CN114755410A - 碱性磷酸酶标记抗体试剂 - Google Patents

碱性磷酸酶标记抗体试剂 Download PDF

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CN114755410A CN202210246515.4A CN202210246515A CN114755410A CN 114755410 A CN114755410 A CN 114755410A CN 202210246515 A CN202210246515 A CN 202210246515A CN 114755410 A CN114755410 A CN 114755410A
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Abstract

本发明涉及生化检测技术领域，尤其涉及碱性磷酸酶标记抗体试剂。本发明提供了碱性磷酸酶标记抗体试剂，该试剂中保存液，能够提高组分的稳定性，特别是提高碱性磷酸酶标记抗体的稳定性，从而使该试剂用于待测样本的检测具备更好的稳定性、灵敏度、准确性、特异性和精密度。并且，本发明中，所述碱性磷酸酶标记抗体的制备在活化阶段无需封闭剂，以2‑IT活化碱性磷酸酶，以Sulfo‑SMCC活化抗体，避免了活化剂对ALP构象的干扰，获得的酶标记抗体具有良好的稳定性。

Description

碱性磷酸酶标记抗体试剂
技术领域
本发明涉及生化检测技术领域，尤其涉及碱性磷酸酶标记抗体试剂。
背景技术
碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP或AKP)是目前免疫诊断试剂产品最常用的标记酶之一。以碱性磷酸酶(ALP)标记抗体后，经过免疫反应形成固相包被抗体-待测抗原-酶标记抗体复合物，该复合物中的碱性磷酸酶使发光剂脱去磷酸根基团而发光。
碱性磷酸酶标记抗体试剂即含有碱性磷酸酶标记抗体和缓冲液的试剂，该试剂对免疫检测的结果存在重要的影响。研究表明，该试剂对检测结果产生影响的原因主要包括碱性磷酸酶标记抗体的制备方法和缓冲液的组分有关。第一方面，目前常用的碱性磷酸酶标记抗体的方法包括，EDC-NHS以及SMCC标记方法。EDC-NHS标记方法的标记时间长、偶联物稳定性较差。SMCC标记方法中，常用的是用2-MEA、TCEP活化抗体，Sulfo-SMCC活化碱性磷酸酶。2-MEA和TCEP活化抗体，破坏了抗体结构，对稳定性有一定的影响，且活化环境比较严格，活化时间长。第二方面，保存液对碱性磷酸酶酶标记抗体的稳定性有着重大的作用。但目前常用的保存液中，大多含有葡萄糖、甘油、聚乙二醇聚合物等类似的保护剂，添加种类多，试剂组分复杂，保护效果并不明显；并且，添加这些保护剂后，可能影响试剂性能。
目前，关于如何进一步提高碱性磷酸酶标记抗体试剂的稳定性，进而提高检测的效果，仍有待进一步研究。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供稳定性良好的碱性磷酸酶标记抗体试剂。
本发明提供了一种碱性磷酸酶标记抗体的试剂，其包括碱性磷酸酶标记抗体母液和保存液。
本发明中，所述保存液由水和10～100mmol/L缓冲盐、2～20g/L蛋白质、0.5～5g/L表面活性剂、0.1～0.5mol/L盐、0.5～5g/L防腐剂、0.5～20g/L保护剂组成；其中，所述保护剂为甘氨酸和硫酸盐。
本发明所述的保护剂与酶标记抗体母液可以混合存在也可以相互独立存在，本发明对此不做限定。本发明所述保存液可以以工作浓度同等浓度存在，也可为工作浓度的2～100倍浓度存在。本发明所述试剂的保存液中不含不添加多元醇或生化试剂而使用甘氨酸和硫酸盐，甘氨酸与硫酸盐与其他各组分共同作用，显著提高ALP标记抗体的稳定性。其中，所述硫酸盐为硫酸钠或硫酸钾。
本发明用常见的硫酸钠盐和甘氨酸作为保护剂，有效提高碱性磷酸酶标记心肌肌钙蛋白I抗体在储存和使用的稳定性。组分简单，容易配制，成本低廉。
在本发明所述的ALP标记抗体试剂中，其中本发明所述制备方法制得的碱性磷酸酶标记抗体的浓度为0.5～5ng/mL。本发明一些实施例中，本发明提供的碱性磷酸酶标记抗体的试剂，由水和0.5～5ng/mL碱性磷酸酶标记抗体、10～100mmol/L缓冲盐、2～20g/L蛋白质、0.5～5g/L表面活性剂、0.1～0.5mol/L盐、0.5～5g/L防腐剂、0.5～20g/L保护剂组成；所述保护剂为甘氨酸和硫酸盐。实验表明，在如上试剂的选择下，所得保存液的效果优于其他组分的选择或浓度。其中，所述硫酸盐为硫酸钠或硫酸钾。
本发明所述试剂中，所述缓冲盐选自Tris、MES、MOPS、HEPES中任意一种；本发明实施例中，所述缓冲盐为Tris，所述缓冲盐浓度为50mM。
本发明所述试剂中，所述蛋白质选自牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶蛋白中任意一种或两种以上的组合。本发明实施例中，所述蛋白为牛血清白蛋白。所述蛋白质的浓度为10g/L。
本发明所述试剂中，所述表面活性剂选自吐温20、吐温40、吐温80、曲拉通x-100、曲拉通x-405、Brij-35中任意一种或两种以上的组合。本发明实施例中，所述表面活性剂为Brij-35。所述表面活性剂的浓度为1g/L。
本发明所述试剂中，所述盐选自氯化钠、氯化镁、氯化锌、氯化钾中任意一种或两种以上的组合。本发明实施例中，所述盐为氯化钠、氯化镁和氯化锌组合，其中，所述氯化钠浓度为0.1～0.3mol/L，优选的氯化钠浓度为0.15mol/L。所述氯化镁浓度为1～10mmol/L，优选的氯化镁浓度为2.5mmol/L。所述氯化锌浓度为0.2～5mmol/L，优选的氯化锌浓度为0.5mmol/L。
本发明所述试剂中，所述防腐剂选自叠氮钠、PC300、氯霉素、庆大霉素中任意一种或两种以上的组合；本发明实施例中，所述防腐剂为叠氮钠。所述叠氮钠浓度为1g/L。
本发明所述试剂中，所述甘氨酸浓度为0.5～10g/L，硫酸钠浓度为5～20g/L。本发明实施例中，所述甘氨酸浓度为0.5、5或10g/L，硫酸盐浓度为5、10或20g/L。本发明保存液中，所述硫酸盐为硫酸钠或硫酸钾。
本发明所述试剂的pH值为7.0～8.0，优选的pH值为7.40。
本发明所述试剂中，碱性磷酸酶标记抗体的制备方法包括：
以2-IT活化碱性磷酸酶，获得活化的碱性磷酸酶；
以Sulfo-SMCC活化抗体，获得活化的抗体；
将活化的碱性磷酸酶和活化的抗体混合，加入N-乙基马来酰亚胺后，经封闭获得碱性磷酸酶标记的抗体。
本发明利用2-IT活化碱性磷酸酶，使其带上与Sulfo-SMCC活化抗体后的抗体相连的巯基，达到抗体和碱性磷酸酶偶联的目的。该方法不论是在抗体的活化阶段还是在碱性磷酸酶的活化阶段都无需加入封闭液，减少操作步骤，节约时间。相对于采用Sulfo-SMCC活化ALP的方案，本发明制备的碱性磷酸酶标记抗体更稳定，有利于检测效果的提高。
本发明所述的方法中对碱性磷酸酶或抗体的来源不做限定，实验表明原料的来源对效果不存在影响。
一些实施例中，所述碱性磷酸酶在活化前经脱盐柱处理。
所述碱性磷酸酶的活化步骤中，缓冲液为酶标记液1，其中包括水和1g/kg～5g/kgNaH2PO4·2H2O、25g/kg～30g/kg Na2HPO4·12H2O、8g/kg～10g/kg NaCl、0.9g/kg～1g/kgNa2EDTA·2H2O。一些实施例中，所述酶标记液1由水和3g/kg NaH2PO4·2H2O、29g/kgNa2HPO4·12H2O、9g/kg NaCl、0.93g/kg Na2EDTA·2H2O。所述酶标记液1的pH值为8.0。
所述碱性磷酸酶的活化步骤中，碱性磷酸酶与2-IT的质量比为100:(1～5)。一些实施例中，所述碱性磷酸酶与2-IT的质量比为100:2。
具体的，所述碱性磷酸酶的活化包括，将碱性磷酸酶以酶标液1溶解至浓度为5mg/mL，获得ALP溶液，将2-IT以酶标液1溶解至浓度为2mg/mL，获得2-IT溶液。将ALP溶液和2-IT溶液混合，20～25℃静置0.1～1h。一些实施例中，所述活化的条件为22℃静置30min。所述活化后的碱性磷酸酶经脱盐柱纯化，获得活化ALP溶液。
本发明所述的方法可适用于多种抗体的标记，本发明中，所述抗体可选自心肌肌钙蛋白I抗体、白介素-6抗体或肌红蛋白抗体中的任意一种。在本发明实施例中，以心肌肌钙蛋白I抗体为例，对制备方法的效果进行验证。
一些实施例中，所述抗体在活化前经脱盐柱处理。
所述抗体的活化步骤中，缓冲液为酶标记液2，其中包括水和1g/kg～5g/kgNaH2PO4·2H2O、25g/kg～30g/kg Na2HPO4·12H2O、15g/kg～20g/kg NaCl、1g/kg～5g/kgNa2EDTA·2H2O。一些实施例中，所述酶标记液2由水和3g/kg NaH2PO4·2H2O、29g/kgNa2HPO4·12H2O、18g/kg NaCl、3.72g/kg Na2EDTA·2H2O。所述酶标记液1的pH值为8.0。
所述抗体的活化步骤中，抗体与Sulfo-SMCC的质量比为100：(5～10)。。一些实施例中，所述抗体与Sulfo-SMCC的质量比为100:8.5。
具体的，所述抗体的活化包括，将抗体以酶标液2溶解至浓度为4mg/mL，获得抗体溶液，将Sulfo-SMCC以酶标液2溶解至浓度为5mg/mL，获得Sulfo-SMCC溶液。将抗体溶液和Sulfo-SMCC溶液混合，20～25℃静置0.1～1h。一些实施例中，所述活化的条件为22℃静置30min。所述活化后的抗体经脱盐柱纯化，获得活化抗体溶液。
在本发明中，将活化ALP溶液和活化抗体溶液混合。在该步骤中，活化ALP和活化抗体的质量比为(0.5～2)：1。
所述活化ALP溶液和活化抗体溶液混合后，于20～25℃静置0.1～3h。具体实施例中，所述活化ALP溶液和活化抗体溶液混合后，于22℃静置60h。
本发明中，所述活化ALP溶液和活化抗体溶液混合并于22℃静置60h后加入N-乙基马来酰亚胺(NEM)，然后进行封闭。本发明封闭阶段加入封闭液，有效避免非特异性结合。提高试剂的灵敏度、精密度、特异性、准确性和稳定性。
本发明中，所述NEM与ALP的质量比为(5～20)：100。加入NEM后反应的条件为20～25℃静置5～10min。一些实施例中，加入NEM后反应的条件为22℃静置10min。
本发明中，所述封闭的封闭剂为乙醇胺。所述乙醇胺以酶标记液3。所述酶标记液3包括水和25g/kg～26g/kg Na2HPO4·12H2O、4g/kg～5g/kg NaH2PO4·2H2O、5g/kg～10g/kgNaCl。一些实施例中，所述酶标记液3由水和25.78g/kg Na2HPO4·12H2O、4.36g/kgNaH2PO4·2H2O、8.78g/kg NaCl。所述酶标记液1的pH值为7.4。一些实施例中，所述乙醇胺与ALP的质量比为(1～2)：1。所述封闭反应的条件为为20～25℃静置10～20min。一些实施例中，封闭反应的条件为22℃静置10min。
本发明所述ALP标记抗体的制备方法中，所述封闭后还包括超滤和配制母液的步骤。
本发明中，所述超滤的滤膜分子量为30kDa，所述超滤至ALP标记的抗体的浓度为0.2mg/mL。超滤后ALP标记的抗体的浓度以酶标记液3调节。
本发明中，所述配制母液包括在超滤后的液体中加入甘油。所述甘油的体积与超滤后液体的体积相等。
本发明提供的标记工艺的标记时间短、操作简单、提升活化效率。本发明中提供的试剂以该碱性磷酸酶标记抗体为检测抗体，具备更好的稳定性，将其用于检测能够获得更高的灵敏度、准确性、特异性和精密度。
本发明还提供了一种免疫学检测试剂，其包括本发明所述的试剂、包被抗体试剂和发光剂。
本发明还提供了一种免疫学检测方法，其包括以本发明所述的免疫学检测试剂对待测抗原或抗体进行检测。
本发明所述免疫学检测方法包括诊断为目的利用免疫学方法对疾病标志物进行检测，也可包括非诊断目的的对其他待测抗原进行检测。
本发明提供了碱性磷酸酶标记抗体试剂，该试剂中保存液，能够提高组分的稳定性，特别是提高碱性磷酸酶标记抗体的稳定性，从而使该试剂用于待测抗原的检测具备更好的稳定性、灵敏度、准确性、特异性和精密度。并且，本发明中，所述碱性磷酸酶标记抗体的制备在活化阶段无需封闭剂，以2-IT活化碱性磷酸酶，以Sulfo-SMCC活化抗体，避免了活化剂对ALP构象的干扰，获得的酶标记抗体具有良好的稳定性。
具体实施方式
本发明提供了碱性磷酸酶标记抗体试剂，本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1碱性磷酸酶标记心肌肌钙蛋白I抗体的制备：
一、按照表1～4配制试剂：
表1酶标记液1
物料名称 单位 用量
NaH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>·2H<sub>2</sub>O g 3.00
Na<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>·12H<sub>2</sub>O g 29.00
NaCl g 9.00
二水合乙二胺四乙酸二钠盐 g 0.93
称量各试剂至干净的烧杯中，添加0.8kg的纯化水，搅拌至完全溶解，用5M的NaOH溶液调节pH至8.0，用纯化水补充至1.0kg。再用0.22μm的滤膜抽滤，2～8℃放置备用。
表2酶标记液2
物料名称 单位 用量
NaH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>·2H<sub>2</sub>O g 3.00
Na<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>·12H<sub>2</sub>O g 29.00
NaCl g 18.00
二水合乙二胺四乙酸二钠盐 g 3.72
称量各试剂至干净的烧杯中，添加0.8kg的纯化水，搅拌至完全溶解，用5M的NaOH溶液调节pH至8.0，用纯化水补充至1.0kg。再用0.22μm的滤膜抽滤，，2～8℃放置备用。
表3酶标记缓冲液3
物料 单位 用量
Na<sub>2</sub>HPO<sub>4</sub>·12H<sub>2</sub>O g 25.78
NaH<sub>2</sub>PO<sub>4</sub>·2H<sub>2</sub>O g 4.36
NaCl g 8.78
称取上述试剂于干净烧杯中，加入0.8kg的超纯水，充分搅拌溶解完全，用5M NaOH或5M HCl溶液调整pH＝7.4；用纯化水补充至1.0kg，用0.22μm滤头过滤备用。
表4封闭液
物料名称 单位 用量
乙醇胺 g 2.50
称量各试剂至玻璃瓶中，添加250mL的酶标标记液2，搅拌至完全溶解，用5M的NaOH溶液调节pH至7.40。再用.22μm的滤膜抽滤，2～8℃放置备用。
二、按照如下步骤制备碱性磷酸酶标记心肌肌钙蛋白I抗体：
1)取100μg碱性磷酸酶，用脱盐柱处理后，用酶标记液1调整浓度至5mg/mL，加入2μL的2-IT溶液(由酶标记液1配制，浓度为2mg/mL)，涡旋混匀，22℃静置30min，脱盐柱纯化；
2)取100μg抗体，脱盐柱处理后，用酶标记液2调整浓度至4mg/mL，加入1.7μL的Sulfo-SMCC溶液(超纯水配制，浓度为5mg/mL)，旋混匀，22℃静置30min，脱盐柱纯化；
3)将活化后的碱性磷酸酶和抗体混合，22℃静置60min，加入5μL的N-乙基马来酰亚胺(酶标液2配制，浓度为10mg/mL)，22℃静置10min，加入10uL的封闭液，22℃静置10min；
4)封闭之后，转移至30K超滤管，用酶标记液3补充至400μL，9000rpm/min，25min；
5)吸取离心后的酶标记抗体母液，加入酶标记液3补充至250μL，加入250μL甘油，得到0.2mg/mL酶标记抗体母液，-20℃保存。
实施例2：
用于碱性磷酸酶标记结合物的保存液，各组分及其含量如下表：
表5保存液
物料代码 单位 用量(1kg)
Tris g 6.06
NaCl g 9.00
BSA g 10.00
Brij-35 g 1.00
NaN<sub>3</sub> g 1.00
甘氨酸 g 5.00
硫酸钠 g 10.00
2M氯化镁溶液 mL 1.25
0.2M氯化锌溶液 mL 2.50
称量各试剂于烧杯烧中，添加0.8kg的纯化水，搅拌至完全溶解，用5M的NaOH溶液调节pH至7.40，用纯化水补充至1.0kg。再用0.22μm的滤膜抽滤，2～8℃放置备用。
实施例3
用于碱性磷酸酶标记结合物的保存液，各组分及其含量如下表：
表6保存液
物料代码 单位 用量(1Kg)
Tris g 6.06
NaCl g 9.00
BSA g 10.00
Brij-35 g 1.00
NaN<sub>3</sub> g 1.00
甘氨酸 g 0.50
硫酸钠 g 20.00
2M氯化镁溶液 mL 1.25
0.2M氯化锌溶液 mL 2.50
称量各试剂于烧杯烧中，添加0.8kg的纯化水，搅拌至完全溶解，用5M的NaOH溶液调节pH至7.40，用纯化水补充至1.0kg。再用0.22μm的滤膜抽滤，2～8℃放置备用。
实施例4
用于碱性磷酸酶标记结合物的保存液，各组分及其含量如下表：
表7保存液
物料代码 单位 用量(1Kg)
Tris g 6.06
NaCl g 9.00
BSA g 10.00
Brij-35 g 1.00
NaN<sub>3</sub> g 1.00
甘氨酸 g 10.00
硫酸钠 g 5.00
2M氯化镁溶液 mL 1.25
0.2M氯化锌溶液 mL 2.50
称量各试剂于烧杯烧中，添加0.8kg的纯化水，搅拌至完全溶解，用5M的NaOH溶液调节pH至7.40，用纯化水补充至1.0kg。再用0.22μm的滤膜抽滤，2～8℃放置备用。
实施例5
用于碱性磷酸酶标记结合物的保存液，各组分及其含量如下表：
表8保存液
Figure BDA0003544909510000091
Figure BDA0003544909510000101
称量各试剂于烧杯烧中，添加0.8kg的纯化水，搅拌至完全溶解，用5M的NaOH溶液调节pH至7.40，用纯化水补充至1.0kg。再用0.22μm的滤膜抽滤，2～8℃放置备用。
对比例1：
用于碱性磷酸酶标记结合物的保存液，各组分及其含量如下表：
表9保存液
物料代码 单位 用量(1Kg)
Tris g 6.06
NaCl g 9.00
BSA g 10.00
Brij-35 g 1.00
NaN<sub>3</sub> g 1.00
2M氯化镁溶液 mL 1.25
0.2M氯化锌溶液 mL 2.50
称量各试剂于烧杯烧中，添加0.8kg的纯化水，搅拌至完全溶解，用5M的NaOH溶液调节pH至7.40，用纯化水补充至1.0kg。再用0.22μm的滤膜抽滤，2～8℃放置备用。
对比例2：
用于碱性磷酸酶标记结合物的保存液，各组分及其含量如下表：
表10保存液
Figure BDA0003544909510000102
Figure BDA0003544909510000111
称量各试剂于烧杯烧中，添加0.8kg的纯化水，搅拌至完全溶解，用5M的NaOH溶液调节pH至7.40，用纯化水补充至1.0kg。再用0.22μm的滤膜抽滤，2～8℃放置备用。
实验例1稳定性验证：
酶标试剂由实施例2～5和对比例1～2所述的保存液中加入实施例1中制备的碱性磷酸酶标记心肌肌钙蛋白I抗体母液制得。
将上述试剂每种各分为2份，一份放置于37℃加速老化7天，一份放置于2～8℃保存。放置7天后，以放置2～8℃试剂为对照，用两份酶标试剂同步测试相同样本。测试结果如表11：
表11稳定性测试结果
Figure BDA0003544909510000112
Figure BDA0003544909510000121
从测试结果可以看出，以各实施例保存液配制的碱性磷酸酶结合物37℃加速7天，cTnI测试发光值降幅在3％以内；且保护剂含量对稳定性影响不大。从对比结果看出，未添加保护剂甘氨酸和硫酸钠(硫酸钾)，37℃加速7天，其发光值降幅均在15％以上；添加蔗糖、聚乙二醇4000、甘油等保护剂，37℃加速7天，其发光值降幅液均在15％以上。
实验例2精密度验证：
取高浓度和低浓度的心肌肌钙蛋白I重复性参考品(R1和R2)，以实施例2保存液配制的碱性磷酸酶标记心肌肌钙蛋白I抗体试剂分别测试10次，计算变异系数(CV)。
表12精密度验证结果
Figure BDA0003544909510000122
结果表明，该保存液配制的试剂多次测试之间变异系数较小，具有良好的精密度。
实验例3准确性验证：
以实施例2保存液配制的碱性磷酸酶标记心肌肌钙蛋白I抗体试剂对具有溯源性的企业参考品进行检测，计算测试偏差。
表13准确性验证结果
Figure BDA0003544909510000123
Figure BDA0003544909510000131
结果表明，该保存液配制的试剂对参考品多次测试之间偏差较小，具有良好的准确性。
实验例3空白限验证：
以实施例2保存液配制的碱性磷酸酶标记心肌肌钙蛋白I抗体试剂测试20次零浓度校准品，计算发光值的平均值
Figure BDA0003544909510000132
和标准差SD，将
Figure BDA0003544909510000133
代入零浓度和相邻校准品之间的浓度-发光值的方程，得出的浓度值即为空白限。
Figure BDA0003544909510000134
Figure BDA0003544909510000141
结果表明，本发明所述的试剂度测试空白限为0.001ng/mL，本试剂具有良好的灵敏度。
实验例4特异性验证：
在零浓度校准品中加入浓度为1000ng/mL的心肌肌钙蛋白C(cTnC)、心肌肌钙蛋白T(cTnT)、骨骼肌肌钙蛋白I(sTnI)，用以实施例2保存液配制的碱性磷酸酶标记心肌肌钙蛋白I抗体试剂测试结果。
表14特异性验证结果
交叉物 浓度(ng/mL) 计算浓度(ng/mL) 交叉反应率
cTnC 1000 0.005 0.0005％
cTnT 1000 0.008 0.0008％
sTnI 1000 0.006 0.0006％
结果表明，本发明所述的试剂对类似物测试结果的交叉反应率均＜0.1％，表明这3种类似物对试剂均无干扰，能够实现对心肌肌钙蛋白I的准确检测。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.碱性磷酸酶标记抗体的试剂，其特征在于，由水和0.5～5ng/mL碱性磷酸酶标记抗体、10～100mmol/L缓冲盐、2～20g/L蛋白质、0.5～5g/L表面活性剂、0.1～0.5mol/L盐、0.5～5g/L防腐剂、0.5～20g/L保护剂组成；所述保护剂为甘氨酸和硫酸盐。
2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述保护剂中的硫酸盐为硫酸钠或硫酸钾。
3.根据权利要求1或2所述的试剂，其特征在于，
所述缓冲盐选自Tris、MES、MOPS、HEPES中任意一种；
所述蛋白质选自牛血清白蛋白、酪蛋白、明胶蛋白中任意一种或两种以上的组合；
所述表面活性剂选自吐温20、吐温40、吐温80、曲拉通x-100、曲拉通x-405、Brij-35中任意一种或两种以上的组合；
所述盐选自氯化钠、氯化镁、氯化锌、氯化钾中任意一种或两种以上的组合；
所述防腐剂选自叠氮钠、PC300、氯霉素、庆大霉素中任意一种或两种以上的组合。
4.根据权利要求1或2所述的试剂，其特征在于，由水和0.5～5ng/mL碱性磷酸酶标记抗体、10～100mmol/L Tris、2～20g/L牛血清白蛋白、0.5～5g/L Brij-35、0.1～0.3mol/L氯化钠、1～10mmol/L氯化镁、0.2～5mmol/L氯化锌、0.5～5g/L叠氮钠、0.5～10g/L甘氨酸和5～20g/L硫酸盐组成。
5.根据权利要求4所述的试剂，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记抗体的制备方法包括：
以2-IT活化碱性磷酸酶，获得活化的碱性磷酸酶；
以Sulfo-SMCC活化抗体，获得活化的抗体；
将活化的碱性磷酸酶和活化的抗体混合，加入N-乙基马来酰亚胺后，经封闭获得碱性磷酸酶标记的抗体。
6.根据权利要求5所述的试剂，其特征在于，所述抗体包括心肌肌钙蛋白I抗体、白介素-6抗体或肌红蛋白抗体中任意一种。
7.根据权利要求5所述的试剂，其特征在于，所述封闭的封闭剂为乙醇胺。
8.根据权利要求5所述的试剂，其特征在于，
所述封闭后还包括超滤和配制母液的步骤；
所述配制母液包括在超滤后的液体中加入甘油。
9.一种免疫学检测试剂，其特征在于，包括权利要求1～8任一项所述的试剂、包被抗体试剂和发光剂。
10.一种免疫学检测方法，其特征在于，包括，以权利要求9所述的免疫学检测试剂对待测抗原或抗体进行检测。
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