CN114752640A - 一种羊肚菌硒多糖的制备方法 - Google Patents
一种羊肚菌硒多糖的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114752640A CN114752640A CN202210331043.2A CN202210331043A CN114752640A CN 114752640 A CN114752640 A CN 114752640A CN 202210331043 A CN202210331043 A CN 202210331043A CN 114752640 A CN114752640 A CN 114752640A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- morchella
- selenium
- polysaccharide
- liquid
- culture medium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 61
- 239000011669 selenium Substances 0.000 title claims abstract description 61
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 45
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 45
- -1 selenium polysaccharide Chemical class 0.000 title claims abstract description 33
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 17
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 32
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 28
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 15
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims abstract description 5
- 229940091258 selenium supplement Drugs 0.000 claims description 54
- 241000221638 Morchella Species 0.000 claims description 49
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 240000002769 Morchella esculenta Species 0.000 claims description 19
- 235000002779 Morchella esculenta Nutrition 0.000 claims description 19
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 18
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 17
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 13
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 12
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 12
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 10
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims description 7
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 6
- 241001052560 Thallis Species 0.000 claims description 6
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 6
- BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L disodium selenite Chemical compound [Na+].[Na+].[O-][Se]([O-])=O BVTBRVFYZUCAKH-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 6
- 238000002386 leaching Methods 0.000 claims description 6
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 claims description 6
- GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M potassium dihydrogen phosphate Chemical compound [K+].OP(O)([O-])=O GNSKLFRGEWLPPA-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 6
- 229960001471 sodium selenite Drugs 0.000 claims description 6
- 239000011781 sodium selenite Substances 0.000 claims description 6
- 235000015921 sodium selenite Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 6
- 238000000967 suction filtration Methods 0.000 claims description 6
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 6
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 claims description 5
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 claims description 5
- 230000004913 activation Effects 0.000 claims description 5
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 4
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 4
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 claims description 3
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 claims description 3
- 240000001624 Espostoa lanata Species 0.000 claims description 3
- 235000009161 Espostoa lanata Nutrition 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 claims description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 3
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 3
- 238000011218 seed culture Methods 0.000 claims description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 3
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000010009 beating Methods 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 15
- HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N dpph Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1[N]N(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 HHEAADYXPMHMCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 10
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 abstract description 4
- 230000036983 biotransformation Effects 0.000 abstract description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 3
- OCZVHBZNPVABKX-UHFFFAOYSA-N 1,1-diphenyl-2-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazine;ethanol Chemical compound CCO.[O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1NN(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 OCZVHBZNPVABKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 2
- 102000006587 Glutathione peroxidase Human genes 0.000 description 2
- 108700016172 Glutathione peroxidases Proteins 0.000 description 2
- RJFAYQIBOAGBLC-BYPYZUCNSA-N Selenium-L-methionine Chemical compound C[Se]CC[C@H](N)C(O)=O RJFAYQIBOAGBLC-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- RJFAYQIBOAGBLC-UHFFFAOYSA-N Selenomethionine Natural products C[Se]CCC(N)C(O)=O RJFAYQIBOAGBLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 2
- MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N diphenyl-(2,4,6-trinitrophenyl)iminoazanium Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC([N+](=O)[O-])=CC([N+]([O-])=O)=C1N=[N+](C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 MGJZITXUQXWAKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003574 free electron Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 2
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 2
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 2
- 229960002718 selenomethionine Drugs 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- KRRJTXBAYAYGCV-GEMLJDPKSA-N (2s)-2-amino-5-[[(2r)-1-(carboxymethylamino)-1-oxo-3-sulfanylpropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid;hydrogen peroxide Chemical compound OO.OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O KRRJTXBAYAYGCV-GEMLJDPKSA-N 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 1
- PMYDPQQPEAYXKD-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-n-naphthalen-2-ylnaphthalene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=CC2=CC(NC(=O)C3=CC4=CC=CC=C4C=C3O)=CC=C21 PMYDPQQPEAYXKD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229940123457 Free radical scavenger Drugs 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002292 Radical scavenging effect Effects 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005562 fading Methods 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 230000007760 free radical scavenging Effects 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 125000004433 nitrogen atom Chemical group N* 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001881 sodium selenate Drugs 0.000 description 1
- 239000011655 sodium selenate Substances 0.000 description 1
- 235000018716 sodium selenate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/04—Polysaccharides, i.e. compounds containing more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic bonds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/38—Chemical stimulation of growth or activity by addition of chemical compounds which are not essential growth factors; Stimulation of growth by removal of a chemical compound
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
本发明涉及一种羊肚菌硒多糖的制备方法，以羊肚菌为菌种进行液体深层发酵，通过生物转化将无机硒转化成有机硒多糖，提高硒源利用率，易于人体吸收，且获得的羊肚菌硒多糖DPPH·清除活性比未富硒的羊肚菌胞内多糖提高43.75％，清除活性大大提升，效果非常明显。
Description
技术领域
本发明属于食用菌培养技术领域，涉及富硒羊肚菌液体深层发酵及硒多糖的提取工艺，具体涉及一种羊肚菌硒多糖的制备方法。
背景技术
羊肚菌(Morchella)隶属真菌中子囊菌亚门、盘菌纲、盘菌目、羊肚菌科、羊肚菌属，是一种野生名贵的药食用真菌，具有降血脂、降血糖，调节免疫功能，抗疲劳、抗辐射、抗肿瘤等作用。由于羊肚菌生长条件苛刻，人工培育的难度增大、成本高，所以并未规模化生产。人工栽培的不可控性、栽培土壤的退化现象，培育过程中的病虫害等问题都是制约其快速发展的不利因素，目前尚未解决。
硒是一种物质稀缺、经济稀缺的资源，在地球表面的分布极不平衡，我国约有72％的地区缺硒，特别是从东北到西南的15个省市自治区的部分地区构成了“贫硒地带”。硒是人体必需微量矿质营养元素之一，是人体红细胞谷胱甘肽过氧化物酶和磷脂过氧化氢谷胱甘肽过氧化物酶的重要组成成分，其主要作用是参与酶的合成，保护细胞膜的结构与功能免遭过度氧化和干扰，对维持人体正常的生命活动具有重要的意义。
《WS/T 578.3～2017中国居民膳食营养素参考摄入量第3部分：微量元素》中推荐成年人硒摄入量为60μg/d。我国总膳食结构调查显示，中国居民日常饮食中硒摄入量平均值为26～32μg/d，需要额外补充。无机硒一般指亚硒酸钠和硒酸钠，可从金属矿藏的副产品中获得，其生产工艺简单，成本低廉，安全性差，毒性较大。现已知的集硒手段有两种：人工合成和生物转化。人工合成的产品有硒化亚油酸，硒化脂多糖，肌醇硒酸脂等，生产工艺复杂，价格昂贵，无法满足市场所需；硒的生物转化主要是通过动物、植物、微生物转化无机硒生产有机硒。微生物因具有生长繁殖快、适应和代谢能力强等优点，成为有硒转化的最适载体。羊肚菌等大型真菌可将无机硒通过富集、代谢、转化等作用，使其与多糖结合，形成安全性高、生物可利用性良好的硒多糖，具有易于人体吸收，稳定性良好，对人体无毒副作用等特点，富硒羊肚菌的研究对保障硒资源的可持续开发和发展、进一步揭示功效成分作用机理及其在人类保健事业上的应用有着十分重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提出一种羊肚菌硒多糖的制备方法。
本发明解决其技术问题是通过以下技术方案实现的：
一种羊肚菌硒多糖的制备方法，其特征在于：所述方法的步骤为：
1)羊肚菌菌种活化
羊肚菌斜面培养基制备：马铃薯200.0g/L、葡萄糖20.0g/L及琼脂20.0g/L，在温度121℃、压强0.1MPa条件下高压灭菌20min，待温度降至45℃～50℃后，摆放入斜面培养基；
羊肚菌母种的活化：将接种铲、酒精灯、打火机及上述配制好的斜面培养基在超净工作台上进行紫外杀菌30min，然后关闭紫外灯，开启风扇，使超净操作台呈正压状态，将接种人员双手用酒精棉球反复擦拭3次，进行消毒，接种时先将接种铲用酒精灯的火焰反复灼烧，待冷却后用接种铲挖取约0.5cm2的羊肚菌母种，倒置在斜面培养基的表面，将斜面培养基的试管口用火焰进行杀菌，塞入棉塞，25℃恒温培养7天；
2)羊肚菌液体种子的制备
羊肚菌液体种子培养基：蔗糖30～50g/L，酵母膏10～30g/L，磷酸二氢钾0.5～1.5g/L，硫酸镁0.5～1.5g/L，在温度121℃、压强0.1MPa条件下高压灭菌20min；
羊肚菌液体种子的制备：将两块面积大小为0.5cm2的羊肚菌斜面菌种接入装液量分别为200、500mL的种子摇瓶中，在温度22～26℃条件下，以150～170r/min摇床振荡培养4～6天；
3)羊肚菌菌丝体富硒发酵
蔗糖30～50g/L，酵母膏10～30g/L，硫酸镁0.5～1.5g/L，磷酸二氢钾0.5～1.5g/L，亚硒酸钠20mg/L，接种量5.0～10.0％，初始pH为6，培养温度22～26℃，摇床转速130～150r/min振荡培养5～6天；
4)羊肚菌菌丝体硒多糖提取
将羊肚菌液体深层发酵产物置于布氏漏斗进行抽滤，用蒸馏水将羊肚菌表面浮色进行反复清洗，待颜色大致退去且布氏漏斗下方没有液体流出时结束抽滤，将收集得到的菌体，置于60℃烘干至恒重，用微型万能粉碎机打成菌粉备用；
将上述菌粉与蒸馏水以1：30的比例，在50～60℃条件下超声浸提60～120min，将浸提液4000～5000r/min离心10～20min，去除沉淀，取上清液；
上清液在40～60℃条件下真空浓缩，并以1：4的比例加入无水乙醇，4℃醇沉8～12h静置，4000～5000r/min冷冻离心10～20min，弃去上清，取沉淀；
向沉淀中加入蒸馏水复溶，直接加入四分之一体积的Sevage溶剂充分振荡后，置于冷冻离心机中4000～5000r/min离心10～20min，弃去蛋白；重复多次直至没有蛋白析出，此时上层液体为羊肚菌胞内粗多糖溶液；取上层清液重复浓缩、醇沉，收集沉淀物，置于40～60℃真空干燥箱中干燥，得到羊肚菌硒多糖。
本发明的优点和有益效果为：
1、本发明羊肚菌硒多糖的制备方法，采用液体深层发酵的方法培养羊肚菌，具有速度快，周期短，易于回收的特点，可以突破气候、环境等因素的限制，避免不利因素对菌种发酵造成的负面影响。
2、本发明羊肚菌硒多糖的制备方法，亚硒酸钠在适宜的浓度范围对羊肚菌发酵具有促进作用，可提升菌丝体得率及菌体胞内多糖含量。
3、本发明羊肚菌硒多糖的制备方法，羊肚菌通过液体深层发酵将无机硒转化成有机硒，以硒蛋氨酸和硒多糖的形式存在，硒蛋氨酸依循蛋氨酸代谢途径代谢，参与蛋白的合成，容易在组织内储存、吸收；硒多糖作为一种非特异性免疫增强剂，兼有多糖和硒两者活性，它可通过多种途径提高机体免疫功能，对机体没有副作用。
4、本发明羊肚菌硒多糖的制备方法，以亚硒酸钠为硒来源，以羊肚菌为菌种进行液体深层发酵，通过生物转化将无机硒转化成有机硒多糖，其DPPH·清除活性比未富硒的羊肚菌胞内多糖提高43.75％，清除活性大大提升，效果非常明显。
附图说明
图1为本发明的羊肚菌硒多糖与Vc及富硒羊肚菌多糖DPPH·清除活性对比图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明作进一步详述，以下实施例只是描述性的，不是限定性的，不能以此限定本发明的保护范围。
一种羊肚菌硒多糖的制备方法，其创新之处在于：所述方法的步骤为：
1、羊肚菌液体种子制备
1.1菌种活化
羊肚菌斜面培养基制备：马铃薯200.0g/L，葡萄糖20.0g/L，琼脂20.0g/L，121℃，0.1MPa，高压灭菌20min。待温度降至45℃～50℃，摆放斜面培养基。
羊肚菌母种的活化：将接种铲、酒精灯、打火机以及配制好的斜面培养基在超净工作台中紫外杀菌30min，关闭紫外灯，开启风扇，使操作台呈正压状态，双手用酒精棉球反复擦拭3次，进行消毒。接种时先将接种铲用酒精灯的火焰反复灼烧，待冷却后用接种铲挖取约0.5cm2的羊肚菌母种，倒置在斜面培养基的表面，将斜面培养基的试管口用火焰进行杀菌，塞入棉塞，25℃恒温培养7天。
1.2羊肚菌液体种子的制备
羊肚菌液体种子培养基：蔗糖30～50g/L，酵母膏10～30g/L，磷酸二氢钾0.5～1.5g/L，硫酸镁0.5～1.5g/L，121℃，0.1MPa，高压灭菌20min。
羊肚菌液体种子的制备：将两块面积大小为0.5cm2的羊肚菌斜面菌种接入装液量为200/500mL的种子摇瓶中，22～26℃，150～170r/min摇床振荡培养4～6天。
2、羊肚菌菌丝体富硒发酵
蔗糖30～50g/L，酵母膏10～30g/L，硫酸镁0.5～1.5g/L，磷酸二氢钾0.5～1.5g/L，亚硒酸钠20mg/L，接种量5.0～10.0％，初始pH6，培养温度22～26℃，摇床转速130～150r/min振荡培养5～6天。
3、羊肚菌菌丝体硒多糖提取
将羊肚菌液体深层发酵产物置于布氏漏斗进行抽滤，用蒸馏水将羊肚菌表面浮色进行反复清洗，待颜色大致退去且布氏漏斗下方没有液体流出时结束抽滤，收集得到的菌体，置于60℃烘干至恒重，用微型万能粉碎机打粉备用。
将菌粉与蒸馏水以1：30的比例，50～60℃超声浸提60～120min。将浸提液4000～5000r/min离心10～20min，去除沉淀，取上清液。上清液40～60℃真空浓缩，以1：4的比例加入无水乙醇，4℃醇沉8～12h静置，4000～5000r/min冷冻离心10～20min，弃去上清，取沉淀。
向沉淀中加入蒸馏水复溶，直接加入四分之一体积的Sevage溶剂(正丁醇：氯仿＝1：4)，充分振荡后，置于冷冻离心机中4000～5000r/min离心10～20min，弃去蛋白。重复多次直至没有蛋白析出，此时上层液体为羊肚菌胞内粗多糖溶液。取上层清液重复浓缩、醇沉步骤，收集沉淀物，置于40～60℃真空干燥箱中干燥，得到羊肚菌硒多糖。
羊肚菌硒多糖抗氧化性测定
1、DPPH自由基清除率测定方法
吸取不同浓度样品2.0mL，加入0.2mmol/L的DPPH～乙醇溶液2mL，充分混匀后避光保存30min，然后在517nm处测定吸光度值，记为A1。用同样体积的乙醇和蒸馏水分别取代DPPH溶液和样品做调零，以同样体积的无水乙醇代替多糖样品测得吸光度值为A0，以同样体积的无水乙醇代替DPPH～乙醇溶液测得的吸光度值为A2，抗坏血酸做阳性对照，由此可得DPPH自由基清除率的计算公式为：
DPPH自由基清除率(％)＝[1～(A1～A2)/A0]*100％
2、DPPH自由基清除能力验证
DPPH是一种比较稳定的氮中心的脂性自由基，其N上有一个游离电子，由于三个苯环的共振稳定作用，使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。DPPH的乙醇溶液呈紫色，在517处有最大的吸收峰。向其加入自由基清除剂以后，DPPH捕捉一个电子与游离电子配对，紫色褪去，变为无色物质，在517nm处的吸收消失，其褪色程度与其接受的电子数成定量关系。依此原理用分光光度计检测DPPH自由基与试样液反应后吸光值的变化，可检定试样提供氢原子、清除自由基抗氧化的能力。
如图1所示：
Vc对DPPH·的清除率的线性回归方程为：y＝74.693x+26.045(R2＝0.9984)，IC50为0.32mg/mL；
羊肚菌硒多糖的线性回归方程为：y＝50.343x+26.07(R2＝0.9981)，IC50为0.48mg/mL；
未富硒羊肚菌多糖的线性回归方程为：y＝39.164x+22.945(R2＝0.9975)，IC50为0.69mg/mL。
对DPPH·清除作用大小为：Vc＞羊肚菌硒多糖＞未富硒羊肚菌多糖。羊肚菌硒多糖清除DPPH·能力比未富硒羊肚菌多糖提高43.75％。
尽管为说明目的公开了本发明的实施例和附图，但是本领域的技术人员可以理解：在不脱离本发明及所附权利要求的精神和范围内，各种替换、变化和修改都是可能的，因此，本发明的范围不局限于实施例和附图所公开的内容。
Claims (1)
1.一种羊肚菌硒多糖的制备方法，其特征在于：所述方法的步骤为：
1)羊肚菌菌种活化
羊肚菌斜面培养基制备：马铃薯200.0g/L、葡萄糖20.0g/L及琼脂20.0g/L，在温度121℃、压强0.1MPa条件下高压灭菌20min，待温度降至45℃～50℃后，摆放入斜面培养基；
羊肚菌母种的活化：将接种铲、酒精灯、打火机及上述配制好的斜面培养基在超净工作台上进行紫外杀菌30min，然后关闭紫外灯，开启风扇，使超净操作台呈正压状态，将接种人员双手用酒精棉球反复擦拭3次，进行消毒，接种时先将接种铲用酒精灯的火焰反复灼烧，待冷却后用接种铲挖取约0.5cm2的羊肚菌母种，倒置在斜面培养基的表面，将斜面培养基的试管口用火焰进行杀菌，塞入棉塞，25℃恒温培养7天；
2)羊肚菌液体种子的制备
羊肚菌液体种子培养基：蔗糖30～50g/L，酵母膏10～30g/L，磷酸二氢钾0.5～1.5g/L，硫酸镁0.5～1.5g/L，在温度121℃、压强0.1MPa条件下高压灭菌20min；
羊肚菌液体种子的制备：将两块面积大小为0.5cm2的羊肚菌斜面菌种接入装液量分别为200、500mL的种子摇瓶中，在温度22～26℃条件下，以150～170r/min摇床振荡培养4～6天；
3)羊肚菌菌丝体富硒发酵
蔗糖30～50g/L，酵母膏10～30g/L，硫酸镁0.5～1.5g/L，磷酸二氢钾0.5～1.5g/L，亚硒酸钠20mg/L，接种量5.0～10.0％，初始pH为6，培养温度22～26℃，摇床转速130～150r/min振荡培养5～6天；
4)羊肚菌菌丝体硒多糖提取
将羊肚菌液体深层发酵产物置于布氏漏斗进行抽滤，用蒸馏水将羊肚菌表面浮色进行反复清洗，待颜色大致退去且布氏漏斗下方没有液体流出时结束抽滤，将收集得到的菌体，置于60℃烘干至恒重，用微型万能粉碎机打成菌粉备用；
将上述菌粉与蒸馏水以1：30的比例，在50～60℃条件下超声浸提60～120min，将浸提液4000～5000r/min离心10～20min，去除沉淀，取上清液；
上清液在40～60℃条件下真空浓缩，并以1：4的比例加入无水乙醇，4℃醇沉8～12h静置，4000～5000r/min冷冻离心10～20min，弃去上清，取沉淀；
向沉淀中加入蒸馏水复溶，直接加入四分之一体积的Sevage溶剂充分振荡后，置于冷冻离心机中4000～5000r/min离心10～20min，弃去蛋白；重复多次直至没有蛋白析出，此时上层液体为羊肚菌胞内粗多糖溶液；取上层清液重复浓缩、醇沉，收集沉淀物，置于40～60℃真空干燥箱中干燥，得到羊肚菌硒多糖。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210331043.2A CN114752640A (zh) | 2022-03-30 | 2022-03-30 | 一种羊肚菌硒多糖的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210331043.2A CN114752640A (zh) | 2022-03-30 | 2022-03-30 | 一种羊肚菌硒多糖的制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114752640A true CN114752640A (zh) | 2022-07-15 |
Family
ID=82329557
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210331043.2A Pending CN114752640A (zh) | 2022-03-30 | 2022-03-30 | 一种羊肚菌硒多糖的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114752640A (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103130909A (zh) * | 2013-03-17 | 2013-06-05 | 吉林大学 | 一种富硒羊肚菌多糖的制备方法 |
| CN104823701A (zh) * | 2015-04-21 | 2015-08-12 | 吴中区胥口精益生物医药研究所 | 一种富硒羊肚菌深层发酵工艺 |
| CN106434516A (zh) * | 2016-09-21 | 2017-02-22 | 四川农业大学 | 一种食用菌富硒多糖的制备方法及应用 |
| WO2019209706A2 (en) * | 2018-04-27 | 2019-10-31 | Kairos Biomedical, Inc | Bioactive fungal compounds produced by solid-state fermentation |
-
2022
- 2022-03-30 CN CN202210331043.2A patent/CN114752640A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103130909A (zh) * | 2013-03-17 | 2013-06-05 | 吉林大学 | 一种富硒羊肚菌多糖的制备方法 |
| CN104823701A (zh) * | 2015-04-21 | 2015-08-12 | 吴中区胥口精益生物医药研究所 | 一种富硒羊肚菌深层发酵工艺 |
| CN106434516A (zh) * | 2016-09-21 | 2017-02-22 | 四川农业大学 | 一种食用菌富硒多糖的制备方法及应用 |
| WO2019209706A2 (en) * | 2018-04-27 | 2019-10-31 | Kairos Biomedical, Inc | Bioactive fungal compounds produced by solid-state fermentation |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 孟凡云: "羊肚菌胞外多糖与胞内硒多糖抗氧化活性研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》, no. 2011, pages 49 - 50 * |
| 张跃非: "探析羊肚菌菌丝体富硒培养条件优化及其菌丝体硒多糖抗氧化活性", 《农业开发与装备》, no. 7, pages 133 - 134 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101143002B (zh) | 一种深层液体发酵法制备富硒金针菇粗多糖原粉的方法 | |
| CN107333564B (zh) | 一种高产、高硒蛹虫草的生产方法 | |
| CN109182199B (zh) | 一株具有植物促生作用的油菜假单胞菌 | |
| CN106591205B (zh) | 一株具解磷促生能力的不动杆菌属细菌njau-3及其应用 | |
| WO2023020191A1 (zh) | 一株印度微小杆菌及其在合成纳米硒中的应用 | |
| CN101148643A (zh) | 一种海参用海洋胶红酵母的生产方法 | |
| CN101078005B (zh) | 一株短小芽孢杆菌及其在生物转化异丁香酚生产天然香兰素中的应用 | |
| CN109456915A (zh) | 一种沙福芽孢杆菌株x3及其应用 | |
| CN104630090A (zh) | 一种玉米根际促生菌ym3及其应用 | |
| CN104630094A (zh) | 一种花生根际促生菌hs10及其应用 | |
| CN110218670A (zh) | 一株具有良好定殖能力的硒氧化型根瘤菌t3f4及其应用 | |
| CN106085867A (zh) | 一种富硒灵芝菌丝粉及其制备方法 | |
| CN117025400A (zh) | 产纳米硒的蛋白核小球藻及其应用和纳米硒制备方法 | |
| CN105535035B (zh) | 一种桦褐孔菌发酵培养组合物及其制备方法 | |
| CN110885764A (zh) | 一种冠突散囊菌富硒菌株及驯化和发酵方法 | |
| CN114752640A (zh) | 一种羊肚菌硒多糖的制备方法 | |
| CN112501027A (zh) | 一种冠突散囊菌菌株及驯化和发酵方法 | |
| CN106190865A (zh) | 一种提高蝉花真菌生物量和活性成分含量的液体发酵培养基配方 | |
| CN112266938A (zh) | 一种提高蛋白核小球藻发酵油脂的方法 | |
| CN101798564A (zh) | 氯嘧磺隆降解菌和基于该菌的土壤生物修复菌剂及应用 | |
| CN111286500A (zh) | 一种等离子体作用结合氧限制生产辅酶q10的方法 | |
| CN106467895B (zh) | 一种富硒栅藻及其培养应用 | |
| CN104630089A (zh) | 一种烟草根际促生菌yc5及其应用 | |
| JP3834626B2 (ja) | 新規な微生物及びそれを用いた天然カロチノイドの製造方法 | |
| CN109496694A (zh) | 一种基于葛根渣栽培富硒猴头菇的基质配方 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20220715 |