CN114732812A - 甜橙黄酮在制备高尿酸血症产品中的应用及产品 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了甜橙黄酮在制备减轻高尿酸血症状或治疗高尿酸血症产品中的应用。发明人通过验证甜橙黄酮对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平，白细胞数目，脏器指数(脾、肝和肾)、肝脏炎症因子水平及肝肾组织病理改变，证明了甜橙黄酮对的高尿酸血症状的改善作用。
Description
技术领域
本发明涉及甜橙黄酮在医药保健领域的应用，特别涉及甜橙黄酮在制备高尿酸血症产品中的应用及产品。
背景技术
高尿酸血症是危害人类健康的一种代谢性疾病，在临床诊断时男性血清尿酸＞417μM(7mg/dL)，女性大于357μM(6mg/dL)即为高尿酸。高尿酸除了可能会引发痛风，还与心血管疾病、糖尿病、高血压、肥胖症、高脂血症、慢性肾脏病等疾病息息相关。随着生活水平的提升，“高尿酸血症”的发病率正在逐年提高，据《2021中国高尿酸及痛风趋势白皮书》中显示，我国高尿酸血症患者人数已达1.7亿，其中痛风患者超过8000万人，而且正以每年9.7％的年增长率迅速增加。因而“高尿酸血症”被称作继高血压、高血脂、高血糖“三高”之后的名副其实“第四高”，已成为严重威胁人类健康的世界性公共卫生问题。
目前，临床使用的降尿酸药物可分为三大类：一类是抑制尿酸生成药物，比如别嘌醇，非布司他；一类是促尿酸排泄药物，如丙磺舒和苯溴马隆；另一类是新型降尿酸药物，包括尿酸酶和选择性尿酸重吸收抑制剂，代表药物有普瑞凯希和RDEA594。但这些降尿酸药物患者长期服用后会出现不良反应，其中别嘌醇可引起皮肤过敏反应及肝肾功能受损，主要包括胃肠道症状、皮疹、骨髓抑制等；苯溴马隆的不良反应主要有腹泻、胃部不适、恶心等消化系统症状，风团、斑疹、潮红、瘙痒等皮肤过敏症状，肝功能损害及谷草转氨酶、谷丙转氨酶及碱性磷酸酶升高。非布司他是2009年获批用于治疗慢性高尿酸血症的药物，相比传统治疗药别嘌醇和苯溴马隆，非布司他降低尿酸的有效性较好，但常出现不良肝功能异常、腹泻、皮疹、胸痛、晕厥或头晕、加快或不规则心跳、说话困难、视力突然模糊或头痛等心血管疾病等不良副作用，目前已有心脏病发作、中风和心脏相关死亡的报道。而新型降尿酸药普瑞凯希是一种聚乙二醇重组尿酸氧化酶，可将尿酸分解为可溶性产物排出，其主要不良反应包括严重心血管事件、输液反应和免疫原性反应。
因此，本领域技术人员致力于开发一种制备副作用小，效果好的减轻高尿酸血症状或治疗高尿酸血症的产品。
发明内容
有鉴于现有技术的上述缺陷，本发明公开了甜橙黄酮在制备高尿酸血症产品中的应用及产品，以解决现存药物或产品的副作用严重，效果不佳的技术问题。
为实现上述目的，本发明提供了甜橙黄酮在制备减轻高尿酸血症状或治疗高尿酸血症产品中的应用。
进一步地，甜橙黄酮在制备降低高尿酸血症的血清尿酸水平产品中的应用。
进一步地，甜橙黄酮在制备调节高尿酸血症的白细胞水平产品中的应用。
进一步地，甜橙黄酮在制备调节高尿酸血症的脾脏指数或肝脏指数产品中的应用。
进一步地，甜橙黄酮在制备降低高尿酸血症的肝脏脂滴蓄积产品中的应用。
进一步地，甜橙黄酮在制备降低高尿酸血症的肝脏炎性细胞浸润产品中的应用。
进一步地，甜橙黄酮在制备维持高尿酸血症的肾小球、肾小管正常形态及功能产品中的应用。
进一步地，甜橙黄酮在制备降低高尿酸血症的血乳酸水平产品中的应用。
可选地，所述高尿酸血症状或高尿酸血症为化学诱导型高尿酸血症、高糖饮食型高尿酸血症、运动型高尿酸血症、混合型高尿酸血症中的任一或它们的复合症。
为实现上述目的，本发明还提供了应用甜橙黄酮减轻高尿酸血症状或治疗高尿酸血症的产品。
可选地，所述产品包括：药物、医用食品、保健品、功能食品、常规食品。
可选地，所述产品为口服剂型或注射剂型，所述口服剂型为可以为片剂、粉剂、颗粒剂、茶剂、胶囊剂、软胶囊剂、口服液、丸剂、膏剂、酒剂中的任一种；所述注射剂型为注射液。
相比于现有技术，本发明具有如下有益效果：
通过甜橙黄酮在体内起到调控尿酸补救合成途径上GDA酶的活性，有效减少了尿酸合成；另一方面是调控尿酸转运体表达，减少了尿酸在肾脏的重吸收，从而排泄增多，从而降低血尿酸含量，并具有较好的抗炎效果，辅助降尿酸，从而起到减轻高尿酸血症状或治疗高尿酸血症的作用。在下列具体实施例中，发明人通过实验记录了甜橙黄酮对高尿酸血症小鼠血清尿酸水平，白细胞数目，脏器指数(脾、肝和肾)、肝脏炎症因子水平及肝肾组织病理改变，验证了甜橙黄酮对的高尿酸血症状的改善作用。
附图说明
图1a、图1b是本发明实施例1实验流程图，以及小鼠第5天和第10天血清尿酸水平示意图；
图2a、图2b是本发明实施例1小鼠第5天和第10天白细胞水平示意图；
图3a、图3b、图3c分别是是本发明实施例1小鼠脾、肝脏和肾脏的脏器指数示意图；
图4a、图4b、图4c、图4d是本发明实施例1模型组和给药组小鼠肝脏和肾脏的HE染色图；
图5a、图5b、5c分别是本发明实施例1的TNF-α、IL-1β、IL-10炎症因子水平示意图；
图6a、图6b分别是本发明实施例2的血清尿酸水平示意图以及白细胞水平示意图；
图7a、图7b、图7c、图7d是本发明实施例2中各组小鼠肾脏、肝脏、脾和脂肪组织的脏器指数示意图；
图8a、图8b是本发明实施例2中各组小鼠肝脏、肾脏和脾脏照片以及各组小鼠肝脏的HE染色图；
图9a、图9b分别是本实施例3的血清尿酸水平示意图以及白细胞水平示意图；
图10a、图10b、图10c分别是本实施例4的血清尿酸水平示意图、白细胞水平示意图以及血乳酸含量示意图。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的方法进行说明，但本发明并不局限于此，凡在本发明的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法；所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
本发明所有实施例中，甜橙黄酮(IUPAC name:2-(3,4-dimethoxyphenyl)-5,6,7-trimethoxychromen-4-one)，结构式为：
甜橙黄酮为甜橙加工废弃物中分离得到，具体制备方法根据CN108727324B中记载的方法，甜橙黄酮最后纯度为98.9％。但本分离方法只是作为范例，其他本领域技术人员能够想到的提纯方式，亦可达到发明目标。
本发明所有实施例中，实施例1受试小鼠为健康雄性C57BL/6J小鼠，6-8周龄，体重22-25g；实施例2-4受试小鼠为健康雄性昆明小鼠，6-8周龄，体重40-45g，均为湖南斯莱克景达实验动物有限公司提供，动物许可证号为SCXK(湘)2019-0004。
本发明实施例中，小鼠饲养方法为：SPF级屏障系统内饲养，屏障系统的温度保持在(22±1)℃，湿度保持在(60±5)％，采用明暗各12h间隔照明控制。
本发明所有实施里中，通过GraphPad Prism 9.0软件对获得的基本生理数据进行统计分析，数据以均值±标准差表示。如有显著性差异，显著性水平定为p<0.05。
实施例1
如图1-图6所示，小鼠随机分组，每组5只，分别为模型组和给药组，给药组按200mg/kg灌胃给予受试药物甜橙黄酮，模型组灌胃等体积的0.8％CMC-Na/saline(羧甲基纤维素钠生理盐水)，如图1a所示，每天1次，连续灌胃7天。模型组和给药组小鼠于第1，3，7天腹腔注射氧嗪酸钾(图1a所示PO)250mg/kg诱导成高尿酸血症小鼠。期间，于第5天进行眶下静脉丛采血用于血清尿酸水平检测，第10天摘眼取血，进行血细胞计数并取血清(2800×g，RT，离心15min)检测尿酸水平。其中，采用HPLC法检测血清尿酸，具体检测条件为：SunFireC18柱(5μm,4.6×250mm)，流动相A为10mmol/L乙酸铵/0.1％甲酸；流动相B为乙腈，按A:B＝90:10进行等度洗脱，柱温为25℃，进样量为10μL，流速为0.4mL/min，检测通道为280nm。
实验结果如图1b和图1c所示，第5天模型组和给药组小鼠平均尿酸水平分别为425.312μM和262.859μM；第10天模型组和给药组小鼠平均尿酸水平分别为310.504μM和204.011μM。并于第5天和10天利用全血细胞计数仪(Sysmex XT2000i，日本)检测小鼠外周血白细胞水平，如图2a和图2b所示，第5天模型组和给药组小鼠平均白细胞数目水平分别为354.5×10/μL和285.3×10/μL，第10天模型组和给药组小鼠平均白细胞数目水平则分别为197×10/μL和154.667×10/μL。通过实验可知，与模型组相比，给药组灌胃给予甜橙黄酮后，小鼠白细胞数目显著降低，该结果显示甜橙黄酮具有抗炎作用，尤其是可降低氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症所引起的白细胞数目增加，以维持机体内环境稳定。
在本实施例中，再对小鼠的脾、肝脏和肾脏以脏器指数(脏器指数为脏器与小鼠体重之比，脾脏为免疫器官，脾脏增大是机体炎症表型之一)、组织HE染色和qRT-PCR为标准进行分析，评估甜橙黄酮对氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠脏器的作用。
在实验第10天，通过称重，按公式：脏器指数＝[脏器重量(g)/小鼠体重(g)]×100％，计算小鼠的脏器指数，对两组小鼠肾脏、肝脏、脾的肾脏指数取平均值，其中，如图3a至图3c所示，模型组小鼠的肾脏-脏器指数为1.324，肝-脏器指数为5.65，脾-脏器指数为0.595，给药组小鼠的肾脏-脏器指数为1.325，肝-脏器指数为4.455，脾-脏器指数为0.344。通过实验结果可知，甜橙黄酮可有效减轻氧嗪酸钾诱导的高尿酸小鼠的炎症反应，其主要靶器官可能是肝脏和脾。
过对小鼠肝脏进行HE染色，随机选择模型组及给药组小鼠一只的肝脏HE染色图片如图4a和4b所示，可见在模型组小鼠肝脏HE染色在图中黑色三角处具有明显有大量空泡状脂滴聚集，且在黑色箭头处显示，具有炎性细胞浸润。此外，模型组肝脏组织肝小叶界限不清晰，且伴有炎性细胞浸润(图4a中黑色箭头所示)及核固缩现象。而给药组小鼠肝脏HE染色则没有这些结果，本实验的其他小鼠的肝脏HE染色结果与同组小鼠基本相同，不再赘述。结果显示甜橙黄酮可显著缓解氧嗪酸钾诱导的高尿酸所致的肝脏脂滴蓄积，减轻肝脏炎症。
在肾脏的HE染色中，结果显示，模型组小鼠较给药组具有更大的小球结构，内含更多细胞，提示肾小球分泌活动异常和有一定程度脓肿；此外，模型组肾小管排列较甜橙黄酮组更为紊乱无序。提示甜橙黄酮对维持肾小球、肾小管形态及功能正常有正向作用。因同组小鼠HE染色极其近似，随机在两组小鼠中选择一只小鼠的肾脏HE染色图片如图4c和图4d所示，可见在黑色三角区域，模型组小鼠较给药组具有更大的肾小球结构。
同时，对肝脏匀浆中相关炎症因子进行qRT-PCR检测，步骤如下：
(1)RNA提取：①称取15-20mg动物组织(肝脏)，置于普通玻璃匀浆器中并加入600μl裂解液进行研磨至无明显组织块。研磨后轻轻吹打匀浆液8-10次，室温放置4分钟。然后14000×g离心2分钟，将上清液移至新的离心管中。
②加入等体积结合液至裂解液中，轻轻颠倒混匀3-5次。此时可能会有沉淀物产生，属于正常现象。
③将混合物(包括沉淀物)转移至纯化柱内，12000×g离心30秒，倒弃收集管内液体。纯化柱一次的最大体积为600μL，因此此步骤需重复两次。
④加入600μl洗涤液I，12,000×g离心30秒，倒弃收集管内液体。
⑤加入600μl洗涤液II，12,000×g离心30秒，倒弃收集管内液体。
⑥重复步骤⑤一次。
⑦最高速(16000×g)离心2分钟，去除残留的液体
⑧将RNA纯化柱置于本试剂盒提供的RNA洗脱管中，加入50μl洗脱液，室温放置2-3分钟，最高速离心1分钟，所得溶液再重复加入到洗脱管中心，最高速离心1分钟，所得溶液即为纯化的RNA。
qRT-PCR反应：①One-Step qRT-PCR反应体系的设置：
②One-Step qRT-PCR反应程序：
a.反转录：50℃15-30min
b.预变性：95℃2min
c.变性：95℃15sec
d.退火/延伸：60℃15-30sec
e.重复步骤c和步骤d，总共40个循环
f.熔解曲线分析(可选)：95℃15sec,60℃15sec,95℃15sec
其结果显示甜橙黄酮对肝脏中炎症因子相关基因的表达具有较好的调控作用，各组所有检测数据的均值，如图5a、5b、5c所示，可见甜橙黄酮干预可显著降低TNF-α、IL-1β等促炎因子水平，提高抗炎因子IL-10的表达，进一步表明了甜橙黄酮具有较好的抗炎效果。
结果表明，氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠肝脏和脾脏指数较大，有明显的炎症反应，而给药组小鼠肝和脾脏指数显著低于模型组。给药组小鼠血清尿酸水平和白细胞数目均显著低于模型组；同时，在氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症模型中，甜橙黄酮可显著降低氧嗪酸钾诱导高尿酸血症所引起的肝和脾指数增加。说明甜橙黄酮能缓解小鼠肝脏脂滴蓄积和炎性细胞浸润，减轻肝脏炎症；维持肾小球、肾小管正常形态及功能。以上实验表明，甜橙黄酮可显著降低动物血清尿酸水平和白细胞数目，降低肝和脾指数，缓解机体炎症反应，维持肝肾组织正常的结构和功能，且在连续灌胃期间，动物未出现明显中毒反应。
实施例2-4为甜橙黄酮在其他类型的高尿酸血症中的效果，以及对比其他药物效果的优越性的验证，具体实验如下：
实施例2
如图7所示采用昆明小鼠构建混合诱因(高糖高嘌呤饮食和化学诱导)导致的高尿酸血症模型，对受试化合物的降尿酸作用进行验证。小鼠随机分组，每组10只，分别为空白组、模型组、阳性对照组(别嘌醇)、给药组1(川陈皮素)、给药组2(橘皮素)和给药组3(甜橙黄酮)和空白给药组3。
空白组小鼠自由饮食饮水，不做任何处理；阳性对照组按10mg/kg灌胃给予临床降尿酸药物别嘌醇；给药组按200mg/kg分别灌胃给予受试药物川陈皮素、橘皮素和甜橙黄酮；空白给药组3组的小鼠自由饮食饮水，并按200mg/kg灌胃给予甜橙黄酮；模型组小鼠灌胃等体积的0.8％羧甲基纤维素钠生理盐水，每天1次，连续灌胃21天。同时，除空白组和空白给药3组小鼠外，其余各组小鼠按250mg/kg灌胃给予黄嘌呤溶液，并于第1，3，7，10，14和17天腹腔注射氧嗪酸钾250mg/kg，并将饮水换成20％果葡糖浆饮水(15％果糖+5％葡萄糖)。于第21天摘眼取血，进行血细胞计数并取血清(2800×g，RT，离心15min)检测尿酸水平。其中，采用HPLC法检测血清尿酸，具体检测条件为：SunFire C18柱(5μm,4.6×250mm)，流动相A为10mmol/L乙酸铵/0.1％甲酸；流动相B为乙腈，按A:B＝90:10进行等度洗脱，柱温为25℃，进样量为10μL，流速为0.4mL/min，检测通道为280nm。利用全血细胞计数仪(Sysmex XT2000i，日本)检测小鼠外周血白细胞水平。
实验结果，如图6a所示，阳性对照组和给药组3(甜橙黄酮)组小鼠血清尿酸水平分别为259.6μM和254.03μM，显著低于模型组小鼠血清尿酸水平(379.58μM)，而与空白组小鼠尿酸水平(233.35μM)无显著差异；给药组1(川陈皮素)和给药组2(橘皮素)组小鼠血清尿酸水平则分别为267.94μM和279.69μM，与模型组小鼠血清尿酸水平无显著差异。如图6b所示，给药组1(川陈皮素)和给药组3(甜橙黄酮)组小鼠白细胞水平分别为219.86×10/μL和210.71×10/μL，显著低于模型组小鼠白细胞水平(314.86×10/μL)，且也与空白组小鼠白细胞水平(218.63×10/μL)无显著差异；而阳性对照组和给药组2(橘皮素)组小鼠白细胞水平分别为261.8×10/μL和232×10/μL，与模型组无显著差异。而空白给药甜橙黄酮组(空白给药组3)小鼠血清尿酸水平(195.836μM)和白细胞数目(176.4×10/μL)均与模型组小鼠的血尿酸和白细胞水平具有极显著差异，而与空白小鼠的血尿酸和白细胞数目均无显著差异。因此通过实验可知，与模型组相比，灌胃给予别嘌醇、甜橙黄酮后，小鼠血清尿酸水平显著下降，同时给予甜橙黄酮可显著降低小鼠白细胞数目，甜橙黄酮处理该结果显示甜橙黄酮较川陈皮素、橘皮素有更好的降尿酸作用，且具有更强的抗炎作用。
在实验第21天，小鼠摘眼取血后脱颈处死，剥离小鼠各脏器，称重，按公式：脏器指数＝[脏器重量(g)/小鼠体重(g)]×100％，计算各小鼠的脏器指数并进行统计。如图7a所示，模型组小鼠、给药组1(川陈皮素)组、给药组2(橘皮素)组、给药组3(甜橙黄酮)组和空白给药3组小鼠的肾脏脏器指数分别为1.468、1.398、1.468、1.443和1.532，均与空白组小鼠的肾脏脏器指数(1.4025)无显著差异，而阳性对照组小鼠肾脏脏器指数为1.344，显著低于模型组小鼠，但与空白组无显著差异。如图7b所示，模型组小鼠肝脏脏器指数为4.918，空白组、阳性对照组、给药组1(川陈皮素)组和给药组2(橘皮素)组小鼠肝脏的脏器指数分别为4.845、4.619、5.041和4.766，均与模型组无显著差异；而给药组3(甜橙黄酮)和空白给药甜橙黄酮(空白给药组3)组小鼠肝指数分别为4.416和4.457，显著低于模型组小鼠的肝脏脏器指数，但与空白组无显著差异。如图7c所示，模型组和空白组小鼠的脾指数分别为0.411和0.354，二者间无显著差异，但阳性对照组、给药组2和给药组3组小鼠的脾指数(分别为0.32、0.291和0.306)则显著低于模型组，但与空白组无显著差异。如图7d所示，各组小鼠的脂肪指数分别为：1.784、1.656、1.923、1.4、1.82、1.811和1.914，表明该实施例中的造模处理和给药处理均对小鼠脂肪指数无显著影响。通过实验结果可知，与空白组小鼠相比，甜橙黄酮处理对小鼠各脏器无明显实质性改变，与模型组小鼠相比，甜橙黄酮的主要靶器官可能是肝脏和脾，与实施例1结果一致。
因此，我们对本实施例中各组小鼠的肝、肾和脾进行了拍照观察，并对肝脏组织进行了HE染色。如图8a所示，在外观上，模型组小鼠肝脏较其余各组小鼠肝脏的颜色更浅，肾脏见明显白色瘢痕。如图8b所示，各组小鼠肝脏HE染色结果表明：空白组肝脏细胞排列有序，胞质和胞核界限分明且清晰，胞间存在少量单核细胞，未见明显脂滴；模型组肝脏胞质融合严重，胞间单核细胞(黑色箭头)较正常肝组织多，提示可能有炎性细胞浸润，同时胞间可见少量脂滴聚集(三角形标记处)，阳性对照组肝脏有明显脂滴和单核细胞浸润，肝细胞规则且排列有序，组织较为正常；给药组1(川陈皮素)组胞间单核细胞和脂滴明显，而给药组2(橘皮素)组肝脏整体较正常，视野内未见明显单核细胞，但小脂滴较其余组偏多；给药组3(甜橙黄酮)组和空白给药3组单核细胞较多，但细胞排列规则有序，形态结构较为正常，整体而言，无显著病理变化。
上述结果表明，混合因素(高糖高嘌呤饮食和化学因素)诱导的高尿酸血症模型组小鼠肝脏和脾脏指数较大，外周血白细胞数目显著增高，而给药甜橙黄酮处理后小鼠肝和脾脏指数显著低于模型组，同时，给药甜橙黄酮干预组小鼠血清尿酸水平和白细胞数目均显著低于模型组，而与空白小鼠无显著差异；且在连续灌胃甜橙黄酮21天内未见受试动物出现明显中毒反应，各脏器外观正常，未见明显病变。
实施例3
果糖、葡萄糖是常用甜味添加剂，尤其是果葡糖浆常作为饮料、蛋糕、饼干等食物添加剂，而果糖在人体代谢过程中会消耗大量ATP，产生过量的AMP,增加机体内源性嘌呤物质，造成尿酸大量生成，形成高尿酸血症。
因此，采用昆明小鼠构建高糖摄入(20％果葡糖浆水)导致的高尿酸血症模型，对受试化合物的降尿酸作用进行验证。小鼠随机分组，每组5只，分别为空白组、模型组、给药组1(川陈皮素)和给药组2(甜橙黄酮)。空白组小鼠自由饮食饮水，不做任何处理；给药组按200mg/kg分别灌胃给予受试药物川陈皮素和甜橙黄酮；模型组小鼠灌胃等体积的0.8％羧甲基纤维素钠生理盐水，每天1次，连续灌胃60天。同时，除空白组小鼠外，将其余各组小鼠饮水为20％果葡糖浆饮水(15％果糖+5％葡萄糖)。于第60天摘眼取血，进行血细胞计数并取血清(2800×g，RT，离心15min)检测尿酸水平。其中，采用HPLC法检测血清尿酸，具体检测条件为：SunFire C18柱(5μm,4.6×250mm)，流动相A为10mmol/L乙酸铵/0.1％甲酸；流动相B为乙腈，按A:B＝90:10进行等度洗脱，柱温为25℃，进样量为10μL，流速为0.4mL/min，检测通道为280nm。利用全血细胞计数仪(Sysmex XT2000i，日本)检测小鼠外周血白细胞水平。
实验结果如图9a所示，模型组小鼠血尿酸水平(412.60μM)显著高于空白组小鼠血尿酸水平(296.57μM)，表明高糖饮食诱导的高尿酸酸血症模型构建成功；给药组2(甜橙黄酮)组小鼠血清尿酸水平为291.75μM，显著低于模型组，且与空白组无显著差异，而给药组1(川陈皮素)组小鼠血尿酸水平(446.46μM)与模型组小鼠血尿酸水平无显著差异，显著高于空白组小鼠血尿酸水平。如图9b所示，空白组小鼠白细胞数目为246×10/μL，显著低于模型组小鼠外周血白细胞数目(342.25×10/μL)；给药组2(甜橙黄酮)组小鼠白细胞水平为242×10/μL，与空白组小鼠白细胞水平无明显差异，且显著低于模型组小鼠白细胞水平；给药组1(川陈皮素)组小鼠白细胞水平则为370.33×10/μL，与模型组小鼠血白细胞数目无显著差异。因此通过实验可知，高糖饮食(20％果葡糖浆水)可显著升高小鼠血清尿酸水平和外周血白细胞数目，而灌胃给予甜橙黄酮后，与模型组相比，小鼠血清尿酸水平和白细胞数目可显著下降，与空白小鼠无明显差异，而给予川陈皮素则无此作用，表明甜橙黄酮对高糖摄入诱导的高尿酸血症具有显著的降尿酸作用和抗炎效果。
实施例4
剧烈运动会导致机体能源物质大量消耗，从而依靠乳酸能系统供能：即主要依靠葡萄糖和糖原在无氧的情况下分解产生乳酸，合成ATP进行能量供应。该阶段机体血糖、肌糖原、肝糖原会大量消耗，产生过量内源性嘌呤物质，增加尿酸合成底物，从而提高了血清尿酸水平。同时，剧烈运动过程中分解产生乳酸，而乳酸会与尿酸竞争性排泄，高血乳酸含量会导致尿酸排泄减少，从而进一步增加血清尿酸含量，造成运动型急性高尿酸血症。
因此，本实施例采用昆明小鼠构建运动型急性高尿酸血症模型，对受试化合物的降尿酸作用进行验证。小鼠随机分组，每组5只，分别为模型组和给药组，各小鼠自由摄食取水。给药组按200mg/kg灌胃给予受试药物甜橙黄酮，模型组灌胃等体积的0.8％羧甲基纤维素钠生理盐水，每天1次，连续灌胃28天，期间，于第21至28天对小鼠进行力竭游泳试验。最后一次力竭游泳后2h摘眼取血，利用全血细胞计数仪(Sysmex XT2000i，日本)检测小鼠外周血白细胞水平，并取血清(2800×g，RT，离心15min)检测尿酸和乳酸水平。其中，乳酸的测量采用南京建成血乳酸检测试剂盒进行，血清尿酸采用HPLC法进行检测，具体检测条件为：SunFire C18柱(5μm,4.6×250mm)，流动相A为10mmol/L乙酸铵/0.1％甲酸；流动相B为乙腈，按A:B＝90:10进行等度洗脱，柱温为25℃，进样量为10μL，流速为0.4mL/min，检测通道为280nm。
实验结果如图10a所示，给药组小鼠血清尿酸水平为177.49μM，显著低于模型组小鼠血尿酸水平(243.28μM)。如图10b所示，给药组小鼠平均白细胞数目为180.4×10/μL，显著低于模型组小鼠外周血白细胞数目(205.75×10/μL)；在小鼠血乳酸含量方面，如图10c所示，模型组小鼠血乳酸为5.546mM，而给予甜橙黄酮灌胃后，小鼠血乳酸含量显著降低，为4.526mM。因此通过实验可知，灌胃给予甜橙黄酮后，与模型组相比，力竭运动小鼠的血清尿酸水平、白细胞数目和血乳酸含量均可显著下降，表明甜橙黄酮对运动型急性高尿酸血症具有较好的缓解作用。
以上实验表明，甜橙黄酮可显著降低高尿酸血症的血尿酸和白细胞水平，差异有统计学显著意义；同时，甜橙黄酮具有较好的抗炎效果，可缓解氧嗪酸钾诱导的高尿酸血症小鼠的肝脏脂质堆积和肾损伤，维持受试小鼠肾小管和肾小球形态和功能正常，具有良好的降尿酸的效果且安全无毒副作用，可用于预防或/和治疗高尿酸血症。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术人员无需创造性劳动就可以根据本发明的构思作出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在由权利要求书所确定的保护范围内。
Claims (10)
1.甜橙黄酮在制备减轻高尿酸血症状或治疗高尿酸血症产品中的应用。
2.如权利要求1所述的产品中的应用，其特征在于，甜橙黄酮在制备降低高尿酸血症的血清尿酸水平产品中的应用。
3.如权利要求1所述的产品中的应用，其特征在于，甜橙黄酮在制备调节高尿酸血症的白细胞水平产品中的应用。
4.如权利要求1所述的产品中的应用，其特征在于，甜橙黄酮在制备调节高尿酸血症的脾脏指数或肝脏指数产品中的应用。
5.如权利要求4所述的产品中的应用，其特征在于，甜橙黄酮在制备降低高尿酸血症的肝脏脂滴蓄积产品中的应用。
6.如权利要求4所述的产品中的应用，其特征在于，甜橙黄酮在制备降低高尿酸血症的肝脏炎性细胞浸润产品中的应用。
7.如权利要求1所述的产品中的应用，其特征在于，甜橙黄酮在制备维持高尿酸血症的肾小球、肾小管正常形态及功能产品中的应用。
8.如权利要求1所述的产品中的应用，其特征在于，甜橙黄酮在制备降低高尿酸血症的血乳酸水平产品中的应用。
9.如权利要求1所述的产品中的应用，其特征在于，所述高尿酸血症状或高尿酸血症为化学诱导型高尿酸血症、高糖饮食型高尿酸血症、运动型高尿酸血症、混合型高尿酸血症中的任一或包含它们的复合症。
10.如权利要求1-8任一项所述的应用甜橙黄酮减轻高尿酸血症状或治疗高尿酸血症的产品。
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