CN114907474A - 抗冠状病毒抗体、其筛选方法、含有该抗体的药物组合物及应用 - Google Patents

Abstract

本申请公开了一种抗冠状病毒抗体、其筛选方法、含有该抗体的药物组合物及应用。本申请中，经所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力大于未经所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力。本申请提供的靶向非RBD表位的抑制S1/S2解离和或S2变构重排的抗冠状病毒抗体，以尝试替代现有的RBD靶向抗体，克服单一阻断RBD/ACE2互作无法抵抗冠状病毒利用其它受体入侵的缺陷，或与现有的RBD靶向抗体配合使用，降低长期使用单一的RBD靶向抗体诱发冠状病毒产生抵抗性突变的几率。

Description

抗冠状病毒抗体、其筛选方法、含有该抗体的药物组合物及 应用

技术领域

本发明实施例涉及细胞免疫领域，特别涉及一种抗冠状病毒抗体、其筛选方法、含有该抗体的药物组合物及应用。

背景技术

冠状病毒主要利用其刺突蛋白(S蛋白)结合宿主细胞上的受体，激活刺突蛋白的融合机制，实现病毒入侵宿主。成熟的刺突蛋白主要由S1和S2两个结构域通过分子内强非共价的相互作用组装而成。例如，SARS-CoV-2新冠病毒主要利用其表面刺突蛋白中的受体结合域(RBD)识别并结合宿主细胞的血管紧张素转化酶2受体(ACE2)，激活病毒入侵。

因此，现有技术主要聚焦于RBD靶向中和抗体的研发，用于直接阻断其与ACE2的相互作用，但单一阻断RBD/ACE2互作无法抵抗冠状病毒利用其他受体入侵。同时，冠状病毒RBD区域变异较快，针对RBD区域的抗体能否对变异的病毒起效仍存疑。另外，发明人在研究中发现，使用单一的RBD靶向抗体还可能会诱发冠状病毒产生抵抗性突变。此外，免疫细胞表面的Fc受体结合RBD阻断抗体还有可能激活促进S2膜融合机器的活化反而帮助病毒入侵。因此，开发靶向非RBD表位的抗体及其筛选方法对冠状病毒感染疾病的治疗意义重大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种靶向非RBD表位的抗冠状病毒抗体，以尝试替代现有的RBD靶向抗体，克服单一阻断RBD/ACE2互作无法抵抗冠状病毒利用其它受体入侵的缺陷，或与现有的RBD靶向抗体配合使用，降低长期使用单一的RBD靶向抗体诱发冠状病毒产生抵抗性突变的几率。

为解决上述问题，本发明第一方面提供了一种抗冠状病毒抗体，所述抗冠状病毒抗体可抑制冠状病毒刺突蛋白S1结构域与S2结构域的解离；和/或抑制冠状病毒刺突蛋白S2变构重排。

在一些优选的方案中，经所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力大于未经所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力。

在一些优选的方案中，经所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力与未经所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力之比大于等于1.2，优选地，经所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力与未经所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力之比大于等于1.2，或1.3，或1.4，或1.5等，更优选地该解离的力大于等于2。

在一些优选的方案中，经所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力与未经所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力之比为1.2～200；优选地，经所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力与未经所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力之比为1.2～100。

在另一优选例中，所述抗冠状病毒抗体特异性靶向冠状病毒的刺突蛋白S1结构域，和/或冠状病毒的刺突蛋白S2结构域。

在一些优选的方案中，所述测定抗体抑制冠状病毒刺突蛋白S1结构域和S2结构域解离的活性的方法为单分子力谱技术。优选地，所述单分子力谱技术包括：磁镊、光镊、原子力显微镜技术、生物膜力学探针技术、玻璃纤维技术；更优选地，所述单分子力谱技术为单分子磁镊技术。

在一些优选的方案中，通过单分子磁镊拉伸实验测定“冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力”；优选地，所述单分子磁镊拉伸实验包括依次重复执行步骤：(1)使用磁镊对冠状病毒的刺突蛋白施加力使其解离；和(2)将力减小至0pN静置使蛋白质恢复初态；(3)记录力的大小。

步骤(1)中，所述力的增加的加速度优选为0.8～1.2pN/s；例如1pN/s。

步骤(2)中，所述力的减小的加速度优选为-3～-6pN/s；例如-5pN/s。

步骤(2)中，所述静置的时间优选为50～70s；例如60s。

在一些优选的方案中，所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力为大于等于15pN；优选地，所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力为大于等于20pN；例如24.3pN。

在一些优选的方案中，所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力为15～2000pN；优选地，所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力为大于等于20～1000pN。

本发明第二方面提供了一种筛选抗冠状病毒抗体的方法，所述方法包括步骤：

(1)测定抗体抑制冠状病毒刺突蛋白S1结构域和S2结构域解离的活性；和/或

(2)测定抗体抑制冠状病毒刺突蛋白S2变构重排的活性。

在一些优选的方案中，步骤(1)中，所述测定抗体抑制冠状病毒刺突蛋白S1结构域和S2结构域解离活性步骤包括：

(A)测定未经抗体处理的刺突蛋白S1/S2解离的力的大小，记为F₁；和

(B)测定抗体处理后的刺突蛋白S1/S2解离的力的大小，记为F₂；

(C)筛选F₂大于F₁时的抗体，即得所述抗冠状病毒抗体。

在一些优选的方案中，所述步骤(1)前还包括步骤：

(I)筛选同时结合冠状病毒刺突蛋白S1结构域和S2结构域的抗体。

在一些优选的方案中，步骤(I)中，所述筛选同时结合冠状病毒刺突蛋白S1结构域和S2结构域的抗体包括步骤：

(a)从抗体库中筛选特异性结合刺突蛋白S1结构域的抗体；

(b)从特异性结合刺突蛋白S1的抗体中筛选特异性结合S2结构域的抗体。

本发明第三方面提供了一种由上述方法筛选获得的抗冠状病毒抗体。

在一些优选的方案中，所述抗体为单克隆抗体、多克隆抗体或纳米抗体。

在一些优选的方案中，所述抗冠状病毒抗体为人源化抗体。

本发明第四方面提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括所述的抗冠状病毒抗体以及药学可接受的载体。

本发明第五方面提供了上述抗冠状病毒抗体或药物组合物在制备预防和/或治疗冠状病毒所导致的疾病的药物中的应用。

在一些优选的方案中，所述冠状病毒所导致的疾病包括中东呼吸综合征(MERS)、严重急性呼吸综合征(SARS)和/或新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。

本发明第六方面提供了预防和/或治疗冠状病毒所导致的疾病的方法，所述方法包括向患者施用治疗有效量的上述的抗体，或其抗原结合片段；或者向患者施用包含有治疗有效量的上述的抗体，或其抗原结合片段的药物组合物。

在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

相对现有技术而言，本发明至少具有下述优点：

(1)本发明提供的抗冠状病毒抗体，由于其靶向非RBD表位，因此具有潜力替代现有的RBD靶向抗体，克服单一阻断RBD/ACE2互作无法抵抗冠状病毒利用其它受体入侵的缺陷，或与现有的RBD靶向抗体配合使用，降低长期使用单一的RBD靶向抗体诱发冠状病毒产生抵抗性突变的几率。

(2)本发明提供的筛选抗冠状病毒抗体的方法，应用全新的抑制冠状病毒刺突蛋白S1与S2解离或抑制S2变构重排的筛选策略，该策略可以广泛应用于冠状病毒的入侵阻断中。

附图说明

一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这些示例性说明并不构成对实施例的限定。

图1是根据刺突蛋白在抗体作用下S1与S2结构域解离力的大小的比较；

图2是刺突蛋白在抗体作用下S1与S2结构域解离的距离大小的比较；

图3是抗体作用下S1与S2结构域解离速率随力的变化示意图；

图4是抗体作用下假病毒感染ACE2表达的293T宿主细胞的效率示意图。

具体实施方式

如本文所用，术语“和/或”当用于连接两个或多个可选项时，应理解为意指可选项中的任一项或可选项中的任意两项或更多项。

如本文所用，术语“冠状病毒”的范围涵盖冠状病毒的四个主要亚组，分别为Alpha，Beta，Gamma和Delta。更具体地，在该术语下是指具有正向RNA基因组(ssRNA+)和具有螺旋对称的核衣壳的包膜病毒；以及基因组大小范围约为26至32千个碱基的大型RNA病毒；以及在电子显微镜下具有大球形表面突起特征形态的其他病毒，例如：HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV、MERS-CoV和SARS-CoV-2(2019-nCoV)等。

如本文所用，术语“抗体”涵盖完整抗体以及抗体片段。“抗体”包括自然生成的和人工生成的多克隆抗体、单克隆抗体和纳米抗体，具体地，术语“抗体”是指特异性识别和结合抗原的多肽或多肽复合物。所述抗体可以是完整的抗体及其任何抗原结合片段或其单链。因此，术语“抗体”包括分子中含有具有与抗原结合的生物学活性的免疫球蛋白分子的至少一部分的含蛋白质或肽，例如：人抗体、嵌合抗体、人源化抗体、灵长类源化抗体、镶饰的抗体、单链抗体以及结构域抗体等。

如本文所用，术语“表位”是指能够特异性结合抗体的蛋白质决定簇。表位通常由分子如氨基酸或糖侧链的化学活性表面基团组成，并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。

如本文所用，术语“刺突蛋白”和“突刺蛋白”和“棘突蛋白”和“S蛋白”和“s-protein”和“spike protein”之间可以互换使用，所述“刺突蛋白”由近N-末端S1结构域、近C端S2结构域，跨膜结构域和细胞内结构域组成。

如文本所用，术语“刺突蛋白S1/S2解离的力”是指解离刺突蛋白S1结构域和S2结构域之间的力。

如本文所用，术语“S1”是指冠状病毒刺突蛋白近N-末端的结构域，术语“S1”和“S1结构域”可互换使用。

如本文所用，术语“S2”是指冠状病毒刺突蛋白近C端的结构域，术语“S2”和“S2结构域”可互换使用。

如本文所用，术语“变构重排”是指生物分子发生任一种结构的改变，非限制性的例如：冠状病刺突蛋白的S1结构域和S2结构域发生解离，暴露S2结构域上的膜融合肽引起的S2结构的重组。

如文本所用，术语“RBD”是指冠状病刺突蛋白上的S1亚基的受体结合域，负责与细胞受体蛋白ACE2的结合。

如本文所用，术语“人源化抗体”是指一类工程化抗体，其具有源自非人供体免疫球蛋白的CDR，该人源化抗体的剩余免疫球蛋白部分是来源自一种(或多种)人免疫球蛋白。

如本文所用，术语“Trizol法”是指一种使用Trizol试剂提取RNA的方法，具体包括步骤培养组织细胞；Trizol试剂处理组织细胞离心取上清；氯仿处理组织细胞离心取上清；异丙醇处理组织细胞离心弃上清并干燥。

如本文所用，术语“OD600”是指某种溶液在600nm波长处的吸光值。

如本文所用，术语“药物组合物”是指该组合物具有适于对人类受试者进行预防性或治疗性给药的等级和纯度，并且与药学上可接受的载体，稀释剂，赋形剂和/或添加剂中的至少一种一起存在。

如上所述，本文所用的“药学上可接受的载体，赋形剂，佐剂，赋形剂或稀释剂”是本领域技术人员公知的，易于公众获得。优选地，药学上可接受的载体是对活性化合物具有化学惰性的载体和在使用条件下没有有害副作用或毒性的载体。

如本文所用，术语“治疗”是指治疗性治疗和预防性或防治性措施，其目的是预防或减缓(减少)不期望发生的生理改变或紊乱，例如自身免疫性疾病的进程。有益的或期望的临床结果包括但不限于以下无论是可检测还是不可检测的结果，包括症状的缓解、疾病程度的减小、疾病状态的稳定(即不恶化)、疾病进展的延迟或减缓、疾病状态的改善或缓和以及减轻(无论是部分还是全部)。“治疗”还意指与不接受治疗时预期的生存期限相比所延长的生存期限。需要治疗的包括那些已经患有病症或紊乱的人，以及那些容易患有病症或紊乱的人，或者那些需要预防该病症或紊乱的人。

除非另有说明，本文所用的所有科学和技术术语具有本领域常用的含义。这里提供的定义是为了便于理解这里经常使用的某些术语，而不是为了限制本公开的范围。

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合实施例对本发明的各实施方式进行详细的阐述。然而，本领域的普通技术人员可以理解，在本发明各实施方式中，为了使读者更好地理解本申请而提出了许多技术细节。但是，即使没有这些技术细节和基于以下各实施方式的种种变化和修改，也可以实现本申请所要求保护的技术方案。

实施例1抗冠状病毒抗体库构建

在健康羊驼颈部淋巴结附近每2周注射一次约1mg胞外域全长的刺突蛋白，共7次免疫；最后两次免疫期间进行羊驼颈部静脉取约60mL血液；通过离心的方式(25℃，400g，离心30分钟)分离得到淋巴细胞。

用Trizol法提取淋巴细胞总RNA，使用逆转录试剂盒建立相应的cDNA库；之后用PCR聚合酶从上述cDNA库中特异性地扩增抗体片段，并通过限制性内切酶与T4连接酶将其连接到噬菌体载体上；通过电转的方式将连接产物转化到SS320感受态细胞中，在抗性(四环素和氨苄)固体LB板上培养过夜；将含有抗性的细胞在抗性(四环素和氨苄)YT培养液扩增(37℃，220rpm)；当OD600≈0.5时，加入辅助噬菌体(辅助噬菌体数：细菌细胞数＝20:1)并继续培养30分钟；并用0.2mM的IPTG诱导30℃过夜培养；最后通过沉淀-离心的方式得到噬菌体库。

将胞外域全长的刺突蛋白包被好的免疫管与上述得到的噬菌体库进行选择性地结合(3％BSA，室温，1小时)；之后，用含有0.01％吐温的PBS清洗；用100mM Trimethymime洗脱结合的噬菌体；将洗脱的噬菌体再次扩增及纯化，并逐次减低包被胞外域全长的刺突蛋白浓度，经过多轮筛选得到胞外域全长的刺突蛋白特异的噬菌体库。最后通过ELISA鉴定并将相应的SS320菌落进行测序获得相应抗体的基因序列。

实施例2抗冠状病毒抗体筛选

(1)从抗体库中筛选同时结合冠状病毒刺突蛋白S1结构域和S2结构域的抗体

用2μg/mL的S1 4℃过夜包被聚苯乙烯微孔板；用含0.2％Tween-20的PBS溶液清洗上述微孔板；之后用含2％BSA的PBST溶液37℃封闭1小时；微孔板经PBST清洗后用含有不同浓度的抗体在37℃条件下孵育1小时；PBST清洗后，用辣根过氧化物酶偶连的二抗以1:10000的稀释倍数37℃孵育1小时；清洗后，加入TMB显色液，室温孵育10分钟；加入等体积的硫酸溶液终止反应，并在波长450nm处测定吸光值，筛选波长450nm处有响应的抗体，即得特异性结合刺突蛋白S1的抗体。

用2μg/mL的S2 4℃过夜包被聚苯乙烯微孔板，采用与筛选特异性结合刺突蛋白S1的抗体相同的方法从特异性结合刺突蛋白S1的抗体中筛选特异性结合刺突蛋白S2的抗体；或者先筛选特异性结合刺突蛋白S2的抗体，再筛选特异性结合刺突蛋白S1的抗体，即得同时结合冠状病毒刺突蛋白S1与S2的抗体。最终筛选出两个抗体记为抗体1和抗体2。

(2)通过单分子磁镊拉伸实验筛选抑制冠状病毒刺突蛋白S1结构域与S2结构域的解离或抑制冠状病毒刺突蛋白S2变构重排的抗体。

将筛选出的抗体1和抗体2进行单分子磁镊拉伸实验。

将盖玻片(尺寸分别是30×24mm和22×22mm)浸泡在10％浓度的Decon 90溶液中，30分钟后用双蒸水清洗盖玻片。将清洗完成的长玻片烘干后放入氧气等离子清洗机清洗5分钟，并将其浸泡在1％浓度的APTES甲醇溶液中对玻片表面进行氨基化修饰，60分钟后用甲醇和双蒸水先后分别清洗三次玻片。将长玻片烘干后，将其和短玻片按照“三明治”样式组装成实验小室(Chamber)，将Chamber放在85℃平台上，用镊子轻轻按压封口膜处提高其封闭性。挤压硅胶堆积在Chamber的玻片两头制造“蓄水池”，用于加入和吸出溶液。待硅胶凝固后，先加入PBS溶液清洗Chamber，随后加入0.5％浓度的戊二醛PBS溶液，使玻片表面醛基化。30分钟后，用PBS溶液清洗Chamber两次，加入100μL 50μg/mL的RBD单克隆抗体溶液，使RBD抗体共价连接到玻片表面上。10分钟后，加入30μL表面带有氨基修饰的聚苯乙烯小球(10⁷个/mL)，使小球通过共价连接固定至玻片表面。4小时后，用PBS溶液清洗Chamber两次，再用1％BSA的PBS溶液封闭Chamber。8小时或过夜后，从-80℃冰箱中取出刺突蛋白，将其稀释至存储浓度的1/10⁴～1/10⁶倍后加入Chamber中，使刺突蛋白的RBD区域被玻片表面的RBD抗体捕获。30分钟后，用PBS溶液清洗两边Chamber，接着将100uL BSA封闭的磁球(10⁶个/mL)加入Chamber中孵育20分钟，使刺突蛋白的C端通过生物素连接到带链霉亲和素蛋白(SA)的磁球上。

在显微镜下找到两端分别连接在磁球和玻片表面的刺突蛋白后开始做单分子磁镊实验。控制磁铁以1pN/s的力加载速度对蛋白质施加力，当力达到峰值后以-5pN的速度将力减小至0pN；观察刺突蛋白在力增加的过程中的S1/S2解离情况。观察到S1/S2解离后，等待时间60秒以保证蛋白质回到最初状态，如此反复执行上述过程。在确定刺突蛋白S1/S2发生力致解离后，记录其力的大小和距离变化的大小。

在Chamber中轻柔地加入一定浓度的实施例2筛选的抗体1溶液，将力维持在较低水平(～1pN)，等待20分钟，使待测抗体结合到刺突蛋白相应的抗原表位上。控制磁镊对刺突蛋白施加逐渐增加的力，统计此时刺突蛋白出现S1/S2解离时的力和距离变化的大小，并与没有加入待测抗体的数据进行比较。结果见图2。

同样的，在Chamber中轻柔地加入一定浓度的实施例2筛选的抗体2溶液，将力维持在较低水平(～1pN)，等待20分钟，使待测抗体结合到刺突蛋白相应的抗原表位上。控制磁镊对刺突蛋白施加逐渐增加的力，统计此时刺突蛋白出现S1/S2解离时的力和距离变化的大小，并与没有加入待测抗体的数据进行比较。结果见图2。抗体1使刺突蛋白出现S1/S2解离时的力约为24pN。

根据上述数据，根据Bell模型，分别得到的抗体1和抗体2对S1结构域与S2结构域解离速率影响情况，见图3。

实施例3抗冠状病毒抗体人源化改造

利用在线工具(例如IG Blast、IMGT/V-QUEST、AbYsis等)将得到的纳米抗体与人源抗体或成熟的人源化抗体的氨基酸序列划分为的骨架区(FR1到FR4区)和互补决定区(CDR1～CDR3区)；以人源抗体或成熟的人源化抗体为模板，保留骨架区(FR1到FR4区)，将其CDR1～CDR3区移植为目标纳米抗体的CDR1～CDR3，即CDR区移植法对纳米抗体进行人源化改造。将改造得到的人源化纳米抗体进行同源建模，对产生空间结构影响的CDR区进行适当地改造，并对其进行能量最小化优化，提升人源化纳米抗体结构的稳定性。

合成人源化抗体重链与轻链基因并在AbVec2.0-IGHG1载体上构建抗体表达的质粒；通过PEI脂质体瞬时转染的方式将其在Expi-293F细胞上分泌表达。取适量的ProteinA/G Beads用平衡液进行离心清洗(500g，3分钟；重复两次)；将上述Protein A/G Beads中加入Expi-293F细胞分泌的抗体溶液，混合孵育约30分钟；离心并用洗杂液清洗抗体富集的Protein A/G Beads(500g，3分钟；重复两次)；之后，加入5倍Protein A/G Beads体积的洗脱液，均匀混匀10分钟，离心(500g，3分钟)获得抗体上清液；之后，立即加入十分之一体积的中和液讲pH值调至7.4；之后通过离子交换柱及分子筛得到高纯度的抗体。

实施例4抗冠状病毒抗体中和效果鉴定

用PEI脂质体共转染新冠病毒刺突蛋白质粒(pCAG-SARS2-SΔC19)及辅助质粒(PLP1、PLP2、pCDH-CMV-CopGFP)到HEK 293T细胞中，50小时后获得SARS2-GFP假病毒。随后，取1mL上述SARS2-GFP假病毒溶液，并加入不同浓度的抗体1溶液，在24孔板中感染2×10⁵个表达ACE2的293T宿主细胞。12小时后更换新鲜DMEM完全培养基；细胞再培养36小时后用FACS检测GFP阳性的293T的比例，即指示新冠假病毒感染ACE2宿主细胞的效率。相比于对照组抗体2的中和效果，抗体1的加入显著地降低了新冠假病毒入侵的效率；并且随着其浓度的提高，新冠假病毒感染ACE2表达的293T宿主细胞的效率从15％降低到10％；结果见图4。

上述结果表明，抗体1使S1/S2解离时的力明显增加，约2倍左右，从而显著地降低了新冠假病毒入侵的效率；而抗体2使S1/S2解离时的力增加不明显，其降低新冠假病毒入侵的效率效果不及抗体1。显而易见地，采用本发明所述的抗冠状病毒抗体筛选的方法，通过对刺突蛋白S1/S2解离时的力的测定，筛选出的抗体可显著降低冠状病毒入侵的效率。

本领域的普通技术人员可以理解，上述各实施方式是实现本发明的具体实施例，而在实际应用中，可以在形式上和细节上对其作各种改变，而不偏离本发明的精神和范围。

Claims (12)

1.一种抗冠状病毒抗体，其特征在于，所述抗冠状病毒抗体可抑制冠状病毒刺突蛋白S1结构域与S2结构域的解离；和/或

抑制冠状病毒刺突蛋白S2变构重排。

2.根据权利要求1所述的抗冠状病毒抗体，其特征在于，所述抗体抑制冠状病毒刺突蛋白S1结构域与S2结构域的解离指经所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力大于未经所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力。

3.根据权利要求2所述的抗冠状病毒抗体，其特征在于，经所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力与未经所述抗冠状病毒抗体处理的冠状病毒的刺突蛋白S1/S2解离的力之比大于等于1.2。

4.一种筛选抗冠状病毒抗体的方法，其特征在于，所述方法包括步骤：

(1)测定抗体抑制冠状病毒刺突蛋白S1结构域和S2结构域解离的活性；和/或

(2)测定抗体抑制冠状病毒刺突蛋白S2变构重排的活性；

其中，所述测定抗体抑制冠状病毒刺突蛋白S1结构域和S2结构域解离的活性包括步骤：

(A)测定未经抗体处理的刺突蛋白S1/S2解离的力的大小，记为F₁；和

(B)测定抗体处理后的刺突蛋白S1/S2解离的力的大小，记为F₂；和

(C)筛选F₂大于F₁时的抗体，即得所述抗冠状病毒抗体。

5.根据权利要求4所述的筛选抗冠状病毒抗体的方法，其特征在于，所述测定抗体抑制冠状病毒刺突蛋白S1结构域和S2结构域解离的活性的方法为单分子力谱技术。

6.根据权利要求4或5任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)前还包括步骤：

(Ⅰ)筛选同时结合冠状病毒刺突蛋白S1结构域和S2结构域的抗体。

7.一种抗冠状病毒抗体，其特征在于，所述抗冠状病毒抗体由权利要求4～6中任一种方法筛选获得。

8.根据权利要求1或7任一项所述的抗冠状病毒抗体，其特征在于，所述抗冠状病毒抗体为人源化抗体。

9.一种药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包括权利要求7或8任一项所述的抗冠状病毒抗体以及药学可接受的载体。

10.根据权利要求1～3中任一项所述的抗冠状病毒抗体或者7或8任一项所述的抗冠状病毒抗体在制备预防和/或治疗冠状病毒所导致的疾病的药物中的应用。

11.根据权利要求9所述的抗冠状病毒抗体在制备预防和/或治疗冠状病毒所导致的疾病的药物中的应用。

12.根据权利要求10或11任一项所述的应用，其特征在于，所述冠状病毒所导致的疾病包括中东呼吸综合征(MERS)、严重急性呼吸综合征(SARS)和/或新型冠状病毒肺炎(COVID-19)。

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