CN115591006A - 天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于医疗材料技术领域,具体涉及一种天然抗菌的茶多酚‑丝素/壳聚糖栓塞微球及其制备方法。该制备方法以丝素蛋白/壳聚糖为基体材料,以壳聚糖微纳米粒为芯材,采用两步成球法制得大尺寸规格的茶多酚‑丝素/壳聚糖栓塞微球,再经冷冻干燥制得。本发明制得的茶多酚‑丝素/壳聚糖栓塞微球尺寸分布为200‑400μm、550‑750μm,抗菌效果超过99%,包封率超过70%,吸水重量增加率为在400‑500%左右,微球结构致密,多孔,球形较圆整,亲水性好,微球不易聚集而堵塞手术时的导管。
Description
技术领域
本发明属于医疗材料技术领域,具体涉及一种天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球及其制备方法。
背景技术
栓塞微球在经导管动脉介入治疗肿瘤方面有广泛的应用。在介入栓塞治疗中,根据目标血管的大小需要选择相应尺寸的栓塞微球,微球应尺寸均一,具有不同粒径规格可供选择;作为与生物体直接接触的材料,微球应具有较好的生物相容性、低细胞毒性;栓塞时为了使微球到达尽可能远的血管端,微球还应具有一定的弹性可变形性;并且根据肿瘤的种类、病程等特点应能负载不同的化疗药物,对药物有良好的负载率,对药物释放具有可控性,最大程度的保持药物活性等。
目前,临床上应用的栓塞微球产品仍比较单一,大都是不可降解的聚乙烯醇栓塞微球,此外,制备栓塞微球的研究大多集中在载药方面,研究大尺寸微球制备的较少。而实际临床上对栓塞微球的尺寸要求在50-1200μm之间,根据栓塞部位的血管粗细选择相匹配规格的栓塞微球。目前的文献中鲜少有200μm以上的天然高分子聚合物栓塞微球。
在栓塞微球的研究领域,微球的制备材料有壳聚糖、藻酸盐、丝素、明胶、聚丙烯酸,或者两种不同材料如壳聚糖和丝素蛋白、壳聚糖和明胶等进行复合制备,制备技术有乳化交联法、膜乳化技术、静电分化成球技术。目前的文献中关于栓塞微球的研究大多采用单一方法制备微球,微球的尺寸偏小,很少有大于300微米的栓塞微球。而临床上有各种类型各种大小的肿瘤,部分肿瘤血管较大,特别是对于近端栓塞均需要大尺寸微球。但是目前的微球制备方法在制备大尺寸微球上都存在一定的难度。特别是不同的制备方法形成的微球尺寸有限,比如乳化交联法形成的微球尺寸大多在100μm左右,最小可到1μm左右,但是最大很难超过200μm;离子凝胶法制备的微球尺寸最小可到纳米级,但是最大不超过100μm,静电分化法制备纳米尺寸微球有一定的优势,但是制备较大尺寸微球较难。特别是每一种制备方法制备的微球都存在一定的尺寸范围。
茶多酚是从天然植物茶叶中提取出的30多种多酚类化合物的总称,约占茶叶总重的20%-30%。茶多酚的成分有黄烷双醇、黄烷醇、黄酮等,而黄烷醇含量最高,占茶多酚总量的70%-80%。黄烷醇是由表儿茶素(EC)、表没食子儿茶素(EGC)、表儿茶素没食子酸酯(ECC)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)组成,其中EGCG含量最高,约占总含量80%左右,具有较强的活性。
茶多酚具有优异的抗菌性,且抗菌谱较广,对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、蜡样芽胞杆菌具有明显的抑菌活性,但对大肠杆菌的抑菌效果最差。其抗菌机制主要包括了三个方面:(1)损伤细菌的细胞膜。茶多酚的酚羟基能与细菌结构中的氨基、羧基结合,与细菌的细胞膜发生反应,破坏细菌的细胞结构并导致细菌细胞膜损伤,从而产生直接的抗菌作用。(2)抑制细菌脂肪酸的合成。因为脂肪酸是细菌能量的只要来源,通过破坏脂肪酸的合成,对细菌毒素的合成起到抑制作用。(3)通过抑制细菌酶的活性,起到抗菌作用。例如可干扰细菌DNA螺旋酶的功能、抑制细菌二氢叶酸还原酶和ATP合成酶的活性,从而抑制DNA复制和细菌能量的产生。茶多酚的抗菌活性与提取来源的不同,质量浓度和pH有关。有研究表明对大肠杆菌的抑菌效果随着茶多酚浓度的增加,抑菌效果更好。
因此可利用茶多酚的抗菌性,制备负载茶多酚的具有高效抗菌效果的栓塞微球,可以减轻栓塞手术中,导丝导管与人体动脉血管、组织接触可能会产生的炎症反应。
发明内容
本发明旨在提供一种天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖(TP-SF/CS)栓塞微球及其制备方法,以丝素蛋白/壳聚糖为基体材料,以壳聚糖微纳米粒为芯材,制备得到200-400μm、550-750μm两种大尺寸规格的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球,微球结构致密,多孔,球形圆整,亲水性好。
按照本发明的技术方案,所述天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球的制备方法,包括以下步骤,
S1:冰浴条件下,向茶多酚溶液与壳聚糖溶液的混合液中滴加三聚磷酸钠溶液,搅拌反应后分离,得到茶多酚-壳聚糖微纳米球;
S2:将茶多酚-壳聚糖微纳米球的水分散悬液、丝素蛋白(丝素,SF)溶液和壳聚糖(CS)溶液混匀,得到混合液I,加入茶多酚溶液,得到水相溶液;
S3:将所述水相溶液中加入到油相溶液中,加热乳化,得到混合液II;
所述油相溶液为掺杂乳化剂的液体石蜡或大豆油;
S4:冰浴条件下,向所述混合液II中滴加交联剂,滴加完成后继续反应,反应完成后洗涤、分筛、冷冻干燥,得到所述茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球。
本发明以丝素与壳聚糖复合以优化微球性能,克服了纯丝素成球性差,尤其是丝素蛋白经过溶解、成膜、干燥后脆性变大,机械强度降低,极大的限制了其实际应用范围;以及纯壳聚糖微球降解速度过慢,并且对药物的装载率低的问题。
进一步的,所述茶多酚溶液与壳聚糖溶液的混合液中的茶多酚占茶多酚和壳聚糖总重量的4-12%,优选为5-12%,进一步优选为8-11%。
进一步的,所述壳聚糖溶液的溶剂为乙酸溶液,乙酸溶液的浓度为1-2%v/v,壳聚糖溶液中壳聚糖的浓度为1-2%w/v。
具体的,壳聚糖溶液的制备如下:45-55℃条件下,将壳聚糖溶解于1-2%v/v乙酸溶液中,配置成1-2%w/v的壳聚糖溶液。
进一步的,所述三聚磷酸钠溶液的浓度为0.2-0.5%w/v。
进一步的,所述茶多酚-壳聚糖微纳米球的水分散悬液的浓度为2-3%w/v;丝素溶液的浓度为5-10wt%
进一步的,所述丝素蛋白溶液和壳聚糖溶液中丝素蛋白与壳聚糖的质量比为10:1-8:1,优选质量比为9:1。
进一步的,所述步骤S2中,加入的茶多酚溶液中的茶多酚占丝素蛋白、壳聚糖和茶多酚总质量的4-12%,优选为5-12%,进一步优选为8-11%。
进一步的,所述步骤S2中,茶多酚-壳聚糖微纳米球的水分散悬液与丝素溶液、壳聚糖溶液、茶多酚溶液的总体积比为(0.95-1.05):(0.95-1.05);优选为1:1,在一个实施例中,茶多酚-壳聚糖微纳米球的水分散悬液的体积为10mL,丝素溶液、壳聚糖溶液和茶多酚溶液的总体积为10mL。
进一步的,所述步骤S3中,水相溶液与油相溶液的体积比为3-5:6,优选为2:3。
进一步的,所述步骤S3中,加热乳化的温度为45-55℃,时间为0.6-2h。
进一步的,所述油相溶液中乳化剂的占比为0.85-1.05v/v%。
具体的,油相溶液由乳化剂(Span-80,Tween-20等)滴加到一定量的大豆油或液体石蜡中,在45-55℃的条件下搅拌20-60min得到。
进一步的,所述步骤S4中,加入交联剂的体积为混合液II体积的0.4-0.6%。
进一步的,所述交联剂为戊二醛、京尼平或EDC(1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺)。
进一步的,所述步骤S4中,洗涤为利用石油醚、丙酮以及乙醇依次进行洗涤。
本发明的另一方面提供了上述制备方法制备得到的天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球。
进一步的,所述天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球,通过分筛可得到多种尺寸规格,包括200-400μm、550-750μm。
进一步的,所述天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球的包封率超过70%。
本发明的技术方案相比现有技术具有以下优点:
载药方法上:采用两步法,以离子凝胶法制得微纳米级微球(尺寸在1μm左右,有部分纳米级微球),以此微纳米级微球为芯材,采用乳化交联法,将微球层层组装,形成尺寸范围较广的微球。在两步成球过程中茶多酚与与丝素、壳聚糖形成极强的氢健作用,被层层包裹,极大的提升了其载药能力。
微球功能上:壳聚糖本身具有一定的抗菌能力,与茶多酚的协同作用,极大的提升了复合栓塞微球的抗菌能力,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率能分别达到99.23%和99.9%;同时茶多酚与壳聚糖、丝素的氢健作用延缓了茶多酚的释放,使得栓塞微球具有高效的与长效的抗菌功能。
附图说明
图1为200-400μm不同投药量微球的SEM图:(a)为空白微球;(b)5%载药微球;(c)8%载药微球;(d)11%载药微球。
图2为550-750μm不同投药量微球的SEM图:(a)为空白微球;(b)5%载药微球;(c)8%载药微球;(d)11%载药微球。
图3为不同投药量干态微球的溶胀率。
图4为200-400μm载药微球累积释放率。
图5为550-750μm载药微球累积释放率。
图6为PBS溶液对照组以及不同投药量TP-SF/CS载药栓塞微球对大肠杆菌的抑菌率测试图片;(a)为PBS溶液对照组,(b),(c),(d),(e)分别表示茶多酚在栓塞微球中的药物添加量分别为:0;5%;8%;11%。
图7为PBS溶液以及不同投药量TP-SF/CS载药栓塞微球对金黄色葡萄球菌的抑菌率测试图片;(a)为PBS溶液对照组,(b),(c),(d),(e)分别表示茶多酚在栓塞微球中的药物添加量分别为:0;5%;8%;11%。
图8为不同壳聚糖丝素重量比情况下所得产品的SEM图,(a),(b),(c)分别为对比例2、对比例3和对比例4。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步说明,以使本领域的技术人员可以更好地理解本发明并能予以实施,但所举实施例不作为对本发明的限定。
实施例1茶多酚投药量为5%的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球的制备
第一步:制备茶多酚-壳聚糖微纳米球
(1)取一定量的壳聚糖在50℃下溶解于1%(v/v)乙酸溶液中,配置成1%(w/v)的壳聚糖溶液。
(2)将一定量的茶多酚溶解于去离子水中,配置成10wt%的茶多酚溶液,以茶多酚投药量为5%(茶多酚占茶多酚与壳聚糖总质量的5%),与(1)中壳聚糖溶液混合,搅拌0.5h,得到茶多酚-壳聚糖溶液。
(3)在冰浴条件下逐滴向茶多酚-壳聚糖溶液中加入适量(以能够充分反应为准)0.4%(w/v)的三聚磷酸钠(TPP)溶液,搅拌1h后将溶液收集离心。用去离子水冲洗两遍后,得到茶多酚-壳聚糖微纳米球。
第二步:茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球的制备
(1)蚕丝脱胶:将桑蚕生丝放入煮沸的0.5%(w/v)碳酸钠水溶液中,浴比1︰100,进行30min的脱胶处理,每10min对蚕丝搅拌1次,之后用去离子水充分洗涤。重复上述步骤3次后,放到60℃的烘箱里烘干,得到脱胶丝。
(2)丝素溶液制备:将脱胶丝于60℃下置于9.3M LiBr水溶液中溶解4-6h,过滤除杂后置于透析袋里,用去离子水连续室温透析3d,前两天每两小时换一次水,最后一天每4小时换一次,得到纯丝素蛋白溶液。烘干称重法测定丝素溶液浓度。
(3)配置水相液体:称取一定量的壳聚糖溶于1%(v/v)乙酸溶液中,制备质量分数为1%(w/v)的壳聚糖溶液;将第一步中制备得到的质量分数2%(w/v)的壳聚糖微纳米球水分散悬液,与质量分数9%(w/v)的丝素溶液和1%(w/v)壳聚糖溶液按比例(丝素壳聚糖质量比为9:1)混合,搅拌0.5h,再加入10wt%的茶多酚溶液(茶多酚投药量为5%,即加入茶多酚的质量占丝素、壳聚糖和茶多酚总质量的5%,茶多酚-壳聚糖微纳米球的水分散悬液与丝素溶液、壳聚糖溶液、茶多酚溶液的总体积比为1:1),得到水相溶液。
(4)配置油相溶液:取一定量的乳化剂(Span-80,Tween-20)滴加到一定量的大豆油中(乳化剂占比为0.96%(v/v)),在50℃的条件下搅拌30min。
(5)将水相溶液滴加到油相溶液中(体积比为2:3),使用磁力搅拌机在50℃的条件下持续乳化1h。在冰浴条件下逐滴加入一定量的12.5%(v/v)戊二醛溶液(戊二醛溶液用量为0.55%(v/v)),滴加完毕后继续反应3h。利用石油醚,丙酮以及乙醇依次洗涤,分筛,得到两种尺寸规格的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球(湿态)。利用冷冻干燥机对分筛得到的栓塞微球进行干燥,得到干态的两种规格的茶多酚投药量为5%的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球。
实施例2、3
在实施例1的基础上将第一步(2)以及第二步(3)中茶多酚投药量分别调整为8%和11%,分别得到茶多酚投药量为8%和11%的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球。
对比例1
在实施例1的基础上不加入茶多酚,得到丝素/壳聚糖栓塞微球(空白微球)。
对比例2
在实施例1的基础上,第二步(3)中不加入壳聚糖溶液。
对比例3
在实施例1的基础上,第二步(3)中调整丝素壳聚糖质量比为8:2。
对比例4
在实施例1的基础上,第二步(3)中调整丝素壳聚糖质量比为7:3。
结果分析
1、尺寸变化
湿态下的栓塞微球通过冷冻干燥后变为干态微球的过程中,微球尺寸会有明显的减小,外观形态相应的变得不太圆整(图1和2),而且球形表面会呈现明显的多孔状。干湿两态下的微球粒径变化如表1和表2所示。
表1干湿两态下(200-400μm)尺寸规格微球的平均粒径
表2干湿两态下(550-750μm)尺寸规格微球的平均粒径
2、溶胀率
溶胀作用是指干态微球在液体中完全吸收水分后,自身体积或重量发生变化的作用。良好的溶胀能力与内部结构有着非常密切的关系,内部结构过于松散或者过于紧密,结合水的能力就会越差。将不同投药量的栓塞微球放在60℃的烘箱中烘干至恒重,称量后记为W1,每组3个平行样。将栓塞微球放在去离子水中,使其完全被去离子水浸没。浸泡12h后用吸水纸将栓塞微球表面的水份吸出,称量后记为W2,并按照下面的公式计算栓塞微球的溶胀率:
式中,W为溶胀率(%),W1为干燥后重量(mg),W2为吸水后重量(mg)。实施例中不同投药量干态微球的溶胀率如图3所示。
3、缓释性能
茶多酚标准曲线的绘制
(1)酒石酸亚铁/PBS缓冲溶液的配制:称取0.1g硫酸亚铁和0.5g酒石酸钾钠,将其溶解在100mL的去离子水里,获得酒石酸亚铁溶液;根据PBS︰酒石酸亚铁︰去离子水=3︰1︰1的体积比配置酒石酸亚铁/PBS缓冲溶液。
(2)标准曲线的建立:称取0.25g茶多酚于50mL的定容瓶中,用酒石酸亚铁/PBS溶液溶解并定容到刻度线作为母液,然后逐级稀释成质量浓度分别为10μg/mL,20μg/mL,30μg/mL,40μg/mL,50μg/mL,60μg/mL,70μg/mL,80μg/mL的酒石酸亚铁/PBS溶液,用于后续测量茶多酚浓度与吸光度关系曲线的标准溶液。然后再次配置酒石酸亚铁/PBS溶液,作为对照组。使用紫外-可见分光光度计,分别测试上述配置溶液在540nm波长下的吸光度值。最终得到茶多酚浓度与吸光度之间的关系,并画出标准线性方程。
(3)包封率与载药率测试
制备茶多酚-丝素/壳聚糖载药栓塞微球时,分别收集两步操作中的清洗废液,取上清液0.5mL,根据PBS︰酒石酸亚铁︰上清液=3︰1︰1的体积比配置混合溶液,利用紫外分光光度计测量其在540nm处的吸光度,以不添加茶多酚的空白栓塞微球的废液为校零样。所测吸光度值代入茶多酚标准曲线方程求其浓度,再计算收集的废液的体积,最终计算出上清液中茶多酚的含量。利用所添加的茶多酚量减去废液中茶多酚的含量,就可得到载药微球中的茶多酚含量。并对冷冻干燥后的载药微球立即称重并记录。按照以下公式可算出载药微球的载药率和包封率:
式中,Mt为所添加的茶多酚量(mg);Mw为上清液中茶多酚的含量(mg);Mm为栓塞微球的质量(mg)。测试结果如表3所示。
表3茶多酚占比对微球包封率、载药率的影响
(4)药物缓释性能测试
分别称取30mg三种投药量下两种尺寸的载药微球放入透析袋中并使其悬浮于离心管中,并向离心管中分别加入12mL的酒石酸亚铁/PBS缓释液,放入电热恒温震荡水槽中振荡,水温设定为37℃,以水平式80r/min-1摇动,在设置的时间点2h,5h,10h,22h,之后就每隔24h取出3mL缓释液,并测其吸光度值,同时补充添加新的3mL酒石酸亚铁/PBS溶液。利用茶多酚标准曲线测定溶液中茶多酚的释放量,计算载药微球的茶多酚累积释放率。
式中,M为所投的茶多酚量(μg);λi为第i个时间点所测定的离心管中茶多酚浓度(μg/mL);n为测试次数。计算结果如图4图5所示。
4、抗菌性能
采用震荡法测定TP-SF/CS载药栓塞微球的抗菌性能。抗菌测试选择的菌种是大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,其中选用空白PBS溶液作为对照组。试验样品抑菌活性的测定采用抑菌率进行评价。具体的实验操作步骤如下:
第一天:样品准备以及细菌悬液培养
(1)将制备的空白SF/CS栓塞微球以及3种不同投药量的TP-SF/CS载药栓塞微球,称重并用玻璃瓶分装好备用,分别用于测试对于大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌性。
(2)配置80mL的营养肉汤灭菌备用。
第二天:样品与细菌共培养
(1)灭菌处理:将营养肉汤,PBS缓冲液,棕瓶,10mL枪头,1mL枪头以及10个100mL锥形瓶放入高压锅灭菌。并提前对洁净工作台进行紫外灭菌处理20min。
(2)细菌的稀释:细菌在经过4次稀释流程后,其活菌浓度在3×105cfu/mL-4×105cfu/mL。
(3)样本接触细菌:将空白对照样及测试样分别放入灭菌后的装有70mL PBS缓冲液的锥形瓶中,再分别接种金黄色葡萄球菌和大肠杆菌各5ml,震荡摇匀。然后将这10个锥形瓶放入24℃恒温震荡箱中震荡18h待用。
第三天:倒平皿
(1)制备营养琼脂:称量33g营养琼脂粉末放入1L的去离子水中,并在锅中不停的用玻璃棒搅拌煮沸后,倒入锥形瓶中备用。
(2)制备PBS缓冲液:称量4.2g PBS粉末,搅拌溶解在1L的去离子水中备用。
(3)灭菌处理:取棕瓶40个,10mL以及1mL枪头若干,锥形瓶以及制备好的营养琼脂和PBS缓冲液在121℃,103KPa条件下高压锅中灭菌30min。并提前对洁净工作台紫外灭菌20min。
(4)倒平板:细菌和样品混合液在震荡箱中培养18h后,再依次稀释4次后,会获得四个浓度的溶液。分别对四个浓度溶液,取1mL放入灭菌培养皿中,并加入15-20mL琼脂,将培养皿底部覆盖住,摇匀。每个浓度设置2个平行样。等待琼脂凝固后,将所有的培养皿放入37℃恒温箱中培养。金黄色葡萄球菌需培养36-48h,大肠杆菌则培养24h即可。
第四天:菌落记数
将所有培养皿拿出,拍照,并观察不同浓度的培养皿上细菌生长情况。发现当细菌浓度稀释至104时,其对细菌的抗菌效果差异是最明显的,可用此浓度的培养皿上的细菌数对抑菌率进行计算。
抑菌率的计算公式为
式中,X为抑菌率,%;W为标准空白试样培养皿中平均菌落数;Q为不同投药量的TP-SF/CS载药栓塞微球培养皿上的平均菌落数。在本实验中规定一个菌斑作为一个菌落。而且必须使两个平行培养皿的菌落数误差范围不超过15%时,才认为此数据有效。不同的菌种,其抑菌效果评判标准不一,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌率不低于70%时,试验样品才具有抗菌作用。
抗菌试验如图6和图7所示,计算抑菌率可得投药量为5%,8%,11%的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球对大肠杆菌抑菌率分别为80.77±0.9%,93.85±1.1%,99.23±0.6%,对金黄色葡萄球菌的抑菌率分别为80.71±1.7%,95±1.5%,99.9±0.3%。结果表明5%-11%的投药量时均具有较好的抗菌效果,且抗菌效果随着投药量的增加而提升。
5、微球形态
如图8所示,对比例2中,纯丝素的工艺条件下,无法制备得到微球;相比于实施例1,调整丝素壳聚糖质量比,提高壳聚糖占比,微球形态变得不够圆整。
显然,上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例,并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说,在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引申出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。
Claims (10)
1.一种天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球的制备方法,其特征在于,包括以下步骤,
S1:冰浴条件下,向茶多酚溶液与壳聚糖溶液的混合液中滴加三聚磷酸钠溶液,搅拌反应后分离,得到茶多酚-壳聚糖微纳米球;
S2:将茶多酚-壳聚糖微纳米球的水分散悬液、丝素蛋白溶液和壳聚糖溶液混匀,得到混合液I,加入茶多酚溶液,得到水相溶液;
S3:将所述水相溶液中加入到油相溶液中,加热乳化,得到混合液II;
所述油相溶液为掺杂乳化剂的液体石蜡或大豆油;
S4:冰浴条件下,向所述混合液II中滴加交联剂,滴加完成后继续反应,反应完成后洗涤、分筛、冷冻干燥,得到所述茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球。
2.如权利要求1所述的天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球的制备方法,其特征在于,所述茶多酚溶液与壳聚糖溶液的混合液中的茶多酚占茶多酚和壳聚糖总重量的4-12%。
3.如权利要求1所述的天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球的制备方法,其特征在于,所述步骤S2中,丝素蛋白溶液中的丝素蛋白与壳聚糖溶液中的壳聚糖的质量比为10:1-8:1。
4.如权利要求1所述的天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球的制备方法,其特征在于,所述步骤S2中,加入茶多酚溶液中的茶多酚占丝素蛋白、壳聚糖和茶多酚总质量的4-12%。
5.如权利要求1所述的天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球的制备方法,其特征在于,所述步骤S3中,水相溶液与油相溶液的体积比为3-5:6。
6.如权利要求1所述的天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球的制备方法,其特征在于,所述步骤S3中,加热乳化的温度为45-55℃,时间为0.6-2h。
7.如权利要求1所述的天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球的制备方法,其特征在于,所述油相溶液中乳化剂的占比为0.85-1.05v/v%。
8.如权利要求1所述的天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球的制备方法,其特征在于,所述步骤S4中,加入交联剂的体积为混合液II体积的0.4-0.6%。
9.如权利要求1或8所述的天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球的制备方法,其特征在于,所述交联剂为戊二醛、京尼平或EDC。
10.一种权利要求1-9中任一项所述的制备方法制备得到的天然抗菌的茶多酚-丝素/壳聚糖栓塞微球。
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