CN114736397B

CN114736397B - 一种用于硬膜损伤修复的湿性粘合水凝胶的制备方法和应用

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Publication number: CN114736397B
Application number: CN202210384550.2A
Authority: CN
Inventors: 沈慧勇; 吴丁财; 王鹏; 蔡兆鹏; 唐友臣; 谢中瑜; 周浩; 李贺; 黄春花; 卢焰; 梁志; 黄汉文
Original assignee: Sun Yat Sen University; Eighth Affiliated Hospital of Sun Yat Sen University
Current assignee: Sun Yat Sen University; Eighth Affiliated Hospital of Sun Yat Sen University
Priority date: 2022-04-13
Filing date: 2022-04-13
Publication date: 2023-01-13
Anticipated expiration: 2042-04-13
Also published as: CN114736397A

Abstract

本发明属于生物医用材料技术领域，具体涉及一种用于硬膜损伤修复的湿性粘合水凝胶的制备方法和应用。该水凝胶材料包括丙烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酰胺、交联剂以及光引发剂(还可包括丙烯酸N‑琥珀酰亚胺酯)前体组分，并且由上述组分组成混合液后经光引发自由基聚合反应而制备得到。该体系中，丙烯酸和丙烯酸N‑琥珀酰亚胺酯提供粘附力；丙烯酸甲酯的疏水作用加强其在湿性环境下的粘附和抗溶胀能力。此外，还可以对该水凝胶材料进行壳寡糖抗粘附改性处理，减轻术后粘连，总之，该水凝胶可望用作湿性环境下硬膜损伤修复材料，具有极大的临床应用价值。

Description

一种用于硬膜损伤修复的湿性粘合水凝胶的制备方法和应用

技术领域

本发明属于生物医用材料技术领域，具体涉及一种用于硬膜损伤修复的湿性粘合水凝胶的制备方法和应用。

背景技术

硬膜撕裂(Dural tear，DT)或缺损是神经外科和脊柱外科手术中经常遭遇的棘手问题，而硬脊膜撕裂导致的脑脊液漏(cerebrospinal fluid leakage,CSFL)也是脊柱手术中常见的并发症。脊柱外科手术中硬脊膜损伤的发生率为0.6％-7.4％,术后脑脊液漏的发生率为1％-17％。脑脊液漏的发生通常是由医源性因素或患者自身因素引起的。其中，医源性因素包括术前对脑脊液漏风险评估不到位、术中手术视野局限及操作不当、术后负压引流不当等；患者因素则包括硬膜与周围组织的粘连、脊柱创伤引起的硬脊膜直接损伤、脊柱肿瘤累积、硬膜需部分切除等。硬膜撕裂引起的脑脊液漏会延缓手术切口的愈合，产生神经组织崁顿及神经功能障碍，增加椎管内及颅内感染的风险等，甚至死亡。因此，硬膜撕裂后的早期修复至关重要。

对于硬膜撕裂的治疗，目前临床上常根据撕裂大小分度不同而采取不同措施，小的撕裂通常简单缝合即可，大的缺损则需要通过自体或异体组织进行修补。由于硬膜缝合手术会增加术后感染风险，因而通常还需要采用DuraSeal、CoSeal等生物胶的补充使用来预防单纯缝合术后出现的脑脊液漏问题。然而，单纯的生物胶并不能直接用于硬膜损伤的修补，特别是在硬膜损伤缺口较大的情况下。同时，现有的生物胶还存在着吸收人体体液后溶胀明显，易造成脊髓或神经根压迫的危险，以及在湿性环境下与组织粘附力过低等问题。由于临床上硬膜撕裂并不罕见，加上脊柱手术的复杂性以及硬膜撕裂会带来诸多不良的后果。因此，临床实践中，考虑到硬膜缺损的修补并不允许术者对患者的硬膜施加过大的压力以及椎管的容积有限，所以给湿性粘附材料赋予更强大更可靠的粘附性能以及更低的溶胀率是大有必要的；同时，开发抗粘附生物医学材料，减轻术后粘连也是一种常见的临床需求。可见，开发一种湿性环境下简单易用、低溶胀、一面湿性粘附一面抗粘连的双面异质多功能水凝胶直接用于硬脊膜缺损的修补，具有重大的临床应用价值。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明的首要目的是提供一种用于硬膜损伤修复的湿性粘合水凝胶。该湿性粘合水凝胶前体组分包括丙烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯、丙烯酰胺、交联剂以及光引发剂。

本发明的第二个目的是提供上述湿性粘合水凝胶的制备方法。将各组分组成的混合液经光引发自由基聚合反应后形成高粘附高分子水凝胶。该体系中，丙烯酸和丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯提供粘附力；丙烯酸甲酯的疏水作用加强其在湿性环境下的粘附和抗溶胀能力。此外，将该水凝胶的一面用壳寡糖溶液浸泡进行抗粘附改性，壳寡糖的抗粘附改性可以减轻术后粘连。

本发明的第三个目的是提供上述湿性粘合水凝胶的应用。该水凝胶可用作湿性环境下硬膜损伤修复材料，具有极大的临床应用价值。

本发明的第一个发明目的通过以下技术方案来实现：

本发明提供了一种湿性粘合水凝胶，所述湿性粘合水凝胶前体组分包括丙烯酰胺、丙烯酸、丙烯酸甲酯、光引发剂和交联剂。

优选地，所述湿性粘合水凝胶前体组分还包括丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯。

更优选地，所述湿性粘合水凝胶还包括壳寡糖处理。

丙烯酸的羧基与组织表面可以形成氢键，而氢键可以提供瞬时高效的粘附效果。丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯也可以与组织表面的氨基形成共价键而提供强大且持久的粘附效果。丙烯酸甲酯具有疏水特性可以排除界面水，从而可以作为湿性粘附材料的一种有益组分，同时也能够增强水凝胶材料的抗溶胀性。而壳寡糖带有正电荷，能够与带负电荷的丙烯酸发生电荷中和反应从而减小丙烯酸与组织间氢键的组织粘附力。

因此，本发明以丙烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酰胺、丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯为主要组分合成高粘附水凝胶，用壳寡糖对水凝胶单面进行抗粘附改性。丙烯酸和丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯提供粘附力；丙烯酸甲酯的疏水作用加强其在湿性环境下的粘附和抗溶胀能力；壳寡糖的抗粘附改性减轻术后粘连，从而开发出安全可靠、简单易用的硬膜修补材料。

优选地，按质量百分比计，所述湿性粘合水凝胶前体组分包括23.5％-30％丙烯酸、11.8％丙烯酰胺、11.7％丙烯酸甲酯、0.8％-2％丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯、0.8‰-3‰交联剂、0.3‰-1‰光引发剂。

更优选地，按质量百分比计，所述湿性粘合水凝胶前体组分包括30％丙烯酸、11.8％丙烯酰胺、11.7％丙烯酸甲酯、2％丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯、0.8‰交联剂、0.3‰光引发剂。

本发明的第二个发明目的通过以下技术方案来实现：

本发明还提供了所述湿性粘合水凝胶的制备方法，即将各组分混合均匀后在紫外光照射下通过光引发自由基聚合反应制备得到水凝胶。制得的水凝胶置于保鲜膜中密封可长期保存。

本发明还提供了所述湿性粘合水凝胶的另一种制备方法，即将各组分混合均匀后在紫外光照射下通过光引发自由基聚合反应制备得到水凝胶，随后将水凝胶剪裁成片状，将水凝胶的一面置于壳寡糖溶液中进行浸泡处理，取出后除去表面多余的壳聚糖即得。制得的水凝胶置于保鲜膜中密封可长期保存。

本发明的第三个发明目的通过以下技术方案来实现：

本发明还提供了所述的湿性粘合水凝胶在制备生物医用材料中的应用。

本发明还提供了所述的湿性粘合水凝胶在制备硬膜损伤修复材料中的应用。

优选地，所述硬膜损伤修复材料为用于硬膜损伤修复的湿性粘合补片。

优选地，所述壳寡糖溶液的浓度为0.5-0.7mol/L。进一步优选为0.6mol/L。

优选地，所述紫外光照射的时间为3-5min，照射距离为1-5cm。

优选地，浸泡的时间为1-5h。带正电荷的壳寡糖与带负电荷的丙烯酸发生中和反应从而减弱水凝胶的粘附性。壳寡糖对水凝胶一面浸泡后进行抗粘附改性，实现单面粘性水凝胶的制备。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：

本发明公开了一种用于硬膜损伤修复的湿性粘合水凝胶材料，该水凝胶材料前体组分包括丙烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酰胺、交联剂以及光引发剂(还可包括丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯)，并且由上述组分组成混合液后经光引发自由基聚合反应而制备得到。其中，丙烯酸与底物形成氢键提供瞬时粘附力，丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯使凝胶与底物表面形成共价键提供长期牢固的粘附作用，丙烯酸甲酯的疏水作用则加强水凝胶在湿性环境下的粘附和抗溶胀能力。此外，还可以对该水凝胶材料进行壳寡糖处理，带正电荷的壳寡糖与带负电荷的丙烯酸发生电荷中和，从而减弱非粘附面的粘附力，减轻硬膜损伤修补后与周围组织的粘连。因此，本发明的水凝胶材料具有低溶胀性(溶胀率低于40％)，并且在湿性环境下具有强大的硬脊膜粘附性(可承受高达150mmHg爆破压)，可用作湿性环境下硬膜损伤的修复材料，具有极大的临床应用价值。

附图说明

图1为不同水凝胶材料的剪切粘附力测试结果；

图2为水凝胶材料及传统手术封堵硬脊膜缺损后的抗爆破压测试结果；

图3为水凝胶材料的力学性能(拉伸强度、断裂伸长率)测试结果；

图4为水凝胶材料吸水溶胀后的质量变化测试结果；

图5为水凝胶材料吸水溶胀后的体积(宽度、厚度)变化测试结果；

图6为水凝胶材料用于牛硬脊膜缺损体外封堵实验结果；

图7为水凝胶材料细胞毒性测试结果。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式作进一步说明。在此需要说明的是，对于这些实施方式的说明用于帮助理解本发明，但并不构成对本发明的限定。此外，下面所描述的本发明各个实施方式中所涉及的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。

下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为可通过常规的商业途径购买得到。

实施例1一种用于硬膜损伤修复的湿性粘合水凝胶及其制备方法

按质量百分比计，该湿性粘合水凝胶前体组分包括11.8％丙烯酰胺、23.5％丙烯酸、11.7％丙烯酸甲酯、0.3‰光引发剂α酮戊二酸、0.8‰交联剂N,N'-亚甲基双丙烯酰胺，余量为去离子水。

该湿性粘合水凝胶的制备方法为：称取1.2g丙烯酰胺(11.8％)和8mg N,N'-亚甲基双丙烯酰胺(0.8‰)后，加入2.28mL丙烯酸(23.5％)、1.25mL丙烯酸甲酯(11.7％)、0.6mLα-酮戊二酸(0.3‰，由10mgα-酮戊二酸溶于2mL去离子水中制成)以及4.8mL去离子水，然后将上述混合液均匀混合并充分震荡，随后于室温下(25℃)置于紫外灯下照射3-5min(紫外灯功率为35w，照射距离为1-5cm)，通过光引发自由基聚合反应制备得到水凝胶。

实施例2一种用于硬膜损伤修复的湿性粘合水凝胶及其制备方法

按质量百分比计，该湿性粘合水凝胶前体组分包括11.8％丙烯酰胺、23.5％丙烯酸、11.7％丙烯酸甲酯、1.6％丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯、0.3‰光引发剂α酮戊二酸、0.8‰交联剂N,N'-亚甲基双丙烯酰胺，余量为去离子水。

该湿性粘合水凝胶的制备方法为：称取1.2g丙烯酰胺(11.8％)和8mg N,N'-亚甲基双丙烯酰胺(0.8‰)后，加入2.28mL丙烯酸(23.5％)、1.25mL丙烯酸甲酯(11.7％)、0.16g丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯(1.6％)、0.6mLα-酮戊二酸(0.3‰，由10mgα-酮戊二酸溶于2mL去离子水中制成)以及4.8mL去离子水，然后将上述混合液均匀混合并充分震荡，随后于室温下(25℃)置于紫外灯下照射3-5min(紫外灯功率为35w，照射距离为1-5cm)，通过光引发自由基聚合反应制备得到水凝胶。

实施例3一种用于硬膜损伤修复的湿性粘合水凝胶及其制备方法

按质量百分比计，该湿性粘合水凝胶的前体组分与实施例2相同，不同之处在于，丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯的用量为8‰。

该湿性粘合水凝胶的制备方法与实施例2相同，不同之处在于，丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯的添加量为0.08g。

实施例4一种用于硬膜损伤修复的湿性粘合水凝胶及其制备方法

按质量百分比计，该湿性粘合水凝胶的前体组分与实施例1相同，不同之处在于，丙烯酸的用量为30％。

该湿性粘合水凝胶的制备方法与实施例1相同，不同之处在于，丙烯酸的添加量为2.9mL，去离子水的添加量为4.2mL。

实施例5一种用于硬膜损伤修复的湿性粘合水凝胶及其制备方法

按质量百分比计，该湿性粘合水凝胶的前体组分与实施例2相同，不同之处在于，丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯的用量为2％，丙烯酸的用量为30％。

该湿性粘合水凝胶的制备方法与实施例2相同，不同之处在于，丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯的添加量为0.2g，丙烯酸的添加量为2.9mL，去离子水的添加量为4.2mL。

实施例6一种用于硬膜损伤修复的湿性粘合水凝胶及其制备方法

按质量百分比计，该湿性粘合水凝胶的前体组分与实施例5相同，不同之处在于，丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯的用量为1％。

该湿性粘合水凝胶的制备方法与实施例5相同，不同之处在于，丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯的添加量为0.1g。

实施例7一种用于硬膜损伤修复的单面湿性粘合水凝胶及其制备方法

按质量百分比计，该湿性粘合水凝胶的前体组分与实施例5相同，不同之处在于，该湿性粘合水凝胶还包括抗粘附改性的反应液，所述抗粘附改性的反应液为浓度为0.6mol/L的壳寡糖溶液(去离子水为溶剂)。

该湿性粘合水凝胶的制备方法与实施例5相同，不同之处在于，该制备方法还包括以下步骤：

(3)将步骤(2)中的水凝胶剪裁成片状，然后将水凝胶的一面置于壳寡糖溶液中浸泡1h(将水凝胶贴附于PMMA板上，再将水凝胶的非贴附面浸泡于壳寡糖溶液)，取出后置于去离子水中洗脱表面多余的壳聚糖即得到单面湿性粘合水凝胶(即其中一面为抗粘附改性面)。

实施例8一种用于硬膜损伤修复的单面湿性粘合水凝胶及其制备方法

按质量百分比计，该湿性粘合水凝胶的前体组分与实施例7相同。

该湿性粘合水凝胶的制备方法与实施例7相同，不同之处在于，于壳寡糖溶液中浸泡的时间为3h。

实施例9一种用于硬膜损伤修复的单面湿性粘合水凝胶及其制备方法

该湿性粘合水凝胶的制备方法与实施例7相同，不同之处在于，于壳寡糖溶液中浸泡的时间为5h。

实施例10一种用于硬膜损伤修复的单面湿性粘合水凝胶及其制备方法

按质量百分比计，该湿性粘合水凝胶的前体组分与实施例5相同，不同之处在于，丙烯酸甲酯的用量占比为0。

该湿性粘合水凝胶的制备方法与实施例5相同，不同之处在于，丙烯酸甲酯的用量为0g。

实验例1水凝胶粘附性能测试

(1)剪切试验

将水凝胶制成面积为30mm×10mm的薄片，将水凝胶的粘附面或抗粘附改性面贴附于猪皮并轻压使二者充分接触(接触面积为15mm×10mm)，等待3-5min后，将水凝胶的一端夹闭在拉力计拉伸端，并将猪皮的一端固定，拉伸速率为30mm/min，直至水凝胶和猪皮粘附面脱落时记录为拉力计最大拉伸力，并用最大拉伸力除以相应的粘附面积计算得到粘附强度。

结果如图1所示，与实施例1相比，实施例2的粘附力得到提高(10.85±1.07kPa vs15.02±1.34kPa)，说明丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯的引入为体系提供的共价键提高了组织粘附性。而同样的结论可由实施例4与实施例5的统计差异得到再次例证(12.98±0.34kPa vs18.24±1.99kPa)。与实施例1相比，实施例4的粘附力得到提升(10.85±1.07kPa vs 12.98±0.34kPa)，说明提升体系中丙烯酸的量可以提供更多瞬时粘附氢键，从而提升其组织粘附力。而通过实施例7及实施例9可以看出(5.95±0.97kPa vs 3.33±0.00kPa)，壳寡糖的抗粘附改性可以非常显著地降低水凝胶的组织粘附性，虽然壳寡糖只会以电中和方式中和掉丙烯酸提供的氢键，但由于组织不能瞬时高效的与组织粘附进而也会影响到共价键的形成，所以可见到相比实施例5，壳聚糖浸泡后的实施例7-9都出现了明显的组织粘附性的下降(18.24±1.99kPa vs 5.95±0.97kPa，4.48±1.32kPa，3.33±0.00kPa)，说明该水凝胶用于硬膜损伤修复可以避免术后粘连的问题。

(2)爆破压测试

将一定长度的牛硬脊膜固定到爆破压仪器上，然后在牛硬脊膜壁上造一直径为3mm的圆形开口模拟硬脊膜损伤。测试前，将水凝胶裁剪成为直径为15mm的圆形补片，将水凝胶的粘附面或抗粘附改性面贴附在造口的硬脊膜上。另以直接缝合缺口及筋膜缝合作为对照。在测试过程中，蠕动泵以20mm/min的速度推动注射器往爆破压仪器内注水，爆破压仪器另一端连接到压力计上，直到硬脊膜上的水凝胶或缝合口发生破裂渗漏或者与硬脊膜脱离，并及时记录爆破压力值(mmHg)，即为该水凝胶或缝合方式的最大可耐受爆破压力值。

结果如图2所示，与实施例1相比，更多氢键以及共价键的引入为实施例5提供了更强大的抗爆破压能力(26.33±5.51mmHg vs 131.67±20.11mmHg)，其抗爆破压值更是正常脑脊液压(20mmHg)的7倍之多，可以为硬脊膜缺损修补提供可靠放心的粘附效果。由实施例9可知(12.01±3.02mmHg)，抗粘附改性后，水凝胶抗粘附面的抗爆破压性能大大降低，这也从侧面印证了其具有抗术后粘连的作用。而传统的手术缝合由于存在针孔，所以并不能抵抗过高的爆破压，因此依然存在脑脊液渗漏的风险。

实验例2水凝胶机械性能测试

将水凝胶切成长条，测量水凝胶的宽度和厚度以及两端夹闭后的初始长度并输入拉伸仪，拉伸速率设置为30mm/min。待水凝胶拉伸至断裂时记录其拉伸强度以及断裂伸长率等信息。

结果如图3所示，与实施例5相比，实施例9由于壳寡糖中和原凝胶体系中的氢键，使得水凝胶的内聚力有一定程度的下降，体现在如图所示的拉伸强度的下降(0.40±0.09MPa vs 0.27±0.01MPa)以及断裂伸长率的提高(442.0±74.9％vs 705.2±41.4％)。结合前述爆破压测试数据可知，抗粘附改性引起的水凝胶内聚力的下降并不会影响到该水凝胶补片的实际临床应用。

实验例3溶胀性能测试

(1)水凝胶质量变化：

将一定质量的水凝胶(实施例10、实施例5、实施例9)置于PBS溶液中,每隔一段时间将水凝胶取出(0h,0.25h,0.5h,1h,2h,4h,8h,24h,48h)，甩干其表面水分后称取水凝胶的质量。水凝胶溶胀率的计算公式为：

SD＝(W_t-W₀)/W₀×100％

其中，SD为溶胀率(％)，W₀为水凝胶浸泡前的质量(g)，W_t为水凝胶在PBS溶液中浸泡后的质量(g)。

结果如图4所示，实施例5、实施例9在24h后基本达到溶胀平衡，溶胀率约为34％。而与之对比明显的是，由于缺少疏水组份丙烯酸甲酯，实施例10水凝胶在48h的溶胀率约为85％，且仍未达到平衡，说明疏水组分丙烯酸甲酯能有效降低材料的溶胀率。

(2)水凝胶体积(宽度、厚度)变化：

将一定大小的规则水凝胶置于PBS溶液中浸泡48h，甩干其表面水分后量取水凝胶的宽度、厚度，并计算其变化率，计算公式为：

C＝(l_t-l₀)/l₀×100％

其中，C为宽度或厚度变化率(％)，l₀为水凝胶浸泡前的宽度或厚度(mm)，l_t为水凝胶在PBS溶液中浸泡后的宽度或厚度(mm)。

结果如图5所示，水凝胶在达到溶胀平衡后，实施例5、实施例9宽度增长约11％，而厚度分别增长约21％和26％。由此结果也可以看出，其体积的变化并不明显，不存在因过度溶胀而压迫神经或脊髓的问题，这为其作为硬膜缺损补片的临床应用提供了可能。同理，实施例10水凝胶由于缺少疏水组份丙烯酸甲酯，其宽度、厚度增长率更大。

实验例4牛硬脊膜缺损体外封堵实验

实验组选用新鲜的牛硬脊膜，在两段神经根出口之间作3mm直径的圆形开口，将水凝胶裁剪成为直径为15mm的圆形补片，将水凝胶的粘附面贴附在开口的硬脊膜上，将硬脊膜封堵在长30cm、内径为15mm的透明塑料管下端口，用扎带将硬脊膜扎紧在塑料管下端口的周围以完全封闭下口。对照组(单纯模型组)的透明塑料管下端封口的硬脊膜不进行开口处理。分别往塑料管中加入20cm高的人工脑脊液溶液(124.0mM NaCl,26mM NaHCO₃,2.5mMKCl,2.0mM CaCl,1.0mM MgCl,1.25mM NaH₂PO₄,10.0mM无水葡萄糖)，观察是否有液体漏出。用生理盐水喷湿水凝胶的外表面，以维持补片的湿润状态，并记录水凝胶补片封堵硬脊膜缺口的持续效果。

结果如图6所示，该水凝胶补片封堵硬脊膜缺口3天内没有渗漏。与单纯模型组(图6A)相比，实验组(图6B)液面高度下降更小(1.1cm vs 2.3cm)。单纯模型组的液面下降考虑是由于底部硬脊膜暴露于空气中的蒸发作用引起，而实验组的液面下降更小，考虑是因为有水凝胶贴附在底部的硬脊膜表面，在封堵硬脊膜缺损的同时，也遮挡了硬脊膜从而减少了其蒸发作用。

实验例5体外生物相容性测试

(1)制备样品浸提液：

空白对照：DMEM培养基置于4℃中24h；

水凝胶浸提液：每1mL DMEM培养基加入20mg水凝胶，置于4℃中24h后取出，并用0.22μm过滤膜过滤。

(2)浸提液与细胞共培养：

将稀释好的人骨髓间充质干细胞(hBM-MSC)接种至96孔板里(接种密度为4×10³个/孔)，待细胞完全贴壁后，实验组将培养基更换为水凝胶浸提液，对照组为完全培养基，不含细胞的空白孔加入正常培养基为空白对照组。分别在1d、3d时取出孔板，用光学显微镜来观察细胞形貌，之后将孔板内的浸提液或完全培养基更换为含CCK-8试剂的完全培养基(CCK-8试剂与完全培养基体积比为1:10)，在37℃孵育1h后在450nm波长下通过酶标仪测定各组的吸光度，并通过吸光度计算细胞相对增长率：

细胞相对增长率＝(浸提液组吸光度-空白对照组吸光度)/(对照组吸光度-空白对照组吸光度)×100％。

结果如图7所示，水凝胶会对细胞活力产生一定程度的影响，但根据细胞毒性判定标准(ISO 10993-5)，细胞活力在70％以上则不具有细胞毒性。水凝胶浸提液的细胞相对增长率均在70％以上，即为合格。

以上对本发明的实施方式作了详细说明，但本发明不限于所描述的实施方式。对于本领域的技术人员而言，在不脱离本发明原理和精神的情况下，对这些实施方式进行多种变化、修改、替换和变型，仍落入本发明的保护范围内。

Claims

1.一种湿性粘合水凝胶，其特征在于，所述湿性粘合水凝胶前体组分包括丙烯酰胺、丙烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯、壳寡糖、光引发剂和交联剂；将丙烯酰胺、丙烯酸、丙烯酸甲酯、丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯、光引发剂和交联剂混合均匀后在紫外光照射下通过光引发自由基聚合反应制备得到水凝胶，随后将水凝胶剪裁成片状，将水凝胶的一面置于壳寡糖溶液中进行浸泡处理，取出后除去表面多余的壳聚糖即得湿性粘合水凝胶。

2.根据权利要求1所述的湿性粘合水凝胶，其特征在于，按质量百分比计，所述湿性粘合水凝胶前体组分包括23.5％-30％丙烯酸、11.8％丙烯酰胺、11.7％丙烯酸甲酯、0.8％-2％丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯、0.8‰-3‰交联剂、0.3‰-1‰光引发剂。

3.根据权利要求2所述的湿性粘合水凝胶，其特征在于，按质量百分比计，所述湿性粘合水凝胶前体组分包括30％丙烯酸、11.8％丙烯酰胺、11.7％丙烯酸甲酯、2％丙烯酸N-琥珀酰亚胺酯、0.8‰交联剂、0.3‰光引发剂。

4.权利要求1-3任一项所述的湿性粘合水凝胶在制备生物医用材料中的应用。

5.权利要求1-3任一项所述的湿性粘合水凝胶在制备硬膜损伤修复材料中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述硬膜损伤修复材料为用于硬膜损伤修复的湿性粘合补片。