CN114657233A - 一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及核酸检测试剂技术领域，且公开了一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂，包括缓冲液，所述缓冲液：200‑600mM、氯化钠：20‑100mM、氯化钾：20‑100mM、氯化镁：10‑40mM、二硫苏糖醇：5‑10mM、聚乙烯呲咯烷酮：5‑15％、ATP：10‑15mM、dNPTs：2‑4mM，该基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂及其应用，通过增加多种引物之间进行替换，并针对核酸检测试剂替换不同比例，并对不同比例件进行检测，即可增加核酸检测试剂对不同物种之间检测时增加精准性，并针对不同物质之间进行测试后，可有效增加实验的成功率，并在后期使用时，增加使用效果，减小试剂实验不足导致对身体造成损坏的问题。

Description

一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂及其应用
技术领域
本发明涉及核酸检测试剂技术领域，具体为一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂及其应用。
背景技术
聚合酶链式反应(PCR)技术自1983年由Mullis等发明以来，在生命科学研究等方面得到广泛应用。传统的PCR反应中，在存在DNA模板、引物、四种dTTP、适当的缓冲液的反应混合物的条件下，通过DNA聚合酶催化从而对目的DNA片段进行扩增，至此针对核酸检测试剂进行生产时，研发出一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂及其应用。
在现有的基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂及其应用中，会出现多荧光核酸检测试剂使用时，无法准确对多荧光核酸检测试剂的使用效果进行检验，从而导致在多荧光核酸检测试剂配料不同比例的情况下无法精准测算出使用结果，导致多荧光核酸检测试剂制备和应用时无法准确的检测出结构的问题。
发明内容
针对现有基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂及其应用的不足，本发明提供了一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂及其应用，具备通过对不同动物提取的引物组，并带动引物组与不同比例的核酸检测试剂之间进行混合，即可对核酸检测试剂与不同引物组之间进行检验测试，从而增加测试结果准确性的优点，解决了上述背景技术中提出的问题。
本发明提供如下技术方案：一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂，包括缓冲液，所述缓冲液：200-600mM、氯化钠：20-100mM、氯化钾：20-100mM、氯化镁：10-40mM、二硫苏糖醇：5-10mM、聚乙烯呲咯烷酮：5-15％、ATP：10-15mM、dNPTs：2-4mM、磷酸烯醇丙酮酸：20-40mM、丙酮酸激酶：600-1400ng/μl、BSA：200-400ng/μl、引物组：每种引物30-150ng/μl、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白：80-150ng/μl、天蓝色链霉菌recA蛋白：120-450ng/μ、单链结合蛋白：300-800ng/μl、大肠杆菌DNA聚合酶I：80-120ng/μl。
优选的，所述缓冲液、氯化钠、氯化钾、氯化镁、二硫苏糖醇、聚乙烯呲咯烷酮、ATP、dNPTs、磷酸烯醇丙酮酸、丙酮酸激酶、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白、天蓝色链霉菌recA蛋白、单链结合蛋白、大肠杆菌DNA聚合酶I混合成核酸检测试剂。
优选的，还包括：供应检测模块，包括：
第一顺序确定单元，用于调取所述核酸检测试剂的历史使用记录，根据所述历史使用记录的水平记录顺序，确定对所述历史使用记录的第一预览顺序；
第二顺序确定单元，用于根据所述历史使用记录的垂直记录顺序，确定对所述历史使用记录的第二预览顺序；
流程确定单元，用于基于所述第一预览顺序以及所述第二预览顺序，确定对所述历史使用记录的预览流程；
条件确定单元，用于基于所述预览流程，对所述历史使用记录中存在的所有使用信息进行预览，并根据预览结果，确定所存在的每一需求信息与每一使用信息之间的对应条件；
拆分单元，用于获取当前存在的实际需求信息，并对所述实际需求信息进行拆分，得到实际子需求信息；
遍历顺序确定单元，用于根据所有实际子需求信息所在的层级顺序，确定对应的遍历顺序；
信息确定单元，用于基于所述对应条件，按照所述遍历顺序对每一实际子需求信息进行遍历，确定与所述每一实际子需求信息对应的实际使用信息；
控制单元，用于根据所述实际使用信息与所述核酸检测试剂的供应信息之间的比较结果，确定当前供应是否存在富余，若存在，获取当前遍历的第一实际子需求信息与上一层级对应的第二实际子需求信息之间的相同信息，确定所述相同信息与当前富余的核酸检测试剂对应的富余信息之间的适应性，当所述适应性达到预设适应性时，将所述富余信息添加至所述第二实际子需求信息对应的供应信息中；
当所述适应性未达到预设适应性时，沿着所述第一实际子需求信息向上遍历，或者向下遍历，若未找到具有相同需求内容的实际子需求信息，将所述富余的核酸检测试剂进行存储；
若不富余，根据所述实际使用信息与对应的供应信息之间的差异信息，确定所需补充供给信息，并提醒继续进行扩增作业。
优选的，所述核酸检测试剂加热温度至20℃至42℃，并在核酸检测试剂的内部添加缓冲液。
优选的，添加缓冲液的核酸检测试剂内部添加荧光染剂，并在荧光染剂的内部添加引物组，所述引物组根据需要从待检测动物上进行提取。
优选的，基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂调剂而成后，形成数列，并放置在通风且温度保持在20℃至42℃之间的环境中。
优选的，所述缓冲液在玉米内部进行提取，并保持缓冲液PH值保持在8.0。
优选的，所述荧光染剂为SYBRGREEN1、SYTO-13或SYTO-82。
优选的，对基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂使用检测后，对反应后的物料进行检测，并对检测后物料的DNA和cDNA进行提取并进行记录。
优选的，还包括：基于对所添加的所述荧光染剂的检测结果，对所述核酸检测试剂的使用效果进行评估，具体包括：
分别获取所述核酸检测试剂、所述缓冲液、所述荧光染剂、所述引物组对应的当前实验容量值，并将具有相同容量值的待实验组置于同一实验环境中进行N组实验；
获取每组实验中添加所述荧光染剂的初始荧光强度以及获取时间点；
其中，所述每组实验的所述获取时间点相同；
以所述初始荧光强度为基础，监测所述每组实验中荧光强度在所述核酸检测试剂与所述引物组进行混合作用的过程中的变化特征，并将所述获取时间点作为起点，基于所述变化特征，构建对应的第一变化曲线集合；
将所述第一变化曲线集合中的每一变化曲线置于预先建立的目标坐标系中，根据预先设置的待研究曲线段对应的第一数量以及每一任意两条变化曲线之间存在的吻合曲线段对应的第二数量，确定所述每一任意两条变化曲线对应的吻合比例；
基于所述每一任意两条变化曲线对应的吻合比例以及对应的所述吻合比例在所有任意两条变化曲线中的布局特征，确定所述每一任意两条变化曲线对应的吻合值；
筛选最大吻合值对应的第二变化曲线集合，并获取所述第二变化曲线集合中每一变化曲线中每一点对应的切线斜率，基于所述切线斜率的正负交替处对应的横坐标值以及纵坐标值，确定所述每一变化曲线对应的波峰点以及波谷点，并基于所述切线斜率的正负性、所述波峰点以及所述波谷点，确定所述每一变化曲线对应的变化规律；
基于所述第二变化曲线集合，获取基于所述变化规律的最终荧光强度，并基于所述初始荧光强度以及所述最终荧光强度，确定所述核酸检测试剂与所述引物组之间的反应效率；
基于所述反应效率，对所述核酸检测试剂的使用效果进行评估，并确定最终评估结果。
与现有基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂及其应用对比，本发明具备以下有益效果：
1、该基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂及其应用，通过增加多种引物之间进行替换，并针对核酸检测试剂替换不同比例，并对不同比例件进行检测，即可增加核酸检测试剂对不同物种之间检测时的精准性，并针对不同物质之间进行测试后，可有效增加实验的成功率，并在后期使用时，增加使用效果，减小试剂实验不足导致对身体造成损坏的问题。
2、该基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂及其应用，通过在玉米内部提取缓冲液，即可增加缓冲液提取的便捷性，同时在试剂的内部添加荧光染剂，可通过荧光染剂增加反应效果，同时方便后期根据荧光染剂有效观察试剂使用效果。
3、该基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂及其应用，根据核酸检测试剂的历史使用情况，来确定需求信息与使用信息之间的对应条件，进而便于对实际需求信息进行分析，确定对核酸检测试剂的使用信息，也便于与供应信息进行比较，使得在不浪费的情况下，满足相应的需求信息，在不足时，及时进行扩增，提升核酸检测试剂的供应效率。
4、该基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂及其应用，根据灵敏度、所用时长以及准确度三方面对第j个核酸检测试剂进行综合评分，使得计算更加的准确，根据综合评分值与目标评分值之间的比较结果，来确定第j个核酸检测试剂的合格情况，以便及时进行调整，确保拥有较好的作用效果。
5、该基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂及其应用，通过对N组实验中每一组实验的荧光染剂的荧光强度进行变化检测，以便后续根据实验评估结果，进行准确调整，并通过曲线分析的方式，形象直观地将变化特征表现出来，提升了准确率，将众多曲线进行吻合值确定，便于筛选稳定的曲线，提升最终对核酸检测试剂的使用效果的评估准确性。
附图说明
图1为本发明试剂配方比例示意图；
图2为本发明整体操作流程示意图；
图3为本发明供应检测模块的结构框图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1和图2，一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂，包括缓冲液，缓冲液：200-600mM、氯化钠：20-100mM、氯化钾：20-100mM、氯化镁：10-40mM、二硫苏糖醇：5-10mM、聚乙烯呲咯烷酮：5-15％、ATP：10-15mM、dNPTs：2-4mM、磷酸烯醇丙酮酸：20-40mM、丙酮酸激酶：600-1400ng/μl、BSA：200-400ng/μl、引物组：每种引物30-150ng/μl、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白：80-150ng/μl、天蓝色链霉菌recA蛋白：120-450ng/μ、单链结合蛋白：300-800ng/μl、大肠杆菌DNA聚合酶I：80-120ng/μl。
参阅图1，缓冲液、氯化钠、氯化钾、氯化镁、二硫苏糖醇、聚乙烯呲咯烷酮、ATP、dNPTs、磷酸烯醇丙酮酸、丙酮酸激酶、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白、天蓝色链霉菌recA蛋白、单链结合蛋白、大肠杆菌DNA聚合酶I混合成核酸检测试剂，通过带动缓冲液、氯化钠、氯化钾、氯化镁、二硫苏糖醇、聚乙烯呲咯烷酮、ATP、dNPTs、磷酸烯醇丙酮酸、丙酮酸激酶、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白、天蓝色链霉菌recA蛋白、单链结合蛋白、大肠杆菌DNA聚合酶I混合成核酸检测试剂，即可带动多荧光核酸检测试剂进行合成限定。
参阅图2，核酸检测试剂加热温度至20℃至42℃，并在核酸检测试剂的内部添加缓冲液，核酸检测试剂加热温度至20℃至42℃，即可带动核酸检测试剂进行反应，增加核酸检测试剂的活性，同时在核酸检测试剂的内部添加缓冲液，方便后期与反应物之间进行混合。
参阅图2，添加缓冲液的核酸检测试剂内部添加荧光染剂，并在荧光染剂的内部添加引物组，引物组根据需要从待检测动物上进行提取，通过在添加缓冲液的核酸检测试剂内部添加荧光染剂，即可通过荧光染剂方便对反应组进行观察，增加对后期实验结构的检验性，同时在添加荧光染剂后添加引物组，即可带动试剂与引物组之间进行反应，从而进行使用的作用。
参阅图2，基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂调剂而成后，形成数列，并放置在通风且温度保持在20℃至42℃之间的环境中，通过经过基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂调剂而成后，摆放在特定位置，并保持通风且温度保持在20℃至42℃之间，即可方便带动反应物之间发生反应。
参阅图2，缓冲液在玉米内部进行提取，并保持缓冲液PH值在8.0，通过缓冲液在玉米内部进行提取，即可增加对缓冲液提取的便捷性，并带动缓冲液PH值保持在8.0，从而避免缓冲液过低或过高对物料造成影响的问题。
参阅图1，所述荧光染剂为SYBRGREEN1、SYTO-13或SYTO-82。
参阅图2，对基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂使用检测后，对反应后的物料进行检测，并对检测后物料的DNA和cDNA进行提取并进行记录，通过使用后，对检测后物料的DNA和cDNA进行提取并进行记录，即可达到对多荧光核酸检测试剂使用结果进行观察的作用。
实施例一
缓冲液：600mM、氯化钠：100mM、氯化钾：100mM、氯化镁：40mM、二硫苏糖醇：10mM、聚乙烯呲咯烷酮：15％、ATP：15mM、dNPTs：4mM、磷酸烯醇丙酮酸：40mM、丙酮酸激酶：1400ng/μl、BSA：400ng/μl、引物组：每种引物150ng/μl、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白：150ng/μl、天蓝色链霉菌recA蛋白：450ng/μ、单链结合蛋白：800ng/μl、大肠杆菌DNA聚合酶I：120ng/μl混合成核酸检测试剂，通过带动缓冲液：600mM、氯化钠：100mM、氯化钾：100mM、氯化镁：40mM、二硫苏糖醇：10mM、聚乙烯呲咯烷酮：15％、ATP：15mM、dNPTs：4mM、磷酸烯醇丙酮酸：40mM、丙酮酸激酶：1400ng/μl、BSA：400ng/μl、引物组：每种引物150ng/μl、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白：150ng/μl、天蓝色链霉菌recA蛋白：450ng/μ、单链结合蛋白：800ng/μl、大肠杆菌DNA聚合酶I：120ng/μl混合成核酸检测试剂，即可带动多荧光核酸检测试剂进行合成限定。
核酸检测试剂加热温度至20℃至42℃，并在核酸检测试剂的内部添加缓冲液，核酸检测试剂加热温度至20℃至42℃，即可带动核酸检测试剂进行反应，增加核酸检测试剂的活性，同时在核酸检测试剂的内部添加缓冲液，方便后期与反应物之间进行混合。
添加缓冲液的核酸检测试剂内部添加荧光染剂，并在荧光染剂的内部添加引物组，引物组根据需要从鸡上进行提取，通过在添加缓冲液的核酸检测试剂内部添加荧光染剂，即可通过荧光染剂方便对反应组进行观察，增加对后期实验结构的检验性，同时在添加荧光染剂后添加引物组，即可带动试剂与引物组之间进行反应，从而进行使用的作用。
基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂调剂而成后，形成数列，并放置在通风且温度保持在20℃至42℃之间的环境中，通过经过基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂调剂而成后，摆放在特定位置，并保持通风且温度保持在20℃至42℃之间，即可方便带动反应物之间发生反应。
对基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂使用检测后，对反应后的物料进行检测，并对检测后物料的DNA和cDNA进行提取并进行记录，通过使用后，对检测后物料的DNA和cDNA进行提取并进行记录，即可达到对多荧光核酸检测试剂使用结果进行观察的作用。
实施例二
缓冲液：200mM、氯化钠：20mM、氯化钾：20mM、氯化镁：10mM、二硫苏糖醇：5mM、聚乙烯呲咯烷酮：5％、ATP：10mM、dNPTs：2mM、磷酸烯醇丙酮酸：2mM、丙酮酸激酶：600ng/μl、BSA：200ng/μl、引物组：每种引物30ng/μl、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白：80ng/μl、天蓝色链霉菌recA蛋白：120ng/μ、单链结合蛋白：300ng/μl、大肠杆菌DNA聚合酶I：80ng/μl混合成核酸检测试剂，通过带动缓冲液：200mM、氯化钠：20mM、氯化钾：20mM、氯化镁：10mM、二硫苏糖醇：5mM、聚乙烯呲咯烷酮：5％、ATP：10mM、dNPTs：2mM、磷酸烯醇丙酮酸：2mM、丙酮酸激酶：600ng/μl、BSA：200ng/μl、引物组：每种引物30ng/μl、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白：80ng/μl、天蓝色链霉菌recA蛋白：120ng/μ、单链结合蛋白：300ng/μl、大肠杆菌DNA聚合酶I：80ng/μl混合成核酸检测试剂，即可带动多荧光核酸检测试剂进行合成限定。
核酸检测试剂加热温度至20℃至42℃，并在核酸检测试剂的内部添加缓冲液，核酸检测试剂加热温度至20℃至42℃，即可带动核酸检测试剂进行反应，增加核酸检测试剂的活性，同时在核酸检测试剂的内部添加缓冲液，方便后期与反应物之间进行混合。
添加缓冲液的核酸检测试剂内部添加荧光染剂，并在荧光染剂的内部添加引物组，引物组根据需要从鸡上进行提取，通过在添加缓冲液的核酸检测试剂内部添加荧光染剂，即可通过荧光染剂方便对反应组进行观察，增加对后期实验结构的检验性，同时在添加荧光染剂后添加引物组，即可带动试剂与引物组之间进行反应，从而进行使用的作用。
基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂调剂而成后，形成数列，并放置在通风且温度保持在20℃至42℃之间的环境中，通过经过基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂调剂而成后，摆放在特定位置，并保持通风且温度保持在20℃至42℃之间，即可方便带动反应物之间发生反应。
对基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂使用检测后，对反应后的物料进行检测，并对检测后物料的DNA和cDNA进行提取并进行记录，通过使用后，对检测后物料的DNA和cDNA进行提取并进行记录，即可达到对多荧光核酸检测试剂使用结果进行观察的作用。
实施例三
缓冲液：200mM、氯化钠：20mM、氯化钾：20mM、氯化镁：10mM、二硫苏糖醇：5mM、聚乙烯呲咯烷酮：5％、ATP：10mM、dNPTs：2mM、磷酸烯醇丙酮酸：2mM、丙酮酸激酶：600ng/μl、BSA：200ng/μl、引物组：每种引物30ng/μl、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白：80ng/μl、天蓝色链霉菌recA蛋白：120ng/μ、单链结合蛋白：300ng/μl、大肠杆菌DNA聚合酶I：80ng/μl混合成核酸检测试剂，通过带动缓冲液：200mM、氯化钠：20mM、氯化钾：20mM、氯化镁：10mM、二硫苏糖醇：5mM、聚乙烯呲咯烷酮：5％、ATP：10mM、dNPTs：2mM、磷酸烯醇丙酮酸：2mM、丙酮酸激酶：600ng/μl、BSA：200ng/μl、引物组：每种引物30ng/μl、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白：80ng/μl、天蓝色链霉菌recA蛋白：120ng/μ、单链结合蛋白：300ng/μl、大肠杆菌DNA聚合酶I：80ng/μl混合成核酸检测试剂，即可带动多荧光核酸检测试剂进行合成限定。
核酸检测试剂加热温度至20℃至42℃，并在核酸检测试剂的内部添加缓冲液，核酸检测试剂加热温度至20℃至42℃，即可带动核酸检测试剂进行反应，增加核酸检测试剂的活性，同时在核酸检测试剂的内部添加缓冲液，方便后期与反应物之间进行混合。
添加缓冲液的核酸检测试剂内部添加荧光染剂，并在荧光染剂的内部添加引物组，引物组根据需要从鸭上进行提取，通过在添加缓冲液的核酸检测试剂内部添加荧光染剂，即可通过荧光染剂方便对反应组进行观察，增加对后期实验结构的检验性，同时在添加荧光染剂后添加引物组，即可带动试剂与引物组之间进行反应，从而进行使用的作用。
基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂调剂而成后，形成数列，并放置在通风且温度保持在20℃至42℃之间的环境中，通过经过基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂调剂而成后，摆放在特定位置，并保持通风且温度保持在20℃至42℃之间，即可方便带动反应物之间发生反应。
对基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂使用检测后，对反应后的物料进行检测，并对检测后物料的DNA和cDNA进行提取并进行记录，通过使用后，对检测后物料的DNA和cDNA进行提取并进行记录，即可达到对多荧光核酸检测试剂使用结果进行观察的作用。
实施例四
缓冲液：600mM、氯化钠：100mM、氯化钾：100mM、氯化镁：40mM、二硫苏糖醇：10mM、聚乙烯呲咯烷酮：15％、ATP：15mM、dNPTs：4mM、磷酸烯醇丙酮酸：40mM、丙酮酸激酶：1400ng/μl、BSA：400ng/μl、引物组：每种引物150ng/μl、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白：150ng/μl、天蓝色链霉菌recA蛋白：450ng/μ、单链结合蛋白：800ng/μl、大肠杆菌DNA聚合酶I：120ng/μl混合成核酸检测试剂，通过带动缓冲液：600mM、氯化钠：100mM、氯化钾：100mM、氯化镁：40mM、二硫苏糖醇：10mM、聚乙烯呲咯烷酮：15％、ATP：15mM、dNPTs：4mM、磷酸烯醇丙酮酸：40mM、丙酮酸激酶：1400ng/μl、BSA：400ng/μl、引物组：每种引物150ng/μl、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白：150ng/μl、天蓝色链霉菌recA蛋白：450ng/μ、单链结合蛋白：800ng/μl、大肠杆菌DNA聚合酶I：120ng/μl混合成核酸检测试剂，即可带动多荧光核酸检进行合成限定。
核酸检测试剂加热温度至20℃至42℃，并在核酸检测试剂的内部添加缓冲液，核酸检测试剂加热温度至20℃至42℃，即可带动核酸检测试剂进行反应，增加核酸检测试剂的活性，同时在核酸检测试剂的内部添加缓冲液，方便后期与反应物之间进行混合。
添加缓冲液的核酸检测试剂内部添加荧光染剂，并在荧光染剂的内部添加引物组，引物组根据需要从鸭上进行提取，通过在添加缓冲液的核酸检测试剂内部添加荧光染剂，即可通过荧光染剂方便对反应组进行观察，增加对后期实验结构的检验性，同时在添加荧光染剂后添加引物组，即可带动试剂与引物组之间进行反应，从而进行使用的作用。
基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂调剂而成后，形成数列，并放置在通风且温度保持在20℃至42℃之间的环境中，通过经过基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂调剂而成后，摆放在特定位置，并保持通风且温度保持在20℃至42℃之间，即可方便带动反应物之间发生反应。
对基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂使用检测后，对反应后的物料进行检测，并对检测后物料的DNA和cDNA进行提取并进行记录，通过使用后，对检测后物料的DNA和cDNA进行提取并进行记录，即可达到对多荧光核酸检测试剂使用结果进行观察的作用。
实施例五
缓冲液：400mM、氯化钠：60mM、氯化钾：60mM、氯化镁：25mM、二硫苏糖醇：7mM、聚乙烯呲咯烷酮：7％、ATP：12mM、dNPTs：3mM、磷酸烯醇丙酮酸：10mM、丙酮酸激酶：1000ng/μl、BSA：300ng/μl、引物组：每种引物80ng/μl、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白：110ng/μl、天蓝色链霉菌recA蛋白：300ng/μ、单链结合蛋白：450ng/μl、大肠杆菌DNA聚合酶I：100ng/μl混合成核酸检测试剂，通过带动缓冲液：400mM、氯化钠：60mM、氯化钾：60mM、氯化镁：25mM、二硫苏糖醇：7mM、聚乙烯呲咯烷酮：7％、ATP：12mM、dNPTs：3mM、磷酸烯醇丙酮酸：10mM、丙酮酸激酶：1000ng/μl、BSA：300ng/μl、引物组：每种引物80ng/μl、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白：110ng/μl、天蓝色链霉菌recA蛋白：300ng/μ、单链结合蛋白：450ng/μl、大肠杆菌DNA聚合酶I：100ng/μl混合成核酸检测试剂，即可带动多荧光核酸检测试剂进行合成限定。
核酸检测试剂加热温度至20℃至42℃，并在核酸检测试剂的内部添加缓冲液，核酸检测试剂加热温度至20℃至42℃，即可带动核酸检测试剂进行反应，增加核酸检测试剂的活性，同时在核酸检测试剂的内部添加缓冲液，方便后期与反应物之间进行混合。
添加缓冲液的核酸检测试剂内部添加荧光染剂，并在荧光染剂的内部添加引物组，引物组根据需要从鸡上进行提取，通过在添加缓冲液的核酸检测试剂内部添加荧光染剂，即可通过荧光染剂方便对反应组进行观察，增加对后期实验结构的检验性，同时在添加荧光染剂后添加引物组，即可带动试剂与引物组之间进行反应，从而进行使用的作用。
基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂调剂而成后，形成数列，并放置在通风且温度保持在20℃至42℃之间的环境中，通过经过基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂调剂而成后，摆放在特定位置，并保持通风且温度保持在20℃至42℃之间，即可方便带动反应物之间发生反应。
对基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂使用检测后，对反应后的物料进行检测，并对检测后物料的DNA和cDNA进行提取并进行记录，通过使用后，对检测后物料的DNA和cDNA进行提取并进行记录，即可达到对多荧光核酸检测试剂使用结果进行观察的作用。
参阅图3，本发明提供一种技术方案：还包括：供应检测模块，包括：
第一顺序确定单元，用于调取所述核酸检测试剂的历史使用记录，根据所述历史使用记录的水平记录顺序，确定对所述历史使用记录的第一预览顺序；
第二顺序确定单元，用于根据所述历史使用记录的垂直记录顺序，确定对所述历史使用记录的第二预览顺序；
流程确定单元，用于基于所述第一预览顺序以及所述第二预览顺序，确定对所述历史使用记录的预览流程；
条件确定单元，用于基于所述预览流程，对所述历史使用记录中存在的所有使用信息进行预览，并根据预览结果，确定所存在的每一需求信息与每一使用信息之间的对应条件；
拆分单元，用于获取当前存在的实际需求信息，并对所述实际需求信息进行拆分，得到实际子需求信息；
遍历顺序确定单元，用于根据所有实际子需求信息所在的层级顺序，确定对应的遍历顺序；
信息确定单元，用于基于所述对应条件，按照所述遍历顺序对每一实际子需求信息进行遍历，确定与所述每一实际子需求信息对应的实际使用信息；
控制单元，用于根据所述实际使用信息与所述核酸检测试剂的供应信息之间的比较结果，确定当前供应是否存在富余，若存在，获取当前遍历的第一实际子需求信息与上一层级对应的第二实际子需求信息之间的相同信息，确定所述相同信息与当前富余的核酸检测试剂对应的富余信息之间的适应性，当所述适应性达到预设适应性时，将所述富余信息添加至所述第二实际子需求信息对应的供应信息中；
当所述适应性未达到预设适应性时，沿着所述第一实际子需求信息向上遍历，或者向下遍历，若未找到具有相同需求内容的实际子需求信息，将所述富余的核酸检测试剂进行存储；
若不富余，根据所述实际使用信息与对应的供应信息之间的差异信息，确定所需补充供给信息，并提醒继续进行扩增作业。
该实施例中，历史使用记录是指包括核酸检测试剂的历史使用时间、使用试剂量、使用试剂类型等信息在内的记录。
该实施例中，水平记录顺序是指记录的行信息的先后顺序。
该实施例中，垂直记录顺序是指记录的列信息的先后顺序。
该实施例中，预览流程是指先根据第一预览顺序对第一使用信息进行行浏览，再根据第二预览顺序对第二使用信息进行列浏览，并再根据第一预览顺序对第二使用信息进行行浏览，再根据第二预览顺序对第三使用信息进行列浏览，依次进行。
该实施例中，对应条件例如：第一需求信息中对应的第一引物组ang/μl，对应使用的核酸检测试剂为bng/μl，ang/μl与bng/μl之间对应形成第一对应条件。
该实施例中，实际需求信息包括需求时间、所需核酸检测试剂的试剂量，所需核酸检测试剂的浓度等。
该实施例中，进行拆分是指将所有实际需求信息中的每一实际子需求信息都拆分开。
该实施例中，层级顺序是指按照在实际需求信息中的当前位置划分的。
该实施例中，相同信息可以为需求时间相同的对应信息，也可以为需求内容相同的对应信息等。
该实施例中，富余信息是指包括富余核酸检测试剂的成分信息、试剂量、试剂浓度等信息。
该实施例中，适应性是指根据第二实际子需求对富余核酸检测试剂的需要确定的。
该实施例中，相同需求内容是指与富余的核酸检测试剂的浓度、试剂量一致的内容信息。
该实施例中，差异信息可以为实际使用量与实际供应量之间差异量值。
上述技术方案的有益效果为：根据核酸检测试剂的历史使用情况，来确定需求信息与使用信息之间的对应条件，进而便于对实际需求信息进行分析，确定对核酸检测试剂的使用信息，也便于与供应信息进行比较，使得在不浪费的情况下，满足相应的需求信息，在不足时，及时进行扩增，提升核酸检测试剂的供应效率。
本发明提供一种技术方案：还包括：综合评估模块，包括：
获取单元，用于获取现存在的第j个核酸检测试剂在预设时间内进行核酸检测的样本总数量以及对生物样本进行核酸检测对应的平均失误率；
计算单元，用于基于所述获取单元的获取结果以及如下公式，计算对所述第j个核酸检测试剂的综合评分值Bj：
Figure BDA0003588296400000161
其中，
Figure BDA0003588296400000162
表示对所述第j个核酸检测试剂的目标评分值；
Figure BDA0003588296400000163
表示所述第j个核酸检测试剂的实际灵敏度；
Figure BDA0003588296400000164
表示所述第j个核酸检测试剂的目标灵敏度；m表示当前存在的核酸检测试剂的总数量；
Figure BDA0003588296400000165
表示所述第j个核酸检测试剂的实际作用时长；
Figure BDA0003588296400000166
表示所述第j个核酸检测试剂的目标作用时长，其中，
Figure BDA0003588296400000167
Cj表示所述第j个核酸检测试剂在预设时间内进行核酸检测的样本总数量；μj表示所述第j个核酸检测试剂对生物样本进行核酸检测对应的平均失误率；
Figure BDA0003588296400000168
表示所述第j个核酸检测试剂进行核酸检测对应的准确率；τ1表示灵敏度评价系数，其的取值范围为(0.2，0.3)；τ2表示准确率评价系数，其的取值范围为(0.3，0.4)；
主控单元，用于根据所述综合评分值以及所述目标评分值之间的比较结果，确定所述第j个核酸检测试剂的合格情况。
该实施例中，在公式
Figure BDA0003588296400000171
Figure BDA0003588296400000172
中，当
Figure BDA0003588296400000173
Figure BDA0003588296400000174
时，Bj＝46.7，显然46.7小于100，说明所述第j个核酸检测试剂不合格。
上述技术方案的有益效果为：根据灵敏度、所用时长以及准确度三方面对第j个核酸检测试剂进行综合评分，使得计算更加的准确，根据综合评分值与目标评分值之间的比较结果，来确定第j个核酸检测试剂的合格情况，以便及时进行调整，确保拥有较好的作用效果。
本发明提供一种技术方案：还包括：基于对所添加的所述荧光染剂的检测结果，对所述核酸检测试剂的使用效果进行评估，具体包括：
分别获取所述核酸检测试剂、所述缓冲液、所述荧光染剂、所述引物组对应的当前实验容量值，并将具有相同容量值的待实验组置于同一实验环境中进行N组实验；
获取每组实验中添加所述荧光染剂的初始荧光强度以及获取时间点；
其中，所述每组实验的所述获取时间点相同；
以所述初始荧光强度为基础，监测所述每组实验中荧光强度在所述核酸检测试剂与所述引物组进行混合作用的过程中的变化特征，并将所述获取时间点作为起点，基于所述变化特征，构建对应的第一变化曲线集合；
将所述第一变化曲线集合中的每一变化曲线置于预先建立的目标坐标系中，根据预先设置的待研究曲线段对应的第一数量以及每一任意两条变化曲线之间存在的吻合曲线段对应的第二数量，确定所述每一任意两条变化曲线对应的吻合比例；
基于所述每一任意两条变化曲线对应的吻合比例以及对应的所述吻合比例在所有任意两条变化曲线中的布局特征，确定所述每一任意两条变化曲线对应的吻合值；
筛选最大吻合值对应的第二变化曲线集合，并获取所述第二变化曲线集合中每一变化曲线中每一点对应的切线斜率，基于所述切线斜率的正负交替处对应的横坐标值以及纵坐标值，确定所述每一变化曲线对应的波峰点以及波谷点，并基于所述切线斜率的正负性、所述波峰点以及所述波谷点，确定所述每一变化曲线对应的变化规律；
基于所述第二变化曲线集合，获取基于所述变化规律的最终荧光强度，并基于所述初始荧光强度以及所述最终荧光强度，确定所述核酸检测试剂与所述引物组之间的反应效率；
基于所述反应效率，对所述核酸检测试剂的使用效果进行评估，并确定最终评估结果。
该实施例中，待实验组包括：核酸检测试剂、缓冲液、荧光染剂、引物组。
该实施例中，变化特征是指在什么时间段为上升，什么时间段为下降，什么时间点达到波峰，什么时间点达到波谷。
该实施例中，吻合比例是指根据第二数量与第一数量之间的比值确定的。
该实施例中，布局特征是指第一吻合比例对应哪两条变化曲线，第二吻合比例对应哪两条变化曲线等。
该实施例中，吻合值的计算公式如下：
Figure BDA0003588296400000181
其中，Mi表示第i组变化曲线对应的吻合值；M0表示任意一组变化曲线所能达到的最大吻合值；n表示所述第一变化曲线集合中存在的所有变化曲线所能组合成的组合总数量；Ni表示所述第i组变化曲线上存在的吻合曲线段对应的第二数量；N表示预先设置的待研究曲线段对应的第一数量；
Figure BDA0003588296400000191
表示所述第i组变化曲线对应的吻合比例；δ表示误差因子，其的取值范围为(0.01，0.10)。
该实施例中，在公式
Figure BDA0003588296400000192
中，当n＝3，M0＝100，
Figure BDA0003588296400000193
δ＝0.02时，Mi＝29.4。
该实施例中，正负性是指切线斜率为正时，说明对应的曲线段为上升阶段，切线斜率为负时，说明对应的曲线段为下降阶段。
该实施例中，变化规律是指先上升后下降，或先下降后上升，或一直上升，或一直下降。
该实施例中，反应效率是指根据最终荧光强度与初始荧光强度的比值确定的。
该实施例中，最终评估结果是指反应效率越高，评估结果越高，反应效率越低，评估结果越低。
上述技术方案的有益效果为：通过对N组实验中每一组实验的荧光染剂的荧光强度进行变化检测，以便后续根据实验评估结果，进行准确调整，并通过曲线分析的方式，形象直观地将变化特征表现出来，提升了准确率，将众多曲线进行吻合值确定，便于筛选稳定的曲线，提升最终对核酸检测试剂的使用效果的评估准确性。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (10)

1.一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂，包括缓冲液，其特征在于：所述缓冲液：200-600mM、氯化钠：20-100mM、氯化钾：20-100mM、氯化镁：10-40mM、二硫苏糖醇：5-10mM、聚乙烯呲咯烷酮：5-15％、ATP：10-15mM、dNPTs：2-4mM、磷酸烯醇丙酮酸：20-40mM、丙酮酸激酶：600-1400ng/μl、BSA：200-400ng/μl、引物组：每种引物30-150ng/μl、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白：80-150ng/μl、天蓝色链霉菌recA蛋白：120-450ng/μ、单链结合蛋白：300-800ng/μl、大肠杆菌DNA聚合酶I：80-120ng/μl。
2.根据权利要求1所述的一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂，其特征在于：所述缓冲液、氯化钠、氯化钾、氯化镁、二硫苏糖醇、聚乙烯呲咯烷酮、ATP、dNPTs、磷酸烯醇丙酮酸、丙酮酸激酶、T4噬菌体DNA解旋酶gp41蛋白、天蓝色链霉菌recA蛋白、单链结合蛋白、大肠杆菌DNA聚合酶I混合成核酸检测试剂。
3.根据权利要求1所述的一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂，其特征在于，还包括：供应检测模块，包括：
第一顺序确定单元，用于调取所述核酸检测试剂的历史使用记录，根据所述历史使用记录的水平记录顺序，确定对所述历史使用记录的第一预览顺序；
第二顺序确定单元，用于根据所述历史使用记录的垂直记录顺序，确定对所述历史使用记录的第二预览顺序；
流程确定单元，用于基于所述第一预览顺序以及所述第二预览顺序，确定对所述历史使用记录的预览流程；
条件确定单元，用于基于所述预览流程，对所述历史使用记录中存在的所有使用信息进行预览，并根据预览结果，确定所存在的每一需求信息与每一使用信息之间的对应条件；
拆分单元，用于获取当前存在的实际需求信息，并对所述实际需求信息进行拆分，得到实际子需求信息；
遍历顺序确定单元，用于根据所有实际子需求信息所在的层级顺序，确定对应的遍历顺序；
信息确定单元，用于基于所述对应条件，按照所述遍历顺序对每一实际子需求信息进行遍历，确定与所述每一实际子需求信息对应的实际使用信息；
控制单元，用于根据所述实际使用信息与所述核酸检测试剂的供应信息之间的比较结果，确定当前供应是否存在富余，若存在，获取当前遍历的第一实际子需求信息与上一层级对应的第二实际子需求信息之间的相同信息，确定所述相同信息与当前富余的核酸检测试剂对应的富余信息之间的适应性，当所述适应性达到预设适应性时，将所述富余信息添加至所述第二实际子需求信息对应的供应信息中；
当所述适应性未达到预设适应性时，沿着所述第一实际子需求信息向上遍历，或者向下遍历，若未找到具有相同需求内容的实际子需求信息，将所述富余的核酸检测试剂进行存储；
若不富余，根据所述实际使用信息与对应的供应信息之间的差异信息，确定所需补充供给信息，并提醒继续进行扩增作业。
4.根据权利要求2所述的一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂的应用，其特征在于：所述核酸检测试剂加热温度至20℃至42℃，并在核酸检测试剂的内部添加缓冲液。
5.根据权利要求4所述的一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂的应用，其特征在于：添加缓冲液的核酸检测试剂内部添加荧光染剂，并在荧光染剂的内部添加引物组，所述引物组根据需要从待检测动物上进行提取。
6.根据权利要求5所述的一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂的应用，其特征在于：基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂调剂而成后，形成数列，并放置在通风且温度保持在20℃至42℃之间的环境中。
7.根据权利要求1所述的一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂的应用，其特征在于：所述缓冲液在玉米内部进行提取，并保持缓冲液PH值在8.0。
8.根据权利要求1所述的一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂的应用，其特征在于：所述荧光染剂为SYBRGREEN1、SYTO-13或SYTO-82。
9.根据权利要求1所述的一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂的应用，其特征在于：对基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂使用检测后，对反应后的物料进行检测，并对检测后物料的DNA和cDNA进行提取并进行记录。
10.根据权利要求5所述的一种基于恒温扩增的多荧光核酸检测试剂的应用，其特征在于，还包括：基于对所添加的所述荧光染剂的检测结果，对所述核酸检测试剂的使用效果进行评估，具体包括：
分别获取所述核酸检测试剂、所述缓冲液、所述荧光染剂、所述引物组对应的当前实验容量值，并将具有相同容量值的待实验组置于同一实验环境中进行N组实验；
获取每组实验中添加所述荧光染剂的初始荧光强度以及获取时间点；
其中，所述每组实验的所述获取时间点相同；
以所述初始荧光强度为基础，监测所述每组实验中荧光强度在所述核酸检测试剂与所述引物组进行混合作用的过程中的变化特征，并将所述获取时间点作为起点，基于所述变化特征，构建对应的第一变化曲线集合；
将所述第一变化曲线集合中的每一变化曲线置于预先建立的目标坐标系中，根据预先设置的待研究曲线段对应的第一数量以及每一任意两条变化曲线之间存在的吻合曲线段对应的第二数量，确定所述每一任意两条变化曲线对应的吻合比例；
基于所述每一任意两条变化曲线对应的吻合比例以及对应的所述吻合比例在所有任意两条变化曲线中的布局特征，确定所述每一任意两条变化曲线对应的吻合值；
筛选最大吻合值对应的第二变化曲线集合，并获取所述第二变化曲线集合中每一变化曲线中每一点对应的切线斜率，基于所述切线斜率的正负交替处对应的横坐标值以及纵坐标值，确定所述每一变化曲线对应的波峰点以及波谷点，并基于所述切线斜率的正负性、所述波峰点以及所述波谷点，确定所述每一变化曲线对应的变化规律；
基于所述第二变化曲线集合，获取基于所述变化规律的最终荧光强度，并基于所述初始荧光强度以及所述最终荧光强度，确定所述核酸检测试剂与所述引物组之间的反应效率；
基于所述反应效率，对所述核酸检测试剂的使用效果进行评估，并确定最终评估结果。
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US20050112631A1 (en) * 2002-02-21 2005-05-26 Olaf Piepenburg Recombinase polymerase amplification
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