CN114886834A - 美白精华液及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种美白精华液及其制备方法。本发明的美白精华液包括如下重量份的组分：4‑8份改性透明质酸钠、0.5‑0.8份角鲨烷、0.5‑1.0份蜂胶、40‑50份保湿剂、5‑10份皮肤调理剂、3‑5份中药精华提取物、0.1‑0.5份吸收促进剂、茯苓‑白桦汁共发酵物5‑8份、50‑80份水。本发明中添加了茯苓和白桦汁两种美白成分，制备了茯苓白桦汁共发酵物，相比单一的添加美白成分，本发明采用的是双发酵的方式对功效成分进行提取具备更好的美白效果，且通过发酵的处理降低了植物成分的致敏性，使得精华液变得安全有效。

Description

美白精华液及其制备方法
技术领域
本发明涉及护肤品技术领域，具体涉及美白精华液及其制备方法。
背景技术
随着城市化污染口益严重，皮肤问题越来越受到人们的关注，大多数的女性以及越来越多的男性都在寻找适合自己皮肤的护肤产品以解决自身的问题，这些问题主要集中于美白、补水、抗痘以及抗氧化等方面。然而，随着越来越多的美肤产品被曝光出含有各种对皮肤有害的重金属或激素等添加剂，化学护肤品安全问题也口益严重，安全的纯天然植物化妆品又迅速回归。
白桦(学名：Betula platyphylla Suk)属落叶乔木科，分布较广，中国长白山及大、小兴安岭均有成片纯林。在华北平原和黄土高原山区、西南山地亦为阔叶落叶林及针叶阔叶混交林中的常见树种。白桦汁是桦树树皮被划开或树干钻孔流出的新鲜汁液，无色或浅黄色，无沉淀及杂质，具有淡淡的桦树清香。其不仅具有独特的药理保健作用，广泛应用于饮品、药品与保健品中，更是最天然的护发护肤养料，具有抗氧化、美白、保湿等功效。
茯苓为好氧性真菌，菌丝体是多核菌丝，茯苓担抱子核相以双核为主，茯苓最开始记载在《神农本草经》上也收载在各个版本的《中国药典》中。茯苓的应用非常广泛，在中药的方剂配伍中占据很重要的位置，其与其他药材搭配使用的概率高达70％。茯苓除作为药材外，还被应用于现代食品中，常被加工成各种糕点、酥糖、夹饼以及茯苓粥等。当代药理学研究结果显示茯苓具备镇静催眠、杀虫等方面的生理活性。茯苓的主要生物活性成分是多糖和三萜类物质，具备多种良好的美白皮肤的生物活性基础。
中国专利CN 103919714 B公开了一种美白组合物，由以质量百分比计的以下组分组成：烟酰胺1-20％，熊果苷1-5％，肉碱1-10％，当归根提取物0.1-1％，桑树皮提取物0.1-1％，芍药根提取物0.1-1％，白芨根提取物0.1-1％，茯苓根提取物0.01-0.5％，白术根提取物0.01-0.5％，珍珠提取物0.01-0.5％，甘油10-50％，余量为水。具有优异的美白嫩肤效果，并能保湿滋养肌肤，长期使用具有抗皱功效。
中国专利CN 108578282 A公开了一种含白茯苓提取物的美白淡斑乳液的制备方法，包括：制备白茯苓提取物、制备甘草提取物、制备玛咖提取物、提取荞麦淀粉，制备颗粒状冷水可溶荞麦淀粉，制备乳液。该发明以植物提取物作为活性成分，具有良好的保湿功效和美白功效。
但现有技术中美白护肤品的功能还较为单一，而选用多种功效成分结合后又提高了护肤产品的致敏性，因此制备出一种成分天然、低敏性美白保湿效果好的精华液显得尤为重要。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了美白精华液及其制备方法，技术方案如下：
美白精华液，包括如下重量份的组分：4-8份改性透明质酸钠、0.5-0.8份角鲨烷、0.5-1.0份蜂胶、40-50份保湿剂、5-10份皮肤调理剂、3-5份中药精华提取物、0.1-0.5份吸收促进剂、茯苓-白桦汁共发酵物5-8份、50-80份水。
所述改性透明质酸钠是质量比为1：2-3的丁酰化透明质酸钠和三氟乙酰化透明质酸钠的混合。
所述改性透明质酸钠的制备方法，包括如下步骤：
1)脱乙酰化透明质酸钠的制备：称取5.0-10.0g透明质酸钠、2.5-5.0g硫酸肼与100-150mL一水合肼中，搅拌24-48h至完全溶解得体系1，将体系1加热至60-80℃保温0.5-1小时，加入200-300mL70-90wt％乙醇水溶液，出现白色絮状沉淀，过滤，收集滤饼，将滤饼置于40-60℃干燥箱中干燥6-8h后，将滤饼加入20-30mL 3-6wt％的乙酸水溶液和0.5-1mol/L的碘酸水溶液的混合液中得体系2，体系2在0-5℃下反应1-2h后加入3-5wt％的碘甲烷水溶液得体系3，体系3在20-40℃下反应10-30min后用80-99wt％乙醚水溶液萃取2-3次，收集水层，向水层中加入0.5-1mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH值至7-7.5得体系4，向体系4中加入200-300mL 70-90wt％乙醇水溶液，有白色絮状沉淀析出，过滤收集滤饼，将滤饼按料液比1:10-20g/mL溶解在水中，用10kDa-14kDa的透析袋透析48-72h，完毕后离心，取上层清液-15～-25℃冷冻干燥冻干12-24h后得脱乙酰化透明质酸钠；
2)丁酰化透明质酸钠的制备：称取0.1-0.5g步骤(1)制备的脱乙酰化透明质酸钠溶解于50-80mL水中，加入10-12mL饱和NaHCO3水溶液得体系5，向体系5中加入10-12mL丁酸酐，20-40℃下反应1-2h后加热至80-100℃反应5-10min，减压旋蒸除去溶剂，将旋蒸后得到的固体按料液比1:5-10g/mL与水混合后用10kDa-14kDa的透析袋透析48-72h，完毕后离心，取上层清液-15～-25℃冷冻干燥冻干12-24h后得丁酰化透明质酸钠；
3)三氟乙酰化透明质酸钠的制备：称取0.1-0.5g步骤(1)制备的脱乙酰化透明质酸钠溶解于50-80mL水中，加入10-12mL饱和NaHCO3水溶液得体系5，向体系5中加入10-12mL三氟乙酸酐，20-40℃下反应1-2h后加热至80-100℃反应5-10min，减压旋蒸除去溶剂，将旋蒸后得到的固体按料液比1:5-10g/mL与水混合后用10kDa-14kDa的透析袋透析48-72h，完毕后离心，取上层清液-15～-25℃冷冻干燥冻干12-24h后得三氟乙酰化透明质酸钠。
由于透明质酸钠的水溶性很好，且中存在羧基、羟基等多个活性基团，所以发明人通过酸酐与羟基反应在透明质酸钠上引入丁酰基、三氟乙酰基等疏水性基团形成双亲性的透明质酸钠，通过测试发现引入疏水基团的透明质酸钠的抗酶解能力大大增强。
所述的保湿剂为甘油、丁二醇、1，3-丙二醇、羟乙基脲、1,2-戊二醇、聚谷氨酸、芦芭油、甜菜碱中的一种或两种及两种以上的混合；
优选的保湿剂为甘油、芦芭油的混合，三者质量比为2-3：1。
所述皮肤调理剂为卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、鲸蜡醇中的一种或两种及两种以上的混合；优选的皮肤调理剂为质量比为2-3:1-2的氢化大豆卵磷脂和鲸蜡醇的混合。
所述中药精华提取物包括如下重量份的组分：10-15份黄芪、10-15份甘草、10-15份人参、10-15份紫芝。
所述中药精华提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)称取干燥的黄芪、甘草、人参、紫芝粉碎、过筛混合均匀得中药粉备用；
(2)将步骤(1)所得中药粉按料液比为1：10-20g/mL与水混合，在90-110℃下提取2-3次，每次0.5-1小时，将提取完毕的混合物过滤，分离得滤液L1和滤渣；
(3)将步骤(2)所得滤渣按料液比为1：10-20g/mL与75-90wt％乙醇水溶液混合，在20-40℃下超声提取1-2小时，将提取完毕的混合物过滤，分离得滤液L2和滤渣；
(4)将滤液L1和L2合并，减压除去溶剂得固体，将固体置于40-60℃干燥箱中干燥20-24h得中药精华提取物。
所述吸收促进剂为氮酮、羧甲基纤维素、薄荷醇、冰片、N-甲基吡咯烷酮中的一种或两种及两种以上的混合。
优选的吸收促进剂为质量比为2-3:2-3的薄荷醇与N-甲基吡咯烷酮的混合。
所述茯苓-白桦汁共发酵物采用如下方法制备而成：称重180～200g马铃薯，洗净、去皮、切成小块，加1～1.5L水煎煮10～15min，用5～6层纱布过滤，取滤汁，再称取葡萄糖18～20g.KH2PO4 1.2～1.5g、MgSO4 1～1.2g、VB1 0.05～0.06g、琼脂粉23～25g，加10～15mL水升温置50～60℃下搅拌溶解后与马铃薯滤汁混合，再加入500～600mL水混匀后灭菌20～30min再冷却凝固，将茯苓菌种接人斜面培养基中间位置，置于26～28℃恒温培养箱中培养5～6d，得到活化的茯苓菌接种；将灭菌后的白桦汁用水稀释8～10倍，再将活化后的茯苓菌种接种在白桦汁中，置于28～30℃，150～160rpm下培养48～72h后灭菌冷却至室温于4000～4500rpm下离心10～15min，取上清液冷冻干燥即得茯苓-白桦汁共发酵物。
进一步的，所述茯苓菌在白桦汁中的接种量为2～3wt％。
本发明还公开了上述美白精华液的制备方法，包括如下步骤：
S1：将改性透明质酸钠、角鲨烷、蜂胶、保湿剂、茯苓-白桦汁共发酵物、水混合均匀，然后升温至70-90℃，保温1-2小时得混合液1；
S2：向步骤S1制得的混合液1中加入皮肤调理剂和中药精华提取物搅拌均匀后将体系温度降低为20-40℃得混合液2；
S3：向混合液2中加入吸收促进剂，搅拌均匀后得到美白精华液。
本发明中所用中药组分的说明：
黄芪，为豆科植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。性甘，微温。归肺、脾经。补气升阳，固表止汗，利水消肿，生津养血，行滞通痹，托毒排脓，敛疮生肌。用于气虚乏力，食少便溏，中气下陷，久泻脱肛，便血崩漏，表虚自汗，气虚水肿，内热消渴，血虚萎黄，半身不遂，痹痛麻木，痈疽难溃，久溃不敛。产自甘肃省定西市陇西县。
甘草，为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhizainflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根茎。性甘，平。归心、肺、脾、胃经。补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药。用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。产自甘肃省定西市陇西县。
人参，为五加科植物人参Panax ginseng C.A.Mey.的干燥根和根茎。性甘、微苦，微温。归脾、肺、心、肾经。具有大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津养血，安神益智功效。用于体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少，肺虚喘咳，津伤口渴，内热消渴，气血亏虚，久病虚羸，惊悸失眠，阳痿宫冷。产自吉林省白山市抚松县。
紫芝，又名紫灵芝、黑芝、木芝，为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum(Leyss.exFr.)Karst.或紫芝Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang的干燥子实体。性甘，平。归心、肺、肝、肾经。补气安神，止咳平喘。用于心神不宁，失眠心悸，肺虚咳喘，虚劳短气，不思饮食。产自山东冠县。
本发明首先对透明质酸钠引入丁酰基、三氟乙酰基进行疏水改性，制备双亲性的透明质酸钠，提高透明质酸钠的抗酶解能力；蜂胶、角鲨烷可以通过修复皮肤屏障、吸收空气中的水分、填充胶质细胞间的缝隙、阻止或延缓水分蒸发的方式达到良好的保湿效果；添加保湿剂赋予精华液更好的保湿效果；加入皮肤调理剂和吸收促进剂能很好的改善精华液吸收不好的问题，同时添加中药精华提取物通过合理搭配各种中药，通过协同作用有效提高精华液的自身补水能力和锁水能力，减少皮肤缺水引起的衰老。
在此基础上，本发明添加了茯苓和白桦汁两种美白成分，制备了茯苓白桦汁共发酵物，相比单一的添加美白成分，本发明采用的是双发酵的方式对功效成分进行提取。双向发酵又称共发酵，双向发酵是指采用具有一定生物活性的中药材，再将经过活化的菌种加入其中进行发酵。其双向性体现在药性基质不仅满足了真菌的要求，又可被真菌的生长代谢所改变，从而改变自身的成分、产生新活性功能等。同时双向发酵能够增强活性成分的功效以及吸收能力。本发明制备的茯苓白桦汁共发酵物具备更好的美白效果，且通过发酵的处理降低了植物成分的致敏性，使得精华液变得安全有效。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
透明质酸钠：购买自华熙生物科技股份有限公司，型号为HA-TLM，分子量为10kDa-1000kDa。
角鲨烷：购买自武汉拉那白医药化工有限公司，含量为99％，货号为680001，熔点为38℃，密度为0.81g/mL，折射率为1.452，沸点为176℃。
蜂胶：购买自长葛市瑞建蜂业有限公司，纯度为99％，色泽为黑褐色，黄酮含量≥14。
甘油：购买自济南奥斯利化工有限公司，有效成分含量为99.7％，密度为1.26g/mL。
芦芭油：购买自武汉华翔科洁生物技术有限公司，含量为99％，外观为无色透明水溶性低粘度流动性液体。
氢化大豆卵磷脂：购买自武汉华翔科洁生物技术有限公司，含量为99％，酸值<40，碘值<10，炽灼残渣<10％，干燥失重<2％，重金属<20ppm。
鲸蜡醇：购买自湖北科沃德化工有限公司，有效物质含量为99％，密度为0.8±0.1g/cm3，沸点为310.9±5.0g/cm3，闪点为135.0±0.0℃，熔点为49-51℃。
薄荷醇：购买自上海研生实业有限公司，纯度≥98％，熔点为41-43℃。
N-甲基吡咯烷酮，购买自广州远达新材料有限公司，外观为无色液体，型号为01。
透明质酸酶：购买自上海阿拉丁生化科技股份有限公司，纯度≥300IU/mg，货号为H298749-300UN。
茯苓菌种购自广东省微生物病菌保藏中心，保藏号为GIM5.219。
对比例1
精华液的制备，包括如下步骤：
S1：将6g透明质酸钠、0.5g角鲨烷、0.8g蜂胶、45g保湿剂、60g去离子水混合均匀，然后升温至80℃，保温2小时得混合液1；所述保湿剂为质量比为2：1的甘油和芦芭油的混合；
S2：向步骤S1制得的混合液1中加入9g皮肤调理剂和4g中药精华提取物搅拌均匀后将体系温度降低为30℃得混合液2；所述皮肤调理剂为质量比为2:1的氢化大豆卵磷脂和鲸蜡醇的混合；
S3：向混合液2中加入0.5g吸收促进剂，搅拌均匀后得到透明质酸钠精华液；所述吸收促进剂为质量比为2:3的薄荷醇与N-甲基吡咯烷酮的混合。
所述中药精华提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)称取干燥的10g黄芪、10g甘草、10g人参、10g紫芝粉碎、过40目筛混合均匀得中药粉备用；
(2)将步骤(1)所得中药粉按料液比为1:20g/mL与水混合，在90℃下提取2次，每次0.5小时，将提取完毕的混合物过滤，分离得滤液L1和滤渣；
(3)将步骤(2)所得滤渣按料液比为1:10g/mL与75wt％乙醇水溶液混合，在30℃下超声提取1小时，将提取完毕的混合物过滤，分离得滤液L2和滤渣；
(4)将滤液L1和L2合并，减压除去溶剂得固体，将固体置于60℃干燥箱中干燥24h得中药精华提取物。
实施例1
精华液的制备，包括如下步骤：
S1：将6g改性透明质酸钠、0.5g角鲨烷、0.8g蜂胶、45g保湿剂、60g去离子水混合均匀，然后升温至80℃，保温2小时得混合液1；所述改性透明质酸钠为丁酰化透明质酸钠；所述保湿剂为质量比为2:1的甘油和芦芭油的混合；
S2：向步骤S1制得的混合液1中加入9g皮肤调理剂和4g中药精华提取物搅拌均匀后将体系温度降低为30℃得混合液2；所述皮肤调理剂为质量比为2:1的氢化大豆卵磷脂和鲸蜡醇的混合；
S3：向混合液2中加入0.5g吸收促进剂，搅拌均匀后得到透明质酸钠精华液；所述吸收促进剂为质量比为2:3的薄荷醇与N-甲基吡咯烷酮的混合。
所述改性透明质酸钠的制备方法，包括如下步骤：
1)脱乙酰化透明质酸钠的制备：称取5.0g透明质酸钠、3.0g硫酸肼与120mL一水合肼中，搅拌24h至完全溶解得体系1，将体系1加热至60℃保温0.5小时，加入200mL 90wt％乙醇水溶液，出现白色絮状沉淀，过滤，收集滤饼，将滤饼置于60℃干燥箱中干燥8h后，将滤饼加入30mL 5wt％的乙酸水溶液和0.5mol/L的碘酸水溶液的混合液中得体系2，体系2在4℃下反应1h后加入3wt％的碘甲烷水溶液得体系3，体系3在30℃下反应30min后用99wt％乙醚水溶液萃取3次，收集水层，向水层中加入0.5mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH值至7得体系4，向体系4中加入200mL 90wt％乙醇水溶液，有白色絮状沉淀析出，过滤收集滤饼，将滤饼按料液比1:10g/mL溶解在水中，用14kDa的透析袋透析72h，完毕后离心，取上层清液-25℃冷冻干燥冻干24h后得脱乙酰化透明质酸钠；
2)丁酰化透明质酸钠的制备：称取0.2g步骤(1)制备的脱乙酰化透明质酸钠溶解于50mL水中，加入10mL饱和NaHCO3水溶液得体系5，向体系5中加入12mL丁酸酐30℃下反应1h后加热至100℃反应5min，减压旋蒸除去溶剂，将旋蒸后得到的固体按料液比1:5g/mL与水混合后用14kDa的透析袋透析72h，完毕后离心，取上层清液-25℃冷冻干燥冻干24h后得丁酰化透明质酸钠。
所述中药精华提取物的制备方法同对比例1。
实施例2
精华液的制备，包括如下步骤：
S1：将6g改性透明质酸钠、0.5g角鲨烷、0.8g蜂胶、45g保湿剂、60g去离子水混合均匀，然后升温至80℃，保温2小时得混合液1；所述改性透明质酸钠为三氟乙酰化透明质酸钠；所述保湿剂为质量比为2:1的甘油和芦芭油的混合；
S2：向步骤S1制得的混合液1中加入9g皮肤调理剂和4g中药精华提取物搅拌均匀后将体系温度降低为30℃得混合液2；所述皮肤调理剂为质量比为2:1的氢化大豆卵磷脂和鲸蜡醇的混合；
S3：向混合液2中加入0.5g吸收促进剂，搅拌均匀后得到透明质酸钠精华液；所述吸收促进剂为质量比为2:3的薄荷醇与N-甲基吡咯烷酮的混合。
所述改性透明质酸钠的制备方法，包括如下步骤：
1)脱乙酰化透明质酸钠的制备：称取5.0g透明质酸钠、3.0g硫酸肼与120mL一水合肼中，搅拌24h至完全溶解得体系1，将体系1加热至60℃保温0.5小时，加入200mL 90wt％乙醇水溶液，出现白色絮状沉淀，过滤，收集滤饼，将滤饼置于60℃干燥箱中干燥8h后，将滤饼加入30mL 5wt％的乙酸水溶液和0.5mol/L的碘酸水溶液的混合液中得体系2，体系2在4℃下反应1h后加入3wt％的碘甲烷水溶液得体系3，体系3在30℃下反应30min后用99wt％乙醚水溶液萃取3次，收集水层，向水层中加入0.5mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH值至7得体系4，向体系4中加入200mL 90wt％乙醇水溶液，有白色絮状沉淀析出，过滤收集滤饼，将滤饼按料液比1:10g/mL溶解在水中，用14kDa的透析袋透析72h，完毕后离心，取上层清液-25℃冷冻干燥冻干24h后得脱乙酰化透明质酸钠；
2)三氟乙酰化透明质酸钠的制备：称取0.2g步骤(1)制备的脱乙酰化透明质酸钠溶解于50mL水中，加入10mL饱和NaHCO3水溶液得体系5，向体系5中加入12mL三氟乙酸酐30℃下反应1h后加热至100℃反应5min，减压旋蒸除去溶剂，将旋蒸后得到的固体按料液比1:5g/mL与水混合后用14kDa的透析袋透析72h，完毕后离心，取上层清液-25℃冷冻干燥冻干24h后得三氟酰化透明质酸钠。
所述中药精华提取物的制备方法同对比例1。
实施例3
精华液的制备方法，包括如下步骤：
S1：将6g改性透明质酸钠、0.5g角鲨烷、0.8g蜂胶、45g保湿剂、60g去离子水混合均匀，然后升温至80℃，保温2小时得混合液1；所述改性透明质酸钠为质量比为1:2的丁酰化透明质酸钠和三氟乙酰化透明质酸钠的混合；所述保湿剂为质量比为2:1的甘油和芦芭油的混合；
S2：向步骤S1制得的混合液1中加入9g皮肤调理剂和4g中药精华提取物搅拌均匀后将体系温度降低为30℃得混合液2；所述皮肤调理剂为质量比为2:1的氢化大豆卵磷脂和鲸蜡醇的混合；
S3：向混合液2中加入0.5g吸收促进剂，搅拌均匀后得到透明质酸钠精华液；所述吸收促进剂为质量比为2:3的薄荷醇与N-甲基吡咯烷酮的混合。
所述改性透明质酸钠的制备方法，包括如下步骤：
1)脱乙酰化透明质酸钠的制备：称取5.0g透明质酸钠、3.0g硫酸肼与120mL一水合肼中，搅拌24h至完全溶解得体系1，将体系1加热至60℃保温0.5小时，加入200mL 90wt％乙醇水溶液，出现白色絮状沉淀，过滤，收集滤饼，将滤饼置于60℃干燥箱中干燥8h后，将滤饼加入30mL 5wt％的乙酸水溶液和0.5mol/L的碘酸水溶液的混合液中得体系2，体系2在4℃下反应1h后加入3wt％的碘甲烷水溶液得体系3，体系3在30℃下反应30min后用99wt％乙醚水溶液萃取3次，收集水层，向水层中加入0.5mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH值至7得体系4，向体系4中加入200mL 90wt％乙醇水溶液，有白色絮状沉淀析出，过滤收集滤饼，将滤饼按料液比1:10g/mL溶解在水中，用14kDa的透析袋透析72h，完毕后离心，取上层清液-25℃冷冻干燥冻干24h后得脱乙酰化透明质酸钠；
2)丁酰化透明质酸钠的制备：称取0.2g步骤(1)制备的脱乙酰化透明质酸钠溶解于50mL水中，加入10mL饱和NaHCO3水溶液得体系5，向体系5中加入12mL丁酸酐30℃下反应1h后加热至100℃反应5min，减压旋蒸除去溶剂，将旋蒸后得到的固体按料液比1:5g/mL与水混合后用14kDa的透析袋透析72h，完毕后离心，取上层清液-25℃冷冻干燥冻干24h后得丁酰化透明质酸钠；
3)三氟乙酰化透明质酸钠的制备：称取0.2g步骤(1)制备的脱乙酰化透明质酸钠溶解于50mL水中，加入10mL饱和NaHCO3水溶液得体系5，向体系5中加入12mL三氟乙酸酐30℃下反应1h后加热至100℃反应5min，减压旋蒸除去溶剂，将旋蒸后得到的固体按料液比1:5g/mL与水混合后用14kDa的透析袋透析72h，完毕后离心，取上层清液-25℃冷冻干燥冻干24h后得三氟酰化透明质酸钠。
所述中药精华提取物的制备方法同对比例1。
实施例4
美白精华液的制备，包括如下步骤：
S1：将6g改性透明质酸钠、0.5g角鲨烷、0.8g蜂胶、45g保湿剂、5g茯苓-白桦汁共发酵物、60g去离子水混合均匀，然后升温至80℃，保温2小时得混合液1；所述改性透明质酸钠为质量比为1:2的丁酰化透明质酸钠和三氟乙酰化透明质酸钠的混合；所述保湿剂为质量比为2:1的甘油和芦芭油的混合；
S2：向步骤S1制得的混合液1中加入9g皮肤调理剂和4g中药精华提取物搅拌均匀后将体系温度降低为30℃得混合液2；所述皮肤调理剂为质量比为2:1的氢化大豆卵磷脂和鲸蜡醇的混合；
S3：向混合液2中加入0.5g吸收促进剂，搅拌均匀后得到透明质酸钠精华液；所述吸收促进剂为质量比为2：3的薄荷醇与N-甲基吡咯烷酮的混合。
所述改性透明质酸钠的制备方法，包括如下步骤：
1)脱乙酰化透明质酸钠的制备：称取5.0g透明质酸钠、3.0g硫酸肼与120mL一水合肼中，搅拌24h至完全溶解得体系1，将体系1加热至60℃保温0.5小时，加入200mL 90wt％乙醇水溶液，出现白色絮状沉淀，过滤，收集滤饼，将滤饼置于60℃干燥箱中干燥8h后，将滤饼加入30mL 5wt％的乙酸水溶液和0.5mol/L的碘酸水溶液的混合液中得体系2，体系2在4℃下反应1h后加入3wt％的碘甲烷水溶液得体系3，体系3在30℃下反应30min后用99wt％乙醚水溶液萃取3次，收集水层，向水层中加入0.5mol/L的氢氧化钠水溶液调节pH值至7得体系4，向体系4中加入200mL 90wt％乙醇水溶液，有白色絮状沉淀析出，过滤收集滤饼，将滤饼按料液比1:10g/mL溶解在水中，用14kDa的透析袋透析72h，完毕后离心，取上层清液-25℃冷冻干燥冻干24h后得脱乙酰化透明质酸钠；
2)丁酰化透明质酸钠的制备：称取0.2g步骤(1)制备的脱乙酰化透明质酸钠溶解于50mL水中，加入10mL饱和NaHCO3水溶液得体系5，向体系5中加入12mL丁酸酐30℃下反应1h后加热至100℃反应5min，减压旋蒸除去溶剂，将旋蒸后得到的固体按料液比1:5g/mL与水混合后用14kDa的透析袋透析72h，完毕后离心，取上层清液-25℃冷冻干燥冻干24h后得丁酰化透明质酸钠；
3)三氟乙酰化透明质酸钠的制备：称取0.2g步骤(1)制备的脱乙酰化透明质酸钠溶解于50mL水中，加入10mL饱和NaHCO3水溶液得体系5，向体系5中加入12mL三氟乙酸酐30℃下反应1h后加热至100℃反应5min，减压旋蒸除去溶剂，将旋蒸后得到的固体按料液比1:5g/mL与水混合后用14kDa的透析袋透析72h，完毕后离心，取上层清液-25℃冷冻干燥冻干24h后得三氟酰化透明质酸钠。
所述中药精华提取物的制备方法同对比例1。
所述茯苓-白桦汁共发酵物采用如下方法制备得到：称重200g马铃薯，洗净、去皮、切成小块，加1L水煎煮15min，用6层纱布过滤，取滤汁，再称取葡萄糖20g.KH2PO4 1.5g、MgSO4 1.2g、VB1 0.05g、琼脂粉25g，加10mL水升温置50℃下搅拌溶解后与马铃薯滤汁混合，再加入500mL水混匀后灭菌20min再冷却凝固，将茯苓菌种接人斜面培养基中间位置，置于26℃恒温培养箱中培养6d，得到活化的茯苓菌接种；将灭菌后的白桦汁用水稀释10倍，再将活化后的茯苓菌种按照2wt％的接种量接种在白桦汁中，置于28℃，1500rpm下培养48h后灭菌冷却至室温于4000rpm下离心10min，取上清液冷冻干燥即得茯苓-白桦汁共发酵物。
测试例
抗酶性能测试：称取透明质酸钠1.0g，各加入1mL浓度为862U·mL-1的透明质酸酶溶液，37℃保温降解65h。取1mL酶解液加入4mL99wt％乙醇水溶液，离心15min，取上清液作为甲液；另外准确称取透明质酸钠1.0g，各加入0.5mol/L硫酸水溶液5mL，沸水浴水解15min，加水稀释至50mL作为乙液；精密取甲、乙各1.0mL于具塞试管中，用硫酸咔唑显色法测定糖醛酸的含量。透明质酸钠的抗酶解性用R表示，计算公式为R＝1-0.625M/N，其中M为甲液的糖醛酸含量，N为乙液的糖醛酸含量，实施例3制备的丁酰化透明质酸钠和三氟乙酰化透明质酸钠的性能测试同上。测试结果为透明质酸钠的抗酶解性为39.56％，丁酰化透明质酸钠的抗酶解性为82.12％，三氟乙酰化透明质酸钠的抗酶解性为84.65％。
保湿效果测试：测定条件为温度20±2℃，相对湿度为50％±3％，挑选20-30岁年龄段的皮肤健康无过敏性疾病的受试者40名，所有受试者近一月内没有使用过激素类药物和免疫抑制剂且未参与其他临床试验，受试者分4组，每组10名，选取左前臂内侧相同区域5cm×5cm处为受试部位，清洁后，分别均匀涂抹0.1mL对比例1和实施例1-3制得的透明质酸钠精华液，用皮肤水分测试仪测定涂抹样品前及涂抹样品30min后皮肤水分含量，每组样品平行测试3次，计算皮肤水合度增长率。皮肤水合度增长率计算公式如下：
皮肤水合度增长率＝(MWVt-MWV0)/MWV0×100％
MWV0为涂抹样品之前皮肤水分含量，MWVt为涂抹t时间后皮肤水分含量。
测试所得结果如表1所示：
表1：保湿效果测试
Figure BDA0003631578790000151
皮肤水合作用是指皮肤外层角蛋白或其降解产物具有的与水结合的能，水合度是指角质层含水量的多少。水合作用会让皮肤角质层含水量增加，从而阻止变软，胶质细胞充盈，细胞间隙含水量增加，间隙变大，有利于活性成分的经皮渗透。从表1的数据可知，由改性透明质酸钠制备得到的精华液的保湿效果明显强于由普通透明质酸钠制备得到的精华液。可能的原因是对透明质酸钠引入疏水基团后，自组装形成两亲性胶束，通过物理包载的方式将中药精华提取物及其它原料载入胶束形成的疏水性内核中，提高中药精华提取物及其它原料的溶解性和生物利用度，从而提高了精华液的保湿性能。
自由基清除率测试：测试对象为对比例1、实施例1-3制备的透明质酸钠精华液；试剂为1，1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、无水乙醇；DPPH的配制：准确称取20mg DPPH，用95wt％无水乙醇定容至250mL备用；待测试样的配制：分别取20mg对比例1、实施例1-3制备的透明质酸钠精华液，用99.9wt％乙醇水溶液定容至250mL备用。
测试步骤为取2mL配制的待测试样及2mL DPPH溶液置于带塞的试管中，置于恒温箱中37℃下恒温1h，以99.9wt％乙醇水溶液为空白对照，在紫外分光光度计中波长为517nm下测定各待测试样的吸光度Ai，并按下式计算清除率：清除率＝[1-(Ai-Aj)/Ac]×100％
Ac为2mL 99.9wt％乙醇水溶液加2mL DPPH溶液的吸光度；
Ai为2mL待测试剂加2mL DPPH溶液的吸光度；
Aj为2mL待测试剂加2mL 99.9wt％乙醇水溶液的吸光度；
每个待测试样测三组平行样，求平均值，测试结果如表2所示：
表2：自由基清除率
Figure BDA0003631578790000161
Figure BDA0003631578790000171
一般情况下，在自由基的作用下，皮肤中的胶原蛋白会发生反应，使皮肤得不到足够的营养供应，造成皮肤组织活力下降，失去弹性，产生皱纹、肤色暗沉等。从表2的数据可知，所制备的透明质酸钠精华液具有很好的清除自由基的性能。可能的原因是改性后的透明质酸钠的抗酶解能力增强，减缓了透明质酸钠的降解，使其在皮肤中的保存的时间延长，能更充分地与自由基发生反应，自由基能更好地被清除。两种双亲性的透明质酸钠上的亲水基团羟基、羟基发生分子间的反应形成氢键交联结构，抗酶能力更好，使得制得的精华液具有更好的清除自由基的能力，而实施例4中引入了茯苓及白桦汁成分也进一步增强了精华液的抗氧化活性。
美白评价测试：参考(上海日用化学品行业协会团体标准T/SHRH015-2018)中的测试方法进行测试。具体步骤为：使用10mL试管设立样品管(T)、样品本底(T0)、酶反应管(C)和溶剂本底(C0)，每一样品的每个受试浓度的样品管(T)需设立3支平行管，同时酶反应管(C)也需设立3支平行管。在样品管(T)和样品本底(T0)中各加入1mL相同浓度的样品溶液，酶反应管(C)和溶剂本底(C0)则分别加入1mL磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液。在样品管(T)和酶反应管(C)中各加入0.5mL酪氨酸酶溶液，样品本底(T0)与溶剂本底(C0)以0.5mL磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液代替，将样品和酪氨酸酶充分混匀，置37℃水浴槽孵育10分钟。依次在各管中加入2mL的左旋多巴溶液，控制每管反应时间为5分钟，即刻将各管反应溶液移入比色皿中，在475nm处测定吸光值。计算公式如下：
Figure BDA0003631578790000172
表3：酪氨酸酶活性抑制率测试结果表
Figure BDA0003631578790000173
Figure BDA0003631578790000181
由表3可知，加入了茯苓-白桦汁共发酵物的精华液具有显著的美白功效，对酪氨酸酶活性的抑制作用越强，说明抑制黑色素生成的效果越好。实施例4采用的是双发酵的方式对功效成分进行提取，不仅满足了真菌的要求，又可被真菌的生长代谢所改变，从而改变自身的成分，同时双向发酵能够增强活性成分的功效以及吸收能力。本发明制备的茯苓白桦汁共发酵物具备更好的美白效果，且通过发酵的处理降低了植物成分的致敏性，使得精华液变得安全有效。

Claims (10)

1.美白精华液，其特征在于，包括如下重量份的组分：4-8份改性透明质酸钠、0.5-0.8份角鲨烷、0.5-1.0份蜂胶、40-50份保湿剂、5-10份皮肤调理剂、3-5份中药精华提取物、0.1-0.5份吸收促进剂、茯苓-白桦汁共发酵物5-8份、50-80份水。
2.如权利要求1所述的美白精华液，其特征在于，所述茯苓-白桦汁共发酵物采用如下方法制备而成：称重180～200g马铃薯，洗净、去皮、切成小块，加1～1.5L水煎煮10～15min，用5～6层纱布过滤，取滤汁，再称取葡萄糖18～20g.KH2PO4 1.2～1.5g、MgSO4 1～1.2g、VB10.05～0.06g、琼脂粉23～25g，加10～15mL水升温置50～60℃下搅拌溶解后与马铃薯滤汁混合，再加入500～600mL水混匀后灭菌20～30min再冷却凝固，将茯苓菌种接人斜面培养基中间位置，置于26～28℃恒温培养箱中培养5～6d，得到活化的茯苓菌接种；将灭菌后的白桦汁用水稀释8～10倍，再将活化后的茯苓菌种接种在白桦汁中，置于28～30℃，150～160rpm下培养48～72h后灭菌冷却至室温于4000～4500rpm下离心10～15min，取上清液冷冻干燥即得茯苓-白桦汁共发酵物。
3.如权利要求1所述的美白精华液，其特征在于：所述改性透明质酸钠由丁酰化透明质酸钠与三氟乙酰化透明质酸钠混合而成。
4.如权利要求1所述的美白精华液，其特征在于：所述改性透明质酸钠由质量比为1:2-3的丁酰化透明质酸钠与三氟乙酰化透明质酸钠混合而成。
5.如权利要求1所述的美白精华液，其特征在于：所述保湿剂为甘油、丁二醇、1，3-丙二醇、羟乙基脲、1,2-戊二醇、聚谷氨酸、芦芭油、甜菜碱中的一种、两种或两种以上的混合。
6.如权利要求1所述的美白精华液，其特征在于：所述皮肤调理剂为卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、鲸蜡醇中的一种或两种及两种以上的混合。
7.如权利要求1所述的美白精华液，其特征在于：所述皮肤调理剂为氢化大豆卵磷脂与鲸蜡醇的混合。
8.如权利要求1所述的美白精华液，其特征在于，所述中药精华提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)称取干燥的黄芪、甘草、人参、紫芝粉碎、过筛混合均匀得中药粉备用；
(2)将步骤(1)所得中药粉按料液比为1:10-20g/mL与水混合，在90-110℃下提取2-3次，每次0.5-1小时，将提取完毕的混合物过滤，分离得滤液L1和滤渣；
(3)将步骤(2)所得滤渣按料液比为1:10-20g/mL与75-90wt％乙醇水溶液混合，在20-40℃下超声提取1-2小时，将提取完毕的混合物过滤，分离得滤液L2和滤渣；
(4)将滤液L1和L2合并，减压除去溶剂得固体，将固体置于40-60℃干燥箱中干燥20-24h得中药精华提取物。
9.如权利要求1所述的美白精华液，其特征在于：所述吸收促进剂为氮酮、羧甲基纤维素、薄荷醇、冰片、N-甲基吡咯烷酮中的一种或两种及两种以上的混合。
10.如权利要求1-9任一项所述的美白精华液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1：将改性透明质酸钠、角鲨烷、蜂胶、保湿剂、水混合均匀，然后升温至70-90℃，保温1-2小时得混合液1；
S2：向步骤S1制得的混合液1中加入皮肤调理剂和中药精华提取物搅拌均匀后将体系温度降低为20-40℃得混合液2；
S3：向混合液2中加入吸收促进剂，搅拌均匀后得到透明质酸钠精华液。
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