CN114796172A - 具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的山杜英枝叶提取物活性部位和应用 - Google Patents
具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的山杜英枝叶提取物活性部位和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114796172A CN114796172A CN202210579578.1A CN202210579578A CN114796172A CN 114796172 A CN114796172 A CN 114796172A CN 202210579578 A CN202210579578 A CN 202210579578A CN 114796172 A CN114796172 A CN 114796172A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pxs48
- pxs
- ethyl acetate
- extract
- active site
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 241000193241 Solanum dulcamara Species 0.000 title claims abstract description 24
- 235000010307 Solanum dulcamara var. dulcamara Nutrition 0.000 title claims abstract description 17
- 108010022752 Acetylcholinesterase Proteins 0.000 title abstract description 25
- 229940022698 acetylcholinesterase Drugs 0.000 title abstract description 25
- 102000012440 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 title abstract 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 title description 6
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 title description 6
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 66
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims abstract description 44
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical group CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 40
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 26
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 23
- 238000003810 ethyl acetate extraction Methods 0.000 claims abstract description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 18
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 9
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 20
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 20
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 15
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 15
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 15
- WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N dichloromethane;methanol Chemical compound OC.ClCCl WGLUMOCWFMKWIL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 14
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 14
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 14
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 9
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 8
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims description 7
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 7
- 241001508399 Elaeagnus Species 0.000 claims description 6
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 6
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 claims description 6
- 206010039966 Senile dementia Diseases 0.000 claims description 5
- 235000000336 Solanum dulcamara Nutrition 0.000 claims description 4
- 241001228114 Elaeagnus mollis Species 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 14
- 239000002904 solvent Substances 0.000 abstract description 4
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 abstract description 2
- 238000007670 refining Methods 0.000 abstract 1
- 102100033639 Acetylcholinesterase Human genes 0.000 description 22
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 11
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 9
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 6
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 5
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 5
- KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 3,3'-Dithiobis(6-nitrobenzoic acid) Chemical compound C1=C([N+]([O-])=O)C(C(=O)O)=CC(SSC=2C=C(C(=CC=2)[N+]([O-])=O)C(O)=O)=C1 KIUMMUBSPKGMOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 4
- YLJREFDVOIBQDA-UHFFFAOYSA-N tacrine Chemical compound C1=CC=C2C(N)=C(CCCC3)C3=NC2=C1 YLJREFDVOIBQDA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960001685 tacrine Drugs 0.000 description 4
- SZMVXHRECFRCKQ-UHFFFAOYSA-M 2-ethanethioyloxyethyl(trimethyl)azanium;iodide Chemical class [I-].CC(=S)OCC[N+](C)(C)C SZMVXHRECFRCKQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000737263 Lygodium Species 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000469 ethanolic extract Substances 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 3
- GGLIEWRLXDLBBF-UHFFFAOYSA-N Dulcin Chemical compound CCOC1=CC=C(NC(N)=O)C=C1 GGLIEWRLXDLBBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000015876 Elaeocarpus sylvestris Nutrition 0.000 description 2
- 241000615471 Elaeocarpus sylvestris Species 0.000 description 2
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 210000002932 cholinergic neuron Anatomy 0.000 description 2
- 230000019771 cognition Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- NWNUTSZTAUGIGA-UHFFFAOYSA-N dulcin Natural products C12CC(C)(C)CCC2(C(=O)OC2C(C(O)C(O)C(COC3C(C(O)C(O)CO3)O)O2)O)C(O)CC(C2(CCC3C4(C)C)C)(C)C1=CCC2C3(C)CCC4OC1OCC(O)C(O)C1OC1OC(CO)C(O)C(O)C1O NWNUTSZTAUGIGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008126 dulcin Substances 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002398 materia medica Substances 0.000 description 2
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 2
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000011218 segmentation Effects 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 229940100578 Acetylcholinesterase inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000000044 Amnesia Diseases 0.000 description 1
- 102000003914 Cholinesterases Human genes 0.000 description 1
- 108090000322 Cholinesterases Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000337007 Oceania Species 0.000 description 1
- 244000294611 Punica granatum Species 0.000 description 1
- 235000014360 Punica granatum Nutrition 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 1
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 1
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000012223 aqueous fraction Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000006949 cholinergic function Effects 0.000 description 1
- 229940048961 cholinesterase Drugs 0.000 description 1
- 239000000544 cholinesterase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 208000010877 cognitive disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 231100000863 loss of memory Toxicity 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 229940097496 nasal spray Drugs 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000008736 traumatic injury Effects 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/39—Complex extraction schemes, e.g. fractionation or repeated extraction steps
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/55—Liquid-liquid separation; Phase separation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明提供具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的山杜英[Elaeocarpus sylvestris(Lour.)Poir.]枝叶提取物活性部位和应用，属于植物药技术领域。本发明将干燥的山杜英枝叶，用溶剂提取获得粗提物PXS48‑1A，PXS48‑1A通过萃取制备得到乙酸乙酯萃取部位PXS48‑3A和正丁醇萃取部位PXS48‑4A。并分别将乙酸乙酯部位PXS48‑3A和正丁醇萃取部位PXS48‑4A精分得到PXS48‑23、PXS48‑24、PXS48‑25、PXS48‑43、PXS48‑44和PXS48‑45等六个活性部位。这些活性部位对乙酰胆碱酯酶具有显著的抑制活性。本发明同时提供了以山杜英枝叶的植物药活性部位组成的药物组合物，该植物药活性部位及其药物组合物的制备方法，以及它们在制备治疗阿兹海默症的药物中的应用。
Description
技术领域：
本发明属于医药技术领域，具体地，涉及植物药技术领域，更具体地，涉及山杜英枝叶提取物活性部位及其药物组合物与其制备方法和其在制备治疗或预防阿兹海默症的药物中的应用。
背景技术：
乙酰胆碱(Acetyl choline,ACh)是最先被发现的神经传递素，它是所有胆碱能神经元使用的神经递质，在外围和中枢神经系统中扮演着非常重要的角色。几乎大脑中的每个区域都受到胆碱能神经元的控制。阿兹海默症(Alzheimer’s disease,AD)是一种渐进性的中枢神经退行性疾病。患有AD的病人在临床上主要表现是记忆力的逐渐丧失和逐渐出现的认知功能障碍。AD的认知能力低下与中枢乙酰胆碱能活性降低相关，而Ach在突触中的含量升高会使人的认知能力和记忆力得到改善。乙酰胆碱酯酶(Acetylcholinesterase,AChE)是水解乙酰胆碱的特异性胆碱酯酶，而增强胆碱能功能是目前治疗AD最有效的方法。因此高效的乙酰胆碱酯酶抑制剂的筛选是开发治疗神经退行性疾病药物的基础。随着我国逐渐步入结构老龄化社会，AD日益成为当前老年医学面临的最为严峻的问题之一。从植物中寻找和筛选具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的天然分子也成了新的研究热点。
山杜英[Elaeocarpus sylvestris(Lour.)Poir.]为杜英科杜英属植物，该属植物全世界约有350种，分布于东亚，东南亚及西南太平洋和大洋洲。我国产38种，6变种，主要分布于横断山山脉和南岭山脉，四川峨眉山是其分布的最北界。山杜英主要分布于热带、亚热带地区；越南、老挝、泰国、韩国的济州岛、中国南部以及日本的冲绳和九州，是常绿阔叶森林群落的重要组成树种，国内广东、海南、广西、福建、浙江、江西、湖南、贵州、四川及云南有野生资源分布。
山杜英具有良好的观赏价值，是南方地区常用的绿化行道树。除其观赏价值外，山杜英还是优良的蜜源植物，还具一定的药用功能。据《新华本草纲要》(第一册)记载，山杜英的根具有散瘀消肿的功能，用于跌打肿痛[吴征镒.新华本草纲要.上海:上海科学技术出版社,1988.]。经查，现有技术中未见有山杜英枝叶提取物活性部位及其具有抗老年痴呆或神经退行性疾病价值治疗前景的活性相关报道。
发明内容：
本发明的目的是提供山杜英枝叶提取物活性部位，其制备方法，其药物组合物，其在制备治疗或预防阿兹海默症的药物中的应用。
为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：
山杜英枝叶提取物活性部位，包括PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25和PXS48-43、PXS48-44、PXS48-45，是由下述方法制备而得的：
(a)山杜英干燥的枝叶，粉碎后用95％的乙醇，60℃水浴超声提取60min，重复3次，合并过滤，减压浓缩得到浸膏PXS48-1A；
(b)将浸膏PXS48-1A用水制成混悬液，用石油醚萃取，石油醚萃取后的水相溶液，继续用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取部位PXS48-3A；乙酸乙酯萃取后的水相溶液，继续用正丁醇萃取，回收正丁醇，得正丁醇萃取部位PXS48-4A；
(c)将乙酸乙酯萃取部位PXS48-3A经正相硅胶80～100目柱层析，用二氯甲烷-甲醇体系10:1→0:1梯度洗脱，得到PXS48-23、PXS48-24和PXS48-25；
(d)将正丁醇萃取部位PXS48-4A，经正相硅胶80～100目柱层析，用二氯甲烷-甲醇10:1→0:1梯度洗脱，得到PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45。
同时提供了制备所述的山杜英枝叶提取物活性部位的方法，该方法包括下述步骤：
(a)山杜英干燥的枝叶，粉碎后用95％的乙醇，60℃水浴超声提取60min，重复3次，合并过滤，减压浓缩得到浸膏PXS48-1A；
(b)将浸膏PXS48-1A用水制成混悬液，用石油醚萃取，石油醚萃取后的水相溶液，继续用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取部位PXS48-3A；乙酸乙酯萃取后的水相溶液，继续用正丁醇萃取，回收正丁醇，得正丁醇萃取部位PXS48-4A；
(c)将乙酸乙酯萃取部位PXS48-3A经正相硅胶80～100目柱层析，用二氯甲烷-甲醇体系10:1→0:1梯度洗脱，得到PXS48-23、PXS48-24和PXS48-25；
(d)将正丁醇萃取部位PXS48-4A，经正相硅胶80～100目柱层析，用二氯甲烷-甲醇10:1→0:1梯度洗脱，得到PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45。
本发明还提供了一种药物组合物，其含有治疗有效量的山杜英枝叶提取物活性部位PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25和PXS48-43、PXS48-44、PXS48-45任其一或其任意组合，以及药学上可接受的载体。
此外，本发明提供了所述的山杜英枝叶提取物活性部位或所述的药物组合物在制备治疗或预防阿兹海默症的药物中的应用。
以及，所述的山杜英枝叶提取物活性部位或所述的药物组合物在制备治疗或预防老年痴呆或神经退行性疾病的药物中的应用。
另外，提供了所述的药物组合物的制备方法，该方法包括下述步骤：
(a)山杜英干燥的枝叶，粉碎后用95％的乙醇，60℃水浴超声提取60min，重复3次，合并过滤，减压浓缩得到浸膏PXS48-1A；
(b)将浸膏PXS48-1A用水制成混悬液，用石油醚萃取，石油醚萃取后的水相溶液，继续用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取部位PXS48-3A；乙酸乙酯萃取后的水相溶液，继续用正丁醇萃取，回收正丁醇，得正丁醇萃取部位PXS48-4A；
(c)将乙酸乙酯萃取部位PXS48-3A经正相硅胶80～100目柱层析，用二氯甲烷-甲醇体系10:1→0:1梯度洗脱，得到PXS48-23、PXS48-24和PXS48-25；
(d)将正丁醇萃取部位PXS48-4A，经正相硅胶80～100目柱层析，用二氯甲烷-甲醇10:1→0:1梯度洗脱，得到PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45；
(e)将山杜英枝叶提取物活性部位PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25和PXS48-43、PXS48-44、PXS48-45任其一或其任意组合，加入可药用载体。
本发明还另外提供了一种改善阿兹海默症的植物药，其含有治疗有效量的山杜英枝叶提取物活性部位PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25和PXS48-43、PXS48-44、PXS48-45任其一或其任意组合，和药学上可接受的载体。
本发明将干燥的山杜英枝叶，用溶剂提取和萃取制备得到PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A，其对乙酰胆碱酯酶具有显著的抑制活性。将PXS48-3A和PXS48-4A分别以及柱层析分离，得到PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25、PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45均对乙酰胆碱酯酶具有显著的抑制活性。PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25、PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45及其不同的组合，提供了新的治疗或预防阿兹海默症的药物。
本发明山杜英枝叶提取物活性部位用作药物时，可以直接使用，或者以药物组合物的形式使用。该药物组合物含有20–90％的本发明山杜英枝叶提取物活性部位，其余为药物学上可接受的，对人和动物无毒和惰性的可药用载体或赋形剂。
所述的药用载体或赋形剂是一种或多种固体、半固体和液体稀释剂、填料以及药物制品辅剂。将本发明的药物组合物以单位体重服用量的形式使用。本发明的药物可经注射(静注、肌注)和口服两种形式给药。
本发明所述的山杜英枝叶及其提取物为原料能制备预防和治疗阿兹海默症的药物，能制备治疗或预防老年痴呆或神经退行性疾病的药物，可在现有技术的基础上，采用中药制剂常规方法制备成任何药用的制剂。例如，将山杜英枝叶制成散剂冲服；将提取物制成片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂，但这并不限制本发明的保护范围。
与现有技术相比，本发明具有下述的优益效果：
首次提供了山杜英枝叶提取物活性部位PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25和PXS48-43、PXS48-44、PXS48-45，填补了现有技术的空白。
本发明的山杜英提取物活性部位，特别是乙醇提取物(PXS48-1A)对乙酰胆碱酯酶具有显著的抑制活性，其半数抑制浓度(IC50值)为1.88±0.09μg/mL。对乙醇提取物进行萃取和进一步的精分划段后测试其乙酰胆碱酯酶的抑制活性，结果显示其乙酸乙酯萃取部位(PXS48-3A)、正丁醇萃取部位(PXS48-4A)和精分划段部位PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25、PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45均有乙酰胆碱酯酶抑制活性，其中PXS48-24和PXS48-25的IC50值接近对照他克林，分别为0.2±0.1μg/mL和0.32±0.1μg/mL。PXS48-43，PXS48-44和PXS48-45的IC50值平均为1.0μg/mL。
本发明的制备方法原料易得，步骤简单易行，可操作性强，环保，得率高。
本发明首次提供了山杜英枝叶提取物活性部位或所述的药物组合物在制备治疗或预防阿兹海默症的药物中的应用，以及，在制备治疗或预防老年痴呆或神经退行性疾病的药物中的应用。
具体实施方式：
下面用本发明的实施例来进一步说明本发明的实质性内容，但并不以此来限定本发明。
实施例1：
PXS48-1A的制备。
取山杜英[Elaeocarpus sylvestris(Lour.)Poir.]的枝叶干燥后的样品11.0kg，粉碎后经95％的乙醇(15L)，60℃水浴超声提取60min，重复3次，合并过滤，减压浓缩得到浸膏(编号为：PXS48-1A)3.7kg。
实施例2：
PXS48-3A和PXS48-4A的制备。
取浸膏PXS48-1A(3.7kg)，加蒸馏水(2L)制成混悬液后，用依次用等体积的石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分别萃取6～10次，回收萃取溶剂后，分别得到石油醚萃取部位，乙酸乙酯萃取部位(编号为：PXS48-3A)665.0g；正丁醇萃取部位(编号为：PXS48-4A)541.0g和水部分。
实施例3：
PXS48-23、PXS48-24和PXS48-25的制备。
将乙酸乙酯萃取部位(PXS48-3A，660.0g)进行正相硅胶(80～100目)柱层析，用二氯甲烷-甲醇体系(10:1→0:1)梯度洗脱，得到PXS48-23(97.6g)、PXS48-24(115.7g)和PXS48-25(128.4g)。
实施例4：
PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45的制备。
将正丁醇萃取部位(PXS48-4A，540.0g)，经正相硅胶(80～100目)柱层析，用二氯甲烷-甲醇(10：1→0：1)梯度洗脱，得到PXS48-43(16.0g)，PXS48-44(19.5g)和PXS48-45(25.8g)。
实施例5：
PXS48-1A、PXS48-2A和PXS48-4A对乙酰胆碱酯酶的抑制作用。
一、实验原理
乙酰胆碱酯酶能够催化其底物类似物碘化硫代乙酰胆碱降解，生成硫代胆碱和乙酸，反应生成物与显色剂DTNB反应生成黄色物质，在405nm处有特异光吸收。样品与乙酰胆碱酯酶的混合液在37℃反应，如果样品对乙酰胆碱酯酶有抑制作用，那么乙酰胆碱酯酶催化底物类似物碘化硫代乙酰胆碱降解的量就会减少，相应的与DTNB反应生成的黄色样品减少，即在405nm处的光吸收值变小，以此来筛选具有抑制活性的样品。
二、试剂仪器
提取物样品：PXS48-1A、PXS48-3A和PXS48-4A；Na2HPO4；NaH2PO4；乙酰胆碱酯酶、碘化硫代乙酰胆碱、DTNB、他克林均购自Sigma。
仪器：酶标仪Multiskan FC(Thermo Fisher,USA)。
三、实验方法
1.用磷酸盐缓冲液(每100mL磷酸盐缓冲液中含0.1M Na2HPO4溶液94.7mL；0.1MNaH2PO4溶液5.3mL，调pH至8.0)将AChE稀释成0.1U/mL工作液；
2.碘化硫代乙酰胆碱和DTNB用磷酸盐缓冲液配成6.25mM的溶液(工作液)；
3.粗提物稀释成2mg/mL工作液，粗提物终浓度为100μg/mL。阳性对照为他克林，终浓度为0.333μM；阴性对照组(NC组)为2％DMSO溶剂对照。
4.反应在96孔板中进行，向96孔板中依次加入下列试剂(加入试剂的体积为一个反应的体积)，每个样品做3个重复；
(1)样品和他克林浓度梯度的设定(用1％DMSO稀释)。
(2)铺板：200μL/体系，每孔内DMSO的终浓度均为0.1％，每个样本做3个复孔。
表1.实验试剂加样体系
5.加入显色剂和底物后1小时内，每30秒钟检测一次405nm吸光值。
6.选择NC组吸光值平均值约为1时的样品吸光值，计算样品吸光值平均值(样品测定值-背景值)，并按照(NC-样品吸光值平均值)/NC*100％来计算样品AChE抑制率。
四、实验结果
结果显示，山杜英枝叶乙醇提取物PXS48-1A，乙酸乙酯萃取部位PXS48-3A和正丁醇萃取部位PXS48-4A均对乙酰胆碱酯酶具有抑制活性。
表2.PXS48-1A、PXS48-3A和PXS48-4A对乙酰胆碱酯酶的抑制活性
实施例6：
PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25、PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45对乙酰胆碱酯酶的抑制作用。
实验原理、试剂仪器和实验方法同实施例5，实验样品为：PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25、PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45。
实验结果显示，精分划段获得的PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25、PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45均对乙酰胆碱酯酶具有抑制作用。
表3.PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25、PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45对乙酰胆碱酯酶的抑制活性
制剂实施例
1.取PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25、PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45任其一或其任意组合，按其与赋形剂重量比1:1的比例加入赋形剂，制粒压片。
2.取PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25、PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45任其一或其任意组合，按其与赋形剂重量比1:2的比例加入赋形剂，制粒压片。
3.取PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25、PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45任其一或其任意组合，按常规胶囊制剂方法制成胶囊。
4.取PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25、PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45任其一或其任意组合100mg，再取淀粉适量、玉米浆适量、硬脂酸镁适量，制成片剂。
5.胶囊剂：取PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25、PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45任其一或其任意组合100mg，淀粉适量，硬脂酸模适量，制备方法：将活性部位与助剂混合，过筛，在合适的容器中均匀混合，把得到的混合物装入硬明胶胶囊。
6.鼻喷雾剂：
取PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25、PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45任其一或其任意组合，80mg
制备方法：搅拌下于适当体积的重蒸榴水中每次加入一种成分，直至完全溶解，然后再加入另一种成分。加水至2mL后，将该溶液在无菌过滤器上过滤，装入瓶中并按照适当的剂量分隔。
7.滴丸：取PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25、PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45任其一或其任意组合1g，聚乙二醇6000 9g。制法：按上述处方量称取PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25、PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45任其一或其任意组合，加入适量无水乙醇，微热溶解后，加入处方量的聚乙二醇熔融液中(60℃水浴保温)，搅拌混合均匀，直至乙醇挥尽为止，静置于60℃水浴中保温30分钟，待气泡除尽，将除尽气泡的上述混匀熔融液转入贮液筒内，在80～85℃保温条件下，控制滴速，逐滴滴入冷凝液中，待冷凝完全，倾去冷凝液，收集滴丸，沥净和用滤纸除去丸上的冷凝液，放置硅胶干燥器中或自然干燥即可。
Claims (8)
1.山杜英枝叶提取物活性部位，其特征在于所述的山杜英枝叶提取物活性部位包括PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25和PXS48-43、PXS48-44、PXS48-45，是由下述方法制备而得的：
（a）山杜英干燥的枝叶，粉碎后用95%的乙醇，60℃水浴超声提取60 min，重复3次，合并过滤，减压浓缩得到浸膏PXS48-1A；
（b）将浸膏PXS48-1A用水制成混悬液，用石油醚萃取，石油醚萃取后的水相溶液，继续用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取部位PXS48-3A；乙酸乙酯萃取后的水相溶液，继续用正丁醇萃取，回收正丁醇，得正丁醇萃取部位PXS48-4A；
（c）将乙酸乙酯萃取部位PXS48-3A经正相硅胶80~100目柱层析，用二氯甲烷-甲醇体系10:1→0:1梯度洗脱，得到PXS48-23、PXS48-24和PXS48-25；
（d）将正丁醇萃取部位PXS48-4A，经正相硅胶80~100目柱层析，用二氯甲烷-甲醇10:1→0:1梯度洗脱，得到PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45。
2.制备权利要求1所述的山杜英枝叶提取物活性部位的方法，其特征在于该方法包括下述步骤：
（a）山杜英干燥的枝叶，粉碎后用95%的乙醇，60℃水浴超声提取60 min，重复3次，合并过滤，减压浓缩得到浸膏PXS48-1A；
（b）将浸膏PXS48-1A用水制成混悬液，用石油醚萃取，石油醚萃取后的水相溶液，继续用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取部位PXS48-3A；乙酸乙酯萃取后的水相溶液，继续用正丁醇萃取，回收正丁醇，得正丁醇萃取部位PXS48-4A；
（c）将乙酸乙酯萃取部位PXS48-3A经正相硅胶80~100目柱层析，用二氯甲烷-甲醇体系10:1→0:1梯度洗脱，得到PXS48-23、PXS48-24和PXS48-25；
（d）将正丁醇萃取部位PXS48-4A，经正相硅胶80~100目柱层析，用二氯甲烷-甲醇10:1→0:1梯度洗脱，得到PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45。
3.药物组合物，其含有治疗有效量的权利要求1所述的山杜英枝叶提取物活性部位PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25和PXS48-43、PXS48-44、PXS48-45任其一或其任意组合，以及药学上可接受的载体。
4.权利要求1所述的山杜英枝叶提取物活性部位或权利要求3所述的药物组合物在制备治疗或预防阿兹海默症的药物中的应用。
5.权利要求1所述的山杜英枝叶提取物活性部位或权利要求3所述的药物组合物在制备治疗或预防老年痴呆的药物中的应用。
6.权利要求1所述的山杜英枝叶提取物活性部位或权利要求3所述的药物组合物在制备治疗或预防神经退行性疾病的药物中的应用。
7.权利要求3所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，该方法包括下述步骤：
（a）山杜英干燥的枝叶，粉碎后用95%的乙醇，60℃水浴超声提取60 min，重复3次，合并过滤，减压浓缩得到浸膏PXS48-1A；
（b）将浸膏PXS48-1A用水制成混悬液，用石油醚萃取，石油醚萃取后的水相溶液，继续用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯萃取部位PXS48-3A；乙酸乙酯萃取后的水相溶液，继续用正丁醇萃取，回收正丁醇，得正丁醇萃取部位PXS48-4A；
（c）将乙酸乙酯萃取部位PXS48-3A经正相硅胶80~100目柱层析，用二氯甲烷-甲醇体系10:1→0:1梯度洗脱，得到PXS48-23、PXS48-24和PXS48-25；
（d）将正丁醇萃取部位PXS48-4A，经正相硅胶80~100目柱层析，用二氯甲烷-甲醇10:1→0:1梯度洗脱，得到PXS48-43、PXS48-44和PXS48-45；
（e）将山杜英枝叶提取物活性部位PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25和PXS48-43、PXS48-44、PXS48-45任其一或其任意组合，加入可药用载体。
8.一种改善阿兹海默症的植物药，其含有治疗有效量的权利要求1或2所述的山杜英枝叶提取物活性部位PXS48-1A、PXS48-3A、PXS48-4A、PXS48-23、PXS48-24、PXS48-25和PXS48-43、PXS48-44、PXS48-45任其一或其任意组合，和药学上可接受的载体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210579578.1A CN114796172A (zh) | 2022-05-26 | 2022-05-26 | 具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的山杜英枝叶提取物活性部位和应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210579578.1A CN114796172A (zh) | 2022-05-26 | 2022-05-26 | 具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的山杜英枝叶提取物活性部位和应用 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114796172A true CN114796172A (zh) | 2022-07-29 |
Family
ID=82517136
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210579578.1A Pending CN114796172A (zh) | 2022-05-26 | 2022-05-26 | 具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的山杜英枝叶提取物活性部位和应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114796172A (zh) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103467533A (zh) * | 2013-09-17 | 2013-12-25 | 南京通泽农业科技有限公司 | 一种卵形山杜英叶中提取杜英素的方法 |
| KR20150047756A (ko) * | 2013-10-25 | 2015-05-06 | 김석말 | 담팔수나무 잎과 열매를 이용한 환 제조방법 |
| CN114502184A (zh) * | 2020-09-07 | 2022-05-13 | 杰恩森生物科技有限公司 | 防治冠状病毒感染的包括杜英萃取物的药物和食品组合物 |
-
2022
- 2022-05-26 CN CN202210579578.1A patent/CN114796172A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103467533A (zh) * | 2013-09-17 | 2013-12-25 | 南京通泽农业科技有限公司 | 一种卵形山杜英叶中提取杜英素的方法 |
| KR20150047756A (ko) * | 2013-10-25 | 2015-05-06 | 김석말 | 담팔수나무 잎과 열매를 이용한 환 제조방법 |
| CN114502184A (zh) * | 2020-09-07 | 2022-05-13 | 杰恩森生物科技有限公司 | 防治冠状病毒感染的包括杜英萃取物的药物和食品组合物 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 张洪超等: "山杜英叶的化学成分研究", 中药材, vol. 31, no. 10, pages 1503 - 1505 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CA2451740C (en) | Composition comprising wenguanguo extracts, methods for preparing same and uses thereof | |
| Djordjevic | From medicinal plant raw material to herbal remedies | |
| AU2002348988A1 (en) | Composition comprising Wenguanguo extracts, methods for preparing same and uses thereof | |
| JP6091651B2 (ja) | 頭痛治療用医薬組成物、及びその調製法 | |
| CN110742972B (zh) | 一种具有改善认知作用的中药组合物及其制备方法和中药制剂 | |
| WO2008145064A1 (fr) | Procédé d'obtention d'un extrait contenant du séquoyitol à partir d'une espèce du genre trifolium, de soja et de ginkgo biloba, et utilisation de celui-ci | |
| CN111117773A (zh) | 一种从蒜头果油中分离神经酸的方法及应用 | |
| CN105055462A (zh) | 一种用于预防和治疗阿尔茨海默病的中药提取物及其应用 | |
| CN101757374B (zh) | 一种制备治疗烧烫伤的药剂及其制备方法 | |
| CN101274013B (zh) | 一种治疗老年痴呆症的组方药物及制备方法 | |
| CN114796172A (zh) | 具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的山杜英枝叶提取物活性部位和应用 | |
| CN1679698A (zh) | 一种由三七、川芎制成的治疗心脑血管疾病的药物制剂及其制备方法 | |
| CN100560578C (zh) | 一种用于防治视疲劳的植物提取物和制剂及制备方法 | |
| RU2408384C2 (ru) | Китайский лекарственный состав, способ его получения и применение | |
| CN112807398A (zh) | 一种具有滋阴清热，养血安神功效的中药组合物 | |
| CN102755365B (zh) | 一种具有活血散瘀、消肿止痛作用的活血止痛滴丸及其制备方法 | |
| CN100453072C (zh) | 板蓝根滴丸及其制备方法 | |
| CN1321632C (zh) | 复方雪莲软胶囊及其制备工艺 | |
| KR20160086457A (ko) | 가미방기황기탕의 주정추출물을 포함하는 류마티스 관절염의 예방 및 치료용 조성물 | |
| CN111686085B (zh) | 一种咽喉清喉制剂的制备方法 | |
| RU2683643C1 (ru) | Способ получения водно-спиртового экстракта лекарственных растений, обладающего седативным и гипотензивным действием | |
| RU2197980C1 (ru) | Средство, нормализующее обмен веществ | |
| CN110664919A (zh) | 一种抗老年痴呆的药物组合物及其制备方法和应用 | |
| CN118593571A (zh) | 一种含有川乌茎叶提取物的组合物及其应用 | |
| CN114949013A (zh) | 黄水枝醇提物在制备治疗或保护、调节阿尔兹海默症疾病药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220729 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |