CN114685320B - 胍基丁胺牛磺酸盐及其制备方法、应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了胍基丁胺牛磺酸盐及其制备方法、应用。胍基丁胺牛磺酸盐的结构式如下文所示。胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法包括以下步骤：(1)以胍基丁胺盐溶液为原料，通过双极膜电渗析装置制备胍基丁胺溶液；(2)胍基丁胺溶液与牛磺酸混合反应，得胍基丁胺牛磺酸盐溶液；(3)将胍基丁胺牛磺酸溶液结晶即得。本发明提供了新物质胍基丁胺牛磺酸盐，并提供了胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，该制备方法无废盐、废酸碱产生，环保无污染；胍基丁胺牛磺酸盐可用于制备神经保护疾病方面的药物，且有望成为降血压的新功能食品。

Description

胍基丁胺牛磺酸盐及其制备方法、应用
技术领域
本发明涉及胍基丁胺牛磺酸盐及其制备方法、应用。
背景技术
胍基丁胺(Agmatine)是L-精氨酸脱羧的产物，是一种神经递质，在哺乳动物体内的大部分器官和组织内都有分布，其含量呈器官特异性。研究资料表明，胍基丁胺具有重要的生理功能，在中枢神经系统、心脑血管系统、肠胃系统等方面有重要作用，它能够促进记忆的巩固，降低心率，平均动脉压，促进胃酸和胃蛋白酶的分泌，增加胰岛素的分泌降血糖，抑制细胞内多胺的合成，降低细胞内多胺的水平。
目前，苏州大学宋旭明研究了胍基丁胺对谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡的影响，实验结果表明较高浓度的谷氨酸有兴奋毒性作用，细胞死亡机制主要为诱导细胞凋亡，而胍基丁胺能在一定程度上拮抗谷氨酸所致的PC12细胞凋亡。现有技术CN106307533A公布的运动营养补充剂的重量份组分中，胍基丁胺硫酸盐0.2～0.6份、牛磺酸0.48～0.54份；CN106306964A公布的一种胍基丁胺饮片中重量份原料：胍基丁胺硫酸盐8～12份，牛磺酸1～3份。这些配方的运动营养补充剂具有一定的缓解疲劳作用，但是即使胍基丁胺硫酸盐与牛磺酸配合使用，依然无法克服胍基丁胺硫酸盐的过量摄入会导致腹泻与溃疡性结肠炎的缺陷。
牛磺酸(Taurine)，又称β-氨基乙磺酸，分子式为C2H7NO3S，分子量125.15，是动物和人体内含量仅次于谷氨酸的一种含硫氨基酸，最早由牛黄中分离出来，在神经系统、血管平滑肌和骨骼肌等可兴奋组织中含量最丰富。牛磺酸分子小，不具有苯基类基团，化学性质稳定，不溶于乙醚等有机溶剂。牛磺酸具有重要的生理作用，具有调节神经系统兴奋性、解热、镇痛，退烧、增强人体抵抗力等作用，能促进大脑细胞发育、提高免疫力、缓解疲劳、调节神经传导。
目前利用牛磺酸上述性能的相关研究如下：高丽艳，朱东亚探讨牛磺酸对过氧化氢(H2O2)引起的神经元损伤的保护作用，采用不同浓度的H2O2处理神经元，制备体外氧化应激模型，结果表明牛磺酸能够减轻H2O2引起的神经元损伤，在一定程度上具有神经保护作用。现有技术CN101306011B公开了一种用于综合降血压的功能食品，组成该功能食品的活性成分及其重量含量是：海藻酸盐5～70％、营养钾5～70％、牛磺酸10～75％、L-精氨酸15～80％，其中，四种原料在降血压的过程中充分发挥各自作用，仅在一定程度上具有辅助降血压的作用。
基于上述背景可知，目前的研究仅停留在对牛磺酸或者胍基丁胺本身的性质的探究，牛磺酸对神经保护、降血压方面的作用一般，而胍基丁胺对拮抗细胞凋亡、缓解疲劳也仅具有一定程度的作用；并且当胍基丁胺成盐后，还容易导致肠炎。因此，亟需一种在神经保护、高血压方面有明显疗效、且不会危及身体健康的药物。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术中牛磺酸和胍基丁胺盐不能同时在神经保护、降血压方面发挥作用以及现有的胍基丁胺牛磺酸盐还容易导致肠炎的缺陷，而提供胍基丁胺牛磺酸盐及其制备方法、应用。
发明人在研发之初发现，目前的现有的研究仅停留在分别对牛磺酸或者胍基丁胺本身的性质的探究，且牛磺酸对神经保护、降血压方面的作用，以及胍基丁胺对拮抗细胞凋亡、缓解疲劳效果均一般；并且当胍基丁胺成盐后与牛磺酸复配使用时，还容易导致肠炎；在研究过程中意外发现，当胍基丁胺与牛磺酸制备成复合盐时，不仅能明显提升单独使用胍基丁胺或者牛磺酸时的效果，而且还能克服胍基丁胺硫酸盐使用时的缺陷，甚至效果还明显优于胍基丁胺与牛磺酸复配使用的情况。
本发明提供了一种胍基丁胺牛磺酸盐，其结构为：
其中，n＝1～4。
本发明还提供了一种胍基丁胺牛磺酸盐在制备治疗神经系统疾病的药物中的应用。
本发明还提供了一种胍基丁胺牛磺酸盐在制备治疗高血压药物中的应用。
本发明还提供了一种胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，其包括以下步骤：
(1)以胍基丁胺盐溶液为原料，通过双极膜电渗析装置制备胍基丁胺溶液；
(2)所述胍基丁胺溶液与牛磺酸混合反应，得胍基丁胺牛磺酸盐溶液；
(3)所述胍基丁胺牛磺酸盐溶液结晶即可获得胍基丁胺牛磺酸盐；
所述胍基丁胺牛磺酸盐如上所述。
步骤(1)中，所述双极膜电渗析装置可为本领域常规的双极膜电渗析装置。
步骤(1)中，所述双极膜电渗析装置中采用的阴电极和阳电极的材料可为本领域常规，一般为耐腐蚀的材料，例如常规市售的Ti、Pt和Ir的合金。
步骤(1)中，根据本领域常识可知，所述双极膜电渗析装置中的阳极室和/或阴极室中含有电解质溶液，较佳地含有强电解质溶液。
其中，所述强电解质溶液的体积浓度较佳地为1～3％。
所述强电解质的种类可为化学领域常规的在水溶液中几乎完全发生电离的电解质，较佳地选自硫酸、盐酸、硝酸、氢氧化钠、氯化钠、硫酸钠、硝酸钠、硫酸钾、硝酸钾、硫化钾和硫酸铵中的一种或多种，例如为硫酸。
步骤(1)中，所述双极膜电渗析装置较佳地采用两隔室。其中，所述两隔室较佳地由双极膜与阴离子交换膜，或双极膜与阳离子交换膜分隔而成。
当所述两隔室由双极膜与阴离子交换膜分隔而成时，所述双极膜电渗析装置中膜堆的排列方式较佳地为：阳电极-阳极室-阳极膜-[酸室-阴离子交换膜-碱室-双极膜]n-酸室-阴极膜-阴极室-阴电极，其中n为重复单元数且取值范围为1～100之间的整数，例如100。其中，碱室中均含有胍基丁胺盐溶液。酸室中均含有反渗透水。
步骤(1)中，所述双极膜电渗析装置中采用的阳极膜可为阳离子交换膜。所述双极膜电渗析装置中采用的阴极膜可为阳离子交换膜或者阴离子交换膜。较佳地，所述阴离子交换膜为季胺型阴离子交换膜；所述阳离子交换膜为磺酸型阳离子交换膜。
本发明中，所述“[酸室-阴离子交换膜-碱室-双极膜]n”中采用的阴离子交换膜可为本领域常规，较佳地为季胺型阴离子交换膜。所述阳极膜采用的阳离子交换膜可为本领域常规，较佳地为磺酸型阳离子交换膜。
步骤(1)中，本领域技术人员应知晓，所述双极膜电渗析装置中，膜与膜间的隔室垫有对应流道的格网及密封垫，其中所述膜可为阴极膜、阴离子交换膜、阳离子交换膜、双极膜和阳极膜；碱室和碱室之间、酸室和酸室之间一般通过相同的流道串联起来。
步骤(1)中，所述双极膜电渗析装置两端一般具有恒压直流电。
其中，所述恒压直流电的参数较佳地为：电压为220V，电流为200A。
步骤(1)中，根据常识可知，所述双极膜电渗析装置中，各隔室(隔室可为酸室、碱室、阴极室和阳极室)均含有循环泵，启动所述循环泵，使各料液在所述隔室之间循环流动起来，循环流动10min排除气泡后，设置流速200L/h，小幅度调整各隔室流速，使各所述隔室压力相当。一般地，待所述排除气泡之后，启动所述恒压直流电的电源。
步骤(1)中，所述胍基丁胺盐溶液中胍基丁胺盐的种类可为本领域常规，较佳地为胍基丁胺盐酸盐、胍基丁胺硫酸盐、胍基丁胺醋酸盐、胍基丁胺硝酸盐、胍基丁胺柠檬酸盐。
步骤(1)中，所述胍基丁胺盐溶液中胍基丁胺盐的浓度可为本领域常规，较佳地为0.5～1.8mol/L，例如0.8mol/L、1.0mol/L或1.5mol/L。
步骤(1)中，碱室中，所述胍基丁胺盐溶液在电离的过程中，生成胍基丁胺盐阳离子和对应的阴离子，所述对应的阴离子通过阴离子交换膜，进入酸室，再与水电离的氢离子结合，生成对应的酸。所述胍基丁胺盐阳离子与水电离的氢氧根离子结合生成胍基丁胺。
步骤(1)中，在制备所述胍基丁胺溶液的同时还生成了对应的酸。
其中，较佳地，所述对应的酸的物质的量与所述胍基丁胺盐溶液中对应的阴离子的物质的量相当。所述酸室中，所述对应的酸的浓度较佳地为0～2.0mol/L，例如1.0mol/L或1.2mol/L。
步骤(1)中，较佳地，所述胍基丁胺溶液中胍基丁胺的物质的量与所述胍基丁胺盐溶液中胍基丁胺阳离子的物质的量相当。所述胍基丁胺溶液中胍基丁胺的浓度较佳地为0.4～3mol/L，例如0.8mol/L或1.0mol/L。
步骤(1)中，当所述双极膜电渗析装置采用两隔室，且所述两隔室由双极膜与阴离子交换膜分隔而成时，一般通过检测碱室电导率和电流控制反应进程。较佳地，所述碱室的电导率降至1.0～8.0ms/cm，且电流降低至0.1～1.2A时停止步骤(1)中的反应，更佳地，所述碱室的电导率降至1.0～3.0ms/cm，且电流降低至0.1～0.5A时停止步骤(1)中的反应，例如，所述碱室的电导率降至3.0ms/cm以下，且电流降低至0.5A以下时停止步骤(1)中的反应。
步骤(2)中，所述牛磺酸的用量可为本领域常规，较佳地，所述牛磺酸与所述胍基丁胺溶液中胍基丁胺的摩尔比为1:1～1:4，例如1:1。
步骤(2)中，所述牛磺酸还可用于调节所述胍基丁胺牛磺酸盐溶液的pH值，所述pH值较佳地为6～11，例如8～11，再例如8.6、9.85或者10.5。
步骤(3)中，在所述结晶的操作步骤之前，较佳地先将所述胍基丁胺牛磺酸盐溶液依次进行脱色、过滤和浓缩处理，得胍基丁胺牛磺酸盐溶液的浓缩液。
其中，所述脱色的操作和步骤可为本领域常规，一般通过加入活性炭进行脱色。所述活性炭的用量可为本领域常规，较佳地，所述活性炭占所述胍基丁胺牛磺酸盐的比例为0.2～1％wt％，例如0.3wt％、0.44wt％或0.46wt％。所述脱色的时间可为本领域常规，例如脱色30～60min，再例如30min。
其中，所述过滤的方式可为本领域常规，一般通过板框过滤来实现。
其中，所述浓缩的操作条件可为本领域常规，例如可在真空条件下进行。
其中，较佳地，所述浓缩之后的浓缩液中，胍基丁胺牛磺酸盐的浓度为600～800g/L，例如630g/L或634g/L。
步骤(3)中，所述结晶的方法可为本领域常规，例如向所述浓缩之后的浓缩液中流加溶析剂，之后离心甩料和烘干即可。
一般地，先将所述浓缩液降温至4～40℃，例如20℃，再将所述浓缩液和所述溶析剂的混合溶液保温快速搅拌20～40min，例如30min，使温度维持在4～10℃，离心甩料并烘干即可。
一般地，所述降温采用冰盐水等冷媒实现。
其中，所述溶析剂的种类可为本领域常规，较佳地为甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、甲醇水溶液、乙醇水溶液、丙酮水溶液、氯仿水溶液、石油醚水溶液或乙酸乙酯水溶液，例如乙醇。
其中，所述溶析剂的用量可为本领域常规，较佳地，所述溶析剂与胍基丁胺牛磺酸盐浓缩液的体积比为(0.4～6)：1，例如5:2或3:2。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本申请各较佳实例。
本申请所用试剂和原料均市售可得。
本发明的积极进步效果在于：
1)本发明提供了一种新物质，即胍基丁胺牛磺酸盐。
2)本发明提供了胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，该方法无废盐、废酸碱，环保无污染。
3)本发明还提供了胍基丁胺牛磺酸盐在制备神经保护疾病方面的药物中的用途。
4)本发明还发现胍基丁胺牛磺酸盐在降血压方面的有益效果，有望成为降血压的新功能食品。
附图说明
图1为双极膜电渗析装置中膜堆排列方式的示意图。
图2为各实验处理组的PC12细胞的MTT实验结果：a与对照组比较，P<0.05；b与H2O2模型组相比，P<0.05；c与复合盐组相比，P<0.05。
图3为体外实验中各组实验对Bcl-2、Bax mRNA表达的影响：a与对照组比较，P<0.05；b与H2O2模型组相比，P<0.05；c与复合盐组相比，P<0.05。
图4为体外实验中各组实验对Bcl-2、Bax、cleaved caspase 3蛋白表达的影响：a与对照组比较，P<0.05；b与H2O2相比，P<0.05；c与硫酸盐组相比，P<0.05；d与牛磺酸组相比，P<0.05。
图5为体内实验中各组实验对Bcl-2、Bax mRNA表达的影响：a与对照组比较，P<0.05；b与染毒组相比，P<0.05；c与复合盐组相比，P<0.05。
图6为体内实验中各组实验对Bcl-2、Bax、cleaved caspase 3蛋白表达的影响：a与对照组比较，P<0.05；b与染毒组相比，P<0.05；c与复合盐组相比，P<0.05。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
实施例1胍基丁胺牛磺酸盐(摩尔比1:1)的制备
(1)使用如图1所示的两隔室的双极膜电渗析装置，膜堆排列方式为阳电极-阳极室-阳极膜-[酸室-阴离子交换膜-碱室-双极膜]100-酸室-阴极膜-阴极室-阴电极，100为重复的单元数。阴阳电极均为耐腐蚀的Ti、Pt和Ir合金材料，膜与膜间的隔室垫有对应流道的格网及密封垫，所有碱室或酸室通过相同的流道串联起来。将膜堆安装到电渗析设备，将阳极极板连接正极电源，阴极极板连接负极电源，将各隔室与对应的储存桶及循环泵连接起来，储存桶内装入一定量的反渗透水，启动循环泵，使反渗透水在各储存桶与对应的隔室之间流动起来，循环流动10min排除气泡后，设置流速200L/h，检查膜堆无渗漏后，膜堆安装完成；
(2)将456.54kg胍基丁胺硫酸盐溶于2000L水中，配制成浓度为1.0mol/L的溶液，并将此溶液加入碱室储存桶，将200L反渗透水加入酸室储存桶，将浓度为1％的硫酸溶液2000L分别加入到阴、阳极室储存桶，启动各隔室对应的循环泵，使各料液在储存桶和对应的隔室之间循环流动起来，循环流动10min排除气泡后，设置流速200L/h，小幅度调整各隔室流速，使各隔室压力相当；
(3)待隔室液体在双极膜电渗析装置内循环流动10min后，启动双极膜电渗析装置的电源，设置电压为220V，电流上限设置为200A。实验过程中监控酸室pH值、碱室液面及电导率，若酸室pH值不再下降，则补充100L反渗透水至酸室降低酸室酸浓度；若碱室液面下降，则补充100L反渗透水使液面与实验开始持平。实验运行至碱室电导率降至3.0ms/cm以下，且电流降低至0.5A以下时停止。此时，碱室中SO42-降至10ppm以下，酸室硫酸浓度达到1.0mol/L，碱室胍基丁胺溶液浓度在0.8mol/L以上。
(4)将碱室储存桶的游离的胍基丁胺溶液放出，加入约250.3kg牛磺酸(牛磺酸与胍基丁胺溶液中胍基丁胺的摩尔比为1:1)调节pH值至10.50，加入胍基丁胺牛磺酸盐质量的0.3％的活性炭1.6kg脱色30min，板框过滤至滤液清亮，滤液减压浓缩至800L，浓度约为630g/L，加入2000L乙醇(2:5)保温快速搅拌30min，冰盐水降温至4～10℃，离心甩料，烘干即得胍基丁胺牛磺酸盐464.8kg。
效果数据：胍基丁胺牛磺酸盐的收率达到91.0％，产品的结构式及氢谱解析如下：
1HNMR(400MHz，D2O)3.307-3.333(2H，t)，3.120-3.169(4H，m)，2.913-2.943(2H，t)，1.552-1.650(4H，m)，n＝1。
实施例2胍基丁胺牛磺酸盐(摩尔比1:2)的制备
(1)使用如图1所示的两隔室的双极膜电渗析装置，膜堆排列方式为阳电极-阳极室-阳极膜-[酸室-阴离子交换膜-碱室-双极膜]100-酸室-阴极膜-阴极室-阴电极，100为重复的单元数。阴阳电极均为耐腐蚀的Ti、Pt和Ir合金材料，膜与膜间的隔室垫有对应流道的格网及密封垫，所有碱室或酸室通过相同的流道串联起来。将膜堆安装到电渗析设备，将阳极极板连接正极电源，阴极极板连接负极电源，将各隔室与对应的储存桶及循环泵连接起来，储存桶内装入一定量的反渗透水，启动循环泵，使反渗透水在各储存桶与对应的隔室之间流动起来，循环流动10min排除气泡后，设置流速200L/h，检查膜堆无渗漏后，膜堆安装完成；
(2)将456.54kg胍基丁胺硫酸盐溶于2000L水中，配制成浓度为1.0mol/L的溶液，并将此溶液加入碱室储存桶，将200L反渗透水加入酸室储存桶，将浓度为1％的硫酸溶液2000L分别加入到阴、阳极室储存桶，启动各隔室对应的循环泵，使各料液在储存桶和对应的隔室之间循环流动起来，循环流动10min排除气泡后，设置流速200L/h，小幅度调整各隔室流速，使各隔室压力相当；
(3)待隔室液体在双极膜电渗析装置内循环流动10min后，启动双极膜电渗析装置的电源，设置电压为220V，电流上限设置为200A。实验过程中监控酸室pH值、碱室液面及电导率，若酸室pH值不再下降，则补充100L反渗透水至酸室降低酸室酸浓度；若碱室液面下降，则补充100L反渗透水使液面与实验开始持平。实验运行至碱室电导率降至3.0ms/cm以下，且电流降低至0.5A以下时停止。此时，碱室中SO42-降至10ppm以下，酸室硫酸浓度达到1.0mol/L，碱室胍基丁胺溶液浓度在0.8mol/L以上。
(4)将碱室储存桶的游离的胍基丁胺溶液放出，加入约500.6kg牛磺酸(牛磺酸与胍基丁胺溶液中胍基丁胺的摩尔比为1:2)调节pH值至9.85，加入胍基丁胺牛磺酸盐质量的0.3％的活性炭2.35kg脱色30min，板框过滤至滤液清亮，滤液减压浓缩至1400L，浓度约为615g/L，加入3500L乙醇(2:5)保温快速搅拌30min，冰盐水降温至4～10℃，离心甩料，烘干即得胍基丁胺牛磺酸盐766.3kg。
效果数据：胍基丁胺牛磺酸盐的收率达到89.3％，产品的结构式及氢谱解析如下：
1HNMR(400MHz，D2O)3.307-3.333(4H，t)，3.120-3.169(6H，m)，2.913-2.943(2H，t)，1.552-1.650(4H，m)，n＝2。
实施例3胍基丁胺牛磺酸盐(摩尔比1:4)的制备
(1)使用如图1所示的两隔室的双极膜电渗析装置，膜堆排列方式为阳电极-阳极室-阳极膜-[酸室-阴离子交换膜-碱室-双极膜]100-酸室-阴极膜-阴极室-阴电极，100为重复的单元数。阴阳电极均为耐腐蚀的Ti、Pt和Ir合金材料，膜与膜间的隔室垫有对应流道的格网及密封垫，所有碱室或酸室通过相同的流道串联起来。将膜堆安装到电渗析设备，将阳极极板连接正极电源，阴极极板连接负极电源，将各隔室与对应的储存桶及循环泵连接起来，储存桶内装入一定量的反渗透水，启动循环泵，使反渗透水在各储存桶与对应的隔室之间流动起来，循环流动10min排除气泡后，设置流速200L/h，检查膜堆无渗漏后，膜堆安装完成；
(2)将456.54kg胍基丁胺硫酸盐溶于2000L水中，配制成浓度为1.0mol/L的溶液，并将此溶液加入碱室储存桶，将200L反渗透水加入酸室储存桶，将浓度为1％的硫酸溶液2000L分别加入到阴、阳极室储存桶，启动各隔室对应的循环泵，使各料液在储存桶和对应的隔室之间循环流动起来，循环流动10min排除气泡后，设置流速200L/h，小幅度调整各隔室流速，使各隔室压力相当；
(3)待隔室液体在双极膜电渗析装置内循环流动10min后，启动双极膜电渗析装置的电源，设置电压为220V，电流上限设置为200A。实验过程中监控酸室pH值、碱室液面及电导率，若酸室pH值不再下降，则补充100L反渗透水至酸室降低酸室酸浓度；若碱室液面下降，则补充100L反渗透水使液面与实验开始持平。实验运行至碱室电导率降至3.0ms/cm以下，且电流降低至0.5A以下时停止。此时，碱室中SO42-降至10ppm以下，酸室硫酸浓度达到1.0mol/L，碱室胍基丁胺溶液浓度在0.8mol/L以上。
(4)将碱室储存桶的游离的胍基丁胺溶液放出，加入约1001.2kg牛磺酸(牛磺酸与胍基丁胺溶液中胍基丁胺的摩尔比为1:4)调节pH值至8.6，加入胍基丁胺牛磺酸盐质量的0.3％的活性炭3.78kg脱色30min，板框过滤至滤液清亮，滤液减压浓缩至2000L，浓度约为630g/L，加入3000L乙醇(2:3)保温快速搅拌30min，冰盐水降温至4～10℃，离心甩料，烘干即得胍基丁胺牛磺酸盐1156kg。
效果数据：胍基丁胺牛磺酸盐的收率达到91.6％，产品的结构式及氢谱解析如下：
1HNMR(400MHz，D2O)3.307-3.333(8H，t)，3.120-3.169(10H，m)，2.913-2.943(2H，t)，1.552-1.650(4H，m)，n＝4。
效果实施例
(1)体外细胞学实验研究
培养大鼠肾上腺髓质嗜铬瘤细胞(PC12)，细胞系来自能移植的雄性大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤。这些细胞表达神经生长因子(NGF)受体。当用NGF处理后，可分化使其在形态、生理生化功能方面更接近于神经元。本研究通过建立H2O2所致的PC12细胞损伤模型，探求胍基丁胺硫酸盐、牛磺酸、胍基丁胺牛磺酸盐是否能改善H2O2所致的细胞凋亡，抑制线粒体凋亡的通路。
(a)细胞培养：将RPMI-1640完全培养基(含10％小牛血清、100U/L青霉素和100U/L链霉素；下称培养液)与PC12细胞(来源于湖北大学中药重点实验室；购自上海酶研生物科技有限公司)混匀置于25ml规格的培养瓶中，静置于细胞培养箱(5％CO2、37℃)中使其缓慢生长，生长至细胞密度为70～80％时，用0.25％胰酶消化，或传代或配置细胞混悬液准备实验，通常选择对数期细胞进行实验；
(b)实验分组：正常对照组(仅培养液)；模型组(培养液中含有150μmol/L H2O2)；牛磺酸组(培养液中含有150μmol/L H2O2+400μmol/L牛磺酸)；复配组(培养液中含有150μmol/L H2O2+100μmol/L胍基丁胺硫酸盐+400μmol/L牛磺酸)；复合盐组使用胍基丁胺牛磺酸盐(胍基丁胺牛磺酸摩尔比1:4)(培养液中含有150μmol/L H2O2+100μmol/L胍基丁胺牛磺酸盐)和硫酸盐组(培养液中含有150μmol/L H2O2+100μmol/L胍基丁胺硫酸盐)。
先取对数期PC12细胞，分别种若干数量的96孔板和6孔板中，孵育24h后换培养液为上述组别相应浓度的实验组，再次置于培养箱中培养12h，然后检测相应的实验数据，每组实验设置6个平行实验组。
(c)MTT法检测PC12细胞活力：首先显微镜下观察培养瓶中细胞生长情况，确定密度达到70～80％，即细胞处于对数生长期时，0.25％胰酶消化细胞5min。加入新鲜的培养液混匀，计数，接种于96孔板内，接种浓度大约为10000个/孔200μL。静置培养箱待其贴壁生长细胞长至孔底时，更换培养基为(b)实验分组中的培养液。再次置于培养箱中培养12h后除去培养液，加入5g/L的MTT溶液20uL，继续在培养箱中孵育4h。每孔加入DMSO200μL，充分振荡，用酶标仪测定570nm处的吸光度(A)值，计算细胞的存活率。
基于体外细胞实验发现：如图2所示，H2O2模型组与对照组相比，细胞出现显著性调亡(P<0.05)；实验组与H2O2模型组相比，牛磺酸组、复配组与复合盐组均能显著性改善H2O2所致的细胞凋亡，差异具有统计学意义(P<0.05)。硫酸盐组能改善H2O2所致的细胞凋亡但没有显著性差异；复合盐组与H2O2模型组、硫酸盐组、牛磺酸组和复配组相比，细胞活力均有显著性差异，差异具有统计学意义(统计方法用的是TTEST，双尾检测)(P<0.05)。
(2)mRNA和蛋白水平检测
Bcl-2蛋白是bcl-2原癌基因的编码产物，是细胞存活促进因子，属膜整合蛋白，分子量为26kDa，定位于线粒体、内质网和连续的核周膜，在胚胎组织中广泛表达。Bcl-2蛋白家族是一个特别的家族，目前已发现25种Bcl-2家族同源蛋白，其成员中有些促进凋亡，如Bad、Bid、Bax，有些成员阻止细胞凋亡，如Bcl-2、Bcl-x、Bcl-w。Bcl-2能够阻止细胞色素C从线粒体释放到细胞质，从而抑制了细胞凋亡。BAX是与Bcl-2同源的水溶性相关蛋白，是Bcl-2基因家族中细胞凋亡促进基因，BAX的过度表达可拮抗Bcl-2的保护效应而使细胞趋于死亡。caspase是一个成员较多的蛋白酶家族，目前发现人体内的caspase蛋白家族成员至少有11种，其中caspase3在细胞凋亡过程中发挥凋亡执行因子的作用。caspase3在正常情况下以酶原的形式存在，当细胞发生凋亡时，caspase3被活化成为cleaved caspase3，发挥促进细胞凋亡的作用。
本实验中，采用复配组、硫酸盐组、牛磺酸组与复合盐组干预后”，对H2O2介导的PC12体外凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的基因表达，及Bcl-2、Bax、cleaved caspase3的蛋白表达情况进行检测。实验分组及药物处理同上述(b)，细胞培养在6孔板中。给药处理培养结束后，分别进行mRNA和蛋白的提取及表达检测。
mRNA提取及检测：每孔加入PBS洗3遍后，每孔加入200μL RNA保护液(购自QIAGENcat.No.76506)，用细胞刮板将孔板内的细胞刮起，收集液体放入RNAase-free的EP管内，利用800rpm离心2min收集细胞，凯杰(Qiagen)的RNeasy Mini Handbook进行RNA的提取。cDNA合成：逆转录是指在逆转录酶的作用下，以RNA为模板合成cDNA合成。本实验采用TaKaRa公司PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser试剂盒进行cDNA合成。qPCR测定：实时荧光定量PCR反应采用Takara公司SYBR Premix Ex TaqTMⅡ试剂盒进行，RT-PCR引物如下。
RT-PCR引物
RT-PCR检测条件：①95℃预变性10min；②95℃变性10s；③59℃退火15s，72℃延伸15s。从②步开始，循环40次。反应结束后，根据CT值和基因的扩增效率计算出样本基因的拷贝数。
蛋白提取及检测：用每孔加入PBS洗3遍后，置于冰上操作，6孔板每孔加入50μL细胞裂解液(内含10％PMSF、10％Try抑制剂、10％Ser/Thr抑制剂)。消化吹打混匀后，将相应组别细胞裂解液收集到相应的EP罐内，4℃低温离心(12000×g离心15min)。取上清留存并进行蛋白浓度测定，蛋白浓度检测是根据南京建成生物工程研究所总蛋白定量测定试剂盒(带牛清蛋白标准品：BCA法)(比色法)进行测定。根据BCA蛋白浓度检测的浓度值，取出一定体积的上清液加入相应体积的5×的上样缓冲液并混匀。在沸腾下煮10min后将制备的蛋白样品进行SDS-PAGE电泳，再单转转至PVDF膜上。将膜放入5％BSA液体中封闭1h，然后放入预先用Bcl-2、Bax、cleaved caspase3和β-actin的一抗的液体槽中，放置于4℃冰箱孵育过夜。次日将膜从槽体中取出，用TBST在摇床上洗三次，每次5min。然后将膜置于各自二抗的液体槽中，室温下孵育1h。取出膜用TBST洗3次，ECL化学发光法进行暗室显影。
基于上述实验发现，如图3和图4所示，实验组与H2O2模型组相比，均能显著性上调线粒体凋亡的通路Bcl-2的mRNA及蛋白表达。除了硫酸盐组对Bax的mRNA及蛋白表达、cleaved caspase3蛋白表达没有显著性影响，其他处理组均能有一定程度下调Bax的mRNA及蛋白表达，下调cleaved caspase3的蛋白表达，结果具有统计学差异；且复合盐组与硫酸盐组、牛磺酸组相比，能显著性下调线粒体凋亡的通路Bax的mRNA及蛋白表达、上调Bcl-2基因及蛋白表达，下调cleaved caspase3的蛋白表达，差异具有统计学意义(P<0.05)；复合盐组与复配组相比，能显著性下调线粒体凋亡的通路Bax的mRNA表达、上调Bcl-2的mRNA表达，下调cleaved caspase3的蛋白表达，差异具有统计学意义(P<0.05)，但对Bax和Bcl-2蛋白表达无差异。
(3)神经保护作用研究
(i)体内实验动物建模及实验分组：研究选取36只SPF级雄性Wistar大鼠(200±20g)，由湖北省疾病预防控制中心提供，动物合格证号：SCXK(鄂)2017-0012。动物房温度保持在(23±2)℃范围内，相对湿度维持在(60±10)％范围内，12h亮/暗循环。大鼠适应性饲养一周后，随机分为6组，每组6只实验动物，采用灌胃的方式进行给药。
实验组分别为正常对照组(1.0ml/d生理盐水连续灌胃8周)、染毒组(前四周280mg/kg AlCl3溶液，后四周1.0ml/d生理盐水)、硫酸盐组(前四周280mg/kg AlCl3溶液，后四周230mg/kg胍基丁胺硫酸盐)、牛磺酸组(前四周280mg/kg AlCl3溶液，后四周500mg/kg牛磺酸)、复配组(前四周280mg/kg AlCl3溶液，后四周230mg/kg胍基丁胺硫酸盐与500mg/kg牛磺酸复配)、复合盐组(胍基丁胺牛磺酸摩尔比1:4)(前四周280mg/kg AlCl3溶液，后四周630mg/kg胍基丁胺牛磺酸盐)。
(ⅱ)动物处理：最后一次灌胃实验结束后，动物禁食24h，称重并断头处死大鼠，放置于冰上迅速分离脑组织，分离皮层和海马区。各实验组的海马组织切成小块状，分别放入编号加有RNA保护液的无菌冻存管中，置于-80℃保存，用于后期RNA提取和蛋白提取，RT-PCR和Western检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase3的mRNA表达及蛋白表达情况。准确称重分离出的大脑皮层，然后按重量(g):体积(mL)＝1:9的比例加入4℃的生理盐水，用玻璃匀浆管置于冰水浴中匀浆，4000r/min，4℃离心10min，取上清液用于检测大鼠皮层丙二醛(MDA)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力值、超氧化物歧化酶(SOD)活力值。
(ⅲ)大鼠皮层丙二醛(MDA)含量测定：根据南京建成生物工程研究所提供的丙二醛(MDA)测定试剂盒(TBA法)进行检测。
(iv)大鼠皮层谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力值测定：根据南京建成生物工程研究所提供的谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测定试剂盒(比色法)进行检测。
(ⅴ)大鼠皮层超氧化物歧化酶(SOD)活力值测定：根据南京建成生物工程研究所提供的总超氧化物歧化酶(SOD)测定试剂盒(WST-1法)进行检测。
(ⅵ)海马Bcl-2、Bax基因表达的测定
RNA的提取：将加有RNA保护液的海马组织样品，取出冰上解冻后1000rpm离心去上清，将沉淀组织放入加有液氮的研钵中，研钵均匀为细粉末状，按照凯杰的RNeasy MiniHandbook进行RNA的提取。
cDNA合成：逆转录是指在逆转录酶的作用下，以RNA为模板合成cDNA合成。本实验采用TaKaRa公司PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser试剂盒进行cDNA合成。
qPCR测定：实施荧光定量PCR反应采用Takara公司SYBR Premix Ex TaqTMⅡ试剂盒进行，使用Roche LC 96仪器进行检测。
(ⅶ)海马Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3的蛋白表达的测定。
蛋白样品制备：将20mg海马组织块，置于玻璃匀浆器中加入1ml裂解液(内含10％PMSF、10％Try抑制剂、10％Ser/Thr抑制剂)中。用机械匀浆机进行匀浆，过程中保持冰上操作，研磨至透明后置于冰上，10000g，4℃，10min，取上清至1.5mlEP管中，12,000，4℃，离心60min后取上清到新EP管中，-80℃储存或蛋白浓度测定。蛋白浓度检测是根据南京建成生物工程研究所总蛋白定量测定试剂盒(带标准：BCA法)(比色法)进行测定。Western-blotting：根据BCA蛋白浓度检测的浓度值，取出一定体积的上清液加入相应体积的5×的上样缓冲液并混匀，在沸腾下煮10min后将制备的蛋白样品进行SDS-PAGE电泳，再电转转至PVDF膜上。将膜放入5％BSA液体中封闭1h，然后放入预先用Bcl-2、Bax、cleaved caspase 3和β-actin的一抗(Bcl-2、Bax、cleaved caspase 3一抗为兔来源，购自美国Thermo FisherScientific公司，β-actin一抗为鼠来源，购自武汉三鹰生物技术有限公司)的液体槽中，放置于4℃冰箱孵育过夜，次日将膜从槽体中取出，用TBST在摇床上洗三次，每次5min，然后将膜置于各自二抗(二抗为羊抗和兔抗，羊抗和兔抗均购自美国Thermo Fisher Scientific公司)的液体槽中，室温下孵育1h，取出膜用TBST洗3次，ECL化学发光法进行暗室显影。
效果数据：体内实验发现，与对照组相比，染毒组的大鼠的大脑皮层中的SOD以及GSH-Px活力明显降低，MDA含量显著上升，差异有统计学意义(P<0.05)。与染毒组相比，牛磺酸组、复配组与复合盐组组均能显著性降低MDA的含量，差异具有统计学意义(P<0.05)；与复合盐组和牛磺酸组相比，复配组与复合盐组均能显著性降低MDA的含量，差异具有统计学意义(P<0.05)。与染毒组相比，硫酸盐组、牛磺酸组、复配组与复合盐组均能显著性提高GSH-Px活力，差异具有统计学意义(P<0.05)；与硫酸盐组和牛磺酸组相比，复配组与复合盐组能显著性提高GSH-Px活力，差异具有统计学意义(P<0.05)。与染毒组相比，牛磺酸组、复配组、复合盐组均能显著性提高SOD活力，差异具有统计学意义(P<0.05)；与硫酸盐组和牛磺酸组相比，复配组、复合盐组显著性提高SOD活力，差异具有统计学意义(P<0.05)。复配组与复合盐组相比，MDA的含量、GSH-Px活力与SOD活力均无显著性差异(如下表1所示)。
表1：各组大鼠大脑皮层中MDA含量、GSH-Px活力以及SOD含量(n＝6，)
注：a与对照组比较，P<0.05；b与染毒组相比，P<0.05；c与硫酸盐组相比，P<0.05；d与牛磺酸组相比，P<0.05。
体内检测大鼠海马中Bcl-2与Bax的mRNA表达量与蛋白表达量，cleaved caspase3蛋白表达量。如图5、图6所示，与对照组相比，染毒组的大鼠海马中Bcl-2的mRNA表达量明显降低，Bax的mRNA表达量明显增多，差异有统计学意义(P<0.05)；与对照组相比，染毒组的大鼠海马中Bcl-2的蛋白表达量明显降低，Bax蛋白表达量明显增多，差异有统计学意义(P<0.05)，蛋白表达情况与mRNA表达情况一致；与对照组相比，染毒组cleaved caspase3蛋白表达量明显增多，差异有统计学意义(P<0.05)。与染毒组相比，牛磺酸组、复配组和复合盐组均显著性增强Bcl-2的mRNA表达量，硫酸盐组无显著性差异，蛋白表达情况与mRNA表达情况一致。与染毒组相比，硫酸盐组、牛磺酸组、复配组与复合盐组均显著性降低Bax的mRNA表达量，蛋白表达情况与mRNA表达情况一致。与染毒组相比，硫酸盐组、牛磺酸组、复配组与复合盐组均显著性降低cleaved caspase 3蛋白表达量，差异有统计学意义(P<0.05)，复合盐组与硫酸盐组、牛磺酸组、复配组相比，均能显著性增强Bcl-2的mRNA表达量，降低Bax的mRNA表达量，复合盐组与复配组的Bax蛋白表达无明显差异，其他蛋白表达情况与mRNA表达情况一致。复合盐组与硫酸盐组、牛磺酸组、复配组相比，显著性降低cleaved caspase 3蛋白表达量，差异有统计学意义(P<0.05)。
(4)：降血压功能研究
(a)体内实验动物建模及实验分组：研究选取30只SPF级自发性高血压大鼠，体质量(190±10)g，雌雄各半，购于北京维通利华实验动物技术有限公司(合格证：SCXK(京)2017－0002)，动物房温度保持在(23±2)℃范围内，相对湿度维持在(60±10)％范围内，12h亮/暗循环。大鼠适应性饲养一周后，随机分为对照组和实验组，每组10只大鼠，采用灌胃的方式进行实验。
实验组每天灌胃210mg/kg胍基丁胺牛磺酸盐(胍基丁胺牛磺酸摩尔比1:4)一次，对照组每天灌胃复配的167mg/kg牛磺酸和76mg/kg胍基丁胺硫酸盐一次(牛磺酸、胍基丁胺的摩尔比与胍基丁胺牛磺酸盐一致)，空白对照组灌胃等体积的生理盐水，连续灌胃4周。
(b)大鼠体重的测定：对于(1)处理的动物，分别第0、1、2、3、4周、停药一周周末测定动物的体重。
(c)大鼠尾动脉血压测定：对于(1)处理的动物，清醒状态下，分别于用药前、用药后第1、2、3、4周、停药后一周周末，使用RM-6240BD型生理信号采集处理系统，尾套法测定动物收缩压。测压前先将大鼠于42℃保温10min，保温时注意将尾巴置于水浴恒温试验台上，使其尾动脉充分显露。平行测定3次，且相互误差在5mmHg以内，取3次血压读(1mmHg＝0.133kPa)的平均值。
效果数据：测定的大鼠体重数值见下表2。从下表2可见，大鼠的初始体重对照组与实验组无显著性差异(P>0.05)。实验一周、两周、三周、四周，以及停药后一周，实验组的大鼠体重与空白对照组和对照组相比，均无显著性差异(P>0.05)，即本发明的胍基丁胺牛磺酸盐对大鼠的体重无不良影响。
表2：大鼠实验组与对照组在受试前后体重统计表(n＝10，)
胍基丁胺牛磺酸给药组对自发性高血压大鼠的血压影响见下表3。从下表3可见，随着胍基丁胺牛磺酸的口服，自发性大鼠的血压有下降的趋势，在第三周给药后，血压与空白对照组相比，有显著性差异(P<0.05)，第四周继续给药后，血压与空白对照组相比，出现极显著性差异(P<0.01)。停止给药后，大鼠的血压出现上升。对照组与空白对照组相比，有血压下降的趋势，但是统计学比较，未发现有统计学差异。本发明通过动物实验初步判断胍基丁胺牛磺酸盐具有一定的降压功能，具体的降压机制还有待进一步深入研究。
表3：大鼠实验组与对照组在受试前后血压统计表(n＝10，)/>
注：*为实验组与空白对照组比较，P<0.05，**为实验组与空白对照组比较，P<0.01。

Claims (18)

1.一种胍基丁胺牛磺酸盐，其特征在于，其结构为：
其中，n＝1～4。
2.一种如权利要求1所述的胍基丁胺牛磺酸盐在制备治疗神经系统疾病的药物中的应用。
3.一种如权利要求1所述的胍基丁胺牛磺酸盐在制备治疗高血压药物中的应用。
4.一种胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：
(1)以胍基丁胺盐溶液为原料，通过双极膜电渗析装置制备胍基丁胺溶液；
(2)所述胍基丁胺溶液与牛磺酸混合反应，得胍基丁胺牛磺酸盐溶液；
(3)所述胍基丁胺牛磺酸盐溶液结晶，即得胍基丁胺牛磺酸盐；
所述胍基丁胺牛磺酸盐如权利要求1所述。
5.如权利要求4所述的胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述双极膜电渗析装置中的阳极室和/或阴极室中含有电解质溶液；
或，步骤(1)中，所述双极膜电渗析装置采用两隔室；
或，步骤(1)中，所述双极膜电渗析装置两端具有恒压直流电。
6.如权利要求5所述的胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述双极膜电渗析装置中的阳极室和/或阴极室中含有强电解质溶液；
或，步骤(1)中，所述两隔室由双极膜与阴离子交换膜，或双极膜与阳离子交换膜分隔而成；
或，步骤(1)中，所述恒压直流电的参数为：电压为220V，电流为200A。
7.如权利要求6所述的胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，其特征在于，所述强电解质溶液的体积浓度为1～3％；
或，所述强电解质的种类选自硫酸、盐酸、硝酸、氢氧化钠、氯化钠、硫酸钠、硝酸钠、硫酸钾、硝酸钾、硫化钾和硫酸铵中的一种或多种；
或，当所述两隔室由双极膜与阴离子交换膜分隔而成时，所述双极膜电渗析装置中膜堆的排列方式为：阳电极-阳极室-阳极膜-[酸室-阴离子交换膜-碱室-双极膜]n-酸室-阴极膜-阴极室-阴电极，其中n为重复单元数且取值范围为1～100之间的整数。
8.如权利要求7所述的胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，其特征在于，所述强电解质为硫酸；
或，当所述两隔室由双极膜与阴离子交换膜分隔而成时，所述双极膜电渗析装置中膜堆的排列方式为：阳电极-阳极室-阳极膜-[酸室-阴离子交换膜-碱室-双极膜]n-酸室-阴极膜-阴极室-阴电极，其中n为100。
9.如权利要求8所述的胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，其特征在于，所述阴极膜采用阳离子交换膜或者阴离子交换膜；
或，所述[酸室-阴离子交换膜-碱室-双极膜]n中采用的阴离子交换膜为季铵型阴离子交换膜；
或，所述阳极膜采用的阳离子交换膜为磺酸型阳离子交换膜。
10.如权利要求9所述的胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，其特征在于，所述阴离子交换膜为季铵型阴离子交换膜；所述阳离子交换膜为磺酸型阳离子交换膜。
11.如权利要求4所述的胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述胍基丁胺盐溶液中胍基丁胺盐的种类为胍基丁胺盐酸盐、胍基丁胺硫酸盐、胍基丁胺醋酸盐、胍基丁胺硝酸盐、或胍基丁胺柠檬酸盐；
或，步骤(1)中，所述胍基丁胺盐溶液中胍基丁胺盐的浓度为0.5～1.8mol/L；
或，步骤(1)中，在制备所述胍基丁胺溶液的同时还生成了对应的酸；
或，步骤(1)中，所述胍基丁胺溶液中胍基丁胺的物质的量与所述胍基丁胺盐溶液中胍基丁胺阳离子的物质的量相当；
或，步骤(1)中，当所述双极膜电渗析装置采用两隔室，且所述两隔室由双极膜与阴离子交换膜分隔而成时，通过检测碱室电导率和电流控制反应进程；
或，步骤(2)中，所述牛磺酸的用量与所述胍基丁胺溶液中胍基丁胺的摩尔比为1:1～1:4；
或，步骤(2)中，所述胍基丁胺牛磺酸盐溶液的pH值为6～11；
或，步骤(3)中，在所述结晶步骤之前，先将所述胍基丁胺牛磺酸盐溶液依次进行脱色、过滤和浓缩处理，得胍基丁胺牛磺酸盐溶液的浓缩液。
12.如权利要求11所述的胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述胍基丁胺盐溶液中胍基丁胺盐的浓度为0.8mol/L、1.0mol/L或1.5mol/L；
或，步骤(1)中，所述对应的酸的物质的量与所述胍基丁胺盐溶液中对应的阴离子的物质的量相当；
或，步骤(1)中，所述胍基丁胺溶液中胍基丁胺的浓度为0.4～3mol/L；
或，步骤(1)中，所述碱室的电导率降至1.0～8.0ms/cm，且电流降低至0.1～1.2A时停止步骤(1)中的反应；
或，步骤(2)中，所述牛磺酸的用量与所述胍基丁胺溶液中胍基丁胺的摩尔比为1:1；
或，步骤(2)中，所述胍基丁胺牛磺酸盐溶液的pH值为8～11。
13.如权利要求12所述的胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述对应的酸的浓度为0～2.0mol/L；
或，步骤(1)中，所述胍基丁胺溶液中胍基丁胺的浓度为0.8mol/L或1.0mol/L；或，步骤(1)中，所述碱室的电导率降至1.0～3.0ms/cm，且电流降低至0.1～0.5A时停止步骤(1)中的反应；
或，步骤(2)中，所述胍基丁胺牛磺酸盐溶液的pH值为8.6、9.85或者10.5。
14.如权利要求13所述的胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述对应的酸的浓度为1.0mol/L或1.2mol/L；
或，步骤(1)中，所述碱室的电导率降至3.0ms/cm以下，且电流降低至0.5A以下时停止步骤(1)中的反应。
15.如权利要求11所述的胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述脱色通过加入活性炭完成，所述活性炭的用量占所述胍基丁胺牛磺酸盐溶液中的胍基丁胺牛磺酸盐的用量的比例为0.2～1％wt％；
或，所述脱色的时间为30～60min；
或，所述浓缩液中胍基丁胺牛磺酸盐的浓度为600～800g/L；
或，所述结晶的过程如下：向所述浓缩液中流加溶析剂，之后离心甩料和烘干即可。
16.如权利要求15所述的胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，所述活性炭的用量占所述胍基丁胺牛磺酸盐溶液中的胍基丁胺牛磺酸盐的用量的比例为0.3wt％、0.44wt％或0.46wt％；
或，所述脱色的时间为30min；
或，所述浓缩液中胍基丁胺牛磺酸盐的浓度为630g/L或634g/L。
17.如权利要求15所述的胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，其特征在于，先将所述浓缩液降温至4～40℃，再将所述浓缩液和所述溶析剂的混合溶液保温并快速搅拌20～40min，使温度维持在4～10℃，离心甩料并烘干即可；
或，所述溶析剂的种类为甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、石油醚、乙酸乙酯、甲醇水溶液、乙醇水溶液、丙酮水溶液、氯仿水溶液、石油醚水溶液或乙酸乙酯水溶液；
或，所述溶析剂的用量与所述浓缩液的体积比为(0.4～6)：1。
18.如权利要求15所述的胍基丁胺牛磺酸盐的制备方法，其特征在于，所述溶析剂为乙醇；
或，所述溶析剂的用量与所述浓缩液的体积比为5:2或3:2。
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