CN113845551A - 一种具有光动力抗三阴乳腺癌活性的Pt(Ⅱ)配合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于抗癌药物研发技术领域，具体涉及一种具有光动力抗三阴乳腺癌活性的Pt(Ⅱ)配合物及其制备方法和应用。本发明以具有优异的光敏活性的碘代BODIPY(氟硼二吡咯)为光敏基团，DPA(二甲基吡啶胺)为Pt(Ⅱ)配位基团，创造性的设计合成出一个光动力活性Pt(Ⅱ)配合物。所述Pt(Ⅱ)配合物属于新化合物，表现出优良的体外抗三阴乳腺癌活性，具有潜在的药用价值，有望用于各种抗三阴乳腺癌药物的制备。本发明所述Pt(Ⅱ)配合物的结构式如下：

Description

一种具有光动力抗三阴乳腺癌活性的Pt(Ⅱ)配合物及其制备 方法和应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种具有光动力抗三阴乳腺癌活性的Pt(Ⅱ)配合物及其制备方法和应用。

背景技术

乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤，所谓三阴乳腺癌是乳腺癌手术病理标本的免疫组织化监测雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)和人表皮生长因子受体(HER-2)这三个指标都是阴性的乳腺癌，属于特殊类型的乳腺恶性癌。中国人三阴乳腺癌的临床特征，主要为：(1)多为年轻患者；(2)大肿块；(3)淋巴转移率高；(4)有乳腺癌家族史。乳腺癌是一种激素依赖性肿瘤，内分泌治疗是一种主要的治疗手段，三阴乳腺癌因其激素受体均呈阴性，因此，缺乏有效的靶向治疗，免疫治疗和内分泌治疗也不敏感，化疗是目前唯一的系统治疗手段。治疗结束后，患者1至2年内可能发生复发和转移，转移后肿瘤进展迅速，预后不好。

乳腺癌是世界第二高发癌症，女性发病率第一，死亡率排名第五。居国外学者统计，三阴乳腺癌占所有乳腺癌患者的15％-20％，以非洲、非籍美洲绝经前年轻女性患病率较高。国内学者报道，中国近1/4患者为三阴乳腺癌。三阴乳腺癌对化疗敏感性高，有报道指出，以铂类药物为基础的化疗可提高三阴乳腺癌的敏感性与反应率。然而铂类抗肿瘤药物的应用却受到限制，究其原因主要有二：(1)毒副作用较明显，包括肾毒性、神经毒性、骨髓抑制、恶心、呕吐、脱发和乏力等；(2)耐药性较突出，包括内源性耐药性和获得性耐药性。近年来，光动力疗法(PDT)已成为治疗各种恶性肿瘤的有效方法，其优点有创伤小、低毒性，对患者损伤较小。在PDT中，光、光敏剂(PS)和分子氧的光化学相互作用产生活性氧(ROS)，诱导细胞死亡。通过使用PDT和化疗联合治疗，可以促进协同作用，以消除耐药性，提高癌症根除的效果。

发明内容

本发明针对现有技术中存在的技术问题，提供一种具有光动力抗三阴乳腺癌活性的Pt(Ⅱ)配合物及其制备方法和应用，所述Pt(Ⅱ)配合物在绿光照射下对三阴乳腺癌细胞具有很高的抑制活性，而在避光条件下则抑制活性很低，且其在避光条件下，对正常细胞没有明显的毒性。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

一种具有光动力抗三阴乳腺癌活性的Pt(Ⅱ)配合物，其结构式如下：

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进。

本发明的另一目的是提供上述Pt(Ⅱ)配合物的制备方法。

具体的技术方案如下：

一种具有光动力抗三阴乳腺癌活性的Pt(Ⅱ)配合物的制备方法，所述Pt(Ⅱ)配合物的合成路线如下：

进一步，所述Pt(Ⅱ)配合物的制备方法，包括以下步骤：

1)将2,4-二甲基吡咯、4-氯丁酰氯溶于二氯甲烷中，25℃下搅拌5min后，在50℃下搅拌2h，冷却至室温，真空蒸发，残渣用甲苯和二氯甲烷溶解，加入三乙胺，常温搅拌15min；在N₂保护下，缓慢滴加BF₃·Et₂O，之后在50℃下继续搅拌反应1h；冷却至室温，蒸发溶剂，然后用乙酸乙酯溶解残余物，并用水洗涤；收集有机层，用无水硫酸钠干燥过夜；过滤后，蒸发溶剂，得到中间体ClPro-BODIPY红色粘稠粗品；

2)用硅胶柱层析纯化步骤1)中粗品，得橙红色的ClPro-BODIPY纯品；

3)将步骤2)所得的ClPro-BODIPY溶于乙腈，与K₂CO₃、KI的水溶液混合，再加入二甲基吡啶胺的乙腈溶液；在N₂保护和80℃下搅拌反应12h，冷却至室温后，减压蒸发，残渣溶解于二氯甲烷，用纯水洗涤三次；收集有机层，用无水硫酸钠干燥过夜；过滤后，蒸发溶剂，得到红色粘稠粗品；

4)用硅胶柱层析纯化步骤3)的粗品，得到红色的中间体BC；

5)取步骤4)所得的BC溶于二氯甲烷，并加入N-碘代丁二酰亚胺(NIS)，在N₂保护下，室温搅拌反应，TCL监测反应进程，至BC反应完全，停止反应；用纯水和二氯甲烷分别洗涤三次，以除去过量的NIS，收集有机相，加无水硫酸钠干燥，放置过夜；抽滤，滤液旋蒸，得I₂BC粗品；

6)用硅胶柱纯化步骤5)所得粗品，得紫红色I₂BC纯品；

7)将步骤6)所得I₂BC溶于甲醇，与K₂PtCl₄的水溶液混合，在室温下避光搅拌反应48h；反应结束后，离心机高速离心，弃去上清液，依次用二氯甲烷、乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤数次，至洗涤液澄清，得红色沉淀产物，即为所述Pt(Ⅱ)配合物。

优选的，步骤7)中，I₂BC与K₂PtCl₄的物质的量之比为1:1-1.5。

优选的，步骤2)中，硅胶柱流动相为体积比为1:2的石油醚/二氯甲烷混合溶液。

优选的，步骤4)和步骤6)中，硅胶柱流动相均为体积比为20:1的乙酸乙酯/甲醇混合溶液。

本发明的最后目的是提供上述Pt(Ⅱ)配合物的应用。

具体的技术方案如下：

一种具有光动力抗三阴乳腺癌活性的Pt(Ⅱ)配合物在制备三阴乳腺癌防治药物中的应用。

本发明的有益效果是：

1)本发明首次以具有优异的光敏活性的碘代BODIPY(氟硼二吡咯)为光敏基团，DPA(二甲基吡啶胺)为Pt(Ⅱ)配位基团，创造性的设计合成出一个光动力活性Pt(Ⅱ)配合物，此配合物属于新化合物，在本领域和现有文献中尚无报道。

2)本发明通过¹H-NMR和HRMS等表征手段确定了上述新型Pt(Ⅱ)配合物的结构，并证明了所陈述的制备方法能成功制备出目标配合物I₂BC-Pt。

3)本发明通过体外抗肿瘤实验和细胞ROS实验，证实了目标Pt(Ⅱ)配合物在光照和非光照条件下均对三阴乳腺癌细胞表现出良好的抑制作用，在光照后对三阴乳腺癌细胞表现出了强烈的抑制作用，且其在避光条件下对正常细胞没有明显的毒性，期望能在克服现有铂类药物的耐药性和毒副作用方面有所改善，为未来设计、合成新型光动力抗癌活性铂类药物做出一些有益的探索和提供有价值的借鉴。

附图说明

图1为本发明实施例1中BC-Pt配合物的¹H-NMR图谱；

图2为本发明实施例1中BC-Pt配合物的HRMS图谱；

图3为本发明实施例1中I₂BC-Pt配合物的¹H-NMR图谱；

图4为本发明实施例1中I₂BC-Pt配合物的HRMS图谱；

图5为本发明实施例1中BC-Pt配合物的荧光光谱图；

图6为本发明实施例1中I₂BC-Pt配合物的荧光光谱图；

图7为本发明实施例1制得的I₂BC-Pt配合物的紫外可见吸收光谱图；

图8为本发明实施例1制得的I₂BC-Pt配合物在MDA-MB-231细胞内产生ROS的荧光显微镜成像图；

图9为本发明实施例1制得的I₂BC-Pt配合物在520nm绿光照射下产生单线态氧的衰减曲线。

具体实施方式

以下对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。

除非另有说明，本发明采用的原料及设备为本技术领域常规原料及设备(常规市售品)，皆可于市场购得。

需要说明是，本发明中，BC的结构式如下：

I₂BC的结构式如下：

实施例1

具有如下结构式的Pt(Ⅱ)配合物及其参照物(BC-Pt配合物)的制备：

所述Pt(Ⅱ)配合物及其参照物(BC-Pt配合物)的合成路线如下：

其中，R＝H或I。

具体而言，包括以下步骤：

1)将2,4-二甲基吡咯(2.00g,21mmol)溶于二氯甲烷(150mL)中。在氮气保护下，加入4-氯丁酰氯(1.48g，10.5mmol)，25℃下搅拌5min后，在50℃下磁力搅拌2h，冷却至室温，真空蒸发，残渣用甲苯(150mL)和二氯甲烷(25mL)溶解，5min后，加入三乙胺(2.53g，25mmol)至反应混合物中，常温搅拌15min。在N₂保护下，缓慢滴加BF₃·Et₂O(7.60g，50mmol)。之后，在50℃下继续磁力搅拌反应1h。冷却至室温，在真空中蒸发溶剂，然后用乙酸乙酯(200mL)溶解残余物，并用水(3×60mL)洗涤。收集有机层，用无水硫酸钠干燥过夜。过滤后，蒸发溶剂，得到红色粘稠粗品，用石油醚/二氯甲烷＝1:2(体积比)硅胶柱层析纯化粗品，得橙红色的ClPro-BODIPY(C₁₆H₂₂BClF₂N₂)粉末(0.50g，产率：14.6％)。

ClPro-BODIPY：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ2.05-2.12(m,2H),2.44(s,6H),2.52(s,6H),3.11-3.16(m,2H),3.72(t,J＝8.0Hz,2H),6.06(s,2H)。¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ＝14.48(2C),16.60(2C),25.95,34.03,44.75,121.86(2C),131.43,140.33(2C),144.43(2C),154.37(2C)。

2)将ClPro-BODIPY(0.56g，1.73mmol)溶于乙腈(30mL)中，K₂CO₃(4.78g,34.60mmol,20.0eq)和KI(5.74g,34.60mmol,20.0eq)溶于水(10mL)，加入前面混合物中。二甲基吡啶胺(1.03g,5.19mmol,3.0eq)溶于5mL乙腈并滴入先前的混合物。在N₂保护和80℃下搅拌反应12h，冷却至室温后，真空减压蒸发，残渣溶解于50mL二氯甲烷，用纯水(3×60mL)洗涤。收集有机层，用无水硫酸钠干燥过夜。过滤后，蒸发溶剂，得到红色粘稠粗品。用乙酸乙酯/甲醇＝20:1(体积比)硅胶柱层析纯化粗品，得到红色的中间体BC(127.2mg，产率：15.1％)。

BC：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝1.76(m,2H),2.26(s,6H),2.39

(s,6H),2.62(t,J＝8.0Hz,2H),2.79(t,J＝8.0Hz,2H),3.80(s,4H),6.21(s,2H),7.28(t,J＝8.0Hz,2H),7.58(d,J＝8.0Hz,2H),7.79(td,J＝8.0Hz,J＝1.7Hz,2H),8.50(d,J＝4.0Hz,2H)。¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ＝14.42(2C),16.26(2C),26.27,29.40,54.14,60.53(2C),121.60(2C),122.11(2C),122.94(2C),131.36,136.42(2C),140.24(2C),146.01(2C),149.09(2C),153.87(2C),159.34(2C)。ESI-MS(CH₃OH):m/z实测值：488.3和510.2,C₂₈H₃₂BF₂N₅,[BC+H]⁺与[BC+Na]⁺理论值分别为488.27和510.26。

3)将BC(48.727mg，0.1mmol)溶于10ml甲醇，K₂PtCl₄(41.509mg，1mmol)溶于10mL蒸馏水，在黑暗中且室温下混合搅拌反应48h。反应结束后，离心机高速离心，弃去上清液，再依次用二氯甲烷、乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤数次，至上清液澄清，得浅红色沉淀产物，即为所述Pt(Ⅱ)配合物的参照物(BC-Pt配合物，20.6mg，产率27.4％)，其中R＝H。

如图1和图2所示，BC-Pt配合物:¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝1.92(m,2H),2.33(s,6H),2.38(s,6H),2.8(t,J＝8.0Hz,2H),3.29(t,J＝8.0Hz,2H),4.97(d,J＝8.0Hz,2H),5.35(d,J＝8.0Hz,2H),6.23(s,2H),7.65(td,J＝8.0Hz,2H),7.82(d,J＝4.0Hz,2H),8.28(t,J＝8.0Hz,2H),8.78(d,J＝4.0Hz,2H)。ESI-MS(MeCN):m/z实测值为:716.2033、717.2052、718.2042、719.2045、720.2046,C₂₈H₃₂BCl₂F₂N₅Pt,[BC-Pt-Cl]⁺理论值为716.2029、717.2050。

4)取BC(267.4mg,0.5mmol)溶于30mL二氯甲烷(CH₂Cl₂)，并移至100mL三口烧瓶中，在N₂保护下，室温搅拌。称取N-碘代丁二酰亚胺(NIS)(819.7mg，3mmol)加入到三口烧瓶中，TCL监测反应进程，至BC反应完全，停止反应。用纯水和二氯甲烷分别洗涤三次，以除去过量的NIS，收集有机相，加无水硫酸钠干燥，放置过夜。抽滤，除去无水硫酸钠，旋蒸，得粗品。用乙酸乙酯/甲醇＝20:1(体积比)硅胶柱纯化粗品，得紫红色粉末160mg,即为I₂BC产物(产率：81.2％)。

I₂BC：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ＝1.91(m,2H),2.34(s,6H),2.50(s,6H),2.60(t,J＝8.0Hz,2H),2.92(t,J＝8.0Hz,2H),4.05(s,4H),7.25(t,J＝8.0Hz,2H),7.53(d,J＝8.0Hz,2H),7.73(td,J＝8.0Hz,J＝1.7Hz,2H),8.59(d,J＝4.0Hz,2H)。¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ＝16.14(2C),19(2C),26.87,28.79,53.88,60.18(2C),122.69(2C),123.35(2C),123.63(2C),131.30,137.03(2C),142.16(2C),145.35(2C),149.12(2C),155.45(2C),157.82(2C)。ESI-MS(CH₃OH):m/z实测值：740.07202,C₂₈H₃₀BF₂I₂N₅,[I₂BC+H]⁺理论值分别为740.0730。

5)将I₂BC(73.9mg，0.1mmol)溶于10mL甲醇，K₂PtCl₄(62.3mg，0.15mmol)溶于10mL蒸馏水，在黑暗中且室温条件下混合搅拌反应48h。反应结束后，离心，弃去上清液，再依次用二氯甲烷、乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤数次，至上清液澄清，得红色沉淀产物35.3mg，即为所述Pt(Ⅱ)配合物(I₂BC-Pt，产率：34.6％)，其中R＝I。

如图3和图4所示，I₂BC-Pt配合物：¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ＝1.98(m,2H),2.35(s,6H),2.49(s,6H),2.88(t,J＝8.0Hz,2H),3.28(t,J＝8.0Hz,2H),4.95(d,J＝8.0Hz,2H),5.27(d,J＝8.0Hz,2H),7.68(td,,2H),7.79(d,J＝4.0Hz,2H),8.29(t,J＝8.0Hz,2H),8.79(d,J＝4.0Hz,2H)。ESI-MS(MeCN):m/z实测值为：968.0198、969.0210、971.0216、972.0221,C₂₈H₃₀BCl₂F₂I₂N₅Pt,[I₂BC-Pt—Cl]⁺理论值为：967.9961、968.9982。

(一)对实施例1制得的配合物BC-Pt和I₂BC-Pt进行体外抗肿瘤活性实验。

1.1细胞株与细胞培养

本实验选用了两种三阴乳腺癌细胞株：MDA-MB-231、MDA-MB-468，四种癌细胞株：SH-SY5Y、HCT116、HCC78和SW1990,对比不同的癌细胞，以及对正常细胞THLE-3和SV40，进行了活性探究，结果表明配合物I₂BC-Pt对三阴乳腺癌细胞的抑制活性较好。

所有细胞株均培养在含10％小牛血清、100U/mL链霉素RPMI-1640/DMEM培养液内，置37℃含体积浓度5％CO₂孵箱中培养。

1.2待测化合物的配制

所用的受试药物的纯度≥95％，将其DMSO储液用生理缓冲液稀释后配置成5mmol/L的终溶液，其中助溶剂DMSO的浓度≤1％，测试该浓度下化合物对各种肿瘤细胞生长的抑制程度。实验中对不同化合物及是否光照处理的编号分别为：Pt，顺铂；BP，BC-Pt；IP，I₂BC-Pt；BPG，BC-Pt 47h+1h光照；IPG，I₂BC-Pt 47h+1h光照。另外，Pt、BP、BPG的测定浓度为0-128μM，IP测定浓度为0-32μM，IPG测定浓度为0-2μM。

1.3细胞生长抑制实验(MTT法)

(1)取对数生长期的肿瘤细胞，经胰蛋白酶消化后，用含10％小牛血清的培养液配置成浓度为5000个/mL的细胞悬液，以每孔180μL接种于96孔培养板中，使待测细胞浓度至每孔1000～10000/孔(边缘孔用无菌PBS填充)；

(2)5％CO₂，37℃孵育24h，至细胞单层铺满孔底，每孔加入一定浓度梯度的药物20μL，每个浓度梯度设5个复孔；

(3)5％CO₂，非光照组37℃孵育48h，光照组37℃孵育47h，之后置于520nm绿光下持续照射1h，置倒置显微镜下观察；

(4)每孔加入10μL的MTT溶液(5mg/mL PBS，即0.5％MTT)，继续培养4h-6h；

(5)终止培养，小心吸去孔内培养液，每孔加入100μL的DMSO充分溶解甲瓒沉淀，振荡器混匀后，在酶标仪用波长为570nm，参比波长为450nm测定各孔的光密度值；

(6)根据测得的光密度值(OD值)，来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强。利用公式：

肿瘤细胞生长抑制率(％)＝[(1-实验组平均OD值)/(对照组平均OD值)]×％；

IC₅₀测定：利用以上方法，每种化合物须设置浓度梯度，其中含多个(一般5～8个)浓度，每个浓度也须设置3～5个副孔，实验得到每个不同浓度的抑制率，然后在SPSS软件中计算化合物的IC₅₀值。

表1：配体以及配合物对不同细胞株的IC₅₀值(μM)，数值越低表明化合物抑制活性越好。

1.4数据分析

结果见表1。

由表1可知：

(1)本发明实施例1所合成的配合物I₂BC-Pt在光照和非光照条件下均对MDA-MB-468及MDA-MB-231细胞表现出良好的抑制作用，在光照后对两种三阴乳腺癌细胞表现出了强烈的抑制作用，而配合物BC-Pt则无抑制作用。

(2)不论MDA-MB-468或MDA-MB-231，配合物I₂BC-Pt对它们的抑制活性均优于对照组顺铂；而对于两种不同类型的癌细胞，配合物I₂BC-Pt对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞的活性明显强于MDA-MB-468；对MDA-MB-231细胞的IC₅₀值在0.13μM以下。

(3)本发明实施例1所合成的配合物I₂BC-Pt在避光条件下对正常细胞THLE-3和SV40没有明显的毒性。

(二)对实施例1制得的配合物BC-Pt和I₂BC-Pt在MDA-MB-231细胞内产生ROS的能力通过荧光显微镜成像进行测定。

实验结果见图8。

由图8可知：

配合物I₂BC-Pt在一定波长的光照条件下能够在MDA-MB-231细胞内产生大量的活性氧，且随着其浓度的增加，产生活性氧的能力增强，能够有效杀灭细胞，有望用于癌症治疗。

(三)对实施例1制得的配合物BC-Pt和I₂BC-Pt在特定波长光照下产生单线态氧的能力通过DPBF实验进行测定。

实验结果见图9。

由图9可知：

基于DPBF的吸光度的衰减率，配合物I₂BC-Pt的相对衰减率比配合物BC-Pt大。斜率表明单线态氧产生率，由此可知I₂BC-Pt在520nm的绿光照射下，可产生大量单线态氧，产生细胞毒性，能够抑制或杀死癌细胞。

综上所述，本发明所述的光动力活性铂(Ⅱ)配合物I₂BC-Pt在体外表现出优异的抗肿瘤活性，且其在避光条件下对正常细胞的毒性较弱。本发明所合成的具有光动力活性抗三阴乳腺癌Pt(Ⅱ)配合物的设计思路与合成路线等均是切实可行的。I₂BC-Pt表现出的抗肿瘤活性令其具有良好的潜在药用价值，有望用于抗三阴乳腺癌药物的制备。

以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种具有光动力抗三阴乳腺癌活性的Pt(Ⅱ)配合物，其特征在于，其结构式如下：

2.权利要求1所述的具有光动力抗三阴乳腺癌活性的Pt(Ⅱ)配合物的制备方法，其特征在于，所述Pt(Ⅱ)配合物的合成路线如下：

3.根据权利要求2所述的具有光动力抗三阴乳腺癌活性的Pt(Ⅱ)配合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)将2,4-二甲基吡咯、4-氯丁酰氯溶于二氯甲烷中，25℃下搅拌5min后，在50℃下搅拌2h，冷却至室温，真空蒸发，残渣用甲苯和二氯甲烷溶解，加入三乙胺，常温搅拌15min；在N₂保护下，缓慢滴加BF₃·Et₂O，之后在50℃下继续搅拌反应1h；冷却至室温，蒸发溶剂，然后用乙酸乙酯溶解残余物，并用水洗涤；收集有机层，用无水硫酸钠干燥过夜；过滤后，蒸发溶剂，得到中间体ClPro-BODIPY红色粘稠粗品；

2)用硅胶柱层析纯化步骤1)中粗品，得橙红色的ClPro-BODIPY纯品；

3)将步骤2)所得的ClPro-BODIPY溶于乙腈，与K₂CO₃、KI的水溶液混合，再加入二甲基吡啶胺的乙腈溶液；在N₂保护和80℃下搅拌反应12h，冷却至室温后，减压蒸发，残渣溶解于二氯甲烷，用纯水洗涤三次；收集有机层，用无水硫酸钠干燥过夜；过滤后，蒸发溶剂，得到红色粘稠粗品；

4)用硅胶柱层析纯化步骤3)的粗品，得到红色的中间体BC；

5)取步骤4)所得的BC溶于二氯甲烷，并加入N-碘代丁二酰亚胺(NIS)，在N₂保护下，室温搅拌反应，TCL监测反应进程，至BC反应完全，停止反应；用纯水和二氯甲烷分别洗涤三次，以除去过量的NIS，收集有机相，加无水硫酸钠干燥，放置过夜；抽滤，滤液旋蒸，得I₂BC粗品；

6)用硅胶柱纯化步骤5)所得粗品，得紫红色I₂BC纯品；

7)将步骤6)所得I₂BC溶于甲醇，与K₂PtCl₄的水溶液混合，在室温下避光搅拌反应48h；反应结束后，离心机高速离心，弃去上清液，依次用二氯甲烷、乙醇、丙酮、无水乙醚洗涤数次，至洗涤液澄清，得红色沉淀产物，即为所述Pt(Ⅱ)配合物。

4.根据权利要求3所述的具有光动力抗三阴乳腺癌活性的Pt(Ⅱ)配合物的制备方法，其特征在于，步骤7)中，I₂BC与K₂PtCl₄的物质的量之比为1:1-1.5。

5.根据权利要求3所述的具有光动力抗三阴乳腺癌活性的Pt(Ⅱ)配合物的制备方法，其特征在于，步骤2)中，硅胶柱流动相为体积比为1:2的石油醚/二氯甲烷混合溶液。

6.根据权利要求3所述的具有光动力抗三阴乳腺癌活性的Pt(Ⅱ)配合物的制备方法，其特征在于，步骤4)和步骤6)中，硅胶柱流动相均为体积比为20:1的乙酸乙酯/甲醇混合溶液。

7.权利要求1所述的Pt(Ⅱ)配合物在制备三阴乳腺癌防治药物中的应用。

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