CN114703073B

CN114703073B - 解脂亚罗酵母及其应用和发酵产赤藓糖醇的方法

Info

Publication number: CN114703073B
Application number: CN202210293824.7A
Authority: CN
Inventors: 佟毅; 李义; 张媛; 陈绍辉; 赵国淼; 刘安妮; 潘喜春; 武丽达; 孙浩轩; 魏超; 徐杨; 王小艳; 郭元亨
Original assignee: Cofco Nutrition and Health Research Institute Co Ltd; Cofco Jilin Bio Chemical Technology Co Ltd
Current assignee: Cofco Nutrition and Health Research Institute Co Ltd; Cofco Jilin Bio Chemical Technology Co Ltd
Priority date: 2022-03-23
Filing date: 2022-03-23
Publication date: 2023-08-08
Anticipated expiration: 2042-03-23
Also published as: CN114703073A

Abstract

本发明涉及发酵领域，公开了一种解脂亚罗酵母及其应用和一种发酵产赤藓糖醇的方法。该解脂亚罗酵母的保藏编号为CGMCC No.22632。该解脂亚罗酵母发酵产赤藓糖醇的量高，基本不积累甘露醇、阿拉伯糖醇、甘油。使用本发明的解脂亚罗酵母发酵产赤藓糖醇，赤藓糖醇的产量高、收率高，发酵副产物少，发酵液中杂质少，更有利于赤藓糖醇的分离。

Description

解脂亚罗酵母及其应用和发酵产赤藓糖醇的方法

技术领域

本发明涉及发酵领域，具体涉及一种解脂亚罗酵母及其应用和一种发酵产赤藓糖醇的方法。

背景技术

赤藓糖醇，即1,2,3,4-丁四醇，是一种天然糖醇，在海藻、蘑菇、梨、葡萄和西瓜等食物中，以及常见发酵食品如酱油、葡萄酒中少量存在。赤藓糖醇为白色结晶性粉末，甜度为蔗糖的65％，甜味纯正并具有清凉感，对酸和热的稳定性高，与其他功能性糖醇相比，具有分子量较低、溶液渗透压高、吸湿性等特点。赤藓糖醇热量仅为蔗糖的1/10，人体耐受性高，不引起血糖变化，可以作为甜味剂添加到食品和日化消费品中。

目前，工业化制备赤藓糖醇的方法大多是以葡萄糖为原料，经过微生物发酵而得。所用微生物多为食品级高渗酵母，如假丝酵母属(Candida)、丛梗孢酵母属(Moniliella)、丝孢酵母属(Trichospornides)、亚罗酵母属(Yarrowia)等属。我国生产赤藓糖醇的微生物主要为解脂亚罗酵母(Yarrowia lipolytica)，但该菌株普遍存在糖醇类副产物较多(2-3wt％甚至更多)，易产生油脂类物质，且发酵后期到分离纯化前会消耗赤藓糖醇等问题，因此对发酵控制要求高，并且会影响赤藓糖醇提取收率。因此，获得一株发酵产物更纯并且不会消耗产物的赤藓糖醇生产菌株十分有必要。

CN111363759A中通过基因工程方法改造解脂亚罗酵母，也达到了没有糖醇类副产物和后期不会消耗赤藓糖醇的效果，但没有提及其他杂质的问题。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术存在的问题，提供一种解脂亚罗酵母(Yarrowia lipolytica)及其应用以及一种赤藓糖醇生产的方法。使用该解脂亚罗酵母(Yarrowia lipolytica)生产赤藓糖醇，赤藓糖醇产量高、收率高，发酵副产物少，发酵液中杂质少，更有利于赤藓糖醇的分离。

为了实现上述目的，本发明第一方面提供一种解脂亚罗酵母(Yarrowialipolytica)，其特征在于，该解脂亚罗酵母的保藏编号为CGMCC No.22632。

本发明第二方面提供解脂亚罗酵母CGMCC No.22632在发酵产赤藓糖醇中的应用。

本发明第三方面提供一种发酵产赤藓糖醇的方法，其特征在于，该方法包括：将如前所述的解脂亚罗酵母接种至发酵培养基中进行发酵，得到赤藓糖醇。

本发明第四方面提供一种解脂亚罗酵母CGMCC No.22632和/或其发酵产物在制备甜味剂中的应用。

本发明提供的解脂亚罗酵母发酵产赤藓糖醇的量高，基本不积累甘露醇、阿拉伯糖醇、甘油。使用本发明的解脂亚罗酵母发酵产赤藓糖醇获得的有益效果包括：

1、副产物少：使用本发明的解脂亚罗酵母发酵产赤藓糖醇，发酵副产物极少，基本不积累甘露醇、阿拉伯糖醇、甘油等副产物，发酵液中赤藓糖醇的纯度高，更有利于结晶分离；

2、赤藓糖醇产量高：使用本发明的解脂亚罗酵母发酵产赤藓糖醇，菌株不会消耗赤藓糖醇，有利于赤藓糖醇的积累；

3、发酵液杂质少，赤藓糖醇收率高：使用本发明的解脂亚罗酵母发酵产赤藓糖醇，发酵液中大分子杂质少(分离过程中没有白色粘稠杂质产生，白色粘稠杂质中脂肪占比高)，有利于分离提取操作，且废液体积减少，赤藓糖醇收率提高。

生物保藏

本发明的菌株的分类命名为解脂亚罗酵母(Yarrowia lipolytica)，于2021年05月28日被保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101)(保藏单位的缩写为CGMCC)，保藏编号为CGMCC No.22632。

具体实施方式

在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。

本发明一方面提供一种解脂亚罗酵母(Yarrowia lipolytica)，该解脂亚罗酵母的保藏编号为CGMCC No.22632。

本发明第二方面提供上述解脂亚罗酵母在发酵产赤藓糖醇中的应用。

本发明第三方面提供一种发酵产赤藓糖醇的方法，该方法包括：将如前所述的解脂亚罗酵母接种至发酵培养基中进行发酵，得到含赤藓糖醇的发酵液；其中。

本发明的一些实施方式中，所述发酵的条件可以为本领域常用的发酵产赤藓糖醇的条件。优选的情况下，所述发酵的条件包括：发酵温度为30-35℃，发酵时间为60-120h。进一步优选的，为了进一步提高赤藓糖醇产量，所述发酵温度为30-32℃。

本发明的一些实施方式中，所述方法还包括：在发酵过程中，控制发酵液中的溶氧量为10-35vol％。本发明中，对所述发酵液中的溶氧量控制的方式可以为本领域常用的方式，例如可以为控制发酵罐的通气量、发酵罐的转速，本领域技术人员可以根据实际情况调整。

本发明中，所述发酵培养基可以为本领域常用的用于发酵产赤藓糖醇的培养基。优选的情况下，所述发酵培养基含有碳源、氮源、可选的无机营养盐和可选的表面活性剂。优选的情况下，相对于1L所述发酵培养基，所述碳源的含量为150-350g，所述氮源的含量为5-30g，无机营养盐的含量为0-7g，表面活性剂的含量为0-2g。

本发明的一些实施方式中，所述碳源为葡萄糖。

本发明的一些实施方式中，所述氮源可以为酵母浸粉、酵母膏、玉米浆粉、柠檬酸铵、硫酸铵和硫酸氢二铵中的至少一种。

本发明的一些实施方式中，所述无机营养盐为硫酸二氢钾和/或硫酸镁。

本发明的一些实施方式中，所述表面活性剂为吐温80。

本发明的一些优选的实施方式中，相对于1L所述发酵培养基，葡萄糖的含量为150-350g，氮源的含量为5-30g，磷酸二氢钾的含量为0-5g，硫酸镁的含量为0-2g，吐温80的含量为0-2g。优选的情况下，所述发酵培养基的初始pH值为5-6.5。其中，所述氮源可以为本领域常用的氮源，例如可以为酵母浸粉、酵母膏、玉米浆粉、柠檬酸铵、硫酸铵、磷酸氢二铵中的至少一种。

本发明的一些实施方式中，所述发酵培养基的初始pH值为5-6.5。

本发明的一些实施方式中，所述方法还可以包括：在发酵液中的葡萄糖浓度低于100g/L时，向发酵液中流加葡萄糖溶液至折算总糖达到380-450g/L停止流加，继续发酵至发酵液的葡萄糖浓度低于1g/L。其中，所述“折算总糖”指的是：发酵培养基中初始葡萄糖总量(g)及流加的葡萄糖溶液中葡萄糖的总量(g)的总和与停止流加葡萄糖溶液后的发酵液的总体积(L)之比。其中，控制流加葡萄糖溶液的流速以维持发酵液中葡萄糖浓度为100-150g/L。对所述葡萄糖溶液的浓度没有要求，可以为本领域常用的葡萄糖溶液浓度。优选的情况下，所述葡萄糖溶液的浓度可以为600-800g/L。

本发明中，除非特殊说明，所述发酵培养基的溶剂为去离子水。

本发明的一些实施方式中，其中，所述解脂亚罗酵母通过种子液的形式进行接种。

本发明中，所述种子液的制备方法可以为本领域常规的制备方法，例如可以为一级种子培养、二级种子培养，本领域技术人员可以根据实际情况选择培养方式。

本发明中，所述一级种子培养可以为本领域常规的方法，例如可以包括：取甘油菌接种于活化培养基中，28-32℃，180-240rpm培养16-30h。

本发明中，所述“甘油菌”指保存在甘油中的解脂亚罗酵母，活菌数一般为10⁷cfu/mL以上。本发明中，所述“甘油菌”的接种量可以为本领域常规的接种量，例如可以为3‰(v/v)。

本发明中，所述二级种子培养可以为本领域常规的方法。本发明的一些实施方式中，所述二级种子培养为：先取甘油菌或斜面保藏的菌种接种于活化培养基中，28-32℃，180-240rpm培养12-24h，再按照5-15％(v/v)的接种量接种至发酵培养基中，28-32℃，180-350rpm培养12-24h，得到种子液。

本发明的一些实施方式中，所述活化培养基可以为本领域常用的活化解脂亚罗酵母(Yarrowia lipolytica)的培养基。优选的情况下，所述活化培养基含有葡萄糖50-150g/L，酵母浸粉或酵母膏10-30g/L，磷酸二氢钾0.2-1g/L。

本发明中，所述种子液的OD₆₀₀值可以在较宽的范围内选择，优选的情况下，所述种子液的OD₆₀₀值为8-25。

本发明中，所述种子液的接种量可以为本领域常用的接种量。本发明的一些实施方式中，所述种子液的接种量为5-15％(v/v)。

本发明第四方面提供一种上述解脂亚罗酵母和/或其发酵产物在制备甜味剂中的应用。

以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例中，除非特殊说明，所用试剂均可通过商购得到。

以下实施例中，WL固体培养基：葡萄糖50g/L，酵母浸粉4g/L，氯化铁0.0025g/L，硫酸锰0.0025g/L，氯化钾0.425g/L，溴甲酚绿0.022g/L，氯化钙0.125g/L，硫酸镁0.125g/L，酸水解酪蛋白5g/L，磷酸二氢钾0.55g/L，琼脂20g/L，pH 5.5±0.2。

筛选培养基：葡萄糖300g/L，酵母浸粉10g/L，碘乙酸0.5g/L，TTC 0.1g/L，琼脂20g/L。

活化培养基：葡萄糖150g/L，酵母膏15g/L，磷酸二氢钾0.5g/L。

甘油菌指的是保存在甘油中的解脂亚罗酵母，活菌数为10⁷cfu/mL。

发酵液(上清)中葡萄糖的浓度使用SBA-40E型生物传感器进行检测，D-葡萄糖酶膜，进样量25μL；

赤藓糖醇、甘露醇、阿拉伯糖醇、甘油含量(均指发酵液(上清)中的含量)的检测方法为液相色谱检测方法，使用Agilent Technologies 1260Infinity II色谱仪和RID检出器，Aminex HPX-87H Column 300×7.8mm分离柱，流动相为0.005M硫酸。

糖醇转化率为发酵产生的赤藓糖醇的质量与消耗掉的葡萄糖的质量的比值。

实施例1

本实施例用于说明解脂亚罗酵母(Yarrowia lipolytica)CGMCC No.22632的分离、诱变及其发酵效果验证。

(1)菌株分离

从我国怀涿盆地沙城产区自然发酵的酿酒葡萄醪中，在发酵不同阶段取样，对样品进行梯度稀释后涂布于WL固体培养基平板，30℃静置培养至有较多酵母长出。从中挑选出长势较好的菌株，接种在筛选培养基上，30℃培养3-4天，挑选其中生长较好并且显出红色的单菌落，接种至活化培养基，30℃200rpm培养24h，按10％(v/v)接种量将菌液转接入发酵培养基(发酵培养基的成分配比为：220g/L葡萄糖，酵母浸粉5g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁0.2g/L，硫酸铵5g/L，pH6)中，32℃250rpm培养120h，通过液相色谱检测发酵液中产物情况，筛选出4株可产生5g/L以上赤藓糖醇的菌株，并进一步选出产赤藓糖醇最高的一株菌株，该菌株可产生92g/L赤藓糖醇，同时有3g/L副产物甘露醇。

取部分上述最终筛选出的菌株的发酵液进行光学显微镜检测，观察到菌体形态为卵圆形类似酿酒酵母的形态。将上述最终筛选出来的菌株进行平板培养后用光学显微镜进行菌体观察，也观察到菌体形态为卵圆形类似酿酒酵母的形态。对该菌株使用酵母鉴定常用的26s rDNA引物NL1：5’-GCATATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3’(SEQ ID NO:1)和NL4：5’-GGTCCGTGTTTCAAGACGG-3’(SEQ ID NO:2)进行扩增测序，测序结果为：

5’-AAACCAACAGGGATTGCCTCAGTAGCGGCGAGTGAAGCGGCA AAAGCTCAAATTTGAAACCCTCGGGATTGTAATTTGAAGATTTGGCATTGGAGAAAGCTAACCCAAGTTGCTTGGAATAGTACGTCATAGAGGGTGACAACCCCGTCTGGCTAACCGTTCTCCATGTATTGCCTTATCGAAGAGTCGAGTTGTTTGGGAATGCAGCTCAAAGTGGGTGGTAAACTCCATCTAAAGCTAAATACTGGTGAGAGACCGATAGCGAACAAGTACTGTGAAGGAAAGGTGAAAAGAACTTTGAAAAGAGAGTGAAATAGTATGTGAAATTGTTGATAGGGAAGGAAATGAGTGGAGAGTGGCCGAGGTTTCAGCCGCCCCTCGTGGGCGGTGTACTGCCGACGCCGAGTCATCGATAGCGAGACGAGGGTTACAAATGGGAGCGCCTTTCGGGCGTTCTCCCCTAACCCTCCACACTGCCACCGACGACATAATCCACCCATTTCAC-3’(SEQ ID NO:3)，通过NCBI数据库比对，该序列与解脂亚罗酵母(Yarrowia lipolytica)相似度为99.6％，因此该菌株为一株Yarrowia lipolytica，实验室命名为CoY1。

(2)菌株诱变及筛选

为了进一步提高菌株的赤藓糖醇合成水平，对CoY1进行诱变。

将CoY1菌株使用活化培养基培养至对数生长期，进行离心分离得到菌体，用生理盐水洗涤一次，再用生理盐水重悬得到OD₆₀₀＝0.5的菌悬液，进行第一轮诱变。诱变采用常压室温等离子体(ARTP)诱变和紫外照射诱变交替进行的方式。ARTP诱变方法为：10ul菌悬液，以氦气作为等离子体的工作气体，功率120W，气体流量10slpm，处理时间40s、50s、60s；紫外诱变的方法为：取5mL菌悬液均匀铺在6cm无菌平皿上，30W紫外灯距离20cm照射60s左右。诱变后的菌悬液避光条件下用生理盐水梯度稀释并涂布筛选培养基平板，30℃静置避光培养3天左右。挑选菌落红色明显的单克隆接种到活化培养基，30℃200rpm培养24h，按10％(v/v)接种量将菌液转接入发酵培养基(发酵培养基的成分配比为：300g/L葡萄糖，酵母浸粉5g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁0.2g/L，硫酸铵5g/L，pH6)中，32℃250rpm培养96h，通过液相色谱检测发酵液中产物情况，选取其中赤藓糖醇产量高，甘露醇、阿拉伯糖醇、甘油等副产物低的三株较好的单克隆菌株，将这三株菌株混合进行下一轮诱变。最终，通过ARTP和紫外各两轮诱变，选出20株赤藓糖醇产量提高的菌株进行摇瓶发酵复筛：将菌株接种至活化培养基，30℃200rpm培养20h，按10％(v/v)接种量接种到50ml发酵培养基(发酵培养基的成分配比为：葡萄糖325g/L，酵母浸粉5g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁0.2g/L，硫酸铵5g/L，pH6)中，32℃250rpm培养，每24h取样并补充挥发的水分，培养96h，得到3株赤藓糖醇产量明显提升并且副产物基本检测不到的菌株，这三株菌株96h分别可产赤藓糖醇168.5g/L、170.2g/L、167.1g/L，副产物甘露醇含量均低于1g/L，阿拉伯糖醇、甘油含量未检出。命名CoY1-M1、M2、M3，作为备选菌株进行验证。

(3)发酵效果验证

取保藏的CoY1和CoY1-M1、M2、M3甘油菌按3‰(v/v)接种量分别接种至活化培养基，30℃200rpm培养20h，按10％(v/v)接种量将菌液接种至含有发酵培养基的5L发酵罐，定时取样进行检测(发酵初期每隔12h取样检测葡萄糖浓度，根据葡萄糖浓度估算发酵速率，根据葡萄糖浓度和发酵速率判断发酵终点即耗尽葡萄糖，在发酵终点前12h每隔0.5h取样检测葡萄糖浓度)。接种后发酵罐的装液量为60体积％，发酵培养基的成分配比为：葡萄糖315g/L，酵母浸粉5g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁0.2g/L，硫酸铵5g/L，pH6。发酵温度控制32℃，转速为200-800rpm，通气量为0.5-1vvm(L/min·L)，使溶氧量控制在20-25vol％。CoY1-M1、M2、M3分别于92h、90h、93.5h耗尽葡萄糖，CoY1发酵120h后，葡萄糖浓度仍有100g/L左右，继续延长发酵时间葡萄糖浓度下降变缓慢因此终止发酵。M1、M2、M3三株菌发酵终点(耗尽葡萄糖)赤藓糖醇含量189.3g/L、187.8g/L、184.1g/L，甘露醇含量分别为0.39g/L、0.76g/L、1.05g/L，阿拉伯糖醇、甘油检测不到。发酵液下罐后室温密闭放置1天后取样检测，赤藓糖醇含量无明显变化(含量上升均不超过0.5g/L)，而甘露醇含量降低至0.05g/L、0.13g/L、0.41g/L；继续放置到7天再取样检测，赤藓糖醇仍无明显变化，甘露醇基本检测不到。这几株菌均有副产物少、不利用赤藓糖醇的优点。但CoY1-M2发酵过程中泡沫严重出现喷罐，重复3次实验均有严重泡沫问题，并且添加0.1‰(v/v)聚醚多元醇类消泡剂也不能有效解决泡沫问题，因此舍弃该突变株。

将M1和M3的发酵液采用离心—微滤—纳滤工艺进行处理，即先对发酵液进行离心，离心后的发酵液上清先后经过微滤、纳滤。处理工艺的条件为：离心4000rpm，15min，25℃；微滤使用陶瓷膜，操作压力0.15MPa，温度30℃；纳滤截留分子量250-300Da，操作压力1MPa，温度30℃。M1和M3发酵液单位时间微滤透过截留体积比分别为80％和66％，单位时间纳滤透过截留体积比分别为75％和53％。M3的纳滤浓缩侧料液体积较大并且明显浑浊，这部分液体浓缩后出现白色粘稠杂质，经检测，杂质中脂肪占比43wt％，这部分杂质对结晶收率和一次结晶的产品纯度影响较大，而M1发酵液纳滤浓缩侧液体较少，并且浓缩后也没有白色粘稠杂质，对后续结晶分离更为友好。因此综合评估，CoY1-M1为一株适合用于生产赤藓糖醇的菌株，将该菌株进行保藏，保藏编号为CGMCC No.22632。

实施例2

发酵培养基的成分配比为：葡萄糖325g/L，酵母浸粉5g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁0.5g/L，柠檬酸铵5g/L，pH5.8。

取保藏的CoY1-M1甘油菌按3‰(v/v)接种至300mL活化培养基中，30℃200rpm培养20h(OD₆₀₀＝10)，按10％(v/v)接种量接种至含有发酵培养基的5L发酵罐。接种后发酵罐的的装液量为60体积％，发酵温度控制在32℃，转速为200-1000rpm，通气量为0.5-1vvm(L/min·L)，使溶氧量控制在25-32vol％。发酵初期每隔12h取样检测葡萄糖浓度，根据葡萄糖浓度估算发酵速率，根据葡萄糖浓度和发酵速率判断发酵终点(耗尽葡萄糖)，在发酵终点前12h每隔0.5h取样检测葡萄糖浓度。

发酵至发酵液中葡萄糖浓度小于1g/L发酵结束，发酵结束后测定发酵液中赤藓糖醇的含量，并计算糖醇转化率。

97h发酵结束，赤藓糖醇含量为199.4g/L，糖醇转化率61.3％。

实施例3

发酵培养基的成分配比为：葡萄糖220g/L，酵母浸粉1g/L，玉米浆粉5g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁0.2g/L，硫酸铵5g/L，吐温80 0.25g/L，pH6。

取保藏的CoY1-M1甘油菌按3‰(v/v)接种至100mL活化培养基，30℃200rpm过夜培养(16h)，再按10％(v/v)接种量转接至600mL发酵培养基，30℃240rpm培养16h得到种子液(OD₆₀₀＝25)。

将种子液全部接入10L发酵罐，接种后发酵罐的装液量为60体积％，发酵温度控制在32℃，转速为200-900rpm，通气量为0.5-1vvm(L/min·L)，使溶氧量控制在20-25vol％。发酵初期每隔12h取样检测葡萄糖浓度，根据葡萄糖浓度估算发酵速率，根据葡萄糖浓度和发酵速率判断发酵终点(耗尽葡萄糖)，在发酵终点前12h每隔0.5h取样检测葡萄糖浓度。

61h发酵结束，赤藓糖醇含量为122.7g/L，糖醇转化率55.8％。

实施例4

本实施例中，发酵培养基的成分配比为：葡萄糖280g/L，酵母浸粉8g/L，磷酸二氢钾1g/L，硫酸镁1g/L，柠檬酸铵5g/L，pH6。

取斜面保藏的CoY1-M1接种至350mL活化培养基，30℃200rpm过夜培养(16h)，再按10％(v/v)接种量转接至含有发酵培养基的5L发酵罐中，接种后发酵罐的装液量为70体积％，发酵控制30℃，恒定转速350rpm，控制通气量为0.5vvm(L/min·L)，培养12h得到种子液(OD₆₀₀＝25)。

将种子液全部接入70L发酵罐，接种后发酵罐的装液量为60体积％，发酵温度控制在32℃，转速为200-800rpm，通气量为0.3-0.8vvm(L/min·L)，使溶氧量控制在20-25vol％。发酵初期每隔12h取样检测葡萄糖浓度，当发酵液中葡萄糖浓度低于100g/L时开始流加650g/L葡萄糖溶液，流加葡萄糖溶液的流速控制在维持发酵液中糖浓度在100-120g/L，补料18L后停止流加(折算总糖约为390g/L)，继续发酵。每隔12h取样检测葡萄糖浓度，根据葡萄糖浓度估算发酵速率，根据葡萄糖浓度和发酵速率判断发酵终点(耗尽葡萄糖)，在发酵终点前12h每隔0.5h取样检测葡萄糖浓度。

98h发酵结束，发酵液中赤藓糖醇含量为225.2g/L，糖醇转化率57.6％。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型，包括各个技术特征以任何其它的合适方式进行组合，这些简单变型和组合同样应当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。

SEQUENCE LISTING

<110> 吉林中粮生化有限公司

中粮营养健康研究院有限公司

<120> 解脂亚罗酵母及其应用和发酵产赤藓糖醇的方法

<130> I70244COF

<160> 3

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 24

<212> DNA

<213> 26s rDNA引物NL1

<400> 1

gcatatcaat aagcggagga aaag 24

<210> 2

<211> 19

<212> DNA

<213> 26s rDNA引物NL4

<400> 2

ggtccgtgtt tcaagacgg 19

<210> 3

<211> 505

<212> DNA

<213> Yarrowia lipolytica

<400> 3

aaaccaacag ggattgcctc agtagcggcg agtgaagcgg caaaagctca aatttgaaac 60

cctcgggatt gtaatttgaa gatttggcat tggagaaagc taacccaagt tgcttggaat 120

agtacgtcat agagggtgac aaccccgtct ggctaaccgt tctccatgta ttgccttatc 180

gaagagtcga gttgtttggg aatgcagctc aaagtgggtg gtaaactcca tctaaagcta 240

aatactggtg agagaccgat agcgaacaag tactgtgaag gaaaggtgaa aagaactttg 300

aaaagagagt gaaatagtat gtgaaattgt tgatagggaa ggaaatgagt ggagagtggc 360

cgaggtttca gccgcccctc gtgggcggtg tactgccgac gccgagtcat cgatagcgag 420

acgagggtta caaatgggag cgcctttcgg gcgttctccc ctaaccctcc acactgccac 480

cgacgacata atccacccat ttcac 505

Claims

1.一种解脂亚罗酵母(Yarrowia lipolytica)，其特征在于，该解脂亚罗酵母的保藏编号为CGMCC No.22632。

2.权利要求1所述的解脂亚罗酵母在发酵产赤藓糖醇中的应用。

3.一种发酵产赤藓糖醇的方法，其特征在于，该方法包括：将权利要求1所述的解脂亚罗酵母接种至发酵培养基中进行发酵，得到含赤藓糖醇的发酵液。

4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述发酵的条件包括：发酵温度为30-35℃，发酵时间为60-120h。

5.根据权利要求3所述的方法，其中，所述方法还包括：在发酵过程中，控制发酵液中的溶氧量为10-35vol％。

6.根据权利要求3-5中任意一项所述的方法，其中，所述发酵培养基含有碳源、氮源、可选的无机营养盐和可选的表面活性剂。

7.根据权利要求6所述的方法，其中，相对于1L所述发酵培养基，所述碳源的含量为150-350g，所述氮源的含量为5-30g，无机营养盐的含量为0-7g，表面活性剂的含量为0-2g。

8.根据权利要求6所述的方法，其中，所述碳源为葡萄糖；

和/或，所述氮源为酵母浸粉、酵母膏、玉米浆粉、柠檬酸铵、硫酸铵和硫酸氢二铵中的至少一种；

和/或，所述无机营养盐为磷酸二氢钾和/或硫酸镁；

和/或，所述表面活性剂为吐温80。

9.根据权利要求3所述的方法，其中，所述发酵培养基的初始pH值为5-6.5；

和/或，所述方法还包括：在发酵过程中，发酵液中的葡萄糖浓度低于100g/L时，流加葡萄糖溶液；

其中，控制所述流加葡萄糖溶液的流速以维持发酵液中葡萄糖的浓度为100-150g/L。

10.根据权利要求3所述的方法，其中，所述解脂亚罗酵母通过种子液的形式进行接种。

11.权利要求1所述的解脂亚罗酵母在制备甜味剂中的应用。