CN114748675B - 离子凝胶-s/w/o乳化多级成球法制备明胶/壳聚糖栓塞微球的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于医疗材料领域，具体涉及一种离子凝胶‑S/W/O乳化多级成球法制备明胶/壳聚糖栓塞微球的方法，包括以下步骤：将明胶溶液加入油相溶液中，得到混合溶液I；向所述混合溶液I中加入壳聚糖溶液和壳聚糖微纳米球水溶液，混匀，得到混合溶液II；冰浴条件下向所述混合溶液II中滴加交联剂，滴加完成后加热继续反应，制得所述冻干态或生理盐水分散湿态明胶/壳聚糖栓塞微球。本发明采用离子凝胶‑S/W/O乳化多级成球法，以制得的微纳米级(1μm左右)微球为芯材，通过S/W/O乳化层层组装，最后通过分筛分级，同时制备出多种尺寸规格的明胶/壳聚糖栓塞微球，以满足序贯栓塞，即不同尺寸规格的微球由小到大层迭栓塞的需求。

Description

离子凝胶-S/W/O乳化多级成球法制备明胶/壳聚糖栓塞微球的方法
技术领域
本发明属于医疗材料领域，具体涉及一种离子凝胶-S/W/O乳化多级成球法制备明胶/壳聚糖栓塞微球的方法。
背景技术
近年来，随着微创介入技术的快速发展，经动脉栓塞术(TAE)治疗肿瘤也逐渐成为一种倍受青睐的治疗手段。介入治疗是通过导管向肿瘤血管注射栓塞物质，对流向肿瘤的主血管进行阻塞，进而阻断肿瘤细胞的血氧供给，使得肿瘤变小或者坏死，这种方法对于一些不需要手术的良性肿瘤比如子宫肌瘤，以及癌症晚期无法进行手术的恶性肿瘤的治疗具有重要的作用；对于需要手术治疗的肿瘤也可以先进行微创栓塞术，使肿瘤坏死萎缩，从而降低手术切除部位的尺寸。
在介入栓塞治疗中，根据目标血管的大小需要选择相应尺寸的栓塞微球，微球应尺寸均一，具有不同粒径规格可供选择；作为与生物体直接接触的材料，微球应具有较好的生物相容性、低细胞毒性；栓塞时为了使微球到达尽可能远的血管端，微球还应具有一定的弹性可变形性；并且根据肿瘤的种类、病程等特点应能负载不同的化疗药物，对药物有良好的负载率，对药物释放具有可控性，最大程度的保持药物活性等。
目前临床使用的栓塞微球产品虽然仍比较单一，大都是不可降解的聚乙烯醇微球。在栓塞微球的研究领域，微球的制备材料有壳聚糖、藻酸盐、丝素、明胶、聚丙烯酸，或者两种不同材料如壳聚糖和丝素蛋白、壳聚糖和明胶等进行复合制备，制备技术有乳化交联法、膜乳化技术、静电分化成球技术。目前的文献中关于栓塞微球的研究大多采用单一方法制备微球，微球的尺寸偏小，很少有大于200μm以上的栓塞微球。而临床上有各种类型各种大小的肿瘤，部分肿瘤血管较大，特别是对于近端栓塞均需要大尺寸微球。但是目前的微球制备方法在制备大尺寸微球上都存在一定的难度。特别是不同的制备方法形成的微球尺寸有限，比如乳化交联法形成的微球尺寸大多在100μm左右，最小可到1μm左右，但是最大很难超过200μm；离子凝胶法制备的微球尺寸最小可到纳米级，但是最大不超过100μm，静电分化法制备纳米尺寸微球有一定的优势，但是制备较大尺寸微球较难。特别是每一种制备方法制备的微球都存在一定的尺寸范围。
此外，制备栓塞微球的研究大多集中在载药方面，研究大尺寸微球制备的较少。而实际临床上对于较大尺寸的微球是有需求的。现有的微球制备技术如乳化交联法生产的微球尺寸最多达到100μm已经算很大了，而离子凝胶法与喷雾干燥技术更适合制备纳米粒子，很难制备大尺寸微球。静电喷雾技术制备100μm以上尺寸的微球也存在困难。
发明内容
本发明旨在提供一种明胶/壳聚糖栓塞微球及其制备方法，采用离子凝胶-S/W/O乳化多级成球法，以制得的微纳米级(1μm左右)微球为芯材，通过S/W/O乳化层层组装，最后分筛分级，同时制备出多种尺寸规格的明胶/壳聚糖栓塞微球，以满足序贯栓塞，即不同尺寸规格的微球由小到大层迭栓塞的需求。
按照本发明的技术方案，所述离子凝胶-S/W/O乳化多级成球法制备明胶/壳聚糖栓塞微球的方法，包括以下步骤，
S1：将明胶溶液加入油相溶液中，得到混合溶液I；
所述油相溶液为掺杂乳化剂的液体石蜡或大豆油；
S2：向所述混合溶液I中加入壳聚糖溶液和壳聚糖微纳米球水溶液，混匀，得到混合溶液II；
所述壳聚糖微纳米球由离子凝胶法制备得到；
S3：冰浴条件下，向所述混合溶液II中缓慢滴加(用时1h)交联剂，滴加完成后再加热继续反应，制得所述明胶/壳聚糖栓塞微球。
进一步的，所述明胶溶液的浓度为4-6％w/v，每20-40mL油相溶液加入6-8mL明胶溶液。
进一步的，所述乳化剂为Span80、Span60、Span 80或tween20。
进一步的，向所述混合溶液I中缓慢加入壳聚糖溶液和壳聚糖微纳米球水溶液，缓慢加入的标准为用时10-15min。
进一步的，壳聚糖溶液的浓度为1-2％w/v，壳聚糖微纳米球水溶液的浓度为4-6％w/v；混合溶液I、壳聚糖溶液和壳聚糖微纳米球水溶液的体积比为25-50：2-3：5-15。
进一步的，所述壳聚糖溶液的溶剂为0.5-2％v/v的乙酸溶液。
进一步的，所述壳聚糖微纳米球的制备方法如下：
a、将壳聚糖加入0.5-2％v/v的乙酸水溶液中，混匀，制备得到0.5-2％w/v的壳聚糖溶液；
b、将三聚磷酸钠粉末加入去离子水中，混匀，制备得到0.2-0.5％三聚磷酸钠(TPP)溶液；
c、将所述TPP溶液逐滴(2mL/min)加入到搅拌的壳聚糖溶液中，继续反应0.8-1.2h；
d、离心、去离子水清洗步骤c所得混合溶液，得到所述壳聚糖微纳米球。
步骤a和b没有先后顺序。
进一步的，所述壳聚糖微纳米球上还可负载脂类药物(如广藿香油、碘化油等)或能够与壳聚糖发生氢键作用的药物(水溶性药物，如茶多酚等)。
具体的，负载脂类药物时，将脂质类药物溶解于有机溶剂中，作为油相；加入上述步骤a制得的壳聚糖溶液中，形成水包油乳液；再与TPP溶液混合制备负载有脂质类药物的壳聚糖微纳米球；
负载能够与壳聚糖发生氢键作用的药物时，直接将药物用去离子水配置成合适浓度的水溶液再加入上述步骤a制得的壳聚糖溶液中；再与TPP溶液混合制备负载有能够与壳聚糖发生氢键作用的药物的壳聚糖微纳米球。
进一步的，所述步骤S1和S2均在45-55℃条件下进行。
进一步的，所述步骤S3中，交联剂为戊二醛水溶液，每30-70mL混合溶液II中加入0.5-2mL交联剂。
进一步的，所述步骤S3中，加热反应的温度为35-40℃，时间为2-4h。
进一步的，所述步骤S3中，加热反应后还包括分离、清洗和去除交联剂的操作。
进一步的，通过加入甘氨酸浸泡3-5h，去除未反应的交联剂。
具体的，所述明胶/壳聚糖栓塞微球的制备方法，包括以下步骤：
(1)配置20-40ml，0.5-2％(w/v)的壳聚糖溶液：取一定量的壳聚糖，将之加入20-40ml的0.5-2％(v/v)的乙酸溶液中，放置在磁力搅拌器上混合均匀，配置温度为40-50℃，时间为1-1.5h，转速600-1000r/min；
(2)配置0.2-0.5％TPP溶液：称取适量的三聚磷酸钠粉末，将之加入20-40ml的去离子水中，然后放置在磁力搅拌器上混合均匀；配置温度为常温，时间为0.5-1h，转速600-700r/min；
(3)混合溶液放入烧瓶中且置于冰浴中，温度范围0℃-8℃：将TPP溶液(0.2-0.5％(w/v)，40mL)逐滴(2mL/min)加入到搅拌的壳聚糖溶液中，冰浴条件下继续反应0.8-1.2h，转速400-600r/min；
(4)将混合溶液收集离心，转速为1000-2000r/min，时间为5-10min，然后倒去上层液体，得到下层微球，随后用去离子水冲洗两次，得到壳聚糖微纳米球备用；
(5)配置油相溶液：将0.35mL的乳化剂Span80(或Span60,或Span 80与tween20的混合)加入到20-40mL液体石蜡(或大豆油)中(在三颈烧瓶中进行)，然后将之放置在磁力搅拌器上混合均匀；配制温度为35-55℃，时间为0.5-1h，转速300-500r/min；
(6)在步骤(5)配置的油相溶液中加入6-8mL 5％w/v明胶水溶液，然后将之放置在磁力搅拌器上混合均匀；配制温度为35-55℃，时间为0.5-1h，转速300-500r/min；
(7)在步骤(5)的溶液中缓慢加入(用时10-15min)1-2％w/v壳聚糖溶液溶液2-3mL和5-15mL的步骤(5)制备得到的质量体积分数2-3％w/v壳聚糖微纳米球的水溶液，然后将溶液放置在磁力搅拌器上混合均匀；配制温度为50℃，时间为2h，转速120r/min；
(8)将步骤(7)中配置的混合溶液放入有冰水混合物的水浴锅中0℃-8℃冰浴并且缓慢滴加(用时0.8-1h)0.5-2mL的10-20％v/v交联剂戊二醛溶液，转速120-300r/min；滴加完毕后将水温加热到35-40℃水浴，时间为2-4h，转速120-300r/min，总用时为4h；
(9)将步骤(8)中的溶液收集离心，转速800-1500r/min，时间为5min，然后倒去上层液体，得到下层微球；
(10)将离心得到的下层微球依次用丙酮清洗两遍、乙醇清洗两遍，最后真空抽滤得到分散的栓塞微球水溶液。
(11)向栓塞微球水溶液中加入一定量的甘氨酸浸泡3-5h，去除未反应的戊二醛。
本发明的另一方面提供了上述制备方法制得的明胶/壳聚糖栓塞微球。
进一步的，所述明胶/壳聚糖栓塞微球为冻干栓塞微球或生理盐水分散湿态栓塞微球。
具体的，冻干栓塞微球制剂即干态微球，由明胶/壳聚糖栓塞微球冷冻干燥制得。该状态微球吸水溶胀率在300-400％左右，微球结构致密，多孔，球形圆整，亲水性好，微球不易聚集而堵塞手术时的导管，特别适用于易产生血管瘘的肿瘤。尺寸规格包括50-100μm、100-200μm、200-400μm、400-600μm、600-900μm。
生理盐水分散湿态栓塞微球制剂与冻干栓塞微球制剂的制备方法相同，唯一区别的是制成的微球最后不经冷冻干燥直接分散在生理盐水中，微球具有较大的形变回复率，直径压缩率达50％左右，具有较好的血管随形性，球形圆整，亲水性好，微球不易聚集而堵塞手术时的导管，不适用于易产生血管瘘的肿瘤。尺寸规格包括200-400μm、400-600μm、600-900μm、900-1200μm。
本发明的技术方案相比现有技术具有以下优点：
制备方法上：采用离子凝胶-S/W/O乳化多级成球法，以离子凝胶法制得微纳米级微球(尺寸在1μm左右，有部分纳米级微球)，以此微纳米级微球为芯材，采用S/W/O乳化，将微球层层组装，形成尺寸范围较广的微球，再通过分筛同时制得多种规格尺寸微球；
微球形态上：产品为冻干栓塞微球制剂及生理盐水分散湿态栓塞微球制剂两种形式，适用于不同栓塞需求。湿球具有较好的压缩形变回弹性，从而使其栓塞时血管随形性好；
微球尺寸上：制备的产品湿态微球规格可达900-1200μm，可以实现近端血管或较大尺寸肿瘤血管的栓塞。
附图说明
图1为实施例1中栓塞微球的照片。
图2为实施例1中栓塞微球的施压形变图。
图3为实施例2中栓塞微球的电镜图。
图4为实施例3中广霍香油-明胶/壳聚糖栓塞微球的电镜图。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。
实施例1明胶/壳聚糖生理盐水分散栓塞微球制剂的制备
(1)配置40ml，1％(w/v)的壳聚糖溶液：取0.4g壳聚糖，将之加入40ml的1％(v/v)的乙酸溶液中，放置在磁力搅拌器上混合均匀，配置温度为50℃，时间为1h，转速800r/min。
(2)配置0.4％TPP溶液：称取0.16g三聚磷酸钠粉末，将之加入40ml的去离子水中，然后放置在磁力搅拌器上混合均匀。配置温度为常温，时间为0.5h，转速500r/min。
(3)混合溶液放入烧瓶中且置于冰浴中，温度范围5℃-8℃。将TPP溶液(0.4％(w/v)，40mL)逐滴(2mL/min)加入到搅拌的乳液中，继续反应一小时，转速500r/min。
(4)将溶液收集离心，转速为1000r/min，时间为5min，然后倒去上层液体，得到下层微球，随后用去离子水冲洗两次，得到壳聚糖微纳米球备用。
(5)配置油相溶液：将0.35mL的乳化剂Span80加入到30mL液体石蜡中(在三颈烧瓶中进行)，然后将之放置在磁力搅拌器上混合均匀。配制温度为35℃，时间为0.5h，转速300r/min。
(6)在第(5)步配置的油相溶液中加入7.5mL5％(w/v)明胶溶液。然后将之放置在磁力搅拌器上混合均匀。配制温度为35℃，时间为0.5h，转速300r/min。
(7)在第(6)步的溶液中缓慢加入(用时15min)2％(w/v)壳聚糖溶液溶液2.5mL和10mL的第一步制备的质量体积分数2.08％壳聚糖微纳米球水溶液，然后将溶液放置在磁力搅拌器上混合均匀。配制温度为50℃，时间为2h，转速120r/min。
(8)上一步中配置的混合溶液放入有冰水混合物的水浴锅中冰浴并且缓慢滴加(用时1h)1.5mL的12.5％(v/v)交联剂戊二醛溶液，转速120r/min。滴加完毕后将水温加热到35℃水浴，时间为3h，转速120r/min。总用时为4h。
(9)将上一步的溶液收集离心，转速1000r/min，时间为5min，然后倒去上层液体，得到下层微球。
(10)将离心得到的下层微球依次用丙酮清洗两遍、乙醇清洗两遍。最后真空抽滤得到分散的栓塞微球水溶液。
(11)栓塞微球水溶液中加入一定量的甘氨酸浸泡3h，去除未反应的戊二醛。
(12)将上一步收集的微球分筛成不同尺寸规格，分别抽滤后分散生理盐水中冷藏备用。即得所述生理盐水分散湿态栓塞球制剂。
所制备的栓塞微球照片如下图1所示，其中图1(A)中微球平径粒径200-400μm，图1(B)中微球平径粒径400-600μm，图1(B-1)是图1(B)中微球的光学显微镜标尺图。图1(C)中微球平径粒径600-900μm，图1(C-1)是图1(C)中微球的光学显微镜标尺图。图1(D)中微球平径粒径900-1200μm，图1(D-1)是图1(D)中微球的光学显微镜标尺图。
图2是将湿态微球用镊子施加压力后，微球发生形变，撤去压力后微球恢复原状，直径压缩率超过50％，在栓塞手术时可适应血管的粗细变化，尽可能实施远端栓塞。
实施例2明胶/壳聚糖冻干栓塞微球制剂
(1)配置40ml，1％(w/v)的壳聚糖溶液：取0.4g壳聚糖，将之加入40ml的1％(v/v)的乙酸溶液中，放置在磁力搅拌器上混合均匀，配置温度为50℃，时间为1h，转速800r/min。
(2)配置0.4％TPP溶液：称取0.16g三聚磷酸钠粉末，将之加入40ml的去离子水中，然后放置在磁力搅拌器上混合均匀。配置温度为常温，时间为0.5h，转速500r/min。
(3)混合溶液放入烧瓶中且置于冰浴中，温度范围5℃-8℃。将TPP溶液(0.4％(w/v)，40mL)逐滴(2mL/min)加入到搅拌的乳液中，继续反应一小时，转速500r/min。
(4)将溶液收集离心，转速为1000r/min，时间为5min，然后倒去上层液体，得到下层微球，随后用去离子水冲洗两次，得到壳聚糖微纳米球备用。
(5)配置油相溶液：将0.35mL的乳化剂Span80加入到30mL液体石蜡中(在三颈烧瓶中进行)，然后将之放置在磁力搅拌器上混合均匀。配制温度为35℃，时间为0.5h，转速300r/min。
(6)在第(5)步配置的油相溶液中加入7.5mL5％(w/v)明胶溶液。然后将之放置在磁力搅拌器上混合均匀。配制温度为35℃，时间为0.5h，转速300r/min。
(7)在第(6)步的溶液中缓慢加入(用时15min)2％(w/v)壳聚糖溶液溶液2.5mL和10mL的第一步制备的质量体积分数2.08％壳聚糖微纳米球水溶液，然后将溶液放置在磁力搅拌器上混合均匀。配制温度为50℃，时间为2h，转速120r/min。
(8)上一步中配置的混合溶液放入有冰水混合物的水浴锅中冰浴并且缓慢滴加(用时1h)1.5mL的12.5％(v/v)交联剂戊二醛溶液，转速120r/min。滴加完毕后将水温加热到35℃水浴，时间为3h，转速120r/min。总用时为4h。
(9)将上一步的溶液收集离心，转速1000r/min，时间为5min，然后倒去上层液体，得到下层微球。
(10)将离心得到的下层微球依次用丙酮清洗两遍、乙醇清洗两遍。最后真空抽滤得到分散的栓塞微球水溶液。
(11)栓塞微球水溶液中加入一定量的甘氨酸浸泡3h,去除未反应的戊二醛。
(12)将上一步收集的微球分筛成不同尺寸规格，冷冻干燥，即得所述栓塞微球冻干制剂。
所制备的栓塞微球电镜照片如图3所示，其中图3(A)中为直径100-200μm的栓塞微球，为经冷冻干燥后的干态微粒。图3(B)是直径200-400μm的栓塞微球，为经冷冻干燥后的干态微粒。图3(C)是直径400-600μm的栓塞微球，为经冷冻干燥后的干态微粒。
实施例3广霍香油-明胶/壳聚糖栓塞微球的制备
第一步：负载广霍香油的壳聚糖微纳米球的制备
(1)广藿香油(0.5-1.5mL)分别溶解于CH2Cl2(3mL)中，得到油相。
(2)配置40ml，1％(w/v)的壳聚糖溶液：取0.4g壳聚糖，将之加入40ml的1％(v/v)的乙酸溶液中，放置在磁力搅拌器上混合均匀，配置温度为35℃，时间为1h，转速800r/min。
(3)将Tween20(0.45g)作为表面活性剂加入到40mL(2)的壳聚糖溶液中，并在35℃下搅拌0.5小时以获得均匀的混合物。
(4)把油相缓慢滴入水性壳聚糖溶液(40mL)中，获得水包油乳液。磁力搅拌机处理1小时，温度35℃，转速800r/min。
(5)配置0.4％TPP溶液：称取0.16g三聚磷酸钠粉末，将之加入40ml的去离子水中，然后放置在磁力搅拌器上混合均匀。配置温度为常温，时间为0.5h，转速500r/min。
(6)第(4)步中制得的混合溶液置于冰浴中。将TPP溶液(0.4％(w/v)，40mL)逐滴(2mL/min)加入到搅拌的乳液中，继续反应一小时，转速500r/min。
(7)将溶液收集离心，转速为1000r/min，时间为5min，然后倒去上层液体，得到下层微球，随后用去离子水冲洗两次，得到负载广霍香油的壳聚糖微纳米球备用。
第二步：乳化交联法制备广霍香油-壳聚糖/明胶栓塞微球
(1)配置油相溶液：将0.35mL的乳化剂Span80加入到30mL液体石蜡中(在三颈烧瓶中进行)，然后将之放置在磁力搅拌器上混合均匀。配制温度为35℃，时间为0.5h，转速300r/min。
(2)在第(1)步配置的油相溶液中加入7.5mL5％(w/v)明胶溶液。然后将之放置在磁力搅拌器上混合均匀。配制温度为35℃，时间为0.5h，转速300r/min。
(3)在第(2)步的溶液中缓慢加入(用时15min)2％(w/v)壳聚糖溶液溶液2.5mL和10mL的第一步制备的壳聚糖微纳米球水溶液，然后将溶液放置在磁力搅拌器上混合均匀。配制温度为35℃，时间为2h，转速120r/min。
(4)上一步中配置的混合溶液放入有冰水混合物的水浴锅中冰浴并且缓慢滴加(用时1h)1.5mL的12.5％(v/v)交联剂戊二醛溶液，转速120r/min。滴加完毕后将水温加热到35℃水浴，时间为3h，转速120r/min。总用时为4h。
(5)将上一步的溶液收集离心，转速1000r/min，时间为5min，然后倒去上层液体，得到下层微球。
(6)将离心得到的下层微球依次用丙酮清洗两遍、乙醇清洗两遍。最后真空抽滤得到分散的栓塞微球水溶液。
(7)将上一步收集的微球冷冻干燥。即得所述广霍香油-壳聚糖/明胶栓塞微球。
第三步：药物包封率测定
(1)绘制广藿香油-正己烷溶液紫外吸收标准曲线：配置95、150、250、350、450、650、950μg/mL广藿香油的正己烷溶液。
(2)上一步配置好的溶液分别取1mL在266nm处测定吸光度值。
(3)以溶液浓度为自变量，吸光度值为应变量建立回归方程，绘制吸光度标准曲线。
(4)称取一定量的第二步制备好的栓塞微球，碾磨，用一定浓度的盐酸处理，再回入正己烷，离心，取上清液，测定吸光度值，根据吸光度曲线得到上清液中广藿香油浓度，计算包封率。
图4为600-900μm规格的广霍香油-明胶/壳聚糖栓塞微球电镜图，该规格栓塞微球的包封率如表1所示，随着投药量的增加，虽然包封率所有下降，载药量呈上升趋势，说明采用本专利制备方法可以获得较高的包封率与载药率。
表1 600-900μm规格的广霍香油-明胶/壳聚糖栓塞微球包封率
Figure BDA0003575580560000111
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (9)

1.一种离子凝胶-S/W/O乳化多级成球法制备明胶/壳聚糖栓塞微球的方法，其特征在于，包括以下步骤，
S1：将明胶溶液加入油相溶液中，得到混合溶液I；
所述油相溶液为掺杂乳化剂的液体石蜡或大豆油；
所述明胶溶液的浓度为4-6 % w/v，每20-40mL油相溶液加入6-8mL明胶溶液；
S2：向所述混合溶液I中加入壳聚糖溶液和壳聚糖微纳米球水溶液，混匀，得到混合溶液II；
所述壳聚糖微纳米球由离子凝胶法制备得到；
所述壳聚糖溶液的浓度为1-2 % w/v，壳聚糖微纳米球水溶液的浓度为2-3 % w/v；混合溶液I、壳聚糖溶液和壳聚糖微纳米球水溶液的体积比为25-50:2-3:5-15；
S3：冰浴条件下，向所述混合溶液II中滴加交联剂，滴加完成后加热继续反应，制得所述明胶/壳聚糖栓塞微球。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述壳聚糖微纳米球上还可负载脂类药物。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述壳聚糖微纳米球上还可负载能够与壳聚糖发生氢键作用的药物。
4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S1和S2均在45-55℃条件下进行。
5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中，交联剂为戊二醛水溶液，每30-70mL混合溶液II中加入0.5-2mL交联剂。
6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中，加热反应的温度为35-40℃，时间为2-4h。
7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤S3中，加热反应后还包括分离、清洗和甘氨酸浸泡去除交联剂的操作。
8.一种权利要求1-7中任一项所述的方法制得的明胶/壳聚糖栓塞微球。
9.如权利要求8所述的明胶/壳聚糖栓塞微球，其特征在于，所述明胶/壳聚糖栓塞微球为冻干栓塞微球或生理盐水分散湿态栓塞微球。
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