CN114891085B

CN114891085B - 乳清过敏原β-乳球蛋白的IgE表位肽

Info

Publication number: CN114891085B
Application number: CN202210673422.XA
Authority: CN
Inventors: 李欣; 陈红兵; 熊子奕; 彭小雨; 潘丽娜; 李辉宇; 汪家琦; 张敏; 胡永芯; 谭宏凯; 武涌; 孟轩夷; 高金燕; 谢彦海; 戴智勇; 颜卫彬
Original assignee: Ausnutria Dairy China Co ltd
Current assignee: Ausnutria Dairy China Co ltd
Priority date: 2022-06-15
Filing date: 2022-06-15
Publication date: 2024-03-26
Anticipated expiration: 2042-06-15
Also published as: CN114891085A

Abstract

本发明涉及免疫学技术领域，尤其涉及乳清过敏原β‑乳球蛋白的IgE表位肽。本发明提供了β‑乳球蛋白的IgE结合表位，该表位是针对中国人群特异性的牛乳乳清过敏原的表位，对牛乳过敏发生的分子机制，指导定向打断表位的蛋白酶的筛选，以及基于表位的低过敏性乳清蛋白制品的开发具有重大意义。

Description

乳清过敏原β-乳球蛋白的IgE表位肽

技术领域

本发明涉及免疫学技术领域，尤其涉及乳清过敏原β-乳球蛋白的IgE表位肽。

背景技术

牛乳及乳制品因含有较高的营养价值而备受广大消费者的青睐，但牛乳过敏引发的食品安全问题也被人们广泛关注。牛乳及牛乳制品是WHO/FAO认定的八大类主要过敏食物之一。牛奶蛋白过敏(cow’smilk allergy,CMA)是生命早期的一种常见疾病，患病率为2％～7％，且呈现增加的趋势。CMA分为免疫球蛋白E(immunoglobulin E，IgE)介导、非IgE介导和混合(IgE与非IgE)介导。大约60％的CMA是IgE介导，即与体液免疫反应异常有关，尽管因研究人群和年龄的不同而略有差异。非IgE介导或两者混合介导的CMA相对少见。IgE介导的CMA发生机制是牛乳过敏原致敏机体免疫细胞并使之产生特异性IgE(specific IgE,sIgE)，随后sIgE与效应细胞结合使其处于致敏阶段；机体再次接触到同种过敏原会导致效应细胞脱颗粒和释放介质，如组胺等，最终导致皮肤系统、呼吸系统、胃肠道系统等出现临床症状，如湿疹、呼吸困难、腹痛、呕吐等，牛乳过敏严重时甚至会导致患者休克和死亡。

牛乳中含有三十多种蛋白质，都具有潜在致敏性。目前认为酪蛋白、β-乳球蛋白(β-lactoglobulin,BLG)和α-乳白蛋白(α-lactalbumin,ALA)是主要过敏原。在20℃条件下调节脱脂乳pH至4.6，可得到两部分：其中凝固状态的酪蛋白占80％，溶液状态的乳清蛋白占20％。乳清蛋白中主要过敏原是β-乳球蛋白和α-乳白蛋白，分别占乳清蛋白组分的50％和25％。β-乳球蛋白是一种属于脂钙蛋白超家族的具有162个氨基酸残基的视黄醇结合蛋白，在天然状态下以36kDa二聚体的形式存在，它具有两个二硫键和一个游离半胱氨酸。α-乳白蛋白是一种属于溶菌酶家族的具有123个氨基酸残基的单体球状钙结合金属蛋白，分子量为14.4kDa，具有四个二硫键和一个钙的高亲和力结合位点。有研究发现大约82％的牛乳过敏患者对β-乳球蛋白过敏，大约75％的牛乳过敏患者可对多种牛乳蛋白过敏。

表位是过敏反应的物质基础，可分为线性表位和构象性表位，前者由氨基酸残基线性排列组成，后者是氨基酸残基在空间相互靠近形成的能被免疫活性物质识别的特定三维结构。表位也可以按照表位的受体可分为T细胞表位与B细胞表位，B细胞表位指的是B细胞受体或B细胞分泌的特异性抗体识别的表位，如IgE表位和IgG表位。B细胞线性表位的长度通常有8～15个氨基酸。尽管有报道称线性表位可短至5个氨基酸，但能与IgE高活性结合的表位至少含有8个氨基酸。

近年来，肽阵列、噬菌体展示、X射线晶体学等技术都已经运用于食物过敏原表位的定位。噬菌体展示技术是一种基于噬菌体表面展示的目标多肽或蛋白进行筛选的体外选择系统，能实现抗体基因型和表现型的统一，由于其便捷、特异性强、操作方便等特点，被广泛用于表位定位。

目前，虽然对牛乳过敏蛋白，包括酪蛋白，β-乳球蛋白，α-乳白蛋白已进行了诸多的表位定位研究，但针对中国人群特异性的牛乳乳清过敏原的表位定位极少报道。为了更好的对食物过敏，特别是牛奶致敏性进行检测，本领域仍亟需对乳清过敏原的表位肽进行研究。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供具有良好特异性的乳清过敏原β-乳球蛋白的IgE表位肽。

本发明提的乳清过敏原的表位肽具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列。

本发明采用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)筛选获得12个牛乳过敏儿童患者的血清。然后以Hitrap Protein G HP亲和层析柱纯化的高纯度牛乳特异性抗体为靶分子，对噬菌体随机十二肽库进行亲和淘选。最后利用生物信息学进行预测，最后获得β-乳球蛋白的表位信息。本发明提供的表位肽来源于中国人群的血清。相对于筛选获得的其它表位肽而言，能够更准确的反映中国人群对乳制品中反应的表位特异性。

本发明中，乳清过敏原的表位肽具有如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，或为在SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中经取代、缺失或替代一个或多个氨基酸残基的多肽，或者为与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少70％同源性的且具有相同或相似功能的蛋白。所述与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列具有至少70％同源性，包括与SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的同源性为70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％同源性的多肽。一些具体实施例中，本发明提供的乳清过敏原的表位肽的氨基酸序列为Ala-Glu-Pro-Glu-Gln-Ser-Leu-Ala-Cys-Gln-Cys-Leu-Val-Arg-Thr-Pro-Glu-Val-Asp-Asp-Glu-Ala-Leu。

为了在体外实现对乳制品中过敏原的检测，或者筛选去除降低乳制品过敏原的试剂，需要以本发明所述的表位肽作为标志物进行检测。在检测试剂中，可以包括本发明所述的表位肽，也可以包括所述表位肽的抗体。因此，为了制备上述检测试剂，本发明还提供了如下i)～iii)中的至少一种：i)、编码所述表位肽的核酸；ii)、包含编码所述表位肽的核酸的质粒载体；iii)、转染或转化所述质粒载体的宿主细胞。

本发明所述宿主细胞的构建方法包括向宿主中转化或转染本发明所述的编码表位肽的核酸。

本发明还提供了所述表位肽的制备方法，包括化学合成或生物合成；

所述化学合成包括：按照SEQ ID NO:1所示的肽序，经偶联制得所述表位肽；

所述生物合成包括：培养本发明所述的宿主细胞，获得含有所述表位肽的培养物。

本发明还提供了乳清过敏原的抗体，其由所述的表位肽免疫动物制得。

本发明所述的抗体为单克隆抗体或多克隆抗体，本发明对此不做限定，其能够实现对所述表位肽的特异性识别即可。

本发明还提供了本发明所述表位肽的用途，其包括如下I)～III)中的至少一种：

I)、所述的表位肽作为靶点，在制备乳清过敏原检测试剂中的应用；

II)、所述的表位肽作为靶点，在制备筛选低致敏乳制品用蛋白酶的试剂中的应用；

III)、所述的表位肽在制备乳制品过敏诊断试剂中的应用。本发明还提供了一种乳清过敏原的检测试剂，其包括本发明所述的抗体。

本发明还提供了一种乳清过敏原的检测方法，其包括以所述的检测试剂对样品进行检测。

本发明所述的检测试剂是基于免疫反应的检测试剂，所述免疫学反应的检测包括但不限于酶联免疫吸附反应(ELISA)、胶体金免疫层析技术、免疫荧光偏振技术或荧光分析法。或者本发明所述的检测试剂是基于化学分析的检测试剂，所述化学分析的方法包括质谱和/或色谱。

进一步的，本发明还提供了一种低致敏乳制品生产用蛋白酶的筛选试剂，其包括本发明所述表位肽的检测试剂和酶解缓冲液。

更进一步的，本发明还提供了低致敏乳制品生产用蛋白酶的筛选方法，其包括以蛋白酶对所述表位肽进行酶解，根据酶解水平筛选获得用于低致敏乳制品的蛋白酶或蛋白酶组合。

具体的，所述低致敏乳制品生产用蛋白酶的筛选方法包括以本发明所述的筛选试剂对乳制品样品进行检测，然后以蛋白酶对乳制品进行酶解，再以本发明所述的筛选试剂对乳制品样品进行检测。根据酶解前后乳制品中表位肽的含量判断采用的蛋白酶是否适合用于低致敏乳制品的制备。例如，酶解后，表位肽含量显著降低，则该蛋白酶可以用于制备低致敏乳制品。

本发明还提供了低致敏乳制品的制备方法，其包括以本发明所述表位肽的肽段为底物，以蛋白酶进行酶解。本发明中，所述表位肽作为引起过敏反应的主要过敏原的表位，以蛋白酶对该表位肽进行酶解，能够获得低致敏乳制品。本发明中，所述酶解后还包括以本发明所述检测试剂进行检测的步骤。

本发明还提供了一种乳制品过敏检测的方法。本发明提供的表位肽能够与其抗体特异性结合，将其制备成为试剂，能够用于检测机体是否存在针对该表位肽的抗体，进而判断机体是否对乳制品过敏。所述检测的样品为血液、血清或血浆。

本发明还提供了一种乳制品过敏诊断试剂，其包括本发明所述的表位肽和/或能够特异性识别所述的表位肽的抗体的物质。

本发明提供了β-乳球蛋白的IgE结合表位，该表位是针对中国人群特异性的牛乳乳清过敏原的表位，对牛乳过敏发生的分子机制，指导定向打断表位的蛋白酶的筛选，以及基于表位的低过敏性乳清蛋白制品的开发具有重大意义。

附图说明

图1中A示：牛乳过敏患者(X轴)的BLG-sIgE(左Y轴)与ImmunoCAP(右Y轴)水平；B示牛乳过敏患者(X轴)的BLG-sIgG水平；

图2中A示Protein G柱纯化后的电泳图，M为蛋白Marker，泳道1为牛乳过敏患者血清池蛋白，泳道2为非特异性洗脱峰收集蛋白，泳道3为特异性洗脱峰收集蛋白；B示纯化抗体的水平；

图3示噬菌体的加入量为10¹²时的OD_450nm值；

图4示β-乳球蛋白的线性表位；

图5肽段的DNAstar多参数线性表位预测结果

图6斑点印迹验证肽段的IgE结合能力；左图示斑点印记结果，右图示血清稀释倍数；

图7细胞实验验证其脱颗粒效果；

具体实施方式

本发明提供了乳清过敏原β-乳球蛋白的IgE表位肽，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。

本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本发明：

实施例1

一、牛乳过敏患者血清池的构建

1、间接ELISA筛选牛乳过敏患者血清

本研究使用的过敏患者血清由北京协和医院惠赠。过敏患者血清中针对牛乳蛋白的sIgE水平由ImmunoCAP检测，选择牛乳蛋白sIgE水平大于等于0.35kUA/L并且年龄在3–12岁的血清进行ELISA。利用间接ELISA法测定牛乳过敏患者血清中抗β-乳球蛋白特异性免疫球蛋白E(β-lactoglobulin specific immunoglobulin E，BLG-sIgE)。

包被液为pH 9.6的0.05mol/L的碳酸盐缓冲液，洗液、封阻液、血清、二抗等均使用0.01M的PBS缓冲液稀释，洗液含有0.05％(v/v)Tween-20，封阻液含有3％明胶。β-乳球蛋白(Sigma-Aldrich)的包被浓度为1μg/mL，封阻后加入稀释好的过敏患者血清。测定IgG水平时，血清稀释倍数为2000倍。测定IgE水平时，血清稀释倍数为200倍取出酶标板扣干后洗涤三次，加入1:5000稀释的HRP标记羊抗人IgG(Sigma-Aldrich)或生物素标记羊抗人IgE(Sigma-Aldrich)。对于IgG板，二抗孵育结束后，直接取出酶标板扣干后洗涤三次，加入TMB底物溶液(欣博盛生物科技有限公司)，100μL/孔，37℃保温保湿15min。加入2mol/LH₂SO₄终止反应，50μL/孔。测定吸光度为450nm的吸光值。对于IgE板，二抗孵育结束后，还需额外加入亲和素(欣博盛生物科技有限公司)，具体步骤为：取出酶标板扣干后洗涤三次，加入1:60稀释的HRP标记的亲和素，37℃保温保湿1h。后续显色步骤与IgG板保持一致。以P/N＞2，且P＞0.2时血清判断为阳性，其中P和N分别为样品与阴性血清的OD_450nm值。

2、血清池的构建

根据间接ELISA结果，筛选出BLG-sIgE水平均呈现阳性的患者血清，取等体积血清混合得到血清池。

3、结果

3.1牛乳过敏患者β-乳球蛋白的特异性IgE水平测定

本研究中有75％(14份)牛乳过敏患者血清对β-乳球蛋白存在IgE阳性反应，实验结果说明β-乳球蛋白确实是主要过敏原，同从图1中A和图1中B中发现，ImmunoCAP的牛乳蛋白sIgE结果与ELISA结果存在差异，因为前者是通过粗蛋白进行检测，后者只检测了某一种组分蛋白，而部分不可能代表整体，后者会遗漏部分特异性抗体的检测。

3.2牛乳过敏患者血清池构建

6、10、11、16号血清的BLG-sIgE水平较低，而IgE是牛乳过敏的决定性抗日。因此，6、10、11、16号不参与血清池构建，其余12份混血清池。

二、牛乳特异性抗体的纯化

1、Protein G HP免疫层析柱一步亲和纯化抗体

先后采用200μL活化液(1M Tris-HCl,pH 9.0)和10倍柱体积的平衡缓冲液(20mMPBS,pH 7.4)冲洗亲和柱(美国GE公司)，流速均为1mL/min。采用平衡缓冲液以1:1(v/v)的比例稀释血清后通过0.45μm水系滤膜。过滤后的血清加入亲和柱后，将亲和柱上下的盖子旋紧，37℃摇动结合1h。以平衡缓冲液和洗脱液(0.1M glycine-HCl,pH 2.7)分别对亲和柱进行非特异性和特异性洗脱，流速均为1mL/min，收集流出液200μL/管。在收集特异性洗脱峰的过程中，加入中和液(1M Tris-HCl,pH9.0)到收集管，标准是每毫升特异性洗脱液中加入60至200μL中和液，直到pH达到7左右。特异性洗脱结束之后，分别用10倍柱体积的平衡缓冲液和20％乙醇洗涤亲和柱。收集到的非特异性洗脱液与特异性洗脱液用超滤离心管浓缩并更换缓冲液为0.01MPBS。

2、纯化抗体的纯度和浓度测定

采用还原型聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定纯化的抗体，采用BCA试剂盒(上海碧云天生物技术有限公司)鉴定浓度。将获得的抗体于-20℃冰箱保存。

3、纯化抗体的特异性评估

采用间接ELISA进行纯化抗体的IgE水平测定，做出如下调整：IgE水平测定时，样品(浓缩非特异性洗脱液与特异性洗脱液)的稀释倍数分别是20倍和200倍。

4、结果

4.1纯化抗体的纯度和浓度

经Protein G柱纯化后的IgE(泳道3)，在还原型电泳的结果中显示为两条蛋白条带，分别位于50kDa和25kDa，仅含有少量的杂蛋白，主要集中在125kDa左右。由图2中A可知，未经任何处理的血清含有较多的杂蛋白(泳道1)。泳道2为非特异性洗脱液，在72kDa附近有明显的条带，在50kDa处没有明显条带，说明其中的IgE已经被分离。经过Image J软件计算，泳道2(特异性IgE)的纯度达到90％。

4.2纯化抗体的特异性结果

由图2中B可知，特异性洗脱峰收集液中，BLG-sIgE水平很低，相反，非特异性洗脱液有较高的BLG-sIgE水平。

三、β-乳球蛋白的IgE表位的筛选

1、噬菌体展示技术筛选模拟表位

参考说明书，利用噬菌体随机十二肽库试剂盒(Biolabs公司)进行IgE模拟表位的淘选。第一轮到第四轮，包被的IgE浓度为600μg/mL、450μg/mL、300μg/mL、300μg/mL，洗液的浓度分别是0.1％、0.25％、0.5％、0.5％，噬菌体孵育结合时间分别是60min、45min、30min、30min，甘氨酸洗脱时间分别是6min、8min、10min、10min。逐步严格的淘选条件有助于选择到特异性更强的噬菌体序列。从第四轮测滴度的平板上挑取10株噬菌体送往金唯智公司进行测序，测序引物为-96III。

2、间接ELISA鉴定阳性噬菌体克隆

通过噬菌体ELISA检测所选多肽对抗体的结合。包被蛋白是2μg/mL的抗牛乳蛋白IgE，100μL/孔，包被于96孔微孔板上，4℃孵育过夜，同时包被3％BSA-PBS作阴性对照。倾去孔内液体，用含0.05％Tween-20的PBST洗涤三次。用3％的明胶封阻，300μL/孔，37℃孵育1h。洗板三次，加入经扩增纯化的噬菌体，100μL/孔，37℃孵育1h。加入的噬菌体数量有四组梯度，分别是10¹²、10¹⁰、10⁸、10⁶，阴性对照加入噬菌体量为10⁶，空白对照加PBS缓冲液。洗板六次，加入HRP标记的抗M13二抗(北京义翘神州科技股份有限公司)，100μL/孔，37℃孵育1h。洗板六次，加入TMB显色液，100μL/孔，37℃避光显色15min。加入2M H₂SO₄终止反应，50μL/孔，测定OD_450nm值。P/N＞2且P＞0.2时，噬菌体判断为阳性，其中P和N分别为样品与阴性对照的OD_450nm值。

3、生物信息学定位IgE表位

用于序列分析的β-乳球蛋白的氨基酸序列从NCBI数据库(www.ncbi.nlm.nih.gov)获取。使用DNAStar的Editseq软件模块对插入的噬菌体外源基因序列进行翻译。分别使用DNAman 7.0软件和The PepitopeServer网络服务器(http://pepitope.tau.ac.il/)进行线性表位与构象性模拟表位的定位。

4、结果

4.1亲和淘选到的噬菌体的测序

表1展示了淘选过程中噬菌体的富集效果，可以发现每经过一次淘选，噬菌体产出量和回收率都有所增加。在第四轮中，IgE洗脱噬菌体的产出量达到1.2×10⁵，表明特异性结合的噬菌体在此过程中得到了有效的富集。第四轮的平板中，在IgE组中挑选10个噬菌斑，分别命名为IgE1至IgE10，送往金唯智公司进行测序并获得19个12肽随机序列。表2展示了噬菌体外源序列。

表1儿童IgE四轮亲和淘选中噬菌体的富集

轮次	投入量(pfu)	IgE产出量(pfu)	IgE回收率
				1	2.0×10¹¹	9×10³	4.5×10^-8
2	2.0×10¹¹	1.3×10⁴	6.5×10^-8
				3	2.0×10¹¹	5×10⁴	2.5×10^-7
4	2.0×10¹¹	1.2×10⁵	6×10^-7

注：回收率＝回收量/文库投入量

表2噬菌体展示技术筛选的模拟表位

表位类型	蛋白质序列	表位类型	蛋白质序列
				IgE1	WAVGMNPDRDRT	IgE6	VYPLYRNPGVAM
IgE2	AAPTGFSGITLV	IgE7	DYSTLVRKVWLL
				IgE3	VVGRAMAYSTIP	IgE8	VSVPGIITGTLR
IgE4	NISSLALTEMWF	IgE9	VSVPGIITGTLR
				IgE5	VVGRAMAYSTIP	IgE10	TLSDLLGNPSFK

4.2噬菌体ELISA结果

采用间接ELISA检测所选多肽对抗体的结合能力。发现随着加入噬菌体数量的降低，吸光度也呈现降低的趋势。图3展示了噬菌体的加入量为10¹²时的OD_450nm值。发现除了IgE5，其余克隆子的OD_450nm值全部高于阴性对照组(Con组)的2倍，因此18个克隆子被判断为阳性克隆。

4.3β-乳球蛋白的IgE表位定位

使用软件DNAman7.0的多序列对比功能将噬菌体外源序列与β-乳球蛋白和β-乳球蛋白氨基酸序列进行对比，默认参数不变，分析肽段的识别位点与出现频率，含有连续重合三个氨基酸以上的肽序列和非连续重合五个氨基酸以上的肽序列被定义为线性表位。图4展示了β-乳球蛋白的线性表位，发现AA111-133是一种全新的牛乳β-乳球蛋白IgE表位，其氨基酸序列为：¹¹¹Ala-Glu-Pro-Glu-Gln-Ser-Leu-Ala-Cys-Gln-Cys-Leu-Val-Arg-Thr-Pro-Glu-Val-Asp-Asp-Glu-Ala-Leu¹³³。图5对该肽段的DNAstar多参数线性表位进行预测，结果表明：AA111-117和AA124-133的抗原指数(Antigenic Index)最高。

表3蛋白酶的限制性酶切位点

表4肽段的DNAstar多参数线性表位预测结果

四、β-乳球蛋白的IgE表位的验证

1、通过斑点印迹，确定该肽段与特异性抗体G反应效果明显(图6)。其中P代表牛乳过敏个体血清与该肽段的反应，N是非牛乳过敏的健康个体血清与该肽段的反应。通过比较斑点印记结果(左图)发现，该肽段与过敏患者血清呈现阳性反应，而与健康血清无反应，证明此肽段是牛乳过敏的表位序列。通过血清效价(右图)发现，即使过敏患者血清稀释倍数高达400000倍，该肽段仍能被识别，表明该肽段有较强的抗原性。而健康个体血清稀释倍数为100000倍时，该肽段无反应，表明该肽段不被健康个体识别。

2、通过人嗜碱性粒细胞实验，确定肽段可使效应性细胞出现脱颗粒现象明显(图7)。Control组采用磷酸盐缓冲液激发效应细胞，为阴性对照组；β-lactolglobulin组采用β-乳球蛋白激发，为阳性对照组；Epitope组采用肽段激发，为实验组。比较了三组的组胺(Histamine，His)、β-氨基己糖苷酶(β-hexaminoglycosidase，β-HEX)和白介素-6(Interleukin–6，IL-6)的释放量，发现Control组的三个指标释放量均最低，β-lactolglobulin组均最高，表明细胞模型建立成功。Control组和Epitope组的三个指标均存在显著性差异(P<0.05)，表明该肽段能有效激发效应细胞脱颗粒。

以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

序列表

<110> 澳优乳业（中国）有限公司

<120> 乳清过敏原β-乳球蛋白的IgE表位肽

<130> MP22014591

<160> 1

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

Ala Glu Pro Glu Gln Ser Leu Ala Cys Gln Cys Leu Val Arg Thr Pro

1 5 10 15

Glu Val Asp Asp Glu Ala Leu

20

Claims

1.乳清过敏原的表位肽，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

2.编码权利要求1所述表位肽的核酸、包含编码权利要求1所述表位肽的核酸的质粒载体，或表达权利要求1所述表位肽的宿主细胞。

3.权利要求1所述表位肽的制备方法，包括化学合成或生物合成；

所述化学合成包括：按照SEQ ID NO:1所示的肽序列，经偶联制得所述表位肽；

所述生物合成包括：培养权利要求2所述宿主细胞，获得含有所述表位肽的培养物。

4.权利要求1所述的表位肽的用途，包括如下I）~III）中的至少一种：

I）、所述的表位肽作为靶点，在制备乳清过敏原检测试剂中的应用；

II）、所述的表位肽作为靶点，在制备筛选低致敏乳制品用蛋白酶的试剂中的应用；

III）、所述的表位肽在制备乳制品过敏诊断试剂中的应用。

5.低致敏乳制品生产用蛋白酶的筛选方法，其特征在于，包括以蛋白酶对权利要求1所述表位肽进行酶解，根据酶解水平筛选获得用于低致敏乳制品的蛋白酶或蛋白酶组合。

6.低致敏乳制品的制备方法，其特征在于，包括以权利要求1所述表位肽为底物，以蛋白酶进行酶解。