CN114908128B - 固体发酵方法、后生元和动物饲料 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种固体发酵方法、后生元和动物饲料,固体发酵方法包括以下步骤:步骤a、种子培养基的配制和固态发酵培养基的配制,固态发酵培养基包括茶叶渣、青稞麸皮、亚麻籽粕和龙虾壳;步骤b、菌种活化;步骤c、将活化后的菌种接种至种子液中,拌种后装至固态培养基中发酵;发酵完成后经过一定处理的发酵产物为后生元,该种后生元和非常规饲料原料同时作为动物饲料的组成成分,在动物体内后生元有效降解非常规饲料原料中的抗营养因子,因此消除其抗营养作用,提高饲料的营养价值,进而解决非常规饲料原料因含有抗营养因子而导致的应用受限的问题。

Description

固体发酵方法、后生元和动物饲料
技术领域
本发明涉及生物发酵领域,具体是涉及一种固体发酵方法、后生元和动物饲料。
背景技术
我国畜牧业年均直接或间接消费谷物1.6亿t左右,约占我国谷物总产量的三分之一。由于我国大量的非常规饲料资源未得到合理利用,在成本、供给、来源等多方面的压力下,寻找能够代替玉米、豆粕、鱼粉等常规饲料原料的非常规饲料;比如用木薯、小麦、稻谷等能量性的物质替代玉米,用菜粕、棉粕、肉骨粉、羽毛粉、皮革粉,以及食品加工业下脚料等蛋白类原料来替代豆粕。
但非常规饲料原料的营养成分不平衡,含有如非淀粉多糖(NSP) 等多种抗营养因子,非淀粉多糖NSP与水结合形成粘性溶液,在消化道内会提高肠道食糜粘度,产生抗营养作用,同时也会提高动物机体内活性氧族物质含量和炎症反应,降低动物对饲料营养物质的吸收利用致使非常规日粮在畜禽日粮中的应用受到限制。
发明内容
本发明的第一目的是提供一种提高非常规日粮应用范围的固体发酵方法。
本发明的第二目的是提供一种上述固体发酵方法制备得到的后生元。
本发明的第三目的是提供一种含有上述后生元的动物饲料。
为了实现上述的主要目的,本发明提供的固体发酵方法包括以下步骤:
步骤a、种子培养基的配制和固态发酵培养基的配制,固态发酵培养基包括茶叶渣、青稞麸皮、亚麻籽粕和龙虾壳;
步骤b、菌种活化;
步骤c、将活化后的菌种接种至种子液中,拌种后装至固态培养基中,发酵。
进一步的方案是,按重量百分比,固态发酵培养基包括25%~35%茶叶渣、40%~50%青稞麸皮、5%~10%亚麻籽粕和10%~15%龙虾壳。
进一步的方案是,茶叶渣中粗蛋白质≥20.5%、粗纤维≥14.5%、钙≥0.3%;茶多酚≥6.3%;青稞麸皮中淀粉≥33.5%、粗蛋白质≥16.5%、粗纤维≥10%,花青素≥6mg/g、总酚≥9mg/g;亚麻籽粕中粗蛋白质≥34.8%、钙≥0.4%;龙虾壳中粗蛋白质≥22.5%、钙≥9.6%、Mg≥0.15%。
进一步的方案是,固态发酵培养的配制步骤为:
步骤S1、将混合后的茶叶渣、青稞麸皮、亚麻籽粕和龙虾壳粗粉碎至20目~40目;
步骤S2、采用气流超微破壁粉碎机将粗粉碎后的茶叶渣、青稞麸皮、亚麻籽粕和龙虾壳粉碎至30μm以下,得到干料;
步骤S3、在步骤S1得到的干料加水润料后搅拌;
步骤S4、将步骤S3搅拌均匀后的物料蒸煮灭菌,在120℃~125℃下蒸煮30min~40min。
进一步的方案是,在步骤c中,拌种具体为:使用蒸球拌种,蒸球须按顺-逆-顺这一顺序旋转拌种1.5h,平均每一个方向拌种30min。
进一步的方案是,菌种包括至少一种厌氧菌和至少一种好氧菌,在步骤c中至少一种厌氧菌和至少一种好氧菌的接种量比例为1:1~3: 1;
在步骤c中,发酵前对固态培养基做隔氧处理,隔氧处理具体为: 取好氧菌菌液和隔氧溶液混合均匀后喷晒至固态培养基表面后,继续铺盖一层厚度为2cm~3cm的麸皮;按质量百分数总和为100计,隔氧溶液包括1.5%~2.5%硫酸亚铁、0.5%~1%的L-半胱氨酸盐酸盐、 0.2%~0.5%抗坏血钠和余量的水。
进一步的方案是,厌氧菌为丁酸梭菌,好氧菌为凝结芽孢杆菌。
进一步的方案是,在步骤c中,发酵产物包括1.1*108cfu/g~ 1.5*108cfu/g丁酸梭菌、3.2*108cfu/g~3.6*108cfu/g凝结芽孢杆菌、 798U/g~976U/g木聚糖酶、874U/g~1089U/g蛋白酶、124U/g~158U/g 纤维素酶、937U/g~1164U/g果胶酶、76U/g~97U/g葡聚糖酶、1.05%~ 1.58%低聚木糖、3.38%~3.75%总酚、3.54%~3.76%丁酸钙、1.21%~1.38%乳酸钙和7.98%~8.96%游离氨基酸。
由上述方案可见,在固体发酵过程中,采用非常规饲料原料如茶叶渣、青稞麸皮、亚麻籽粕和龙虾壳作为固体培养基的底物,进行菌种的培养,菌种对该种非常规饲料原料进行分解,完成发酵后,发酵产物中含有大量活菌以及代谢产物,其中包括木聚糖酶,发酵产物作为功能性添加剂作与非常规饲料原料同时作为动物饲料中的组成成分,发酵产物营养丰富,发酵产物中的菌种和低聚木糖能够改善动物肠道环境,纠正肠道菌群紊乱,减少肠毒素的产生,降低肠道食糜黏度,提升肠道吸收营养效果;发酵产物中的木聚糖酶能够有效降解非常规饲料原料中的抗营养因子,消除其抗营养作用,提高饲料的营养价值,促进饲料中养分的消化分解;发酵产物中的其他成分,如丁酸、乳酸、胞外多糖、总酚等,可以降低体内活性氧族物质含量,减少活性氧族物质对机体的损伤,同时降低非常规日粮使用造成的动物机体炎症反应,减少机体活性氧族物质和炎症反应对饲料的消耗,从而提高饲料利用率,降低料重比。在步骤c中,发酵之前对固体培养基进行隔氧处理,其中所使用的隔氧溶液中的硫酸亚铁、L-半胱氨酸盐酸盐和抗坏血钠具有氧化性,可以与空气的氧化反应,降低溶氧,而凝结芽孢杆菌在有氧条件可以快速成长,消耗氧气含量,最上面的一层的麸皮可也起到隔绝氧气的作用。
为实现上述的第二目的,本发明提供的后生元通过如上述的固体发酵方法制备得到,后生元为固体发酵方法的发酵产物。
可见,固体发酵方法得到的产物为后生元,后生元中不仅含有益生菌固体发酵产生的活性更强的酶,如蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、葡聚糖酶、木聚糖酶等,还含有益生菌的其他代谢产物,如代谢产生大量的短链脂肪酸,其中的丁酸和乳酸与虾壳粉作用,产生丁酸钙和乳酸钙,丁酸钙对养殖动物各种类型腹泻都具有防控作用,乳酸钙的吸收比无机钙好,适合养殖动物补充钙质,而且发酵后总酚的含量得到进一步提高,酚类可以提高动物机体抗氧化和抗炎的能力。
为实现上述的第三目的,本发明提供的动物饲料包括上述的后生元。
可见,通过该种固体发酵方法制备得到的后生元中含有大量的酶,当动物饲料中同时含有非常规饲料原料和该后生元时,在动物食用后,在动物体内后生元中的酶有效降解非常规饲料原料中的抗营养因子,因此消除其抗营养作用,提高饲料的营养价值,进而解决非常规饲料原料因含有抗营养因子而导致的应用受限的问题。
具体实施方式
本发明的固体发酵方法可应用于后生元制备工艺、饲料组成成分制备工艺或菌种发酵培育工艺中,本发明的固体发酵方法中采用非常规饲料原料中的茶叶渣、青稞麸皮、亚麻籽粕和龙虾壳作为发酵底物,得到含有丰富产物的发酵产物,该种发酵产物即为后生元,该种后生元与非常规饲料原料同时作为饲料的组成成分,后世元中的物质能够有效降解非常规饲料原料中的抗营养因子,进而非常规饲料原料应用受限的问题。非常规饲料原料是指在配方中较少使用、或者对营养特性和饲用价值了解较少的饲料原料,如玉米、大豆粕、菜籽粕、大麦、小麦麸皮和小麦等物质,影响饲料原料消化和利用的主要抗营养因子有纤维素、木聚糖、木质素、果胶等非淀粉多糖。
下面通过不同的实施例和对比例对本发明做出进一步的说明,以便更好地了解本发明。
实施例1
本发明的固体发酵方法中的采用的菌种包括丁酸梭菌和凝结芽孢杆菌,其中丁酸梭菌为厌氧菌,凝结芽孢杆菌为好氧菌。
固体发酵方法包括以下步骤:
步骤a、种子培养基的配制和固态发酵培养基的配制;
丁酸梭菌种子培养基配制:胰蛋白胨10g/L、酵母浸粉22g/L、葡萄糖26g/L、无水硫酸铵1g/L、硫酸镁0.2g/L、碳酸氢钠1g/L、硫酸锰0.2g/L、氯化钙0.2g/L以及半胱氨酸0.5g/L,丁酸梭菌种子培养基的pH值为6.8到7.0,灭菌温度:121℃,灭菌时间为20min;
凝结芽孢杆菌种子培养基配制:蛋白胨10g/L、牛肉粉5g/L、酵母粉4g/L、葡萄糖20g/L、吐温80 1ml/L、磷酸氢二钾2g/L、醋酸钠 5g/L、柠檬酸三铵2g/L、硫酸镁0.2g/L以及硫酸锰0.05g/L,所述种子培养基的pH值为6.8±0.2,灭菌温度:118℃,灭菌时间为20min;
固态发酵培养基包括茶叶渣、青稞麸皮、亚麻籽粕和龙虾壳,其中要求茶叶渣中粗蛋白质≥20.5%、粗纤维≥14.5%、钙≥0.3%;茶多酚≥6.3%;青稞麸皮中淀粉≥33.5%、粗蛋白质≥16.5%、粗纤维≥10%,花青素≥6mg/g、总酚≥9mg/g;亚麻籽粕中粗蛋白质≥34.8%、钙≥0.4%;龙虾壳中粗蛋白质≥22.5%、钙≥9.6%、Mg≥0.15%;按重量百分比,固态发酵培养基包括25%茶叶渣、50%青稞麸皮、10%亚麻籽粕和15%龙虾壳。固态发酵培养的配制步骤为:步骤S1、将混合后的茶叶渣、青稞麸皮、亚麻籽粕和龙虾壳粗粉碎至20目~40目;步骤S2、采用气流超微破壁粉碎机将粗粉碎后的茶叶渣、青稞麸皮、亚麻籽粕和龙虾壳粉碎至30μm以下,得到干料;步骤S3、在步骤S1得到的干料加水润料后搅拌(具体加水量根据接种后水分60%计算);步骤S4、将步骤S3搅拌均匀后的物料蒸煮灭菌,在120℃~125℃下蒸煮 30min~40min,其中可采用蒸球进行蒸煮,蒸煮过程中蒸球必须转动。在上述固态培养基配制步骤中,采用细胞破壁技术细粉碎发酵底物,用过打破植物细胞壁,使水分及营养更好地被吸收和保持活性成分。
步骤b、菌种活化;
丁酸梭菌活化:1、从-80℃冷冻保存的甘油管中取丁酸梭菌液体菌种接入到种子培养基中,并在恒温培养箱37℃培养生长48h以实现菌种活化处理;2、将经过活化处理的丁酸梭菌菌种按照5%的接种量转接到装有种子培养基的种子罐中并在37℃下培养10h至12h以达到对数生长中期,从而得到一级种子液;
凝结芽孢杆菌活化:1、从-80℃冷冻保存的甘油管中取凝结芽孢杆菌液体菌种接入到种子培养基中,并在恒温培养箱37℃培养生长 48h以实现菌种活化处理;2、将经过活化处理的凝结芽孢杆菌菌种按照5%的接种量转接到装有种子培养基的试剂瓶中并在37℃下培养 16h至18h以达到对数生长后期,从而得到一级种子液。
步骤c、将活化后的菌种接种至种子液中,拌种后装至固态培养基中,发酵。其中接种具体为:每吨干物料加种子液100L,丁酸梭菌:凝结芽孢杆菌=2:1;拌种具体为:使用蒸球拌种,蒸球须按顺- 逆-顺这一顺序旋转拌种1.5h,平均每一个方向拌种30min,拌种时向蒸球内通入无菌氮气,减少与氧气的接触;接种后的固体培养基装入发酵箱的操作具体为:将完成拌种的物料装入发酵箱中,摊平,使物料厚度均匀,厚度约为60cm~80cm,装箱后转移至发酵间。到发酵间后,发酵前对固态培养基做隔氧处理,隔氧处理具体为:取凝结芽孢杆菌菌液和隔氧溶液按1:1混合均匀后喷晒至固态培养基表面后,继续铺盖一层厚度为2cm~3cm的麸皮(该麸皮经过高温蒸煮且含水量 50%±2%);按质量百分数总和为100计,隔氧溶液包括1.5%硫酸亚铁、1%的L~半胱氨酸盐酸盐、0.5%抗坏血钠和余量的水。发酵时的具体控制条件为:温度控制:发酵间培养温度:33℃~37℃;以无菌氮气置换发酵间空气后,按照3m3/h的通气量持续通入氮气,保持发酵间氧气含量3%以下;发酵培养时间为:64至72h。
发酵结束后,采用低温沸腾干燥(110℃)干燥至产品水分6%以下;干燥的后产品粉碎至60目以下,获得后生元产品。
实施例2
实施例2中的固体发酵方法和发酵结束后获得后生元的方法实施例1中的固体发酵方法和发酵结束后获得后生元的方法大致上相同,不同之处在于:固体培养基配方:35%茶叶渣、45%青稞麸皮、10%亚麻籽粕和10%龙虾壳。
例3
实施例5中的固体发酵方法和发酵结束后获得后生元的方法与实施例1中的固体发酵方法和发酵结束后获得后生元的方法大致上相同,不同之处在于:固体培养基配方:30%茶叶渣、50%青稞麸皮、7.5%亚麻籽粕和12.5%龙虾壳。
实施例4
实施例4中的固体发酵方法和发酵结束后获得后生元的方法实施例1中的固体发酵方法和发酵结束后获得后生元的方法大致上相同,不同之处在于:丁酸梭菌与凝结芽孢杆菌之间的接种比例为3:1。
实施例5
实施例5中的固体发酵方法和发酵结束后获得后生元的方法实施例1中的固体发酵方法和发酵结束后获得后生元的方法大致上相同,不同之处在于:丁酸梭菌与凝结芽孢杆菌之间的接种比例为1:1。
对比例1
对比例1中的固体发酵方法和发酵结束后获得后生元的方法实施例1中的固体发酵方法和发酵结束后获得后生元的方法大致上相同,不同之处在于:固体发酵培养基中的发酵底物为玉米皮、菜粕、麸皮、碳酸钙。
对比例2
对比例2中的采用液体发酵方法对菌种进行发酵,其中液体发酵培养基以及液体发酵方法如下:
步骤a、种子培养基的配制和固态发酵培养基的配制;
丁酸梭菌种子培养基配制:胰蛋白胨10g/L、酵母浸粉22g/L、葡萄糖26g/L、无水硫酸铵1g/L、硫酸镁0.2g/L、碳酸氢钠1g/L、硫酸锰0.2g/L、氯化钙0.2g/L以及半胱氨酸0.5g/L,丁酸梭菌种子培养基的pH值为6.8到7.0,灭菌温度:121℃,灭菌时间为20min;
凝结芽孢杆菌种子培养基配制:蛋白胨10g/L、牛肉粉5g/L、酵母粉4g/L、葡萄糖20g/L、吐温80 1ml/L、磷酸氢二钾2g/L、醋酸钠 5g/L、柠檬酸三铵2g/L、硫酸镁0.2g/L以及硫酸锰0.05g/L,所述种子培养基的pH值为6.8±0.2,灭菌温度:118℃,灭菌时间为20min;
丁酸梭菌+凝结芽孢杆菌发酵培养基:胰蛋白胨10g/L、酵母浸粉 22g/L、葡萄糖26g/L、无水硫酸铵1g/L、硫酸镁0.2g/L、碳酸氢钠1g/L、硫酸锰0.2g/L、氯化钙0.2g/L以及半胱氨酸0.5g/L,pH值为 6.8到7.0,灭菌温度:121℃,灭菌时间为20min;
丁酸梭菌活化:1、从~80℃冷冻保存的甘油管中取丁酸梭菌液体菌种接入到种子培养基中,并在恒温培养箱37℃培养生长48h以实现菌种活化处理;2、将经过活化处理的丁酸梭菌菌种按照5%的接种量转接到装有种子培养基的种子罐中并在37℃下培养10h至12h以达到对数生长中期,从而得到一级种子液;
凝结芽孢杆菌活化:1、从~80℃冷冻保存的甘油管中取凝结芽孢杆菌液体菌种接入到种子培养基中,并在恒温培养箱37℃培养生长 48h以实现菌种活化处理;2、将经过活化处理的凝结芽孢杆菌菌种按照5%的接种量转接到装有种子培养基的试剂瓶中并在37℃下培养 16h至18h以达到对数生长后期,从而得到一级种子液。
将活化的丁酸梭菌和凝结芽孢杆菌种子按照5%的接种量进入发酵培养基中(丁酸梭菌:凝结芽孢杆菌=2:1);厌氧培养22~26h;后续操作按照一种混合益生菌制剂及其制备工艺(201910564760.8)执行。
对上述各实施例和对比例最终获得的后生元就活菌及代谢产物含量、后生元对木聚糖含量影响测试、DPPH自由基清除活性测试、对巨噬细胞抗炎作用的测试和仔猪养殖功效测试五个方向进行测试。
后生元中活菌及代谢产物含量测定,测定结果见下表1。
表1:活菌及代谢产物含量测定结果
Figure BDA0003724715970000081
采用本发明的固体工艺方法,可以制备获得后生元,后生元中不仅含有益生菌固体发酵产生的活性更强的酶,如蛋白酶、纤维素酶、果胶酶、葡聚糖酶、木聚糖酶等,还含有益生菌的其他代谢产物,如代谢产生大量的短链脂肪酸,其中的丁酸和乳酸与虾壳粉作用,产生丁酸钙和乳酸钙,丁酸钙对养殖动物各种类型腹泻都具有防控作用,乳酸钙的吸收比无机钙好,适合养殖动物补充钙质。与对比例比较,本发明采用的发酵工艺和底物更利于代谢产物的产生和积累。
后生元对木聚糖含量影响测试
测试方法为:以小麦粉与水按照1:1.2制备小麦粉溶液,按照1‰接入后生元后,37℃培养24h,检测小麦粉溶液黏度和木聚糖含量的变化,其中木聚糖含量测定参照标准(NY/T 2335-2013)谷物中戊聚糖含量的测定方法进行测定,而黏度测定使用DNJ-1指针式旋转粘度计,选用0号或1号转子测定其绝对黏度,读取转盘上的读数,并乘上系数表上的特定系数。木聚糖含量具体测试结果见下表2,小麦粉溶液黏度变化测试结果见下表3。
表2:
Figure BDA0003724715970000091
表3:
Figure BDA0003724715970000092
上述试验表明,本发明制备获得后生元,具有较好的降低小麦溶液黏度和小麦中木聚糖含量的能力,表明后生元可以降低动物肠道食糜黏度,促进动物对饲料的吸收利用。与对比例相对,本发明制备的后生元对于促进动物对饲料的吸收利用具有更优异的能力。
DPPH自由基清除活性测试:用比色法测定样品的DPPH自由基清除活性,具体测试方法为:将含有100μLDPPH溶液(0.4mM)和100μL 后生元进行混合反应,混合物溶液在室温下静置30分钟。静置后,使用ELISA酶标仪在517nm处测得吸光度;测试结果见下表4。
表4
  实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 实施例5 对比例1 对比例2
DPPH自由基清除率 81.03% 78.94% 76.45% 76.84% 77.85% 32.07% 12.35% 
非常规日粮中的霉菌毒素、脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)、抗营养因子能够导致细胞内活性氧族族物质的明显增加,这些活性氧族族物质会导致细胞氧化性损伤。上述试验表明,本发明制备的后生元具有很好的抗氧化能力,可以降低活性氧族物质对动物机体的损伤以及提高营养物质的消化吸收。
对巨噬细胞抗炎作用的测试
具体测试方法为:接种巨噬细胞细胞至MAM培养基中并培养24小时。将本发明的后生元处理至最终浓度为0、25、50和100μg/mL;1 小时后加入脂多糖(1g/mL);24小时后,取100μL实验样品液转移到96孔板中,并加入100μL Griess试剂(1%磺酰胺和在2.5%磷酸中的0.1%萘乙二胺二盐酸盐);10分钟后,在酶标仪上以540nm 的波长读取吸光度;具体测试结果见下表5。
表5:
Figure BDA0003724715970000101
本发明制备的后生元具有较好的降低巨噬细胞炎症反应的功效,能够解决非常规日粮造成的动物机体的炎症反应,提高动物对饲料的利用率。
仔猪养殖功效试验:
具体试验方法为:选取720头健康断奶仔猪,随机分为3组(见表6),每组6个重复,每个重复40头。试验期长183天,其中保育期45天。试验期间,按照猪场的一般日常管理进行,猪自由采水,每天饲喂3次(7:00、13:00和18:00)。检测全程生长性能(平均日增重(ADG)、平均日采食量(ADFI)、料重比(F/G)和腹泻频率)、保育阶段肠道指标(绒毛长度与隐窝深度)。其中在下表6中,对照页中的喂养饲料中不含后生元,低剂量组中添加低剂量的实施例1中的后生元,高剂量组中添加高剂量的实施例1中的后生元。
表6试验Ⅰ分组及设计
Figure BDA0003724715970000111
功效试验结果如下表7、表8和表9:
表7不同处理对保育期仔猪生长性能的影响
Figure BDA0003724715970000112
表8:保育期仔猪肠道形态
Figure BDA0003724715970000113
(同一行数字右上角肩标字母不同,表示组间有显著性差异P<0.05,字母相同为差异不显著P> 0.05)
表9:断奶-出栏全程生长性能
Figure BDA0003724715970000121
(同一行数字右上角肩标字母不同,表示组间有显著性差异P<0.05,字母相同为差异不显著P> 0.05)
通过仔猪养殖试验表明,使用后生元可以提高仔猪的日增重,降低抗营养因子引起的腹泻,同时降低养殖全程的料肉比,并促进空肠、十二指肠、回肠的肠道发育。
有上述实验结果可见,本发明的后生元含有丰富的益生菌、代谢产物(酶、短链脂肪酸)、益生元等,固体发酵产生的丰富代谢产物可有效降解饲料中的抗营养因子(如表2所示的木聚糖),消除其抗营养作用,提高饲料的营养价值,促进饲料中养分的消化分解,从而提高饲料利用率,降低料重比;还可促进肠道有益菌群增殖和发育,抑制有害菌和腐败菌的生长、繁殖,纠正肠道菌群紊乱,减少肠毒素的产生。饲料中的霉菌毒素、抗营养因子会引起动物机体炎症反应,导致日粮氨基酸的损失和机体蛋白沉积减少,影响动物的生长发育;同时也会造成动物机体产生大量的活性氧族物质,损伤动物机体细胞,影响动物生长发育,而由表4、表5的测试结果可见,本发明的后生元具有比较的强抗氧化性和抗炎功效,可以清除自由基,消除机体的炎症反应,促进动物的生长发育。经过动物试验验证表明,本发明的后生元可以提高非常规日粮在养殖上的应用。
最后需要强调的是,以上所述仅为本发明的优选实施例,并不用于限制本发明,对于本领域的技术人员来说,本发明可以有各种变化和更改,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.固体发酵方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤a、种子培养基的配制和固态发酵培养基的配制,所述固态发酵培养基包括茶叶渣、青稞麸皮、亚麻籽粕和龙虾壳;
步骤b、菌种活化;
步骤c、将活化后的菌种接种至种子液中,拌种后装至所述固态培养基中,发酵;
按重量百分比,所述固态发酵培养基包括25%~35%茶叶渣、40%~50%青稞麸皮、5%~10%亚麻籽粕和10%~15%龙虾壳;
所述茶叶渣中粗蛋白质≥20.5%、粗纤维≥14.5%、钙≥0.3%;茶多酚≥6.3%;所述青稞麸皮中淀粉≥33.5%、粗蛋白质≥16.5%、粗纤维≥10%,花青素≥6mg/g、总酚≥9mg/g;所述亚麻籽粕中粗蛋白质≥34.8%、钙≥0.4%;所述龙虾壳中粗蛋白质≥22.5%、钙≥9.6%、Mg≥0.15%;
所述菌种包括厌氧菌和好氧菌,在步骤c中厌氧菌和好氧菌的接种量比例为1:1~3:1;
所述厌氧菌为丁酸梭菌,所述好氧菌为凝结芽孢杆菌。
2.根据权利要求1所述的固体发酵方法,其特征在于:
所述固态发酵培养的配制步骤为:
步骤S1、将混合后的所述茶叶渣、所述青稞麸皮、所述亚麻籽粕和所述龙虾壳粗粉碎至20目~40目;
步骤S2、采用气流超微破壁粉碎机将粗粉碎后的所述茶叶渣、所述青稞麸皮、所述亚麻籽粕和所述龙虾壳粉碎至30μm以下,得到干料;
步骤S3、在步骤S2得到的干料加水润料后搅拌;
步骤S4、将步骤S3搅拌均匀后的物料蒸煮灭菌,在120℃~125℃下蒸煮30min~40min。
3.根据权利要求1所述的固体发酵方法,其特征在于:
在步骤c中,拌种具体为:使用蒸球拌种,所述蒸球须按顺-逆-顺这一顺序旋转拌种1.5h,平均每一个方向拌种30min。
4.根据权利要求1所述的固体发酵方法,其特征在于:
在步骤c中,发酵前对所述固态培养基做隔氧处理,所述隔氧处理具体为:取好氧菌菌液和隔氧溶液混合均匀后喷晒至所述固态培养基表面后,继续铺盖一层厚度为2cm~3cm的麸皮;
按质量百分数总和为100计,所述隔氧溶液包括1.5%~2.5%硫酸亚铁、0.5%~1%的L-半胱氨酸盐酸盐、0.2%~0.5%抗坏血钠和余量的水。
5.根据权利要求1所述的固体发酵方法,其特征在于:
在步骤c中,发酵产物包括1.1*108cfu/g~1.5*108cfu/g丁酸梭菌、3.2*108cfu/g~3.6*108cfu/g凝结芽孢杆菌、798U/g~976U/g木聚糖酶、874U/g~1089U/g蛋白酶、124U/g~158U/g纤维素酶、937U/g~1164U/g果胶酶、76U/g~97U/g葡聚糖酶、1.05%~1.58%低聚木糖、3.38%~3.75%总酚、3.54%~3.76%丁酸钙、1.21%~1.38%乳酸钙和7.98%~8.96%游离氨基酸。
6.后生元,其特征在于:所述后生元通过如权利要求1至5任一项所述的固体发酵方法制备得到,所述后生元为所述固体发酵方法的发酵产物。
7.动物饲料,其特征在于:所述动物饲料包括权利要求6所述的后生元。
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