CN110124033B - 一种具有光动力作用的脂质体及其制备与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有光动力作用的脂质体及其制备与应用，属于药物制剂领域。所述脂质体为磷脂双分子层结构，磷脂双分子层结构中镶嵌胆固醇；所述磷脂双分子层结构的疏水腔中包埋了化疗药物或抗菌药物，所述磷脂双分子层结构的疏水腔和/或亲水腔中包埋了光敏剂，所述光敏剂为具有聚集诱导发光性质的多吡啶盐。制备方法为将磷脂、胆固醇、药物和光敏剂加入到助溶剂中，完全溶解后，使助溶剂挥发，形成薄膜；将薄膜加入到水相中进行水化，然后进行超声，使磷脂形成双分子层结构的脂质体。本发明中的脂质体，不仅具有点亮死亡细胞的细胞核性质，可以早期诊断抗肿瘤疗效并且实时示踪抗肿瘤效果。
Description
技术领域
本发明属于药物制剂领域，具体地，涉及一种具有光动力作用的脂质体及其制备与应用。
背景技术
2015年全国恶性肿瘤发病约392.9万人，死亡约233.8万人。即平均每天超过1万人、每分钟7.5个人被确诊为癌症。虽然多种抗癌药物被开发出并应用于化疗，但常常会引起患者的不良副作用，导致身体和精神上的疼痛，且治疗效率很低。目前临床上常用的化疗药物包括紫杉醇、阿霉素、伊立替康、10-羟基喜树碱等等。
光动力疗法(Photodynamic therapy,简称PDT)，是一种应用于实体肿瘤治疗的新方法，在临床上也被接受作为一种治疗癌症和其他恶性失调病的缓解疗法。机体被施予光敏剂后，再用特定波长的光照射，光敏剂随之活化，与底物及氧分子作用产生单线态氧及其他活性氧物质，可以直接杀伤肿瘤细胞。光动力疗法不同于以往传统的治疗方法，作为目前较为新颖的抗肿瘤手段，其治疗手段具有下述优势：(1)不存在化疗的耐药性，肿瘤患者即使多次进行光动力治疗也不会产生耐药性，可对肿瘤进行重复治疗至完全治愈；(2)相比放疗与化疗对肿瘤患者的毒副作用，光动力治疗在无光源下毒性低；(3)光动力疗法可与其它疗法联合进行协同治疗，可减轻药物对正常组织的损伤；(4)对肿瘤有相对的选择特异性，能定向地消灭原发和复发肿瘤，在特定光源下局部治疗，很少损伤正常组织；(5)可保护正常的组织器官；(6)广谱性好，对各种实体瘤均有效果；(7)光动力治疗的光敏剂无基因毒性、无蓄积毒性，不影响其他抗肿瘤药物，使PDT与其他治疗方法联合的综合治疗得到越来越多的临床研究的支持。
目前，单一疗法治疗肿瘤无法达到令人满意的效果，多种手段联合治疗(即多模式治疗)可以克服单一疗法的缺点，是一种具有广阔前景的肿瘤治疗策略。采用多模式治疗肿瘤，可以结合不同治疗模式的优势，利用不同的作用机制协同抑制肿瘤生长，提高疗效，降低副作用。诸多研究表明，光动力治疗具有“光内化作用”，PDT产生的单线态氧能够有效地抑制由P-gp介导的药物外排，同时破坏内体和溶酶体的脂膜结构，促进化疗药物从酸性细胞器逃逸，从而达到显著增强化疗效果。基于光动力治疗与化疗联用的优势，有研究将光敏剂与化疗药物共同载于相同纳米系统中，以达到光动力与化疗的协同治疗作用。
此外，为了检测治疗的效果，很多学者会将成像(MRI,CT,PET等)造影剂和光敏剂及化疗药物组装到一起，一起达到诊疗一体化的效果。较为普遍的方法是，将光敏剂，造影剂和化疗药物共同包载于纳米载体中，然而，采用此策略会使得光敏剂和化疗药物同时争夺纳米粒的疏水内核而使得两者的载药量和包封率均降低；此外，大多数光敏剂极度疏水，与纳米粒的相容性差，在血浆中容易泄露。因此，合适的光敏剂和化药组合，对于制剂的质量以及疗效的发挥至关重要。
脂质体是由磷脂双分子膜所形成的封闭囊泡，被广泛用于控释，亲疏水性药物载体，药物靶向，增强药物溶解度和增加药物口服吸收。
发明内容
本发明解决了现有技术中药物与光敏剂联合用药不能实时监测效果的技术问题，提供的具有光动力作用的脂质体，所述脂质体的疏水腔中包埋了化疗药物或抗菌药物，脂质体的疏水腔和/或亲水腔中包埋了光敏剂，所述光敏剂为具有聚集诱导发光性质的多吡啶盐。本发明的脂质体不需要另外加成像造影剂，利用光敏剂点亮死亡细胞的细胞核的作用，从而可以实时监测联合抗肿瘤或抗菌的效果。
根据本发明的第一方面，提供了一种具有光动力作用的脂质体，所述脂质体为磷脂双分子层结构，所述磷脂双分子层结构中镶嵌胆固醇，所述胆固醇用于增强所述磷脂双分子层结构的稳定性；所述磷脂双分子层结构的疏水腔中包埋了化疗药物或抗菌药物，所述磷脂双分子层结构的疏水腔和/或亲水腔中包埋了光敏剂，所述光敏剂为具有聚集诱导发光性质的多吡啶盐。
优选地，所述脂质体中磷脂的质量份为40-60份，胆固醇的质量份为6-12份，化疗药物或抗菌药物的质量份为2-5份，光敏剂的质量份为2-6份。
优选地，所述具有聚集诱导发光性质的多吡啶盐为具有聚集诱导发光性质的四吡啶盐。
优选地，所述具有聚集诱导发光性质的四吡啶盐的结构式如式Ⅰ所示：
其中R为拉电子基团；
优选地，所述拉电子基团R为
优选地，所述磷脂为大豆磷脂、蛋黄卵磷脂或氢化大豆磷脂；所述化疗药物为盐酸阿霉素、柔红霉素、顺铂、紫杉醇、羟基喜树碱、姜黄素、氟尿嘧啶和阿糖胞苷中的至少一种；所述抗菌药物为青霉素类药物、氨基糖苷类药物、头孢菌素类药物、β-内酰胺类药物、林可霉素类药物、喹诺酮类药物或大环内酯类药物；
优选地，所述磷脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸或磷脂酰甘油。
按照本发明的另一方面，提供了一种具有光动力作用的脂质体的制备方法，包括以下步骤：
(1)将磷脂、胆固醇、药物和光敏剂加入到助溶剂中，所述药物为化疗药物或抗菌药物，所述光敏剂为具有聚集诱导发光性质的多吡啶盐；完全溶解后，然后在减压的条件下，使助溶剂挥发，形成薄膜；
(2)将步骤(1)所述薄膜加入到水相中进行水化，然后进行超声，使磷脂形成双分子层结构的脂质体，所述胆固醇镶嵌在所述双分子层中；并使所述药物包埋在所述磷脂双分子层结构的疏水腔中，所述光敏剂包埋在所述磷脂双分子层结构的疏水腔和/或亲水腔中，得到具有光动力作用的脂质体。
优选地，步骤(1)所述助溶剂为三氯甲烷与有机醇的混合溶剂，或者所述助溶剂为二氯甲烷与有机醇的混合溶剂，所述有机醇为甲醇或乙醇；步骤(2)所述超声之后，采用超滤离心法除去未包埋的药物和/或光敏剂，超滤离心的转速为500rpm-6000rpm，超滤离心时间为5min-120min；步骤(2)所述的水相为超纯水或NaCl溶液；所述超声为探头冰浴超声；所述超声的功率为2％-50％；所述超声的时间为1min-20min；所述超声的频率为工作时间1s-9s，间隔时间1s-9s。
优选地，所述脂质体中磷脂的质量份为40-60份，胆固醇的质量份为6-12份，药物的质量份为2-5份，光敏剂的质量份为2-6份。
优选地，所述具有聚集诱导发光性质的多吡啶盐为具有聚集诱导发光性质的四吡啶盐；所述磷脂为大豆磷脂、蛋黄卵磷脂或氢化大豆磷脂；所述化疗药物为盐酸阿霉素、柔红霉素、顺铂、紫杉醇、羟基喜树碱、姜黄素、氟尿嘧啶和阿糖胞苷中的至少一种；所述抗菌药物为青霉素类药物、氨基糖苷类药物、头孢菌素类药物、β-内酰胺类药物、林可霉素类药物、喹诺酮类药物或大环内酯类药物；
优选地，所述磷脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸或磷脂酰甘油；所述具有聚集诱导发光性质的四吡啶盐的结构式如式Ⅰ所示：
其中R为拉电子基团；
优选地，所述拉电子基团R为
按照本发明的另一方面，提供了任一所述的具有光动力作用的脂质体用于制备抗肿瘤药物或杀菌药物的应用。
总体而言，通过本发明所构思的以上技术方案与现有技术相比，主要具备以下的技术优点。
(1)本发明具有光动力作用的脂质体，在活细胞中荧光强度较弱，但是在死亡细胞中荧光可以数十倍的增加，可以实时指示抗肿瘤的疗效，不需要通过负载其他造影剂来判断抗肿瘤的疗效。
(2)本发明具有光动力作用的脂质体，可以实现早期诊疗，具有优于目前诊疗的特性，其可以在肿瘤细胞死亡而肿瘤体积未发生明显变化时就判断出药物的疗效，而目前的诊疗手段只能够通过肿瘤体积的变化进行判断。具有此性质的原因在于，具有聚集诱导发光性质的发色团具有能够在聚集状态下，荧光显著增强的性质；另外研究表明，多吡啶盐的分子由于其荷正电，经其修饰后的分子更容易进入细胞核周围；因此，当具有聚集诱导发光性质的发色团进行多吡啶盐修饰后，该分子会具有容易进入细胞，并且易从细胞质向细胞核转移的特性。
(3)本发明具有光动力作用的脂质体具有比较大应用的范围，关于癌症的治疗，对膀胱癌，前列腺癌，子宫颈癌以及乳腺癌皆有很好的协同抗肿瘤的效果，能够数十倍的降低化药的半数抑制浓度。
(4)本发明具有光动力作用的脂质体，选用的都是天然来源的材料，无免疫原性，生物相容性好，可以被生物体中的相关酶代谢，而且无任何有害的代谢产物生成，其代谢产物可以作为营养物质参与到体内生命活动，不会引起机体的炎症反应。
(5)本发明中的此制备方法不仅可以提高光敏剂和化疗药物的包封率，而且制备工艺简单，生产及原料成本低，容易产业化生产。
附图说明
图1为泰素、对比例1和实施例1制备得到的集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体的紫杉醇体外累积释放图。
图2和图3分别为对比例1-2和实施例1制备得到的集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体的对PC3细胞暗毒性和光毒性。
图4、图5、图6、图7分别为对比例2预处理PC3细胞12h后，在光照条件下，与PI共染的荧光显微镜成像图片；其中图4和图5分别为对比例1中脂质体孵育PC3细胞12h后，光照进行光动力治疗前后，细胞TPCI的荧光显微图片；图6和图7分别为光照进行光动力治疗前后，细胞PI的荧光显微图片。
图8和图9分别为对比例2、实施例1治疗下荷PC3肿瘤小鼠肿瘤部位荧光强度的变化。
图10为对比例1-2和实施例1治疗后荷PC3肿瘤小鼠瘤重散点图。图中*表示同对照组相比P<0.05，**表示同对照组相比P<0.01，***表示同对照组相比P<0.001；#表示和联合治疗组相比P<0.05，##表示和联合治疗组相比P<0.01，图中###表示和联合治疗组相比P<0.001。
图11为对比例1-2和实施例1治疗后荷PC3肿瘤小鼠生存曲线。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
具体对比例和实施例中紫杉醇和TPCI的结构式分别为：
对比例1
本实施例提供一种集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体，由以下重量百分比的原料制备而成：磷脂酰胆碱(S100)70％，胆固醇14％，三氯甲烷：无水乙醇(V:V＝1:1)11.6％，紫杉醇4.37％，TPCI 0.03％。
该集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体的制备方法如下：
称取240mg磷脂酰胆碱(S100)，48mg胆固醇，15mg紫杉醇，0.1mg TPCI混合在一起后，然后加入40mg的三氯甲烷：无水乙醇混合液(V:V＝1:1)，使之完全溶解后，40℃下减压挥去有机溶剂，形成薄膜，然后加入0.9％NaCl进行水化，在冰浴条件下，进行探头超声，超声功率为20％，超声时间为12min，超声频率为工作时间9s，间隔时间1s；超滤离心条件转速为3000rpm，离心时间为60min。收集超滤管中的脂质体，经0.22μm滤膜过滤除菌后，4℃下保存。
对比例2
本实施例提供一种集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体，由以下重量百分比的原料制备而成：磷脂酰胆碱(S100)68.6％，胆固醇13.7％，三氯甲烷：无水乙醇(V:V＝1:1)11.4％，紫杉醇0.03％，TPCI 6.27％。
该集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体的制备方法如下：
称取240mg磷脂酰胆碱(S100)，48mg胆固醇，0.1mg紫杉醇，22mg TPCI混合在一起后，然后加入40mg的三氯甲烷：无水乙醇混合液(V:V＝1:1)，使之完全溶解后，40℃下减压挥去有机溶剂，形成薄膜，然后加入0.9％NaCl进行水化，在冰浴条件下，进行探头超声，超声功率为20％，超声时间为12min，超声频率为工作时间3s，间隔时间3s；超滤离心条件转速为3000rpm，离心时间为90min。收集超滤管中的脂质体，经0.22μm滤膜过滤除菌后，4℃下保存。
实施例1
本实施例提供一种集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体，由以下重量百分比的原料制备而成：磷脂酰胆碱(S100)65.8％，胆固醇13.2％，三氯甲烷：无水乙醇(V:V＝1:1)10.9％，紫杉醇4.1％，TPCI 6.0％。
该集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体的制备方法如下：
称取240mg磷脂酰胆碱(S100)，48mg胆固醇，15mg紫杉醇，22mg TPCI混合在一起后，然后加入40mg的三氯甲烷：无水乙醇混合液(V:V＝1:1)，使之完全溶解后，40℃下减压挥去有机溶剂，形成薄膜，然后加入0.9％NaCl进行水化，在冰浴条件下，进行探头超声，超声功率为20％，超声时间为13min，超声频率为工作时间9s，间隔时间1s；超滤离心条件转速为3000rpm，离心时间为45min。收集超滤管中的脂质体，经0.22μm滤膜过滤除菌后，4℃下保存。
实施例2
本实施例提供一种集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体，由以下重量百分比的原料制备而成：磷脂酰胆碱(S100)60.3％，胆固醇10.9％，三氯甲烷：无水乙醇(V:V＝1:1)18.6％，紫杉醇4.1％，TPCI 6.1％。
该集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体的制备方法如下：
称取220mg磷脂酰胆碱(S100)，40mg胆固醇，15mg紫杉醇，22mg TPCI混合在一起后，然后加入68mg的三氯甲烷：无水乙醇混合液(V:V＝1:1)，使之完全溶解后，40℃下减压挥去有机溶剂，形成薄膜，然后加入0.9％NaCl进行水化，在冰浴条件下，进行探头超声，超声功率为20％，超声时间为15min，超声频率为工作时间3s，间隔时间3s；超滤离心条件转速为3000rpm，离心时间为45min。收集超滤管中的脂质体，经0.22μm滤膜过滤除菌后，4℃下保存。
实施例3
本实施例提供一种集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体，由以下重量百分比的原料制备而成：磷脂酰胆碱(S100)69.3％，胆固醇10.5％，三氯甲烷：无水乙醇(V:V＝1:1)10.9％，紫杉醇4.4％，TPCI 4.9％。
该集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体的制备方法如下：
称取253mg磷脂酰胆碱(S100)，38mg胆固醇，16mg紫杉醇，18mg TPCI混合在一起后，然后加入40mg的三氯甲烷：无水乙醇混合液(V:V＝1:1)，使之完全溶解后，40℃下减压挥去有机溶剂，形成薄膜，然后加入0.9％NaCl进行水化，在冰浴条件下，进行探头超声，超声功率为20％，超声时间为12min，超声频率为工作时间9s，间隔时间1s；超滤离心条件转速为3000rpm，离心时间为60min。收集超滤管中的脂质体，经0.22μm滤膜过滤除菌后，4℃下保存。
实施例4
将上述对比例1-2和实施例1制备得到的集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体进行制剂性质的表征，粒径和Zeta电位的测定方法是将脂质体稀释合适浓度后，使用马尔文激光粒度仪nano ZS90进行脂质体的粒径和Zeta电位的测定；包封率的测定则采用超滤离心法，方法如下：
将超滤离心后的滤液，经15000rpm离心后注入HPLC，进行未包埋的药物含量测定。包封率(％)＝(投药量-未包埋药物含量)/投药量x 100％。
测定结果如表1所示，对比例1-2和实施例1制备的脂质体粒径大小在110nm左右，脂质体几乎不带电，并且PTX和TPCI可以彼此促进各自的装载，导致各自的包封率增加。表1为对比例1-2和实施例1制备得到的集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体的性质表征。
表1
实施例5
对比例1-2和实施例1制备的集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体进行紫杉醇体外释放考察。
实验方法：称取适量的脂质体溶液于透析袋中，密封后，置于一定体积的pH 7.4磷酸盐缓冲液后，放入恒温摇床中进行振荡释放，恒温摇床参数设置：温度37℃，转速100rpm。分别于不同时间点取样，然后向释放体系中补加相同体积的释放介质。取出的释放介质放置-20℃备用，经HPLC检测释放介质中紫杉醇的含量。
实验结果如图1所示：本发明制备的集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体在模拟体外环境条件下，释放速率低于市售的紫杉醇制剂Taxol，在48h时，可以完成90％的紫杉醇的释放，且实施例1的释放速率要快于对比例1，原因可能是因为化疗药物与光敏剂TPCI的复配比例不同，导致药物在脂质体的结晶形式不同，进而影响体外的释放速率。
实施例6
将上述对比例1-2和实施例1制备得到的集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体进行体外联合抗肿瘤疗效的评价，前列腺癌PC3细胞，膀胱癌细胞(EJ,J82,UMUC3)，乳腺癌细胞(MCF-7)作为研究对象，考察方法如下：将不同浓度的脂质体孵育不同细胞株24h后，进行光照(460nm，1.0mW cm-2,20min)，光照结束4h后，加入MTT 0.5mg/ml，继续孵育3h后，加入DMSO溶解甲瓒，然后使用多功能酶标仪测定OD570。细胞存活率(％)＝(处理组的OD570–空白孔OD570)/(未处理组的OD570–空白孔OD570)X 100％。
测量结果如图2、图3和表2所示，对比例1-2和实施例1制备集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体具有良好的广谱联合抗肿瘤细胞的效果，具体表现在不同的肿瘤细胞株中，皆可以将化药的IC50值降低十倍。表2为本发明不同脂质体杀死不同肿瘤细胞株的IC50值统计表。
表2
实施例7
将上述对比例1-2和实施例1制备得到的集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体进行体外诊疗一体化研究，研究方法如下：脂质体预先孵育细胞12h后，加入PI染液，在荧光显微镜蓝光光照条件下，观察细胞内TPCI与PI荧光信号的变化。PI只能着色细胞膜破裂的死亡细胞，因此PI着色的细胞是死亡细胞。
研究结果如图4、图5、图6、图7所示，对比例2制备的化疗与光动力诊疗一体化的脂质体具有良好的体外诊疗效果。根据图4可知，不加光照进行光动力治疗时，对比例1中的脂质体主要定位于细胞的溶酶体，细胞质中的荧光很弱细胞核中几乎无荧光，当加入光照后，根据图5可知，细胞质中的荧光消失，细胞核被点亮，整个细胞中的荧光显著增强；因此根据图4和图5可知，该脂质体在光动力治疗过程中，TPCI具有由细胞质到细胞核转移的功能，并且能够使细胞荧光显著增强。根据图6和图7可知，当不加光照时，本发明对细胞几乎无毒性，细胞膜完整，碘化丙啶(PI)无法进入细胞核，但是加光照进行光动力治疗后，细胞膜被破坏，碘化丙啶(PI)进入细胞核并于DNA结合，使细胞核被着色，因此图6和图7可以说明在加光照进行光动力治疗后，细胞死亡。综上所述，对比例1中的脂质体在光动力治疗过程中，TPCI具有由活细胞的细胞质到死细胞的细胞核转移的功能，并且能够使点亮死亡细胞的细胞核，因此可以通过细胞荧光的变化来判断细胞的存活状态。
实施例8
将上述对比例1-2和实施例1制备得到的集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体进行体内诊疗一体化研究，通过荷瘤小鼠肿瘤内荧光的变化来确定抗肿瘤的效果。研究方法是向PC3荷瘤小鼠的肿瘤中注射一定体积的脂质体，然后经过一定的时间后，在小动物活体成像系统中进行成像观察。激发光为465nm，收集波段为ICG，然后用小动物成像系统软件进行肿瘤部位荧光的分析，绘制图表。图8和图9分别为对比例2、实施例1治疗下荷PC3肿瘤小鼠肿瘤部位荧光强度的变化。
研究结果如图10所示，对比例2和实施例1制备的集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体具有良好的体内诊疗效果，不加光照组的小鼠肿瘤的荧光信号随着时间的延长逐渐减弱，光照组的小鼠肿瘤部位的荧光在加光照后，会增强，说明有部分肿瘤细胞死亡，导致肿瘤细胞核被点亮，进而肿瘤部位的荧光增强，如此，便在肿瘤体积未发生明显变化的时候实现了抗肿瘤疗效的早期诊断。肿瘤部位的脂质体，会随着在小鼠体内滞留时间的延长，发生扩散以及被机体代谢，进而导致肿瘤部位的荧光逐渐降低。通过比较对比例2和实施例1治疗的不加光照组小鼠肿瘤部位荧光强度的变化可知，实施例1治疗后的小鼠肿瘤部位的荧光降低速率要远远低于对比例1，说明可能因为实施例1中的化疗药物紫杉醇杀死了一些肿瘤细胞，进而导致TPCI进入这些肿瘤细胞的细胞核，导致这些死亡的细胞被点亮，进而降低肿瘤部位荧光信号降低的速率。
实施例9
将上述对比例1-2和实施例1制备得到的集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体进行体内抗肿瘤疗效评价，评价指标为治疗结束一周后肿瘤的瘤重，以及免疫组化指标。研究方法为当荷PC3肿瘤的小鼠的肿瘤体积在200mm3时，瘤内注射上述脂质体，每两天给药一次，连续给药4次，然后连续光照8天。给药剂量：PTX为6mg/kg；TPCI为5.4mg/kg；光照条件为460nm，50mW cm-2，20min。
体内抗肿瘤疗效的结果如图10和图11所示，对比例1-2和实施例1制备的集化疗与光动力诊疗一体化的脂质体具有良好的体内联合抗肿瘤的疗效，同对照组相比，治疗组皆在一定程度上抑制了肿瘤的生长，但是联合治疗组的效果最佳，并且显著低于其他各个治疗组。从小鼠的生存曲线可知，联合给药组可以延长小鼠的生存期的时间最长。
本领域的技术人员容易理解，以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (12)
1.一种具有光动力作用的脂质体，其特征在于，所述脂质体为磷脂双分子层结构，所述磷脂双分子层结构中镶嵌胆固醇，所述胆固醇用于增强所述磷脂双分子层结构的稳定性；所述磷脂双分子层结构的疏水腔中包埋了化疗药物，所述磷脂双分子层结构的疏水腔和/或亲水腔中包埋了光敏剂，所述光敏剂为具有聚集诱导发光性质的多吡啶盐，所述具有聚集诱导发光性质的多吡啶盐为具有聚集诱导发光性质的四吡啶盐；
所述具有聚集诱导发光性质的四吡啶盐的结构式如式Ⅰ所示：
其中R为拉电子基团。
2.如权利要求1所述的具有光动力作用的脂质体，其特征在于，所述脂质体中磷脂的质量份为40-60份，胆固醇的质量份为6-12份，化疗药物的质量份为2-5份，光敏剂的质量份为2-6份。
3.如权利要求1所述的具有光动力作用的脂质体，其特征在于，所述拉电子基团R为
4.如权利要求1所述的具有光动力作用的脂质体，其特征在于，所述磷脂为大豆磷脂、蛋黄卵磷脂或氢化大豆磷脂；所述化疗药物为柔红霉素、顺铂、紫杉醇、羟基喜树碱、姜黄素和氟尿嘧啶中的至少一种。
5.如权利要求4所述的具有光动力作用的脂质体，其特征在于，所述磷脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸或磷脂酰甘油。
6.如权利要求1-5任一所述的具有光动力作用的脂质体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将磷脂、胆固醇、药物和光敏剂加入到助溶剂中，所述药物为化疗药物，所述光敏剂为具有聚集诱导发光性质的多吡啶盐；所述具有聚集诱导发光性质的多吡啶盐为具有聚集诱导发光性质的四吡啶盐；完全溶解后，然后在减压的条件下，使助溶剂挥发，形成薄膜；
(2)将步骤(1)所述薄膜加入到水相中进行水化，然后进行超声，使磷脂形成双分子层结构的脂质体，所述胆固醇镶嵌在所述双分子层中；并使所述药物包埋在所述磷脂双分子层结构的疏水腔中，所述光敏剂包埋在所述磷脂双分子层结构的疏水腔和/或亲水腔中，得到具有光动力作用的脂质体。
7.如权利要求6所述具有光动力作用的脂质体的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述助溶剂为三氯甲烷与有机醇的混合溶剂，或者所述助溶剂为二氯甲烷与有机醇的混合溶剂，所述有机醇为甲醇或乙醇；步骤(2)所述超声之后，采用超滤离心法除去未包埋的药物和/或光敏剂，超滤离心的转速为500rpm-6000rpm，超滤离心时间为5min-120min；步骤(2)所述的水相为超纯水或NaCl溶液；所述超声为探头冰浴超声；所述超声的功率为2％-50％；所述超声的时间为1min-20min；所述超声的频率为工作时间1s-9s，间隔时间1s-9s。
8.如权利要求6所述具有光动力作用的脂质体的制备方法，其特征在于，所述脂质体中磷脂的质量份为40-60份，胆固醇的质量份为6-12份，药物的质量份为2-5份，光敏剂的质量份为2-6份。
9.如权利要求6所述具有光动力作用的脂质体的制备方法，其特征在于，所述磷脂为大豆磷脂、蛋黄卵磷脂或氢化大豆磷脂；所述化疗药物为柔红霉素、顺铂、紫杉醇、羟基喜树碱、姜黄素和氟尿嘧啶中的至少一种。
10.如权利要求9所述具有光动力作用的脂质体的制备方法，其特征在于，所述磷脂为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸或磷脂酰甘油；所述具有聚集诱导发光性质的四吡啶盐的结构式如式Ⅰ所示：
其中R为拉电子基团。
11.如权利要求10所述具有光动力作用的脂质体的制备方法，其特征在于，所述拉电子基团R为
12.如权利要求1-5任一所述的具有光动力作用的脂质体用于制备抗肿瘤药物的应用。
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