CN114711141B - 提高红大戟组培苗驯化成活率的培养基及其驯化方法 - Google Patents

提高红大戟组培苗驯化成活率的培养基及其驯化方法 Download PDF

Info

Publication number
CN114711141B
CN114711141B CN202210272047.8A CN202210272047A CN114711141B CN 114711141 B CN114711141 B CN 114711141B CN 202210272047 A CN202210272047 A CN 202210272047A CN 114711141 B CN114711141 B CN 114711141B
Authority
CN
China
Prior art keywords
rooting
culture medium
cluster
buds
euphorbia
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202210272047.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN114711141A (zh
Inventor
邓国宾
杨军文
曾祥飞
王德新
张媛
向建英
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yunnan Plant Insect Medicine Biotechnology Co ltd
Southwest Forestry University
Original Assignee
Yunnan Plant Insect Medicine Biotechnology Co ltd
Southwest Forestry University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yunnan Plant Insect Medicine Biotechnology Co ltd, Southwest Forestry University filed Critical Yunnan Plant Insect Medicine Biotechnology Co ltd
Priority to CN202210272047.8A priority Critical patent/CN114711141B/zh
Publication of CN114711141A publication Critical patent/CN114711141A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN114711141B publication Critical patent/CN114711141B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/002—Culture media for tissue culture
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G24/00—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor
    • A01G24/10—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing inorganic material
    • A01G24/12—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing inorganic material containing soil minerals
    • A01G24/15—Calcined rock, e.g. perlite, vermiculite or clay aggregates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G24/00—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor
    • A01G24/20—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing natural organic material
    • A01G24/22—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing natural organic material containing plant material
    • A01G24/25—Dry fruit hulls or husks, e.g. chaff or coir
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01G—HORTICULTURE; CULTIVATION OF VEGETABLES, FLOWERS, RICE, FRUIT, VINES, HOPS OR SEAWEED; FORESTRY; WATERING
    • A01G24/00—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor
    • A01G24/20—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing natural organic material
    • A01G24/28—Growth substrates; Culture media; Apparatus or methods therefor based on or containing natural organic material containing peat, moss or sphagnum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
    • A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
    • A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
    • A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P60/00—Technologies relating to agriculture, livestock or agroalimentary industries
    • Y02P60/40—Afforestation or reforestation

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Environmental Sciences (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Soil Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Cultivation Of Plants (AREA)

Abstract

本发明涉及药用植物组织培养及中药材领域，具体涉及一种提高红大戟组培苗驯化成活率的培养基及其驯化方法，培养基包括：丛生芽诱导培养基、丛生芽增殖培养基和丛生芽生根培养基；培养步骤包括：外植体消毒、丛生芽诱导、丛生芽增殖、丛生芽生根和生根苗驯化。本发明在生根时，使用低浓度的2,4‑D及IBA搭配，可有效促进红大戟的生根，可使生根率接近100％，同时，在生根瓶培养基中添加了2.0～2.4μg/L的硝酸银及0.2～0.3mg/L的MET，能将生根苗的玻化现象完全抑制，能在很大程度上提高驯化成活率。

Description

提高红大戟组培苗驯化成活率的培养基及其驯化方法
技术领域
本发明涉及药用植物组织培养及中药材领域，具体涉及一种提高红大戟组培苗驯化成活率的培养基及其驯化方法。
背景技术
红大戟(Knoxia valerianoides Thorelet Pitard)又名红芽戟、紫大戟、广大戟、南大戟等，为茜草科红芽大戟属多年生草本植物，主要生长于海拔50～1500米的山坡草地上，我国分布于云南、广东、福建、海南、广西、浙江等省区，国外在印度、缅甸、柬埔寨、尼泊尔、泰国等地亦有分布。
红大戟以块根入药，有泻水逐饮，消肿散结的功效，主要用于治疗水肿胀满，胸腹积水，痰饮积聚，气逆咳喘，二便不利，痈肿疮毒，瘰疬痰核等症。现代医药研究表明，红大戟内含大戟素甲、乙、丙，蒽醌类化合物、丁香酸、虎刺醛、甲基异茜草素、红大戟素等，主要有抑菌及利尿作用。临床上主要用于治疗胸腹积水、痰饮喘满、水肿腹胀、二便不利、痈肿疮毒、瘰疬痰核等。目前以红大戟为主要原料的中药制剂有外用紫金锭、白百抗痨颗粒、白药胶囊、白药散等近30种。
随着国家大力推广及发展中医药大健康，中医药市场需求的不断扩大，红大戟作为各著名中药制剂如白药胶囊、白药散、外用紫金锭等重要原料药，其市场需求亦逐年迅猛增长。目前红大戟药材主要来源为野生资源，逐年扩大的市场需求，使得红大戟价格迅猛增长，导致野生资源被无序采挖。近年来，在云南、广西、广东等省市逐步开展红大戟的人工种植，而目前红大戟繁殖技术主要依靠种子繁殖，但红大戟种子由于种子未充分成熟或种胚发育不完全，使得种子发芽率极低。据云南保山、楚雄等各种植大户介绍，目前红大戟种子在人工条件下，发芽率不超过0.01％，同时，红大戟市场价格与大戟素、红大戟素等有效成分含量成正相关，而通过种子繁殖存在种质质量参差不齐，遗传性状不稳定等情况。
近年来广西大学、广西药用植物园、广西科学院生物研究所、湖北三峡学院等科研院所纷纷展开了红大戟及相关的组培技术研究，但现有技术条件下，红大戟组培繁育技术存在增殖系数低、增殖及生根过程中玻化极其严重、生根苗出瓶后脱水极快，生根苗驯化成活率低等情况。
本发明针对现有组培技术的不足，特发明了一种不用经过愈伤而直接诱导丛生芽，再通过丛生芽增殖及生根获得商品苗，其具有操作简便，增殖系数高，增殖培养过程玻化率低，生根培养过程无玻化现象，瓶苗抗逆性强，驯化成活率高等有点。
发明内容
本发明的目的是针对背景技术中存在的问题，提供一种提高红大戟组培苗驯化成活率的培养基及其驯化方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：提高红大戟组培苗驯化成活率的培养基，包括：丛生芽诱导培养基、丛生芽增殖培养基和丛生芽生根培养基，
所述丛生芽诱导培养基配方为：MS+NAA 0.05～0.1mg/L+TDZ 0.3～0.5mg/L+KT1.5～2.0mg/L+活性炭0.5～0.7g/L；
所述丛生芽增殖培养基配方为：1/2MS+IBA 0.2～0.3mg/L+氯吡苯脲(CPPU)0.03～0.06mg/L+水解络蛋白(CH)30～40mg/L+硝酸银1.0～1.5μg/L；
所述丛生芽生根培养基配方为：1/2WPM+IBA 0.6～0.8mg/L+2,4-D 0.05～0.08mg/L+水杨酸(SA)7～9mg/L+多效唑(MET)0.2～0.3mg/L+硝酸银2.0～2.4μg/L+活性炭0.8～0.9g/L。
利用上述培养基来提高红大戟组培苗驯化成活率方法，包括如下步骤：
(1)外植体清洁：将红大戟移栽于室内，每隔3天用75％多菌灵1000倍液喷施茎叶，连续喷施3次后取红大戟顶端30cm内茎段，去叶后将其剪成2～3cm带芽小段，用饱和肥皂水溶液涮洗10～15min后，用自来水洗净，后加2～3滴吐温-80，震摇15～20min，后用自来水冲淋50～60min；
(2)外植体消毒：外植体洗净后转移至超净台，用75％酒精10～15s，无菌水涮洗2～3次，8％双氧水溶液10～15min，无菌水涮洗3～4次，0.4％新洁尔灭溶液消毒40～45min，无菌水涮洗4～5次；
(3)丛生芽诱导：将消毒好的丛生芽，用无菌纸吸去表面水分，同时剪去两端伤口，按极性接种在MS+NAA 0.05～0.1mg/L+TDZ 0.3～0.5mg/L+KT 1.5～2.0mg/L+活性炭0.5～0.7g/L的丛生芽诱导培养基中，在温度为25±2℃，光照强度2000～3000Lux，日照光12h的光暗交替环境下培养35天；
(4)丛生芽的增殖：丛生芽切成单芽，按极性接种在1/2MS+IBA 0.2～0.3mg/L+氯吡苯脲(CPPU)0.03～0.06mg/L+水解络蛋白(CH)30～40mg/L+硝酸银1.0～1.5μg/L的增殖培养基中，在温度为25±2℃，光照强度2000～3000Lux，日照光12h的光暗交替环境下培养25～30天；
(5)丛生芽的生根：将增殖的丛生芽切成单芽，接种在以1/2WPM+IBA 0.6～0.8mg/L+2,4-D 0.05～0.08mg/L+水杨酸(SA)7～9mg/L+多效唑(MET)0.2～0.3mg/L+硝酸银2.0～2.4μg/L+活性炭0.8～0.9g/L的生根培养基中，在温度为25±2℃，光照强度2000～3000Lux，日照光14h的光暗交替环境下培养20～25天；
(6)生根苗的驯化：将红大戟组培生根苗，移栽于生根基质中，驯化环境为具65～75％遮阴率的大棚下，移栽后喷施一次30～40mg/L的水杨酸(SA)，后每隔5～7天喷施一次30～40mg/L的水杨酸(SA)。移栽前十天保持空气湿度在100％，后逐步降低空气湿度，整个驯化期间保持基质湿度在50～60％。
进一步的，步骤(6)中，所述生根基质为泥炭土、椰糠和珍珠岩，其重量比为4:6:1。
本发明的有益技术效果是：
1.本发明在增殖过程中，细胞分裂素采用氯吡苯脲(CPPU)，同时搭配生长素IBA，氯吡苯脲(CPPU)活性极强，低剂量的即可形成高增殖系数，同时减少了玻化率，而同时添加水解络蛋白(CH)，能有效提高红大戟的粗壮程度，亦能有效抑制玻化率，而一定浓度硝酸银的添加，能最大程度的将玻化率降到最低。综上，各植物生长调节剂与其他成分的有效添加剂合理剂量的有效搭配，在增殖过程中，既能提高红大戟的增殖系数，又能在高增殖系数下提高苗质量，还能最大程度的抑制玻化的发生，而增殖苗低的玻化率，在进行生根培养时，亦能在在很大程度的降低生根苗玻化率。
2.目前现有技术对红大戟的生根基本都能很好解决，但红大戟在生根时亦极易发生玻化，而玻化的生根苗，在驯化时，几乎不能成活，生根苗的玻化直接影响了红大戟的驯化成活率。本发明在生根时，使用低浓度的2,4-D及IBA搭配，可有效促进红大戟的生根，可使生根率接近100％，同时，在生根瓶培养基中添加了2.0～2.4μg/L的硝酸银及0.2～0.3mg/L的多效唑(MET)，能将生根苗的玻化现象完全抑制，能在很大程度上提高驯化成活率。
3.由于组培苗一般是在组培瓶内进行培育，其环境处于全密封状态，小环境空气湿度一般保持在100％，使得组培苗叶片上气孔几乎都是全部打开的。一般情况下，组培苗出瓶时，由于空气湿度骤降，一定时间内即可表现为一定程度的脱水，但大部分组培苗在脱水时间一般在1～6h，一些叶片较厚的植物其脱水时间更长。但红大戟组培苗在出瓶5min内即表现脱水，出瓶20～40min时即表现较为严重脱水，而严重脱水后较难恢复，严重影响了驯化成活率。本发明特在生根培养时，添加了7～9mg/L的水杨酸(SA)，同时添加了0.2～0.3mg/L的多效唑(MET)，改变了红大戟生根苗的气孔、叶片、茎秆等特征，使开始脱水时间延长至40～60min，同时由于水杨酸(SA)的使用，抗逆性增强，脱水后恢复相对较好一些，能很大程度的提高驯化成活率；
4.红大戟在驯化过程中，高的空气湿度可保证红大戟不出现脱现象，但高的空气湿度极易导致茎基部出现茎腐。本发明在驯化练苗时，采用泥炭土，椰糠，珍珠岩，比例为4:6:1的混合基质，能有效提高基质透气性，减少茎腐病的发生，同时驯化过程中，定期喷施30～40mg/L的水杨酸(SA)，能有效改善红大戟对空气湿度的过度依赖，同时亦能提高红大戟的抗逆性，最终有效提高红大戟组培苗的驯化成活率。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
一种提高红大戟组培苗驯化成活率方法，包括如下步骤：
1.外植体的清洁：将红大戟移栽于室内，每隔3天用75％多菌灵1000倍液喷施茎叶，连续喷施3次后取红大戟顶端30cm内茎段，去叶后将其剪成2cm带芽小段，用饱和肥皂水溶液涮洗10min后，用自来水洗净，后加2滴吐温-80，震摇15min，后用自来水冲淋50min；
2.外植体的消毒：外植体洗净后，转移至超净台，用75％(v/v)酒精10s，无菌水涮洗2次，8％(v/v)双氧水溶液10min，无菌水涮洗3次，0.4％(v/v)新洁尔灭溶液消毒40min，无菌水涮洗4次；
3.丛生芽的诱导：将消毒好丛生芽，用无菌纸吸去表面水分，同时剪去两端伤口，按极性接种在MS+NAA 0.05mg/L+TDZ 0.3mg/L+KT 1.5mg/L+活性炭0.5g/L的丛生芽诱导培养基中，在温度为25℃，光照强度2000Lux，日照光12h的光暗交替环境下培养35天；
4.丛生芽的增殖：将诱导出的丛生芽，切成单芽，按极性接种在1/2MS+IBA 0.2mg/L+CPPU 0.03mg/L+CH 30mg/L+硝酸银1.0μg/L的增殖培养基中，在温度为25℃，光照强度2000Lux，日照光12h的光暗交替环境下培养25天；
5.丛生芽的生根：将增殖的丛生芽，切成单芽，接种在以1/2WPM+IBA 0.6mg/L+2,4-D 0.05mg/L+SA 7mg/L+MET 0.2mg/L+硝酸银2.0μg/L+活性炭0.8g/L的生根培养基中，在温度为25℃，光照强度2000Lux，日照光14h的光暗交替环境下培养25天；
6.生根苗的驯化：将红大戟组培生根苗，移栽于泥炭土，椰糠，珍珠岩，比例为4:6:1的混合基质中，驯化环境为具70％遮阴率的大棚下，移栽后喷施一次30mg/L的SA，后每隔5天喷施一次30mg/L的SA。移栽前十天保持空气湿度在100％，后逐步降低空气湿度，整个驯化期间保持基质湿度在55％。
实施例2
一种提高红大戟组培苗驯化成活率方法，包括如下步骤：
1.外植体的清洁：将红大戟移栽于室内，每隔3天用75％多菌灵1000倍液喷施茎叶，连续喷施3次后取红大戟顶端30cm内茎段，去叶后将其剪成3cm带芽小段，用饱和肥皂水溶液涮洗15min后，用自来水洗净，后加3滴吐温-80，震摇20min，后用自来水冲淋60min；
2.外植体的消毒：外植体洗净后，转移至超净台，用75％(v/v)酒精15s，无菌水涮洗3次，8％(v/v)双氧水溶液15min，无菌水涮洗4次，0.4％(v/v)新洁尔灭溶液消毒45min，无菌水涮洗5次。
3.丛生芽的诱导：将消毒好的丛生芽，用无菌纸吸去表面水分，同时剪去两端伤口，按极性接种在MS+NAA 0.1mg/L+TDZ 0.5mg/L+KT 2.0mg/L+活性炭0.7g/L的丛生芽诱导培养基中，在温度为23℃，光照强度3000Lux，日照光12h的光暗交替环境下培养35天；
4.丛生芽的增殖：将诱导出的丛生芽，切成单芽，按极性接种在1/2MS+IBA 0.3mg/L+CPPU 0.06mg/L+CH 40mg/L+硝酸银1.5μg/L的增殖培养基中，在温度为23℃，光照强度3000Lux，日照光12h的光暗交替环境下培养30天；
5.丛生芽的生根：将增殖的丛生芽，切成单芽，接种在以1/2WPM+IBA 0.8mg/L+2,4-D 0.08mg/L+SA 9mg/L+MET 0.3mg/L+硝酸银2.4μg/L+活性炭0.9g/L的生根培养基中，在温度为23℃，光照强度3000Lux，日照光14h的光暗交替环境下培养25天；
6.生根苗的驯化：将红大戟组培生根苗，移栽于泥炭土，椰糠，珍珠岩，比例为4:6:1的混合基质中，驯化环境为具75％遮阴率的大棚下，移栽后喷施一次40mg/L的SA，后每隔7天喷施一次40mg/L的SA。移栽前十天保持空气湿度在100％，后逐步降低空气湿度，整个驯化期间保持基质湿度在55％。
对比例1
采用了本实施例1或者实施2的驯化方法过程，只是在生根苗的驯化过程中，不喷施水杨酸(SA)，其目的是验证水杨酸(SA)对驯化结果影响。
对比例2
1.照公开专利《一种红芽大戟繁育方法》(专利申请号：CN10810246A)项下实施例1进行组培苗的愈伤诱导、愈伤分化、继代增殖及生根培养。
2.生根苗驯化：将红大戟组培生根苗，移栽于泥炭土，椰糠，珍珠岩，比例为4:6:1的混合基质中，驯化环境为具70％遮阴率的大棚下，移栽后喷施一次40mg/L的SA，后每隔5～7天喷施一次40mg/L的SA。移栽前十天保持空气湿度在100％，后逐步降低空气湿度，整个驯化期间保持基质湿度在55％。
对比例3
1.照已发表期刊文献《红芽大戟组织培养条件的优化》(李林轩，韦莹等，江苏农业科学[J]，2014，42(4)60～62)，采用最佳丛生芽诱导培养基MS+NAA 0.4mg/L+6-BA 2.0mg/L，最佳丛生芽增殖培养基MS+IAA 0.2mg/L+NAA 0.2mg/L+6-BA 1.5mg/L+活性炭0.3g/L，最佳丛生芽生根培养基1/2MS+IBA 0.75mg/L+PPP333 0.2mg/L，进行丛生芽的诱导、增殖及生根。
2.将获得的生根苗照《红芽大戟组织培养条件的优化》(李林轩，韦莹等，江苏农业科学[J]，2014，42(4)60～62)，移栽于经121℃高压蒸汽消毒的泥炭土+珍珠岩(1:1)基质中，驯化环境为具70％遮阴率的大棚下，移栽前十天保持空气湿度在100％，后逐步降低空气湿度，整个驯化期间保持基质湿度在55％。
对比例4
1.照已发表期刊文献《红芽大戟组织培养条件的优化》(李林轩，韦莹等，江苏农业科学[J]，2014，42(4)60～62)，采用最佳丛生芽诱导培养基MS+NAA 0.4mg/L+6-BA 2.0mg/L，最佳丛生芽增殖培养基MS+IAA 0.2mg/L+NAA 0.2mg/L+6-BA 1.5mg/L+活性炭0.3g/L，最佳丛生芽生根培养基1/2MS+IBA 0.75mg/L+PPP333 0.2mg/L，进行丛生芽的诱导、增殖及生根。
2.将红大戟组培生根苗，移栽于泥炭土，椰糠，珍珠岩，比例为4:6:1的混合基质中，驯化环境为具70％遮阴率的大棚下，移栽后喷施一次40mg/L的SA，后每隔5～7天喷施一次40mg/L的SA。移栽前十天保持空气湿度在100％，后逐步降低空气湿度，整个驯化期间保持基质湿度在55％。
对比例5
1.照已发表期刊文献《濒危药材红芽大戟组培快繁影响因素研究》(莫勇生，孙文波等，广西科学院学报[J]，2014，30(3)：181～184)，采用最佳丛生芽诱导培养基MS+6-BA1.5mg/L+NAA 0.15mg/L，最佳继代增殖培养基MS+6-BA 3.0mg/L+NAA 0.3mg/L，最佳生根培养基1/2MS+IBA 2.0mg/L+NAA 0.2mg/L。
2.将红大戟组培生根苗，移栽于泥炭土，椰糠，珍珠岩，比例为4:6:1的混合基质中，驯化环境为具70％遮阴率的大棚下，移栽后喷施一次40mg/L的SA，后每隔5～7天喷施一次40mg/L的SA。移栽前十天保持空气湿度在100％，后逐步降低空气湿度，整个驯化期间保持基质湿度在55％。
上述各实施例试验数据如下表
Figure BDA0003553888250000081
由上表可以看出，现有技术条件下，不论是增殖还是生根，其玻化率均较高，同时苗较为细弱，而采用一定浓度的PPP333，可有效降低生根苗玻化率，使生根苗更加健壮，但仍不能完全抑制生根苗玻化情况的发生，最终影响生根苗的驯化成活，从实施例2与对比例1比较以及对比例3与对比例4比较可以看出，本发明在驯化时基质配比，驯化时喷施一定浓度的SA，可在一定程度增加驯化成活率。
最后所应说明的是：以上实施例仅用以说明而非限制本发明的技术方案，尽管参照上述实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应该理解：依然可以对本发明进行修改或者等同替换，而不脱离本发明的精神和范围的任何修改或局部替换，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。

Claims (3)

1.一种提高红大戟组培苗驯化成活率方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）外植体清洁：将红大戟移栽于室内，每隔3天用75%多菌灵1000倍液喷施茎叶，连续喷施3次后取红大戟顶端30cm内茎段，去叶后将其剪成2～3cm带芽小段，用饱和肥皂水溶液涮洗10～15min后，用自来水洗净，后加2～3滴吐温-80，震摇15～20min，后用自来水冲淋50～60min；
（2）外植体消毒：外植体洗净后转移至超净台，用75%酒精10～15s，无菌水涮洗2～3次，8%双氧水溶液10～15min，无菌水涮洗3～4次，0.4%新洁尔灭溶液消毒40～45min，无菌水涮洗4～5次；
（3）丛生芽诱导：将消毒好的丛生芽，用无菌纸吸去表面水分，同时剪去两端伤口，按极性接种在MS+NAA 0.05～0.1mg/L+TDZ 0.3～0.5mg/L+KT 1.5～2.0mg/L+活性炭0.5～0.7g/L的丛生芽诱导培养基中，在温度为25±2℃，光照强度2000～3000Lux，日照光12h的光暗交替环境下培养35天；
（4）丛生芽增殖：丛生芽切成单芽，按极性接种在1/2MS+IBA 0.2～0.3mg/L+氯吡苯脲（CPPU） 0.03～0.06mg/L+水解酪蛋白（CH） 30～40mg/L+硝酸银1.0～1.5μg/L的丛生芽增殖培养基中，在温度为25±2℃，光照强度2000～3000Lux，日照光12h的光暗交替环境下培养25～30天；
（5）丛生芽生根：将增殖的丛生芽切成单芽，接种在以1/2WPM+IBA 0.6～0.8mg/L+2,4-D 0.05～0.08mg/L+水杨酸（SA） 7～9mg/L +多效唑（MET） 0.2～0.3mg/L+硝酸银 2.0～2.4μg/L+活性炭 0.8～0.9g/L的丛生芽生根培养基中，在温度为25±2℃，光照强度2000～3000 Lux，日照光14h的光暗交替环境下培养20～25天；
（6）生根苗的驯化：将红大戟组培生根苗，移栽于生根基质中，驯化环境为65～75%遮阴率的大棚下，移栽后喷施一次30～40mg/L的水杨酸（SA），后每隔5～7天喷施一次30～40mg/L的水杨酸（SA）。
2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤（6）中，所述生根基质为泥炭土、椰糠和珍珠岩，其重量比为4:6:1。
3.根据权利要求1-2任一项所述方法在红大戟组培苗繁育中的应用。
CN202210272047.8A 2022-03-18 2022-03-18 提高红大戟组培苗驯化成活率的培养基及其驯化方法 Active CN114711141B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210272047.8A CN114711141B (zh) 2022-03-18 2022-03-18 提高红大戟组培苗驯化成活率的培养基及其驯化方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202210272047.8A CN114711141B (zh) 2022-03-18 2022-03-18 提高红大戟组培苗驯化成活率的培养基及其驯化方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN114711141A CN114711141A (zh) 2022-07-08
CN114711141B true CN114711141B (zh) 2023-01-03

Family

ID=82237932

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202210272047.8A Active CN114711141B (zh) 2022-03-18 2022-03-18 提高红大戟组培苗驯化成活率的培养基及其驯化方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN114711141B (zh)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115176688B (zh) * 2022-07-12 2023-08-11 神农架国家公园科学研究院 曲茎石斛仿野生种植的方法
CN117337767B (zh) * 2023-12-06 2024-01-30 西南林业大学 彩虹大戟组培快繁方法及应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014133710A (ja) * 2013-01-09 2014-07-24 Kao Corp Ｃｇｉ−５８発現促進剤

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1312276C (zh) * 2004-03-11 2007-04-25 中国科学院植物研究所 一种离体培养药蒲公英的方法
CN101353637A (zh) * 2008-09-02 2009-01-28 楚雄师范学院 小红参组织培养方法
JP7121442B2 (ja) * 2018-07-05 2022-08-18 住友ゴム工業株式会社 Ｔａｒａｘａｃｕｍ属植物の形質転換植物の製造方法
CN110810246A (zh) * 2019-12-03 2020-02-21 赵健华 一种红芽大戟繁育方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2014133710A (ja) * 2013-01-09 2014-07-24 Kao Corp Ｃｇｉ−５８発現促進剤

Also Published As

Publication number Publication date
CN114711141A (zh) 2022-07-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114711141B (zh) 提高红大戟组培苗驯化成活率的培养基及其驯化方法
CN102613086B (zh) 一种铁皮石斛无激素组织培养的方法
CN101637096B (zh) 海南粗榧种子种苗快速高效繁育方法
CN103651145B (zh) 一种沉水樟组织培养方法
CN115362940A (zh) 猪笼草组培快速育苗方法及其应用
CN111406652A (zh) 一种绿色球状体(ggb)途径的槲蕨种苗组培快繁方法
CN104206281A (zh) 铁线莲优雅紫的组织培养方法
CN102301957B (zh) 一种以重楼根茎为外植体的愈伤组织培养方法
CN110278871B (zh) 利用荆半夏组培丛生苗一步成种的组培方法
CN110810246A (zh) 一种红芽大戟繁育方法
CN111657309A (zh) 一种植物源生根剂及其制备方法
CN115088622B (zh) 一种提高云南独蒜兰组培苗假鳞茎膨大和数量的方法
CN113678735B (zh) 一种半红树植物黄槿的组织培养方法
CN111434218A (zh) 一种黄精品种复壮的组培快繁方法
CN110250004B (zh) 一种山乌龟组织培养快速繁殖的方法
CN108243951B (zh) 一种白花蛇舌草的组织培养方法
CN113366945A (zh) 一种在中轻度镉污染农田边修复边安全种植玉米的间套作方法
CN111480577A (zh) 一种巫山淫羊藿花序组培快繁方法
CN112913693B (zh) 利用搭桥技术防止植物愈伤褐化和胶状物形成的有效方法
CN111264393B (zh) 一种快速繁育淫羊藿试管苗的方法
CN114190276B (zh) 一种利用叶片生产盘龙参种苗的组培快繁的方法
CN107135947A (zh) 柳树幼胚成苗组织培养方法
CN117717004B (zh) 南非龟甲龙组培育苗方法及应用
CN114557280B (zh) 一种土瓶草组织培养方法及应用
CN118020646A (zh) 一种俄罗斯饲料菜组织培养快繁的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant