドなどの固定剤を用いて達成されるものとは区別される効果を有するHISTOCHOICE(登録商標)を用いて二次固定(二次の固定)の中程度の濃度によって行われる。
1.1Lの遠心ボトルにドナー側のパックされたRBCを添加し、2×106/μL〜4×106/μL、好ましくは3×106/μLのカウントになるように等浸透の平衡化されたクエン酸塩洗浄溶液を添加する。
2.10〜30分間、好ましくは20分間、又はパックされるまで、2,000〜4,000RPM、好ましくは3,000RPMで遠心分離し、上清を吸引除去し、2×106/μL〜4×106/μL、好ましくは3×106/μLのカウントになるようにクエン酸塩洗浄溶液で充填する。
3.クエン酸塩洗浄を繰り返し、2×106/μL〜4×106/μL、好ましくは3×106/μLのカウントになるようにクエン酸塩洗浄溶液で赤血球を再懸濁する。
4.ストック溶液である24%グルタルアルデヒドの0.005%〜1%、好ましくは0.01%に釣り合うように十分なグルタルアルデヒドを含む第2の1Lボトルに再懸濁させたRBCを注ぎ、結果として、最終のグルタルアルデヒド濃度が0.001%〜0.25%、好ましくは0.0025%になるようにする。
6.上述されるようにクエン酸塩洗浄溶液で洗浄し、もう1回繰り返す。
7.12〜20時間、好ましくは16時間、人工血漿に再懸濁させる。
8.20分間、2,000〜4,000RPM、好ましくは3,000RPMで遠心分離し、上清を吸引除去し、2×106/μL〜4×106/μL、好ましくは3×106/μLのカウントになるように人工血漿懸濁媒体で充填する。
10.洗浄されたグルタルアルデヒドの一次固定され、洗浄された細胞をHISTOCHOICEを含むボトルに注ぐ。
11.2〜8℃で、16〜48時間、好ましくは24時間保存する。
12.2,000〜4,000RPM、好ましくは3,000RPMで10〜30分間、好ましくは20分間、遠心分離し、上清を吸引除去する。
14.洗浄手法をもう2回繰り返す。
15.細胞調整のために、1×106/μL〜3×106/μL、好ましくは2×106/μLで、2〜8℃で7〜30日間、しかし好ましくは21日間保存する。
16.10〜30分間、好ましくは20分間、2,000〜4,000RPM、好ましくは3,000RPMで遠心分離し、上清を吸引除去し、2×106/μL〜5×106/μL、好ましくは2×106/μLの赤血球カウントになるように人工血漿溶液で充填する。
18.標的値に依存して約0.5〜約7×106/μLの範囲の最終血液対照生成物に必要とされるRBCカウントになるように上清を吸引除去する。例えば、レベル1は0.5〜4×106/μLであり、レベル2は2〜5×106/μLであり、及びレベル3対照は3〜7×106/μLである。
19.固定された脊椎動物の白血球の形態である白血球成分(単数又は複数)(WBC)、固定された脊椎動物のRBCの形態、及び/又はラテックス粒子及び花粉としての他の粒子型の形態であるWBC類似体を添加する。
20.実施例1におけるように調製された血小板成分を添加する。
21.正常及び異常な血液学条件を用いて、血液対照の製造に必要とされる細胞カウント及び細胞サイズを調整する。
同様に、この実施例は、非RBC(即ち、白血球及び血小板分析)領域における分散された粒子がほとんどない状態で、再度、複数の血液学技術プラットフォームにわたって、均一な赤血球値を提供するB2型の赤血球成分の調製物を調製するための手法を例示する。実施例2のように、この実施例における手法は、Abbott CD4000 5パート機器における使用のために最適化された。この手法は、光学的な血小板領域における粒状物質の形成を可能にするが、光学的なWBCカウント領域における粒状物質の形成を妨害し、機器タイプ間の一致したRBCパラメータを有する血液対照について、赤血球成分を提供する。この手法に使用された固定剤は、HISTOCHOICE(登録商標)である。
1.1Lの遠心ボトルにドナー側のパックされたRBCを添加し、2×106/μL〜4×106/μL、好ましくは3×106/μLのカウントになるように等浸透の平衡化されたクエン酸塩洗浄溶液を添加する。
2.10〜30分間、好ましくは20分間、又はパックされるまで、2,000RPM〜4,000RPM、好ましくは3,000RPMで遠心分離し、上清を吸引除去し、2×106/μL〜4×106/μL、好ましくは3×106/μLのカウントになるようにクエン酸塩洗浄溶液で充填する。
3.クエン酸塩洗浄を繰り返し、2×106/μL〜4×106/μL、好ましくは3×106/μLのカウントになるようにクエン酸塩洗浄溶液で再懸濁する。
4.12〜20時間、好ましくは16時間、人工血漿懸濁溶液に再懸濁する。
6.HISTOCHOICEの最終濃度が0.1〜5%、しかし好ましくは1%に等しくなるように第2容器に十分なHISTOCHOICEを添加する。
7.洗浄された細胞をHISTOCHOICEを含むボトルに注ぐ。
8.2〜8℃で、16〜48時間、好ましくは24時間保存する。
10.上述されるように、人工血漿懸濁溶液で洗浄する。
11.洗浄手法をもう2回繰り返す。
12.細胞調整のために、1×106/μL〜3×106/μL、好ましくは2×106/μLで、2〜8℃で7〜30日間、しかし好ましくは21日間保存する。
14.固定された脊椎動物の白血球の形態である白血球成分(単数又は複数)(WBC)、固定された脊椎動物のRBCの形態、及び/又はラテックス及び花粉としての他の粒子型の形態であるWBC類似体を添加する。
15.血小板成分を添加する。
16.正常及び異常な血液学条件を用いて、血液対照の製造に必要とされる細胞カウント及び細胞サイズを調整する。
Claims (9)
- 赤血球を含む哺乳動物の血液試料を分析する血液学的機器の精度を検証する方法であって、該機器内で赤血球成分を溶解することを含み、該試料中の異種の血液細胞の相対量を測定するプロセスによるものであり、
該機器内で、既知の組成を有する血液対照であり、疑似血漿に懸濁された既知の相対量の赤血球成分、白血球成分、及び血小板成分を含む血液対照を前記プロセスに従って分析することを含み、該赤血球成分は、該機器内で赤血球を溶解状態にしながら赤血球を架橋するために、0.05%〜2.5%(重量/体積)の濃度であるブタン−1,4−ジアルとともに、16時間〜48時間、2℃〜8℃の温度でインキュベーションすることによって前処理(precondition)された無核のB2型の哺乳動物の赤血球からなり、該分析の結果を該既知の組成と比較することを含む前記方法。 - 前記組成物が、溶解プロモーターを欠いている、請求項1に記載の方法。
- 赤血球を含む哺乳動物の血液試料を分析する血液学的機器の精度を検証する方法であって、該機器内で赤血球成分を溶解することを含み、該試料中の異種の血液細胞の相対量を測定するプロセスによるものであり、
該機器内で、既知の組成を有する血液対照であり、疑似血漿に懸濁された既知の相対量の赤血球成分、白血球成分、及び血小板成分を含む血液対照を前記プロセスに従って分析することを含み、該赤血球成分は、該機器内で赤血球を溶解状態にしながら赤血球を架橋するために、0.001%〜0.25%(重量/体積)の濃度であるグルタルアルデヒドとともに、0.5時間〜4時間、15℃〜25℃の温度でインキュベートし、次に、0.05%〜2.5%(重量/体積)の濃度であるブタン−1,4−ジアルとともに、16時間〜48時間、2℃〜8℃の温度でインキュベーションすることによって前処理された無核のB1型の哺乳動物の赤血球からなり、該分析の結果を該既知の組成と比較することを含む前記方法。 - 疑似血漿に懸濁させた、既知の相対量の赤血球成分、白血球成分、及び血小板成分を含む血液対照であって、該赤血球成分は、血液学的機器内で赤血球を溶解状態にしながら赤血球を架橋するために、0.05%〜2.5%(重量/体積)の濃度であるブタン−1,4−ジアルとともに、16時間〜48時間、2℃〜8℃の温度でインキュベーションすることによって前処理された無核のB2型の哺乳動物の赤血球からなる前記血液対照。
- 疑似血漿に懸濁させた、既知の相対量の赤血球成分、白血球成分、及び血小板成分を含む血液対照であって、該赤血球成分は、血液学的機器内で赤血球を溶解状態にしながら赤血球を架橋するために、0.001%〜0.25%(重量/体積)の濃度であるグルタルアルデヒドとともに、0.5時間〜4時間、15℃〜25℃の温度でインキュベートし、次に、0.05%〜2.5%(重量/体積)の濃度であるブタン−1,4−ジアルとともに、16時間〜48時間、2℃〜8℃の温度でインキュベーションすることによって前処理された無核のB1型の哺乳動物の赤血球からなる前記血液対照。
- 前記無核の哺乳動物の赤血球が、前記固定剤とのインキュベーション後、さらに、固定剤なしに、7日〜30日間、2℃〜8℃で疑似血漿中でのインキュベーションによって前処理されている、請求項4に記載の血液対照。
- 前記血液対照が溶解プロモーターを欠いている、請求項3に記載の方法。
- 前記血液対照が溶解プロモーターを欠いている、請求項5に記載の血液対照。
- 前記無核の哺乳動物の赤血球が、前記固定剤とのインキュベーション後、さらに、固定剤なしに、7日〜30日間、2℃〜8℃で疑似血漿中でのインキュベーションによって前処理されている、請求項5に記載の血液対照。
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