CN114890552A - 一株多功能贝莱斯芽孢杆菌ap3菌株在盐碱水凡纳滨对虾养殖中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一株多功能贝莱斯芽孢杆菌(Bacillusvelezensis)AP3菌株在盐碱盐碱水凡纳滨对虾养殖中的应用，属于功能菌株技术领域。AP3菌株具有良好的胞外分泌蛋白酶和淀粉酶的能力，具有降低养殖水体亚硝酸盐和抑制微囊藻生长的能力。将所述AP3菌株与凡纳滨对虾饲料原料混合，加工成功能性对虾饲料，投喂盐碱盐碱水养殖的凡纳滨对虾，取得良好效果。本发明AP3菌株的应用能够明显提高凡纳滨对虾的体增重率和成活率，提高对虾的饲料消化率，降低凡纳滨对虾饲料系数，同时降低养虾水体中的亚硝酸盐和硝酸盐含量和虾池蓝藻水华的爆发率，为凡纳滨对虾绿色养殖下的营养调控提供一条新的途径。
Description
技术领域
本发明属于功能菌株技术领域，具体涉及一株多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3在盐碱水凡纳滨对虾养殖中的应用。
背景技术
凡纳滨对虾是原产于南太平洋沿岸水域的热带经济虾类，适盐范围0.5％～4.0％，该虾具有高蛋白质、低脂肪、维生素及矿物质含量丰富、含有人类所需的全部必需氨基酸等特点，是一种营养价值较高的虾类食品。自1988年引进中国后，逐步形成了从引种、育苗到养殖、加工、销售的完整产业链，并成为当前我国对虾养殖的主要品种。然而凡纳滨对虾养殖后期，由于投饵量的增加，残饵和粪便的积聚，致使养虾水体中亚硝酸盐居高不下，蓝藻水华时有发生，严重影响凡纳滨对虾的蜕壳生长，甚至爆发疾病，给养殖户造成较大经济损失。因此，凡纳滨对虾养殖面临的严峻问题。
通过检索，现有技术中报道贝莱斯芽孢杆菌的多种生物学功能，公开号CN202110531693.7的专利公开了一株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，应用于大塘的养殖虾，使大塘出虾产量提高了10～15％。公开号CN202110813315.8的专利公开了一株贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)新菌株T23，能促进水产动物生长、降低饲料系数、维护水产动物肠道健康及提高其抗病力作用。公开号CN202111268027.5的专利公开了贝莱斯芽孢杆菌菌株HYL-1具有广泛的抑菌和抗病效果，可用于防治罗汉果白绢病和香蕉枯萎病，同时还具有促进香蕉生长、加快香蕉花期和提高香蕉芽生发的作用，该菌株还可以合成IAA、产生铁载体、溶解无机磷和硅酸盐，此外，该菌株还可产生蛋白质水解酶和淀粉水解酶。在后期的生物防治、生物菌肥、食品加工等领域都具有良好的前景。公开号CN202111381184.7的专利公开了一种贝莱斯芽孢杆菌ZJK2，可对灰霉病或炭疽病具有良好的拮抗效果，制备的生物制剂可对桑树、葡萄和草莓等灰霉病及炭疽病起到显著的防治效果。公开号CN202111385265.4的专利公开了一株高产复合酶同时高效降解霉菌毒素的贝莱斯芽孢杆菌，不仅可有效降解AFB1，还具备高产蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶的能力。公开号CN202111482053.8的专利公开了一株贝莱斯芽孢杆菌菌株HT-9，能有效抑制白绢病菌生长。可见，贝莱斯芽孢杆菌通过发挥抑菌作用，具有抗多种植物病原菌的生物学特性。然而目前还没有关于贝莱斯芽孢杆菌解决盐碱水凡纳滨对虾养殖问题的报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一株多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株在盐碱水凡纳滨对虾养殖中的应用，所述AP3菌株具有良好的胞外分泌淀粉酶和蛋白酶的能力，具有很好的降低养殖水体亚硝酸盐的能力，还具有良好的微囊藻抑制能力，从而有效提高盐碱水凡纳滨对虾养殖的经济效益和生态效益。
本发明提供了一株多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株或其衍生产品在盐碱水凡纳滨对虾养殖中的应用。
优选的，所述衍生产品包括多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌剂或含多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株或所述菌剂的饲料。
优选的，所述多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌剂中活菌数为150～200亿/g。
优选的，所述菌剂的添加质量占所述饲料的质量的0.5‰～1‰。
优选的，所述盐碱水凡纳滨对虾养殖包括对凡纳滨对虾生长、饲料利用以及水体生态的影响。
优选的，对所述凡纳滨对虾生长的影响包括提高凡纳滨对虾的体增重率和成活率；
对所述饲料利用的影响包括提高对虾的饲料消化率；
对所述水体生态的影响包括降低养虾水体中的亚硝酸盐含量和降低虾池蓝藻水华的爆发率。
本发明提供了一株多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株或其衍生产品在提高动物饲料利用和/或消化吸收中的应用。
本发明提供了一株多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株或其衍生产品在降低水体中亚硝酸盐和硝酸盐含量中的应用。
本发明提供了一株多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株或其衍生产品在抑制水体中微囊藻水华爆发中的应用。
本发明提供了一株多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株或其衍生产品在盐碱水凡纳滨对虾养殖中的应用。实验证明，AP3菌株具有分泌蛋白酶和淀粉酶的特性，与空白对照组相比，能够明显提高凡纳滨对虾的体增重率和成活率，明显提高对虾的饲料消化率，明显降低凡纳滨对虾饲料系数，同时该菌株能够显著降低养虾水体中的亚硝酸盐含量，显著降低虾池蓝藻水华的爆发率，显著提高养虾经济效益和生态效益。
附图说明
图1为贝莱斯芽孢杆菌胞外产生的淀粉酶透明圈结果；
图2为贝莱斯芽孢杆菌胞外产生的蛋白酶透明圈结果；
图3为实施例1中对照组和实验组凡纳滨对虾养殖水体中亚硝酸盐和硝酸盐含量的比较结果；
图4为实施例1中对照组和实验组凡纳滨对虾养殖水体中微囊藻水华爆发率的比较结果；
图5为实施例2中对照组和实验组凡纳滨对虾养殖水体中亚硝酸盐和硝酸盐含量的比较结果；
图6为实施例2中对照组和实验组凡纳滨对虾养殖水体中微囊藻水华爆发率的比较结果；
图7为实施例3中对照组和实验组凡纳滨对虾养殖水体中亚硝酸盐和硝酸盐含量的比较结果；
图8为实施例3中对照组和实验组凡纳滨对虾养殖水体中微囊藻水华爆发率的比较结果。
具体实施方式
本发明提供了一株多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株或其衍生产品在盐碱水凡纳滨对虾养殖中的应用。
在本发明中，所述贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株分离自天津的凡钠滨对虾养殖池塘底泥。经过基因组测序，结果表明AP3菌株(AP3菌株的基因组登录号为CP094294和CP094295)为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)。
在本发明中，所述衍生产品优选包括多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌剂或含多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株或所述菌剂的饲料。所述多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌剂中活菌数优选为150～200亿/g，更优选为180亿/g。所述多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌剂的制备方法，优选包括以下步骤：将活化后的贝莱斯芽孢杆菌AP3置于种子培养基中(1％蛋白胨、0.5％酵母浸粉，NaCl1.2％),于34℃、160r/min培养24h，将种子液接种于固体发酵培养基(豆粕50％、NaCl 1％、水49％)中振荡培养48h，喷雾干燥得到菌剂。所述菌剂的添加质量优选占所述饲料的0.5‰～1‰。所述饲料为盐碱水凡纳滨对虾的常规饲料。在本发明实施例中，所述常规饲料优选购自天津凯源饲料有限公司。每天按照对虾体质量的3～5％投喂饲料。
在本发明中，所述盐碱水凡纳滨对虾养殖优选包括对凡纳滨对虾生长、饲料利用以及水体生态的影响。对所述凡纳滨对虾生长的影响优选包括提高凡纳滨对虾的体增重率和成活率。对所述饲料利用的影响包括提高对虾的饲料消化率。对所述水体生态的影响包括降低养虾水体中的亚硝酸盐含量和降低虾池蓝藻水华的爆发率。
在本发明中，所述盐碱水为盐度3～12，总碱度75～250mg/L。
鉴于所述AP3菌株具有良好的胞外分泌蛋白酶和淀粉酶的能力，本发明提供了一株多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株或其衍生产品在提高动物饲料利用和/或消化吸收中的应用。
本发明提供了一株多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株或其衍生产品在降低水体中亚硝酸盐和硝酸盐含量中的应用。
本发明提供了一株多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株或其衍生产品在抑制水体中微囊藻水华爆发中的应用。
下面结合实施例对本发明提供的一株多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株在盐碱水凡纳滨对虾养殖中的应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
一株贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株的分离和鉴定方法
从凡纳滨对虾养殖池底泥中分离纯化菌株AP3，经过菌落形态、菌株的显微观察和扫描电子显微镜观察及其16sDNA和全基因组测序，中基因组登录号为CP094294和CP094295，鉴定AP3菌株为贝莱斯芽孢杆菌。
实施例2
贝莱斯芽孢杆菌AP3菌剂的制备方法
将活化后的贝莱斯芽孢杆菌AP3置于种子培养基中(1％蛋白胨、0.5％酵母浸粉，NaCl 1.2％)，于34℃、160r/min培养24h，将种子液接种于固体发酵培养基(豆粕50％、NaCl1％、水49％)中振荡培养48h，喷雾干燥得到菌剂。
实施例3
贝莱斯芽孢杆菌AP3分解淀粉的实验
采用10-5CFU/mL贝莱斯芽孢杆菌AP3涂布于淀粉酶筛选培养基(配方:1％蛋白胨，0.5％酵母浸粉，NaCl 1.2％，pH值6.8)上，于34℃下培养2d，观察并测定透明圈直径。
结果见图1。由图1可见，贝莱斯芽孢杆菌AP3胞外淀粉酶透明圈。透明圈的直径与菌落直径比值为5.18。贝莱斯芽孢杆菌AP3具有良好的胞外分泌淀粉酶的能力。
实施例4
贝莱斯芽孢杆菌AP3分解蛋白质的实验
采用10-5CFU/mL贝莱斯芽孢杆菌AP3菌液涂布于蛋白酶筛选培养基(配方:1％蛋白胨，0.5％酵母浸粉，NaCl 1.2％，pH值6.5)上，34℃培养2d，观察并测定透明圈直径。
结果见图2。由图2可见，贝莱斯芽孢杆菌胞外蛋白酶透明圈。透明圈的直径与菌落直径比值为7.20。贝莱斯芽孢杆菌AP3具有良好的胞外分泌蛋白酶的能力。
实施例5
一株贝莱斯芽孢杆菌(AP3)在半咸盐碱水凡纳滨对虾养殖上的应用
将贝莱斯芽孢杆菌菌剂(150亿/g)与凡纳滨对虾饲料原料混合(1‰)，加工制作成功能性对虾饲料，进行凡纳滨对虾养殖实验，对照组不使用该芽孢杆菌，每天按照对虾体质量的3～5％投喂饲料。养殖实验持续90d。
结果表明：该芽孢杆菌明显提高凡纳滨对虾体增重、消化吸收率和成活率，明显降低凡纳滨对虾饲料系数(表1)，显著降低养虾水体的亚硝酸盐和硝酸盐含量(图3和表2)，明显降低养虾水体的微囊藻水华爆发率(图4和表2)，从而明显提高凡纳滨对虾养殖经济效益。
表1不同处理组凡纳滨对虾生长性能的比较
注：*表示与对照组相比差异显著(P＜0.05)，下同。
表2不同处理组凡纳滨对虾养殖水体亚硝酸盐、硝酸盐和微囊藻水华爆发率比较
注：*表示与对照组相比差异显著(P＜0.05)，下同。
实施例6
贝莱斯芽孢杆菌(AP3)及其在盐碱水凡纳滨对虾养殖上的应用
贝莱斯芽孢杆菌粉剂(180亿/g)与凡纳滨对虾饲料原料混合(0.75‰)，加工制作成功能性对虾饲料，进行凡纳滨对虾养殖实验，对照组不使用该芽孢杆菌，养殖实验持续90d。
结果表明：该芽孢杆菌明显提高凡纳滨对虾体增重、消化吸收率和成活率，明显降低凡纳滨对虾饲料系数(表3)，显著降低养虾水体的亚硝酸盐和硝酸盐含量(图5和表4)，明显降低养虾水体的微囊藻水华爆发率(图6和表4)，从而明显提高凡纳滨对虾养殖经济效益。
表3不同处理组凡纳滨对虾生长性能的比较
表4不同处理组凡纳滨对虾养殖水体亚硝酸盐、硝酸盐和微囊藻水华爆发率比较
实施例7
一株贝莱斯芽孢杆菌(AP3)及其在盐碱水凡纳滨对虾养殖上的应用
贝莱斯芽孢杆菌粉剂(200亿/g)与凡纳滨对虾饲料原料混合(0.5‰)，加工制作成功能性对虾饲料，进行凡纳滨对虾养殖实验，对照组不使用该芽孢杆菌，养殖实验持续90d。结果表明：该芽孢杆菌明显提高凡纳滨对虾体增重、消化吸收率和成活率，明显降低凡纳滨对虾饲料系数(表5)，显著降低养虾水体的亚硝酸盐和硝酸盐含量(图7和表6)，明显降低养虾水体的微囊藻水华爆发率(图8和表6)，从而明显提高凡纳滨对虾养殖经济效益。
表5不同处理组凡纳滨对虾生长性能的比较
表6不同处理组凡纳滨对虾养殖水体亚硝酸盐、硝酸盐和微囊藻水华爆发率比较
由上述实施例结果可知，经过室外池塘对比养殖试验及推广应用，贝莱斯芽孢杆菌(AP3)明显提高凡纳滨对虾的体增重率和成活率，明显提高对虾的饲料消化率，明显降低凡纳滨对虾饲料系数，显著降低养虾水体中的亚硝酸盐和硝酸盐含量，显著降低虾池蓝藻水华的爆发率，显著提高养虾经济效益和生态效益。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一株多功能贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)AP3菌株或其衍生产品在盐碱水凡纳滨对虾养殖中的应用。
2.根据权利要求1所述应用，其特征在于，所述衍生产品包括多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌剂或含多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株或所述菌剂的饲料。
3.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌剂中活菌数为150～200亿/g。
4.根据权利要求2所述应用，其特征在于，所述菌剂的添加质量占所述饲料的质量的0.5‰～1‰。
5.根据权利要求1～4任意一项所述应用，其特征在于，所述盐碱水凡纳滨对虾养殖包括对凡纳滨对虾生长、饲料利用以及水体生态的影响。
6.根据权利要求5所述应用，其特征在于，对所述凡纳滨对虾生长的影响包括提高凡纳滨对虾的体增重率和成活率；
对所述饲料利用的影响包括提高对虾的饲料消化率；
对所述水体生态的影响包括降低养虾水体中的亚硝酸盐含量和降低虾池蓝藻水华的爆发率。
7.一株多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株或其衍生产品在提高动物饲料利用和/或消化吸收中的应用。
8.一株多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株或其衍生产品在降低水体中亚硝酸盐和硝酸盐含量中的应用。
9.一株多功能贝莱斯芽孢杆菌AP3菌株或其衍生产品在抑制水体中微囊藻水华爆发中的应用。
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- 2022-04-22 CN CN202210428379.0A patent/CN114890552A/zh active Pending
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