CN114853629B - 一种二肽类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种新二肽类化合物及其制备方法和应用，所述二肽类化合物Xenordipeptide的分子式为C15H23N3O4，所述二肽类化合物Xenordipeptide具有杀虫杀菌作用，用于防治南方根结线虫或温室白粉虱、大肠杆菌或白色念珠菌，所述二肽类化合物Xenordipeptide利用微生物嗜线虫致病杆菌发酵实现短时间大量制备，制备周期短、成本低、对环境影响小。

Description

一种二肽类化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于微生物工程技术领域，具体涉及从昆虫病原线虫共生菌嗜线虫致病杆菌的发酵液中提取到新的二肽类化合物及其制备方法与应用。
背景技术
微生物是获得天然产物的一种重要来源。通过对微生物次生代谢产物的纯化、结构修饰、衍生等来开发新型农药，已成为环境有好的新农药研发的一种主要方向。昆虫病原线虫共生菌属肠杆菌科的革兰氏阴性细菌包含致病杆菌属(Xenorhabdus)和发光杆菌属(Photorhabdus)。昆虫病原线虫共生细菌与线虫和昆虫之间具有特殊的共生关系，其存在于线虫体内，随线虫通过昆虫的自然孔口进入昆虫体内，随后细菌会由线虫体内释放到昆虫体腔内，产生次生代谢产物(其中含有多种抗生素)帮助线虫杀死并分解消化昆虫，同时防止昆虫虫体不受其他微生物的侵染，最后在与线虫组成共生体回到土壤中。在这个细菌-线虫-昆虫形成的三元共生系统中，昆虫病原线虫共生菌丰富的次生代谢产物引起了人们的关注。
目前已经被报道的采用嗜线虫致病杆菌发酵分离到多肽类化合物、吲哚类化合物、吡咯类化合物等，而带有硝基的二肽类化合物很少见。本发明中的新二肽类化合物是一种未被报道过的含有硝基的二肽类化合物，且其生物活性并不明确。
发明内容
为了弥补上述现有技术的不足，本发明的目的是提出一种新二肽类化合物及其制备方法和应用，并利用微生物嗜线虫致病杆菌发酵实现短时间大量制备，制备周期短、成本低、对环境影响小，同时明确新二肽类化合物的杀虫和杀菌作用。
本发明提出一种新二肽类化合物Xenordipeptide，其技术要点是：所述二肽类化合物Xenordipeptide的分子式为C15H23N3O4；所述二肽类化合物Xenordipeptide的结构式为：
Figure SMS_1
本发明还提出所述二肽类化合物Xenordipeptide的制备方法，其技术要点是：包括以下步骤：
(1)将嗜线虫致病杆菌接种至NBTA鉴别培养基中，在28℃环境中培养活化并分离获得蓝绿色初生型菌株；
所述嗜线虫致病杆菌菌种保藏单位为中国科学院微生物研究所菌种保藏中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.20308，保藏日期为2020年07月07日；分类命名为Xenorhabdus nematophila；
所述NBTA鉴别培养基配方为：牛肉膏3.0g/L，蛋白胨10.0g/L，氯化钠5.0g/L，琼脂粉15.0g/L，氯化三苯基四氮唑(TTC)0.040g/L，溴百里酚蓝(BTB)0.025g/L，蒸馏水1L，pH值7.0；
(2)将活化好的初生型菌株接种至LB液体培养基中，在28℃、180rpm条件下培养12h作为一级种子发酵液，所述一级种子发酵液的菌落浓度为1-6×106个/mL；
所述LB培养基配方为：胰蛋白胨10.0g/L，酵母提取物5.0g/L，氯化钠10.0g/L，蒸馏水1.0L，pH值7.0；
(3)将步骤2所得的一级种子发酵液接种至M液体培养基中，所述一级种子发酵液与M液体培养基的添加体积比为1:5-1:20，在28℃、180rpm条件下培养12h获得二级种子发酵液；
所述M液体培养基的组成为：葡萄糖6.13g/L，蛋白胨21.29g/L，硫酸镁1.50g/L，硫酸铵2.46g/L，磷酸二氢钾0.86g/L，磷酸氢二钾1.11g/L，硫酸钠1.72g/L，蒸馏水1.00L，pH值7.2～7.6；
(4)将步骤3中所得的二级种子发酵液接种至加有Amberlite XAD 16大孔吸附树脂的M液体培养基中，在28℃、180rpm条件下培养发酵5d，所述二级种子发酵液与M液体培养基的添加体积比为1:5-1:20；所述大孔吸附树脂体积为发酵液的2％-10％；
(5)收集步骤4发酵液中的大孔吸附树脂，清洗并烘干大孔吸附树脂，使用甲醇浸泡树脂4次，每次浸泡3h，收集浸提液，浓缩得到甲醇浸膏F1；
(6)将浸膏F1使用水、甲醇、二氯甲烷体系(V二氯甲烷:V甲醇:V水＝2:1:1)进行萃取4次，收集二氯甲烷萃取液并浓缩得到二氯甲烷浸膏F2；
(7)对浸膏F2进行硅胶柱层析，使用四倍体积的二氯甲烷、二氯甲烷：甲醇＝100：2、二氯甲烷：甲醇＝100：4、二氯甲烷：甲醇＝100：8、二氯甲烷：甲醇＝100：16、二氯甲烷：甲醇＝1：1、甲醇，浓缩二氯甲烷：甲醇＝100：8部分洗脱液，得到浸膏F3；
(8)对浸膏F3进行凝胶柱层析，流动相为甲醇：二氯甲烷＝1：1，合并15-21组分最终得到浸膏F4；
(9)使用高效液相色谱法，色谱柱：EclipseXDB-C18(9.4×250mm)，流动相为24％甲醇、流速为3mL/min的条件下对浸膏F4进行分离，在254nm检测波长下保留时间为6.28min的主要成分为二肽类化合物Xenordipeptide。
本发明提出所述二肽类化合物Xenordipeptide的作用，其技术要点是：所述二肽类化合物Xenordipeptide具有杀虫作用，用于防治南方根结线虫或温室白粉虱。
本发明还提出所述二肽类化合物Xenordipeptide的作用，其技术要点是：所述二肽类化合物Xenordipeptide具有杀菌作用，用于防治大肠杆菌或白色念珠菌。
与现有技术相比，本发明具有下述突出优点：
(1)本发明中的新二肽类化合物Xenordipeptide是具有新颖结构的化合物，对南方根结线虫、温室白粉虱、大肠杆菌、白色念珠菌具有较好的生物活性，可以作为一种新型杀虫剂、杀菌剂的先导化合物，开发新型杀虫、杀菌药物。
(2)本发明的Xenordipeptide可以利用微生物发酵实现短时间大量制备，制备周期短、成本低、对环境影响小。
附图说明
图1为新二肽类化合物Xenordipeptide的1H-NMR谱图(核磁共振氢谱)；
图2为新二肽类化合物Xenordipeptide的13C-NMR谱图(核磁共振碳谱)；
图3为新二肽类化合物Xenordipeptide的HSQC谱图；
图4为新二肽类化合物Xenordipeptide的HMBC谱图；
图5为新二肽类化合物Xenordipeptide的1H-1H COSY谱图(氢氢相关谱图)；
图6为化合物Xenordipeptide的HRESIMS(高分辨电喷雾电离质谱)谱图；
图7为化合物Xenordipeptide单晶衍射得到的椭球图(ORTEP)；
图8为化合物Xenordipeptide主要的HMBC和COSY信号；
图9为化合物Xenordipeptide的结构式。
具体实施方式
通过下面给出的实施例可以进一步了解本发明。但他们不是对本发明的限定。
本实施例的二肽类化合物的结构如式(Ⅰ)所示(图9)：
实施例1：嗜线虫致病杆菌的分离与纯化
本发明所用的昆虫病原共生菌是从辽宁省通辽市扎鲁特旗采集的土样，利用活体大蜡螟进行生物诱导，并最终从大腊螟的血淋巴液中分离得到的致病杆菌。菌株编号为SN313。现保藏在中国科学院微生物研究所菌种保藏中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号保藏编号为CGMCC No.20308保藏日期为2020年07月07日。
将采集到的土样分别置于塑料盒中，将大蜡螟5龄期幼虫经表面消毒后放入装有土样的塑料盒中。在25℃的环境下放置，取出死亡的大蜡螟虫体并将其进行表面消毒，取出重提中的淋巴液涂布于NA培养基上置于28℃的环境中培养，观察并挑取长出的菌落，得到目标菌株。
实施例2：嗜线虫治病杆菌SN313的液体发酵
挑取蓝绿色单菌落接种至装有5mL LB培养基的试管中，于180r/min、28℃的振荡培养箱中培养12h，作为一级种子发酵液。将一级种子发酵液转移到装有40mL M培养基的100mL三角瓶中，于180r/min、28℃的振荡培养箱中培养12h，作为二级种子。将二级种子发酵液接种至装有400mL M培养基和20g大孔树脂的2L三角瓶中使其浓度为5％，总发酵量为43.2L。再次以180r/min、28℃的振荡培养箱中培养5d。
实施例3：Xenordipeptide的分离与提取
收集发酵液中的大孔吸附树脂，清洗并烘干大孔吸附树脂，使用甲醇浸泡树脂，收集并浓缩浸提液，最终得到甲醇浸膏F1。将浸膏F1使用水、甲醇、二氯甲烷体系进行萃取4次，收集二氯甲烷萃取液并浓缩得到二氯甲烷浸膏F2。对浸膏F2进行硅胶柱层析，使用四倍体积的二氯甲烷、二氯甲烷：甲醇＝100：2、二氯甲烷：甲醇＝100：4、二氯甲烷：甲醇＝100：8、二氯甲烷：甲醇＝100：16、二氯甲烷：甲醇＝1：1、甲醇，浓缩二氯甲烷：甲醇＝100：8部分洗脱液，得到浸膏F3。对浸膏F3进行凝胶柱层析，流动相为甲醇：二氯甲烷＝1：1，合并15-21组分最终得到浸膏F4。使用高效液相色谱法，色谱柱：EclipseXDB-C18(9.4×250mm)流动相为24％甲醇、流速为3mL/min的条件下对浸膏F4进行分离，共出现2个主要成分，在254nm检测波长下保留时间为6.28min的第1主要成分为Xenordipeptide。
实施例4：Xenordipeptide的结构鉴定
(1)Xenordipeptide的1H-NMR谱图见图1(DMSO-d6，600MHz)；
(2)Xenordipeptide的13C-NMR谱图见图2(DMSO-d6，150MHz)。具体数据见表1。
表1.Xenordipeptide的1H-NMR(600MHz)和13C-NMR(150MHz)数据(ppm)
position δC δH(J in Hz)
1 145.95，qC -
2 130.44，CH 7.51(d,J＝8.1Hz,1H)
3 123.07，CH 8.12(d,J＝8.1Hz,1H)
4 147.86，qC -
5 123.07，CH 8.12(d,J＝8.1Hz,1H)
6 130.44，CH 7.51(d,J＝8.1Hz,1H)
7 36.55，CH2 3.05(dd,J＝13.56,4.20Hz,1H)2.76(m,1H)
8 51.88，CH 4.13(s,1H)
9 63.17，CH2 3.39(m,2H)
10 170.51，qC -
11 68.97，CH 2.76(m,1H)
12 30.28，CH 1.73(m,1H)
13 18.78，CH3 0.74(t,J＝5.9Hz,3H)
14 18.81，CH3 0.81(t,J＝5.9Hz,3H)
15 33.49，CH3 1.98(s,3H)
(3)Xenordipeptide的HSQC谱图见图3(溶剂DMSO-d6)；
(4)Xenordipeptide的HMBC谱图见图4(溶剂DMSO-d6)；
(5)Xenordipeptide的1H-1H COSY谱图见图5(溶剂DMSO-d6)；
(6)Xenordipeptide的HRESIMS谱图见图6；
Xenordipeptide：白色晶体，HRESIMS m/z 308.1638[M-H]-(calcd:C15H23N3O4,309.37)。1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.12(t,J＝7.0Hz,2H),8.07(t,J＝7.1Hz,1H),7.50(t,J＝7.0Hz,2H),4.13(pd,J＝10.0,5.6,4.9Hz,1H),3.43(dt,J＝10.7,5.3Hz,1H),3.36(dt,J＝11.0,5.9Hz,1H),3.06(dd,J＝13.5,5.7Hz,1H),2.76(ddd,J＝14.9,9.8,5.7Hz,2H),1.97(d,J＝5.6Hz,3H),1.74(dd,J＝12.9,6.4Hz,1H),0.81(t,J＝6.2Hz,3H),0.74(d,J＝6.3Hz,3H).13C NMR(151MHz,DMSO)δ170.52,147.87,145.97,130.45,123.08,68.80,63.18,51.89,36.56,33.50,30.29,18.82,18.79。
通过观察1H-NMR与13C-NMR谱图数据得出该化合物存在21个氢与15个碳，观察该化合物的1H-NMR数据中δH 1.97(d,J＝5.6Hz,3H),0.81(t,J＝6.2Hz,3H)和0.74(t,J＝6.2Hz,3H)三组信号表明化合物结构中具有三个甲基结构，通过HSQC数据与1H-NMR与13C-NMR数据相对应确定碳氢关系，得知三个甲基为C-15，C-14，C-13，同时发现化合物中含有C-1，C-4，C-10(δC 145.97，147.87，170.52)三个季碳；C-2，C-3，C-8，C-11，C-12(δC 123.08，130.45，51.89，68.80，30.29；δH 8.12,7.50,4.13,2.76,1.74)五个叔碳；C-7，C-9(δC 36.56，63.18；δH 2.76/3.06，3.43/3.36)与一个没有与碳原子相连接的质子δH 8.08。通过数据判断出化合物中含有由低场区C-1，C-2，C-3，C-4，C-5，C-6组成的苯环结构，因为四个叔碳信号对称因此可以推断该苯环被对位取代。位于低场区的季碳C-10推断为羰基碳。
参考HMBC与COSY图谱中给出的碳-氢相关与氢-氢相关数据对该化合物结构进一步推测(如图8所示)，得知在苯环的C-4的取代基为C-7，C-8，C-9(δC 36.56,51.89,63.18)组成的三碳结构；C-11，C-12两个叔碳与C-13，C-14两个甲基组成了异丁基结构，且与C-15甲基具有远程相关信号。没有与碳原子形成化学键的质子(δH 8.08)与叔碳C-8，季碳C-10都具有相关信号，可知与该质子相连接的原子一共有三条化学键的N原子。该N原子与羰基碳C-10组成了肽键，结合前面的推断肽键的N端为苯丙氨酸类似物，C端应与前面所推断的异丁基相连。
该化合物的EI-MS m/z测量值为309.37[M-H]-。目前推断出的结构为C14H19NO与一个甲基的相对分子量为232.34。通过与相关文献数据比对确定该二肽类化合物的C端为被甲基取代的缬氨酸，N端为对位取代的硝基苯丙胺。通过使用乙酸乙酯-甲醇体系对该化合物进行单晶培养，得到质量较好的单晶，并进行X-射线单晶衍射检测(Cu靶)，确定了该化合物的绝对构型。
将此结构放入Scifinder数据库中进行检索，最终确认该化合物为新发现的二肽类化合物，并最终命名为Xenordipeptide。
实施例5：Xenordipeptide对南方根结线虫的生物活性测定
(1)线虫的诱集
将采集到的带有南方根结线虫卵囊的黄瓜根放入盛有清水的大烧杯中将根部表面的泥土洗净。用镊子仔细挑取黄瓜根上的南方根结线虫的卵囊，卵囊多为淡黄色至棕色，一段连接在黄瓜根上，呈卵圆形。将挑取到的卵囊使用1％的次氯酸钠溶液进行表面消毒(1min)，并用无菌水快速漂洗三次清洗残留的次氯酸钠。将消毒过后的软囊放置在灭菌的培养皿中加入无菌水放置于电热恒温培养箱中孵化，孵化温度为25℃。每24小时在体式显微镜下观察，收集孵化出的南方根结线虫，此时的南方根结线虫即为J2时期的线虫。
(2)Xenordipeptide对南方根结线虫的活性检测
将检测的化合物使用甲醇稀释，再加入吐温80和无菌水，使溶液的最终浓度为：甲醇2％、吐温80 2％，化合物浓度呈梯度处理。将溶液充分混匀后用移液器分装至24孔板中，每孔500μL，最终使孔中的浓度为线虫约30头/mL、待测化合物100μg/mL、甲醇1％、吐温801％。以阿维菌素为阳性对照组，以不含有化合物只含有1％甲醇与1％吐温80的组分为阴性对照组，每组分别设置三个重复。每12h观测一次记录死亡线虫头数。
(3)南方根结线虫的活动情况观测
在体式显微镜下观察线虫生活状态，当线虫身体呈现僵直状，轻轻摇晃不自然弯曲，对机械触碰不产生反应，则视为该线虫死亡，统计并记录每组线虫的总个数，并记录不同时间段的死亡数量。利用Excel与SPSS软件计算出各个化合物对南方根结线虫的死亡率、校正死亡率，进而求得半数致死浓度(LC50)。
南方根结线虫的活性检测结果表明：Xenordipeptide的LC50为23.62μg/mL，阳性对照阿维菌素的LC50为2.38μg/mL。
以上结果提示，使用含Xenordipeptide的溶液浸泡线虫，能够对南方根结线虫达到很好的杀虫效果，本发明为新型杀线剂的制备提供了新思路。
实施例6：Xenordipeptide抗温室白粉虱的活性测试
(1)白粉虱的饲养与收集。
在养虫笼中放入栽种好的烟草，并接入带有白粉虱虫卵的植物叶片，在放入人工气候室内培养，人工气候室条件为25℃，湿度为70％，光照周期比为16：8。待养虫笼里的白粉虱数量达到实验使用的数目，使用吸虫器将白粉虱吸入指型管中，每个指型管中吸入30头白粉虱。
(2)Xenordipeptide对白粉虱活性试验。
使用无菌水配置30％的蔗糖溶液。使用丙酮溶解待测的化合物溶解，后将待测化合物的丙酮溶液加入配制好的蔗糖溶液中使丙酮的浓度为8％，待测化合物的浓度为500μg/mL。取石蜡封口膜将其双向拉伸至四倍后盖住玻璃双通管中的一端。将配置好的含有待测化合物的30％蔗糖营养液吸取200μL至玻璃双通管封有石蜡口膜的一端外侧，再取一块石蜡封口膜双向拉伸至四倍后盖在营养的液滴上。轻轻敲击收集好白粉虱的指型管，使其中的白粉虱都掉入底部。将指形管放入冰盒中低温处理30s，使白粉虱活动能力减弱。低温处理时不要打湿棉花防止白粉虱粘在棉花上。将低温处理后的白粉虱转移至玻璃双通管中，开口端用纱布封好，用锡箔纸包裹住玻璃管外壁，每组三个重复。放置在人工气候室中，培养条件为25℃，湿度70％，光照周期比为16：8。
(3)温室白粉虱的活动情况观测
饲养48h后打开玻璃双通管下端的纱布，轻轻拍打玻璃双通管将内部的虫子都驱赶到试验台上，观察虫体状态，当虫体僵直，翅膀褶皱，对触碰没有产生应激反应，则视为白粉虱死亡，记录各组的死亡数。利用Excel与SPSS软件计算出各个化合物对温室白粉虱的死亡率、校正死亡率，进而求得半数致死浓度(LC50)。
温室白粉虱的活性检测结果表明：LC50为292.88μg/mL，阳性对照吡虫啉的LC50为0.38μg/mL。
通过该试验结果可知，化合物Xenordipeptide对白粉虱具有触杀活性。
实施例7：Xenordipeptide抗菌的活性测试
(1)菌种活化
以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌为供试菌株，在LB固体培养基上接种超低温保藏的供试菌种，放入恒温培养箱中37℃培养直至得到单菌落。将活化好的菌株接种至MHB液体培养基中，置于振荡培养箱中振荡培养，温度设定为37℃。
(2)抗菌活性检测
在96孔板的各个孔中加入100μL靶标菌的MHB培养基菌悬液与100μLXenordipeptide的DMSO溶液，使Xenordipeptide最终浓度为50μg/mL，DMSO浓度为1％，总体积为200μL。以1％DMSO溶液处理组作为空白对照组。以链霉素(Streptomycin)处理组为细菌阳性对照组，以氟康唑(Fluconazole)处理组为真菌阳性对照组。放置在恒温培养箱中37℃培养24h。
(3)抗菌活性结果统计
将96孔板置于酶标仪中测定各个处理的OD值，并通过统计0h与24h的OD值，使用SPSS软件对抑菌率进行计算。
结果表明Xenordipeptide在浓度为50μg/mL时，对革兰氏阴性菌的大肠杆菌的具有一定的抑制作用；对革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌的抑制作用不明显；对真菌白色念球菌的抑制率为70.63％。
表2化合物Xenordipeptide抗菌活性测定结果(24h)
病原菌 Xenordipeptide抑制率(％) 阳性对照抑制率(％)
大肠杆菌 25.63 100.00
金黄色葡萄球菌 - 90.44
枯草芽孢杆菌 - 100.00
白色念珠菌 70.63 89.00
注：“-”表示化合物Xenordipeptide对该菌的抑制效果不明显。

Claims (4)

1.一种二肽类化合物Xenordipeptide，其特征是：所述二肽类化合物Xenordipeptide的分子式为C15H23N3O4；所述二肽类化合物Xenordipeptide的结构式为：
Figure QLYQS_1
2.根据权利要求1所述的一种二肽类化合物Xenordipeptide的制备方法，其特征是：包括以下步骤：
(1)将嗜线虫致病杆菌接种至NBTA鉴别培养基中，培养活化并分离获得蓝绿色初生型菌株；
所述嗜线虫致病杆菌菌种保藏单位为中国科学院微生物研究所菌种保藏中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为CGMCC No.20308，保藏日期为2020年07月07日；分类命名为Xenorhabdus nematophila；
所述NBTA鉴别培养基配方组分为：牛肉膏3.0g/L，蛋白胨10.0g/L，氯化钠5.0g/L，琼脂粉15.0g/L，氯化三苯基四氮唑0.040g/L，溴百里酚蓝0.025g/L，蒸馏水1.00L，pH值7.0；
(2)将初生型菌株接种至LB液体培养基中，在28℃、180rpm条件下培养12h作为一级种子发酵液，所述一级种子发酵液的浓度为1-6×106个/mL；
所述LB液体培养基配方组分为：胰蛋白胨10.0g/L，酵母提取物5.0g/L，氯化钠10.0g/L，蒸馏水1.00L，pH值7.0；
(3)将一级种子发酵液接种至M液体培养基中，所述一级种子发酵液与M液体培养基的添加体积比为1:5-1:20，在28℃、180rpm条件下培养12h获得二级种子发酵液；
所述M液体培养基的组成为：葡萄糖6.13g/L，蛋白胨21.29g/L，硫酸镁1.50g/L，硫酸铵2.46g/L，磷酸二氢钾0.86g/L，磷酸氢二钾1.11g/L，硫酸钠1.72g/L，蒸馏水1.00L，pH值7.2-7.6；
(4)将二级种子发酵液接种至加有Amberlite XAD 16大孔吸附树脂的M液体培养基中，在28℃、180rpm条件下培养发酵5d，所述二级种子发酵液与M液体培养基的添加体积比为1:5-1:20；所述大孔吸附树脂体积为发酵液的2％-10％；
(5)收集步骤(4)发酵液中的大孔吸附树脂，清洗并烘干大孔吸附树脂，使用甲醇浸泡树脂4次，每次浸泡3h，收集浸提液，浓缩得到甲醇浸膏F1；
(6)将浸膏F1使用水、甲醇、二氯甲烷体系进行萃取4次，所述水、甲醇、二氯甲烷体系为V二氯甲烷:V甲醇:V水＝2:1:1，收集二氯甲烷萃取液并浓缩得到二氯甲烷浸膏F2；
(7)对浸膏F2进行硅胶柱层析，使用四倍体积的二氯甲烷、二氯甲烷：甲醇＝100：2、二氯甲烷：甲醇＝100：4、二氯甲烷：甲醇＝100：8、二氯甲烷：甲醇＝100：16、二氯甲烷：甲醇＝1：1、甲醇，浓缩二氯甲烷：甲醇＝100：8部分洗脱液，得到浸膏F3；
(8)对浸膏F3进行凝胶柱层析，流动相为甲醇：二氯甲烷＝1：1，合并15-21组分最终得到浸膏F4；
(9)使用高效液相色谱法，色谱柱：EclipseXDB-C18(9.4×250mm)，流动相为24％甲醇、流速为3mL/min的条件下对浸膏F4进行分离，在254nm检测波长下保留时间为6.28min的主要成分为二肽类化合物Xenordipeptide。
3.根据权利要求1所述的一种二肽类化合物Xenordipeptide的应用，其特征是：所述二肽类化合物Xenordipeptide用于制备防治南方根结线虫或温室白粉虱的药物。
4.根据权利要求1所述的一种二肽类化合物Xenordipeptide的应用，其特征是：所述二肽类化合物Xenordipeptide用于制备防治大肠杆菌或白色念珠菌的药物。
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