CN114712312B - 一种控制微球活性成分释放的方法 - Google Patents
一种控制微球活性成分释放的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114712312B CN114712312B CN202011503140.2A CN202011503140A CN114712312B CN 114712312 B CN114712312 B CN 114712312B CN 202011503140 A CN202011503140 A CN 202011503140A CN 114712312 B CN114712312 B CN 114712312B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- copolymer
- solution
- oligomer
- content
- taking
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 title claims abstract description 44
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims abstract description 75
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 65
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 32
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims abstract description 18
- 238000007670 refining Methods 0.000 claims abstract description 17
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 16
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims abstract description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 66
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 58
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 38
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 23
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims description 21
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 17
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 14
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 14
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 9
- 238000000861 blow drying Methods 0.000 claims description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 8
- 239000004626 polylactic acid Substances 0.000 claims description 8
- 239000002274 desiccant Substances 0.000 claims description 7
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 claims description 7
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 5
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 claims description 2
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 claims description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000010414 supernatant solution Substances 0.000 claims description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 22
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 33
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 21
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 18
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 17
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 11
- 229920001606 poly(lactic acid-co-glycolic acid) Polymers 0.000 description 10
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N tetraphosphorus decaoxide Chemical compound O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 9
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 9
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 7
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 6
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 6
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 6
- GFIJNRVAKGFPGQ-LIJARHBVSA-N leuprolide Chemical compound CCNC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CC=1N=CNC=1)NC(=O)[C@H]1NC(=O)CC1)CC1=CC=C(O)C=C1 GFIJNRVAKGFPGQ-LIJARHBVSA-N 0.000 description 6
- 229960004338 leuprorelin Drugs 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 5
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 4
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 4
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 4
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 3
- 108010000817 Leuprolide Proteins 0.000 description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 3
- PHZYZQWQIQMLBY-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;propan-1-ol Chemical compound CC#N.CCCO PHZYZQWQIQMLBY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 3
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 3
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000012738 dissolution medium Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 3
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N octadecylsilane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC[SiH3] YTJSFYQNRXLOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 3
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 3
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- JJTUDXZGHPGLLC-UHFFFAOYSA-N lactide Chemical compound CC1OC(=O)C(C)OC1=O JJTUDXZGHPGLLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 238000007151 ring opening polymerisation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- RKDVKSZUMVYZHH-UHFFFAOYSA-N 1,4-dioxane-2,5-dione Chemical compound O=C1COC(=O)CO1 RKDVKSZUMVYZHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 229940121657 clinical drug Drugs 0.000 description 1
- 238000013270 controlled release Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000012377 drug delivery Methods 0.000 description 1
- 229920006158 high molecular weight polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 239000012567 medical material Substances 0.000 description 1
- VUZPPFZMUPKLLV-UHFFFAOYSA-N methane;hydrate Chemical compound C.O VUZPPFZMUPKLLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000000865 mononuclear phagocyte system Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000009828 non-uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 1
- 150000003627 tricarboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
- A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
- A61K9/1629—Organic macromolecular compounds
- A61K9/1641—Organic macromolecular compounds obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyethylene glycol, poloxamers
- A61K9/1647—Polyesters, e.g. poly(lactide-co-glycolide)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
- C08G63/02—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds
- C08G63/06—Polyesters derived from hydroxycarboxylic acids or from polycarboxylic acids and polyhydroxy compounds derived from hydroxycarboxylic acids
- C08G63/08—Lactones or lactides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G63/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carboxylic ester link in the main chain of the macromolecule
- C08G63/88—Post-polymerisation treatment
- C08G63/90—Purification; Drying
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本发明公开了一种控制微球活性成分释放的方法,包括以下步骤:(1)取共聚物粉末制备供试溶液,另取共聚物粉末加入四氢呋喃溶解,作为对照溶液;(2)供试溶液和对照溶液上高效液相色谱进行检测,并计算获得共聚物中低聚体的含量;(3)若共聚物中低聚体的含量大于10%,则对共聚物进行一次或多次精制,直至共聚物中低聚体的含量≤10%;(4)以获得的低聚体含量≤10%的共聚物粉末作为载体制备微球。本发明简单实用,通过采用对共聚物特定的精制方法,从而有效控制共聚物种的低聚体含量在一个特定的范围,从而实现对微球中的活性成分的释放控制;同时低聚体检测方法重现性良好。
Description
技术领域
本发明涉及药物生产技术领域,特别涉及一种控制微球活性成分释放的方法。
背景技术
丙交酯乙交酯共聚物(PLGA)和聚乳酸(PLA)是国内外得到广泛研究和应用的新型生物可降解材料,由于该类共聚物在体内可通过聚酯水解,降解为乳酸和羟基乙酸,然后通过体内三羧酸循环最终降解为二氧化碳和水,不会对人体产生不良反应,因此可以作为缝合线、骨钉、骨栓及各种支架等临床医用材料,也可作为缓控释给药系统的载体,现已被FDA批准为药用辅料。PLGA是由乙交酯和丙交酯在无水无氧条件下加热开环聚合而成,PLA则是由丙交酯在无水无氧条件下内部自身加热开环聚合而成。这种聚合反应分子之间的结合通常都较为随机,最后形成的聚合物往往呈现分子量非均一分布状态,即同时含有低分子量的聚合物和高分子量的聚合物。
而微球是一种药物分散或被吸附在高分子聚合物基质中形成的1μm~300μm的固体颗粒分散体系。由于其独特的缓释性能,微球在注射给药后可在人体内保持可控的释放速度,缓慢释放出包载在其内部的药物有效成分从而可减少对患者的给药次数,改善患者顺应性并实现长期治疗效果;同时微球可被特定组织器官的网状内皮系统吞噬,实现靶向治疗。由上述较传统制剂所具有的显而易见的优势,缓释微球制剂已经成为一种前景广阔的药物剂型。但是微球制剂在临床上的释药周期往往长达数周,甚至数月,如果产品质量出现瑕疵,很容易诱发毒副作用甚至威胁患者的生命。这些产品质量瑕疵,包括但不限于突释过高、释放周期难以控制以及载体材料安全性不能保证等,特别的,对于微球制剂需要严格关注其释放度的质量要求。
PLGA共聚物是目前制备微球制剂常用的载体材料。但如上所述,受限于现有合成工艺难以克服的缺陷,成品PLGA总是会含有不同程度的低聚体(分子量低于3000以下的聚合物)残留,由于低聚体在体内更容易水解,因此当这些残留的低聚体随PLGA进入微球后,它们在微球内部发生水解,降低了微球内部的pH值,增强了微球内部的亲水性,加剧微球对水分的摄取,从而导致微球内药物活性成分的溶解发生变化,影响药物在体内的释放行为,进而影响其对疾病的治疗效果。
因此控制PLGA共聚物中的低聚体含量对微球制剂的开发具有重要意义,目前药剂行业尚无对PLGA共聚物中低聚体含量进行准确定量分析的方法,更未有如何控制PLGA共聚物中低聚体含量的方法。如何通过控制PLGA共聚物中低聚体含量,以实现对微球中的活性成分的释放控制成为亟需解决的问题。
发明内容
本发明的目的在于提供一种控制微球活性成分释放的方法,对微球制备的关键辅料共聚物进行精制,检测其中低聚体含量,通过控制低聚体含量,从而调节微球中活性成分的释放。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是:
一种控制微球活性成分释放的方法,包括以下步骤:
(1)取共聚物粉末分别依次加入丙酮、甲醇溶液,离心,取出上清;沉淀加入甲醇,涡旋后离心,取上清;合并上清溶液,气体吹干,加甲醇,涡旋1分钟后,离心,取上清,气体吹干,加入四氢呋喃溶解,即得供试溶液,另取共聚物粉末加入四氢呋喃溶解,作为对照溶液;(2)供试溶液和对照溶液上高效液相色谱进行检测,并计算获得共聚物中低聚体的含量;
(3)若共聚物中低聚体的含量大于10%,则对共聚物进行一次或多次精制,直至共聚物中低聚体的含量≤10%;
(4)以获得的低聚体含量≤10%的共聚物粉末作为载体制备微球。
发明人在研究中发现,通过控制微球载体材料共聚物中低聚体的含量在10%以下,可以达到控制微球活性成分较好释放的效果。
作为优选,步骤(3)中,所述精制具体为:取共聚物粉末溶于丙酮溶液,溶解后,缓慢加入混合溶液中,析出沉淀,弃去上清,再加水洗涤沉淀,于下层置干燥剂的真空干燥器中抽真空干燥,得精制共聚物。
作为优选,所述混合溶液为丙酮:甲醇:水=2:3:5的体积比的混合而成。
作为优选,所述共聚物为丙交酯乙交酯共聚物或聚乳酸。
作为优选,步骤(2)中,所述高效液相色谱测定条件为:色谱柱:分子排阻色谱柱;流动相为四氢呋喃,采用等度洗脱,检测器为示差检测器;柱温:40℃,流速:1.0ml/min,进样量:50ul,检测器温度:40℃。
作为优选,步骤(3)中,共聚物进行一次或多次精制后,采用步骤(1)-(2)的方法检测共聚物中低聚体的含量。
作为优选,步骤(1)中,离心为9500rpm离心10-20分钟。
本发明的有益效果是:本发明简单实用,通过采用对共聚物特定的精制方法,从而有效控制共聚物种的低聚体含量在一个特定的范围,从而实现对微球中的活性成分的释放控制;同时低聚体检测方法重现性良好。
具体实施方式
下面通过具体实施例,对本发明的技术方案作进一步的具体说明。
本发明中,若非特指,所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的。下述实施例中的方法,如无特别说明,均为本领域的常规方法。
实施例1
(1)精制共聚物的制备:称取丙交酯乙交酯共聚物(7525)(批号:L00020601311)20g(已经检测低聚体含量大于10%),加20ml丙酮搅拌溶解,待溶液澄清后,缓慢倒入2L混合溶液中(20%丙酮:30%甲醇:50%水),静置,弃去上清,沉淀加水洗涤2次,沉淀置于下层置五氧化二磷干燥剂的真空干燥器中抽真空干燥48小时。即得精制共聚物7g,精制共聚物中低聚体含量应控制在10%以下,大于10%重复步骤(1)再次精制,直至其中低聚体低于10%。
(2)共聚物中低聚体检测:精密称取精制后的丙交酯乙交酯共聚物(7525)(批号:L00020601311-01)60.11mg,加入2ml丙酮溶解,再加入2ml甲醇,9500rpm离心10分钟,吸取上清,沉淀加入2ml甲醇,涡旋后9500rpm离心10分钟,取上清,合并上清,气体吹干,加2mL甲醇涡旋1分钟后,于9500rpm离心10分钟,取上清气体吹干,加入2ml四氢呋喃溶解,即得供试溶液。
对照溶液配制:另取丙交酯乙交酯共聚物(7525)(批号:L00020601311-01)60.11mg,加入2ml四氢呋喃溶解,进样检测。
(3)将上述步骤(2)制备的供试溶液和对照溶液分别上样进行液相色谱分析,液相色谱条件如下:色谱柱:Plgel 5μm,Guard,7.5*50mm-预柱;Plgel 5μm,MIXED-C柱,7.5*300mm 2根;Waters Styragel HR-2柱,5μm 7.8*300mm 1根;依次串联;流动相:四氢呋喃;流速:1.0ml/min;柱温:40℃;检测器:示差检测器;检测器温度:40℃;进样量:50ul;检测结果见表1;
计算供试:f=A对/C对
低聚体含量%=A样/f*V样/M样*100%
注:f:校正因子;
A对:对照溶液峰面积;
C对:对照溶液浓度;
A样:供试溶液峰面积;
V样:供试溶液体积;
M样:供试品称样量;
表1检测结果
样品 | 低聚体含量% |
精制PLGA | 7.2 |
(4)将上述步骤(1)制备的精制共聚物,分别称取6.5g,加入10ml二氯甲烷中形成油相,精密称取醋酸亮丙瑞林3.75g溶于10ml水中形成水相,将油相加入水相中涡旋15000rpm混合20分钟形成初乳,3000rpm搅拌下将初乳注入0.25%聚乙烯醇溶于中形成复乳。继续搅拌5小时除去二氯甲烷,离心收集微球,加入甘露醇,冷冻干燥48小时,收集微球。
(5)微球释放度检查:分别取本品0.1g,精密称定,分别置于内容量为120ml的6个玻璃容器中,精密加入(使用经校正后的分注器)预先加热至48℃的溶出介质(取聚乙烯醇20g,加入800ml热水中,加热并搅拌使聚乙烯醇溶解后,加水至1000ml,作为溶液A。取聚山梨酯80 10g,加水溶解使成1000ml,作为溶液B。取乳酸9g,加水溶解使成1000ml,作为溶液C。量取溶液A 200ml、溶液B 100ml和溶液C 200ml,充分混匀后,加水至1000ml,摇匀。)100ml,用胶栓密塞,用铝盖封盖,立即振摇使混悬,各容器以横倒状态固定,将其置于48℃±1℃的水浴中,水平方向的振荡幅度约4cm,以每分钟125次振荡速度进行振荡,在水浴开始升温振荡后的1小时、9小时及48小时时,用附有注射针(0.65×25mm)的注射器通过胶栓由各容器抽取混悬液1ml(如混悬液中的内容物沉降时,振荡均匀分散后抽取。),将混悬液立即离心(转速为3000转/分)10分钟,取上清液作为供试品溶液;另取对照品50mg,精密称定,置50ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml,用水稀释至50ml,摇匀,作为对照品溶液。
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以三乙胺溶液(取三乙胺15.2g,加水800ml溶解,用磷酸调节pH至3.0,加水至1000ml,摇匀)-[乙腈-正丙醇(3:2)](17:3)为流动相,检测波长为220nm。,流速:1.0~1.5ml/min(调整流速,使亮丙瑞林出峰时间在41至49min),取20ul,注入液相色谱仪,记录色谱图;按外标法以峰面积计算释放量,检测结果见表2。
表2检测结果
取样时间点 | 累计释放度% |
1小时 | 9.8% |
9小时 | 53.5% |
48小时 | 89.5% |
实施例2共聚物精制前后释放度比较:
为了验证实施例1所述方法的可行性,进行下述验证。分别依次制备如下(1)-(4)所列的4种样品:
(1)未精制共聚物。
(2)一次精制共聚物:称取丙交酯乙交酯共聚物(7525)(批号:L00020601312)100g,加20ml丙酮搅拌溶解,待溶液澄清后,缓慢倒入5L混合溶液中(20%丙酮:30%甲醇:50%水),静置,弃去上清,沉淀加水洗涤2次,沉淀置于下层置五氧化二磷干燥剂的真空干燥器中抽真空干燥48小时。即得精制共聚物60g。
(3)二次精制共聚物:称取一次精制共聚物(7525)30g,加20ml丙酮搅拌溶解,待溶液澄清后,缓慢倒入2.5L混合溶液中(20%丙酮:30%甲醇:50%水),静置,弃去上清,沉淀加水洗涤2次,沉淀置于下层置五氧化二磷干燥剂的真空干燥器中抽真空干燥48小时。即得精制共聚物16g。
(4)三次精制共聚物:称取二次精制共聚物(7525)12g,加20ml丙酮搅拌溶解,待溶液澄清后,缓慢倒入2L混合溶液中(20%丙酮:30%甲醇:50%水),静置,弃去上清,沉淀加水洗涤2次,沉淀置于下层置五氧化二磷干燥剂的真空干燥器中抽真空干燥48小时。即得精制共聚物5.2g。
(5)将上述4种样品分别检测低聚体含量,检测结果如下表3所示:
表3检测结果
样品 | 低聚体含量% |
未精制共聚物 | 18.74% |
第一次精制共聚物 | 9.89% |
第二次精制共聚物 | 5.12% |
第三次精制共聚物 | 4.55% |
结果分析:表3表明第一次精制后低聚体含量由未精制的18.74%下降至9.89%(下降至10%以下),随着精制次数增加,低聚体含量逐渐下降,精制方法可有效去除低聚体。
(6)将上述实施例2步骤(1)-(4)制备的共聚物制备微球,分别称取5g,加入10ml二氯甲烷中形成油相,精密称取醋酸亮丙瑞林3.75g溶于10ml水中形成水相,将油相加入水相中涡旋15000rpm混合20分钟形成初乳,3000rpm搅拌下将初乳注入0.25%聚乙烯醇溶于中形成复乳。继续搅拌5小时除去二氯甲烷,离心收集微球,加入甘露醇,冷冻干燥48小时,收集微球。
(7)微球释放度检查:分别取本品0.1g,精密称定,分别置于内容量为120ml的6个玻璃容器中,精密加入(使用经校正后的分注器)预先加热至48℃的溶出介质(取聚乙烯醇20g,加入800ml热水中,加热并搅拌使聚乙烯醇溶解后,加水至1000ml,作为溶液A。取聚山梨酯80 10g,加水溶解使成1000ml,作为溶液B。取乳酸9g,加水溶解使成1000ml,作为溶液C。量取溶液A 200ml、溶液B 100ml和溶液C 200ml,充分混匀后,加水至1000ml,摇匀。)100ml,用胶栓密塞,用铝盖封盖,立即振摇使混悬,各容器以横倒状态固定,将其置于48℃±1℃的水浴中,水平方向的振荡幅度约4cm,以每分钟125次振荡速度进行振荡,在水浴开始升温振荡后的1小时、9小时及48小时时,用附有注射针(0.65×25mm)的注射器通过胶栓由各容器抽取混悬液1ml(如混悬液中的内容物沉降时,振荡均匀分散后抽取。),将混悬液立即离心(转速为3000转/分)10分钟,取上清液作为供试品溶液;另取对照品50mg,精密称定,置50ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml,用水稀释至50ml,摇匀,作为对照品溶液。
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以三乙胺溶液(取三乙胺15.2g,加水800ml溶解,用磷酸调节pH至3.0,加水至1000ml,摇匀)-[乙腈-正丙醇(3:2)](17:3)为流动相,检测波长为220nm。,流速:1.0~1.5ml/min(调整流速,使亮丙瑞林出峰时间在41至49min),取20ul,注入液相色谱仪,记录色谱图;按外标法以峰面积计算释放量,结果见表4。
表4检测结果
。
表4表明采用不同低聚体含量的共聚物,制备的微球在释放过程中1小时的累计释放度明显下降,可有效控制微球的释放行为。
实施例3
(1)精制共聚物的制备:称取聚乳酸(批号:0002064569)20g,加20ml丙酮搅拌溶解,待溶液澄清后,缓慢倒入2L混合溶液中(20%丙酮:30%甲醇:50%水),静置,弃去上清,沉淀加水洗涤2次,沉淀置于下层置五氧化二磷干燥剂的真空干燥器中抽真空干燥48小时。即得精制共聚物7g,精制共聚物中低聚体含量应控制在5%~10%之间,大于10%重复步骤(1)再次精制,直至其中低聚体在5%~10%之间。
(2)共聚物中低聚体检测:精密称取精制后的聚乳酸60.24mg,加入2ml丙酮溶解,再加入2ml甲醇,9500rpm离心10分钟,吸取上清,沉淀加入2ml甲醇,涡旋后9500rpm离心10分钟,取上清,合并上清,气体吹干,加2ml甲醇涡旋1分钟后,于9500rpm离心10分钟,取上清气体吹干,加入2ml四氢呋喃溶解,即得供试溶液。
对照溶液配制:另取聚乳酸60.5mg,加入2ml四氢呋喃溶解,进样检测。
(3)将上述步骤(2)制备的供试溶液和对照溶液分别上样进行液相色谱分析,液相色谱条件如下:色谱柱:Plgel 5μm,Guard,7.5*50mm-预柱;Plgel 5μm,MIXED-C柱,7.5*300mm 2根;Waters Styragel HR-2柱,5μm 7.8*300mm 1根;依次串联;流动相:四氢呋喃;流速:1.0ml/min;柱温:40℃;检测器:示差检测器;检测器温度:40℃;进样量:50ul;检测结果见表5;
计算公式:f=A对/C对
低聚体含量%=A样/f*V样/M样*100%
注:f:校正因子;
A对:对照溶液峰面积;
C对:对照溶液浓度;
A样:供试溶液峰面积;
V样:供试溶液体积;
M样:供试品称样量;
表5检测结果
样品 | 低聚体含量% |
精制聚乳酸 | 5.8 |
(4)将上述步骤(1)制备的共聚物,分别称取6.5g,加入10ml二氯甲烷中形成油相,精密称取醋酸亮丙瑞林3.75g溶于10ml水中形成水相,将油相加入水相中涡旋15000rpm混合20分钟形成初乳,3000rpm搅拌下将初乳注入0.25%聚乙烯醇溶于中形成复乳。继续搅拌5小时除去二氯甲烷,离心收集微球,加入甘露醇,冷冻干燥48小时,收集微球。
(5)微球释放度检查:分别取本品0.1g,精密称定,分别置于内容量为120ml的6个玻璃容器中,精密加入(使用经校正后的分注器)预先加热至37的溶出介质(取聚乙烯醇20g,加入800ml热水中,加热并搅拌使聚乙烯醇溶解后,加水至1000ml,作为溶液A。取聚山梨酯80 10g,加水溶解使成1000ml,作为溶液B。取乳酸9g,加水溶解使成1000ml,作为溶液C。量取溶液A 200ml、溶液B 100ml和溶液C 200ml,充分混匀后,加水至1000ml,摇匀。)100ml,用胶栓密塞,用铝盖封盖,立即振摇使混悬,各容器以横倒状态固定,将其置于37℃±0.5℃的水浴中,水平方向的振荡幅度约4cm,以每分钟125次振荡速度进行振荡,在释放度试验的过程中,将水浴温度以每小时0.5℃的速率从37℃升温至61℃,在水浴开始升温振荡后的1小时、9小时及48小时时,用附有注射针(0.65×25mm)的注射器通过胶栓由各容器抽取混悬液1ml(如混悬液中的内容物沉降时,振荡均匀分散后抽取。),将混悬液立即离心(转速为3000转/分)10分钟,取上清液作为供试品溶液;另取对照品50mg,精密称定,置50ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,精密量取5ml,用水稀释至50ml,摇匀,作为对照品溶液。
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂,以三乙胺溶液(取三乙胺15.2g,加水800ml溶解,用磷酸调节pH至3.0,加水至1000ml,摇匀)-[乙腈-正丙醇(3:2)](17:3)为流动相,检测波长为220nm。,流速:1.0~1.5ml/min(调整流速,使亮丙瑞林出峰时间在41至49min),取20ul,注入液相色谱仪,记录色谱图;按外标法以峰面积计算释放量,检测结果见表6。
表6检测结果
取样时间点 | 累计释放度% |
1小时 | 15.3% |
9小时 | 58.1% |
48小时 | 92.3% |
实施例4低聚体检测方法的重现性验证:
(1)供试品溶液的制备:精密称取丙交酯乙交酯共聚物(批号:0002061311-06)60mg,至离心管加2ml丙酮,涡旋溶解,加入2ml甲醇,混匀于9500rpm离心20分钟,收集上清,沉淀再次添加2ml甲醇,涡旋,离心,合并上清,氮气吹干,加4ml甲醇,涡旋混匀,离心,上清挥干,加四氢呋喃定容至刻度,摇匀作为供试溶液,平行配制6份,分别标记为供试品溶液-1、供试品溶液-2、供试品溶液-3、供试品溶液-4、供试品溶液-5、供试品溶液-6。
(2)对照溶液制备:精密称取丙交酯乙交酯共聚物29.54mg置10ml容量瓶,加四氢呋喃溶解,并定容至刻度,摇匀。
(3)将上述步骤(1)制备的供试品溶液和步骤(2)制备的对照品溶液分别进行高效液相色谱分析,液相色谱条件如下:色谱柱:Plgel 5μm,Guard,7.5*50mm-预柱;Plgel 5μm,MIXED-C柱,7.5*300mm 2根;Waters Styragel HR-2柱,5μm 7.8*300mm 1根;依次串联;流动相:四氢呋喃;流速:1.0ml/min;柱温:40℃;检测器:示差检测器;检测器温度:40℃;进样量:50ul;
计算供试:f=A对/C对
低聚体含量%=A样/f*V样/M样*100%
注:f:校正因子;
A对:对照溶液峰面积;
C对:对照溶液浓度;
A样:供试溶液峰面积;
V样:供试溶液体积;
M样:供试品称样量;
表7检测结果
结果分析:六份样品检测结果重现性良好。
以上所述的实施例只是本发明的一种较佳的方案,并非对本发明作任何形式上的限制,在不超出权利要求所记载的技术方案的前提下还有其它的变体及改型。
Claims (3)
1.一种控制微球活性成分释放的方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)取共聚物粉末分别依次加入丙酮、甲醇溶液,离心,取出上清;沉淀加入甲醇,涡旋后离心,取上清;合并上清溶液,气体吹干,加甲醇,涡旋1分钟后,离心,取上清,气体吹干,加入四氢呋喃溶解,即得供试溶液,另取共聚物粉末加入四氢呋喃溶解,作为对照溶液;
(2)供试溶液和对照溶液上高效液相色谱进行检测,并计算获得共聚物中低聚体的含量;
(3)若共聚物中低聚体的含量大于10%,则对共聚物进行一次或多次精制,直至共聚物中低聚体的含量≤10%;
(4)以获得的低聚体含量≤10%的共聚物粉末作为载体制备微球;
步骤(3)中,所述精制具体为:取共聚物粉末溶于丙酮溶液,溶解后,缓慢加入混合溶液中,析出沉淀,弃去上清,再加水洗涤沉淀,于下层置干燥剂的真空干燥器中抽真空干燥,得精制共聚物;所述混合溶液为丙酮:甲醇:水=2:3:5的体积比的混合而成;
所述共聚物为丙交酯乙交酯共聚物或聚乳酸;
步骤(2)中,所述高效液相色谱测定条件为:色谱柱:分子排阻色谱柱;流动相为四氢呋喃,采用等度洗脱,检测器为示差检测器;柱温:40℃,流速:1.0ml/min,进样量:50ul,检测器温度:40℃。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(3)中,共聚物进行一次或多次精制后,采用步骤(1)-(2)的方法检测共聚物中低聚体的含量。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,步骤(1)中,离心为9500rpm离心10-20分钟。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011503140.2A CN114712312B (zh) | 2020-12-18 | 2020-12-18 | 一种控制微球活性成分释放的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202011503140.2A CN114712312B (zh) | 2020-12-18 | 2020-12-18 | 一种控制微球活性成分释放的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN114712312A CN114712312A (zh) | 2022-07-08 |
CN114712312B true CN114712312B (zh) | 2023-10-24 |
Family
ID=82229836
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202011503140.2A Active CN114712312B (zh) | 2020-12-18 | 2020-12-18 | 一种控制微球活性成分释放的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN114712312B (zh) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN117338725B (zh) * | 2023-09-18 | 2024-04-09 | 山东泰合医药科技有限公司 | 一种药物微球制剂的前处理方法及一种分析方法 |
Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1415294A (zh) * | 2002-11-07 | 2003-05-07 | 上海医药工业研究院 | 一种纳曲酮长效注射微球组合物及制备方法和应用 |
CN103768013A (zh) * | 2014-01-17 | 2014-05-07 | 丽珠医药集团股份有限公司 | 以精制两亲性嵌段共聚物为载体的紫杉醇聚合物胶束 |
CN109248159A (zh) * | 2018-10-08 | 2019-01-22 | 上海交通大学 | 每月一针艾塞那肽控释微球的制备方法 |
CN109475498A (zh) * | 2016-07-06 | 2019-03-15 | 株式会社三养生物制药 | 包含水难溶性药物的聚合物胶束制剂的体外释放试验及评价方法 |
CN112824893A (zh) * | 2019-11-21 | 2021-05-21 | 浙江圣兆药物科技股份有限公司 | 一种微球中乙交酯和丙交酯单体的检测方法 |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN104758256B (zh) * | 2014-02-14 | 2016-05-04 | 苏州海特比奥生物技术有限公司 | 一种多西他赛纳米聚合物胶束冻干制剂及其制备方法 |
-
2020
- 2020-12-18 CN CN202011503140.2A patent/CN114712312B/zh active Active
Patent Citations (5)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1415294A (zh) * | 2002-11-07 | 2003-05-07 | 上海医药工业研究院 | 一种纳曲酮长效注射微球组合物及制备方法和应用 |
CN103768013A (zh) * | 2014-01-17 | 2014-05-07 | 丽珠医药集团股份有限公司 | 以精制两亲性嵌段共聚物为载体的紫杉醇聚合物胶束 |
CN109475498A (zh) * | 2016-07-06 | 2019-03-15 | 株式会社三养生物制药 | 包含水难溶性药物的聚合物胶束制剂的体外释放试验及评价方法 |
CN109248159A (zh) * | 2018-10-08 | 2019-01-22 | 上海交通大学 | 每月一针艾塞那肽控释微球的制备方法 |
CN112824893A (zh) * | 2019-11-21 | 2021-05-21 | 浙江圣兆药物科技股份有限公司 | 一种微球中乙交酯和丙交酯单体的检测方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN114712312A (zh) | 2022-07-08 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP2063874B1 (en) | Method for producing microspheres loaded with drugs and microspheres loaded with drugs produced thereby | |
Garner et al. | A protocol for assay of poly (lactide-co-glycolide) in clinical products | |
Lu et al. | Microparticles produced by the hydrogel template method for sustained drug delivery | |
Marquette et al. | Stability study of full-length antibody (anti-TNF alpha) loaded PLGA microspheres | |
CN103768013A (zh) | 以精制两亲性嵌段共聚物为载体的紫杉醇聚合物胶束 | |
KR20190064526A (ko) | 도네페질을 함유하는 서방성 주사제제 및 그 제조방법 | |
CN114712312B (zh) | 一种控制微球活性成分释放的方法 | |
CN109414401B (zh) | 用于胃肠外给药的生物可降解聚合物微球组合物 | |
Ojha et al. | Lyophilization stabilizes clinical‐stage core‐crosslinked polymeric micelles to overcome cold chain supply challenges | |
CN106995528B (zh) | 一种聚乙二醇单甲醚-聚乳酸嵌段共聚物的精制方法 | |
Bakhshi et al. | Nanoparticle delivery systems formed using electrically sprayed co-flowing excipients and active agent | |
CN106361724B (zh) | 一种20(R)-人参皂苷Rg3缓释纳米微球组合及其制备方法 | |
CN109475498B (zh) | 包含水难溶性药物的聚合物胶束制剂的体外释放试验及评价方法 | |
CZ20031559A3 (cs) | Mikročástice se zlepšeným profilem uvolňování a způsob jejich výroby | |
CN110051652A (zh) | Plga/fk506载药纳米微球及其制备方法和应用 | |
CN116102721A (zh) | 一种聚乙二醇单甲醚聚乳酸共聚物及其制备方法和其应用 | |
CN118201599A (zh) | 一种可平稳释放的持续性递送制剂及其制备方法 | |
WO2015158270A1 (zh) | 一种含有艾塞那肽的组合物及其制备方法 | |
CN112824893A (zh) | 一种微球中乙交酯和丙交酯单体的检测方法 | |
CN110882222B (zh) | 颗粒组合物及制备方法和应用 | |
CN109939220B (zh) | 具有速释和缓释效果的多肽微球及其制备方法 | |
CN103340830B (zh) | 注射用更昔洛韦纳米囊冻干制剂及其制备方法 | |
CN109350747A (zh) | 一种zl006环己酯聚合物纳米递药系统及其制备方法 | |
CN114042046B (zh) | 一种可溶性注射用伊布替尼白蛋白纳米制剂及其制备方法和应用 | |
CN110964204B (zh) | 一种载电正性胶束/胰岛素复合物的plga微球及其制备方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |