CN114736941A - 透明质酸钠发酵物，含其皮肤外用剂及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种透明质酸钠发酵物，含其皮肤外用剂及其制备方法和应用。透明质酸钠发酵物的制备方法包括如下步骤：乳酸菌接种到发酵底物中，经发酵培养，灭菌，即可；其中，发酵底物包括透明质酸钠。本发明制得的透明质酸钠发酵物，有效降低其原料透明质酸钠的粘弹性，提高皮肤体验感，补水和锁水性能也明显优于市售的玻尿酸多效修护精华液。
Description
技术领域
本发明属于发酵技术领域，尤其涉及一种透明质酸钠发酵物，含其皮肤外用剂及其制备方法和应用。
背景技术
透明质酸钠是构成人体细胞间质、眼玻璃体、关节滑液等结缔组织的主要成分，在体内发挥保水、维持细胞外空间、调节渗透压、润滑、促进细胞修复等重要生理功能。透明质酸钠分子中含有大量的羧基和羟基，在水溶液中形成分子内和分子间的氢键，这使其具有强大的保水作用。
皮肤的湿润水平与透明质酸钠含量密切相关。随着年龄的增长，皮肤中透明质酸钠含量会下降，使皮肤保水功能减弱，产生皱纹。透明质酸钠水溶液涂于皮肤表面可形成一层保湿透气膜，保持皮肤滋润亮泽，化妆品中常作为保湿剂。相比其他保湿剂，透明质酸钠受外界环境影响较小，所以常作为保湿抗皱的化妆品原料。
但透明质酸钠是一种高分子聚合物，作为皮肤的外用原料，在较高浓度时，由于其分子间作用形成的复杂的三级网状结构，其水溶液又具有显著的粘弹性，整体的皮肤体验感降低，因此限制了透明质酸钠在皮肤外用剂领域的用量。
因此，本领域亟需开发一种可降低透明质酸钠粘弹性，使制得的产品具有理想肤感效果，且不影响透明质酸钠功效，可提高透明质酸钠在皮肤外用剂中含量的制备方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是克服现有皮肤外用剂中透明质酸钠含量较低，当透明质酸钠含量高时，其分子间作用形成复杂的三级网状结构，使水溶液具有显著的粘弹性，导致皮肤体验感差，限制透明质酸钠在皮肤外用剂领域用量等缺陷而提供一种透明质酸钠发酵物，含其皮肤外用剂及其制备方法和应用。本发明制得的透明质酸钠发酵物，有效降低其原料透明质酸钠的粘弹性，提高皮肤体验感，补水和锁水性能也明显优于市售的玻尿酸多效修护精华液。
本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：
本发明提供一种透明质酸钠发酵物的制备方法，具体包括如下步骤：乳酸菌接种到发酵底物中，经发酵培养，灭菌，即可；其中，所述发酵底物包括透明质酸钠。
一些实施例中，所述乳酸菌可包括德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillusdellbruechii subsp.bulgaricus)，较佳地包括中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的保藏编号为CGMCC No.1.16075的德氏乳杆菌保加利亚亚种。
一些实施例中，所述乳酸菌可按照本领域常规以乳酸菌菌液的形式添加，所述乳酸菌菌液中所述乳酸菌的浓度可为本领域常规，较佳地为107～109CFU/mL，更佳地为107～108CFU/mL。
其中，所述乳酸菌菌液的制备方法可为本领域常规，较佳地包括如下步骤：所述乳酸菌接种于pH值为6.8～7.2的MRS肉汤培养基中，经发酵培养，即可。所述发酵培养的温度可为35～40℃，较佳地为37℃。
一些实施例中，单位质量所述发酵底物中接种的所述乳酸菌的数量可为2×105～5×107CFU，较佳地为2×105～5×106CFU。
一些实施例中，所述透明质酸钠占所述发酵底物的质量百分数可为0.5％～1％，较佳地为0.5％。
一些实施例中，所述透明质酸钠可为焦点生物医药有限公司生产的透明质酸钠。
一些实施例中，所述透明质酸钠的数均分子量可为4～80万，较佳地为40～60万，更佳地为50万。
一些实施例中，所述发酵底物中还可进一步包括水。
一较佳实施例中，所述发酵底物由0.5wt％～1wt％的所述透明质酸钠和余量的水组成。
一更佳实施例中，所述发酵底物由0.5wt％～0.8wt％的所述透明质酸钠和余量的水组成。
一些实施例中，所述发酵底物在使用前还可进一步包括灭菌的操作。
其中，所述灭菌的条件和方法可为本领域该类操作常规的条件和方法，一般可为热灭菌法。
所述灭菌的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为75～95℃，更佳地为80～90℃。
所述灭菌的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为20～30min。
一些实施例中，所述发酵培养的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为6～9h，更佳地为6～8h。
一些实施例中，所述发酵培养的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为36～40℃，更佳地为36～38℃。
一些实施例中，所述发酵培养的操作后还可进一步包括过滤收集滤液的操作。
其中，所述过滤可按照本领域常规在过滤器中进行。所述过滤器的孔径大小可为本领域常规，一般可为0.4～0.6μm，较佳地为0.45μm。
一些实施例中，所述灭菌的条件和方法可为本领域常规，一般可为热灭菌法。
所述灭菌的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为75～95℃，更佳地为80～90℃。
所述灭菌的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为20～30min。
一些实施例中，所述灭菌的操作后还可进一步包括与防腐剂混合的操作。
其中，所述混合的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为65～80℃，更佳地为70～75℃。
其中，所述防腐剂的种类可为本领域常规，较佳地包括1,2-己二醇和/或对羟基苯乙酮。
当所述防腐剂包括对羟基苯乙酮和1,2-己二醇时，所述对羟基苯乙酮占所述灭菌后制得物料的质量百分数可为0.3％～0.5％，所述1,2-己二醇占所述灭菌后制得物料的质量百分数可为0.5％～1％；较佳地，所述对羟基苯乙酮占所述灭菌后制得物料的质量百分数为0.5％，所述1,2-己二醇占所述灭菌后制得物料的质量百分数为0.5％。
本发明还提供一种透明质酸钠发酵物，其由如上所述的透明质酸钠发酵物的制备方法制得。
本发明还提供一种如上所述的透明质酸钠发酵物作为产品、产品添加剂或产品基底在制备皮肤外用剂中的应用。
一些实施例中，所述透明质酸钠发酵物可作为所述皮肤外用剂中的保湿活性成分。
本发明还提供一种皮肤外用剂，其包括如上所述的透明质酸钠发酵物。
一些实施例中，所述皮肤外用剂可按照本领域常规包括且不限于面膜、精华或爽肤水。
一些实施例中，所述透明质酸钠发酵物占所述皮肤外用剂的质量百分比可为5％～100％，较佳地为40％～100％。
一较佳实施例中，所述的透明质酸钠发酵物可包括透明质酸钠发酵物1、透明质酸钠发酵物2和透明质酸钠发酵物3；
其中，所述透明质酸钠发酵物1的发酵底物包括数均分子量为3～8万的透明质酸钠；所述透明质酸钠发酵物1占所述皮肤外用剂的质量百分比为5wt％～25wt％；所述透明质酸钠发酵物2的发酵底物包括数均分子量为40～60万的透明质酸钠；所述透明质酸钠发酵物2占所述皮肤外用剂的质量百分比为5wt％～15wt％；所述透明质酸钠发酵物3的发酵底物包括数均分子量为70～90万的透明质酸钠；所述透明质酸钠发酵物3占所述皮肤外用剂的质量百分比为5wt％～15wt％。
较佳地，所述透明质酸钠发酵物1的发酵底物包括数均分子量为4万的透明质酸钠。
较佳地，所述透明质酸钠发酵物2的发酵底物包括数均分子量为50万的透明质酸钠。
较佳地，所述透明质酸钠发酵物3的发酵底物包括数均分子量为80万的透明质酸钠。
较佳地，所述皮肤外用剂包括20wt％所述透明质酸钠发酵物1、10wt％所述透明质酸钠发酵物2和10wt％所述透明质酸钠发酵物3。
一些实施例中，所述皮肤外用剂中还可进一步包括保湿活性成分、美白活性成分、抗炎活性成分、抗敏活性成分、抗氧化活性成分、螯合剂和防腐剂中的任意一种或多种。
其中，所述保湿活性成分可包括丁二醇。所述保湿活性成分占所述皮肤外用剂的质量百分比可为5％～7％。
其中，所述螯合剂可包括EDTA-2Na·2H2O。所述螯合剂占所述皮肤外用剂的质量百分比可为0.005％～0.02％，较佳地为0.01％。
其中，所述防腐剂可包括1,2-己二醇和/或对羟基苯乙酮。所述防腐剂占所述皮肤外用剂的质量百分比可为0.5％～1.5％，较佳地为1％。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。
本发明所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：本发明制得的透明质酸钠发酵物，有效降低其原料透明质酸钠的粘弹性，提高皮肤体验感，补水和锁水性能也明显优于市售的玻尿酸多效修护精华液。
附图说明
本公开可以通过参考下文中结合附图所给出的描述而得到更好的理解。所述附图连同下面的详细说明一起包含在本说明书中并且形成本说明书的一部分，而且用来进一步举例说明本公开的优选实施例和解释本公开的原理和优点。其中：
图1为本发明实施例1制得产品的主观肤感评估图；
图2为本发明实施例2制得产品的主观肤感评估图；
图3为本发明实施例3制得产品的主观肤感评估图；
图4为本发明实施例1制得产品和对比例1制得产品主观肤感评估对比图；
图5为与对比例1制得产品相比，志愿者对实施例1制得产品喜好程度提升百分比；
图6为本发明实施例2制得产品和对比例2制得产品主观肤感评估对比图；
图7为与对比例2制得产品相比，志愿者对实施例2制得产品喜好程度提升百分比；
图8为本发明实施例3制得产品和对比例3制得产品主观肤感评估对比图；
图9为与对比例3制得产品相比，志愿者对实施例3制得产品喜好程度提升百分比；
图10为本发明实施例2制得产品和对比例4制得产品主观肤感评估对比图；
图11为与对比例4制得产品相比，志愿者对实施例2制得产品喜好程度提升百分比；
图12为使用本发明实施例4制得产品和使用对比例5制得产品后，皮肤水含量随时间变化对比图；
图13为使用本发明实施例4制得产品和使用对比例5制得产品后，皮肤水含量变化百分比随时间变化对比图；
图14为使用本发明实施例4制得产品和使用对比例5制得产品后，经皮水分流失量随时间变化对比图；
图15为使用本发明实施例4制得产品和使用对比例5制得产品后，经皮水分流失量变化百分比随时间变化对比图。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中，乳酸菌为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的保藏编号为CGMCC No.1.16075的德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus dellbruechiisubsp.bulgaricus)。
下述实施例中使用的透明质酸钠购自焦点生物医药有限公司。
下述实施例中，乳酸菌菌液的制备方法包括如下步骤：
(1)菌种的活化：将保藏编号为CGMCC No.1.16075的德氏乳杆菌保加利亚亚种接种于MRS肉汤固体培养基中进行划线活化，于37℃培养箱中培养72h，获得单菌落；MRS肉汤液体培养基的配方为：肉汁10g，蛋白胨5g，酵母粉3g，D(+)-葡萄糖5g，淀粉1g，NaCl 5g，NaAc 3g，L-半胱氨酸盐酸盐0.5g，蒸馏水1.0L；MRS肉汤液体培养基中添加琼脂粉，琼脂粉占MRS肉汤液体培养基的质量百分比为1.5％。
(2)菌种的扩大培养：将步骤(1)获得的单菌落接种至100mL，pH值为7的MRS肉汤液体培养基中，在37℃培养箱中培养48h，得到乳酸菌菌液，浓度为107CFU/mL。
实施例1
发酵底物的制备方法包括如下步骤：取适量分子量为4W的透明质酸钠加入水中，搅拌溶解后在温度为85℃条件下灭菌20min，得到透明质酸钠发酵底物；透明质酸钠发酵底物中透明质酸钠和水的质量比为5：1000；
以上述方法制得的浓度为107CFU/mL的乳酸菌菌液和透明质酸钠发酵底物为原料，制备透明质酸钠发酵物，具体包括如下步骤：将10g乳酸菌菌液接种到300g透明质酸钠发酵底物中，在温度为37℃，静置条件下发酵培养6小时；制得的物料转移到过滤器中，在孔径0.22微米滤膜中过滤，收集滤液，滤液在85℃的条件下灭菌30min；灭菌后，降温，在70℃条件下与防腐剂混合，防腐剂中包括1，2-己二醇和对羟基苯乙酮，对羟基苯乙酮占灭菌后制得物料的质量百分数为0.5％，1,2-己二醇占灭菌后制得物料的质量百分数为0.5％，制得透明质酸钠发酵物。
实施例2
与实施例1相比，区别仅在于将分子量为4万的透明质酸钠替换为等量的分子量为50万的透明质酸钠，其他条件参数同实施例1，制得透明质酸钠发酵物。
实施例3
与实施例1相比，区别仅在于将分子量为4万的透明质酸钠替换为等量的分子量为80万透明质酸钠，其他条件参数同实施例1，制得透明质酸钠发酵物。
实施例4
以上述实施例1～3制得的透明质酸钠发酵物为原料配置皮肤外用剂，皮肤外用剂包括如下质量百分比的各组分：20％实施例1制得的透明质酸钠发酵物、10％实施例2制得的透明质酸钠发酵物、10％实施例3制得的透明质酸钠发酵物、51.99％水、7％丁二醇、0.5％的1,2-己二醇、0.5％对羟基苯乙酮和0.01％EDTA-2Na·2H2O。
对比例1
取适量分子量为4万的透明质酸钠加入水中，在温度为85℃的条件下灭菌20min，灭菌后转移到孔径为0.45μm的过滤器中进行过滤，再于温度为85℃的条件下进行二次灭菌30min；二次灭菌后，降温，得到透明质酸钠发酵底物，不进行后续发酵处理；透明质酸钠发酵底物中透明质酸钠和水的质量比为5：1000。
对比例2
与对比例1相比，区别仅在于将分子量为4万的透明质酸钠替换为分子量为50万的透明质酸钠，其他条件参数同对比例1。
对比例3
与对比例1相比，区别仅在于将分子量为4万的透明质酸钠替换为分子量为80万的透明质酸钠，其他条件参数同对比例1。
对比例4
与实施例2相比，区别仅在于发酵菌种不同，将乳酸菌菌液替换为等量和等浓度的酵母菌菌液，其中，酵母菌为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的保藏编号为CGMCC No.2.3857的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，发酵培养的温度为25℃，其他条件参数同实施例2。
对比例5
市售的玻尿酸多效修护精华液，其成分包括水、1，2-戊二醇、甘油、透明质酸、透明质酸钠、马齿苋(PORTULACA OLERACEA)提取物、丁二醇和EDTA二钠。
效果实施例1
严格按照《化妆品接触性皮炎诊断标准及处理原则》要求，选择受试对象，皮肤的待测部位出现瘢痕、鲜红斑痣等影响结果判定的受试者、体质高度敏感者均不能参与试验。本试验选择合适的志愿者38人，年龄范围在18～60岁随机选择。
志愿者测试前48小时内未用过保湿滋润型护肤品。检测前用洗面奶清洗双侧前臂，静息30min。取实施例1～3中产品1mL，使用次数1次，志愿者涂抹于双侧前臂内侧。初次使用实施例1～3制得透明质酸钠发酵物后，志愿者将选择使用产品的等级，根据体验感按照好、一般、不好三个等级进行分类，完成表格填写，并统计各等级的人数及人数占比，结果见表1和图1～3。
表1
结果见表1和图1～3，综合涂抹手感、吸收速度、肌肤感受、产品稠度、产品粘性、产品可涂抹性分布等级，实施例1、实施例2、实施例3制得的透明质酸钠发酵物有较好的体验肤感，且实施例1和实施例2制得的透明质酸钠发酵物的综合肤感最佳。
效果实施例2
严格按照《化妆品接触性皮炎诊断标准及处理原则》要求，选择受试对象，皮肤的待测部位出现瘢痕、鲜红斑痣等影响结果判定的受试者、体质高度敏感者均不能参与试验。本试验选择合适的志愿者38人，年龄范围在18～60岁随机选择。
38名符合条件的志愿者参加测试。测试前48小时内未用过保湿滋润型护肤品。检测前用洗面奶清洗双侧前臂，静息30min。取实施例1及对比例1制得的产品1mL，使用次数1次，志愿者涂抹于双侧前臂内侧。使用之后，各项对比后，选择主观感觉较优的产品，完成表格填写，统计各组人数及人数所占百分比；并计算实施例1与对比例1相比，主观感觉较优人数提升百分比；提升百分比＝(选择实施例1产品人数-选择对比例1产品人数)/38×100％；结果见表2和图4～5；
同理，志愿者对实施例2和对比例2制得产品的效果进行比较，以及对实施例3和对比例3制得产品的效果进行比较，比较结果分别见表3～4和图6～9。
表2
表3
表4
结果表明，与对比例1相比，实施例1制得的产品涂抹手感、肌肤感受和产品粘性均有改善。与对比例2相比，实施例2制得产品的涂抹手感、吸收速度、肌肤感受、产品粘性和产品可涂抹性方面均有改善。与对比例3相比，实施例3制得产品涂抹手感、吸收速度、肌肤感受和产品可涂抹性方面均有改善，肤感提升最高的方面为产品可涂抹性。
综合表明，实施例1、实施例2和实施例3产品均具有改善肤感的作用，且实施例2制得产品的改善程度最显著。
效果实施例3
严格按照《化妆品接触性皮炎诊断标准及处理原则》要求，选择受试对象，皮肤的待测部位出现瘢痕、鲜红斑痣等影响结果判定的受试者、体质高度敏感者均不能参与试验。本试验选择合适的志愿者38人，年龄范围在18～60岁随机选择。
38名符合条件的志愿者参加测试。测试前48小时内未用过保湿滋润型护肤品。检测前用洗面奶清洗双侧前臂，静息30min。取实施例2及对比例4制得的产品1mL，使用次数1次，志愿者涂抹于双侧前臂内侧，使用之后，各项对比后，选择主观感觉较优的产品，完成表格填写，统计各组人数及人数所占百分比，并计算实施例2与对比例4相比主观感觉较优人数提升百分比；提升百分比＝(选择实施例2产品人数-选择对比例4产品人数)/38×100％；结果见表5和图10～11；
表5
结果表明，与对比例4制得产品相比，实施例2制得产品的肤感体验更佳。涂抹手感、吸收速度、肌肤感受、产品粘性和产品可涂抹性方面肤感均有提升，其中，涂抹手感和肌肤感受改善的程度最显著。
效果实施例4
严格按照《化妆品接触性皮炎诊断标准及处理原则》要求，选择受试对象，皮肤的待测部位出现瘢痕、鲜红斑痣等影响结果判定的受试者、体质高度敏感者均不能参与试验。本试验选择合适的志愿者38人，年龄范围在18～60岁随机选择。
38名符合条件的志愿者参加测试。测试前48小时内未用过保湿滋润型护肤品。在测试全过程中不能离开工作室，测试部位保持暴露无遮盖。如果有任何过敏及不适情况，立即报告，停止测试，用大量清水清洗测试部位。
测试场所无光线直射、无风，室温22～24℃，湿度40％～60％。
检测前用洗面奶清洗双侧前臂，静息30min，取受试者双侧前臂内侧用记号笔画出面积为3.5×3.5cm正常皮肤。依次测量在使用前的皮肤水分含量及经皮水分流失量(TWEL)。
将实施例4和对比例5中产品面膜分别剪成3×3cm大小，分别贴在前臂相应标记处，15min后取下，轻轻用化妆棉沾干测试部位未干的实施例4产品或对比例5产品，并开始计时。分别在5min、20min、60min时测试2个部位角质层含水量及经皮水分流失量(TWEL)，每个部位测量3次取平均值，并计算皮肤含水量变化百分比和经皮水分流失量变化百分比，结果见表6和图12～15。
表6
图12、图13所示，在使用实施例4和对比例5制得产品之后，使用者的皮肤含水量变化趋势一致，在5min后均达到最高值，之后随着时间的延长趋于平缓。实施例4和对比例5产品使用后，皮肤含水量变化百分比在测定过程中均大于0，显示两者产品均可提高皮肤的含水量，但使用实施例4制得产品之后，皮肤含水量和皮肤含水量变化百分比均高于对比例5制得的产品，表明实施例4具有显著提高皮肤水含量的作用。
图14所示，对比例5制得产品在使用后5min时与使用前相比经皮水分流失量具有显著性上升，实施例4则无明显变化。与对比例5相比，实施例4产品使用之后，经皮水分流失量要低，且在使用后20min和60min时与使用前相比具有显著性下降。图15所示，实施例4经皮水分流失量变化百分比小于0。结果表明，实施例4制得的透明质酸钠发酵物具有显著降低经皮水分流失量的作用。
Claims (10)
1.一种透明质酸钠发酵物的制备方法，其特征在于，具体包括如下步骤：乳酸菌接种到发酵底物中，经发酵培养，灭菌，即可；其中，所述发酵底物包括透明质酸钠。
2.如权利要求1所述的透明质酸钠发酵物的制备方法，其特征在于，所述乳酸菌包括德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus dellbruechii subsp.bulgaricus)，较佳地包括中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏的保藏编号为CGMCC No.1.16075的德氏乳杆菌保加利亚亚种；
和/或，所述乳酸菌以乳酸菌菌液的形式添加，所述乳酸菌菌液中所述乳酸菌的浓度为107～109CFU/mL，较佳地为107～108CFU/mL；
和/或，单位质量所述发酵底物中接种的所述乳酸菌的数量为2×105～5×107CFU，较佳地为2×105～5×106CFU；
和/或，所述透明质酸钠占所述发酵底物的质量百分数为0.5％～1％；
和/或，所述透明质酸钠的数均分子量为4～80万，较佳地为40～60万，更佳地为50万；
和/或，所述发酵底物中还进一步包括水。
3.如权利要求1所述的透明质酸钠发酵物的制备方法，其特征在于，所述发酵底物在使用前还进一步包括灭菌的操作；
较佳地，所述灭菌的方法为热灭菌法；
较佳地，所述灭菌的温度为75～95℃，更佳地为80～90℃；
较佳地，所述灭菌的时间为20～30min。
4.如权利要求1所述的透明质酸钠发酵物的制备方法，其特征在于，所述灭菌的操作后还进一步包括与防腐剂混合的操作；
较佳地，所述混合的温度为65～80℃，更佳地为70～75℃；
较佳地，所述防腐剂包括1,2-己二醇和/或对羟基苯乙酮；当所述防腐剂包括对羟基苯乙酮和1,2-己二醇时，所述对羟基苯乙酮占所述灭菌后制得物料的质量百分数为0.3％～0.5％，所述1,2-己二醇占所述灭菌后制得物料的质量百分数为0.5％～1％；较佳地，所述对羟基苯乙酮占所述灭菌后制得物料的质量百分数为0.5％，所述1,2-己二醇占所述灭菌后制得物料的质量百分数为0.5％。
5.如权利要求1～4中任意一项所述的透明质酸钠发酵物的制备方法，其特征在于，所述发酵培养的时间为6～9h，较佳地为6～8h；
和/或，所述发酵培养的温度为36～40℃，较佳地为36～38℃；
和/或，所述发酵培养的操作后还进一步包括过滤收集滤液的操作；较佳地，所述过滤采用的过滤器的孔径为0.4～0.6μm，更佳地为0.45μm；
和/或，所述灭菌的方法为热灭菌法；较佳地，所述灭菌的温度为75～95℃，更佳地为80～90℃；较佳地，所述灭菌的时间为20～30min。
6.一种透明质酸钠发酵物，其特征在于，其由如权利要求1～5中任意一项所述的透明质酸钠发酵物的制备方法制得。
7.一种如权利要求6所述的透明质酸钠发酵物作为产品、产品添加剂或产品基底在制备皮肤外用剂中的应用；
较佳地，所述透明质酸钠发酵物作为所述皮肤外用剂中的保湿活性成分。
8.一种皮肤外用剂，其特征在于，所述皮肤外用剂包括如权利要求6所述的透明质酸钠发酵物。
9.如权利要求8所述的皮肤外用剂，其特征在于，所述皮肤外用剂包括面膜、精华或爽肤水；
和/或，所述透明质酸钠发酵物占所述皮肤外用剂的质量百分比为5％～100％，较佳地为40％～100％；
和/或，所述的透明质酸钠发酵物包括透明质酸钠发酵物1、透明质酸钠发酵物2和透明质酸钠发酵物3；其中，所述透明质酸钠发酵物1的发酵底物包括数均分子量为3～8万的透明质酸钠；所述透明质酸钠发酵物1占所述皮肤外用剂的质量百分比为5wt％～25wt％；所述透明质酸钠发酵物2的发酵底物包括数均分子量为40～60万的透明质酸钠；所述透明质酸钠发酵物2占所述皮肤外用剂的质量百分比为5wt％～15wt％；所述透明质酸钠发酵物3的发酵底物包括数均分子量为70～90万的透明质酸钠；所述透明质酸钠发酵物3占所述皮肤外用剂的质量百分比为5wt％～15wt％。
10.如权利要求8或9所述的皮肤外用剂，其特征在于，所述皮肤外用剂中还进一步包括保湿活性成分、美白活性成分、抗炎活性成分、抗敏活性成分、抗氧化活性成分、螯合剂和防腐剂中的任意一种或多种；
较佳地，所述保湿活性成分包括丁二醇；较佳地，所述保湿活性成分占所述皮肤外用剂的质量百分比为5％～7％；
较佳地，所述螯合剂包括EDTA-2Na·2H2O；较佳地，所述螯合剂占所述皮肤外用剂的质量百分比为0.005％～0.02％，更佳地为0.01％；
较佳地，所述防腐剂包括1,2-己二醇和/或对羟基苯乙酮；较佳地，所述防腐剂占所述皮肤外用剂的质量百分比为0.5％～1.5％，更佳地为1％。
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