CN114854712B - 玉米ZmWAK02基因在提高玉米灰斑病抗性中的应用 - Google Patents

玉米ZmWAK02基因在提高玉米灰斑病抗性中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了玉米ZmWAK02基因在提高玉米灰斑病抗性中的应用，属于分子生物学技术领域。本发明提供了与灰斑病抗病性相关的蛋白质及其编码基因。本发明的蛋白质是一种细胞壁相关激酶(Wall‑associatedkinase)，其可通过基因ZmWAK02编码得到。本发明还提供了植物抗灰斑病的方法，包括：提高植物中ZmWAK02的活性和/或含量，从而提高目的植物对灰斑病的抗病性。转基因材料表型分析显示：导入ZmWAK02基因能够提高感病玉米自交系超过30％的灰斑病抗病性。ZmWAK02的遗传转化研究可为玉米抗灰斑病育种提供基因资源和理论支撑。

Description

玉米ZmWAK02基因在提高玉米灰斑病抗性中的应用
技术领域
本发明属于分子生物学育种技术领域，具体涉及玉米ZmWAK02基因在提高玉米灰斑病抗性中的应用。
背景技术
玉米(Zea mays L.)是世界重要粮食作物之一，全球总产量超过10亿吨，其不仅可以作为口粮，也是动物饲料和生物能源的主要原料，并在工业生产上具有非常广泛的用途。
灰斑病是玉米最常见的病害之一，大面积爆发可造成减产超过50％；近年来，灰斑病在玉米产区持续流行，已经成为严重威胁玉米产量和品质的主要病害，并有向更大范围扩散的趋势。灰斑病的防治主要依赖于抗病品种的选育，筛选可用的抗病种质资源并利用分子标记辅助选择育种(Molecular marker-assisted selection,MAS)是实现快速培育抗灰斑病玉米新品种的有效途径。前人研究通过田间表型考察筛选得到了一部分抗灰斑病的玉米种质资源，并进一步运用多种遗传分析手段鉴定到了大量与玉米抗灰斑病相关的数量性状位点(Quantitative trait loci,QTL)，然而在实际育种过程中，其中很多抗病QTL由于效应小和区间过大等原因难以被利用。目前已有的研究成果还远远无法满足当前针对玉米抗灰斑病分子育种的需求。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供玉米ZmWAK02基因在提高玉米灰斑病抗性中的应用，ZmWAK02基因为玉米主效抗灰斑病基因，ZmWAK02基因能够有效提高玉米灰斑病抗性。
本发明提供了与灰斑病抗病性相关的蛋白质，包括a1)～a3)所述蛋白质中的一种或几种：
a1)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白质；
a2)将a1)所述的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与植物灰斑病抗病性相关的蛋白质；
a3)来源于玉米且与a1)所述的蛋白质具有95％以上同一性且与植物灰斑病抗病性相关的蛋白质。
本发明还提供了编码上述方案所述蛋白质的核酸分子。
优选的，所述核酸分子包括b1)～b3)所述核酸分子中的一种或几种：
bl)ZmWAK02基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示；
b2)来源于玉米且与bl)具有95％以上同一性的核酸分子；
b3)与bl)或b2)限定的核苷酸序列杂交的核酸分子。
本发明还提供了含有上述方案所述核酸分子的DNA分子、表达盒、重组载体或重组微生物。
本发明还提供了上述方案所述蛋白质或者所述的核酸分子或者所述的DNA分子、表达盒、重组载体或重组微生物的在调控植物的灰斑病抗病性中的应用；优选的，所述植物包括玉米。
优选的，所述调控植物的灰斑病抗病性包括提高植物的灰斑病抗病性。
本发明还提供了一种用于检测玉米灰斑病抗病性的引物组，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的下游引物。
本发明还提供了一种植物转基因育种的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入上述方案所述的核酸分子或者所述的DNA分子、表达盒、重组载体或重组微生物，得到灰斑病抗病性增强的转基因植物。
优选的，所述出发植物优选的包括玉米。
本发明还提供了一种植物育种方法，包括如下步骤：增加目的植物中上述方案所述蛋白质的含量和/或活性；所述目的植物优选的包括玉米。
本发明提供了与灰斑病抗病性相关的蛋白质。本发明的蛋白质是一种细胞壁相关激酶(Wall-associated kinase)，其可通过基因ZmWAK02编码得到。基因ZmWAK02是利用遗传学的方法在玉米第1号染色体上分离的主效抗灰斑病基因。转基因材料表型分析显示：导入ZmWAK02基因能够提高感病玉米自交系超过30％的灰斑病抗病性。ZmWAK02的遗传转化研究可为玉米抗灰斑病育种提供基因资源和理论支撑。
附图说明
图1为PMB2362表达载体的物理图谱；
图2为转基因互补试验表型；其中，A为转基因玉米的抗灰斑病表型比较(整株)；左边为转基因阳性材料，包含ZmWAK02基因并表现为抗灰斑病表型；右边为转基因阴性材料，不包含ZmWAK02基因并表现为感灰斑病表型；B为转基因玉米的抗灰斑病表型比较结果(单个叶片)；上方为转基因阳性材料，包含ZmWAK02基因并表现为抗灰斑病表型；下方为转基因阴性材料，不包含ZmWAK02基因并表现为感灰斑病表型；C为转基因植株灰斑病病情评分，对来自两个独立家系(L1和L2)的阳性和阴性植株评分，数据以平均值±标准差表示，每一列顶部的数字表示用于比较的样本量，学生t检验(双尾检验)表明，阳性和阴性植株的灰斑病抗性存在显著差异，****P<0.0001，每个灰点或灰色方块代表单个植株的病情严重程度；
图3为实施例1中扩增片段1电泳图；
图4为实施例1中扩增片段2电泳图；
图5为实施例1中阳性克隆电泳结果；
图6为玉米灰斑病病情分级标准。
具体实施方式
本发明提供了与灰斑病抗病性相关的蛋白质，包括a1)～a3)所述蛋白质中的一种或几种：
a1)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白质，具体为：
a2)将a1)所述的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的与植物灰斑病抗病性相关的蛋白质；
a3)来源于玉米且与a1)所述的蛋白质具有95％以上同一性且与植物灰斑病抗病性相关的蛋白质。
本发明的蛋白质是一种细胞壁相关激酶(Wall-associated kinase)，在玉米自然群体中非常稀有，其可通过基因ZmWAK02编码得到。
本发明还提供了编码上述方案所述蛋白质的核酸分子。
在本发明中，所述核酸分子包括b1)～b3)所述核酸分子中的一种或几种：
bl)ZmWAK02基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，具体为：
gtgcgcgttt tcttcgactg gaaggactac ctcaggttct acgacatggg cacgtactggccctacacgc cctccatcca gctcctctac ggcctccgca ccgcgctcga cctcatcttc gaggaagggctggacaacgt cgtgaggagg cacaaccgcc ttgggacagc caccaggctc gccgtcgagg cgtgggggctcagcaactgc tgccagaagg aggagtggtt cagcgacacc gtcaccgccg tcgtcgtgcc gcccaacatcgacagcgccg aggtcgtcag gcacgcgtgg aagcggtaca acctcagcct cggcctcggc ctcaacaaggtcgccgggaa ggtcttcagg atcggccatc tcggcaacct caacgaggta ctgcactgca gagtttggcaattcgtttaa ttaattaatc agtgcaacgt actatatctt gatgctccca aacattattt tttttttcttcttctttgtc agctgcaact tctgggatgt ctgagcggtg tggagatggt gctcaaggat gtggggtacccagtgaaact aggtagcggc gtggcagccg cggcggcgta cctgtcaaac tccacgccgc tcatcccatctaggatctga gaacaatgta aggggaggat atcgcaaaca aggccagcga caacgagtgg gcagacgaacgaacaaagcg ttgctacata gtactctctt agaatgtaaa gttaaatttc acacccagct gttgctacatagtagtatag ttttatgaat tacaggtttg attaaacttc aaattaatct acatgtatag ccctgcccagatttaactat attgggaccg tattacttac cgatcaactc tgctttacag tagtagtctt tttgtttctgaaatcagatc ataagacatg 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b2)来源于玉米且与bl)具有95％以上同一性的核酸分子；
b3)与bl)或b2)限定的核苷酸序列杂交的核酸分子。
在本发明中，SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列包含了启动子和终止子。
在本发明中，基因ZmWAK02是利用遗传学的方法在玉米第1号染色体上分离的主效抗灰斑病基因。转基因材料表型分析显示：导入ZmWAK02基因能够提高感病玉米自交系超过30％的灰斑病抗病性。ZmWAK02的遗传转化研究可为玉米抗灰斑病育种提供基因资源和理论支撑。
本发明还提供了含有上述方案所述核酸分子的DNA分子、表达盒、重组载体或重组微生物。
在本发明中，所述重组载体的原始载体优选的包括转基因载体pZZ01523，插入位点为图1所示载体图谱上的2865～12200bp。
本发明对构建所述DNA分子、表达盒、重组载体或重组微生物的方法没有特殊限制，采用本领域的常规方法即可。
本发明还提供了上述方案所述蛋白质或者所述的核酸分子或者所述的DNA分子、表达盒、重组载体或重组微生物的在调控植物的灰斑病抗病性中的应用。
在本发明中，所述调控植物的灰斑病抗病性包括提高植物的灰斑病抗病性。
在本发明中，所述植物优选的包括玉米，更优选的包括高感灰斑病的玉米；在本发明具体实施过程中，所述高感灰斑病的玉米为玉米自交系KN5585。本发明运用转基因技术，在高感灰斑病的玉米中表达ZmWAK02抗病基因能够提高玉米灰斑病的抗性。
本发明还提供了一种用于检测玉米灰斑病抗病性的引物组，包括核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的下游引物。
本发明还提供了一种植物转基因育种的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入上述方案所述的核酸分子或者所述的DNA分子、表达盒、重组载体或重组微生物，得到灰斑病抗病性增强的转基因植物。
在本发明中，所述出发植物优选的包括玉米，更优选的包括高感灰斑病的玉米；在本发明具体实施过程中，所述高感灰斑病的玉米为玉米自交系KN5585。
本发明还提供了一种植物育种方法，包括如下步骤：增加目的植物中上述方案所述蛋白质的含量和/或活性；所述目的植物优选的包括玉米，更优选的包括高感灰斑病的玉米；在本发明具体实施过程中，所述高感灰斑病的玉米为玉米自交系KN5585。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。
实施例1：
ZmWAK02克隆
构建ZmWAK基因组互补载体：以SB12基因组DNA为模板克隆了ZmWAK基因的基因组序列(包含其自身约3kb启动子和约2kb终止子)，并将它构建到转基因载体pZZ01523中(图1)；由于克隆的基因序列过长，利用高保真DNA聚合酶难以直接扩增全长，因此我们将全长基因分为两段分别进行扩增，最终利用多片段一步法连接试剂盒(MultiSOne Step Cloning Kit)将两个片段同时克隆到转基因载体pZZ01523中。
具体如下所示：
1.载体pZZ01523酶切：
SmaⅠ酶切位点：
CCC|GGG(SEQ ID NO.3)
反应条件:30℃、14h～16h；
酶切后的载体纯化回收。
2.目的片段扩增：使用高保真DNA聚合酶(Max Super-Fidelity DNAPolymerase)
植株(SB12；抗病亲本)叶片总DNA的提取采用CTAB法，PCR扩增程序为：95℃预变性3min，然后以95℃变性15s，58℃退火15s，72℃延伸3min，进行34个循环，最后72℃延伸5min。
PCR扩增体系为：
扩增片段1：4178bp，电泳图参见图3。
引物序列
F:AGCTTATGGCGCGCCTTCCCTTTGCCGAGTGTCATCCGT(SEQ ID NO.4)；
R:CAATCCCAAAAGGAAATGGAACG(SEQ ID NO.5)；
扩增片段2：5180bp，电泳图参见图4。
引物序列
F:TTTAAACGCACTAGTATCCCATGGTGCTCAAGGATGTGGG(SEQ ID NO.6)；
R:CGTTCCATTTCCTTTTGGGATTG(SEQ ID NO.7)。
3.连接；使用多片段一步法连接试剂盒(MultiS One Step Cloning Kit)
连接体系：
连接程序：37℃30min。
4.阳性克隆检测:使用高保真DNA聚合酶(Vazyme 2×Max Master Mix)
特异性引物
F:GAGAGGGCAAACACGCCAGC(SEQ ID NO.8)；
R:CAGTTCCTAATACTCGGTGC(SEQ ID NO.9)。
PCR扩增程序为：94℃预变性5min，然后以94℃变性30s，62℃退火30s，72℃延伸1min，进行34个循环，最后72℃延伸5min。PCR扩增体系为：
成分 体积(μL)
2×Buffer 7.5
Forwardprimer(10μM) 0.5
Reverseprimer(10μM) 0.5
DNA(50ng/μL) 1
ddH2O 5.5
Total 15
扩增片段大小528bp。电泳结果参见图5，由图5可以看出，获得阳性克隆；并进一步通过sanger测序确认目的基因的序列完全正确。
实施例2：ZmWAK02在玉米中的遗传转化
将构建好的转基因载体送至江苏未米生物科技有限公司进行转化，转基因受体玉米自交系KN5585易感灰斑病；2020年，在湖北鄂州基地播种从江苏未米生物科技有限公司获得的T1代转基因玉米种子，进行基因型鉴定并全部自交授粉；2021年，在海南三亚基地对T2代的不同转基因事件中分离产生的阴性和阳性材料分别自交，获得T3代的转基因家系；2021年，对T3代转基因家系进行抗灰斑病表型的鉴定分析，自然条件下发病，不需要人工接种致病菌。抗病表型鉴定依据1～9的等级评分标准，参见表1和图6，1为高抗表型，9为高感表型。
表1玉米灰斑病病情分级标准
结果显示：导入ZmWAK02能够显著提升玉米的抗灰斑病能力；在两个独立的转基因互补事件中，导入ZmWAK02分别提高了36.5％和48％的抗病性，说明ZmWAK02基因具有很高的效应。因此本发明为玉米抗灰斑病改良提供了新的基因资源。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。
序列表
<110> 华中农业大学
<120> 玉米ZmWAK02基因在提高玉米灰斑病抗性中的应用
<160> 9
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 960
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Met Cys Ser Thr Ala Val Leu Leu Val Arg Thr Gly Val Val Leu Val
1 5 10 15
Cys Leu Ala Ala Leu Ala Arg Ala Pro Ser Lys Val His Ala Ala Ala
20 25 30
Gly Thr Gly Asp Gly Leu Leu Ala Ile Pro Thr Asn Ala Ser Leu Ser
35 40 45
His Cys Pro Ser Trp Cys Gly Asp Val Gln Ile Ser Tyr Pro Phe Gly
50 55 60
Ile Gly Leu Gly Cys Phe Arg Gln Gly Phe Glu Val Thr Cys Asp His
65 70 75 80
Thr Ala Pro Ser Pro Arg Leu Phe Phe Val Ser Gly Asn Ser Ser Ile
85 90 95
Gln Val Thr Ser Val His Ile Gly Ile Ser Arg Val Trp Ala Ser Ala
100 105 110
Val Gly Phe Asn Val Thr Met Ser Ala Gly Val Asp Thr Tyr Thr Lys
115 120 125
Ser Trp Glu Ala Pro Thr Ala Thr Gly Val Arg Phe Tyr Ser Asp His
130 135 140
Asn Phe Leu Tyr Thr Val Gly Cys Gly Val Tyr Val Tyr Val Phe Gly
145 150 155 160
Asp Asn Met Thr Asp Ile Ile Gly Tyr Cys Thr Ser Ile Cys Thr Asp
165 170 175
Asn Arg Glu Ile Met Glu Arg Ala Asn Thr Pro Ala Tyr Ser Ala Cys
180 185 190
Ala Gly Leu Gly Cys Cys Ser Ile Leu Met Arg Gly Gly Gln Gly Phe
195 200 205
Thr Leu Lys Leu Gly Arg Leu Asn Ser Thr Ile Pro Gln Leu Gly Glu
210 215 220
Ala Leu Ser Ser Val Lys Ile Ile Phe Ser Glu Tyr Tyr Glu Phe Val
225 230 235 240
Thr Asp Asp Val Tyr Ala Ser Trp Val Asn Thr Ser Asn Val Tyr Gly
245 250 255
Ile Val Leu Asp Ile Ala Ile Thr Asp Gln Pro Ser Cys Ala Ser Ala
260 265 270
Gln Ser Gln Glu Asn Lys Asp Thr Tyr Ala Cys Thr Ser Glu Ser Ile
275 280 285
Cys Tyr Asp Val Gln Gly Gly Tyr Ile Cys Phe Cys Pro Gly Gln Ile
290 295 300
Glu Gly Asn Pro Tyr Ile Lys Asp Gly Cys Ile Ala Tyr Tyr Asn Pro
305 310 315 320
Glu Ala Pro Ser Ile Arg Asn Cys Met Arg Leu Cys Gly Asn Ile Ser
325 330 335
Val Pro Phe Pro Phe Gly Ile Glu Glu Gly Cys Tyr Ala Asn Asp Asn
340 345 350
Leu Arg Leu Asn Cys Thr Ser Asn Gly Thr Leu Ile Leu Asp Arg Arg
355 360 365
Tyr Ala Gln Tyr His Val Thr Asn Leu Ser Leu Asp Asp Gly Leu Leu
370 375 380
Met Val Thr Asn Met Leu Asn Ala Thr Ser Phe Asn Asn Met Glu Arg
385 390 395 400
Val Val Ile Thr Asn Tyr Asp Gly Tyr Tyr Gln Asn Gly Phe Tyr Ser
405 410 415
Thr Asp Glu Asp Val Val Asp Gly Asn Tyr Asp Phe Ser Gln Glu Asp
420 425 430
Thr Thr Ile Lys Trp Phe Ile Ala Asn Ile Thr Cys Gln Lys Ala Met
435 440 445
Gln Asn Asn Ala Thr Tyr Ala Cys Val Ser Asp Asn Ser Ile Cys Lys
450 455 460
Asp Val Met Arg Gly Asn Ile Arg Asp Gly Tyr Arg Cys Lys Cys Ser
465 470 475 480
Asp Gly Phe Gln Gly Asn Pro Tyr Leu His Asn Asn Cys Thr Asp Ile
485 490 495
Asn Glu Cys Phe Ile Pro Asn Lys Cys Asn Gly Ile Cys His Asn Phe
500 505 510
Asp Gly Gly Phe Asn Cys Thr Ser Cys Pro His Gly Lys Glu Tyr Asp
515 520 525
Pro Lys Lys Gln Lys Cys Val Met Ser Ala Lys Gln Leu Ile Leu Ile
530 535 540
Phe Gly Ile Val Ile Gly Leu Val Cys Gly Leu Gly Ser Ile Ser Phe
545 550 555 560
Ala Leu Gly Ala Ile Val Leu Thr Gly Lys Trp Lys Lys Gly Ile Gln
565 570 575
Arg Arg Ile Arg Arg Glu Tyr Phe Lys Lys Asn Gln Gly Leu Leu Leu
580 585 590
Glu Gln Leu Ile Ser Asn Glu Asn Ala Thr Asn Lys Thr Lys Ile Phe
595 600 605
Thr Leu Asp Glu Leu Glu Glu Ala Thr Asn Lys Phe Asp Ala Thr Arg
610 615 620
Val Leu Gly His Gly Gly His Gly Thr Val Tyr Lys Gly Ile Leu Ala
625 630 635 640
Asp Gln Arg Val Val Ala Ile Lys Lys Ser Lys Ile Val Glu Gln Ile
645 650 655
Glu Ile Asp Gln Phe Ile Asn Glu Val Ala Ile Leu Ser Gln Ile Ile
660 665 670
His Arg Asn Val Val Lys Leu Phe Gly Cys Cys Leu Glu Asp Glu Val
675 680 685
Pro Leu Leu Val Tyr Glu Phe Ile Ser Asn Gly Thr Leu Tyr Asp Ile
690 695 700
Leu His Glu Asn Ile Ala Thr Lys Cys Leu Leu Ser Trp Asp Asp Arg
705 710 715 720
Ile Arg Ile Ala Thr Glu Ala Ser Gly Ala Leu Ala Tyr Leu His Ser
725 730 735
Ala Ala Ala Ile Pro Ile Phe His Arg Asp Val Lys Ser Ser Asn Ile
740 745 750
Leu Leu Asp Asp Asn Phe Thr Val Lys Val Ser Asp Phe Gly Ala Ser
755 760 765
Arg Ser Leu Ser Leu Asp Glu Thr His Val Val Thr Ile Val Gln Gly
770 775 780
Thr Phe Gly Tyr Leu Asp Pro Glu Tyr Tyr Tyr Thr Gly Ser Leu Thr
785 790 795 800
Glu Lys Ser Asp Val Tyr Ser Phe Gly Val Ile Leu Val Glu Leu Leu
805 810 815
Thr Arg Lys Lys Pro Ile Phe Ile Asn Glu Ser Ser Ala Lys Gln Asn
820 825 830
Leu Ser His Tyr Phe Ile Glu Gly Leu Gln Glu Gly Ala Leu Met Glu
835 840 845
Ile Ile Asp Ser Gln Val Val Glu Glu Ala Asp Gln Glu Glu Ile Asn
850 855 860
Asp Ile Ser Ser Leu Ile Glu Thr Cys Leu Arg Ser Lys Gly Gly His
865 870 875 880
Arg Pro Ser Met Lys Glu Val Asp Met Arg Leu Gln Cys Leu Arg Thr
885 890 895
Lys Arg Leu Arg Asn Lys Thr His Leu Leu Ile Glu Lys Gly Gly Glu
900 905 910
Met Glu Pro Leu Leu Cys Val Glu Ala Gln His Pro His Glu Arg Ile
915 920 925
Asn Pro Ile Tyr Asn Glu Glu His Leu Thr Ile Pro Met Met Ser Gly
930 935 940
Cys Tyr Ser Leu Glu Gln Glu Leu Ala Ala Ala Ser Ser Met Val Arg
945 950 955 960
<210> 2
<211> 9335
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gtgcgcgttt tcttcgactg gaaggactac ctcaggttct acgacatggg cacgtactgg 60
ccctacacgc cctccatcca gctcctctac ggcctccgca ccgcgctcga cctcatcttc 120
gaggaagggc tggacaacgt cgtgaggagg cacaaccgcc ttgggacagc caccaggctc 180
gccgtcgagg cgtgggggct cagcaactgc tgccagaagg aggagtggtt cagcgacacc 240
gtcaccgccg tcgtcgtgcc gcccaacatc gacagcgccg aggtcgtcag gcacgcgtgg 300
aagcggtaca acctcagcct cggcctcggc ctcaacaagg tcgccgggaa ggtcttcagg 360
atcggccatc tcggcaacct caacgaggta ctgcactgca gagtttggca attcgtttaa 420
ttaattaatc agtgcaacgt actatatctt gatgctccca aacattattt tttttttctt 480
cttctttgtc agctgcaact tctgggatgt ctgagcggtg tggagatggt gctcaaggat 540
gtggggtacc cagtgaaact aggtagcggc gtggcagccg cggcggcgta cctgtcaaac 600
tccacgccgc tcatcccatc taggatctga gaacaatgta aggggaggat atcgcaaaca 660
aggccagcga caacgagtgg gcagacgaac gaacaaagcg ttgctacata gtactctctt 720
agaatgtaaa gttaaatttc acacccagct gttgctacat agtagtatag ttttatgaat 780
tacaggtttg attaaacttc aaattaatct acatgtatag ccctgcccag atttaactat 840
attgggaccg tattacttac cgatcaactc tgctttacag tagtagtctt tttgtttctg 900
aaatcagatc ataagacatg ccattctcac aaacagaaaa aaaacactct cacaagtcac 960
aaatcaccag tatgtattgc tggtatcaag tcaagtcttt gcgcgatcat agaataaaac 1020
tgtttcgaaa aacgaagtac atatactgta actcaatgta aaattggcga aaaaatcagt 1080
aacgaaaccg aaaaacttca agcgaagtac tggctgttgc gctgaagaac atcaggcagc 1140
tttggcgagc tccctgtcga cggcgacctt gaggaagctg ccttcgtcta ggaccatctg 1200
cacggggagg aagccgaggc cgttggccac gccgagcatc acctccttca tctccgcgcg 1260
gaactcgtgc cggtccacca tgccgctgcc gtccctgtcg aaccgcgcga acaggccgcg 1320
gtacagcgcc ccgagctcct ccggcgccac cgcggcctcg tccacgccga agtgcctctc 1380
cagcacccgc aggctaatgt gagctccccg gccatctcgg cgtaggtgag caggccgtcg 1440
tggtcggcgt ccagcgcgac gaagcggccg tccaccgagg agttgaaggc gcgctcgtct 1500
tctacgaagc tccgcaccgt gctcctgtcc aggatctcca cgctcatctt cgggttcctc 1560
tcgctgttcg tgttccttgg atgtgttggt gtgagagttt gctctgggct ctaggctctg 1620
ggctctgact ttttttatag ggtcgcgact ggacgtacct ggaaggggcg cctgggccga 1680
cggtttctgc agacgggttg ggctgggccg gtggattttg acgccggtca gatgccgtgg 1740
acgcgagttg tgtggcgggt gcttgggaac tacgcgaagt ggcccgttca gccgtcgttt 1800
catcgtgcca ttactgggtc tattctatgg agaaaacgtg tgccaggtcg gttgttggtt 1860
gacggacagt agtaaactgg ctagtagaca ccgcttggca ataaatagaa ctgacatggt 1920
tcaaaaagtg atacgatcat cgcaaactaa ttttctagat taattgtctg gtaggtatat 1980
tccgagcaat ggaaacgata cataaactac atctacataa ccaaaaaaaa aactaagcga 2040
agccatttta aagttaaatt tagagagaga aaaattataa taaggttaaa gggcatctct 2100
tcaacgagcc attaaaataa aataacaggt tttacacctc ggtggcgaca agccgacaat 2160
agatatataa actaatgtta ataatgatgt aggtcgttaa taatgaagtt tctcttttgc 2220
cattgtgttt acgccaaaac tttccttgaa ggacagaacg aactccagat gtgtgcttgg 2280
accatagcga atgaatccat gtcaccaaaa caaagaatca gcatcgagtt cttaaaaaag 2340
agcatgaatc agtgtaatcc catgcttgca atattcatat ttacctaata tagaatttct 2400
tttgattttt taagtgataa aaatatcaaa attctacttt tcaatgctat tacatactcc 2460
aaatctcaag tttatttcaa tactaataca aattccaaat ctcaagtgta ttacaactat 2520
atattatgat tggttttaga aactattaca attagagtac caaatttgta atcaaaacaa 2580
aactaaaaca cattacagtt tgaaatacgg aaattacatt atatgtaaac atagcaatgt 2640
catatatatt atatacatat acgcaccata tataccatag tcttatgcga agggaacaaa 2700
atataccata tagttcctct ctgaaaatag atggttacta tagatgtgtc caacatccaa 2760
gcaaatacca agttagcgaa ccatactgga tgctgccgca agttcttgct ccaaactgta 2820
gcacccagac atcattggaa ttgttaaatg ttcctcatta taaattggat tgatacgttc 2880
atgtgggtgc tgagcttcta cgcataacaa aggttccatt tctccaccct tttcaatcaa 2940
aagatgtgtt ttattccgta gcctctttgt tcttagacat tgcaatctca tatctacttc 3000
tttcatgctt ggtctatgcc ctcctttgga tcttaagcac gtttctataa gtgaggagat 3060
atcattaatc tcttcttggt ctgcctcttc cacaacttga gaatctatta tttccatgag 3120
agccccttcc tgtagtcctt caatgaagta atgagataag ttttgtttgg cactcgattc 3180
attgataaaa attggtttct ttcttgtcaa aagttccaca agtatcactc caaaactata 3240
cacatcactc ttctcagtta gagaaccagt ataatagtac tctggatcta aataaccaaa 3300
tgttccttgg acaattgtca ccacatgtgt ttcatcaagg gatagagatc ttgaagcacc 3360
aaaatctgaa acctttacag tgaagttgtc gtccaagagt atattagaag acttcacatc 3420
tctatggaaa attggtattg cagcagctga gtgtagataa gcaagtgctc ctgatgcttc 3480
cgttgcaatc ctaattcgat catcccatga caacaagcat tttgttgcaa tattttcatg 3540
aagaatgtca tacaaagtgc cattcgatat gaactcatag actagcaagg gtacctcatc 3600
ttctaggcaa caaccaaaaa gcttcaccac attgcggtga atgatttgag ataaaatagc 3660
aacctcattg atgaactgat ctatctctat ttgctccact attttagatt tttttatagc 3720
cacgacacgc tgatcagcca aaatcccttt gtaaacagtg ccatgcccac catgacctag 3780
aacacgagta gcatcaaact tgttggttgc ttcctctaat tcatccaaag tgaatatctt 3840
tgttttgttt gtagcatttt cattcgatat tagttgctcc aagagtagac cttgattttt 3900
cttgaagtac tctcttcgaa ttctcctttg gatacctttt ttccacttac cggtgagtac 3960
aattgcacca agtgcaaaac ttatggatcc aagaccacaa acaagcccaa ttacaatccc 4020
tacatccatt aaatgagacc atgaatattt catgtctttt aatttgttgc ataaagtcat 4080
gactcaccaa aaattagaat aagctgctta gctgacatga cacatttttg cttttttgga 4140
tcatactctt tcccatgagg gcaacttgta caattgaagc ctccatcaaa attgtggcat 4200
attccattgc atttatttgg aataaagcac tcattaatat ctgtatcaat aagatggttg 4260
taaaggttgg tgggggcaag taaagcatgc atgcatttat tgtcgtttcc aaaaaaagta 4320
atacaatatg tgatcaactg atcatgtaga accattggtg ataccagtag ttgtctgact 4380
ctagccctct atttatagac aacaatagct atgtaattag taaatagtca acaaccctac 4440
aaatctatat ctaagttact cgcttttacc caaaatatag tataaagtaa atccttaatt 4500
ttcttactat tttctcacct ctaccatttt gtttactcac tggtgcgtgc gtgtgtgatc 4560
aggatagaga atataatgcg aatcatatag tatggctaaa attaaatttt agcatgttta 4620
ttaataccct caccagatag attattgtta gagaaacaag aaacctggcg gaaataagtt 4680
gacataaaga gagaggaata taacctgtac agttattatg aaggtatggg tttccttgga 4740
agccatcgga acacttgcag cggtacccat cacgtatatt ccctcgcatg acatctttgc 4800
atatactgtt gtcacttacg cacgcatatg tagcattatt ttgcattgct ttctgacaag 4860
ttatgtttgc tataaaccat tttattgttg tatcctcctg agagaaatca taattaccat 4920
ccacaacgtc ctcatcggtt gaatagaagc cgttctggta gtaaccgtca tagttagtga 4980
tgactaccct ctccatattg ttgaagcttg tggcattcag catgtttgta accatcaaaa 5040
gcccatcatc aagtgacaaa ttggtcacat gatattgtgc gtaccgtcga tcaagaataa 5100
gagtgccgtt gcttgtgcag ttgagtcgta ggttatcatt tgcgtagcag ccttcttcaa 5160
tcccaaaagg aaatggaacg cttatgtttc cacataatct catacagttc ctaatactcg 5220
gtgcctctgg gttataatat gcttcatata tggtagacaa agcgaggagt taggattgat 5280
ccaaggcatg gaaaaacgag caaaaaggaa gcagcagaga ggcaccaacc tatgcagcca 5340
tctttaatat aggggttgcc ctctatttga ccagggcaga agcaaatgta gcctccttga 5400
acgtcgtagc agatgctttc actagtgcat gcgtaggtat ccttgttctc ttgggactgg 5460
gcactcgcgc agcttggttg gtccgtgatt gcaatgtcaa gtactatgcc ataaacattg 5520
cttgtattca cccaacttgc ataaacatca tcagtaacga attcatagta ttccgaaaag 5580
ataatcttga cactggagag cgcttcaccg agctgtggaa tggtactatt gaggcgacct 5640
agtttgagag tgaagccttg gccgccacgc attagaatgc tgcagcagcc taaccctgca 5700
caggcactat aagctggcgt gtttgccctc tccatgatct ctctgttatc tgtgcaaata 5760
ctcgtgcaat aaccaatgat atctgtcata ttatcaccga acacgtagac gtagacacca 5820
catccaacag tgtacagaaa attatgatct gaataaaacc tgacaccagt ggcagtaggg 5880
gcctcccaag acttggtgta ggtgtccacg cctgcgctca tggtgacgtt gaacccaaca 5940
gctgaagccc aaaccctact gatgccgata tgtacagaag tcacctggat cgagctgttc 6000
cccgacacga agaagagcct gggagaagga gctgtgtgat cgcaggtgac ctcgaagcct 6060
tgacggaagc agcccagccc tatcccgaac gggtaggaga tttggacatc cccgcaccaa 6120
gaggggcagt gcgacaggga ggcgttggta gggatagcaa ggagcccatc cccggtgccg 6180
gcggcagcat ggaccttgct cggcgctcgc gccaaggcgg ccaaacacac aagcacaacg 6240
cctgtgcgaa ctagcagcac tgcagtggag cacatcgcgc tgcaggtagc ttgtttatgt 6300
agacagaaga tggtgtgctt tcctgtgtgt tgtgtgtgtc tacatatact agtttaatta 6360
atttatatgc tgtaacagct agcgcgcgcc agaagaaaac aaaaaacaat aaaaaaaatc 6420
tcacttgcag ttgcgtgggg caagctagca ttctgctagc tagtggaagg agaaggacgg 6480
cctggacttg gactttcagg gcaacagtag catctgatgt tacggtcgtc gctgcggcca 6540
acaagacttg ccaaatcaga cgtacctaga ctgtggtgtg gagtattctc ctcctgtttt 6600
ttctttgatg catcatgcat ggaaacaacg agtggagact ggagaattta tatcacgggg 6660
agactggaga gaccaccgcc atgcatactc aaaactagtg gagcttgacc ggtgttaagt 6720
cttctcacga gttatccgag atgttttcca aagcgaattt tcaagtatgc tcggtgtttt 6780
ttttcttctt gaaaacgata tctgagaaaa gaatagtatt tgactataac tgtgatctct 6840
cgatgcttcc taactcaaat cagttggaca aagtctactc cgatcctagt aactatcatc 6900
gaccaattct tctacttaaa tgccacttga tagatgtgac cactcctatc atggagtaac 6960
tatcatcgac caattcaggt agcctttaat tcgttgagga gtttgataaa gctagtgttc 7020
agatctctcg taaaatttct tatcctttgt cttgataggc tcgtgattgc caatcccgtc 7080
taacccgtct atgttcttat accaagaaca gatcaactga agatatgtta actgatattt 7140
ggccttggag agacataaag agccatttga atcaagtttt ctaccgtcaa taaagttggt 7200
cggaaaatat ttctagctca tgaattgcac aacctacccg tgcatcatta cgaaatggct 7260
cgaaaacaaa ctctgatttt cccccttttg tagtgagttg cgaccatccc acgacagcac 7320
aggtgaaact agttcagaaa aacctcgcga taactgaaat aaacgaccgt ttggctaaca 7380
cacccaccgt agtattaata aatcgggaga gagactgaga gagagagaga gtggaggcat 7440
taccgtagtg aggatgacct cgagcttgcg gtagcggagg ccatgggcgg agaagagaat 7500
ggggtcgacg acgaggctct ggcgctgcag gcgcgggcgg cgcgggcggc ggccatgccg 7560
acagcgtgcg gaacacacca ggggtcgctc gctcccacgg acgtcgctgc gcagtcacca 7620
cggctcgtcg ttgcggatcc aacggtagcc caaccaaagt catgtgacag gccagtttgg 7680
gcggcccatt ccagcccaca gcggagcgcc atccgttcat gcatgatgca tctatgagta 7740
cgcgttttgt acgtgactag taattagcgc gcgccccacg cgcgcgaaga gaaaagtgta 7800
acggcctaac gggagctagg gatgaaaacg ggacggcaaa ttcctgtatc gtcccgtttc 7860
gaatactgtt ttttcccgat cgttttcgaa ttgtttgtga accgattaga aatggtacga 7920
aaacggttta gctagttttt cgatcgtttt cgtattttcc gtttccgagt cgtgctaata 7980
ccgttttata taatatgaga tagatctagc atataattta tttaagttat agacttttgt 8040
tgtgttcaag tgaatgaata agcgaaaagc aaatgttata attactctaa ctaatattaa 8100
tgatgaaaaa gagttgtttg tgtatttcta aatcttaaaa attaggcaat acatcacttt 8160
attatggttt tgtgaaaact acaaaatagt tatccttcca actatagttt atcgttttcg 8220
atcattttcg aataaccgac aatttcgatc ccgtatttcg accattgttt ttcgctttcg 8280
ttttcgttcc tgcaaaaaaa tatgaaaaca aaaacaattt agatgttttt tcgatcgttt 8340
tcgaccgttt tcatccctaa cgggagcgcc ctaccgagcg tgttttaaat tgatactaat 8400
ttgattggta agtggctaga tataagaaat aaagagaggg aataattcat aattagctac 8460
tatagagtaa acacataaaa agttggtcat atatgtacct tatacaaaaa ggaaaatgaa 8520
tgtaattcca agaaaaagat ttaaaacgat catgtgaaaa agggagcaaa tgtaaaagta 8580
atattgaaat gcgtacctat tttgcaatgt ggctgcctta gggtgatcag tagagcaata 8640
agatgttcat gtcacacaga gtgatgggaa aacttttaga tttccatcgc ttgcatttaa 8700
aaaaacacta atgcaagtga cagttcatta ggaaagggaa aataaaatag tataaacgtt 8760
catattttat ataaatctat ctctctttaa aacgtcgctt cagtactgga aatgtccttc 8820
aagtacaaca caaatagatt tgaaaaagtt agtggtaatt aactactatg taacatgtac 8880
acgtacaaca tgaatcagac ttactgtacc ataggaaaag aaatataata gtaagacatg 8940
aatacttggc taggaaagca taaggttctc caaacgttct tttggtcacc tttgtacttc 9000
agaaactacc cattccaaaa atatggagca tatgctcaac ctttaaatag tctcctctta 9060
tgttcttggc aaaccgtacg tcatcatcta aatatcacta ccggaaacga gtgctttgcc 9120
gagtgcccga agcactcggc aaagccttaa aaacactcgg caaaggcttt gccgagtgtc 9180
acactcggca aagaaggctc agcaaacagt gcatcggcaa agccttcttt gccgagtact 9240
ttttctcgga gcactcggca aagaaaagca gccgttacgg cgacgggtga cggagacggc 9300
gtctttgccg agtgtcacgg atgacactcg gcaaa 9335
<210> 3
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
cccggg 6
<210> 4
<211> 39
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
agcttatggc gcgccttccc tttgccgagt gtcatccgt 39
<210> 5
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
caatcccaaa aggaaatgga acg 23
<210> 6
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
tttaaacgca ctagtatccc atggtgctca aggatgtggg 40
<210> 7
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
cgttccattt ccttttggga ttg 23
<210> 8
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
gagagggcaa acacgccagc 20
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
cagttcctaa tactcggtgc 20

Claims (7)

1.一种与玉米灰斑病抗病性相关的蛋白质，所述蛋白质的氨基酸序列
如SEQ ID NO.1所示。
2.编码权利要求1所述蛋白质的核酸分子。
3.根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。
4.含有权利要求2或3所述核酸分子的表达盒、重组载体或重组微生物。
5.权利要求1所述蛋白质或者权利要求2或3所述的核酸分子或者权利要求4所述的表达盒、重组载体或重组微生物在提高玉米的灰斑病抗病性中的应用。
6.一种玉米转基因育种的方法，包括如下步骤：在出发植物中导入权利要求2或3所述的核酸分子或者权利要求4所述的表达盒、重组载体或重组微生物，得到灰斑病抗病性增强的转基因玉米；
所述出发植物为玉米。
7.一种玉米育种方法，包括如下步骤：增加目的植物中权利要求1所述蛋白质的含量；
所述目的植物为玉米。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109705200A (zh) * 2019-02-26 2019-05-03 中国农业大学 灰斑病抗性相关蛋白ZmWAK-RLK及其编码基因和应用
CN111153974A (zh) * 2020-01-15 2020-05-15 华中农业大学 玉米抗病基因和分子标记及其应用
CN114262369A (zh) * 2021-12-15 2022-04-01 中国农业大学 ZmDi19基因及其靶标基因ZmPR10在培育抗灰斑病植物中的应用
CN114410651A (zh) * 2022-01-06 2022-04-29 中国农业大学 玉米灰斑病抗性相关蛋白及其编码基因与应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109705200A (zh) * 2019-02-26 2019-05-03 中国农业大学 灰斑病抗性相关蛋白ZmWAK-RLK及其编码基因和应用
CN111153974A (zh) * 2020-01-15 2020-05-15 华中农业大学 玉米抗病基因和分子标记及其应用
CN114262369A (zh) * 2021-12-15 2022-04-01 中国农业大学 ZmDi19基因及其靶标基因ZmPR10在培育抗灰斑病植物中的应用
CN114410651A (zh) * 2022-01-06 2022-04-29 中国农业大学 玉米灰斑病抗性相关蛋白及其编码基因与应用

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