CN114685783B - 一种抗肿瘤聚氨基酸及其制备方法、应用 - Google Patents
一种抗肿瘤聚氨基酸及其制备方法、应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及生物医用高分子材料技术领域，尤其涉及一种抗肿瘤聚氨基酸及其制备方法、应用。所述聚氨基酸具有式(I)所示结构：其中，5≤n≤200，R1具有式(Ⅱ)、式(Ⅲ)或式(IV)所示结构，R2具有式(V)、式(VI)、式(VII)或式(VIII)所示结构。本发明提供的聚氨基酸可以靶向肿瘤细胞的细胞核，并与核内DNA发生相互作用引起肿瘤细胞死亡。本发明提供的聚氨基酸可以将多种癌细胞存活率抑制到25％以下。
Description
技术领域
本发明属于生物医用高分子材料技术领域，涉及一种聚氨基酸及其制备方法、应用，尤其涉及一种抗肿瘤聚氨基酸及其制备方法、应用。
背景技术
癌症是由于恶性增殖的肿瘤细胞不可控制的分裂，超出了正常极限而产生的。随着病程进展，肿瘤细胞会侵入机体附近或远端的组织，发生转移，最终导致患者死亡。世界卫生组织的数据表明，全球死亡人数中约有13％是由癌症所引起的，这表明癌症已经成为当前人类死亡和发病的主要原因之一。半个多世纪以来，科研人员投入了大量资源深入研究如何更好地诊断和治疗肿瘤。目前，癌症的主要治疗手段仍然是手术切除，化学疗法和放射疗法，或者是三者的有机组合。其中，化学疗法是非常重要的也是最为常见的治疗手段，尤其是对于化疗敏感的癌症，已经发生转移的癌症或者是晚期的癌症。近些年来，尽管研究人员不断开发出新的天然或者人工合成化合物用于肿瘤治疗，并且采用的治疗方案也不断改进，但是由于绝大多数临床使用的化疗药物都是分子量小于500g/mol的小分子化合物，其始终存在一些不可避免的问题：(i)血液循环时的半衰期短，代谢快，清除率高；(ii)缺乏靶向性，在正常组织大量富集，造成全身毒性并且降低了药物利用率；(iii)对于小分子药物，癌细胞容易发展出耐药性，导致预后较差。
为了改善化疗药物的治疗指数，在过去的数十年里，研究人员提出了高分子治疗的概念。治疗型高分子药物既解决了传统小分子化疗药物水溶性差、半衰期短、靶向性差、毒副作用大的问题，同时也避免了耗费精力去设计精细且复杂的智能响应性纳米药物递送体系，并且不会因为大量使用小分子化疗药而引起肿瘤耐药，因此这种“治疗型高分子药物”的开发和探索，有望为高分子材料在肿瘤治疗中的进一步应用开辟新的方向。目前已经报道了多种天然的核定位序列(NLS)，例如SV40 T抗原，腺病毒，TAT肽等，通过偶联这些NLS配体即可促进各种外源的物质经过importinα/β通路转运入细胞核中。然而，对于人工合成的细胞核靶向型聚合物的研究，到目前为止还非常有限。
因此，如何设计一种更为适宜的细胞核靶向型聚合物，进一步拓宽治疗型高分子药物的发展前景，为后续研究提供一个可行性方向，已成为业内诸多前沿学者广泛关注的焦点的之一，具有重要的意义。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种聚氨基酸及其制备方法、应用，特别是一种抗肿瘤聚氨基酸，该具有特定结构的聚氨基酸，对多种肿瘤细胞系表现出抑制能力。
本发明提供了一种聚氨基酸，具有式(I)所示的结构，
其中，5≤n≤200，
R1选自式(Ⅱ)、式(Ⅲ)或式(IV)所示的结构：
R2选自式(V)、式(VI)、式(VII)或式(VIII)所示结构：
优选的，n为20、40、100或200。
本发明还提供了一种聚氨基酸的制备方法，包括以下步骤：
将具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)和三级胺在第一溶剂中进行反应，得到具有式(I)结构的聚氨基酸；
所述三级胺包括具有式(X)结构的三级胺、具有式(XI)结构的三级胺、具有式(XII)结构的三级胺或具有式(XIII)结构的三级胺；
其中，5≤n≤200，R1具有式(Ⅱ)、式(Ⅲ)或式(IV)所示结构：
R2具有式(V)、式(VI)、式(VII)或式(VIII)所示结构：
优选的，具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的侧基中氯原子和具有(X)、(XI)、(XII)或(XIII)结构的三级胺的摩尔比为1：1-10；所述第一溶剂包括二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺中和N-甲基吡咯烷酮中的一种或几种。所述反应的温度为40-100℃；所述反应的时间为24-72h。
优选的，所述具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)按照以下步骤制备：
在第一引发剂的作用下，具有式(XIV)所示结构的γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐在第二溶剂中开环聚合，得到具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)；所述第一引发剂为具有式(XV)、式(XVI)或式(XVII)所示结构的氨基化合物；所述第二溶剂为无水四氢呋喃、无水N,N-二甲基甲酰胺和N-甲基吡咯烷酮中的一种或几种；
优选的，所述具有式(XV)所示结构的氨基化合物按照以下步骤制备，所述具有式(XVI)或式(XVII)所示结构的氨基化合物的来源一般市售。
在第一催化剂的作用下，将焦脱镁叶绿酸a和N-Boc-乙二胺在第三溶剂中反应，得到的产物在三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶液中脱保护，得到具有式(XV)所示结构的氨基化合物；
所述三氟乙酸和二氯甲烷的体积比为1：3-8；
所述第三溶剂为二氯甲烷、二甲基亚砜和N,N-二甲基甲酰胺中的一种或几种；
所述第一催化剂包括1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺；
所述焦脱镁叶绿酸a、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1-1.5：1.5-2.5：0.5-1；
所述焦脱镁叶绿酸a和N-Boc-乙二胺的摩尔比为1：2-4。
本发明还提供了一种上文所述的聚氨基酸或上文所述的制备方法制得的聚氨基酸在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明设计的以焦脱镁叶绿酸a等为端基，季铵盐功能化的细胞核靶向型抗肿瘤聚氨基酸材料，成功实现了靶向细胞核的抗肿瘤聚氨基酸大分子药物治疗。由于此核靶向型抗肿瘤聚氨基酸材料携带大量正电荷，可以迅速透过肿瘤细胞膜并靶向到细胞核，与负电性的DNA紧密结合，最终诱导细胞死亡，此外，在同等条件下，此核靶向型抗肿瘤聚氨基酸材料几乎没有被正常小肠上皮细胞MODE-K所摄取，这表明了其可以特异性地进入肿瘤细胞并靶向细胞核，从而赋予了其进一步用于肿瘤治疗的可能性。
本发明提供了一种聚氨基酸，具有式(I)所示结构：其中，5≤n≤200，R1具有式(Ⅱ)、式(Ⅲ)、式(IV)所示结构，R2具有式(V)、式(VI)、式(VII)、式(VIII)所示结构。本发明提供的聚氨基酸可以靶向肿瘤细胞的细胞核，并与核内DNA发生相互作用导致肿瘤细胞死亡。本发明提供的聚氨基酸可以将多种癌细胞存活率抑制到25％以下。
附图说明
图1为本发明实施例3制备得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的核磁共振氢谱图；
图2为本发明实施例20制备得到的聚氨基酸的核磁共振氢谱图；
图3为本发明实施例20中CT26.WT鼠源结肠癌细胞随着聚氨基酸浓度的增加对应的细胞存活率；
图4为本发明实施例20中的阳离子聚氨基酸在细胞内的分布。
具体实施方式
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为了进一步说明本发明的特征和优点，而不是对发明权利要求的限制。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明所有原料，对其来源没有特别限制，在市场上购买的或按照本领域技术人员熟知的常规方法制备的即可。
本发明所有原料，其来源和简称均属于本领域常规来源和简称，在其相关用途的领域内均是清楚明确的，本领域技术人员根据简称以及相应的用途，能够从市售中购买得到或常规方法制备得到。
特别的，在本发明中涉及较多的结构或取代基团，因而，对于上述结构和基团的命名和表述方式，本发明均按照本领域熟知的命名原则进行命名和结构式表述，本领域技术人员基于本领域的常识能够清楚和明确的知晓本发明所要表达的含义。其中，由于命名原则的差别，部分结构和取代基团的名称可能并不唯一，在本发明中，也可以基于反应机理、反应路线和具体的结构式进行参考。
本发明提供了一种聚氨基酸，具有式(I)所示的结构，
其中，5≤n≤200，
R1选自式(Ⅱ)、式(Ⅲ)或式(IV)所示的结构：
R2选自式(V)、式(VI)、式(VII)或式(VIII)所示结构：
在本发明的某些实施例中，n为20、40、100或200。
式(Ⅱ)、式(Ⅲ)或式(IV)所示结构中，所述波浪处对应的键为基团的连接键，与上述主体结构相连。
式(V)、式(VI)、式(VII)或式(VIII)所示结构中，所述波浪处对应的键为基团的连接键，与上述主体结构相连。
在本发明中，所述聚氨基酸优选为抗肿瘤聚氨基酸。
本发明提供的聚氨基酸可以靶向肿瘤细胞的细胞核，并与核内DNA发生相互作用导致肿瘤细胞死亡。本发明提供的聚氨基酸可以将多种癌细胞存活率抑制到25％以下。
本发明还提供了一种上文所述的聚氨基酸的制备方法，包括以下步骤：
将具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)和三级胺在第一溶剂中进行反应，得到具有式(I)结构的聚氨基酸；
所述三级胺包括具有式(X)结构的三级胺、具有式(XI)结构的三级胺、具有式(XII)结构的三级胺或具有式(XIII)结构的三级胺；
其中，5≤n≤200，R1具有式(Ⅱ)、式(Ⅲ)或式(IV)所示结构：
R2具有式(V)、式(VI)、式(VII)或式(VIII)所示结构：
在本发明的某些实施例中，n为20、40、100或200。
在本发明的某些实施例中，所述具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)按照以下步骤制备：
在第一引发剂的作用下，具有式(XIV)所示结构的γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐在第二溶剂中开环聚合，得到具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)；所述第一引发剂为具有式(XV)、式(XVI)或式(XVII)所示结构的氨基化合物；所述第二溶剂为无水四氢呋喃、无水N,N-二甲基甲酰胺和N-甲基吡咯烷酮中的一种或几种；
在本发明的某些实施例中，所述第二溶剂为无水四氢呋喃、无水N,N-二甲基甲酰胺和N-甲基吡咯烷酮中的一种或几种。在本发明的某些实施例中，具有式(XIV)所示结构的γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐和第一引发剂的质量总和与第二溶剂的用量比为2.0-5.0g：100-300mL。在某些实施例中，具有式(XIV)所示结构的γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐和第一引发剂的质量总和与第二溶剂的用量比为2.7g：250mL、5.3g：250mL、10.7g：250mL、20.3g：250mL。
在本发明的某些实施例中，所述具有式(XV)所示结构的氨基化合物按照以下步骤制备:
在第一催化剂的作用下，将焦脱镁叶绿酸a和N-Boc-乙二胺在第三溶剂中反应，得到的产物在三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶液中脱保护，得到具有式(XV)所示结构的氨基化合物；
在本发明的某些实施例中，所述第三溶剂为二氯甲烷、二甲基亚砜和N,N-二甲基甲酰胺中的一种或几种；本发明对所述第三溶剂的用量并无特殊的限制。在本发明的某些实施例中，焦脱镁叶绿酸a和第三溶剂的用量比为0.7g：180mL。
在本发明的某些实施例中，所述第一催化剂包括1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺；
在本发明的某些实施例中，所述焦脱镁叶绿酸a、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1-1.5：1.5-2.5：0.5-0.8；在本发明的某些实施例中，所述焦脱镁叶绿酸a、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺的质量比为1：1.5：0.6；
在本发明的某些实施例中，所述焦脱镁叶绿酸a和N-Boc-乙二胺的摩尔比为1：2-4。
在本发明的某些实施例中，焦脱镁叶绿酸a和N-Boc-乙二胺在第三溶剂中反应的温度为20～25℃或25℃，时间为12-24h或12h。
在本发明的某些实施例中焦脱镁叶绿酸a和N-Boc-乙二胺在第三溶剂中反应完成后，还包括：将得到的反应产物依次用稀盐酸和去离子水洗涤，干燥后旋干除去有机溶剂，然后在三氟乙酸和二氯甲烷的混合溶液中脱保护，得到具有式(XV)所示结构的氨基化合物。在本发明的某些实施例中，所述稀盐酸的pH值为1-3或2。在本发明的某些实施例中，所述洗涤的次数大于等于3次。
在本发明的某些实施例中，所述三氟乙酸和二氯甲烷的体积比为1：3-8；在某些实施例中，所述三氟乙酸和二氯甲烷的体积比为1：6。
在本发明的某些实施例中，所述脱保护在冰浴条件下进行，所述脱保护的时间为1-2h。在某些实施例中，所述脱保护的时间为1h。在本发明的某些实施例中，所述脱保护后，还包括：将脱保护后的反应产物在乙醚中沉降，用布氏漏斗抽滤得到白色固体，并在真空干燥器中抽干，得到具有式(XV)所示结构的氨基化合物。
在本发明的实施例中，具有式(XVI)和式(XVII)所示结构的氨基化合物的来源为一般市售。
本发明对所述具有式(XIV)所示结构的γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐的来源并无特殊的限制，在本发明的某些实施例中，所述具有式(XIV)所示结构的γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐按照肖春生等人发表的文献Chunsheng Xiao et.Al,MacromolRapid Comm,2010,31,991-997中记载的方法进行合成。
在本发明的某些实施例中，所述第一引发剂与具有式(XIV)所示结构的γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐的摩尔比为1：20-200。
在本发明的某些实施例中，具有式(XIV)所示结构的γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐在第二溶剂中开环聚合的温度为10-60℃，时间为1-7d。在某些实施例中，具有式(XIV)所示结构的γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐在第二溶剂中开环聚合的温度为20-25℃或25℃，时间为3-5d或3d。
在本发明的某些实施例中，具有式(XIV)所示结构的γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐在第二溶剂中开环聚合完成后，还包括：将反应后的产物进行透析和冻干，得到具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)。本发明对所述透析和冻干的方法并无特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的透析和冻干的方法即可。
得到具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)后，将具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)和具有(X)、(XI)、(XII)或(XIII)结构的三级胺在第一溶剂中进行反应，得到具有式(I)结构的聚氨基酸。
在本发明的某些实施例中，所述第一溶剂包括四氢呋喃，二甲基亚砜或N,N-二甲基甲酰胺中的一种或几种。本发明对所述第一溶剂的用量并无特殊的限制，能够将具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)和具有(X)、(XI)、(XII)或(XIII)结构的三级胺溶解即可。
本发明对所述具有(X)、(XI)、(XII)或(XIII)结构的三级胺的来源并无特殊的限制，可以为一般市售。
在本发明的某些实施例中，所述具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的侧基中氯原子和具有(X)、(XI)、(XII)或(XIII)结构的三级胺的摩尔比为1：1-10或1：3。
在本发明的某些实施例中，所述反应的温度为40-100℃，时间为24-72h。在某些实施例中，所述反应的温度为80℃，时间为48h。
在本发明的某些实施例中，所述反应完成后，还包括：将反应后的产物溶液进行透析和冻干，得到具有式(I)结构的聚氨基酸。本发明对所述透析和冻干的方法并无特殊的限制，采用本领域技术人员熟知的透析和冻干的方法即可。
本发明还提供了一种上文所述的聚氨基酸或上文所述的制备方法制得的聚氨基酸在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明提供的聚氨基酸可以靶向肿瘤细胞的细胞核，并与核内DNA发生相互作用导致肿瘤细胞死亡。本发明提供的聚氨基酸可以将多种癌细胞存活率抑制到25％以下。
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的一种聚氨基酸及其制备方法、应用进行详细描述，但是应当理解，这些实施例是在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，只是为进一步说明本发明的特征和优点，而不是对本发明权利要求的限制，本发明的保护范围也不限于下述的实施例。
以下实施例所用的原料均为一般市售。
所述肿瘤细胞选自CT26.WT鼠源结肠癌细胞、小鼠乳腺癌4T1细胞、K7M2-WT小鼠骨肉瘤细胞以及MCF-7人乳腺癌细胞，均购买自中科院上海细胞库。
实施例1
具有式(XV)所示结构的氨基化合物的合成：
称取0.77g(1.4mmol)的焦脱镁叶绿酸a，用180mL二氯甲烷溶解后再加入0.99gEDC·HCl(5.1mmol)和0.48g N-羟基琥珀酰亚胺(NHS，4.1mmol)。室温条件下避光反应12h。称量0.88g(5.5mmol)的N-boc-乙二胺加入到反应混合液中，继续反应过夜。停止反应，用30mL的稀盐酸洗涤有机相两次，再用去离子水洗涤一次，无水硫酸镁干燥有机相，抽滤除掉硫酸镁后，旋蒸除去多余的溶剂得到焦脱镁叶绿酸a和N-boc-乙二胺的偶联产物。将上述偶练产物溶于三氟乙酸/二氯甲烷(体积比1：6)混合溶液中，在室温下避光搅拌1h。之后旋蒸除去多余溶剂，重新用300mL二氯甲烷溶解。并用稀盐酸洗涤有机相两次，去离子水洗涤一次，收集有机相用无水硫酸镁干燥。抽滤除去硫酸镁后旋干得到具有式(XV)所示结构的氨基化合物。
实施例2
具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的合成，式(IX)结构中，n＝20：
称取实施例1中得到的氨基化合物0.19g(0.33mmol)用100mL的无水DMF溶解，然后向其中快速加入提前溶解于150mL无水DMF中的2.5g(8.6mmol)化合物(XIV)γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐。25℃下搅拌反应72h后，透析，冻干，获得黑色粉末产物PPa-聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)。
实施例3
具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的合成，式(IX)结构中，n＝40：
称取实施例1中得到的氨基化合物0.19g(0.33mmol)用100mL的无水DMF溶解，然后向其中快速加入提前溶解于150mL无水DMF中的5.1g(17.2mmol)化合物(XIV)γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐。25℃下搅拌反应72h后，透析，冻干，获得黑色粉末产物PPa-聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)。
实施例4
具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的合成，式(IX)结构中，n＝100：
称取实施例1中得到的氨基化合物0.19g(0.33mmol)用100mL的无水DMF溶解，然后向其中快速加入提前溶解于150mL无水DMF中的10.5g(35.2mmol)化合物(XIV)γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐。25℃下搅拌反应72h后，透析，冻干，获得黑色粉末产物PPa-聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)。
实施例5
具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的合成，式(IX)结构中，n＝200：
称取实施例1中得到的氨基化合物0.19g(0.33mmol)用100mL的无水DMF溶解，然后向其中快速加入提前溶解于150mL无水DMF中的20.1g(70.2mmol)化合物(XIV)γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐。25℃下搅拌反应72h后，透析，冻干，获得黑色粉末产物PPa-聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)。
实施例6
具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的合成，式(IX)结构中，n＝20：
称取苯甲胺0.19g(0.33mmol)用100mL的无水DMF溶解，然后向其中快速加入提前溶解于150mL无水DMF中的2.5g(8.6mmol)化合物(XIV)γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐。25℃下搅拌反应72h后，透析，冻干，获得黑色粉末产物PPa-聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)。
实施例7
具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的合成，式(IX)结构中，n＝40：
称取苯甲胺0.19g(0.33mmol)用100mL的无水DMF溶解，然后向其中快速加入提前溶解于150mL无水DMF中的5.1g(17.2mmol)化合物(XIV)γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐。25℃下搅拌反应72h后，透析，冻干，获得黑色粉末产物PPa-聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)。
实施例8
具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的合成，式(IX)结构中，n＝100：
称取苯甲胺0.19g(0.33mmol)用100mL的无水DMF溶解，然后向其中快速加入提前溶解于150mL无水DMF中的10.5g(35.2mmol)化合物(XIV)γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐。25℃下搅拌反应72h后，透析，冻干，获得黑色粉末产物PPa-聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)。
实施例9
具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的合成，式(IX)结构中，n＝200：
称取苯甲胺0.19g(0.33mmol)用100mL的无水DMF溶解，然后向其中快速加入提前溶解于150mL无水DMF中的20.1g(70.2mmol)化合物(XIV)γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐。25℃下搅拌反应72h后，透析，冻干，获得黑色粉末产物PPa-聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)。
实施例10
具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的合成，式(IX)结构中，n＝20：
称取正己胺0.19g(0.33mmol)用100mL的无水DMF溶解，然后向其中快速加入提前溶解于150mL无水DMF中的2.5g(8.6mmol)化合物(XIV)γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐。25℃下搅拌反应72h后，透析，冻干，获得黑色粉末产物PPa-聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)。
实施例11
具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的合成，式(IX)结构中，n＝40：
称取正己胺0.19g(0.33mmol)用100mL的无水DMF溶解，然后向其中快速加入提前溶解于150mL无水DMF中的5.1g(17.2mmol)化合物(XIV)γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐。25℃下搅拌反应72h后，透析，冻干，获得黑色粉末产物PPa-聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)。
实施例12
具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的合成，式(IX)结构中，n＝100：
称取正己胺0.19g(0.33mmol)用100mL的无水DMF溶解，然后向其中快速加入提前溶解于150mL无水DMF中的10.5g(35.2mmol)化合物(XIV)γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐。25℃下搅拌反应72h后，透析，冻干，获得黑色粉末产物PPa-聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)。
实施例13
具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的合成，式(IX)结构中，n＝200：
称取正己胺0.19g(0.33mmol)用100mL的无水DMF溶解，然后向其中快速加入提前溶解于150mL无水DMF中的20.1g(70.2mmol)化合物(XIV)γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐。25℃下搅拌反应72h后，透析，冻干，获得黑色粉末产物PPa-聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)。
实施例14
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝20：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例2中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.42g(4.8mmol)的N，N-二乙基甲胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例15
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝20：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例2中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.61g(4.8mmol)的N，N-二甲基环己胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例16
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝20：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例2中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.48g(4.8mmol)的N-甲基哌啶，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例17
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝20：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例2中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.39g(4.8mmol)的N-甲基咪唑，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例18
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝40：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例3中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.42g(4.8mmol)的N，N-二乙基甲胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例19
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝40：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例3中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.61g(4.8mmol)的N，N-二甲基环己胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例20
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝40：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例3中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.48g(4.8mmol)的N-甲基哌啶，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例21
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝40：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例3中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.39g(4.8mmol)的N-甲基咪唑，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例22
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝100：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例4中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.42g(4.8mmol)的N，N-二乙基甲胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例23
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝100：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例4中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.61g(4.8mmol)的N，N-二甲基环己胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例24
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝100：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例4中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.48g(4.8mmol)的N-甲基哌啶，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例25
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝100：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例4中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.39g(4.8mmol)的N-甲基咪唑，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例26
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝200：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例5中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.42g(4.8mmol)的N，N-二乙基甲胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例27
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝200：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例5中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.61g(4.8mmol)的N，N-二甲基环己胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例28
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝200：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例5中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.48g(4.8mmol)的N-甲基哌啶，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例29
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝200：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例5中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.39g(4.8mmol)的N-甲基咪唑，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例30
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝20：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例6中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.42g(4.8mmol)的N，N-二乙基甲胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例31
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝20：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例6中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.61g(4.8mmol)的N，N-二甲基环己胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例32
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝20：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例6中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.48g(4.8mmol)的N-甲基哌啶，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例33
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝20：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例6中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.39g(4.8mmol)的N-甲基咪唑，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例34
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝40：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例7中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.42g(4.8mmol)的N，N-二乙基甲胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例35
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝40：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例7中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.61g(4.8mmol)的N，N-二甲基环己胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例36
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝40：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例7中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.48g(4.8mmol)的N-甲基哌啶，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例37
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝40：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例7中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.39g(4.8mmol)的N-甲基咪唑，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例38
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝100：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例8中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.42g(4.8mmol)的N，N-二乙基甲胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例39
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝100：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例8中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.61g(4.8mmol)的N，N-二甲基环己胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例40
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝100：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例8中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.48g(4.8mmol)的N-甲基哌啶，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例41
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝100：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例8中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.39g(4.8mmol)的N-甲基咪唑，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例42
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝200：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例9中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.42g(4.8mmol)的N，N-二乙基甲胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例43
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝200：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例9中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.61g(4.8mmol)的N，N-二甲基环己胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例44
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝200：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例9中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.48g(4.8mmol)的N-甲基哌啶，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例45
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝200：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例9中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.39g(4.8mmol)的N-甲基咪唑，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例46
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝20：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例10中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.42g(4.8mmol)的N，N-二乙基甲胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例47
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝20：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例10中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.61g(4.8mmol)的N，N-二甲基环己胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例48
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝20：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例10中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.48g(4.8mmol)的N-甲基哌啶，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例49
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝20：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例10中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.39g(4.8mmol)的N-甲基咪唑，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例50
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝40：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例11中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.42g(4.8mmol)的N，N-二乙基甲胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例51
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝40：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例11中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.61g(4.8mmol)的N，N-二甲基环己胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例52
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝40：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例11中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.48g(4.8mmol)的N-甲基哌啶，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例53
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝40：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例11中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.39g(4.8mmol)的N-甲基咪唑，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例54
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝100：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例12中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.42g(4.8mmol)的N，N-二乙基甲胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例55
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝100：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例12中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.61g(4.8mmol)的N，N-二甲基环己胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例56
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝100：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例12中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.48g(4.8mmol)的N-甲基哌啶，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例57
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝100：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例12中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.39g(4.8mmol)的N-甲基咪唑，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例58
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝200：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例13中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.42g(4.8mmol)的N，N-二乙基甲胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例59
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝200：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例13中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.61g(4.8mmol)的N，N-二甲基环己胺，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例60
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝200：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例13中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.48g(4.8mmol)的N-甲基哌啶，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
实施例61
具有式(I)结构的聚氨基酸材料的合成，式(I)结构中，n＝200：
称量0.42g(侧基共含有1.6mmol氯原子)的实施例13中得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)，然后加入0.39g(4.8mmol)的N-甲基咪唑，再加入5mL的无水DMF搅拌直到溶解。另外称量0.9g(4.8mmol)碘化钠溶于5mL的无水乙腈中并和上述反应物的DMF溶液混合均匀，密封后在80℃下避光反应48h。反应停止后，先用真空泵抽去剩余溶剂，然后经透析、冻干获得黑色粉末状抗肿瘤聚氨基酸材料。
检测实施例
对本发明上述实施例得到的具有式(I)结构的聚氨基酸材料进行检测。
参见图1，图1为本发明实施例3制备得到的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的核磁共振氢谱图。
参见图2，图2为本发明实施例20制备得到的聚氨基酸的核磁共振氢谱图。从图2可知，聚合物的侧基成功地键合上了三级胺，得到了具有式(I)结构的阳离子聚氨基酸。
阳离子聚氨基酸的抗肿瘤活性通过细胞毒性试验来检测：
将本发明实施例20制备得到的具有式(I)结构的抗肿瘤聚氨基酸和CT26.WT鼠源结肠癌细胞、小鼠乳腺癌4T1细胞、K7M2-WT小鼠骨肉瘤细胞以及MCF-7人乳腺癌细胞共培养，采用MTT实验进行评估：
首先在96孔板中以6000个细胞/孔的密度(悬浮于200μLDMEM培养基)接种相应的细胞，在37℃下细胞培养箱中孵育24h。次日，用新鲜的DMEM培养基溶解相应的阳离子聚氨基酸材料，并梯度稀释成不同的浓度，弃去前一天的培养基，加入含有不同浓度阳离子聚氨基酸材料的DMEM，继续在37℃下细胞培养箱中孵育24h。之后在每个孔中加入MTT溶液(最终浓度0.5mg/mL)，继续在37℃下孵育4h。弃去孔板中的液体，并分别向每个孔中加入150μL的DMSO，溶解紫色甲瓒晶体。最后用酶标仪(Tecan,Switzerland)测定各个孔在570nm处的吸光度，用实验组的吸光度值和对照组相比即可计算出细胞的存活率。
参见图3，图3为本发明实施例20中CT26.WT鼠源结肠癌细胞随着聚氨基酸浓度的增加对应的细胞存活率。
从图3可知，聚氨基酸具有很强的抗结肠癌效果，将CT26.WT鼠源结肠癌细胞存活率抑制到24％以下。
实施例20制备的具有式(I)结构的聚氨基酸对不同癌细胞的细胞毒性，结果如表1所示。
表1实施例20制备的聚氨基酸对不同癌细胞的细胞毒性(IC50，μg/mL)
| CT26 | 4T1 | K7M2-WT | MCF-7 | |
| 实施例20 | 6.5 | 10.2 | 40.3 | 20.2 |
从表1可以看出，实施例20制备的阳离子聚氨基酸材料对CT26.WT鼠源结肠癌细胞、小鼠乳腺癌4T1细胞、K7M2-WT小鼠骨肉瘤细胞以及MCF-7人乳腺癌细胞都具有抗肿瘤活性，其IC50在6～50μg/mL之间。
阳离子聚氨基酸的细胞核靶向性通过使用共聚焦显微镜拍摄材料在细胞内的分布来验证：
将悬浮于2.0mL RPMI-1640培养基中的CT26细胞以每孔1.2×105个细胞的密度接种在6孔板中的无菌盖玻片上，并孵育24h。将培养基换成含有30μg/mL的阳离子聚氨基酸材料的新鲜培养基，并在37℃下孵育2h。随后，将细胞用PBS洗涤3次，并用4％多聚甲醛固定20min。接下来，用PBS洗涤细胞3次，并用DAPI(1μg/mL)染色5min并用PBS洗涤两次后，使用共聚焦显微镜(Carl Zeiss，LSM 780，德国)观察材料在细胞内的分布情况。
参见图4，图4为本发明实施例20中的阳离子聚氨基酸在细胞内的分布。
从图4可知，阳离子聚氨基酸具有很好的细胞核靶向性。
以上对本发明提供的一种抗肿瘤聚氨基酸及其制备方法、应用进行了详细的介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想，包括最佳方式，并且也使得本领域的任何技术人员都能够实践本发明，包括制造和使用任何装置或系统，和实施任何结合的方法。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。本发明专利保护的范围通过权利要求来限定，并可包括本领域技术人员能够想到的其他实施例。如果这些其他实施例具有不是不同于权利要求文字表述的结构要素，或者如果它们包括与权利要求的文字表述无实质差异的等同结构要素，那么这些其他实施例也应包含在权利要求的范围内。
Claims (6)
1.一种聚氨基酸，其特征在于，具有式(I)所示的结构，
其中，5≤n≤200，
R1选自式(Ⅱ)所示的结构：
R2选自式(V)、式(VI)、式(VII)或式(VIII)所示结构：
2.一种聚氨基酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)和三级胺在第一溶剂中进行反应，得到具有式(I)结构的聚氨基酸；
所述三级胺包括具有式(X)结构的三级胺、具有式(XI)结构的三级胺、具有式(XII)结构的三级胺或具有式(XIII)结构的三级胺；
其中，5≤n≤200，
R1选自式(Ⅱ)所示的结构：
R2选自式(V)、式(VI)、式(VII)或式(VIII)所示结构：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)侧基中氯原子和三级胺的摩尔比为1：(1～10)；
所述第一溶剂包括二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺中和N-甲基吡咯烷酮中的一种或多种。
4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述反应的温度为40～100℃；
所述反应的时间为24～72h。
5.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)的制备方法，包括以下步骤：
在第一引发剂的作用下，将具有式(XIV)所示结构的γ-氯己基-L-谷氨酸-N-羧基环内酸酐在第二溶剂中开环聚合，得到具有式(IX)结构的聚(γ-氯己基-L-谷氨酸酯)；
所述第一引发剂包括为具有式(XV)所示结构的氨基化合物中的一种或多种；
所述第二溶剂包括无水四氢呋喃、无水N,N-二甲基甲酰胺和N-甲基吡咯烷酮中的一种或多种。
6.权利要求1所述的聚氨基酸或权利要求2～5任意一项所述的制备方法所制备的聚氨基酸在制备肿瘤治疗药物中的应用。
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