CN114847115A - 甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法及其应用 - Google Patents
甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114847115A CN114847115A CN202110149068.6A CN202110149068A CN114847115A CN 114847115 A CN114847115 A CN 114847115A CN 202110149068 A CN202110149068 A CN 202110149068A CN 114847115 A CN114847115 A CN 114847115A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- sugarcane
- smut
- flux
- inoculation method
- tissue culture
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 title claims abstract description 105
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 title claims abstract description 102
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 title claims abstract description 52
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title description 5
- 241000226724 Sporisorium scitamineum Species 0.000 claims abstract description 20
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims abstract description 19
- 230000013011 mating Effects 0.000 claims abstract description 15
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 14
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 8
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 claims description 7
- 102100033158 Centrosomal protein of 104 kDa Human genes 0.000 claims description 6
- 101000944336 Homo sapiens Centrosomal protein of 104 kDa Proteins 0.000 claims description 6
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 6
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 4
- 238000007654 immersion Methods 0.000 claims description 3
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 abstract description 9
- 238000002791 soaking Methods 0.000 abstract description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 abstract description 6
- 238000012258 culturing Methods 0.000 abstract description 5
- 230000004907 flux Effects 0.000 abstract description 4
- 210000003899 penis Anatomy 0.000 abstract description 4
- 208000035240 Disease Resistance Diseases 0.000 abstract description 3
- 230000003950 pathogenic mechanism Effects 0.000 abstract description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 8
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 7
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 7
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 5
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 5
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 5
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000221566 Ustilago Species 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 3
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 2
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 2
- 229960004793 sucrose Drugs 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 241000221198 Basidiomycota Species 0.000 description 1
- 244000037364 Cinnamomum aromaticum Species 0.000 description 1
- 235000014489 Cinnamomum aromaticum Nutrition 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 1
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 108020005120 Plant DNA Proteins 0.000 description 1
- 244000179560 Prunella vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000010674 Prunella vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241000124033 Salix Species 0.000 description 1
- 241000893100 Sporisorium Species 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 1
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 101150036810 eco gene Proteins 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 210000003495 flagella Anatomy 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 238000005470 impregnation Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000000155 melt Substances 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 244000000003 plant pathogen Species 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012883 rooting culture medium Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 239000012879 subculture medium Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G22/00—Cultivation of specific crops or plants not otherwise provided for
- A01G22/55—Sugar cane
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
- A01G7/00—Botany in general
- A01G7/06—Treatment of growing trees or plants, e.g. for preventing decay of wood, for tingeing flowers or wood, for prolonging the life of plants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Forests & Forestry (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开了一种甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法，该法使用成对交配型的甘蔗黑穗病菌混合担孢子悬浮液为接种源，对生根30天的健康甘蔗组培苗以茎基浸渍的方式接种72h。据此，发明人将其用于甘蔗黑穗菌致病性的测定，即茎基浸渍的方式接种72h后将组培苗种植于小型育苗盆并置于28℃、湿度60％‑80％的人工气候室培养30‑60天，根据甘蔗植株产生典型黑穗病症状(黑鞭)数量的多少判断菌株致病性强弱。本发明为研究甘蔗黑穗菌致病机制提供了新方法，具有快速、高通量、稳定且简便等特点，通过使用甘蔗组培苗进行茎基浸渍接种可缩短致病性检测时间，并可应用于甘蔗育种材料对黑穗病抗病性类型的高通量鉴定。
Description
技术领域
本发明属于植物病原菌接种及植物抗性鉴定技术领域，尤其涉及一种甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法及其应用。
背景技术
甘蔗(Saccharum officinarum L.)是一种生长于热带和亚热带的多年生宿根草本C4植物，也是世界上最重要的糖料作物。在过去十几年中，我国90％以上的食糖都来自甘蔗糖。甘蔗黑穗病是一种为害全球甘蔗的真菌性病害，受感染植株早期蔗芽萌芽早，茎细小且节间长，主轴叶片直立，分蘖明显增多，并且分蘖也多受病菌侵染。受感染植株后期抽出黑鞭，使甘蔗丧失产糖价值并大幅减产，严重威胁甘蔗产业的稳定发展。甘蔗黑穗病菌(Sporisorium scitamineum)是引起甘蔗黑穗病的病原菌，属于担子菌门、黑粉菌亚门、黑粉菌纲、黑粉菌目、孢堆黑粉菌属。甘蔗黑穗病菌完整生命周期包括三个不同的阶段：类酵母菌单倍体担孢子、双核菌丝和二倍体冬孢子。类酵母菌单倍体担孢子不具有侵染性，需由不同交配型的单倍体担孢子进行有性配合后所产生的双核菌丝体侵染甘蔗并造成系统侵染。受侵染后甘蔗长出由真菌细胞和甘蔗组织共同组成的黑色鞭状结构，其中双核菌丝在黑鞭上逐渐发育形成深褐色冬孢子，成熟的冬孢子散落后在适宜条件下萌发产生单倍体担孢子，单倍体担孢子经有性配合形成双核菌丝再次侵染甘蔗，完成其整个侵染循环。
目前认为，自然条件下黑穗病菌从甘蔗生长点入侵。甘蔗品种对黑穗病的抗性鉴定，有田间多年多点病害调查和人工接种鉴定两种方法，前者是品种推广前必须进行的试验，后者则是研究上检测病原菌致病力的常用方法。人工接种主要分为浸渍接种和注射接种，所用接种菌源为冬孢子或成对可有性配合的单倍体担孢子。王建南等以冬孢子为接种源对13个品种的甘蔗种茎进行针刺接种、催芽接种和浸渍接种。三种接种方法的最小潜育期均超过112天，最长达191天。浸渍接种不同甘蔗品种的最高发病率为65.7％，低于催芽接种的发病率(71.4％)和针刺接种的发病率(81.3％)，推测不同甘蔗品种对黑穗病可能存在形态学抗性或生理生化抗性。沈万宽等分别以成对交配型单倍体担孢子悬浮液注射接种22个不同甘蔗品种小苗和以冬孢子悬浮液浸渍这些甘蔗品种的种芽进行品种抗病性评价。与种芽浸渍接种相比，18个品种小苗注射接种的黑穗病发病率均有不同程度增加，增加幅度为4.9％-65.0％，且浸渍接种的潜伏期(49-159天)较注射接种(35-90天)长。颜梅新等用甘蔗黑穗病菌随机插入突变体与相对交配型的野生型担孢子混合悬浮液注射接种株高20-40cm的甘蔗组培苗，以评价突变体的致病性。上述方法存在的共同缺点是发病潜伏期长(平均60天以上)，通量低且发病率不稳定。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种稳定、可靠、快速且便捷的甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法及其应用，该法可对黑穗病菌致病性进行评价，并用于甘蔗对黑穗病非细胞抗性的快速鉴定。
为解决上述技术问题，本发明采用以下技术方案：
甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法，使用成对交配型的甘蔗黑穗病菌混合担孢子悬浮液对健康甘蔗组培苗进行茎基浸渍接种72h。
甘蔗黑穗病菌混合担孢子悬浮液浓度为6.0×106个/mL-4.5×105个/mL。
甘蔗黑穗病菌混合担孢子悬浮液由等体积同浓度的不同交配型甘蔗黑穗病菌担孢子菌液混合而成。
不同交配型甘蔗黑穗病菌为可进行有性配合的甘蔗黑穗病菌野生型菌株JG35和JG36，或HC1和HC3。
健康甘蔗组培苗来自ROC22、桂糖42、柳城05136、中蔗6号、中蔗9号、粤糖94128品种。
上述甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法，在甘蔗组培苗生根30天后，用清水洗净根部后置于含有浓度为6.0×106个/mL的成对交配型的甘蔗黑穗病菌混合担孢子悬浮液的组培瓶中进行茎基浸渍培养72h。
甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法在甘蔗黑穗病菌致病性检测方面的应用。
茎基浸渍接种72h后移栽至小型育苗盆培养，30天后观察并统计黑穗病发病情况。
培养系在盛有育苗基质的小型育苗盆中，置于28℃、光暗各12h/d，光照强度为2000lx，湿度为60％-80％的人工气候室培养30-60天。
上述甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法在甘蔗品质或材料的抗性类型鉴定、抗病品种选育和新品种推广方面的应用。
针对现有甘蔗黑穗病菌致病性检测方法存在耗时长、通量低、易受外界环境条件影响、发病率不稳定等缺陷，发明建立了一种甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法，该法使用成对交配型的甘蔗黑穗病菌混合担孢子悬浮液为接种源，对生根30天的健康甘蔗组培苗以茎基浸渍的方式接种72h。据此，发明人将其用于甘蔗黑穗菌致病性的测定，即茎基浸渍的方式接种72h后将组培苗种植于小型育苗盆并置于28℃、湿度60％-80％的人工气候室培养30-60天，根据甘蔗植株产生典型黑穗病症状(黑鞭)数量的多少判断菌株致病性强弱。本发明为研究甘蔗黑穗菌致病机制提供了新方法，具有快速、高通量、稳定且简便等特点，通过使用甘蔗组培苗进行茎基浸渍接种可缩短致病性检测时间，并可应用于甘蔗育种材料对黑穗病抗病性类型的高通量鉴定。
附图说明
图1是甘蔗组培苗接种及种植环境图，图中：a为组培苗茎基浸渍接种72h时，组培瓶底部含有20ml甘蔗黑穗病菌担孢子混合悬浮液；b为用于培养接种后组培苗的人工气候室，温度28℃，湿度60％-80％。
图2是不同品种的植株发病症状图，图中：红圈内为病株所产生的黑鞭；ROC22、桂糖42、柳城05136、中蔗6号、中蔗9号和粤糖94128的发病植株均长出黑色鞭状体，与田间典型甘蔗黑穗病症状相同。
图3是不同品种甘蔗发病植株体内黑穗菌显微观察图，图中：生长点为纵切染色组织显微观察；芽为纵切染色组织显微观察；节间为横切染色组织显微观察；节为横切染色组织显微观察；茎基为横切染色组织显微观察。
具体实施方式
一、试验材料
试验试剂和药品：植物DNA提取试剂(NuClean Plant Genomic DNA Kit)购自北京康为世纪生物科技有限公司、TaqDNA聚合酶、0.4％台盼蓝染液购自北京索莱宝科技有限公司。
仪器设备：多样品组织研磨仪(上海净信)、摇床(Thermo)、离心机(Eppendorf)、life ECO基因扩增仪(杭州博日科技有限公司)、君意电泳仪JY300C(北京君意东方电泳设备有限公司)、微量分光光度计(ND-1000，NANODROP)、凝胶成像系统(Gel Doc 1000，BIO-RAD)、光学显微镜(OLYMPUS BX51)、数码相机(Canon EOS80D)、人工气候室、口径9cm育苗盆、50cm×40cm×2cm育苗平盘和育苗基质土等。
试验材料：甘蔗黑穗病菌野生型菌株JG35和JG36以及分离自河池的野生型菌株HC1和HC3均为申请人保存，JG35×JG36注射接种甘蔗幼苗的发病率为8.33％-45.45％，而HC1×HC3注射接种甘蔗幼苗的发病率为0％-23.81％。甘蔗品种中蔗1号、新台糖22号、桂糖42、柳城05136、中蔗6号、中蔗9号和粤糖94128的组培苗为自主培育。
二、试验方法
1、组培苗培养
参考陈丽新等(2002.甘蔗愈伤组织、组培幼苗对抗生素的敏感性试验.广西蔗糖,3-6+49)的甘蔗愈伤组织培养方法。取健康粗壮的甘蔗叶鞘部分去除顶部叶片，剥除外部3～5片叶鞘，用75％酒精喷洒外部消毒，在无菌条件下进一步剥除叶鞘，用锋利解剖刀切下1～2mm的嫩叶外植体，迅速将切下的外植体转入无菌水中浸泡5～10min，吸水纸吸干水分后接入愈伤诱导培养基，28℃暗培养15～20天获得愈伤组织。将愈伤组织转入继代培养基中，28℃继代暗培养15～20天获得更多愈伤组织。将愈伤组织转入分化培养基中，培养10天后可分化出绿芽苗。将分化苗转接至壮苗培养基中培养，30天后再转接至新的壮苗培养基进行壮苗。将壮苗期的苗转接至生根培养基生根30天，炼苗1天后即可用于接种。
2、菌种培养及接种液制备
将于50％甘油保存的甘蔗黑穗病担孢子菌株从-80℃冰箱中取出，冰上融化后用移液枪吸取5μL(约100cfu)在YEPSA平板上划线，倒置培养于28℃恒温培养箱2-3天；挑取单菌落接种至YEPS液体培养基中，置于28℃，200rpm摇床培养过夜；吸取1mL菌液接种至50mL新鲜的YEPS液体培养基中，继续培养至OD600为1.0左右；室温4,000rpm离心5min后弃上清收集菌体，用无菌蒸馏水重悬，室温4,000rpm离心5min后弃上清收集菌体；加入适量蒸馏水重悬菌体并稀释至6.0×106担孢子/mL或4.5×105担孢子/mL。吸取等体积同浓度的不同交配型担孢子菌液混合后用于接种。
3、甘蔗组培苗接种及种植
在甘蔗组培苗生根30天后，用清水将其根部的培养基清洗干净后置于盛有20ml不同交配型担孢子混合悬浮液的组培瓶中，浸没组培苗茎基(图1a)，静置接种72h，以无菌水处理对照，培养温度为28℃，湿度大于60％，光照培养时间为12h/d，光照强度为2000lx，期间每24h向瓶中的组培苗喷洒一次无菌水保湿。72h后将接种后的组培苗移栽至装有育苗基质(南宁桂裕鑫农业科技有限公司)的小型育苗盆(底径6cm，高7.5cm，口径9cm)，培养于温度为(28±1)℃，湿度为60％～80％、光照培养时间为12h/d，光照强度为2000lx的人工气候室中培养50天。
4、致病性观察
接种后观察并记录发病情况。首个植株发病约出现于接种后38天。此后每隔2天调查一次发病情况，直至接种后120天。
5、组织切片法观察甘蔗体内黑穗菌侵染情况
将不同品种的发病植株进行组织切片染色以观察菌丝在不同品种甘蔗体内的分布情况。横切发病植株的茎基、节和节间部位以获得1mm厚的切片，纵切芽和生长尖端以获得1mm厚的切片，将切片放入装有蒸馏水的EP管中；待所有切片取样完成后，吸去蒸馏水，加入溶液I(乳酸:乙二醇:蒸馏水＝1:1:1)，没过切片，沸水浴10min；吸去溶液I，加入0.4％台盼蓝染液没过样品，染色30s后吸去染液，用蒸馏水反复清洗至无色；吸去蒸馏水后加入适量溶液I没过样品，沸水浴7min，冷却后取出切片，进行显微镜观察。
三、试验结果
1、如图1所示：接种甘蔗黑穗病菌的甘蔗组培苗可在人工气候室中正常生长。
2、如图2所示：本发明中的甘蔗黑穗病菌组培苗茎基浸渍接种方法能使甘蔗黑穗病菌有效侵染甘蔗，甘蔗植株的顶部抽出黑色鞭状体，植株的发病症状与田间甘蔗黑穗病发病症状相同。
3、如图3所示，各品种发病植株体内菌丝浸染主要分布于茎基、节、芽和生长点，少量菌丝分布于节间，各品种间菌丝分布区域无明显差别，因此该接种方法可明确中蔗6号、中蔗9号和粤糖94128三个田间抗黑穗病品种对甘蔗黑穗病菌的抗性属于非细胞抗性。
4、如表1所示：
以浓度为6.0×106担孢子/mL和4.5×105担孢子/mL的JG35×JG36担孢子混合悬浮液接种ROC22组培苗，发病率为95.7％-97.7％。以浓度为6.0×106担孢子/mL和4.5×105担孢子/mL的HC1×HC3担孢子混合悬浮液接种ROC22组培苗，发病率为2.4％-7.0％。该结果表明，JG35和JG36菌株具有较强的致病性，而HC1和HC3菌株致病性较弱。强致病性菌株JG35和JG36表现出较高的致病率(97.7％)，且潜伏期短(35-80天)；弱致病性菌株HC1和HC3表现出较低的致病率(5％)，且潜伏期长(大于90天)。此外，无论对于强致病性的或弱致病性的菌株，同种菌株的两种不同接种液浓度对甘蔗发病率无影响(表1)。因此，本技术可用于鉴定菌株的致病性。
表1不同菌株的致病率和发病时间
5、如表2所示：
选择3个田间表现为易感黑穗病的甘蔗品种(ROC22、桂糖42和柳城05136)和3个田间表现为抗黑穗病的品种(中蔗6号、中蔗9号和粤糖94128)进行甘蔗品种的细胞抗性鉴定。中蔗6号和中蔗9号为本实验室自主选育的甘蔗新品种，多年多点的田间种植均表现出极强的黑穗病抗性，田间发病率低于0.4％。
以浓度为6.0×105担孢子/mL的野生型菌株JG35和JG36的担孢子混合悬浮液浸渍接种上述品种组培苗，接种38天后统计植株发病情况。该结果显示，6个品种甘蔗均产生典型的黑穗病症状(图2)，其中易感黑穗病的甘蔗品种发病率为84.21％-97.14％，抗黑穗病的品种发病率为77.14％-89.66％(表2)，两类甘蔗品种间的发病率无显著差异。分别对六个品种发病植株的不同部位进行显微观察，发现菌丝主要分布于茎基、节、芽和生长点，少量分布于节间，菌丝在不同品种甘蔗体内分布无明显差别(图3)。通过甘蔗黑穗病菌担孢子悬浮液浸渍接种三个田间感病品种和三个田间抗病品种，甘蔗发病时间在38-60天内，植株的发病率无明显区别；表明这3个田间抗病品种(中蔗6号、中蔗9号和粤糖94128)对黑穗病菌抗性为非细胞抗性。因此该接种方法可用于鉴定甘蔗品种对黑穗病抗性是否为非细胞抗性。
表2不同甘蔗品种组培苗的甘蔗发病率及发病时间
Claims (10)
1.一种甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法，其特征在于：使用成对交配型的甘蔗黑穗病菌混合担孢子悬浮液对健康甘蔗组培苗进行茎基浸渍接种72h。
2.根据权利要求1所述的甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法，其特征在于：所述甘蔗黑穗病菌混合担孢子悬浮液浓度为6.0×106个/mL-4.5×105个/mL。
3.根据权利要求1所述的甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法，其特征在于：所述甘蔗黑穗病菌混合担孢子悬浮液由等体积同浓度的不同交配型甘蔗黑穗病菌担孢子菌液混合而成。
4.根据权利要求3所述的甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法，其特征在于：所述不同交配型甘蔗黑穗病菌为可进行有性配合的甘蔗黑穗病菌野生型菌株JG35和JG36，或HC1和HC3。
5.根据权利要求4所述的甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法，其特征在于：所述健康甘蔗组培苗来自ROC22、桂糖42、柳城05136、中蔗6号、中蔗9号、粤糖94128品种。
6.根据权利要求1所述的甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法，其特征在于：在甘蔗组培苗生根30天后，用清水洗净根部后置于含有浓度为6.0×106个/mL的成对交配型的甘蔗黑穗病菌混合担孢子悬浮液的组培瓶中进行茎基浸渍培养72h。
7.权利要求1所述甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法在甘蔗黑穗病菌致病性检测方面的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述茎基浸渍接种72h后移栽至小型育苗盆培养，30天后观察并统计黑穗病发病情况。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于：所述培养系在盛有育苗基质的小型育苗盆中，置于28℃、光暗各12h/d，光照强度为2000lx，湿度为60％-80％的人工气候室培养30-60天。
10.权利要求1所述甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法在甘蔗品质或材料的抗性类型鉴定、抗病品种选育和新品种推广方面的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110149068.6A CN114847115A (zh) | 2021-02-03 | 2021-02-03 | 甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110149068.6A CN114847115A (zh) | 2021-02-03 | 2021-02-03 | 甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法及其应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114847115A true CN114847115A (zh) | 2022-08-05 |
Family
ID=82623571
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110149068.6A Pending CN114847115A (zh) | 2021-02-03 | 2021-02-03 | 甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114847115A (zh) |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102204465A (zh) * | 2011-04-20 | 2011-10-05 | 广州甘蔗糖业研究所 | 一种甘蔗黑穗病抗性鉴定方法 |
| CN104160846A (zh) * | 2014-07-15 | 2014-11-26 | 武汉市蔬菜科学研究所 | 一种豇豆抗枯萎病的苗期鉴定方法 |
| CN104170668A (zh) * | 2014-07-29 | 2014-12-03 | 云南省农业科学院甘蔗研究所 | 甘蔗实生苗进行黑穗病高效接种方法 |
| WO2015099674A1 (en) * | 2013-12-23 | 2015-07-02 | Monsanto Technology Llc | Sugarcane regeneration and transformation methods |
| CN110628870A (zh) * | 2019-09-23 | 2019-12-31 | 黑龙江省农业科学院园艺分院 | 一种辣椒苗期疫病抗性的浸根接种鉴定方法 |
| AU2020101526A4 (en) * | 2020-07-28 | 2020-10-29 | Guangxi Academy Of Agricultural Sciences | Sugarcane Yield Increasing and Sugar Increasing Growth Promoter Based on Unmanned Aerial Vehicle Precise Spraying and Application Method |
-
2021
- 2021-02-03 CN CN202110149068.6A patent/CN114847115A/zh active Pending
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102204465A (zh) * | 2011-04-20 | 2011-10-05 | 广州甘蔗糖业研究所 | 一种甘蔗黑穗病抗性鉴定方法 |
| WO2015099674A1 (en) * | 2013-12-23 | 2015-07-02 | Monsanto Technology Llc | Sugarcane regeneration and transformation methods |
| CN104160846A (zh) * | 2014-07-15 | 2014-11-26 | 武汉市蔬菜科学研究所 | 一种豇豆抗枯萎病的苗期鉴定方法 |
| CN104170668A (zh) * | 2014-07-29 | 2014-12-03 | 云南省农业科学院甘蔗研究所 | 甘蔗实生苗进行黑穗病高效接种方法 |
| CN110628870A (zh) * | 2019-09-23 | 2019-12-31 | 黑龙江省农业科学院园艺分院 | 一种辣椒苗期疫病抗性的浸根接种鉴定方法 |
| AU2020101526A4 (en) * | 2020-07-28 | 2020-10-29 | Guangxi Academy Of Agricultural Sciences | Sugarcane Yield Increasing and Sugar Increasing Growth Promoter Based on Unmanned Aerial Vehicle Precise Spraying and Application Method |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 张姗姗: "中蔗系列甘蔗品种的黑穗病抗性鉴定", 中国糖料, vol. 41, no. 1, pages 157 - 163 * |
| 李福元: "植物组织培养技术研究", 云南大学出版社, pages: 102 - 108 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN100557014C (zh) | 一种根瘤固氮菌株系bxyd3及其应用 | |
| US20220369648A1 (en) | Endophytic falciphora oryzae fo-r20 and its application | |
| CN101999317B (zh) | 一种以卷叶贝母鳞片叶为外植体的多倍体鳞茎诱导方法 | |
| CN110468057B (zh) | 一株植物内生盘双端毛孢属真菌m7sb 41及其应用 | |
| CN109757373A (zh) | 一种荆半夏组织培养快速繁殖方法 | |
| CN108739385B (zh) | 一种砂梨叶片高效再生体系的建立方法及其应用 | |
| CN115537346B (zh) | 促进西藏虎头兰生长分化的胶膜菌及其应用 | |
| CN103614411A (zh) | 西洋参发状根诱导及植株再生研究方法 | |
| CN108841748B (zh) | 中华根瘤固氮菌株系h6及其应用 | |
| CN100557015C (zh) | 一种根瘤固氮菌株系bxbl9及其应用 | |
| CN108913625B (zh) | 耐盐链霉菌、其菌剂及其菌剂在促进植物生长中的应用 | |
| CN114381379A (zh) | 一株具有提高石斛幼苗萌蘖能力的胶膜菌菌株tp-8及其应用 | |
| CN111876439B (zh) | 一种农杆菌介导真空侵染木豆的高效遗传转化方法 | |
| CN103340180B (zh) | 一种通过转化大豆毛状根鉴定抗蚜基因抗性功能的方法 | |
| CN107338205A (zh) | 一种蜡样芽孢杆菌菌株EAb‑3及其应用 | |
| CN109804913B (zh) | 一种白羊草-内生真菌共生体的构建方法 | |
| CN111387176A (zh) | 一种厚朴胚性愈伤组织玻璃化超低温保存方法 | |
| CN102960244A (zh) | 一种将固氮菌引入甘蔗组培苗的方法 | |
| CN111269841A (zh) | 新属内生真菌tk815及其应用 | |
| CN115287194B (zh) | 一种药用野生稻内生真菌yya21及其应用 | |
| CN114561324B (zh) | 一株番茄青枯病拮抗菌株及其在防治番茄青枯病方面的应用 | |
| CN114847115A (zh) | 甘蔗黑穗病菌高通量快速简易接种方法及其应用 | |
| CN112458021B (zh) | 一种生防荧光假单胞菌及其培养方法和应用 | |
| CN105585620B (zh) | 大豆蛋白GmAIRP1及其编码基因在培育抗逆性植物中的应用 | |
| CN101182478B (zh) | 一种根瘤固氮菌株系bdyd1及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |