CN114668077A - 食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于实验动物技术领域，尤其涉及食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的制备方法，精确称取粉料等进行混合，加入的混合脂肪搅拌，冷却桶中降温，加入水继续搅拌混合，制成颗粒，低温干燥烘干水分，获得食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料。本发明还提供了食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的应用。本发明在10周即可建立食蟹猴的NAFLD模型，同时避免化学药物诱导造成的不可逆影响，成功复制与人类非酒精性脂肪肝病发病机制相类似的动物模型，缩短实验周期，提高科研效率。此外，本发明仅通过单纯的饲料喂养食蟹猴，符合动物伦理，即可获得食蟹猴非酒精性脂肪肝模型，模拟人类非酒精性脂肪肝病的各种症状，从而为相关疾病研究及新药的开发提供理论基础。
Description
技术领域
本发明属于实验动物技术领域，尤其涉及食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料及其制备方法和应用。
背景技术
非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是一种无过量饮酒史，或每日酒精摄入量，以肝脏实质细胞脂肪变性及脂肪蓄积为主要特征的临床病理综合征。本病疾病谱随病程进展表现不一，包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎、肝硬化和肝细胞癌四个不同的病理阶段。不同种族和不同年龄组男女均可发生，男女发病率相差无几，尤其多见于肥胖及糖尿病患者中，不同国家中发病率占，肥胖人群中的发病率更高达，而在无症状性转氨酶升高的患者中，在排除其他肝病后约是由引起的。已经成为世纪全球重要的公共健康问题之一同时也是我国愈来愈重视的慢性肝病问题。多数非酒精性脂肪肝患者无明显临床症状，部分患者可有乏力、腹胀、恶心、食欲减退、右季肋不适或隐痛等不典型症状，其发病具有隐匿性和长期性的特点。处于脂肪性肝炎期的患者可出现黄疸，进展为肝硬化的患者可出现相应临床表现，甚至发展为肝癌。动物模型是人类研究疾病的基础和重要手段。超声结果显示，食蟹猴脂肪肝与人类具有同样的远场回声衰减表现和弥漫性脂肪浸润。食蟹猴正常、轻度及中度脂肪肝能谱曲线表现与人类一致，随着脂肪含量的增加低能量CT值逐渐降低。并且HE结果显示，与人脂肪肝具有同样的病理改变，包括大泡性脂肪变性，小泡性脂肪变性，炎性浸润和气球样变。与现使用的其他模型相比，食蟹猴NAFLD/NASH模型与人类具有较多的一致性，可更好的模拟人类脂肪肝的发展历程。
目前大部分的食蟹猴脂肪肝模型的研究主要有两种方法：1、通过四氯化碳联合高脂饮食诱导法建立食蟹猴NAFLD模型，动态观测食蟹猴NAFLD形成过程，建立食蟹猴NAFLD模型制作的指标和方法，上述方法违背了人类脂肪肝的发病机制，对于模型的建立和相关药物的研发已形成严重干扰因素；2、通过长时间高脂饮食诱导法建立食蟹猴NAFLD模型，此方法虽然能够很好的模拟人类疾病的发病机理，但是实验周期过于漫长，往往需要好几年的时间，极大影响的科研的进展，造成之后的相关研究受限。
发明内容
针对上述现有技术的不足，本发明提供了食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的制备方法，目的是为了解决现有利用四氯化碳联合高脂饮食诱导法建立食蟹猴NAFLD模型，从而违背了人类脂肪肝的发病机制；以及高脂饮食诱导法建立食蟹猴NAFLD模型，实验周期过于漫长，影响的科研的进展的技术问题。本发明还提供了食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料及其应用。
本发明提供了食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的制备方法，具体技术方案如下：
食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的制备方法，包括如下步骤：
S1，精确称取蛋白粉、特制淀粉、麦芽糊精、果糖、纤维素、脂肪酸、复合维生素和复合矿物质进行混合，获得混合粉料；
S2，步骤S1中的混合粉料加入的混合脂肪进行搅拌，获得油料混合物；
S3，步骤S2中的油料混合物放置在冷却桶中冷却至30-40度后，加入水搅拌混合，通过制粒机进行制粒，获得软颗粒饲料；
S4，将步骤S3中的软颗粒饲料进行低温烘干水分，获得食蟹猴非酒精性脂肪肝的模型饲料。
在某些实施方式中，步骤S1中，按质量百分比计，所述蛋白粉为26％，所述特制淀粉为10％，所述麦芽糊精为8％，所述果糖为24％，所述纤维素为4％，所述脂肪酸为3％，所述复合维生素为8％，所述复合矿物质为2％。
在某些实施方式中，步骤S1中，所述特制淀粉为改性玉米淀粉。
在某些实施方式中，步骤S2中，步骤S2中，所述混合脂肪按质量比计为15％。
在某些实施方式中，步骤S3中，所述软颗粒饲料的粒径为10-15mm。
在某些实施方式中，步骤S4中，所述烘干的温度为26摄氏度，时间为48h。
本发明还提供了根据上述方法制备的食蟹猴非酒精性脂肪肝的模型饲料。
本发明还提供了食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的应用，用于构建食蟹猴非酒精性脂肪肝模型，连续给食蟹猴饲喂权利要求7所述的食蟹猴非酒精性脂肪肝的模型饲料10-20周，自由饮水，食蟹猴肝脏出现以肝细胞索消失及脂质变性、肝细胞胞浆空泡化，光镜下见肝小叶结构明显紊乱，肝细胞索消失，肝细胞有不同程度的脂肪变，变性肝细胞肿胀呈圆形，以小叶周围最明显，胞质内充满大量脂肪空泡，部分胞浆充满脂滴，细胞核偏移，肝窦变窄部分可见少量炎性细胞浸润，偶见少许肝细胞坏死的病理改变，即食蟹猴非酒精性脂肪肝模型构建完成。
本发明具有以下有益效果：本发明提供的方法制备的食蟹猴非酒精性脂肪肝的模型饲料喂养食蟹猴在10周左右即可建立食蟹猴的NAFLD模型，同时避免化学药物诱导对动物造成的不可逆影响，动物在ALT，AST，TC，TG，LDL，HDL等诊断NAFLD的相关生化指标方面均有明显的变化，成功复制与人类非酒精性脂肪肝病发病机制相类似的动物模型，由此实验周期被大大缩短，提高了科研效率。此外，本发明仅通过单纯的饲料喂养食蟹猴，无需采用其他不符合动物伦理的手段，即可获得食蟹猴非酒精性脂肪肝模型，模拟人类非酒精性脂肪肝病的各种症状，从而为人类相关疾病研究及新药的开发提供理论基础。
附图说明
图1是本发明提供的食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的制备方法的流程图；
图2是对照组和实施例组食蟹猴肝脏脂肪变性情况的光镜图；
图3是对照组和实施例组食蟹猴肝脏炎症反应情况的光镜图；
图4是对照组和实施例组食蟹猴肝脏纤维化程度的光镜图。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图1-4，对本发明进一步详细说明。
实施例
本实施例提供的食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的制备方法，具体技术方案如下：
食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的制备方法，包括如下步骤：
S1，精确称取如表1所示的原料，按质量比计，将26％蛋白粉、10％特制淀粉、8％麦芽糊精、24％果糖、4％纤维素、3％脂肪酸、8％复合维生素和2％复合矿物质进行混合，获得混合粉料，其中，特制淀粉为改性玉米淀粉，改性玉米淀粉通过将市售的玉米淀粉经过热水浴加热后再低温干燥(干燥的温度为26摄氏度，时间为48h)后，粉碎成粉末。
S2，步骤S1中的混合粉料加入15％质量比的混合脂肪进行搅拌，获得油料混合物；
S3，步骤S2中的油料混合物放置在冷却桶中冷却至30-40度后，加入水分搅拌混合，通过制粒机进行制粒，获得粒径为10-15mm的软颗粒饲料，本实施例中的软颗粒的粒径为12mm左右；
S4，将步骤S3中的软颗粒饲料进行低温烘干水分(烘干的温度为26摄氏度，时间为48h)，获得食蟹猴非酒精性脂肪肝的模型饲料。
表1本实施例提供的食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的称量原料
| 成分 | 重量(g) |
| 蛋白粉 | 260 |
| 特制淀粉 | 100 |
| 麦芽糊精 | 80 |
| 果糖 | 240 |
| 纤维素 | 40 |
| 混合脂肪 | 150 |
| 脂肪酸 | 30 |
| 复合维生素 | 80 |
| 复合矿物质 | 20 |
| 总计 | 1000 |
本实施例还提供利用上述方法制备的食蟹猴非酒精性脂肪肝的模型饲料。
随机选取健康的食蟹猴共60只，龄5～20岁，体质量4kg左右，乙肝和丙肝病毒呈阴性，动物室为清洁级，室内温度控制在(25±2)℃之间，相对湿度为50％-70％，自然光照，避免噪音及其它干扰，自由进食和饮水。将食蟹猴随机分为2组，即对照组和实施例组，对照组20只，实施例组40只。电子秤称重，并记录每只食蟹猴体重。正常组给予普通饲料喂养，高脂组给予本实施例提供的食蟹猴非酒精性脂肪肝的模型饲料喂养。实验期间食蟹猴自由饮水。20周后，对对照组和实施例组的食蟹猴进行麻醉，在B超引导下进行肝脏穿刺采集活检组织，对采集的肝脏组织进行染色，光镜下观察肝脏病理变化，检测脂肪肝程度，观察造模情况，食蟹猴肝脏出现以以肝细胞索消失及脂质变性、肝细胞胞浆空泡化为特征的病理改变，即建模完成。
如图2-4所示，喂养20周后，实施例组食蟹猴的肝脏组织在光镜下见肝小叶结构明显紊乱，肝细胞索消失，肝细胞有不同程度的脂肪变，变性肝细胞肿胀呈圆形，以小叶周围最明显，胞质内充满大量脂肪空泡，部分胞浆充满脂滴，细胞核偏移，肝窦变窄部分可见少量炎性细胞浸润，偶见少许肝细胞坏死，提示肝脏组织呈轻中度脂肪变，体重和肝指数显著高于对照组；血清和肝组织中甘油三酯、胆固醇、游离脂肪酸均显著升高；肝细胞胞浆空泡化，并伴有大量炎症细胞浸润，实质细胞内有大小不等的脂质小滴沉积。
上述仅本发明较佳可行实施例，并非是对本发明的限制，本发明也并不限于上述举例，本技术领域的技术人员，在本发明的实质范围内，所作出的变化、改型、添加或替换，也应属于本发明的保护范围。
Claims (8)
1.食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1，精确称取蛋白粉、特制淀粉、麦芽糊精、果糖、纤维素、脂肪酸、复合维生素和复合矿物质进行混合，获得混合粉料；
S2，步骤S1中的混合粉料加入的混合脂肪进行搅拌，获得油料混合物；
S3，步骤S2中的油料混合物放置在冷却桶中冷却至30-40度后，加入水搅拌混合，通过制粒机进行制粒，获得软颗粒饲料；
S4，将步骤S3中的软颗粒饲料进行低温烘干水分，获得食蟹猴非酒精性脂肪肝的模型饲料。
2.根据权利要求1所述的食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的制备方法，其特征在于，步骤S1中，按质量百分比计，所述蛋白粉为26％，所述特制淀粉为10％，所述麦芽糊精为8％，所述果糖为24％，所述纤维素为4％，所述脂肪酸为3％，所述复合维生素为8％，所述复合矿物质为2％。
3.根据权利要求1所述的食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述特制淀粉为改性玉米淀粉。
4.根据权利要求1所述的食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述混合脂肪按质量比计为15％。
5.根据权利要求1所述的食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述软颗粒饲料的10-15mm。
6.根据权利要求1所述的食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的制备方法，其特征在于，步骤S4中，所述烘干的温度为26摄氏度，时间为48小时。
7.食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料，其特征在于，根据权利要求1-6任一项所述的方法制备的食蟹猴非酒精性脂肪肝的模型饲料。
8.食蟹猴非酒精性脂肪肝模型饲料的应用，用于构建食蟹猴非酒精性脂肪肝模型，其特征在于，连续给食蟹猴饲喂权利要求7所述的食蟹猴非酒精性脂肪肝的模型饲料10-20周，自由饮水，食蟹猴肝脏出现以肝细胞索消失及脂质变性、肝细胞胞浆空泡化，光镜下见肝小叶结构明显紊乱，肝细胞索消失，肝细胞有不同程度的脂肪变，变性肝细胞肿胀呈圆形，以小叶周围最明显，胞质内充满大量脂肪空泡，部分胞浆充满脂滴，细胞核偏移，肝窦变窄部分可见少量炎性细胞浸润，偶见少许肝细胞坏死的病理改变，即食蟹猴非酒精性脂肪肝模型构建完成。
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|---|---|---|---|---|
| CN116019054A (zh) * | 2022-12-30 | 2023-04-28 | 江苏珂玛麒生物科技有限公司 | 一种食蟹猴nash模型的构建方法 |
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| CN106389394A (zh) * | 2016-08-31 | 2017-02-15 | 广西防城港常春生物技术开发有限公司 | 一种食蟹猴酒精性肝病模型的构建方法 |
| CN111328920A (zh) * | 2020-03-10 | 2020-06-26 | 昆明科灵生物科技有限公司 | 一种构建非人灵长类动物非酒精性脂肪性肝炎模型用饲料及其使用方法 |
| CN111728097A (zh) * | 2020-07-15 | 2020-10-02 | 常州鼠一鼠二生物科技有限公司 | 大鼠非酒精性脂肪肝模型饲料及其制备方法和应用 |
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2020
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