CN114699477A - 一种具有安神助眠功能的益生菌群组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有安神助眠功能的益生菌群组合物，属于益生菌群组合物技术领域，所述益生菌群组合物，按重量份计，由以下成分组成：80‑85份一次混合物，105‑110份二次混合物，4‑6份麦芽糊精；所述益生菌群组合物的制备方法，具体为：将一次混合物、二次混合物、麦芽糊精混合后加入粉碎机中进行常温粉碎，粉碎至400‑600目，得到具有安神助眠功能的益生菌群组合物；本发明的益生菌群组合物能够缓解预防焦虑、失眠人群的睡眠障碍、焦躁情绪，避免副作用和耐药性。

Description

一种具有安神助眠功能的益生菌群组合物
技术领域
本发明涉及益生菌群组合物技术领域，具体涉及一种具有安神助眠功能的益生菌群组合物。
背景技术
睡眠障碍是一种影响全球45%的人的流行病，其中多数为失眠患者，失眠是指有足够的时间和睡眠环境适宜的情况下，对睡眠效果不满意的主观体验，表现为难以入睡、睡眠维持障碍、早醒、睡眠质量下降和总睡眠时间减少，是一种最常见的睡眠障碍。2006年中国睡眠研究会进行了一项研究，范围涉及6个城市，其结果表明，中国内地成人失眠的平均发生率为57%。2008年一项国际综合调查研究发现睡眠问题的患病率在美国为56%，在西欧为31%，在日本为23%。失眠对患者的身心健康和生活质量造成严重影响，因失眠产生的疲劳、精神不集中是造成交通事故和安全生产事故的主要原因之一，对个人和社会都造成严重的损失，但目前失眠的发病机制尚不明确。
多个研究结果表明，多种神经递质如谷氨酸和γ-氨基丁酸等参与了中枢对睡眠的调节且发挥了相当关键的作用，但是长期使用谷氨酸会导致流涎、脸红、呕吐，长期使用γ-氨基丁酸会使得肠道受损，而且益生菌组合物必须通过低温冷藏保存才能最大限度地保持其中活性益生菌的数量，保质期一般在1个月内，保质期短，对保存条件要求高，虽然可以通过将益生菌制成凝胶颗粒延长保质期，但是却无法解决副作用的问题。
专利CN108653556A公开了一种清肠护胃、安神助眠的复方制剂及其制备方法，所述复方制剂主要由以下原料制成：益生菌粉、γ-氨基丁酸、香蕉果粉、玫瑰花、百合、针叶樱桃、低聚果糖、麦芽糊精、马兜铃、天仙藤、灯心草、秦艽、臭灵丹草、菥蓂和白鲜皮。其制备包括步骤：粉碎；将叶樱桃和粉碎后的玫瑰花、百合、马兜铃和白鲜皮进行水提取；将天仙藤、灯心草、秦艽、臭灵丹草和菥蓂进行丙酮提取，石油醚结晶；乙醇提取；浓缩至干，并与益生菌粉、γ-氨基丁酸、香蕉果粉、低聚果糖和麦芽糊精合并混合均匀，制成口服制剂；所述复方制剂具有清肠护胃、安神助眠的疗效，但是长期使用γ-氨基丁酸会导致肠道受损。
发明内容
针对现有技术存在的不足，本发明提供了一种具有安神助眠功能的益生菌群组合物，能够缓解预防焦虑、失眠人群的睡眠障碍、焦躁情绪，避免耐药性，延长保质期，避免长期使用后肠道受损问题。
为解决以上技术问题，本发明采取的技术方案如下：
一种具有安神助眠功能的益生菌群组合物，按重量份计，由以下成分组成：80-85份一次混合物，15-20份二次混合物，4-6份麦芽糊精。
所述一次混合物的制备方法为：将改性发酵菌粉、冻干保护剂、稳定剂混合后置于搅拌器中进行搅拌，控制搅拌器内的温度为30-35℃，搅拌速度为180-200rpm，搅拌时间为30-35min，搅拌结束后得到初级一次混合物，将初级一次混合物置于-35℃至-30℃的冰箱中预冻处理25-30min后，转移至真空冷冻干燥机中进行真空冷冻干燥处理，控制真空冷冻干燥处理的温度为-45℃至-40℃，真空度为300-400Pa，处理时间为55-60min，真空冷冻干燥处理结束得到一次混合物；
所述一次混合物的制备中，改性发酵菌粉、冻干保护剂、稳定剂的重量比为70-75:6-8:0.2-0.5。
所述改性发酵菌粉的制备方法，由以下步骤组成：制备种子液、制备发酵液、发酵液干燥。
所述制备种子液的方法为，分别将冻存的植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、副干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、嗜热链球菌在固体LB平板上划线进行活化，然后分别从LB平板中挑选单菌落接种于250mL锥形瓶中，瓶内装有100mL液体培养基，分别将250mL锥形瓶放入摇床进行摇床培养，控制摇床培养的温度为36-38℃，转速为200-220rpm，时间为14-15h，摇床培养结束后分别得到植物乳杆菌种子液、鼠李糖乳杆菌种子液、副干酪乳杆菌种子液、瑞士乳杆菌种子液、嗜热链球菌种子液；
所述液体培养基的组成，按重量份计，由以下成分组成：1-2份大豆蛋白胨，2-3份葡萄糖，0.2-0.5份氯化钠，94.5-96.8份去离子水。
所述制备发酵液的方法为，分别将植物乳杆菌种子液、鼠李糖乳杆菌种子液、副干酪乳杆菌种子液、瑞士乳杆菌种子液、嗜热链球菌种子液依次接种于同一改良MRS液体培养基，控制植物乳杆菌的接种量为1-2%，鼠李糖乳杆菌的接种量为2-3%，副干酪乳杆菌的接种量为2-3%，瑞士乳杆菌的接种量为1-3%，嗜热链球菌的接种量为1-2%，接种完成后进行搅拌发酵培养，控制搅拌发酵培养的温度为36-38℃，转速为300-320rpm，通气量为1.2-1.5vvm，时间为20-22h，搅拌发酵培养结束得到发酵液；
所述改良MRS液体培养基的制备方法为：将葡萄糖、大豆蛋白胨、酵母浸粉、柠檬酸氢二胺、无水乙酸钠、磷酸氢二钾、低聚异麦芽糖、预糊化淀粉混合均匀后加入去离子水中，在35-40℃下以300-350rpm的搅拌速度搅拌35-40min，然后在117.5-118.5℃下灭菌20-22min，得到改良MRS液体培养基；
所述改良MRS液体培养基的制备中，葡萄糖、大豆蛋白胨、酵母浸粉、柠檬酸氢二胺、无水乙酸钠、磷酸氢二钾、低聚异麦芽糖、预糊化淀粉、去离子水的重量比为80-85:8-10:15-18:10-12:7-9:1-3:9-12:18-20:900-950。
所述发酵液干燥的方法为，将发酵液、鼠李糖脂、普鲁兰多糖、大豆多糖、酪朊酸钠混合均匀后得到混合发酵液，将混合发酵液的温度控制到30-35℃，然后向混合发酵液中通入混合气体进行改性，控制改性过程中混合气体的流量为4-5L/min，改性时间为10-12min，改性结束得到改性发酵液，对改性发酵液进行离心分离，控制离心分离过程中的转速为1600-1800rpm，离心分离的时间为8-10min，离心分离结束得到菌泥，将菌泥进行真空冷冻干燥处理，控制真空冷冻干燥处理的温度为-35℃至-30℃，真空度为600-700Pa，处理时间为50-60min，真空冷冻干燥结束得到改性发酵菌粉；
所述改性发酵菌粉中益生菌的总数量为3.5×1010-4.0×1010cfu/g；
所述发酵液干燥中，发酵液、鼠李糖脂、普鲁兰多糖、大豆多糖、酪朊酸钠的重量比为40-45:5-7:2-4:3-4:1-2；
所述混合气体为氧气和二氧化碳的混合气体，其中，氧气与二氧化碳的体积比为3:6-8。
所述冻干保护剂的制备方法为：将预糊化淀粉、葡萄糖、麦芽糊精、蔗糖、乳糖、脱脂奶粉混合后加入去离子水中，在35-40℃下以280-300rpm的转速搅拌40-45min，然后在117.5-118.5℃下灭菌25-30min，得到冻干保护剂；
所述冻干保护剂的制备中，预糊化淀粉、葡萄糖、麦芽糊精、蔗糖、乳糖、脱脂奶粉、去离子水的重量比为100-110:10-15:60-65:20-25:10-15:30-40:650-700。
所述稳定剂的制备方法为：将黄原胶、微晶纤维素、麦芽糊精混合均匀后置于-25℃至-20℃下冷冻处理40-45min，得到稳定剂；
所述稳定剂的制备中，黄原胶、微晶纤维素、麦芽糊精的重量比为6-9:1-1.5:3-4。
所述二次混合物的制备方法为：将中药纳米粉、表面活性剂混合后进行超声震荡，控制超声震荡的频率为30-45kHz，功率为100-150W，时间为25-30min，超声震荡结束得到初级二次混合物，将初级二次混合物置于电晕放电仪内进行电晕处理，控制电晕处理的电压为8-10kV，时间为20-25s，电晕处理结束得到二次混合物；
所述二次混合物的制备中，中药纳米粉与表面活性剂的重量比为17-20:5-7。
所述中药纳米粉的制备方法为：分别将人参、山药、茯苓、白术清洗干净后置于40-45℃下烘干，然后分别使用粉碎机粉碎至400-500μm，得到人参粉、山药粉、茯苓粉、白术粉，将人参粉、山药粉、茯苓粉、白术粉按照重量比为3-5:16-18:7-9:4-7混合均匀后得到混合粉，将混合粉与去离子水按照重量比为1:3-3.5混合后加热至80-85℃，在80-85℃下煎煮1.5-2h，过滤后取滤液作为提取液，向提取液中加入海藻酸钠、明胶，加热至70-75℃，在70-75℃下煎煮1-1.5h，然后进行喷雾干燥，控制喷雾干燥中的进风温度为150-160℃，出风温度为70-75℃，喷雾干燥结束得到中药粉，将中药粉、大豆卵磷脂、壳聚糖置于球磨机中进行球磨，控制球磨中的球料比为15-18:1，转速为400-450rpm，球磨时间为50-55min，球磨结束得到中药纳米粉；
所述中药纳米粉的制备中，提取液、海藻酸钠、明胶的重量比为100-105:5-8:6-9；
所述中药纳米粉的制备中，中药粉、大豆卵磷脂、壳聚糖的重量比为55-60:5-8:2-4。
所述表面活性剂的制备方法为：将柠檬酸、脂肪酸蔗糖聚酯、山梨糖醇混合均匀后置于-20℃至-15℃下冷冻处理30-35min，然后置于球磨机中进行球磨，控制球磨中的球料比为10-12:1，转速为300-350rpm，球磨时间为40-45min，球磨结束得到表面活性剂；
所述表面活性剂的制备中，柠檬酸、脂肪酸蔗糖聚酯、山梨糖醇的重量比为10-13:7-10:5-8。
一种具有安神助眠功能的益生菌群组合物的制备方法，具体为：将一次混合物、二次混合物、麦芽糊精混合后加入粉碎机中进行常温粉碎，粉碎至400-600目，得到具有安神助眠功能的益生菌群组合物。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
（1）本发明的具有安神助眠功能的益生菌群组合物，能够缓解预防焦虑、失眠人群的睡眠障碍，对云南小鼠进行睡眠试验，在连续饲喂10天期间，相对于空白对照组，睡眠时间增长率为21.4-22.1%，饲喂本发明的益生菌群组合物后，熟睡率能达到90-85%；
（2）本发明的具有安神助眠功能的益生菌群组合物，能够将益生菌群组合物的敞口放置时间延长至2个月，在将本发明制备的益生菌群组合物敞口放置2个月后，在云南小鼠上进行睡眠试验，在连续饲喂10天期间，相对于空白对照组，睡眠时间增长率为19.6-20.4%，饲喂本发明的益生菌群组合物后，熟睡率能达到80-90%；
（3）本发明的具有安神助眠功能的益生菌群组合物，能够降低耐药性，在云南小鼠上进行睡眠试验，在连续饲喂100天期间，第30天睡眠时间增长率为21.5-22.1%，第30天熟睡小鼠率能达到90-95%，第50天睡眠时间增长率为20.9-21.2%，第50天熟睡小鼠率能达到85-90%，第100天睡眠时间增长率为18.5-19.3%，第100天熟睡小鼠率能达到75-85%；
（4）本发明的具有安神助眠功能的益生菌群组合物，能够避免副作用，在云南小鼠上进行睡眠试验，在连续饲喂100天后，小鼠的肠道无受损情况。
具体实施方式
为了对本发明的技术特征、目的和效果有更加清楚的理解，现说明本发明的具体实施方式。
实施例1
一种具有安神助眠功能的益生菌群组合物，按重量份计，由以下成分组成：80份一次混合物，15份二次混合物，4份麦芽糊精。
所述一次混合物的制备方法为：将改性发酵菌粉、冻干保护剂、稳定剂混合后置于搅拌器中进行搅拌，控制搅拌器内的温度为30℃，搅拌速度为180rpm，搅拌时间为30min，搅拌结束后得到初级一次混合物，将初级一次混合物置于-35℃的冰箱中预冻处理25min后，转移至真空冷冻干燥机中进行真空冷冻干燥处理，控制真空冷冻干燥处理的温度为-45℃，真空度为300Pa，处理时间为55min，真空冷冻干燥处理结束得到一次混合物；
其中，改性发酵菌粉、冻干保护剂、稳定剂的重量比为70:6:0.2。
所述改性发酵菌粉的制备方法，由以下步骤组成：制备种子液、制备发酵液、发酵液干燥。
所述制备种子液，分别将冻存的植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、副干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、嗜热链球菌在固体LB平板上划线进行活化，然后分别从LB平板中挑选单菌落接种于250mL锥形瓶中，瓶内装有100mL液体培养基，分别将250mL锥形瓶放入摇床进行摇床培养，控制摇床培养的温度为36℃，转速为200rpm，时间为14h，摇床培养结束后分别得到植物乳杆菌种子液、鼠李糖乳杆菌种子液、副干酪乳杆菌种子液、瑞士乳杆菌种子液、嗜热链球菌种子液；
所述液体培养基的组成，按重量份计，由以下成分组成：1份大豆蛋白胨，2份葡萄糖，0.2份氯化钠，94.5份去离子水。
所述制备发酵液，分别将植物乳杆菌种子液、鼠李糖乳杆菌种子液、副干酪乳杆菌种子液、瑞士乳杆菌种子液、嗜热链球菌种子液依次接种于同一改良MRS液体培养基，控制植物乳杆菌的接种量为1%，鼠李糖乳杆菌的接种量为2%，副干酪乳杆菌的接种量为2%，瑞士乳杆菌的接种量为1%，嗜热链球菌的接种量为1%，接种完成后进行搅拌发酵培养，控制搅拌发酵培养的温度为36℃，转速为300rpm，通气量为1.2vvm，时间为20h，搅拌发酵培养结束得到发酵液；
所述改良MRS液体培养基的制备方法为：将葡萄糖、大豆蛋白胨、酵母浸粉、柠檬酸氢二胺、无水乙酸钠、磷酸氢二钾、低聚异麦芽糖、预糊化淀粉混合均匀后加入去离子水中，在35℃下以300rpm的搅拌速度搅拌35min，然后在117.5℃下灭菌20min，得到改良MRS液体培养基；
其中，葡萄糖、大豆蛋白胨、酵母浸粉、柠檬酸氢二胺、无水乙酸钠、磷酸氢二钾、低聚异麦芽糖、预糊化淀粉、去离子水的重量比为80:8:15:10:7:1:9:18:900。
所述发酵液干燥，将发酵液、鼠李糖脂、普鲁兰多糖、大豆多糖、酪朊酸钠混合均匀后得到混合发酵液，将混合发酵液的温度控制到30℃，然后向混合发酵液中通入混合气体进行改性，控制改性过程中混合气体的流量为4L/min，改性时间为10min，改性结束得到改性发酵液，对改性发酵液进行离心分离，控制离心分离过程中的转速为1600rpm，离心分离的时间为8min，离心分离结束得到菌泥，将菌泥进行真空冷冻干燥处理，控制真空冷冻干燥处理的温度为-35℃，真空度为600Pa，处理时间为50min，真空冷冻干燥结束得到改性发酵菌粉；
所述改性发酵菌粉中益生菌的总数量为3.5×1010cfu/g；
其中，发酵液、鼠李糖脂、普鲁兰多糖、大豆多糖、酪朊酸钠的重量比为40:5:2:3:1；
所述混合气体为氧气和二氧化碳的混合气体，其中，氧气与二氧化碳的体积比为3:6。
所述冻干保护剂的制备方法为：将预糊化淀粉、葡萄糖、麦芽糊精、蔗糖、乳糖、脱脂奶粉混合后加入去离子水中，在35℃下以280rpm的转速搅拌40min，然后在117.5℃下灭菌25min，得到冻干保护剂；
其中，预糊化淀粉、葡萄糖、麦芽糊精、蔗糖、乳糖、脱脂奶粉、去离子水的重量比为100:10:60:20:10:30:650。
所述稳定剂的制备方法为：将黄原胶、微晶纤维素、麦芽糊精混合均匀后置于-25℃下冷冻处理40min，得到稳定剂；
其中，黄原胶、微晶纤维素、麦芽糊精的重量比为6:1:3。
所述二次混合物的制备方法为：将中药纳米粉、表面活性剂混合后进行超声震荡，控制超声震荡的频率为30kHz，功率为100W，时间为25min，超声震荡结束得到初级二次混合物，将初级二次混合物置于电晕放电仪内进行电晕处理，控制电晕处理的电压为8kV，时间为20s，电晕处理结束得到二次混合物；
其中，中药纳米粉与表面活性剂的重量比为17:5。
所述中药纳米粉的制备方法为：分别将人参、山药、茯苓、白术清洗干净后置于40℃下烘干，然后分别使用粉碎机粉碎至400μm，得到人参粉、山药粉、茯苓粉、白术粉，将人参粉、山药粉、茯苓粉、白术粉按照重量比为3:16:7:4混合均匀后得到混合粉，将混合粉与去离子水按照重量比为1:3混合后加热至80℃，在80℃下煎煮1.5h，过滤后取滤液作为提取液，向提取液中加入海藻酸钠、明胶，加热至70℃，在70℃下煎煮1h，然后进行喷雾干燥，控制喷雾干燥中的进风温度为150℃，出风温度为70℃，喷雾干燥结束得到中药粉，将中药粉、大豆卵磷脂、壳聚糖置于球磨机中进行球磨，控制球磨中的球料比为15:1，转速为400rpm，球磨时间为50min，球磨结束得到中药纳米粉；
其中，提取液、海藻酸钠、明胶的重量比为100:5:6；
中药粉、大豆卵磷脂、壳聚糖的重量比为55:5:2。
所述表面活性剂的制备方法为：将柠檬酸、脂肪酸蔗糖聚酯、山梨糖醇混合均匀后置于-20℃下冷冻处理30min，然后置于球磨机中进行球磨，控制球磨中的球料比为10:1，转速为300rpm，球磨时间为40min，球磨结束得到表面活性剂；
其中，柠檬酸、脂肪酸蔗糖聚酯、山梨糖醇的重量比为10:7:5。
一种具有安神助眠功能的益生菌群组合物的制备方法，具体为：将一次混合物、二次混合物、麦芽糊精混合后加入粉碎机中进行常温粉碎，粉碎至400目，得到具有安神助眠功能的益生菌群组合物。
实施例2
一种具有安神助眠功能的益生菌群组合物，按重量份计，由以下成分组成：82份一次混合物，17份二次混合物，5份麦芽糊精。
所述一次混合物的制备方法为：将改性发酵菌粉、冻干保护剂、稳定剂混合后置于搅拌器中进行搅拌，控制搅拌器内的温度为32℃，搅拌速度为190rpm，搅拌时间为32min，搅拌结束后得到初级一次混合物，将初级一次混合物置于-32℃的冰箱中预冻处理27min后，转移至真空冷冻干燥机中进行真空冷冻干燥处理，控制真空冷冻干燥处理的温度为-42℃，真空度为350Pa，处理时间为57min，真空冷冻干燥处理结束得到一次混合物；
其中，改性发酵菌粉、冻干保护剂、稳定剂的重量比为72:7:0.3。
所述改性发酵菌粉的制备方法，由以下步骤组成：制备种子液、制备发酵液、发酵液干燥。
所述制备种子液，分别将冻存的植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、副干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、嗜热链球菌在固体LB平板上划线进行活化，然后分别从LB平板中挑选单菌落接种于250mL锥形瓶中，瓶内装有100mL液体培养基，分别将250mL锥形瓶放入摇床进行摇床培养，控制摇床培养的温度为37℃，转速为210rpm，时间为14.5h，摇床培养结束后分别得到植物乳杆菌种子液、鼠李糖乳杆菌种子液、副干酪乳杆菌种子液、瑞士乳杆菌种子液、嗜热链球菌种子液；
所述液体培养基的组成，按重量份计，由以下成分组成：1.5份大豆蛋白胨，2.5份葡萄糖，0.3份氯化钠，95.5份去离子水。
所述制备发酵液，分别将植物乳杆菌种子液、鼠李糖乳杆菌种子液、副干酪乳杆菌种子液、瑞士乳杆菌种子液、嗜热链球菌种子液依次接种于同一改良MRS液体培养基，控制植物乳杆菌的接种量为1.5%，鼠李糖乳杆菌的接种量为2.5%，副干酪乳杆菌的接种量为2.5%，瑞士乳杆菌的接种量为2%，嗜热链球菌的接种量为1.5%，接种完成后进行搅拌发酵培养，控制搅拌发酵培养的温度为37℃，转速为310rpm，通气量为1.3vvm，时间为21h，搅拌发酵培养结束得到发酵液；
所述改良MRS液体培养基的制备方法为：将葡萄糖、大豆蛋白胨、酵母浸粉、柠檬酸氢二胺、无水乙酸钠、磷酸氢二钾、低聚异麦芽糖、预糊化淀粉混合均匀后加入去离子水中，在37℃下以320rpm的搅拌速度搅拌37min，然后在118℃下灭菌21min，得到改良MRS液体培养基；
其中，葡萄糖、大豆蛋白胨、酵母浸粉、柠檬酸氢二胺、无水乙酸钠、磷酸氢二钾、低聚异麦芽糖、预糊化淀粉、去离子水的重量比为82:9:17:11:8:2:10:19:920。
所述发酵液干燥，将发酵液、鼠李糖脂、普鲁兰多糖、大豆多糖、酪朊酸钠混合均匀后得到混合发酵液，将混合发酵液的温度控制到32℃，然后向混合发酵液中通入混合气体进行改性，控制改性过程中混合气体的流量为4.5L/min，改性时间为11min，改性结束得到改性发酵液，对改性发酵液进行离心分离，控制离心分离过程中的转速为1700rpm，离心分离的时间为9min，离心分离结束得到菌泥，将菌泥进行真空冷冻干燥处理，控制真空冷冻干燥处理的温度为-32℃，真空度为650Pa，处理时间为55min，真空冷冻干燥结束得到改性发酵菌粉；
所述改性发酵菌粉中益生菌的总数量为3.7×1010cfu/g；
其中，发酵液、鼠李糖脂、普鲁兰多糖、大豆多糖、酪朊酸钠的重量比为42:6:3:3.5:1.5；
所述混合气体为氧气和二氧化碳的混合气体，其中，氧气与二氧化碳的体积比为3:7。
所述冻干保护剂的制备方法为：将预糊化淀粉、葡萄糖、麦芽糊精、蔗糖、乳糖、脱脂奶粉混合后加入去离子水中，在37℃下以290rpm的转速搅拌42min，然后在118℃下灭菌27min，得到冻干保护剂；
其中，预糊化淀粉、葡萄糖、麦芽糊精、蔗糖、乳糖、脱脂奶粉、去离子水的重量比为105:12:62:22:12:35:670。
所述稳定剂的制备方法为：将黄原胶、微晶纤维素、麦芽糊精混合均匀后置于-22℃下冷冻处理42min，得到稳定剂；
其中，黄原胶、微晶纤维素、麦芽糊精的重量比为8:1.2:3.5。
所述二次混合物的制备方法为：将中药纳米粉、表面活性剂混合后进行超声震荡，控制超声震荡的频率为40kHz，功率为120W，时间为27min，超声震荡结束得到初级二次混合物，将初级二次混合物置于电晕放电仪内进行电晕处理，控制电晕处理的电压为9kV，时间为22s，电晕处理结束得到二次混合物；
其中，中药纳米粉与表面活性剂的重量比为18:6。
所述中药纳米粉的制备方法为：分别将人参、山药、茯苓、白术清洗干净后置于42℃下烘干，然后分别使用粉碎机粉碎至450μm，得到人参粉、山药粉、茯苓粉、白术粉，将人参粉、山药粉、茯苓粉、白术粉按照重量比为4:17:8:5混合均匀后得到混合粉，将混合粉与去离子水按照重量比为1:3.2混合后加热至82℃，在82℃下煎煮1.7h，过滤后取滤液作为提取液，向提取液中加入海藻酸钠、明胶，加热至72℃，在72℃下煎煮1.2h，然后进行喷雾干燥，控制喷雾干燥中的进风温度为155℃，出风温度为72℃，喷雾干燥结束得到中药粉，将中药粉、大豆卵磷脂、壳聚糖置于球磨机中进行球磨，控制球磨中的球料比为17:1，转速为420rpm，球磨时间为52min，球磨结束得到中药纳米粉；
其中，提取液、海藻酸钠、明胶的重量比为102:7:7；
中药粉、大豆卵磷脂、壳聚糖的重量比为57:7:3。
所述表面活性剂的制备方法为：将柠檬酸、脂肪酸蔗糖聚酯、山梨糖醇混合均匀后置于-17℃下冷冻处理32min，然后置于球磨机中进行球磨，控制球磨中的球料比为11:1，转速为320rpm，球磨时间为42min，球磨结束得到表面活性剂；
其中，柠檬酸、脂肪酸蔗糖聚酯、山梨糖醇的重量比为11:8:7。
一种具有安神助眠功能的益生菌群组合物的制备方法，具体为：将一次混合物、二次混合物、麦芽糊精混合后加入粉碎机中进行常温粉碎，粉碎至500目，得到具有安神助眠功能的益生菌群组合物。
实施例3
一种具有安神助眠功能的益生菌群组合物，按重量份计，由以下成分组成：85份一次混合物，20份二次混合物，6份麦芽糊精。
所述一次混合物的制备方法为：将改性发酵菌粉、冻干保护剂、稳定剂混合后置于搅拌器中进行搅拌，控制搅拌器内的温度为35℃，搅拌速度为200rpm，搅拌时间为35min，搅拌结束后得到初级一次混合物，将初级一次混合物置于-30℃的冰箱中预冻处理30min后，转移至真空冷冻干燥机中进行真空冷冻干燥处理，控制真空冷冻干燥处理的温度为-40℃，真空度为400Pa，处理时间为60min，真空冷冻干燥处理结束得到一次混合物；
其中，改性发酵菌粉、冻干保护剂、稳定剂的重量比为75:8:0.5。
所述改性发酵菌粉的制备方法，由以下步骤组成：制备种子液、制备发酵液、发酵液干燥。
所述制备种子液，分别将冻存的植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、副干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、嗜热链球菌在固体LB平板上划线进行活化，然后分别从LB平板中挑选单菌落接种于250mL锥形瓶中，瓶内装有100mL液体培养基，分别将250mL锥形瓶放入摇床进行摇床培养，控制摇床培养的温度为38℃，转速为220rpm，时间为15h，摇床培养结束后分别得到植物乳杆菌种子液、鼠李糖乳杆菌种子液、副干酪乳杆菌种子液、瑞士乳杆菌种子液、嗜热链球菌种子液；
所述液体培养基的组成，按重量份计，由以下成分组成：2份大豆蛋白胨，3份葡萄糖，0.5份氯化钠，96.8份去离子水。
所述制备发酵液，分别将植物乳杆菌种子液、鼠李糖乳杆菌种子液、副干酪乳杆菌种子液、瑞士乳杆菌种子液、嗜热链球菌种子液依次接种于同一改良MRS液体培养基，控制植物乳杆菌的接种量为2%，鼠李糖乳杆菌的接种量为3%，副干酪乳杆菌的接种量为3%，瑞士乳杆菌的接种量为3%，嗜热链球菌的接种量为2%，接种完成后进行搅拌发酵培养，控制搅拌发酵培养的温度为38℃，转速为320rpm，通气量为1.5vvm，时间为22h，搅拌发酵培养结束得到发酵液；
所述改良MRS液体培养基的制备方法为：将葡萄糖、大豆蛋白胨、酵母浸粉、柠檬酸氢二胺、无水乙酸钠、磷酸氢二钾、低聚异麦芽糖、预糊化淀粉混合均匀后加入去离子水中，在40℃下以350rpm的搅拌速度搅拌40min，然后在118.5℃下灭菌22min，得到改良MRS液体培养基；
其中，葡萄糖、大豆蛋白胨、酵母浸粉、柠檬酸氢二胺、无水乙酸钠、磷酸氢二钾、低聚异麦芽糖、预糊化淀粉、去离子水的重量比为85:10:18:12:9:3:12:20:950。
所述发酵液干燥，将发酵液、鼠李糖脂、普鲁兰多糖、大豆多糖、酪朊酸钠混合均匀后得到混合发酵液，将混合发酵液的温度控制到35℃，然后向混合发酵液中通入混合气体进行改性，控制改性过程中混合气体的流量为5L/min，改性时间为12min，改性结束得到改性发酵液，对改性发酵液进行离心分离，控制离心分离过程中的转速为1800rpm，离心分离的时间为10min，离心分离结束得到菌泥，将菌泥进行真空冷冻干燥处理，控制真空冷冻干燥处理的温度为-30℃，真空度为700Pa，处理时间为60min，真空冷冻干燥结束得到改性发酵菌粉；
所述改性发酵菌粉中益生菌的总数量为4.0×1010cfu/g；
其中，发酵液、鼠李糖脂、普鲁兰多糖、大豆多糖、酪朊酸钠的重量比为45:7:4:4:2；
所述混合气体为氧气和二氧化碳的混合气体，其中，氧气与二氧化碳的体积比为3:8。
所述冻干保护剂的制备方法为：将预糊化淀粉、葡萄糖、麦芽糊精、蔗糖、乳糖、脱脂奶粉混合后加入去离子水中，在40℃下以300rpm的转速搅拌45min，然后在118.5℃下灭菌30min，得到冻干保护剂；
其中，预糊化淀粉、葡萄糖、麦芽糊精、蔗糖、乳糖、脱脂奶粉、去离子水的重量比为110:15:65:25:15:40:700。
所述稳定剂的制备方法为：将黄原胶、微晶纤维素、麦芽糊精混合均匀后置于-20℃下冷冻处理45min，得到稳定剂；
其中，黄原胶、微晶纤维素、麦芽糊精的重量比为9:1.5:4。
所述二次混合物的制备方法为：将中药纳米粉、表面活性剂混合后进行超声震荡，控制超声震荡的频率为45kHz，功率为150W，时间为30min，超声震荡结束得到初级二次混合物，将初级二次混合物置于电晕放电仪内进行电晕处理，控制电晕处理的电压为10kV，时间为25s，电晕处理结束得到二次混合物；
其中，中药纳米粉与表面活性剂的重量比为20:7。
所述中药纳米粉的制备方法为：分别将人参、山药、茯苓、白术清洗干净后置于45℃下烘干，然后分别使用粉碎机粉碎至500μm，得到人参粉、山药粉、茯苓粉、白术粉，将人参粉、山药粉、茯苓粉、白术粉按照重量比为5:18:9:7混合均匀后得到混合粉，将混合粉与去离子水按照重量比为1:3.5混合后加热至85℃，在85℃下煎煮2h，过滤后取滤液作为提取液，向提取液中加入海藻酸钠、明胶，加热至75℃，在75℃下煎煮1.5h，然后进行喷雾干燥，控制喷雾干燥中的进风温度为160℃，出风温度为75℃，喷雾干燥结束得到中药粉，将中药粉、大豆卵磷脂、壳聚糖置于球磨机中进行球磨，控制球磨中的球料比为18:1，转速为450rpm，球磨时间为55min，球磨结束得到中药纳米粉；
其中，提取液、海藻酸钠、明胶的重量比为105:8:9；
中药粉、大豆卵磷脂、壳聚糖的重量比为60:8:4。
所述表面活性剂的制备方法为：将柠檬酸、脂肪酸蔗糖聚酯、山梨糖醇混合均匀后置于-15℃下冷冻处理35min，然后置于球磨机中进行球磨，控制球磨中的球料比为12:1，转速为350rpm，球磨时间为45min，球磨结束得到表面活性剂；
其中，柠檬酸、脂肪酸蔗糖聚酯、山梨糖醇的重量比为13:10:8。
一种具有安神助眠功能的益生菌群组合物的制备方法，具体为：将一次混合物、二次混合物、麦芽糊精混合后加入粉碎机中进行常温粉碎，粉碎至600目，得到具有安神助眠功能的益生菌群组合物。
对比例1
采用实施例1所述的具有安神助眠功能的益生菌群组合物的组成及各原料的制备方法，其不同之处在于：一次混合物的制备中省略稳定剂的加入。
对比例2
采用实施例1所述的具有安神助眠功能的益生菌群组合物的组成及各原料的制备方法，其不同之处在于：一次混合物中改性发酵菌粉的制备中，发酵液干燥步骤中，不加入鼠李糖脂、普鲁兰多糖、大豆多糖、酪朊酸钠，及使用混合气体对混合发酵液进行改性，即将制备发酵液步骤中得到的发酵液直接作为改性发酵液进行离心分离。
对比例3
采用实施例1所述的具有安神助眠功能的益生菌群组合物的组成及各原料的制备方法，其不同之处在于：二次混合物的制备中省略表面活性剂的加入。
对比例4
采用实施例1所述的具有安神助眠功能的益生菌群组合物的组成及各原料的制备方法，其不同之处在于：二次混合物的制备中不进行电晕处理，即将初级二次混合物直接用作二次混合物使用。
试验例1
按照实施例1-3和对比例1-4的具有安神助眠功能的益生菌群组合物的组成及各原料的制备方法，分别制备出益生菌群组合物后密封保存且保证1个月内使用，然后进行小鼠试验，试验方法及结果如下：
选择160只SPF级4-5周龄的雄性昆明小鼠，体重22-26g，平分为8组，编号1-8组，每组20只，均饲喂于同一动物房，保证动物房内的温度为24±2℃，湿度为60±2%，动物自由进食，并于每天中午12:00给每只小鼠饲喂0.5g密封保存且保存时间在1个月以内的益生菌群组合物，连续饲喂10天，每组小鼠与所饲喂的益生菌群组合物的对应关系如下：
Figure 316050DEST_PATH_IMAGE001
对饲喂期间每只小鼠的睡眠时间进行记录，并计算饲喂期间每组小鼠的每天的平均睡眠时间，然后计算睡眠时间增长率，计算结果如下：
睡眠时间增长率的计算公式如下：（饲喂期间每组小鼠的每天的平均睡眠时间-饲喂期间空白对照组小鼠的每天的平均睡眠时间)/ 饲喂期间空白对照组小鼠的每天的平均睡眠时间*100%
Figure 667265DEST_PATH_IMAGE002
试验例2
按照实施例1-3和对比例1-4的具有安神助眠功能的益生菌群组合物的组成及各原料的制备方法，分别制备出益生菌群组合物后密封保存且保证1个月内使用，然后进行小鼠试验，试验方法及结果如下：
选择140只SPF级4-5周龄的雄性昆明小鼠，体重22-26g，平分为7组，编号1-7组，每组20只，均饲喂于同一动物房，保证动物房内的温度为24±2℃，湿度为60±2%，动物自由进食，同时于每天中午12:00给每只小鼠饲喂0.5g密封保存且保存时间在1个月以内的益生菌群组合物，每组小鼠与所饲喂的益生菌群组合物的对应关系如下：
Figure 440049DEST_PATH_IMAGE003
然后于饲喂结束小鼠睡着后统计每组熟睡小鼠的只数，熟睡指标为翻正反射消失，统计结果如下：
熟睡小鼠率的计算公式如下：熟睡小鼠的只数/20*100%
Figure 449594DEST_PATH_IMAGE004
试验例3
按照实施例1-3和对比例1-4的具有安神助眠功能的益生菌群组合物的组成及各原料的制备方法，分别制备出益生菌群组合物后于温度为30±2℃，湿度为70±2%的环境下敞口放置2个月后用于小鼠饲喂试验，小鼠饲喂试验方法及结果如下：
选择160只SPF级4-5周龄的雄性昆明小鼠，体重22-26g，平分为8组，编号1-8组，每组20只，均饲喂于同一动物房，保证动物房内的温度为24±2℃，湿度为60±2%，动物自由进食，并于每天中午12:00给每只小鼠饲喂0.5g已经敞口放置2个月的益生菌群组合物，连续饲喂10天，每组小鼠与所饲喂的益生菌群组合物的对应关系如下：
Figure 499589DEST_PATH_IMAGE005
第8组不饲喂益生菌群组合物作为空白对照组。
对饲喂期间每只小鼠的睡眠时间进行记录，并计算饲喂期间每组小鼠的每天的平均睡眠时间，然后计算睡眠时间增长率，计算结果如下：
睡眠时间增长率的计算公式如下：（饲喂期间每组小鼠的每天的平均睡眠时间-饲喂期间空白对照组小鼠的每天的平均睡眠时间)/ 饲喂期间空白对照组小鼠的每天的平均睡眠时间*100%
Figure 631493DEST_PATH_IMAGE006
试验例4
按照实施例1-3和对比例1-4的具有安神助眠功能的益生菌群组合物的组成及各原料的制备方法，分别制备出益生菌群组合物后于温度为30±2℃，湿度为70±2%的环境下敞口放置2个月后用于小鼠饲喂试验，小鼠饲喂试验方法及结果如下：
选择140只SPF级4-5周龄的雄性昆明小鼠，体重22-26g，平分为7组，编号1-7组，每组20只，均饲喂于同一动物房，保证动物房内的温度为24±2℃，湿度为60±2%，动物自由进食，同时于每天中午12:00给每只小鼠饲喂0.5g已经敞口放置2个月的益生菌群组合物，每组小鼠与所饲喂的益生菌群组合物的对应关系如下：
Figure 94836DEST_PATH_IMAGE007
然后于饲喂结束小鼠睡着后统计每组熟睡小鼠的只数，熟睡指标为翻正反射消失，统计结果如下：
熟睡小鼠率的计算公式如下：熟睡小鼠的只数/20*100%
Figure 95021DEST_PATH_IMAGE008
试验例5
按照实施例1-3和对比例1-4的具有安神助眠功能的益生菌群组合物的组成及各原料的制备方法，分别制备出益生菌群组合物后密封保存且保证1个月内使用，然后进行小鼠试验，试验方法及结果如下：
选择160只SPF级4-5周龄的雄性昆明小鼠，体重22-26g，平分为8组，编号1-8组，每组20只，均饲喂于同一动物房，保证动物房内的温度为24±2℃，湿度为60±2%，动物自由进食，同时于每天中午12:00给每只小鼠饲喂0.5g密封保存且保存时间在1个月以内的益生菌群组合物，连续饲喂100天，每组小鼠与所饲喂的益生菌群组合物的对应关系如下：
Figure 327420DEST_PATH_IMAGE009
第8组不饲喂益生菌群组合物作为空白对照组。
然后于饲喂第30天、饲喂第50天、饲喂第100天时，统计每只小鼠的日睡眠时间并计算每组的日睡眠时间的平均值，计算日睡眠时间增长率，计算结果如下：
日睡眠时间增长率的计算公式如下：（饲喂期间每组小鼠的日睡眠时间的平均值-饲喂期间空白对照组小鼠的日睡眠时间)/ 饲喂期间空白对照组小鼠的日睡眠时间*100%
Figure 895804DEST_PATH_IMAGE010
同时，于饲喂第30天、饲喂第50天、饲喂第100天时，统计每组小鼠睡着后熟睡小鼠的只数，熟睡指标为翻正反射消失，统计结果如下：
熟睡小鼠率的计算公式如下：熟睡小鼠的只数/20*100%
Figure 580864DEST_PATH_IMAGE011
同时，于饲喂第100天时，每组随机挑选5只小鼠，进行解剖并观察、统计肠道受损情况，统计结果如下：
Figure 869894DEST_PATH_IMAGE012
除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种具有安神助眠功能的益生菌群组合物，其特征在于，按重量份计，由以下成分组成：80-85份一次混合物，15-20份二次混合物，4-6份麦芽糊精；
所述一次混合物的制备方法为：将改性发酵菌粉、冻干保护剂、稳定剂混合后置于搅拌器中进行搅拌，控制搅拌器内的温度为30-35℃，搅拌速度为180-200rpm，搅拌时间为30-35min，搅拌结束后得到初级一次混合物，将初级一次混合物置于-35℃至-30℃的冰箱中预冻处理25-30min后，转移至真空冷冻干燥机中进行真空冷冻干燥处理，控制真空冷冻干燥处理的温度为-45℃至-40℃，真空度为300-400Pa，处理时间为55-60min，真空冷冻干燥处理结束得到一次混合物；
所述一次混合物的制备中，改性发酵菌粉、冻干保护剂、稳定剂的重量比为70-75:6-8:0.2-0.5；
所述冻干保护剂的制备方法为：将预糊化淀粉、葡萄糖、麦芽糊精、蔗糖、乳糖、脱脂奶粉混合后加入去离子水中，在35-40℃下以280-300rpm的转速搅拌40-45min，然后在117.5-118.5℃下灭菌25-30min，得到冻干保护剂；
所述冻干保护剂的制备中，预糊化淀粉、葡萄糖、麦芽糊精、蔗糖、乳糖、脱脂奶粉、去离子水的重量比为100-110:10-15:60-65:20-25:10-15:30-40:650-700；
所述改性发酵菌粉的制备方法，由以下步骤组成：制备种子液、制备发酵液、发酵液干燥；
所述制备种子液的方法为，分别将冻存的植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、副干酪乳杆菌、瑞士乳杆菌、嗜热链球菌在固体LB平板上划线进行活化，然后分别从LB平板中挑选单菌落接种于250mL锥形瓶中，瓶内装有100mL液体培养基，分别将250mL锥形瓶放入摇床进行摇床培养，控制摇床培养的温度为36-38℃，转速为200-220rpm，时间为14-15h，摇床培养结束后分别得到植物乳杆菌种子液、鼠李糖乳杆菌种子液、副干酪乳杆菌种子液、瑞士乳杆菌种子液、嗜热链球菌种子液；
所述制备发酵液的方法为，分别将植物乳杆菌种子液、鼠李糖乳杆菌种子液、副干酪乳杆菌种子液、瑞士乳杆菌种子液、嗜热链球菌种子液依次接种于同一改良MRS液体培养基，控制植物乳杆菌的接种量为1-2%，鼠李糖乳杆菌的接种量为2-3%，副干酪乳杆菌的接种量为2-3%，瑞士乳杆菌的接种量为1-3%，嗜热链球菌的接种量为1-2%，接种完成后进行搅拌发酵培养，控制搅拌发酵培养的温度为36-38℃，转速为300-320rpm，通气量为1.2-1.5vvm，时间为20-22h，搅拌发酵培养结束得到发酵液；
所述发酵液干燥的方法为，将发酵液、鼠李糖脂、普鲁兰多糖、大豆多糖、酪朊酸钠混合均匀后得到混合发酵液，将混合发酵液的温度控制到30-35℃，然后向混合发酵液中通入混合气体进行改性，控制改性过程中混合气体的流量为4-5L/min，改性时间为10-12min，改性结束得到改性发酵液，对改性发酵液进行离心分离，控制离心分离过程中的转速为1600-1800rpm，离心分离的时间为8-10min，离心分离结束得到菌泥，将菌泥进行真空冷冻干燥处理，控制真空冷冻干燥处理的温度为-35℃至-30℃，真空度为600-700Pa，处理时间为50-60min，真空冷冻干燥结束得到改性发酵菌粉；
所述发酵液干燥中，发酵液、鼠李糖脂、普鲁兰多糖、大豆多糖、酪朊酸钠的重量比为40-45:5-7:2-4:3-4:1-2；
所述混合气体为氧气和二氧化碳的混合气体，其中，氧气与二氧化碳的体积比为3:6-8；
所述稳定剂的制备方法为：将黄原胶、微晶纤维素、麦芽糊精混合均匀后置于-25℃至-20℃下冷冻处理40-45min，得到稳定剂；
所述稳定剂的制备中，黄原胶、微晶纤维素、麦芽糊精的重量比为6-9:1-1.5:3-4；
所述二次混合物的制备方法为：将中药纳米粉、表面活性剂混合后进行超声震荡，控制超声震荡的频率为30-45kHz，功率为100-150W，时间为25-30min，超声震荡结束得到初级二次混合物，将初级二次混合物置于电晕放电仪内进行电晕处理，控制电晕处理的电压为8-10kV，时间为20-25s，电晕处理结束得到二次混合物；
所述二次混合物的制备中，中药纳米粉与表面活性剂的重量比为17-20:5-7；
所述中药纳米粉的制备方法为：分别将人参、山药、茯苓、白术清洗干净后置于40-45℃下烘干，然后分别使用粉碎机粉碎至400-500μm，得到人参粉、山药粉、茯苓粉、白术粉，将人参粉、山药粉、茯苓粉、白术粉按照重量比为3-5:16-18:7-9:4-7混合均匀后得到混合粉，将混合粉与去离子水按照重量比为1:3-3.5混合后加热至80-85℃，在80-85℃下煎煮1.5-2h，过滤后取滤液作为提取液，向提取液中加入海藻酸钠、明胶，加热至70-75℃，在70-75℃下煎煮1-1.5h，然后进行喷雾干燥，控制喷雾干燥中的进风温度为150-160℃，出风温度为70-75℃，喷雾干燥结束得到中药粉，将中药粉、大豆卵磷脂、壳聚糖置于球磨机中进行球磨，控制球磨中的球料比为15-18:1，转速为400-450rpm，球磨时间为50-55min，球磨结束得到中药纳米粉；
所述中药纳米粉的制备中，提取液、海藻酸钠、明胶的重量比为100-105:5-8:6-9；
所述中药纳米粉的制备中，中药粉、大豆卵磷脂、壳聚糖的重量比为55-60:5-8:2-4；
所述表面活性剂的制备方法为：将柠檬酸、脂肪酸蔗糖聚酯、山梨糖醇混合均匀后置于-20℃至-15℃下冷冻处理30-35min，然后置于球磨机中进行球磨，控制球磨中的球料比为10-12:1，转速为300-350rpm，球磨时间为40-45min，球磨结束得到表面活性剂；
所述表面活性剂的制备中，柠檬酸、脂肪酸蔗糖聚酯、山梨糖醇的重量比为10-13:7-10:5-8。
2.根据权利要求1所述的具有安神助眠功能的益生菌群组合物，其特征在于，所述液体培养基的组成，按重量份计，由以下成分组成：1-2份大豆蛋白胨，2-3份葡萄糖，0.2-0.5份氯化钠，94.5-96.8份去离子水。
3.根据权利要求1所述的具有安神助眠功能的益生菌群组合物，其特征在于，所述改良MRS液体培养基的制备方法为：将葡萄糖、大豆蛋白胨、酵母浸粉、柠檬酸氢二胺、无水乙酸钠、磷酸氢二钾、低聚异麦芽糖、预糊化淀粉混合均匀后加入去离子水中，在35-40℃下以300-350rpm的搅拌速度搅拌35-40min，然后在117.5-118.5℃下灭菌20-22min，得到改良MRS液体培养基；
所述改良MRS液体培养基的制备中，葡萄糖、大豆蛋白胨、酵母浸粉、柠檬酸氢二胺、无水乙酸钠、磷酸氢二钾、低聚异麦芽糖、预糊化淀粉、去离子水的重量比为80-85:8-10:15-18:10-12:7-9:1-3:9-12:18-20:900-950。
4.根据权利要求1所述的具有安神助眠功能的益生菌群组合物，其特征在于，所述益生菌群组合物的制备方法，具体为：将一次混合物、二次混合物、麦芽糊精混合后加入粉碎机中进行常温粉碎，粉碎至400-600目，得到具有安神助眠功能的益生菌群组合物。
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