CN114767620B - 一种负载藤黄酸的多级响应可注射水凝胶及其用途 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种水凝胶前驱体及其固化而成的水凝胶，含有如下组分：藤黄酸脂质体0.3～0.8mg/mL；纤维蛋白原3～8mg/mL；凝血酶3～8NIHU/mL；磷酸氢钙15～25μmol/mL；余量为水。前述前驱体具有良好的可注射性能，可在肿瘤部位局部注射后生理响应固化形成水凝胶，在肿瘤酸性环境下，含有磷酸氢钙的水凝胶骨架水解后释放出药物藤黄酸和钙离子，一方面，藤黄酸本身具有抗肿瘤作用，另一方面还能够促进水解出的钙离子进入肿瘤细胞，引起肿瘤细胞内钙超载导致凋亡，从而协同增效治疗肿瘤。本发明水凝胶可以通过局部原位注射提高肿瘤部位的药物浓度，毒副作用小，抗肿瘤效果优异，临床应用前景佳。

Description

一种负载藤黄酸的多级响应可注射水凝胶及其用途
技术领域
本发明属于生物医用材料领域，具体涉及一种负载藤黄酸的多级响应可注射水凝胶及其用途。
背景技术
骨肉瘤(osteosarcoma，OS)是儿童和青少年最常见的恶性骨肿瘤，约占所有骨癌中的30％，是目前造成儿童和青少年死亡最常见的一种恶性肿瘤。骨肉瘤的特征是肿瘤转移，分化向软骨和骨骼。尽管大部分原发性骨肉瘤的治疗取得了重大进展，但其5年生存率仍在60％左右，转移性肿瘤的生存率仅为20％。目前临床上的标准治疗策略是手术、放疗和辅助化疗。特别是在骨肉瘤早期，首选甲氨蝶呤、异环磷酰胺、阿霉素和顺铂等化疗药物控制骨肉瘤的生长，但普通的化疗药物，缺乏靶向性且存在耐药性，并且药物难以到达骨组织，导致肿瘤部位的药物浓度低，从而造成治疗效果不明显且产生严重的药物副作用。
藤黄酸(Gambogic Acid，GA)作为一种新型的、高效广谱抗肿瘤药物，对减轻癌症患者的痛苦，提高患者的生活质量具有非常重要的意义。目前有相关研究([1]L.Liu,X.J.Qi,Z.K.Zhong,et al.Nanomedicine-based combination of gambogic acid andretinoic acid chlorochalcone for enhanced anticancer efficacy in osteosarcoma[J].Biomedecine&pharmacotherapie, 2016(83):79-84.[2]Z.F.Xin,C.C.Shen,L.J.Tao,et al.Gambogic acid inhibits invasion of osteosarcoma via upregulation ofTIMP-1[J].International journal of molecular medicine,2013,31(1):105-12.)表明，藤黄酸对骨肉瘤的治疗具有巨大的潜在价值，然而，尽管藤黄酸展现出较好的体外抗骨肉瘤作用，但藤黄酸水溶性低，血管刺激性强等特性极大的限制了藤黄酸在骨肉瘤治疗中的临床应用。
水凝胶一种生物相容性好，结构可设计性强的材料，作为药物的载体获得了越来越多的关注，尤其是具有刺激响应性(例如温度敏感性、pH敏感性、 ROS敏感性等)的水凝胶、可注射的水凝胶等的出现，为藤黄酸等抗肿瘤药物的给药方式、释药途径提供了更加丰富的选择。尤其是对于骨肉瘤等肿瘤而言，为了提高肿瘤部位的药物浓度，同时避免全身给药，降低毒副作用，改善患者的顺应性，设计一种能够原位注射给药，在生理环境下形成水凝胶，并响应肿瘤微环境实现藤黄酸等抗肿瘤药物释放的可注射水凝胶给药体系，对骨肉瘤等肿瘤的治疗具有非常重要的意义。
在此基础上，为了适应临床使用的需求，也对载藤黄酸的可注射水凝胶给药体系的成胶时间、力学性能、载药和释药能力以及对肿瘤的治疗效果等诸多方面提出了更多更高的要求。
发明内容
本发明的目的在于提供一种可原位注射的多级响应水凝胶，将其包载纳米药物进行骨肉瘤的治疗。
本发明还提供了一种水凝胶前驱体，它含有如下组分：
藤黄酸脂质体0.3～0.8mg/mL；
纤维蛋白原3～8mg/mL；
凝血酶3～8NIH U/mL；
磷酸氢钙15～25μmol/mL；
余量为水。
进一步地，它含有如下组分：
藤黄酸脂质体0.5mg/mL；
纤维蛋白原5mg/mL；
凝血酶5NIH U/mL；
磷酸氢钙20μmol/mL；
余量为水。
进一步地，上述磷酸氢钙为磷酸氢钙纳米线。
进一步地，上述藤黄酸脂质体是包载聚乙二醇修饰的藤黄酸的脂质体。
进一步地，上述脂质体由如下原料制成：胆固醇、氢化大豆磷脂、维生素E。
更进一步地，上述脂质体按照如下步骤制备而成：
(1)聚乙二醇修饰的藤黄酸、胆固醇、氢化大豆磷脂、维生素E溶于无水乙醇溶解，55～60℃保温，得到有机相；
(2)纯水55～60℃保温，得到水相；
(3)取有机相滴加到剧烈搅拌的水相，滴加完成后55～60℃续搅拌1-2h；
(4)除去乙醇，依次通过孔径200nm、100nm的膜，在55～60℃挤出 5～8次；
其中，聚乙二醇修饰的藤黄酸、胆固醇、氢化大豆磷脂、维生素E的摩尔比为1:(1.5～2.5):(7～8):(0.05～0.15)；优选为1:2:7.5:0.1；水相和有机相的体积比为(10～15):1，优选为12:1。
进一步地，上述聚乙二醇修饰的藤黄酸中，聚乙二醇重均分子量为 2000～6000；
优选地，所述聚乙二醇修饰的藤黄酸按照如下方法制备而成：藤黄酸与聚乙二醇在缩合剂、催化剂的作用下反应，纯化。
本发明还提供了一种水凝胶，它是上述的水凝胶前驱体反应固化而成。
本发明还提供了上述的水凝胶在治疗癌症的药物中的用途；优选地，所述药物是治疗骨肉瘤、恶性黑色素瘤、乳腺癌和/或肺癌的药物。
本发明还提供了藤黄酸或藤黄酸脂质体作为细胞的钙离子吸收促进剂的用途，优选地，所述钙离子是氯化钙水解出的钙离子或磷酸氢钙纳米线在酸性条件下解离出的钙离子。
本发明提供的水凝胶前驱体具有良好的可注射性能，可在肿瘤部位局部注射后生理响应固化形成水凝胶，体系中添加了磷酸氢钙纳米线，并负载藤黄酸纳米药物，肿瘤酸性环境下，含有磷酸氢钙的水凝胶骨架水解后释放出药物藤黄酸和钙离子，一方面，藤黄酸本身具有抗肿瘤作用，另一方面还能够促进水解出的钙离子进入肿瘤细胞，引起肿瘤细胞内钙超载导致凋亡，从而协同增效治疗肿瘤；同时，磷酸氢钙纳米线是三维网状结构，有助于纤维蛋白水凝胶的成型，增强凝胶力学性能，且磷酸氢钙纳米线具有介孔结构，有助于藤黄酸药物的附着，即提高凝胶的载药能力。本发明水凝胶前驱体可以通过局部原位注射提高肿瘤部位的药物浓度，在人体温度(37℃)下， 3～5min可形成凝胶，毒副作用小，抗肿瘤效果优异，临床应用前景佳。
本发明“钙离子吸收促进剂”指促进细胞吸收外源钙离子的试剂。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1为不同浓度纤维蛋白原(FG)的水凝胶前驱体成胶时间考察。(a) 不同浓度FG的水凝胶前驱体成胶情况；(b)不同浓度的FG的水凝胶前驱体的成胶时间。
图2为激光共聚焦显微镜(CLSM)观察细胞内钙离子染色情况。
图3为流式细胞术检测细胞内钙离子荧光染色情况。
图4为细胞划痕实验。
图5为显微镜下细胞形态观察。
图6为TEM观察细胞内细胞器变化。
图7为药物及材料对K7细胞24h以及48h的毒性。
具体实施方式
本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
实施例1、本发明水凝胶的制备
1、聚乙二醇修饰的藤黄酸(GM)的合成及纯化
(1)藤黄酸、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺(EDC)和4-二甲氨基吡啶(DMAP)溶于CH2Cl2冰水浴中，加入聚乙二醇(重均分子量2000)。所得到的混合物在室温下搅拌一夜。
(2)用HCl、水、饱和食盐水洗涤，用Mg2SO4干燥，真空浓缩。沉淀在乙醚中搅拌，以去除游离的藤黄酸。对溶液进行过滤，得到黄色沉淀物。
(3)粗产物经硅胶柱层析进一步纯化，在CH2Cl2中使用甲醇的阶梯梯度去除游离的聚乙二醇，得到聚乙二醇修饰的藤黄酸(GM)为浅黄色固体。
2、藤黄酸脂质体的制备
聚乙二醇修饰的藤黄酸(GM):胆固醇(CHO):氢化大豆磷脂(HSPC):维生素E(Ve)＝2:4:15:0.2(摩尔比)；
(1)取上述原料混合溶于3ml无水乙醇中，水浴60℃下搅拌30min，得有机相，恒温备用；
(2)取纯水12ml加入50ml圆底烧瓶中，水浴60℃下搅拌1h；
(3)用注射器(1ml)吸取有机相，缓慢滴加入高速搅拌下的水相中，滴加完成后持续搅拌1-2h；
(4)之后采用旋蒸旋除乙醇(>5h)，温度60℃。
(5)旋干后保温(60℃)
(6)在乙醇洗干净的挤出器上装载200nm、100nm的膜，蠕动泵通入 60℃恒温水(约1h)；
(7)挤出(6次)，得到藤黄酸脂质体GA@LPS。
(8)15ml离心管保存(4℃)待用。
3、载药水凝胶的制备
制备含有GA@LPS(1mg/ml)的纤维蛋白原(10mg/ml)水溶液，随后将纤维蛋白原溶液与等体积(1:1体积比)凝血酶水溶液(10NIH U/mL和磷酸氢钙纳米线40μmol/mL)混合，即得水凝胶前驱体，37℃，静置3-5min，即得载药纤维蛋白凝胶(Gel@GA@LPS)。
以下通过实验例证明本发明的有益效果。
实验例1、水凝胶成胶时间考察
1、实验方法
参照实施例1的制备方法制备得到GA@LPS，用生理盐水溶解纤维蛋白原得到四种不同浓度的纤维蛋白原溶液(2mg/ml、5mg/ml、10mg/ml和20 mg/ml)。随后将不同浓度的纤维蛋白原分别与等体积(1:1体积比)凝血酶溶液 (10NIH U/mL和磷酸氢钙纳米线40μmol/mL)混合，每个浓度设置3个平行实验组。使用VersaMax UV-Vis分光光度计(MolecularDevices,Sunnyvale,CA) 在550nm波长下立即测定各组溶液的浊度变化，成胶时间定义为吸光度曲线上达到最大值的时间。
2、实验结果
结果如图1所示，可以看出，纤维蛋白原(FG)的含量对于水凝胶的成胶时间有明显影响，。随着FG浓度的增加，成胶时间延长，在FG浓度为20 mg/mL时，成胶时间大约在2-3min，成胶时间较长药物容易泄漏不利于给药；在FG浓度2mg/mL时，成胶时间大约在25s时迅速成胶，成胶时间短不方便临床使用。因此，我们选择成胶时间大约在1min左右含有FG10 mg/mL的凝胶进行后续的实验。
实验例2、本发明水凝胶藤黄酸和磷酸氢钙协同作用研究
1、实验方法
由于磷酸氢钙纳米线在水溶液中分散存在一定的问题，容易沉降，而本发明水凝胶是采用的肿瘤原位给药的方式，磷酸氢钙在肿瘤微酸性环境中降解从而会释放出Ca2+，因此在进行藤黄酸和磷酸氢钙的系统研究细胞实验时，采用CaCl2代替磷酸氢钙(CP)作为钙源。
具体地，进行了：
(1)钙离子染色实验：
待K7M2细胞生长状态良好，密度约在85％以上时进行实验。首先将 K7M2细胞消化、重悬、计数后接种于6孔板中，每孔2×105个/孔，随后放入孵箱继续培养，待细胞处于对数生长期时，弃掉培养基，使用PBS洗一次，随后每孔加入不同浓度的含药培养基，即：Control(空白新鲜培养基)、Ca2+ (20μg/mL)、GA(0.4μg/mL)、GA+Ca2+(0.4μg/mL+20μg/mL)、GL(按照GA的量计算0.4μg/mL GA@LPS，)、GL+Ca2+(按照GA的量计算0.4μg/mL GA@LPS+20μg/mL)处理，随后继续培养24h。(所用游离GA而非GM) 用Fluo-4 AM钙离子试剂盒进行细胞内钙离子染色，通过激光共聚焦显微镜观察。并通过流式细胞仪进行荧光定量分析。
(2)细胞集群及划痕实验：
细胞集群实验：取骨肉瘤K7M2细胞接种于6孔板中，每孔1×105个/ 孔，随后放入孵箱继续培养，待细胞处于对数生长期时，弃掉培养基，使用 PBS洗一次，随后每孔加入不同浓度的含药培养基，即：Control(空白新鲜培养基)、Ca2+(20μg/mL)、GA(0.4μg/mL)、GA+Ca2+(0.4μg/mL+20μg/mL)、 GL(按照GA的量计算0.4μg/mL GA@LPS，)、GL+Ca2+(按照GA的量计算0.4μg/mL GA@LPS+20μg/mL)处理，放入孵箱继续培养24h；使用PBS 洗2次，加入1mlPBS缓冲液，使用不同倍数的荧光显微镜进行观察分析。
细胞划痕实验：将培养皿中的K7M2细胞清洗、消化、离心、重悬计数后铺在12孔板中，1×106个/孔每孔，放入孵箱继续培养24h。弃掉培养基，使用PBS清洗一遍后，用10μL的枪头划一道划痕，之后再用PBS清洗掉划下来的细胞，拍照观察。随后加入不同浓度的含药培养基，即：Control(空白新鲜培养基)、Ca2+(20μg/mL)、GA(0.4μg/mL)、GA+Ca2+(0.4μg/mL+20 μg/mL)、GL(按照GA的量计算0.4μg/mL GA@LPS，)、GL+Ca2+(按照 GA的量计算0.4μg/mLGA@LPS+20μg/mL)处理，24h后弃掉培养基，PBS 洗一次后在显微镜下拍照观察细胞的迁移情况。
(3)细胞形态表征：待K7M2细胞生长良好时将其接种于6孔板中，每孔1×105个/孔，接种完成后放入孵箱培养24h，随后弃掉培养基，PBS洗 1-2次，之后加入不同浓度的含药培养基，即：Control(空白新鲜培养基)、Ca2+(20μg/mL)、GA(0.4μg/mL)、GA+Ca2+(0.4μg/mL+20μg/mL)、 GL(按照GA的量计算0.4μg/mL GA@LPS，)、GL+Ca2+(按照GA的量计算0.4μg/mLGA@LPS+20μg/mL)处理继续培养24h。随后弃掉培养基，PBS 洗1次，使用胰蛋白酶消化，收集于离心管中，1000rpm/min，离心4min；弃上清，加入固定液(3％戊二醛：0.1moL/L PBS＝1:5),重悬细胞，4℃静止 5min。随后将其转移至1.5mL离心管中，12000rpm/min，离心10min，弃上清，吸取3％戊二醛沿管壁加入，4℃保存，1％四氧化锇再固定，丙酮逐级脱水，Ep812包埋，半薄切片用甲苯胺蓝染色作光学定位，用钻石刀作超薄切片，醋酸铀和枸橼酸铅染色JEM-1400FLASH透射电镜观察。
(4)MTT实验观察药物对骨肉瘤细胞的毒性：通过MTT法考察材料的细胞毒性、游离药物的细胞毒性以及与钙离子联用的细胞毒性。简单来说，步骤如下：当K7M2细胞密度大约在80％以上且状态良好时进行铺板。所有的细胞操作均在超净台中进行，首先倒掉培养基，使用PBS清洗细胞表面，随后加入胰酶消化细胞3-4min，待细胞成片从壁上滑下时，加入完全培养基终止消化。使用移液枪收集细胞消化液，1200rpm/min，离心3min，弃掉上清液，使用新鲜完全培养基重悬细胞，采用细胞计数板进行计数，随后使用新鲜完全培养基进行稀释，使得细胞浓度约为50000-60000个/mL，排枪加入 96孔板中，每孔100μL。放入孵箱，待细胞处于对数生长期时加入含有不同浓度磷酸氢钙(CHP)溶液(250μg/mL等倍稀释到2μg/mL)、CaCl2溶液 (250μg/mL等倍稀释到2μg/mL)、游离GA溶液(12.5μg/mL等倍稀释到 0.05μg/mL)以及GA(2.5μg/mL等倍稀释到0.01μg/mL)含有钙离子20 μg/mL的完全培养基。随后将96孔板放入孵箱中继续培养，在药物作用24h、 48h后，避光加入MTT(5mg/mL)溶液，每孔20μL，之后放入孵箱中再孵育3-4小时。孵育完成后倒掉培养基，每孔加入150μL的DMSO溶液，再放回孵箱孵育10min左右；最后采用全自动酶标仪570nm处测定吸光度值。
2、实验结果：
(1)如图2所示，Ca2+组绿色荧光强度相对于Control组略有变化，单独的GA组相对于Control组而言具有显著的差异，而GA+Ca2+组相比于GA 组细胞状态发生了明显的变小、皱缩的现象，并且其绿色荧光强度也比GA 组更明显。这表明GA能促进外源钙离子进入细胞内，使得细胞内钙离子稳态失衡，导致细胞形态发生变化，诱导细胞凋亡的发生。在此基础上，也对 GL脂质体进行细胞内钙离子浓度的检测，通过CLSM观察发现GL+Ca2+组相比于GL组细胞内仍具有更高的钙离子浓度，趋势与GA+Ca2+组相似，这表明制备成脂质体后的GL也能促进钙离子进入细胞，导致细胞死亡，因而本发明水凝胶中藤黄酸和磷酸氢钙，在肿瘤微环境下磷酸氢钙水解出钙离子，能够与藤黄酸协同诱导肿瘤细胞的凋亡，抑制肿瘤细胞生长。
如图3所示，通过流式细胞术对细胞内钙离子荧光染色进行定量分析。在GA+Ca2+组中FITC阳性细胞占比约为26％，而在GA组中FITC阳性细胞占比约为16％，这表明在有外源钙离子的加入时，细胞内钙离子更多，增加了10％左右，并且在单独使用钙离子作用细胞时细胞内钙离子只有略微的升高。此外，也发现GL脂质体在促进钙离子进入细胞的趋势与GA相似，这进一步表明GA以及载药脂质体GL可以促进钙离子进入细胞，导致细胞内钙离子过载，从而诱发细胞内离子稳态的变化，诱导细胞凋亡，因而本发明水凝胶中藤黄酸和磷酸氢钙，在肿瘤微环境下磷酸氢钙水解出钙离子，能够与藤黄酸协同诱导肿瘤细胞的凋亡，抑制肿瘤细胞生长。
(2)如图4所示，在不同倍数显微镜下拍照观察细胞整体形态，评价不同药物作用后细胞的形态学变化。Ca2+组与Con组细胞生长状态相似，GA 处理组细胞形态发生明显变化(皱缩变小、变圆)，并且细胞数量明显减少。特别的，GA+Ca2+相对GA组细胞发生形态变化的更多，大部分细胞已经失去了原有的触角、梭形的结构，这些形态学变化均为细胞凋亡发生的主要特征，且GA+Ca2+组细胞密度也较GA组下降。以上结果表明，GA促进细胞内钙离子浓度的增加，促进了细胞内钙超载，从而促进细胞凋亡，因此本发明水凝胶中藤黄酸和磷酸氢钙，在肿瘤微环境下磷酸氢钙水解出钙离子，能够与藤黄酸协同抑制肿瘤细胞的增长。
如图5所示，通过细胞划痕实验评价药物对K7M2细胞的迁移抑制能力，发现Ca2+组与Control组细胞生长迁移状态相似，表明单纯加入Ca2+离子时对细胞的迁移抑制作用很低；GA处理组细胞形态发生明显变化(皱缩)，并且迁移受到抑制。特别的，GA+Ca2+相对GA组细胞发生形态变化的更多，更为明显，并且GA+Ca2+组细胞密度也相对于GA组更低，细胞迁移也受到明显抑制。以上结果表明，GA促进细胞内钙离子浓度的增加，从而使得细胞的运动迁移能力受阻，并且在有Ca2+离子加入时抑制作用更好。因此，本发明水凝胶中藤黄酸和磷酸氢钙，在肿瘤微环境下磷酸氢钙水解出钙离子，能够与藤黄酸协同抑制肿瘤细胞的迁移。
(3)如图6所示，进一步探索GA与钙离子在促进K7M2凋亡的机制，采用透射电子显微镜进行细胞内亚细胞器的观察，从而更加直观的评价细胞凋亡产生的原因，图中红色箭头标示损伤的线粒体。Ca2+组与Control组相比细胞整体形态没有发生明显的变化，线粒体脊有轻微的溶解并且数量很少。 GA组与Control组相比细胞整体形态略有变化，线粒体脊有轻微的溶解并且数量相对Ca2+组增加，特别的，GA+Ca2+组线粒体脊发生明显的溶解，并且细胞整体的形态相对于Control组发生明显变化，并且颜色变深，表明电子云密度增高，染色质异常，内质网扩张肿大，整体细胞处于凋亡的状态。以上结果表明，GA能促进Ca2+进入细胞从而引起细胞线粒体脊溶解，破坏细胞内环境，引起细胞凋亡，因此本发明水凝胶中藤黄酸和磷酸氢钙，在肿瘤微环境下磷酸氢钙水解出钙离子，能够与藤黄酸协同引起肿瘤细胞凋亡。
(4)如图7所示，为探索材料本身的细胞毒性以及GA与释放出钙离子相互作用的细胞毒性，间接的利用GA与钙离子进行MTT实验在K7M2细胞中进行验证。图7A为Ca2+组，图7B为磷酸氢钙(CHP)组，结果显示单独使用Ca2+或CHP均对骨肉瘤细胞没有明显毒性。图7C为GA组，结果显示，GA对骨肉瘤K7细胞的IC50为24h 0.53μg/mL、48h 0.90μg/mL；这提示GA在24h后细胞毒性在降低。图7D分别为GA+Ca2+组(横坐标显示GA浓度，Ca2+浓度对应空白Ca2+组)和GA+CHP组(横坐标显示GA 浓度，CHP浓度对应空白CHP组)，结果显示，在有钙离子加入或者CHP加入时GA对肿瘤的毒性增强，24h IC50从0.53μg/mL降低为0.29μg/mL；48h IC50从0.9μg/mL降低为0.28μg/mL；有趣的是，在CHP加入时，24h IC50 从0.53μg/mL降低为0.32μg/mL；48h IC50从0.9μg/mL降低为0.3μg/ mL，这与Ca2+的加入结果相似，表明CHP在肿瘤增值微环境中能提供源源不断的钙源，在与GA的协同作用下，促进肿瘤细胞的死亡。
综上，本发明提供了一种水凝胶前驱体，具有良好的可注射性能，可在肿瘤部位局部注射后生理响应固化形成水凝胶，体系中添加了磷酸氢钙纳米线，并负载藤黄酸纳米药物，肿瘤酸性环境下，含有磷酸氢钙的水凝胶骨架水解后释放出药物藤黄酸和钙离子，一方面，藤黄酸本身具有抗肿瘤作用，另一方面还能够促进水解出的钙离子进入肿瘤细胞，引起肿瘤细胞内钙超载导致凋亡，从而协同增效治疗肿瘤；同时，磷酸氢钙纳米线是三维网状结构，有助于纤维蛋白水凝胶的成型，增强凝胶力学性能，且磷酸氢钙纳米线具有介孔结构，有助于藤黄酸药物的附着，即提高凝胶的载药能力。本发明水凝胶可以通过局部原位注射提高肿瘤部位的药物浓度，毒副作用小，抗肿瘤效果优异，临床应用前景佳。

Claims (8)

1.一种水凝胶前驱体，其特征在于，它含有如下组分：
藤黄酸脂质体 0.3~0.8 mg/mL；
纤维蛋白原3~8 mg/mL；
凝血酶 3~8 NIH U/mL；
磷酸氢钙15~25μmol/mL；
余量为水；
所述磷酸氢钙为磷酸氢钙纳米线；
所述藤黄酸脂质体是包载聚乙二醇修饰的藤黄酸的脂质体；
所述藤黄酸脂质体由如下原料制成：包载聚乙二醇修饰的藤黄酸、胆固醇、氢化大豆磷脂、维生素E；
所述聚乙二醇修饰的藤黄酸按照如下方法制备而成：藤黄酸与聚乙二醇在缩合剂、催化剂的作用下反应，纯化。
2.如权利要求1所述的水凝胶前驱体，其特征在于，它含有如下组分：
藤黄酸脂质体 0.5 mg/mL；
纤维蛋白原5 mg/mL；
凝血酶 5 NIH U/mL；
磷酸氢钙20μmol/mL；
余量为水。
3.如权利要求1所述的水凝胶前驱体，其特征在于，所述聚乙二醇修饰的藤黄酸中，聚乙二醇重均分子量为2000~6000。
4.如权利要求1所述的水凝胶前驱体，其特征在于，所述藤黄酸脂质体按照如下步骤制备而成：
（1）聚乙二醇修饰的藤黄酸、胆固醇、氢化大豆磷脂、维生素E溶于无水乙醇溶解，55~60℃保温，得到有机相；
（2）纯水55~60℃保温，得到水相；
（3）取有机相滴加到剧烈搅拌的水相，滴加完成后55~60℃续搅拌1-2h；
（4）除去乙醇，依次通过孔径200nm、100nm的膜，在55~60℃挤出5~8次；
其中，聚乙二醇修饰的藤黄酸、胆固醇、氢化大豆磷脂、维生素E的摩尔比为1:(1.5~2.5):(7~8):(0.05~0.15)；水相和有机相的体积比为(10~15):1。
5.如权利要求4所述的水凝胶前驱体，其特征在于，聚乙二醇修饰的藤黄酸、胆固醇、氢化大豆磷脂、维生素E的摩尔比为1:2:7.5:0.1；水相和有机相的体积比为12:1。
6.一种水凝胶，其特征在于，它是权利要求1~5任一项所述的水凝胶前驱体固化而成。
7.权利要求6所述的水凝胶在制备治疗癌症的药物中的用途，所述药物是治疗骨肉瘤、恶性黑色素瘤、乳腺癌和/或肺癌的药物。
8.藤黄酸或藤黄酸脂质体在制备细胞的钙离子吸收促进剂的用途，所述钙离子是氯化钙水解出的钙离子或磷酸氢钙纳米线在酸性条件下解离出的钙离子，其特征在于：
所述藤黄酸脂质体是包载聚乙二醇修饰的藤黄酸的脂质体；
所述藤黄酸脂质体由如下原料制成：包载聚乙二醇修饰的藤黄酸、胆固醇、氢化大豆磷脂、维生素E；
所述聚乙二醇修饰的藤黄酸按照如下方法制备而成：藤黄酸与聚乙二醇在缩合剂、催化剂的作用下反应，纯化。
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